Αφηρημένο

Αρκετές μελέτες έδειξαν ότι ο διαβήτης τύπου 2 σακχαρώδη και αντίσταση στην ινσουλίνη σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. Πρόσφατα, μελέτες δείχνουν ότι η μετφορμίνη μπορεί να μειώσει τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου σε διαβητικούς ή μη διαβητικούς ασθενείς με ασαφή μηχανισμούς. Η εργασία αυτή αποσκοπεί να προσδιοριστεί η επίδραση της μετφορμίνης επί χημικώς επαγόμενη καρκίνο του παχέος εντέρου σε ποντίκια. Καρκίνο του παχέος εντέρου προκλήθηκε χρησιμοποιώντας 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH, 20 mg /kg /εβδομάδα, υποδορίως) για δεκαπέντε εβδομάδες. Πείραμα Ι: υγιή ποντίκια τράφηκαν με βασική δίαιτα για τέσσερις εβδομάδες και στη συνέχεια κατανέμονται σε επτά ομάδες, (i) φυσιολογικού ορού, (ii) DMH, (iii) οξαλιπλατίνη, (iv-ν): μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) και (vi-vii): οξαλιπλατίνη + μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg), αντίστοιχα. Πείραμα II: σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 προκλήθηκε με ένεση STZ (30 mg /kg) μετά από τέσσερις εβδομάδες της σίτισης υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά και, στη συνέχεια, τα ποντίκια κατανεμήθηκαν σε επτά ομάδες παρόμοιες με αυτές που αναφέρθηκαν στο πείραμα Θ Εξέταση του κολικού ιστού στην τέλος του πειράματος επισημαίνεται μια αύξηση στην αγγειογενετική δείκτες και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και έδειξε μεγαλύτερη ανοσοβαφή για υποδοχείς παράγοντα ανάπτυξης ινσουλίνης Ι και CD

34 στο κόλον διαβητικών ποντικών σε σύγκριση με τους μη διαβητικούς. Σε γενικές γραμμές, η μετφορμίνη μειωτικά αγγειογένεση όγκου και αύξησε την αντικαρκινική δράση του οξαλιπλατίνη. Συνολικά, τα σημερινά αποτελέσματα έδειξαν ότι η μετφορμίνη προστατεύονται από DMH-προκληθέντα καρκίνο του παχέος εντέρου σε μη διαβητικά και διαβητικά ποντίκια. Αυτό το θεραπευτικό αποτέλεσμα ήταν, τουλάχιστον εν μέρει, οφείλεται σε αντι-αγγειογενετική και αντι-πολλαπλασιαστική τους μηχανισμούς της

Παράθεση:. Zaafar DK, Zaitone Α.Ε., Moustafa ΥΜ (2014) Ο ρόλος των μετφορμίνη στην καταστολή 1,2- διμεθυλυδραζίνη-προκληθέντα καρκίνο του παχέος εντέρου σε διαβητικούς και μη διαβητικούς ποντικούς: Επίδραση στη όγκου αγγειογένεση και κυτταρικού πολλαπλασιασμού. PLoS ONE 9 (6): e100562. doi: 10.1371 /journal.pone.0100562

Επιμέλεια: Rafael Aldabe, Centro de Investigación en Medicina Aplicada (CIMA), Ισπανία

Ελήφθη: 24 του Γενάρη του 2014? Αποδεκτές: 29 Μάη 2014? Δημοσιεύθηκε: 27 Ιουνίου 2014

Copyright: © 2014 Zaafar et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία χρηματοδότηση ή υποστήριξη στην έκθεση

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος είναι μια κατηγορία ασθενειών που χαρακτηρίζονται από έκβαση του ελέγχου κυτταρικής ανάπτυξης. Σε παγκόσμιο επίπεδο, καρκίνο του παχέος εντέρου είναι η τρίτη πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος στους άνδρες και η δεύτερη στις γυναίκες. Ο ορθοκολικός καρκίνος είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις αναπτυγμένες χώρες [1]. Παχέος εντέρου ξεκινήσει στην επένδυση του εντέρου και αν αφεθεί χωρίς θεραπεία, μπορεί να αυξηθεί στα μυϊκά στρώματα από κάτω, και στη συνέχεια μέσω του τοιχώματος του εντέρου.

σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 έχει συνδεθεί με τον αυξημένο κίνδυνο καρκίνου [ ,,,0],2]. Συγκεκριμένα, τα υψηλότερα ποσοστά της ηπατικής [3], του παχέος εντέρου [4] και του ενδομητρίου [5] του καρκίνου. Μια μετα-ανάλυση διεξήχθη από δημοσιευμένα στοιχεία για τη σχέση μεταξύ διαβήτη και την συχνότητα εμφάνισης, καθώς και τη θνησιμότητα του καρκίνου του παχέος εντέρου [4]. Οι παράγοντες που ευθύνονται για τον αυξημένο κίνδυνο έχει τεκμηριωθεί αλλά ποτέ διαλευκανθεί πλήρως στην ιατρική βιβλιογραφία.

Η αγγειογένεση είναι η διαδικασία της δημιουργίας νέων τριχοειδών αιμοφόρων αγγείων. Ανεξέλεγκτη αγγειογένεση μπορεί να προκαλέσει διαφορετικές παθολογίες [6], όπως η ανάπτυξη και μετάσταση όγκου [7]. Ένας αυξανόμενος όγκος χρειάζεται τριχοειδή να παρέχει θρεπτικά συστατικά και οξυγόνο. Ο αγγειακός ενδοθηλιακός αυξητικός παράγοντας (VEGF), ένα σημαντικό μεσολαβητή της αγγειακής διαπερατότητας και αγγειογένεσης, ενισχύει μικροαγγειακή υπερδιαπερατότητα, το οποίο μπορεί να προηγείται και να συνοδεύει την αγγειογένεση [8]. VEGF βρέθηκε να είναι υψηλότερη σε ορούς παιδιών και ενηλίκων με σακχαρώδη διαβήτη τύπου 1 [9] και παίζει σημαντικό ρόλο σε ασθένειες που σχετίζονται με αγγειακές συμπεριλαμβανομένης ανάπτυξη όγκων σε σακχαρώδη διαβήτη [10]. Ταχεία εξέλιξη του καρκίνου παρατηρήθηκε υπό διαβητική ή /και υπεργλυκαιμικών συνθηκών σε ποντικούς [11].

Υπάρχει μια σχέση μεταξύ της ινσουλίνης και του καρκίνου, υπερινσουλιναιμία προκαλεί ανωμαλίες πολλαπλασιαστικός ιστός, επειδή η ινσουλίνη έχει μια ισχυρή αναβολική δράση, η οποία οδηγεί σε διεγερμένη σύνθεση του DNA και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό [12]. Αυτό το αποτέλεσμα μπορεί επίσης να εξηγηθεί από την εγκάρσια ενεργοποίηση της οικογένειας ινσουλινοειδούς αυξητικού παράγοντα-Ι (IGF-I) υποδοχέα [13]. Το σύστημα σηματοδότησης IGF παίζει σημαντικό ρόλο στον καρκίνο του ανθρώπου και τον υποδοχέα IGF (IGF-R) είναι ένας ελκυστικός στόχος φάρμακο κατά του οποίου αναπτύσσονται μια ποικιλία νέων παραγόντων κατά του όγκου [14]. Επιδημιολογικές μελέτες έχουν αποδείξει μια σύνδεση μεταξύ αυξημένα επίπεδα IGF και την ανάπτυξη των συμπαγών όγκων, όπως του παχέος εντέρου, του μαστού και του καρκίνου του προστάτη [15]. Δεν είναι σαφές εάν ΙΟΡ-Ι είναι ένας αιτιώδης παράγοντας στην ορθοκολικό καρκίνο [16].

μετφορμίνη θεωρείται, εκτός από την αλλαγή του τρόπου ζωής, ως μορφή θεραπείας πρώτης γραμμής για το σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 [16]. Ενδιαφέροντος, οι προηγούμενες μεγάλες μελέτες ασθενών-μαρτύρων έδειξε ότι οι διαβητικοί ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με μετφορμίνη είχαν μία χαμηλότερη επίπτωση καρκίνου από εκείνους που έλαβαν θεραπεία με άλλα διαβητικά φάρμακα [17] – [19]. Οι διαβητικοί ασθενείς με καρκίνο του μαστού που έλαβαν θεραπεία με μετφορμίνη παρουσίασαν υψηλότερα παθολογική ποσοστά πλήρους ανταπόκρισης με εισαγωγική χημειοθεραπεία από ό, τι εκείνοι που έλαβαν θεραπεία με άλλα φάρμακα διαβήτη [20]. έχουν διάφορους μηχανισμούς για τη μείωση του κινδύνου καρκίνου του υποτεθεί [21].

Η τρέχουσα μελέτη σχεδιάστηκε για να συγκρίνει την σοβαρότητα της πειραματικά επαγόμενης καρκίνο του παχέος εντέρου σε διαβητικούς και μη διαβητικούς ποντικούς. Επιπλέον, ο ρόλος της μετφορμίνης στην αγωγή DMH-προκληθέντα καρκίνο του παχέος εντέρου διερευνήθηκε σε διαβητικούς και μη διαβητικούς ποντικούς εστιάζοντας στην επίδρασή της στην αγγειογένεση όγκων και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό. Ως εκ τούτου, ορισμένοι από τους μηχανισμούς του υποτιθέμενου αντικαρκινική δράση της μετφορμίνης μπορεί να επισημανθεί.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Όλα τα πειραματικά πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από το Ερευνητικό Δεοντολογίας Επιτροπής στο Τμήμα Φαρμακευτικής, Πανεπιστήμιο Διώρυγα του Σουέζ.

πειραματόζωα

Άντρας Swiss albino ποντίκια που ζυγίζουν 28-35 g παρασχέθηκαν από το Σύγχρονο Κτηνιατρικό Γραφείο Εργαστηριακών ζώων (Κάιρο, Αίγυπτος). Οι ποντικοί στεγάστηκαν σε ομάδες των δέκα σε κλουβιά πολυαιθυλενίου υπό ελεγχόμενες εργαστηριακές συνθήκες και φυσιολογικό κύκλο σκότους /φωτός. Τα ποντίκια αφέθηκαν να εγκλιματιστούν για μία εβδομάδα πριν την έναρξη του πειράματος. Νερό και τροφή συστατικά δόθηκαν κατά βούληση κατά τη διάρκεια της περιόδου της μελέτης.

Φάρμακα και χημικές ουσίες

Η υδροχλωρική μετφορμίνη χορηγήθηκε ευγενώς από το Sigma Pharmaceutical Co. (Quesna, Αίγυπτος) και διαλύεται σε απεσταγμένο νερό. Οξαλιπλατίνη (οξαλιπλατίνη, Hospira Inc, IL, Αυστραλία) ήταν φρεσκομαγειρεμένα κάθε εβδομάδα. Στρεπτοζοτοκίνη (STZ) και 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH) αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (ΜΟ, USA). STZ παρασκευάζεται προσφάτως σε κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα (0.1 Μ, ρΗ = 4.5), ωστόσο? DMH αραιώθηκε με αλατούχο φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα. Τα συστατικά των ζωοτροφών, όπως λαρδί και η σακχαρόζη προέρχονται από τις εμπορικές πηγές. Το κιτρικό οξύ και κιτρικό νάτριο δόθηκαν από ADWIC Εταιρείας για τα χημικά προϊόντα (Κάιρο, Αίγυπτος).

Πρόκληση διαβήτη και την εκτίμηση της αντίστασης στην ινσουλίνη με τη χρήση του δείκτη HOMA-IR

Ποντίκια στο πείραμα II τρέφονταν με μια δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά (HFD), το οποίο παρασκευάστηκε με ανάμιξη 20% σακχαρόζη (β /β) και 10% λαρδί (w /w) σε βασική δίαιτα (BD) για τέσσερις εβδομάδες. Μετά από αυτό, οι ποντικοί υποβάλλονται σε νηστεία όλη τη νύκτα, στη συνέχεια, έλαβαν μία απλή ένεση STZ (30 mg /kg, ε.π.) [22] σε έναν όγκο 5 ml /kg (Σχήμα 1). Επτά ημέρες μετά τη χορήγηση STZ, οι ποντικοί νήστεψαν για μια νύχτα και το επίπεδο γλυκόζης στο αίμα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας One Touch Ultra Mini γλυκόμετρο (USA). Επιπλέον, ένα δείγμα αίματος τραβήχτηκε από κάθε ποντικό από την κόγχη του οφθαλμού για να ληφθούν τα δείγματα ορού τα οποία διατηρήθηκαν στους -80 ° C και στη συνέχεια χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του επιπέδου της ινσουλίνης στον ορό χρησιμοποιώντας ενζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) κιτ για ινσουλίνη ( Biorbyt, UK) ακολουθώντας τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή. Η αντίσταση στην ινσουλίνη υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το μοντέλο αξιολόγησης ομοιόστασης για την αντίσταση στην ινσουλίνη (HOMA-IR) του δείκτη, χρησιμοποιώντας τον τύπο που περιγράφεται προηγουμένως από Mathew et al. [23], ο δείκτης HOMA-IR = [γλυκόζης νηστείας (mmol /L) × ινσουλίνη νηστείας (μU /ml)] /22.5).

ΩΜΗ χορηγήθηκε ως (20 mg /kg /εβδομάδα, sc) . Μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg /ημέρα) χορηγήθηκε από το στόμα. Η οξαλιπλατίνη χορηγήθηκε εβδομαδιαία σε μία δόση ισούται με 4 mg /kg /εβδομάδα (ε.π.). BD: βασική διατροφή, HFD: υψηλή σε λιπαρά διατροφή, ΩΜΗ: 1,2-dimethyhydrazine. Όλες οι πειραματικές ομάδες έλαβαν DMH πριν την έναρξη των θεραπειών υποδεικνύεται εκτός αλατούχο ομάδες.

Η

Επαγωγή του καρκίνου του κόλου

Για την επαγωγή του καρκίνου του κόλου, τα ποντίκια ενέθηκαν υποδορίως με DMH (20 mg /kg /εβδομάδα, το σωματικό βάρος) για δεκαπέντε εβδομάδες [24]. Η θεραπεία με ΩΜΗ άρχισε μία εβδομάδα μετά την ένεση STZ (δηλαδή) μετά την εκτίμηση της γλυκόζης στο αίμα και συνεχίστηκε για δεκαπέντε εβδομάδες (Εικ. 1).

Οι φαρμακολογικές θεραπείες

Η θεραπεία με μετφορμίνη ξεκίνησε μετά την ολοκλήρωση της η πορεία της ϋΜΗ (δηλαδή κατά την έναρξη της εβδομάδας 21). θεραπεία μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) [25] συνεχίστηκε για τις επόμενες τέσσερις εβδομάδες έως ότου σκοτώθηκαν τα ποντίκια στο τέλος της θεραπευτικής περιόδου (το τέλος της εβδομάδας 24) (Εικ. 1). Τα ποντίκια παρακολουθούνταν καθημερινά για οποιαδήποτε ενόχληση και ζυγίζονται κάθε τρίτη ημέρα για να ελέγξει για την ανάπτυξη του όγκου. Για θεραπείες συνδυασμού, θεραπεία οξαλιπλατίνη (4 mg /kg, ip) δόθηκε την ημέρα 7, 14, 21 και 28 εκτός από την καθημερινή θεραπεία με μετφορμίνη.

Πειραματικές ομάδες

Η τρέχουσα μελέτη διεξήχθη σε δύο ξεχωριστές ομάδες ποντικών? επτά ομάδες το καθένα. Κάθε ομάδα ξεκίνησε με δέκα ποντίκια.

Πείραμα Ι

διεξήχθη σε υγιείς (

μη διαβητικούς

) ποντίκια. Τα ποντίκια τράφηκαν με βασική δίαιτα για τέσσερις εβδομάδες και στη συνέχεια κατανέμονται σε επτά ομάδες, (i) Saline, (ii) DMH, (iii) DMH + οξαλιπλατίνη, (iv): DMH + μετφορμίνη (100 mg /kg), (v) : DMH + μετφορμίνη (200 mg /kg), (vi): ΟΜΗ + οξαλιπλατίνη + μετφορμίνη (100 mg /kg) και (vii):. ΟΜΗ + οξαλιπλατίνη + μετφορμίνη (200 mg /kg)

Πείραμα ΙΙ.

διεξήχθη στο

διαβητικούς

ποντίκια. Ο διαβήτης τύπου 2 σακχαρώδη προκλήθηκε με έγχυση ενός χαμηλού από STZ (30 mg /kg) μετά από τέσσερις εβδομάδες της σίτισης με HFD όπως αναφέρθηκε προηγουμένως και στη συνέχεια τα ποντίκια κατανεμήθηκαν σε επτά ομάδες παρόμοιες με αυτές που φαίνονται στο πείραμα Ι (Εικ. 1).

Αιτιολόγηση της δόσης και το χρονοδιάγραμμα της θεραπείας με μετφορμίνη

Μια τυπική δόση ανθρώπινη μεταχείριση της μετφορμίνης είναι 1000-2500 mg, δίνεται συνήθως δύο φορές την ημέρα. Στην παρούσα μελέτη, η μετφορμίνη (100 και 200 ​​mg /kg) χρησιμοποιήθηκε, και αυτό μπορεί να μεταφραστεί με την ανθρώπινη ισοδύναμη δόση με τη χρήση της μεθόδου Reagan-Shaw [26]. Σύμφωνα με τον τύπο το ανθρώπινο ισοδύναμο της δόσης (mg /kg) = δόση των ζώων (mg /kg) × ζώο (km) /ανθρώπου (km). Χιλιομέτρων για ένα 60 kg ενήλικες ανθρώπους ισούται με 37 και για ένα 20 g ποντικού ισούται 3. Έτσι το ανθρώπινο ισοδύναμο ποντικού δόση των 100 και 200 ​​mg /kg, 486 και 973 mg για ένα μέσο μέγεθος των 60 kg ενήλικα άνθρωπο. Ως εκ τούτου, όλα τα επιλεγμένα δόσεις στην παρούσα μελέτη είναι εντός του θεραπευτικού εύρους ασφαλή καταγράφονται σε ανθρώπους.

Περαιτέρω, η παρούσα μελέτη προσδιορίστηκε η θεραπευτική περίοδος να είναι 4 εβδομάδες για να δοκιμαστεί η αντικαρκινική δράση της μετφορμίνης. Αυτό ήταν συμβατή με τις θεραπευτικές περιόδους που αναφέρθηκαν σε προηγούμενες μελέτες. Για παράδειγμα Ramandeep et al. (2011) μελέτησαν την επίδραση μιας τριών εβδομάδων θεραπευτική αγωγή μετφορμίνης (100 και 200 ​​mg /kg /ημέρα, ρ.ο.) στην καταστολή του καρκίνου των ωοθηκών [27]. Η μικρότερη διάρκεια σχεδιάστηκε από τον Liu et al. (2013)? οι συγγραφείς προσδιορίζεται η επίδραση της μετφορμίνης (250 mg /kg, ί.ρ.) για δεκαπέντε ημέρες έναντι νεφρικών κυττάρων καρκινώματος in vivo ξενομοσχεύματα [28]. Μια άλλη μελέτη εξέτασε την επίδραση της μετφορμίνης (600 mg /kg /ημέρα) για 21 ημέρες μετά τον εμβολιασμό των κυττάρων μελανώματος Β16 [29].

Η οξαλιπλατίνη χρησιμοποιήθηκε για να είναι μια συμπληρωματική θεραπεία με 5-flourouracil στη θεραπεία ορθοκολικού καρκινώματος , και αυτό είναι ένα μετρίως αποτελεσματικό φάρμακο για τη θεραπεία όταν χρησιμοποιούνται μόνα, όπως η οξαλιπλατίνη παρήγαγε ποσοστά ανταπόκρισης 12% έως 24% σε ασθενείς με μη προθεραπευμένο προχωρημένο καρκίνο του παχέος εντέρου, και 10% έως 11% σε ασθενείς με υποτροπιάζουσα ή ανθεκτική προχωρημένο καρκίνο του παχέος εντέρου . Σε δοκιμές φάσης ΙΙ, οξαλιπλατίνη σε συνδυασμό με 5-flourouracil, με ή χωρίς λευκοβορίνη, σχετίστηκε με ποσοστά ανταπόκρισης 60%. Ως εκ τούτου, υποτίθεται ότι η ήπια έως μέτρια αποτελεσματικότητα στη θεραπεία αυτού του τύπου καρκίνου θα επιτρέψει την αναμενόμενη επίδραση της μετφορμίνης να εντοπιστούν [30].

συλλογή αίματος και το δείγμα της προετοιμασίας της

Κατά την τέλος του πειράματος, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με θειοπεντάλη νατρίου (50 mg /kg, ip) και θανατώθηκαν με αποκεφαλισμό. Συλλέχθηκαν δείγματα αίματος με καρδιακή παρακέντηση και φυγοκεντρείται στα 2000 χ

g

για 15 λεπτά – εντός 30 λεπτών μετά τη συλλογή των δειγμάτων αίματος. Στη συνέχεια, οι οροί διαχωρίστηκαν και συλλέχθηκαν σε δύο καθαρά σωληνάρια Eppendorf και αποθηκεύεται στους -20 ° C μέχρι να χρησιμοποιηθεί για τους προσδιορισμούς ELISA. Επιπλέον, τα δείγματα ιστών από το κόλον ανατμήθηκαν και σταθεροποιήθηκαν σε φορμαλίνη ρυθμισμένου με φωσφορικά (4% παραφορμαλδεΰδη σε 0.1 Μ φωσφορικό ρυθμιστικό, ρΗ = 7,2) όλη τη νύκτα και στη συνέχεια ενσωματώνεται σε κερί παραφίνης. Όλα τα τμήματα εγκλεισμένων σε παραφίνη κόπηκαν σε 4-μm πάχους και αφήνονται να στεγνώσουν όλη τη νύχτα. Οι τομές στη συνέχεια αποπαραφινοποιήθηκαν, ενυδατωμένο και προετοιμάζονται για ιστοπαθολογική χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε). Λεκέ για εξέταση ρουτίνας μέσα από το φως ηλεκτρική μικροσκόπιο [31]

Προσδιορισμός του IGF-1 στον ορό και VEGF με κιτ ELISA

ο ορός IGF-1 προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το ποντίκι του IGF-1 κιτ ELISA (Biorbyt, Ηνωμένο Βασίλειο), ενώ VEGF προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ ποντικού VEGF ELISA (Κυρ Red Biotechnology Company, Σαγκάη, Κίνα)? και οι δύο προσδιορίστηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι αντιδράσεις αξιολογήθηκαν με μέτρηση της οπτικής πυκνότητας χρησιμοποιώντας ένα αυτοματοποιημένο αναγνώστη ELISA στα 450 nm

ιστοπαθολογική εξέταση του ιστού του παχέος εντέρου

Οι ιστοί τομές χρωματίστηκαν με Η &?. Ε εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας ένα ελαφρύ μικροσκόπιο. Κάθε τμήμα ιστού προβλήθηκε για πρώτη φορά σε χαμηλή ισχύ (× 10 μεγέθυνση). Ότι, το σκορ έγινε τυφλά από έναν έμπειρο παθολογοανατόμο σε μια ανώτερη δύναμη (× 40 μεγέθυνση). Όγκου κύτταρα σε κόλον αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας μία διαδικασία μορφομετρικών σημείο καταμέτρησης. Η ταξινόμηση έγινε σύμφωνα με τον βαθμό της δυσπλασίας των κυττάρων η οποία είναι μια απόκλιση από την κανονική δομή, υπερπλασία η οποία αυξάνεται από το κανονικό μέγεθος των κυττάρων, φλεγμονώδεις αντιδράσεις στη στρώση του βλεννογόνου η οποία χαρακτηρίζεται από φλεγμονώδη κύτταρα διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων συσσωμάτωση σε εστιακό τρόπο , λεμφοειδή πολλαπλασιασμός, συμφόρηση των αιμοφόρων αγγείων και ίνωση. 0 = χωρίς δυσπλασία, υπερπλασία και φλεγμονώδεις αντιδράσεις, 1 = καμία δυσπλασία ή υπερπλασία αλλά ήπια φλεγμονώδη δώρα αντίδραση, 2 = μέτρια φλεγμονώδη αντίδραση με ή χωρίς δυσπλασία, 3 = σοβαρή φλεγμονώδη αντίδραση με δυσπλασία ή υπερπλασία ή και τα δύο, 4 = πολύ κόβω φλεγμονώδη αντίδραση με ίνωση και δυσπλαστικών και υπερπλασίας δραστηριότητα.

η ανοσοϊστοχημεία και ανάλυση εικόνας

Εν συντομία, immunostainig πραγματοποιήθηκε με τη χρήση στρεπταβιδίνης-βιοτίνης-ανοσοϋπεροξειδάσης πολύπλοκη μέθοδο με 4-μm πάχους τομές που έχουν αποπαραφινοποιήθηκαν και θερμαίνεται σε 0,01 Μ ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικού (ρΗ = 6) επί 15 λεπτά για ανάκτηση αντιγόνου. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύχτα με πολυκλωνικό κουνελιού αντισώματα έναντι IGF υποδοχέα τύπου 1 (IGFR-1) (Biorbyt, UK), μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού έναντι CD

34 (Bio SB, Σάντα Barbana, USA) και πολύκλωνα αντισώματα κουνελιού στο Ki- 67 (Abcam, Cambridge, UK) σε 4 ° C. Μετά από σύζευξη με στρεπταβιδίνη-βιοτίνης-υπεροξειδάσης (ευρύ σύστημα ανίχνευσης φάσματος LAB-SA, Invitrogen), 3,3-διαμινοβενζιδίνη (DAB, Sigma-Aldrich, ΜΟ, USA) χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο και αιματοξυλίνη Mayer χρησιμοποιήθηκε ως αντιχρωστική . Στη συνέχεια, οι τομές ιστών εξετάσθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ελαφρύ μικροσκόπιο και φωτομικρογραφίες συνελήφθησαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ αναπτύχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (Bethesda, Maryland, USA). Εν συντομία, η θετική DAB λεκιασμένη περιοχή, τα οποία αντιπροσωπεύουν τη θετική περιοχή, σε κάθε ψηφιακή μικροφωτογραφία αυτομάτως διαχωρίζεται από αιματοξυλίνη, τα οποία αντιπροσωπεύουν τη συνολική έκταση, με τη χρήση plugin χρώμα αποσυνέλιξη. Εικόνες στη συνέχεια μεταποιούνται σε δυαδική έγχρωμη εικόνα (μαύρο και άσπρο). Το ποσοστό των θετικά λεκιασμένη περιοχή (που αντιπροσωπεύεται από το μαύρο χρώμα) προσδιορίστηκε στη συνέχεια. Ανοσολογική αντίδραση για IGFR-I, CD

34 και Ki-67 αξιολογήθηκαν σε δέκα αντιπροσωπευτικά συνεχόμενα τμήματα σε ολόκληρο το τμήμα του ιστού στο καθένα.

Η στατιστική ανάλυση

Όλα τα αποτελέσματα παρατίθενται και εξέφρασε ως μέσος ± SEM Για τις παραμέτρους με κατανομή Gauss, συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) που ακολουθείται από

post-hoc τεστ Tukey

ως δύο ανεξάρτητες μεταβλητές αλληλεπιδρούν. Ότι, οι παράμετροι με μη Gaussian κατανομή, όπως ιστολογικές βαθμολογίες, πραγματοποιήθηκαν με τη δοκιμή Kruskal-Wallis (μη-παραμετρική ANOVA) ακολουθούμενη από δοκιμασία του Dunnett για πολλαπλές συγκρίσεις. Οι καμπύλες επιβίωσης χαράσσονται για τις πειραματικές ομάδες στα δύο πειράματα και τον αριθμό των ποντικών που επιβιώνουν συγκρίθηκε χρησιμοποιώντας τετράγωνο τεστ Chi.

t

τεστ αταίριαστο φοιτητή χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της διαφοράς μεταξύ των δύο ομάδων, όταν χρειάζεται. Η ανάλυση των δεδομένων έγινε χρησιμοποιώντας το στατιστικό πακέτο για κοινωνικές επιστήμες, έκδοση 17 (SPSS λογισμικού, SPSS Inc., Chicago, USA). Όλα

P

αναφερόμενες τιμές είναι αμφίδρομες και

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

Τα αποτελέσματα της παρούσας πείραμα έδειξε ότι ένεση ϋΜΗ επαγόμενης θνησιμότητας 30% σε μη διαβητικούς ποντικούς έναντι της θνησιμότητας κατά 40% σε διαβητικούς ποντικούς. Η θεραπεία με οξαλιπλατίνη ή /και μετφορμίνη δεν άλλαξε τον αριθμό των επιβιώσεις σε μη διαβητικούς ποντικούς (Σχ. 2). Ωστόσο, σε διαβητικούς ποντικούς, η μονοθεραπεία με μετφορμίνη (200 mg /kg) αύξησε τον αριθμό των ποντικών που επιβιώνουν σε σύγκριση με διαβητική ομάδα /DMH (90% έναντι 60%,

P

& lt?. 0.05, Σχήμα 2) . Η καμπύλη επιβίωσης έδειξε ότι ορισμένοι θνησιμότητα καταγράφηκαν κατά τη διάρκεια της θεραπείας ΩΜΗ (εβδομάδα 6-20), ωστόσο? ο μεγαλύτερος αριθμός θανάτων καταγράφηκε στη θεραπευτική περίοδο (εβδομάδα 21-24).

Ο αριθμός των ποντικών που επιβιώνουν σε μη διαβητικούς ομάδες (άνω αριστερό πάνελ) και σε διαβητικούς ομάδες (πάνω δεξιά πάνελ) σε διαφορετικές χρονικά σημεία συνολικά την πορεία του πειράματος. Το κατώτερο πάνελ επιδεικνύει τον τελικό αριθμό των επιζώντων ποντικιών στο τέλος του πειράματος (τέλος της εβδομάδας 24). Ποντίκια [εκτός αλατούχο ομάδα] εγχύθηκαν με 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH) εβδομαδιαίως για 15 εβδομάδα για να προκαλέσουν καρκίνο του παχέος εντέρου συνέχεια κατεργάζεται με οξαλιπλατίνη ή /και μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) για 4 εβδομάδες. Τα δεδομένα εκφράζονται ως απόλυτος αριθμός (από δέκα) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τετράγωνο τεστ Chi σε

P

& lt? 0.05. * Σημαντικά διαφορετική από την ομάδα φυσιολογικού ορού.

#Significantly διαφορετική από την ομάδα ΩΜΗ.

$ Σημαντικά διαφορετική από την ομάδα οξαλιπλατίνη.

≠ Σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (/kg 100 mg) ομάδα.

× σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (200 mg /kg),

n = 10 κατά την έναρξη της

πειράματος.

Η

Στο τέλος της εβδομάδας 4, η μέση αρχική σωματικό βάρος όλων των ποντικών στο πείραμα II ήταν σημαντικά υψηλότερο από αυτό που καταγράφηκε στο πείραμα Ι (35.71 ± 2.9 έναντι 30,16 ± 2,78,

P

& lt? 0,05). Ωστόσο, στο τέλος της μελέτης (τέλος της εβδομάδας 24), η μέτρηση της επί τοις εκατό μεταβολή στο βάρος σώματος επισημανθεί καμία διαφορά μεταξύ των ποντικών στα δύο πείραμα Ι και II (Πίνακας 1Α & amp? Β).

Η

τα αποτελέσματα που προκύπτουν από το πείραμα II έδειξε ότι το σημερινό μοντέλο του σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 συνοδεύτηκε από μεγαλύτερη δείκτη HOMA-IR σε σύγκριση με ποντίκια που τρέφονταν με μια βασική δίαιτα στο πείραμα Ι (9,22 ± 0,76 έναντι 2,68 ± 0,26,

P

& lt? 0,05). Στο πείραμα Ι, η μονοθεραπεία με μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg), καθώς και συνδυασμοί της με οξαλιπλατίνη δεν προκάλεσε μεταβολή στην υπολογιζόμενη δείκτη HOMA-IR σε σύγκριση με έλεγχο άλμης τους. Αντίθετα, στο πείραμα II, αυτές οι φαρμακοθεραπείες μείωσε το υπολογιζόμενο δείκτη HOMA-IR σε σύγκριση με τον έλεγχο της διαβητικής /αλατούχου (Πίνακας 2Α & amp? Β).

Η

Περαιτέρω, ο IGF-I στον ορό επίπεδο σε διαβητικούς /αλατούχου ομάδα ήταν μεγαλύτερη (περίπου εννέα-φορές) από αυτό που μετρήθηκε σε μη διαβητικούς /αλατούχου ομάδα (4578 ± 454 έναντι 536 ± 54,

P

& lt? 0,05, Πίνακας 2). Τα τρέχοντα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι επανειλημμένες ένεση ϋΜΗ ως αποτέλεσμα τη μείωση στον ορό ΙΟΡ-Ι επίπεδο σε σύγκριση με αλατούχο διάλυμα ελέγχου και στα δύο πειράματα Ι και II. Σε μη διαβητικούς ποντικούς, η μονοθεραπεία με οξαλιπλατίνη ή μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) παρήγαγε μια περαιτέρω μείωση στον ορό ΙΟΡ-Ι επίπεδο σε σύγκριση με μη διαβητικούς /ομάδα DMH, ωστόσο, ο συνδυασμός 1 και 2 δεν παράγει μια παρόμοια μείωση στον ορό IGF-I. Από την άλλη πλευρά, διαβητικούς ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg), καθώς και η ομάδα συνδυασμού 1 έδειξαν σημαντική αύξηση στον ορό ΙΟΡ-Ι επίπεδο σε σύγκριση με διαβητική ομάδα /DMH (Πίνακας 2).

Τα παρόντα αποτελέσματα έδειξαν ότι το επίπεδο του VEGF στον ορό σε μη διαβητικούς ομάδα /DMH δεν ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι μη-διαβητικούς /αλατούχου ομάδα (612 ± 54 έναντι 516 ± 46, Εικ. 3). Στους μη διαβητικούς ποντικούς, όλα τα εφαρμοστεί φαρμακολογικών παραγόντων ήταν σε θέση να μειώσουν το επίπεδο VEGF σε σύγκριση με μη-διαβητικά /ϋΜΗ ελέγχου (Εικ. 3). Περαιτέρω, η μονοθεραπεία με μετφορμίνη (200 mg /kg) ή ο συνδυασμός του με οξαλιπλατίνη (συνδυασμός 2) έδειξε χαμηλότερα επίπεδα VEGF στον ορό σε σύγκριση με τη μονοθεραπεία με οξαλιπλατίνη (

P

& lt?. 0.05, Σχήμα 3).

Επίδραση της οξαλιπλατίνης ή /και μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) σε IGF-I (πίνακας Α) και VEGF ορού (πίνακας Β) στον ορό. Ποντίκια [εκτός αλατούχο ομάδα] εγχύθηκαν με 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH) εβδομαδιαίως για 15 εβδομάδα για να προκαλέσουν καρκίνο του παχέος εντέρου συνέχεια κατεργάζεται με οξαλιπλατίνη ή /και μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) για 4 εβδομάδες. DMH: 1,2-διμεθυλυδραζίνη, IGF-I: παράγοντα ανάπτυξης ινσουλίνης-Ι, VEGF: αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση ± S.E.M. και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ΑΝΟνΑ ακολουθούμενη από

post-hoc τεστ Tukey

κατά

P

& lt?. 0,05 * Σημαντικά διαφορετική από φυσιολογικό ορό ομάδα.

#Significantly διαφορετική από την ομάδα ΩΜΗ.

$ Σημαντικά διαφορετική από την ομάδα οξαλιπλατίνη.

≠ Σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (/kg 100 mg) ομάδα.

× σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (200 mg /kg),

n = 5-6

.

Η

Είναι σημαντικό, το επίπεδο του VEGF στον ορό ήταν μεγαλύτερη στους διαβητικούς /φυσιολογικό ορό ομάδα σε σύγκριση με μη διαβητικούς /αλατούχου ομάδα (680 ± 60 έναντι 516 ± 46,

P

& lt? 0,05, σχ. 3). Στο πείραμα II, διαβητική ομάδα /ΟΜΗ δεν δείχνουν σημαντική αλλαγή στο επίπεδο του VEGF στον ορό σε σύγκριση με διαβητική /φυσιολογικού ορού ομάδας. Περαιτέρω, η μονοθεραπεία με μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) και ο συνδυασμός της με την οξαλιπλατίνη παρήγαγε μία μείωση στο επίπεδο VEGF στον ορό σε σύγκριση με διαβητική ομάδα /ΟΜΗ, ωστόσο, η μονοθεραπεία με οξαλιπλατίνη απέτυχαν να παράγουν ένα παρόμοιο αποτέλεσμα (Σχ. 3Β). Επιπλέον, το επίπεδο VEGF ήταν χαμηλότερο σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με μετφορμίνη (100 mg /kg) και στην ομάδα συνδυασμού 2 σε σχέση με τα ποντίκια που έλαβαν μονοθεραπεία με οξαλιπλατίνη (Σχ. 3-Β).

Μετά την αναμόχλευση των ποντικών, οι βλάβες ήταν σε γενικές γραμμές δεν είναι ορατές από το ακαθάριστο εξέταση. Ωστόσο, η ιστολογική εξέταση αποκάλυψε ότι βλεννογόνου του παχέος εντέρου έδειξε υπερπλασίας και των δυσπλαστικών επιθηλιακών βλαβών και παρεκκλίνουσα εστίες κρύπτη. Το απώτατο κολονικό βλεννογόνο με παρεκκλίνουσα κρυπτικές εστίες ήταν δύσκολο να εντοπιστούν από την κανονική βλεννογόνο. Ιστοπαθολογικές αλλοιώσεις ανιχνεύθηκαν σε μεγάλη μεγέθυνση? υπήρχε μια διάχυτη διαταραχή του βλεννογόνου του παχέος εντέρου. Περαιτέρω, τα κύτταρα εστίες εντός του βλεννογόνου ήταν υπερκυτταρικός, που αποτελείται από μεγάλο αριθμό αποδιοργανωμένη επιθηλιακών κυττάρων? οι πυρήνες ήταν μεγάλο και υπερχρωματικό. Απομονωμένα νησιά του προ-νεοπλασματικών κυττάρων τα οποία προήλθαν από το επιθήλιο παρατηρήθηκαν με χαρακτηριστική λευκοκυτταρική διήθηση. Οι κρύπτες διατάχθηκαν σε μια στενά συσκευασμένα τρόπο (Σχήμα 4Α).

Α) φωτομικρογραφίες από τις πειραματικές ομάδες. Colon του μη διαβητικούς /αλατούχου ποντίκια δείχνει κανονική ιστοπαθολογική δομή του στρώματος του βλεννογόνου με αδενική δομή (ζ) και την υποκείμενη υποβλεννογόνο και μυϊκό στρώμα × 40. Colon της διαβητικής /αλατούχου ποντίκια δείχνει εστιακό συσσωμάτωση λεμφοειδή στο στρώμα βλεννογόνου (βέλος) με απολέπιση του επιθηλίου του βλεννογόνου και αδενική δομή × 40. Colon από μη-διαβητικούς /ομάδα ΩΜΗ δείχνει κυστική διάταση του αδενικού δομή με ήπια δυσπλαστικών επένδυση επιθηλιακά κύτταρα και τη συμφόρηση στα αγγεία (βέλος) × 80. Colon των διαβητικών ποντικών /ΟΜΗ δείχνει εστιακό λεμφικών τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων αντικατάσταση του βλεννογόνου × 40. Colon της μη διαβητικούς /ποντίκια ΩΜΗ αγωγή με οξαλιπλατίνη δείχνει εστιακό χώρο παραμόρφωση με φλεγμονώδη κύτταρα διείσδυση στο στρώμα του βλεννογόνου × 80. Colon της διαβητικής /ποντίκια ΩΜΗ αγωγή με οξαλιπλατίνη δείχνει ανενεργό επιθήλιο επένδυση με πεπλατυσμένο πυρήνες και μερικά φλεγμονώδη κύτταρα Διείσδυση στο μεταξύ × 80. Colon του μη διαβητικούς /ποντίκια DMH αγωγή με μετφορμίνη (100 mg /kg) που δείχνει εστιακά λεμφοειδή υποπλασία στο στρώμα βλεννογόνου × 80. Colon της διαβητικής /ποντίκια DMH αγωγή με μετφορμίνη (100 mg /kg) που δείχνει τεράστιο αριθμό φλεγμονωδών κυττάρων διείσδυση στην αυλούς propria του στρώματος του βλεννογόνου με υπερπλασία και δυσπλασία στην επένδυση επιθήλια του αδενικού δομή × 40. Colon του μη διαβητικούς /ποντίκια DMH αγωγή με μετφορμίνη (200 mg /kg) που δείχνει φλεγμονώδη κύτταρα διείσδυση και ίνωση σε υμένα μεταξύ των αδένων × 80. Colon της διαβητικής /ποντίκια DMH αγωγή με μετφορμίνη (200 mg /kg) που δείχνει εκφυλισμό του αδενικού επένδυσης επιθήλιο με απώλεια των πυρήνων × 80. Colon του μη διαβητικούς /ποντίκια DMH αγωγή με ένα συνδυασμό οξαλιπλατίνη και μετφορμίνη (100 mg /kg) που δείχνει λεμφοειδή πολλαπλασιασμό σε στρώμα βλεννογόνου × 80. Colon της διαβητικής /ποντίκια ΩΜΗ αντιμετωπίζονται με ένα συνδυασμό οξαλιπλατίνη και μετφορμίνη (100 mg /kg) που δείχνει ενεργό αδενικό δομή με επένδυση επιθήλιο του γύρου πυρήνων × 40. Colon του μη διαβητικούς /ποντίκια DMH αγωγή με ένα συνδυασμό οξαλιπλατίνη και μετφορμίνη (200 mg /kg) που δείχνει φλεγμονώδη κύτταρα διείσδυση ανάμεσα στα αδενικά δομή × 80. Colon της διαβητικής /ποντίκια DMH αγωγή με ένα συνδυασμό οξαλιπλατίνη και μετφορμίνη (200 mg /kg) που δείχνει ένα τεράστιο αριθμό των λεμφοκυττάρων αντικατάσταση του υμένα του στρώματος του βλεννογόνου × 40. (X 40 = 240,19 μm και x 80 = 238,2 μm. Β) Ένα ιστόγραμμα που αποδεικνύουν την ιστοπαθολογική βαθμολογία στον ιστό του παχέος εντέρου μη-διαβητικούς και διαβητικούς ποντικούς. Ποντικοί [εκτός ομάδες αλατούχου] εγχύθηκαν με 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH, 20 mg /kg /εβδομάδα) για δεκαπέντε εβδομάδες για να προκαλέσουν καρκίνο του παχέος εντέρου, στη συνέχεια, υποβάλλεται σε επεξεργασία με οξαλιπλατίνη ή /και μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) για πρόσθετη τέσσερις εβδομάδες. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως διάμεση τιμή και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μη-παραμετρικό τεστ Kruskal-Wallis (μη-παραμετρική ANOVA) ακολουθούμενη από δοκιμασία του Dunnett για πολλαπλές συγκρίσεις. * Σημαντικά διαφορετική από την ομάδα φυσιολογικού ορού.

#Significantly διαφορετική από την ομάδα ΩΜΗ.

$ Σημαντικά διαφορετική από την ομάδα οξαλιπλατίνη.

≠ Σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (/kg 100 mg) ομάδα.

× σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (200 mg /kg),

n = 5-6

.

Η

Η στατιστική ανάλυση έδειξε σημαντική διαφορά στην ιστολογική βαθμολογία μεταξύ διαβητικών /ΟΜΗ ομάδα και μη διαβητικά /ϋΜΗ ομάδα (Εικ. 4Β). Σε μη διαβητικά ποντίκια, κανένας από τους παράγοντες που εφαρμόζονται μείωσε τη ιστοπαθολογικές σκορ σύγκριση με τον μάρτυρα ϋΜΗ (Εικ. 4Β). Απίθανη, σε διαβητικούς ποντικούς, όλα τα εφαρμοστεί φαρμακολογικών παραγόντων που βελτιώνεται με επιτυχία την ιστοπαθολογική βαθμολογία συγκριτικά με τον έλεγχο ϋΜΗ (Εικ. 4Β).

Το Σχήμα 5Α δείχνει μικροφωτογραφίες για ανοσοϊστοχημική χρώση για IGFR-Ι σε δείγματα ιστών κόλον. Η ανάλυση των δεδομένων αποκάλυψε μια διαφορά στην ανοσοχρώση για IGFR-I μεταξύ διαβητικών ομάδα /DMH και μη-διαβητική ομάδα /DMH (245 ± 15.6 έναντι 210 ± 10.9, Σχ. 5Β). Στο πείραμα Ι, στατιστική ανάλυση αποκάλυψε ότι οι μη-διαβητική ομάδα /DMH έδειξε μεγαλύτερη ανοσοαντιδραστικότητα για IGFR-I σε σύγκριση με τους μη διαβητικούς /αλατούχου ομάδα. Περαιτέρω, θεραπείες συνδυασμού παρήγαγε μία σημαντική μείωση στην έκφραση του IGFR-I σε σύγκριση με ϋΜΗ ελέγχου (Εικ. 5Β). Στο πείραμα II, διαβητική ομάδα /ΟΜΗ έδειξε μεγαλύτερη ανοσολογική αντίδραση για IGFR-Ι σε σύγκριση με διαβητική /φυσιολογικού ορού ομάδας. Μονοθεραπεία με οξαλιπλατίνη ή μετφορμίνη (200 mg /kg) καθώς και οι δύο θεραπείες συνδυασμού παρήγαγε μία σημαντική μείωση στην ανοσοαντιδραστικότητα για IGFR-I σε ιστούς παχέος εντέρου σε σύγκριση με τον έλεγχο DMH. Είναι σημαντικό, ο συνδυασμός 1 ομάδα έδειξε διαφορές από τις αντίστοιχες μονοθεραπείες του (Εικ. 5Β).

Α) Μικροφωτογραφίες για τους ιστούς του παχέος εντέρου ανοσοϊστοχημικά χρώση για τον IGF-R1 (γραμμή κλίμακας = 238,2 μm). Β) Ένα διάγραμμα με στήλες που δεικνύει την οπτική πυκνότητα για τον IGF-R1 ανοσοχρώση σε μη διαβητικά και διαβητικά ποντίκια. Ποντίκια [εκτός αλατούχο ομάδες] εγχύθηκαν με 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH) εβδομαδιαίως για 15 εβδομάδα για να προκαλέσουν καρκίνο του παχέος εντέρου συνέχεια κατεργάζεται με οξαλιπλατίνη ή /και μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) για 4 εβδομάδες. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση ± S.E.M. και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ΑΝΟνΑ ακολουθούμενη από

post-hoc τεστ Tukey

κατά

P

& lt? 0.05. * Σημαντικά διαφορετική από την ομάδα φυσιολογικού ορού.

#Significantly διαφορετική από την ομάδα ΩΜΗ.

$ Σημαντικά διαφορετική από την ομάδα οξαλιπλατίνη.

≠ Σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (/kg 100 mg) ομάδα.

× σημαντικά διαφορετική από τη μετφορμίνη (200 mg /kg),

n = 5-6

.

Η

Σχήμα 6-Α δείχνει μικροφωτογραφίες για ανοσοϊστοχημική χρώση για CD

34 σε δείγματα ιστού του παχέος εντέρου. Υπήρχε μια σημαντική διαφορά στην ανοσοαντιδραστικότητα για CD

34 μεταξύ διαβητικών /ομάδα DMH και μη-διαβητική ομάδα /DMH (260 ± 12.2 έναντι 213 ± 6.71, Σχ. 6Β). Στο πείραμά μου, η ανοσολογική αντίδραση για CD

34 στην οξαλιπλατίνη, η μετφορμίνη (100 mg /kg) και ο συνδυασμός 1 & amp? 2 ομάδες ήταν χαμηλότερες από το μη διαβητικούς /ϋΜΗ ελέγχου (Εικ. 6Β). Είναι σημαντικό, η ομάδα συνδυασμού 1 έδειξαν χαμηλότερη CD

34 ανοσοχρώση σε σύγκριση με τις αντίστοιχες μονοθεραπείες. Στο πείραμα ΙΙ, όλα τα εφαρμοστεί θεραπείες μείωσε την οπτική πυκνότητα για CD

34 σε σύγκριση με γλυκαιμικός έλεγχος /ΩΜΗ. Επιπλέον, οι συνδυαστικές θεραπείες έδειξαν σημαντικές μειώσεις σε ανοσοχρώση για CD

34 στους ιστούς του παχέος εντέρου σε σύγκριση με τις αντίστοιχες μονοθεραπείες τους (Εικ. 6Β).

Α) Μικροφωτογραφίες για τους ιστούς του παχέος εντέρου ανοσοϊστοχημικά χρώση για CD

34 (γραμμή κλίμακας = 238,2 μm). Β) Ένα γράφημα με στήλες που δεικνύει την οπτική πυκνότητα για CD

34 ανοσοχρώση σε μη-διαβητικούς και διαβητικούς ποντικούς. Ποντίκια [εκτός αλατούχο ομάδες] εγχύθηκαν με 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH) εβδομαδιαίως για 15 εβδομάδα για να προκαλέσουν καρκίνο του παχέος εντέρου συνέχεια κατεργάζεται με οξαλιπλατίνη ή /και μετφορμίνη (100 ή 200 mg /kg) για 4 εβδομάδες. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση ± S.E.M.