Αφηρημένο

Ιστορικό

Μετακίνηση κινε 4Α μέλος της οικογένειας (KIF4A), ένα μικροσωληνίσκων που βασίζεται σε πρωτεΐνη κινητήρα, είχε εμπλακεί στη ρύθμιση της χρωμοσωμικής δομής και κινητοχώρου μικροσωληνίσκων δυναμική. Λαμβάνοντας υπόψη τις λειτουργίες της KIF4A, υποθέσαμε ότι KIF4A εμπλέκεται στην εξέλιξη της προφορικής ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (OSCCs) μέσω ενεργοποίησης του οδοφράγματος της συναρμολόγησης ατράκτου (SAC). Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά σχετικά με τη σημασία της KIF4A στη συμπεριφορά των OSCC. Διερευνήθηκε η κατάσταση έκφρασης KIF4A και λειτουργικούς μηχανισμούς του στην OSCC.

Μέθοδοι

Τα επίπεδα έκφρασης KIF4A σε επτά OSCC προερχόμενα κύτταρα αναλύθηκαν με ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση αντίστροφης μεταγραφάσης-πολυμεράσης και ανοσοστύπωμα αναλύσεις. Χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο KIF4A νοκ ντάουν, εκτιμήσαμε την έκφραση (SAC) -σχετικά μόρια (BUB1, ΜΑϋ2, CDC20, και κυκλίνη Β1), του κυτταρικού κύκλου και του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Εκτός από την

στο

vitro

δεδομένα, η κλινική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης KIF4A σε πρωτογενείς OSCCs (n = 106 ασθενείς) και το κλινικοπαθολογική κατάσταση με ανοσοϊστοχημεία (IHC) επίσης αξιολογήθηκαν.

Αποτελέσματα

KIF4A mRNA και πρωτεΐνης up-ρυθμίζονται σημαντικά (

P

& lt? 0,05) σε επτά OSCC που προέρχονται από κύτταρα σε σύγκριση με ανθρώπινη φυσιολογική στοματική κερατινοκύτταρα. Στα KIF4A knockdown κυττάρων, την ενεργοποίηση SAC παρατηρήθηκε αυξημένη έκφραση μέσω BUB1 στις kinetochores, κατάλληλα κινητοχώρου εντοπισμός του ΜΑϋ2, κάτω ρύθμιση CDC20, αυξητική ρύθμιση της κυκλίνης Β1, και του κυτταρικού κύκλου συλλαμβάνεται σε G2 /M φάση. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός των κυττάρων knockdown KIF4A μειώθηκε σημαντικά (

P

& lt? 0,05) σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. IHC έδειξαν ότι η έκφραση KIF4A στην πρωτοβάθμια OSCCs ήταν σημαντικά (

P

& lt? 0,05) μεγαλύτερη από ό, τι στα κανονικά από το στόμα ομολόγους και ότι KIF4A θετικά OSCCs συσχετίστηκαν στενά (

P

& lt? 0,05) με καρκινικές μέγεθος.

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματά μας πρότεινε για πρώτη φορά ότι KIF4A ελέγχει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό μέσω της ενεργοποίησης SAC. Ως εκ τούτου, KIF4A θα μπορούσε να είναι ένας βασικός ρυθμιστής για την καρκινική εξέλιξη στο OSCCs

Παράθεση:. Minakawa Υ, Kasamatsu Α, Koike Η, Higo Μ, Nakashima D, Kouzu Y, et al. (2013) Μετακίνηση κινε Οικογένεια 4Α μέλος: Ένας πιθανός Predictor για την εξέλιξη των Ανθρωπίνων τον καρκίνο του στόματος. PLoS ONE 8 (12): e85951. doi: 10.1371 /journal.pone.0085951

Επιμέλεια: Xin Yuan-Γκουάν, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Κίνα

Ελήφθη: 6 Ιούν 2013? Αποδεκτές: 10, Δεκ του 2013? Δημοσιεύθηκε: 30 Δεκ 2013

Copyright: © 2013 Minakawa et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Οι πρωτεΐνες κινεσίνης υπεροικογένεια (KIFS), ταξινομούνται σε. 14 υποοικογένειες, είναι εξαρτώμενες από ATP πρωτεΐνες κινητήρα με συν-end ικανότητα κίνησης των μικροσωληνίσκων που εξαρτώνται από [1,2]. Κατά τη διάρκεια της μίτωσης, οι δραστηριότητες των KIFS στον άξονα μικροσωληνίσκων ελέγχεται με ακρίβεια για να διασφαλιστεί ότι οι μιτωτική γεγονότα ενορχηστρωμένο με τη σωστή σειρά σε όλη τη μίτωση [3,4]. Αυτές οι πρωτεΐνες στα διαπολικού μικροσωληνίσκους ελέγχουν την ισορροπία της προς τα έξω δυνάμεων και προς τα μέσα δυνάμεις τους για να διασφαλιστεί η σύλληψη των χρωμοσωμάτων και την προσκόλληση στις ατράκτους και να αποτρέψει την επιμήκυνση της ατράκτου πριν ανάφαση [5,6]. Μεταξύ των KIFS, KIF4A ελέγχει την οργάνωση της ατράκτου, την ευθυγράμμιση των χρωμοσωμάτων, και τη δυναμική κινητοχώρου μικροσωληνίσκων με ρυθμιστή πρωτεΐνη της κυτοκίνησης 1 [4,7-13]. Απορύθμιση των KIF4A προκαλεί ανώμαλη διαχωρισμό της ατράκτου και προκαλεί ανευπλοειδισμών των θυγατρικών κυττάρων [14,15]. Τα κύτταρα που επηρεάζονται από aneploidy χαρακτηρίζεται από κέρδος ή απώλεια γενετικού υλικού. Έχουν έντονα υπόνοιες ότι συνδέονται με την εξέλιξη του καρκίνου [16]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι KIF4A μπορεί να σχετίζεται με την εξέλιξη του καρκίνου.

Το σημείο ελέγχου συναρμολόγηση ατράκτου (SAC) παρακολουθεί τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ κινητοχώρους και μικροσωληνίσκων της ατράκτου κατά τη διάρκεια της μίτωσης και ελέγχει μετάφαση-ανάφαση μετάβαση έως ότου όλα τα χρωμοσώματα δημιουργία biorientation. Ως εκ τούτου, η SAC έχει ένα σημαντικό ρόλο στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό μέσω ενός μηχανισμού ελέγχου του κυτταρικού κύκλου, η οποία είναι ιδιαίτερα κρίσιμη για την ακρίβεια του χρωμοσώματος διαχωρισμού [17-19]. Εύρυθμη λειτουργία της SAC απαιτεί τη συντονισμένη δράση πολλών πρωτεϊνών σημείο ελέγχου, δηλαδή, BubR1, Bub1, Bub3, MAD1 και ΜΑϋ2 [19-22]. Το ενεργό σημείο ελέγχου αναστέλλει ανάφαση προώθηση συγκρότημα /κυκλόσωμα (APC /C) σύλληψη στην ανάφαση [23-26]. Αναστολή της APC /C αποτρέπει την αποδόμηση διαφόρων βασικών μιτωτικής πρωτεΐνες, οι οποίες πρέπει να αποδομηθεί για ανάφαση να ξεκινήσει [23-28]. Η παρουσία της ασύνδετος χρωμοσωμάτων ή η έλλειψη της ατράκτου έντασης που συνήθως δημιουργείται από διπολική αποτελέσματα προσκόλληση του χρωμοσώματος στο συνεχίστηκε ενεργοποίηση σημείο ελέγχου, μιτωτική σύλληψη, και τελικά προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο [17-19,23-25]. Επιπλέον, η SAC έχει αναφερθεί ότι είναι ελαττωματικά σε έναν αριθμό ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων από του στόματος, του παχέος εντέρου, του θυρεοειδούς, και των ωοθηκών, και συνδέεται με την εξέλιξη του καρκίνου [29-32].

Επειδή η σχέση μεταξύ της SAC και KIF4A μόλις τώρα αρχίζει να γίνεται κατανοητό, υποθέτουμε ότι η απορρύθμιση των KIF4A εμπλέκεται στην εξέλιξη της προφορικής πλακώδες καρκίνωμα (OSCCs) μέσω ενεργοποίησης της SAC [4,5,17 , 33,34]. Αναφέρουμε εδώ ότι η παρεκκλίνουσα έκφραση KIF4A σε OSCCs ήταν λειτουργικά και κλινικά συνδέονται με την καρκινική ανάπτυξη και ότι KIF4A θα μπορούσε να είναι ένας μοριακός δείκτης για την εξέλιξη της OSCCs.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η Επιτροπή Ηθικής του Graduate School of Medicine, University Chiba ενέκρινε το πρωτόκολλο της μελέτης (αριθμός έγκρισης, 236). Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις ηθικές προδιαγραφές της Διακήρυξης του Ελσίνκι. Όλοι οι ασθενείς με την προϋπόθεση γραπτή συγκατάθεση.

OSCC που προέρχονται από κυτταρικές γραμμές και δείγματα ιστών

Απαθανάτισε ανθρώπινη OSCC που προέρχονται από κυτταρικές σειρές (HSC-2, HSC-3, HSC-4, Ca9-22 , Sa3, ΗΟ-1-u-1, και ΚΩΝ) ελήφθησαν από το Επιστημονικό Ερευνητικό Τράπεζα Ανθρώπινου Δυναμικού (Osaka, Japan) ή το RIKEN BRC (Ibaraki, Japan) μέσω του Εθνικού Προγράμματος Bio-Resource του Υπουργείου Παιδείας, Πολιτισμού, Αθλητισμού, Επιστημών και Τεχνολογίας (MEXT) (Τόκιο, Ιαπωνία). Σύντομη διαδοχική επανάληψη pro fi les con fi βαίωσαν κυτταρική ταυτότητα. Όλα OSCC προερχόμενα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε Dulbecco τροποποιημένο μέσο Eagle /F-12 ΗΑΜ (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Sigma) και 50 μονάδες /ml πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη (Sigma). Πρωτογενή καλλιεργημένα ανθρώπινα κανονικά από το στόμα κερατινοκύτταρα (HNOKs) χρησιμοποιήθηκαν ως ένα κανονικό έλεγχο [35-40]. Ήταν υγιή βλεννογόνο του στόματος δείγματα επιθηλίου που συλλέγονται από τους νέους ασθενείς στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Chiba. Τρεις ανεξάρτητες HNOKs ήταν πρωτεύοντος καλλιεργούμενου και διατηρήθηκαν σε Στοματική κερατινοκυττάρων Medium (ScienCell Research Laboratories, Carlsbad, CA) που αποτελείται από 5 ml πόσιμου συμπλήρωμα ανάπτυξης κερατινοκυττάρου (ScienCell Research Laboratories) και 5 ml διαλύματος πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (ScienCell Research Laboratories).

Εκατόν έξι βασικά δείγματα OSCC και τον ασθενή ταιριαστό φυσιολογικό επιθήλιο ελήφθησαν κατά τη διάρκεια χειρουργικών επεμβάσεων που εκτελούνται στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Chiba. Οι εκτομή ιστοί μονιμοποιήθηκαν σε διάλυμα φορμαλδεΰδης ρυθμισμένο σε 20% για παθολογική διάγνωση και ανοσοϊστοχημεία (IHC). Ιστοπαθολογική διάγνωση κάθε δειγμάτων OSCC πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τα κριτήρια του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας από το Τμήμα Παθολογίας του Chiba University Hospital [41]. Κλινικοπαθολογικοί στάσης προσδιορίστηκε από την ταξινόμηση ΤΝΜ της Διεθνούς Ένωσης κατά του Καρκίνου [42]. Όλοι οι ασθενείς είχαν OSCC αυτό ήταν ιστολογικά επιβεβαιωμένο, και ελέγχθηκαν όγκων δείγματα ώστε να εξασφαλισθεί ότι καρκινικό ιστό ήταν παρούσα σε περισσότερες από 80% των δειγμάτων.

Παρασκευή cDNA και της πρωτεΐνης

Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. cDNA δημιουργήθηκε χρησιμοποιώντας 5 μg ολικού RNA από OSCC κυτταρικές γραμμές που παράγονται με τη χρήση You-Prime Ready-To-Go First-Strand Χάντρες (GE Healthcare, Buckinghamshire, Ηνωμένο Βασίλειο) και ολιγο (dT) εκκινητή (Hokkaido System Science, Σαπόρο, Ιαπωνία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με ψυχρό ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο (PBS) και φυγοκεντρήθηκε για λίγο. Οι σβώλοι κυττάρων επωάστηκαν στους 4 ° C για 30 λεπτά σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (7 Μ ουρία, 2 Μ θειουρία, 4% β /ο CHAPS, και 10 mM Tris ρΗ 7,4) με ένα κοκτέιλ αναστολέα πρωτεϊνάσης (Roche, Diagnostics). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης μετρήθηκε με BCA Protein Assay Kit (Thermo, Rockford, IL).

έκφραση mRNA ανάλυση

πραγματικού χρόνου ποσοτική αλυσίδα ανάστροφης μεταγραφάσης-αντίδρασης πολυμεράσης (PCR qRT-) διεξήχθη χρησιμοποιώντας LightCycler 480 συσκευές (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany). Αστάρια και καθολική ανιχνευτές σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας το Probe Βιβλιοθήκη Οικουμενική (Roche Diagnostics), η οποία συγγραφή fi es το πιο κατάλληλο σύνολο. Οι αλληλουχίες των εκκινητών που χρησιμοποιούνται για qRT-PCR ήταν:

KIF4A

, προς τα εμπρός,

5′-TCTGTTTCAGGCTGCTTTCA -3 ‘

? αντιστραφεί,

5′-GCCCTG AAATATTTGATTGGAG -3 ‘

? και καθολική καθετήρα 25, και η αφυδρογονάση γλυκεραλδεϋδο-3-φωσφορικής (GAPDH), προς τα εμπρός,

5′-CATCTCTGCCCCCTCTGCTGA-3 ‘

? αντιστραφεί,

5′-GGATGACCTTGCCCACAGCCT-3 ‘

? και καθολική καθετήρα 60. Το ποσό μεταγραφή για

KIF4A

εκτιμήθηκε από τις αντίστοιχες τυπικές καμπύλες και κανονικοποιούνται στο

GAPDH

ποσό μεταγραφή καθορίζεται αντίστοιχα δείγματα. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν και τρία ανεξάρτητα παρασκευάσματα του RNA αναλύθηκαν από κάθε κυτταρική γραμμή.

ανάλυση ανοσοκηλίδωσης

Εκχυλίσματα πρωτεΐνης (20 μg) διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση πήγματος πολυακρυλαμιδίου δωδεκυλοθειικού νατρίου σε 4 -12% γέλη, μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης, και αποκλείστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου σε Ανασταλτικό One (Nacalai Tesque, Tokyo, Japan). Οι μεμβράνες επωάστηκαν με αντι-KIF4A πολυκλωνικό αντίσωμα (Gene Tex, San Antonio, ΤΧ), το μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), αντι-CDC20 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (Santa Cruz Biotechnology), και κουνελιού αντι-κυκλίνης Β1 πολυκλωνικό αντίσωμα (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ) όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Οι μεμβράνες πλύθηκαν με 0,1% Tween-20 σε Tris-ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα, επωάστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα και συζευγμένο με ραφανιδική υπεροξειδάση-συζευγμένο αντι-κουνελιού ή αντι-ποντικού IgG (Promega, Madison, WI) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τέλος, οι μεμβράνες ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας υπόστρωμα SuperSignal West Pico χημειοφωταύγειας (Thermo) και ανοσοκηλίδωση οπτικοποιήθηκε με έκθεση των μεμβρανών σε ΑΤΤΟ Light-Capture II (ΑΤΤΟ, Tokyo, Japan). εντάσεις σήματος προσδιορίστηκαν ποσοτικά χρησιμοποιώντας την έκδοση 3.0 του λογισμικού CS Analyzer (ATTO).

Η επιμόλυνση με shRNA πλασμίδιο

OSCC κυτταρικές γραμμές (HSC-3 και Ca9-22) επιμολύνθηκαν με KIF4A shRNA (shKIF4A ) ή τον έλεγχο shRNA (shMock) φορείς (Santa Cruz Biotechnology) χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη LTX και Plus Αντιδραστήρια (Invitrogen). Μετά την επιμόλυνση, τα σταθερά προϊόντα επιμόλυνσης απομονώθηκαν από το μέσο καλλιέργειας που περιέχει 2 ng /mL πουρομυκίνη (Invitrogen). Δύο έως τρεις εβδομάδες μετά την επιμόλυνση, βιώσιμες αποικίες μεταφέρθηκαν σε νέα πιάτα. shKIF4A και shMock κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν για περαιτέρω πειράματα.

ανοσοφθορισμού

Οι μεταμορφώσεις απλώθηκαν σε πλακίδια θαλάμου (BD Falcon, Franklin Lakes, NJ) σε 50% συρροή, πλύθηκαν με παγωμένο PBS , και μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη-PBS για 20 λεπτά, στη συνέχεια κατέστησαν διαπερατά σε PBS που περιείχε 0,2% Triton Χ-100 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [43]. Χρησιμοποιήσαμε τα ακόλουθα πρωτεύοντα αντισώματα για την ανίχνευση ενεργοποίησης SAC: κουνελιού αντι-KIF4A πολυκλωνικό αντίσωμα (Gene Tex), ποντικού αντι-BUB1 μονοκλωνικό αντίσωμα (Santa Cruz Biotechnology), και αντι-ΜΑϋ2 αντίσωμα ποντικού (Santa Cruz Biotechnology). Σταθερή κύτταρα επωάστηκαν με ένα διάλυμα αποκλεισμού που περιέχει 0.5% αλβουμίνη βόειου ορού για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Μετά την έκπλυση με PBS, τα κύτταρα επωάστηκαν με δευτερεύοντα αντισώματα για 1 ώρα στους 37 ° C. Τα δευτερεύοντα αντισώματα ήταν φλουορεσκεΐνη αντίσωμα IgG αντι-κουνελιού συζευγμένο με ισοθειοκυανική (Vector Laboratories, Burlingame, CA) και Texas Red-αντίσωμα συζευγμένο αντι-ποντικού IgG (Vector Laboratories) επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι. Τέλος, οι τομές πλύθηκαν τρεις φορές με PBS και τα συναρμολογημένα χρησιμοποιώντας Τοποθέτηση Μεσαίο με DAPI (Vector Laboratories). Ο ανοσοφθορισμός με συνεστιακή μικροσκοπία και αναλύονται με το λογισμικό Fluoview (Olympus Optical, Tokyo, Japan).

κυτταρικού κύκλου ανάλυσης

Για να συγχρονίσετε τα κύτταρα στο G0 /G1 ή G2 /M μετάβαση, τα κύτταρα στερήθηκαν ορού για 48 ώρες ή υποβάλλεται σε επεξεργασία με 200 ng /ml nocodazole (Sigma) για 20 ώρες [44,45]. Για τον προσδιορισμό της κατανομής του κυτταρικού κύκλου, τα κύτταρα συλλέχθηκαν, πλύθηκαν με PBS, και ανιχνεύθηκαν με κιτ αντιδραστηρίου DNA CycleTEST Plus (Becton-Dickinson, San Jose, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Προσδιορισμός με κυτταρομετρία ροής του περιεχομένου DNA αναλύθηκε με BD AccuriTM C6 Κυτταρόμετρο Ροής (Becton-Dickinson). Τα κλάσματα των κυττάρων στην G0-G1, S, G2 και Μ-φάσεις αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό FlowJo (Tree Star, Ashland, OR).

Κινητή ανάπτυξη

Οι μορφομετατροπείς σπάρθηκαν σε πλάκες έξι φρεατίων σε πυκνότητα 1 × 10

4 βιώσιμα κύτταρα ανά φρεάτιο. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν για 168 ώρες, και μετρήθηκαν κάθε 24 ώρες. Στα δεικνυόμενα χρονικά σημεία, τα κύτταρα υπέστησαν κατεργασία τρυψίνης και απαριθμήθηκαν χρησιμοποιώντας αιμοκυτόμετρο σε δείγματα εις τριπλούν.

IHC

IHC διεξήχθη σε 4-μm τομών σε δείγματα εγκλεισμένους σε παραφίνη χρησιμοποιώντας κουνελιού αντι-KIF4A πολυκλωνικό αντίσωμα (Gene Tex). Εν συντομία, μετά αποπαραφινώσεως και ενυδάτωση, η ενδογενής δράση υπεροξειδάσης αποσβέστηκε με επώαση 30 λεπτών σε ένα μίγμα από 0,3% διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου σε 100% μεθανόλη? τα τμήματα αποκλείστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου με 1,5% ορό αποκλεισμού (Santa Cruz Biotechnology) σε PBS πριν την αντίδραση με το αντίσωμα αντι-KIF4A στους 4 ° C σε ένα υγρό θάλαμο όλη τη νύκτα. Κατά την επώαση με το πρωτεύον αντίσωμα, τα δείγματα πλύθηκαν τρεις φορές σε PBS και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αντιδραστήριο Envision (DAKO, Carpinteria, CA) ακολουθούμενη από ανάπτυξη χρώματος σε τετραϋδροχλωρική 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (ϋΑΚΟ). Τα πλακίδια στη συνέχεια ήταν ελαφρώς με αιματοξυλίνη, αφυδατώθηκαν με αιθανόλη, καθαρίζονται με ξυλόλιο, και τοποθετημένα. Η μη ειδική πρόσδεση ενός αντισώματος σε πρωτεΐνες πλην μερικές φορές συνέβη το αντιγόνο. Ως αρνητικός έλεγχος, τριπλούν τομές ανοσοχρωματίστηκαν χωρίς έκθεση σε πρωτογενή αντισώματα, τα οποία επιβεβαίωσαν την ειδικότητα χρώσης (Σχήμα S1A). Για να ποσοτικοποιηθεί η κατάσταση της πρωτεϊνικής έκφρασης KIF4A σε αυτά τα συστατικά, χρησιμοποιήσαμε τα συστήματα βαθμολόγησης IHC περιγράφηκε προηγουμένως [39,40,46-49]. Συνοπτικά, οι μέσες ποσοστά των θετικών καρκινικών κυττάρων προσδιορίστηκαν σε τουλάχιστον τρία τυχαία πεδία στα 400 χ μεγέθυνση σε κάθε τμήμα. Η ένταση του KIF4A-ανοσοαντίδρασης βαθμολογήθηκε ως εξής: 0+, κανένας? 1+, αδύναμη? 2+, μέτρια? και 3+, έντονη. Η κυτταρική αριθμός και η ένταση χρώσης πολλαπλασιάστηκαν για να παράγει μια βαθμολογία KIF4A IHC. Θεωρήσαμε την ένταση χρώσης των σκελετικών μυϊκών κυττάρων, τα οποία ήταν θετικοί έλεγχοι για KIF4A (Σχήμα S1B). Θήκες με σκορ KIF4A IHC υπερβαίνει τα 95,0 (+3 τυπική απόκλιση [SD] βαθμολογία για φυσιολογικό ιστό) ορίστηκαν ως KIF4A θετικά. Η ± αποκοπής 3-SD, που στατιστικά θα πρέπει να αναμένεται μόνο το 0,2% της μέτρησης να πέσει έξω από αυτό το εύρος, χρησιμοποιήθηκε γιατί ήταν απίθανο να επηρεαστεί από τυχαίο πειραματικό σφάλμα που παράγεται από το χειρισμό του δείγματος [50]. Δύο ανεξάρτητες παθολόγους από το Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Chiba, κανείς από τους οποίους είχαν καμία γνώση της κλινικής κατάστασης των ασθενών, κάνει αυτές τις αποφάσεις.

Η στατιστική ανάλυση

Σε συγκρίσεις των επιπέδων έκφρασης KIF4A, η στατιστική σημαντικότητα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία U του Mann-Whitney. Οι σχέσεις μεταξύ KIF4A-ανοσοϊστοχημική χρώση βαθμολογίες και κλινικοπαθολογοανατομικές προφίλ αξιολογήθηκαν από χ

2 τεστ, το ακριβές τεστ του Fisher, και δοκιμή U Mann-Whitney.

P

& lt? 0.05 θεωρήθηκε σημαντική. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου (SEM).

Αποτελέσματα

Αξιολόγηση της έκφρασης KIF4A σε OSCC προερχόμενων κυτταρικών γραμμών

Για να διερευνηθεί το mRNA έκφραση του

KIF4A

, πραγματοποιήσαμε ανάλυση qRT-PCR χρησιμοποιώντας επτά OSCC που προέρχονται από κυτταρικές γραμμές (HSC-2, HSC-3, HSC-4, Ca9-22, Sa3, Ho-1-u-1, και ΚΩΝ) και HNOKs.

KIF4A

mRNA ήταν ρυθμισμένη σημαντικά σε όλους τους OSCC προερχόμενων κυτταρικών γραμμών σε σύγκριση με τις HNOKs (Σχήμα 1Α). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SEM των αποτελεσμάτων τριπλούν (

P

& lt? 0,05). Πραγματοποιήσαμε επίσης ανάλυση ανοσοκηλίδωσης να διερευνήσει την κατάσταση έκφρασης πρωτεΐνης KIF4A στις OSCC προερχόμενων κυτταρικών γραμμών και των HNOKs (Σχήμα 1Β). Μια σημαντική αύξηση στην έκφραση πρωτεΐνης KIF4A παρατηρήθηκε σε όλα τα κυψελοειδή γραμμές OSCC σύγκριση με τα HNOKs. Η ανάλυση έκφρασης έδειξε ότι και τα δύο προϊόντα μεταγραφής και μετάφρασης αυτού του μορίου ήταν εντόνως εκφρασμένο σε OSCC προερχόμενων κυτταρικών γραμμών.

(Α) Ποσοτικοποίηση της έκφρασης mRNA σε KIF4A OSCC προερχόμενων κυτταρικών γραμμών με ανάλυση qRT-PCR. Σημαντική ρύθμιση προς τα πάνω του KIF4A mRNA παρατηρείται σε επτά OSCC προερχόμενων κυτταρικών γραμμών σε σύγκριση με τις HNOKs (

P

& lt? 0,05, Mann-Whitney U test). Τα δεδομένα εκφράζονται ως το μέσο ± SEM των αποτελεσμάτων εις τριπλούν. (Β) Ανάλυση ανοσοαποτύπωσης των KIF4A πρωτεΐνης στα OSCC προερχόμενων κυτταρικών γραμμών και HNOKs. έκφραση της πρωτεΐνης KIF4A είναι up-ρυθμίζεται στα OSCC που προέρχονται από κυτταρικές γραμμές σε σύγκριση με εκείνη των HNOKs. δεδομένα πρωτεΐνη πυκνομετρική KIF4A κανονικοποιούνται προς τα επίπεδα πρωτεΐνης GAPDH. Οι τιμές εκφράζονται ως ποσοστό των HNOKs (

P

& lt? 0,05, Mann-Whitney τεστ U).

Η

Ίδρυση KIF4A νοκ ντάουν κυττάρων

Από έκφραση KIF4A ήταν ρυθμισμένη στα κυτταρικά γραμμές OSCC, ιδρύσαμε κύτταρα νοκ ντάουν KIF4A χρήση τεχνολογιών shRNA. HSC-3 και Ca9-22 κύτταρα επιμολύνθηκαν με KIF4A shRNA (shKIF4A) και τον έλεγχο shRNA (shMock) πλασμίδια. επίπεδα έκφρασης KIF4A mRNA και πρωτεϊνών στα κύτταρα shKIF4A ήταν σημαντικά χαμηλότερα από εκείνα στα κύτταρα shMock (HSC-3 και Ca9-22 που προέρχονται από επιμολύνσεις) (Σχήμα 2Α, Β) (

P

& lt? 0,05) .

(Α) qRT-PCR δείχνει ότι η έκφραση του mRNA KIF4A στα κύτταρα shKIF4A (HSC-3-και Ca9-22 προερχόμενο μορφομετατροπείς? 2 κλώνοι έκαστο) είναι σημαντικά χαμηλότερο από ό, τι στα κύτταρα shMock (

P

& lt? 0,05, Mann-Whitney U test). (Β) Ανάλυση ανοσοαποτύπωσης, δείχνει ότι τα επίπεδα πρωτεΐνης KIF4A σε shKIF4A-επιμολυσμένα κύτταρα (HSC-3- και Ca9-22 προερχόμενο μορφομετατροπείς? 2 κλώνοι έκαστο) επίσης έχει μειωθεί σημαντικά σε σύγκριση με ότι στα κύτταρα shMock (

P

& lt?. 0.05, Mann-Whitney τεστ U)

η

Ενεργοποίηση της SAC

για να διερευνήσουν τον μηχανισμό με τον οποίο KIF4A σχετίζεται με το SAC, πραγματοποιήσαμε ανάλυση ανοσοφθορισμού για η άτρακτος-σημείο ελέγχου πρωτεΐνη (BUB1) και η πρωτεΐνη αισθητήρα σημείο ελέγχου (ΜΑϋ2). BUB1 βρέθηκε σε συμπυκνώνεται χρωμοσωμάτων στα κύτταρα shKIF4A αλλά δεν εντοπίστηκε επί kinetochores στα κύτταρα shMock (Σχήμα 3Α). ΜΑϋ2 εντοπίστηκε επί kinetochores στα κύτταρα shKIF4A, ενώ κινητοχώρου εντοπισμός δεν παρατηρήθηκε στα κύτταρα shMock (Σχήμα 3Β). Η άμεση στόχος της ενεργοποίησης SAC είναι CDC20, η οποία είναι ο ενεργοποιητής της ανάφασης προάγουν σύμπλοκο /κυκλόσωμα (APC /C) [23-26]. Επιπλέον, η κυκλίνη Β1 είναι ένα κρίσιμο ρυθμιστή του G2 /M της εξέλιξης και της M-G1 μετάβαση [27]. Για να αξιολογηθεί η σύλληψη Μ φάση με ενεργοποίηση του SAC, πραγματοποιήσαμε επίσης ανοσοστύπωμα CDC20 και κυκλίνη Β1, και ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Όπως αναμενόταν, ενώ CDC20 σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται, κυκλίνη Β1 ήταν ρυθμισμένη σε shKIF4A κύτταρα (Σχήμα 4Α). Επιπλέον, το ποσοστό της φάσης G2 /M σε κύτταρα shKIF4A ήταν σημαντικά (Ρ & lt? 0,05) υψηλότερη από ότι στα κύτταρα shMock (Σχήμα 4Β). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι κάτω ρύθμιση των KIF4A θα μπορούσε να προκαλέσει αναστολή του κυτταρικού κύκλου ή καθυστέρηση στη φάση Μ μέσω της ενεργοποίησης SAC.

Εντοπισμός BUB1 και ΜΑϋ2 στις κινητοχώρους συγκρίνεται σε κύτταρα shKIF4A και shMock με ανοσοφθορισμό. (Α) BUB1 για κινητοχώρους αυξημένη στα κύτταρα shKIF4A σε σύγκριση με εκείνη στα κύτταρα shMock (πράσινο, KIF4A? Κόκκινο, BUB1? Μπλε, DNA). (Β) Κατάλληλη εντοπισμό των ΜΑϋ2 παρατηρείται σε κύτταρα shKIF4A, ενώ κινητοχώρου εντοπισμός δεν παρατηρείται στα κύτταρα shMock. (Πράσινο, KIF4A? Κόκκινο, ΜΑϋ2? Μπλε, DNA)

Η

Για να διερευνήσουν την ενεργοποίηση SAC και την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου, προσδιορίσαμε τα επίπεδα έκφρασης του CDC20 και κυκλίνη Β1, και το περιεχόμενο DNA στο G0-G1, S, και, G2-M φάσεις. (Α) κύτταρα shKIF4A έδειξε μειορύθμιση CDC20 και πάνω ρύθμιση της κυκλίνης Β1 (HSC-3- και Ca9-22 προερχόμενο μορφομετατροπείς? 2 κλώνοι έκαστο) σε σύγκριση με κύτταρα shMock (

P

& lt? 0,05 , Mann-Whitney test U). (Β) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής διεξήχθη για να διερευνηθεί η κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα shKIF4A και shMock. Το ποσοστό της G2 φάσης /Μ σε κύτταρα shKIF4A (HSC-3- και Ca9-22 προερχόμενο μορφομετατροπείς? 2 κλώνοι έκαστο) έχει αυξηθεί σημαντικά σε σύγκριση με κύτταρα shMock (

P

& lt? 0,05, Mann-Whitney για U test).

η

μειωμένη κυτταρική ανάπτυξη σε KIF4A νοκ ντάουν κύτταρα

για να αξιολογηθεί η επίδραση των KIF4A νοκ ντάουν στην κυτταρική ανάπτυξη, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία κυτταρικού πολλαπλασιασμού. shKIF4A και shMock κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες έξι φρεατίων σε πυκνότητα 1 × 10

4 βιώσιμα κύτταρα /φρεάτιο που μετρήθηκαν για 168 ώρες. Υπήρξε μια σημαντική (

P

& lt? 0,05). μείωση στην κυτταρική ανάπτυξη των κυττάρων shKIF4A σύγκριση με τα κύτταρα shMock (Σχήμα 5)

Για να προσδιοριστεί η επίδραση της shKIF4A επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, shKIF4A και shMock κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες έξι φρεατίων σε πυκνότητα 1 × 10

4 βιώσιμα κύτταρα /φρεάτιο. Αμφότερα τα προϊόντα επιμόλυνσης μετρήθηκαν επί επτά συνεχείς ημέρες. Η κυτταρική ανάπτυξη του shKIF4A-επιμολυσμένα κύτταρα (HSC-3- και Cas9-22 προερχόμενο μορφομετατροπείς? 2 κλώνοι έκαστο) ήταν σημαντικά ανέστειλε σε σύγκριση με τα κύτταρα shMock μετά από 7 ημέρες (168 ώρες). Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως το μέσο ± SEM τιμών από τρεις δοκιμασίες. Οι αστερίσκοι υποδεικνύουν σημαντικές διαφορές μεταξύ των κυττάρων shKIF4A και shMock (

P

& lt? 0,05, Mann-Whitney τεστ U)

Η

Η αξιολόγηση της έκφρασης πρωτεϊνών KIF4A στην πρωτοβάθμια OSCC

. οι

αποτελέσματα Αντιπροσωπευτικά IHC για KIF4A πρωτεΐνης σε φυσιολογικό ιστό του στόματος και πρωτογενών OSCC παρουσιάζεται στο Σχήμα 6Α-C. Θετική χρώση παρατηρήθηκε κυρίως στους πυρήνες των βασικών δειγμάτων OSCC (Σχήμα 6Α, Β). Οι KIF4A IHC βαθμολογίες στην πρωτοβάθμια OSCCs (62,3 – 188? Διάμεσος, 131) ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα σε φυσιολογικούς ιστούς (26,5 – 103? Διάμεσος, 66,5) (Σχήμα 6C) (

P

& lt? 0,05). Ορίσαμε περιπτώσεις με βαθμολογία IHC άνω των 95 (βαθμολογία +3 SD για φυσιολογικό ιστό) ως KIF4A θετικά. Οι συσχετισμοί μεταξύ των κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά των ασθενών με OSCC και την κατάσταση της έκφρασης πρωτεΐνης KIF4A φαίνονται στον Πίνακα 1. Μεταξύ των κλινικών παραμέτρων, η έκφραση KIF4A σχετιζόταν σημαντικά (

P

& lt? 0,05) με το πρωτεύον μέγεθος των όγκων OSCC. Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι KIF4A ενδέχεται να σχετίζεται στενά με την εξέλιξη των όγκων.

Εκπρόσωπος IHC αποτελέσματα για KIF4A πρωτεΐνης σε κανονικά από το στόμα ιστού (Α) και πρωτογενών OSCC (Β). Α, Β: Original μεγέθυνσης, × 400. Ράβδοι κλίμακας, 10 μm. Ισχυρή ανοσοδραστικότητα KIF4A ανιχνεύθηκε στην πρωτοβάθμια OSCCs? κανονική ιστών του στόματος δείχνουν σχεδόν αρνητική ανοσοχρώση. Γ: Η κατάσταση της πρωτεϊνικής έκφρασης KIF4A στην πρωτοβάθμια OSCCs (n = 106) και των κανονικών ομολόγων. Οι βαθμολογίες KIF4A IHC υπολογίστηκαν ως εξής: βαθμολογία IHC = 0 × (αριθμός μη βαμμένα κύτταρα στο πεδίο) + 1 × (αριθμός των ασθενώς χρωσμένων κυττάρων στο πεδίο) + 2 × (αριθμός των μετρίως χρώση κυττάρων στο πεδίο) + 3 × (τον αριθμό των έντονα χρωματισμένο κυττάρων στο πεδίο). Οι βαθμολογίες KIF4A IHC για την κανονική στοματική ιστούς και OSCCs κυμαίνονταν από 26,5 να 103, (διάμεση τιμή, 66,5) και 62,3 να 188 (διάμεσος, 131), αντίστοιχα. τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης KIF4A στην OSCCs είναι σημαντικά (

P

& lt? 0,05, δοκιμή U Mann-Whitney του). υψηλότερο από το κανονικό προφορική ιστούς

Απλή αναζήτηση Αποτελέσματα ανοσοχρώση

Κλινική ταξινόμηση

Η αρ ασθενών (%)

Η

Σύνολο

KIF4A- αρνητική

KIF4A θετικά

P

αξίας

μια

Η ηλικία κατά την επέμβαση (έτη) & lt? 603,914 (36) 25 (64) ≧ 60, & lt? 702,212 (55) 10 (45) 0,121

β

≧ 704510 (22) 35 (78) Φύλο Male7529 (39) 46 (52) 0.122

Τ19 γ

Female31 7 (23) 24 (77) Τ-πρωτοπαθούς όγκου 5 (56) 4 (44) 0.005

d

T25825 (43) 33 (57) T319 3 (16) 16 (84) T420 3 (15) 17 (85) Τ1 + T26730 (45) 37 (55) 0,010

γ

Τ3 + T439 6 (15) 33 (85) Ν-περιφερειακών λεμφαδένων Ν (-) 4515 (33) 30 (67) 0.920

γ

N (+) 6121 (34) 40 (66) στάδιο I9 5 (56) 4 (44) 0,121

δ

II3814 (37) 24 (63) III11 4 (36) 7 (64) IV4813 (27) 35 (73) Η ιστοπαθολογική τύπου Well6123 ( 38) 38 (62) 0.352

δ

Moderately3711 (30) 26 (70) Poorly8 2 (25) 6 (75) καρκινική περιοχή Gingiva32 9 (38) 23 (63) 0.861

δ

Tongue6527 (42) 38 (58) Στοματική mucosa6 0 (0) 6 (100) Προφορική floor3 0 (0) 3 (100) Πίνακας 1. Συσχέτιση της έκφρασης KIF4A και κλινική ταξινόμηση σε OSCCs.

α

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική,

β

χ

2 test,

C

ακριβές τεστ του Fisher,

δ

Mann-Whitney για δοκιμή U. CSV Λήψη CSV

Συζήτηση

Από KIF4A ήταν υπερεκφράζεται συχνά σε OSCC που προέρχονται από κυτταρικές σειρές, ιδρύσαμε KIF4A νοκ ντάουν κύτταρα για να δούμε εάν ή όχι KIF4A έχει κρίσιμες λειτουργίες σε OSCCs. κύτταρα shKIF4A έδειξε μειωμένη κυτταρική ανάπτυξη με την ενεργοποίηση SAC που οδηγούν σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου από τη φάση Μ. Εκτός από το

in vitro

δεδομένων, βρήκαμε επίσης ότι KIF4A ήταν ρυθμισμένη σε κλινικά δείγματα OSCC σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς και ότι KIF4A-θετικών κρουσμάτων OSCC σχετίζονταν στενά με καρκινικό μέγεθος. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι KIF4A συνδέεται με ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου στην Μ φάση και παίζει σημαντικό ρόλο στην καρκινική εξέλιξη σε OSCCs.

Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι KIFS παίζουν κρίσιμους ρόλους, συμπεριλαμβανομένων όγκων ανάπτυξη και εξέλιξη, σε καρκίνους [12-14,31,32]. Μεταξύ αυτών, KIF2C, KIF18A, KIF20A, και KIF20B ήταν πάνω ρυθμισμένα σε διάφορες κακοήθειες και συνδέονται με την καρκινική εξέλιξη [51-56]. Σε αντίθεση, KIF1A ήταν κάτω-ρυθμίζονται ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα και αναφέρεται ως ένα δυνητικό καρκινικό καταστολέα [57]. KIF4A υπερεκφράστηκε σε τραχήλου της μήτρας και καρκίνους του πνεύμονα [58,59], ενώ KIF4A ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω σε γαστρικών καρκίνων [60]. Εκτός από την τρέχουσα δεδομένα που KIF4A ήταν σημαντικά up-ρυθμίζεται OSCCs, Castillo et al. ανέφεραν ότι η υπερέκφραση κάποιων κινεσινών κινητήρα, συμπεριλαμβανομένου KIF4A, οι οποίες παράγουν επιπλέον προς τα έξω δυνάμεις κατά τη διάρκεια της μίτωσης, προκαλεί υπερβολική διαχωρισμό της ατράκτου που οδηγεί σε άνιση κατανομή του γενετικού υλικού σε ανάφαση και τελικά ανάπτυξη θυγατρικών κυττάρων που πλήττονται από ανευπλοειδία [61]. Αντίθετα, αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι η απώλεια της KIF4A μπορεί να επηρεάσει καρκινικό πολλαπλασιασμό και καρκινογένεση [34,62]. Λόγω της αντικρουόμενα αποτελέσματα, όπως αυτά, οι περισσότερες μελέτες που απαιτούνται για την καλύτερη κατανόηση των σύνθετων ρόλους KIF4A παίζει στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου.

Τα νέα ευρήματα fi στην παρούσα μελέτη είναι η συσχέτιση μεταξύ KIF4A νοκ ντάουν και διακοπή της μίτωσης που προκύπτουν από ενεργοποίηση SAC. Το μονοπάτι ενεργοποίησης SAC ελέγχεται αυστηρά από άξονα πρωτεΐνες σημείο ελέγχου, όπως BUB1 και ΜΑϋ2 [17-22]. Σε απάντηση σε ακατάλληλες προσκόλληση των χρωμοσωμάτων σε άτρακτο μικροσωληνίσκους, τα οποία προκαλούν μη φυσιολογική κυτταρική διαίρεση, BUB1 συγκεντρώνεται στα κινητοχώρους σε μιτωτικά κύτταρα και βοηθά τον εντοπισμό ΜΑϋ2 για κινητοχώρους [62-64]. Ενεργοποιείται ΜΑϋ2 εντοπίζεται σωστά στο κινητοχώρους μπορεί να αναστείλει CDC20, η οποία ενεργοποιεί την ουμπικιτίνη λιγάσης γνωστή ως APC /C [65-67]. Έτσι, αυτά τα στοιχεία δείχνουν ότι KIF4A νοκ ντάουν θα μπορούσε να προκαλέσει την ενεργοποίηση SAC μέσω APC /C αδρανοποίηση [23-27].

Βρήκαμε ότι παρατηρήθηκαν υψηλά επίπεδα κυκλίνης Β1 και Μ σύλληψη φάση των νοκ ντάουν KIF4A κύτταρα. Κατά τη διάρκεια της επαγωγής G2 /M φάση σύλληψης μετά την επεξεργασία των κυττάρων με αναστολείς μικροσωληνίσκων τα οποία ενεργοποιούν την SAC παρεμβαίνοντας δυναμική των μικροσωληνίσκων και τη σταθερότητα, όπως νοκοδαζόλη και πακλιταξέλη, μια σημαντική αύξηση των επιπέδων πρωτεΐνης κυκλίνης Β1 επίσης παρατηρήθηκε [65-69]. Ως εκ τούτου, προς τα κάτω ρύθμιση των KIF4A προκάλεσε την διακοπή του κυτταρικού κύκλου των κυττάρων OSCC με παρόμοιες λειτουργίες των αναστολέων μικροσωληνίσκων

επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης KIF4A στην πρωτοβάθμια OSCCs συσχετίστηκαν με καρκινική μέγεθος.? αυτό σημαίνει έντονα ότι KIF4A μπορεί να παίξει ένα σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη OSCCs και την ανάπτυξη. Στο σύνολό τους, τη διαστρωμάτωση των ασθενών με OSCC με βάση την κατάσταση KIF4A μπορεί να παρέχει μια πιο εξατομικευμένη προσέγγιση για τη θεραπεία της ανθρώπινης τον καρκίνο του στόματος.

Συμπέρασμα

Τα σημερινά αποτελέσματα έδειξαν για το χρονικό διάστημα πρώτη fi που KIF4A υπερεκφράζεται συχνά σε OSCC, η οποία προτείνει παρεμβολή στη λειτουργία των πρωτεϊνών ατράκτου οδοφράγματος όπως BUB1, ΜΑϋ2, και CDC20. έκφραση KIF4A συσχετίστηκε με καρκινική μέγεθος στο KIF4A-θετικές περιπτώσεις, υποδηλώνοντας ότι η ενεργοποίηση SAC παίζει σημαντικό ρόλο στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό σε OSCC. έκφραση KIF4A είναι πιθανό να είναι ένας βασικός ρυθμιστής των καρκινικών εξέλιξη σε OSCCs.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

KIF4A ανοσολογικής σε θετικούς και αρνητικούς μάρτυρες. Για να αξιολογηθεί η εξειδίκευση του αντισώματος KIF4A, εξετάσαμε την ένταση χρώσης των αρνητικών και θετικών μαρτύρων. Αρχική μεγέθυνση, × 400. Ράβδοι κλίμακας, 10 μm. (Α) Ως αρνητικός μάρτυρας, πρωτογενή δείγματα OSCC ανοσοχρωματίστηκαν χωρίς έκθεση σε πρωτογενή αντισώματα. Δεν υπήρχαν χρωματισμένα κύτταρα. (Β) σκελετικού μυϊκού ιστού είναι ένας θετικός έλεγχος για KIF4A. Ισχυρή ανοσοαντιδραστικότητα KIF4A ανιχνεύθηκε ειδικά στον πυρήνα των κυττάρων.

doi:. 10.1371 /journal.pone.0085951.s001

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε κα Lynda Γ Χάρτες Medical International για την επεξεργασία αυτού του χειρογράφου