Αφηρημένο

Σποραδικές πρώιμη έναρξη ορθοκολικό καρκίνωμα (EOCRC), η οποία έχει εξ ορισμού δεν προσδιορίζονται κληρονομική προδιάθεση είναι ένα αυξανόμενο πρόβλημα που παραμένει ελάχιστα κατανοητή. Μοριακή ανάλυση θα μπορούσε να βελτιώσει την αναγνώριση των διακριτών υπο-τύπους καρκίνων του παχέος εντέρου (CRC) με θεραπευτικές επιπτώσεις και ως εκ τούτου μπορεί να βοηθήσει αποδείξει ότι η σποραδική EOCRC είναι μια ξεχωριστή οντότητα. Από 954 ασθενείς με εκτομή για CRC στο ίδρυμά μας, επιλέχθηκαν 98 ασθενείς. Ασθενείς ηλικίας 45-60 ετών, αποκλείστηκαν για να βοηθήσει στον καθορισμό «νέους» και «παλιά» ομάδες. Τριάντα εννέα περιπτώσεις σποραδικής EOCRC (patients≤45 χρόνια με μικροδορυφόρων σταθερή όγκοι) συγκρίθηκαν με δύο μικροδορυφορικού σταθερή όγκους από ηλικιωμένους ασθενείς (36 περιπτώσεις, οι ασθενείς & gt? 60 ετών) και σε ομάδες ασθενών με αστάθεια μικροδορυφόρου. Κάθε ομάδα ελέγχθηκε για

TP53

,

KRAS

,

BRAF

,

PIK3CA

μεταλλάξεων και την παρουσία ενός φαινοτύπου methylator. προφίλ γονιδιακής έκφρασης χρησιμοποιήθηκαν επίσης για ανάλυση μονοπατιού. Σε σύγκριση με μικροδορυφορικού σταθερή CRC από παλιά ασθενείς, σποραδικές EOCRC χαρακτηρίζονταν από περιφερική θέση, συχνές σύγχρονη μεταστάσεις και σπάνια σύγχρονη αδενώματα αλλά δεν έχουν συγκεκριμένα μορφολογικά χαρακτηριστικά. Ένα οικογενειακό ιστορικό CRC ήταν πιο συχνή σε ασθενείς σποραδικές EOCRC παρά την έλλειψη προσδιορίζονται κληρονομικών συνθηκών (p = 0,013). Γενετικές μελέτες έδειξαν επίσης την απουσία του

BRAF

μεταλλάξεις (p = 0,022) και ο φαινότυπος methylator (p = 0,005) σε σποραδικές EOCRC σε σύγκριση με ηλικιωμένους ασθενείς. Ανάλυση γονιδιακής έκφρασης εμπλέκεται βασικές οδούς, όπως η Wnt /β-κατενίνης, ΜΑΡ κινάσης, αυξητικό παράγοντα σηματοδότηση (EGFR, HGF, PDGF) και την οδό TNFR1 σε σποραδικές EOCRC. ενεργοποίηση σηματοδότησης /β κατενίνης Wnt επιβεβαιώθηκε από ανώμαλη πυρηνική βήτα κατενίνης ανοσοχρώση (p = 0.01). Η μελέτη αυτή υποδηλώνει σαφώς ότι σποραδικές EOCRC είναι μια ξεχωριστή κλινικο-μοριακή οντότητα παρουσιάζοντας ως ακραίο και επιθετικό ασθένεια που σχετίζεται με το χρωμόσωμα αστάθεια. Επιπλέον, πολλά μονοπάτια σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένης της οδού TNFR1 έχουν ταυτοποιηθεί ως πιθανοί βιοδείκτες τόσο για τη διάγνωση και τη θεραπεία της ασθένειας αυτής

Παράθεση:. Kirzin S, Marisa L, Guimbaud R, De Reyniès Α, Legrain Μ, Laurent -Puig P, et al. (2014) Σποραδικές πρώιμη εμφάνιση καρκίνου του παχέος εντέρου είναι ένα συγκεκριμένο υπο-τύπο του καρκίνου: Μια Μορφολογικά, Μοριακή Γενετική και μελέτη. PLoS ONE 9 (8): e103159. doi: 10.1371 /journal.pone.0103159

Επιμέλεια: Πε Yean Cheah, Γενικό Νοσοκομείο Σιγκαπούρη, Σιγκαπούρη

Ελήφθη: 18 Μαρτίου 2014? Αποδεκτές: 26 Ιούν, 2014? Δημοσιεύθηκε: 1 του Αυγ 2014

Copyright: © 2014 Kirzin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Τα δεδομένα είναι διαθέσιμα στο NCBI, GEO αριθμό ένταξης αποθετήριο:. GSE39084

Χρηματοδότηση: Το έργο υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από Ligue Régionale Contre le Cancer, Comité du Gers και το πρόγραμμα δελτίου ταυτότητος des Tumeurs από Λιγκ Nationale Contre le Cancer. Οι συγγραφείς ευχαριστήσω το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου Contre le για την υποστήριξή τους από την κλινική και εργαστηριακή γενετιστή. Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Cancéropôle Μεγάλο Sud-Ouest για την παροχή κλινικών σχολιασμούς. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι πιο συχνά παρατηρείται σε ηλικιωμένους ενήλικες με διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση 70 ετών [1]. Ωστόσο, σύμφωνα με τις ΗΠΑ μητρώα η συχνότητα εμφάνισης της CRC σε νεαρούς ενήλικες αυξάνεται συνεχώς, με ρυθμό 1,5% ετησίως μεταξύ 1992 και 2005, σε ενήλικες ηλικίας 20-49 [2]. Πρώιμη έναρξη CRC (EOCRC) είναι μια επιθετική ασθένεια με την κακή διαφοροποίηση και κλασικά βρίσκεται στο αριστερό κόλον. Τα άτομα μπορεί να έχουν προδιάθεση να EOCRC μέσω κληρονομικότητας και φλεγμονώδεις του εντέρου ασθένειες. Τα πιο καλά καθορισμένη κληρονομικές μορφές CRC είναι σύνδρομο Lynch και οικογενή αδενωματώδη πολυποδίαση (FAP), που αντιπροσωπεύουν 2-4% και λιγότερο από 1% του συνόλου των CRC περιπτώσεων, αντιστοίχως [3]. Η σχετική συμβολή των φλεγμονωδών νόσων του εντέρου και FAP να EOCRC είναι μέτρια αφού και οι δύο συνθήκες μπορεί εύκολα να εντοπιστεί από τα κλινικά χαρακτηριστικά τους και να διαχειρίζονται τη διαλογή και την προφυλακτική θεραπεία σύμφωνα με τις καθιερωμένες κατευθυντήριες γραμμές. Σε αντίθεση, το σύνδρομο Lynch δεν εμφανίζει ένα συγκεκριμένο φαινότυπο και συχνά οδηγεί σε καρκίνωμα, καθιστώντας το ένα τρίτο των περιπτώσεων EOCRC [4]. Έτσι, η πλειοψηφία των EOCRC είναι σποραδικές περιπτώσεις που στερούνται γενετικούς δείκτες που υποδεικνύει προδιάθεση

CRC είναι μια ετερογενής νόσος η οποία είναι κλασικά διαιρείται σε τρεις υπο-τύπους [5], σύμφωνα με τους μοριακούς μηχανισμούς οδήγησης μεταμόρφωση της:. ( i) χρωμοσωμική αστάθεια (CIN), η κυρίαρχη μηχανισμός, ο οποίος χαρακτηρίζεται από μικροδορυφόρων σταθερό όγκους (MSS), απώλεια ετεροζυγωτίας και μεγάλες χρωμοσωμικές αλλαγές στα γονίδια καταστολής όγκων και ογκογονίδια [9]? (Ii) Ο επιγενετικές αλλαγή γνωστή ως το CpG νησιού methylator φαινότυπο (CIMP) που προκαλεί μεταγραφική σίγηση με μεθυλίωση CpG πλούσιων περιοχών στον προαγωγέα των γονιδίων καταστολής όγκων. CIMP είναι υπεύθυνη για τη μεγάλη πλειοψηφία των σποραδικά καρκινώματα MSI μέσω αποσιώπηση του υποκινητή του γονιδίου MMR

hMLH1

[7], [8]? (Iii) αστάθεια μικροδορυφόρου (MSI), το οποίο είναι το σήμα κατατεθέν του συνδρόμου Lynch και χαρακτηρίζεται από τη συσσώρευση μεταλλάξεων μετατόπισης πλαισίου σε μικροδορυφορικών ακολουθιών λόγω της ανεπάρκειας σε αναντιστοιχία επισκευή (MMR) γονιδίων [6]. Ωστόσο, αυτό που χρησιμοποιείται σήμερα μοριακή ταξινόμηση του CRC βασίζεται σε λίγες μόνο δείκτες κοινό DNA.

Καθώς όμως οι μοριακοί δείκτες των σποραδικές EOCRC δεν έχουν διερευνηθεί συστηματικά και ατομικές εισφορές τους προς την καρκινογένεση δεν έχουν χαρακτηριστεί. προφίλ έκφρασης ανάλυση του γονιδιώματος (GEP) θα μπορούσε να βελτιώσει τη μοριακή ταξινόμηση του CRC και να συμβάλει στον εντοπισμό κλινικές οντότητες και βιοδεικτών που θα μπορούσε να προβλέψει την ανταπόκριση στη θεραπεία. Χρησιμοποιήσαμε πρόσφατα αυτό το είδος της προσέγγισης για τον εντοπισμό έξι μοριακού υπο-τύπους CRC που προκύπτουν μέσα από διακριτές βιολογικές οδούς [10].

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνήσει σποραδικές EOCRC χρησιμοποιώντας μια ολοκληρωμένη προσέγγιση που να συνδυάζει εξαντλητική κλινικο -pathological δεδομένων με γενετικές αναλύσεις, προκειμένου να προσδιοριστεί η συγκεκριμένη κλινικά χαρακτηριστικά και μοριακών προφίλ της οντότητας αυτής. Για τη μελέτη αυτή που εντοπίστηκε για πρώτη φορά μια ομοιογενή ομάδα σποραδικές EOCRC που ορίστηκε από την κατοχή μια διάγνωση καρκίνου σε κάτω των 45 ετών, που δεν έχουν εντοπιστεί κληρονομική προδιάθεση για CRC και έχει ένα προφίλ MSS. Είμαστε δίπλα σε σύγκριση με συγκεκριμένα στοιχεία της γενετικής, επιγενετικής και γονιδιακή έκφραση από αυτή την ομάδα με εκείνη από άλλες σαφώς καθορισμένες ομάδες της CRC.

Υλικά και Μέθοδοι

Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει σποραδικές περιπτώσεις EOCRC ( MSS όγκους από τους νέους ασθενείς) και τη σύγκρισή τους με τον ομόλογό MSS όγκους από ηλικιωμένους ασθενείς. Έχουμε περιλαμβάνονται επίσης CRC με MSI (τόσο από μικρούς και μεγάλους ασθενείς), δεδομένου ότι αποτελούν ένα καλά χαρακτηρισμένο μοντέλο της CRC ογκογένεση.

ασθενών και δείγμα επιλογή

Από τον Απρίλιο του 1999 και Δεκέμβριο του 2005, 954 ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία και παρακολουθήθηκαν για CRC στο ίδρυμά μας. Οι ασθενείς κάτω των 45 ετών (από εδώ και στο εξής αναφέρεται ως «νέοι» ασθενείς) και πάνω από 60 ( «παλαιά») θεωρήθηκαν για σύγκριση. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν: μη διαθέσιμο κατεψυγμένο ιστό? διάγνωση της FAP ή IBD? προεγχειρητικής χημειο /ακτινοθεραπεία? δείγματα που περιέχουν κύτταρα όγκου λιγότερο από 50%? και άγνωστης κατάστασης MMR. Λόγω του υψηλού ποσοστού του σταδίου IV MSS όγκους από τους νέους ασθενείς, MSS όγκους από νέους και ηλικιωμένους ασθενείς ταιριάζει ανάλογα με το στάδιο του όγκου. Μετά την επιλογή του δείγματος, 98 ασθενείς ήταν διαθέσιμοι για τη μελέτη, όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 1. Τέσσερις ομάδες ασθενών ορίστηκαν: MSS-Y (MSS-όγκου & lt? 45 ετών), 39 περιπτώσεις? MSI-Υ (MSI όγκου & lt? 45 ετών), 9 περιπτώσεις? MSS-O (MSS όγκο & gt? 60 ετών), 36 περιπτώσεις? και η ομάδα MSI-O (MSI όγκο & gt? 60 ετών)., 14 περιπτώσεις

Consort διάγραμμα που απεικονίζει την επιλογή των ασθενών από ένα μόνο φορέα, βάσει των διαθέσιμων κατεψυγμένων ιστών και μετά την εφαρμογή των κριτηρίων αποκλεισμού. Τέσσερις ομάδες ορίστηκαν λαμβάνοντας υπόψη την ηλικία και την κατάσταση MMR. Η μελέτη σχεδιάστηκε για να επιτρέπει τη σύγκριση των MSS πρώιμης έναρξης CRC με άλλες σαφώς καθορισμένες ομάδες της CRC. FAP: οικογενή αδενωματώδη πολυποδίαση. IBD: Φλεγμονώδεις Νόσους του Εντέρου. MMR κατάσταση: κατάσταση επισκευής Ασυμφωνία. MSS: μικροδορυφορικού σταθερή. MSI:. Μικροδορυφορικοί ασταθή

Η

Επιτροπή Ηθικής Έγκριση

Όλοι οι ασθενείς προοπτικά καταχωρίζονται σε μια κεντρική βάση δεδομένων που εξασφάλισε δηλώνονται στην Επιτροπή Nationale Informatique et Liberté (1.365.952). Η χρήση των συλλεχθέντων όγκων εγκρίθηκε από το διοικητικό συμβούλιο της Τουλούζης Νοσοκομείο (CRB-Cancer Τουλούζη, DC-2008-463, AC-2008 – 820, CPP2). Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλα τα μαθήματα.

Σπούδασε παραμέτρους

Εβδομήντα εννέα μεταβλητές ενδιαφέροντος εξήχθησαν από τη βάση δεδομένων και αναλύθηκαν. Αυτά περιλαμβάνονται κλινικά δεδομένα (οικογενειακό γενεαλογικό, το site του καρκίνου, κλινική εικόνα κατά τη διάγνωση, μορφές θεραπείας, επιβίωση) και τα χαρακτηριστικά του όγκου (πλήρης παθολογική δεδομένων, παρουσία σύγχρονη αδενώματος στα εκτομή δείγμα, MMR κατάσταση, παρουσία των γενετικών και επιγενετικών αλλαγών). Κλινική παρακολούθηση των ασθενών έγινε σύμφωνα με δημοσιευμένες εθνικές κατευθυντήριες γραμμές [11]. Οι καμπύλες επιβίωσης καθιερώθηκαν από την ημερομηνία της διάγνωσης, σύμφωνα με τους υπολογισμούς Kaplan-Meier. Οι λεπτομέρειες που μελετήθηκαν μεταβλητές που αναφέρονται στον Πίνακα S1.

MMR κατάστασης και οικογενειακό γενεαλογικό

MMR κατάσταση προσδιορίστηκε κατά τη διάγνωση (πριν από τη μελέτη) με την εκτίμηση μικροδορυφόρων κατάσταση αστάθειας χρησιμοποιώντας ένα Pentaplex PCR και από χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία (IHC) για τη δοκιμή για την έκφραση του MLH1, MSH2 και MSH6, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. ελλείψεις αναντιστοιχία επισκευή (dMMR όγκοι) ορίστηκαν από την MSI ή /και η απώλεια της έκφρασης ενός από τα MMR πρωτεϊνών, ενώ καλά MMR (pMMR) όγκοι αντιστοιχούσαν σε MSI-χαμηλή ή MSS όγκων που εκφράζουν τις πρωτεΐνες MMR.

η γενεαλογία όλων των νεαρών ασθενών αξιολογήθηκε με ένα και μόνο κλινικό γενετιστή (RG). Γενετικός έλεγχος για τις 2 μεγάλες MMR γονίδια

hMLH1

και

hMSH2

έγινε στην περίπτωση των όγκων MSI ή όταν προσωπικές ή καρκίνο οικογενειακό ιστορικό ήταν παρούσα σε νεαρούς ασθενείς. Η διάγνωση του συνδρόμου Lynch επιβεβαιώθηκε επίσημα από την ταυτοποίηση ενός επιβλαβούς μετάλλαξη βλαστικής σειράς σε μια MMR γονίδιο. Περιπτώσεις MSI όγκων εμφανίζει την απουσία MSH2 ή χρώση MSH6 με IHC θεωρήθηκαν ως πιθανό το σύνδρομο Lynch.

ανάλυση μεταλλάξεων

γονοτυπικός των βασικών μεταλλάξεις που συμβαίνουν σε καρκίνο του παχέος εντέρου (

KRAS

,

BRAF

,

TP53

και

PI3KCA

) πραγματοποιήθηκε μετά από εκχύλιση του DNA από κατεψυγμένα ιστό. Οι επτά πιο συχνές μεταλλάξεις στα κωδικόνια 12 και 13 του

KRAS

, και η μετάλλαξη V600E κωδικόνιο σε

BRAF

εκτιμήθηκαν με υβριδοποίηση αλληλόμορφων χρησιμοποιώντας Taqman ανιχνευτές, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [13]. Απευθείας αλληλούχιση του

ΤΡ53

εξώνια 5 έως 9 και

PI3KCA

εξόνια 9 και 20 διεξήχθη παραλλήλως χρησιμοποιώντας την τεχνική Sanger (Beckman Coulter, Danvers, ΜΑ, USA).

Methylator αξιολόγηση φαινότυπο

προφίλ CIMP προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας έναν πίνακα των πέντε δεικτών όπως περιγράφεται από Weisenberger

et al

:

CACNA1G

,

IGF2

,

NEUROG1

,

RUNX3

και

SOCS1

. Μετά DNA κατεργασία όξινου θειώδους, διεξήχθησαν δύο πολυπλεξίας μεθυλίωσης-ειδική PCRs. ανάλυση Θραύσμα διεξήχθη με τριχοειδή ηλεκτροφόρηση σε ένα αυτόματο αλληλουχητή (Beckman Coulter, Danvers, ΜΑ, USA). Methylator φαινότυπο-θετικές περιπτώσεις (CIMP +) είχαν 3 ή περισσότερες μετουσιωμένο υποστηρικτές, ενώ CIMP-αρνητικών είχε λιγότερο από 2 μετουσιωμένο υποκινητές, που ορίζεται σύμφωνα με καθορισμένα κριτήρια [14].

εκχύλιση RNA και ανάλυση μικροσυστοιχιών

Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA) και ελέγχθηκαν για την καθαρότητα, την ακεραιότητα και την ποσότητα. Τα δείγματα στη συνέχεια ενισχύεται, επισημαίνονται και υβριδοποιήθηκε σε Plus2 GeneChip Affymetrix Human Genome U133, μετά από μία κύκλου πρωτόκολλο επισήμανσης στόχος του κατασκευαστή (Affymetrix, Santa Clara, CA). Τα chips σαρώθηκαν με ένα σαρωτή Affymetrix GeneChip 3000 και τις πρώτες εντάσεις που προέρχονται από μεταγενέστερες εικόνες χρησιμοποιώντας GCOS 1.4 λογισμικό (Affymetrix). Τα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την μέθοδο Robust multiarray μέσου όρου (RMA), που υλοποιείται στο πακέτο R Affy [15]. Τα δεδομένα είναι διαθέσιμα στο NCBI Gene Expression Omnibus αποθετήριο (αριθμός ένταξης: GSE39084).

Ανεξέλεγκτη ανάλυση

Class ανακάλυψη έγινε με συναίνεση ομαδοποίηση των προφίλ έκφρασης, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. σύνολα Probe πρώτα διηθείται για να κρατήσει αυτές που εκφράζονται (δηλαδή με μία κανονικοποιημένη τιμή έντασης πάνω από 15) σε τουλάχιστον 10% των δειγμάτων με μια διακύμανση σημαντικά υψηλότερη από τη μέση διακύμανση όλων των συνόλων ανιχνευτή (ρ & lt? 0,01). Στη συνέχεια, 7 πίνακες ελήφθησαν οποία περιελάμβανε 1% έως 50% των πιο παραλλαγής σύνολα ανιχνευτή (με βάση την ισχυρή συντελεστής μεταβλητότητας). Για κάθε ανιχνευτή που λίστας, δείγματα συγκεντρωμένα χρησιμοποιώντας 1-Pearson συσχέτισης για μετρική απόστασης και Ward σύνδεση, αποδίδοντας 7 δενδρογράμματα. Χωρίσματα σε k συστάδες (k 2-8) προήλθαν από κάθε δενδρόγραμμα και ένα διαμέρισμα συναίνεση υπολογίστηκε για κάθε τιμή του k, δίνοντας 7 συναίνεση χωρίσματα.

Εποπτευόμενοι ανάλυση

Σύλλογοι μεταξύ της κλινικής και μοριακής σχολιασμούς και ομάδες δειγμάτων δοκιμάστηκαν για στατιστική σημαντικότητα χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Chi-τετράγωνο ή την ακριβή δοκιμασία Fisher, όπου ενδείκνυται. επιλέχθηκαν τα γονίδια που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ των όγκων από μικρούς και μεγάλους ασθενείς MSS με βάση Limma μετριάστηκε τιμές p t-test ρυθμιστεί για πολλαπλές δοκιμές από το Benjamini & amp? μεθόδου Hochberg (& lt? 0.05) [17]. Pathways από τη βάση δεδομένων Biocarta ελέγχθηκαν για τον εμπλουτισμό των απελευθερωμένης γονιδίων συνδυάζοντας τις ακόλουθες μεθόδους: Globaltest (R πακέτο globaltest), SAM-GS, και Tuckey [18], [19]. Οι p-τιμές της κάθε μεθόδου μετατράπηκαν σε τάξεις και η μέση τάξη υπολογίστηκε να διατάξει μονοπάτια.

Beta σηματοδότησης κατενίνης

ενεργοποίηση της οδού

Η ανοσοϊστοχημεία πραγματοποιήθηκε σε φορμόλη-σταθερές και παραφίνη-ενσωματωμένες μπλοκ από τις 98 ασθενείς της μελέτης με το μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού βήτα κατενίνης (κλώνος 14, BD BioSciences, αραίωση 1/200, Ventana XT Autostainer (Tucson, AZ, USA). Όλες οι διαφάνειες εξετάστηκαν από δύο παθολόγους τύφλωσε σε ομάδες ασθενών ( JS και SK). η ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης βήτα κατενίνης ορίστηκε από την ισχυρή πυρηνική χρώση σε πάνω από 50% των καρκινικών κυττάρων, με ή χωρίς διάχυτη κυτταροπλασματική χρώση και με απώλεια της χρώσης κυτταρικής μεμβράνης [20].

αποτελέσματα

Κλινικο-παθολογικά χαρακτηριστικά του σποραδικές EOCRC

Η σποραδική ομάδα EOCRC αποτελούνταν από 39 ασθενείς, που κατανέμονται ως εξής: 17 ήταν 40-45 ετών, 13 ήταν 35-40 ετών, 5 ήταν 30-35 ετών, 2 ήταν 25-30 ετών και 2 ήταν κάτω των 25 ετών. μια τέτοια κατανομή σε ηλικία είναι σύμφωνη με στοιχεία που δημοσιεύονται στο μητρώο των ΗΠΑ [1]. Σε σύγκριση με όγκους από ασθενείς ηλικίας MSS, σποραδικές EOCRC (MSS νέους ασθενείς) εμφανίζονται διακριτικά γνωρίσματα. Πρωκτική όγκοι ήταν πιο άφθονο σε σποραδικές EOCRC (41% έναντι 8,3%, p = 7,4

e-04) με λιγότερο συχνές αδενώματα δει σε εκτομή δείγματα (8% έναντι 33%, ρ = 0,013). Αξίζει να σημειωθεί, 15 (38%) ασθενείς σποραδικές EOCRC είχαν οικογενειακό ιστορικό (πρώτου ή δεύτερου βαθμού συγγενή) του CRC σε σύγκριση με το 3 (9%) στην ομάδα του παλιού ασθενείς MSS (p = 0,013). Μια ανάλυση γενεαλογία αυτών των 15 ασθενών έδειξε ότι 3 από αυτούς είχαν μια σαφή αυτοσωματικό κυρίαρχο μοτίβο μετάδοσης κληρονομιά με πολλά μέλη της οικογένειας που πλήττονται. Δύο από τα 3 ήταν από την ίδια οικογένεια, αλλά όχι βλαστικής σειράς μετάλλαξη έχει ταυτοποιηθεί μέχρι σήμερα. Οι υπόλοιποι 12 ασθενείς είχαν ένα απροσδιόριστο τρόπο μετάδοσης με ένα μόνο μέλος του Ωροσκόπου οικογένεια που έχει CRC, συνήθως σε προχωρημένη ηλικία (& gt? 60 ετών). Σύμφωνα με τη γαλλική συστάσεις,

MUTYH

ανάλυση μετάλλαξης εκτελέστηκε μόνο 1 ασθενής ο οποίος παρουσίασε με 8 αδενώματος, αλλά η ανάλυση αυτή ήταν αρνητική [21]. Μια προσωπική ιστορία της CRC παρατηρήθηκε μόνο σε ασθενείς ηλικίας (συμπεριλαμβανομένων τόσο των MSS και οι όγκοι MSI). Όλες οι όγκοι από την MSI νέους ασθενείς ανέκυψε στο πλαίσιο του συνδρόμου Lynch, και 3 ασθενείς (21,5%) από την παλιά ομάδα MSI ήταν επίσης ασθενείς Lynch. Κατά την εξέταση του συνόλου του πληθυσμού της μελέτης, οι άλλες σημαντικές διαφορές που παρατηρούνται μεταξύ των ομάδων που συνδέονται με την ανεπάρκεια MMR, δηλαδή πιο συχνές εγγύς θέση (p = 2,0

e-05), η κακή διαφοροποίηση των κυττάρων (p = 0,033) και συχνές βλεννώδες συστατικό ( p = 0,012). Τα κύρια χαρακτηριστικά του πληθυσμού της μελέτης αναφέρονται στον Πίνακα 1.

Η

Σποραδικές EOCRC είναι μια επιθετική νόσο συχνά παρουσιάζουν μεταστάσεις κατά τη διάγνωση. Η τοποθεσία των μεταστατικών όγκων ήταν κυρίως στο ήπαρ και τους πνεύμονες, όπως παρατηρείται για CRC. Ένα συγκεκριμένο προφίλ επιβίωση παρατηρήθηκε για κάθε ομάδα ασθενών, με συνολική επιβίωση καλύτερα για MSI από τους ασθενείς MSS. Παρά το υψηλό φορτίο των μεταστάσεων (με 23,1% έναντι 5,6% που έχει πολλαπλές μεταστατικές θέσεις κατά τη διάγνωση), οι ασθενείς σποραδικές EOCRC είχε μια καλύτερη 5-ετή συνολική επιβίωση από ασθενείς ηλικίας MSS, αν και αυτό δεν ήταν σημαντική (69% έναντι 42%, p = 0,09). Το ποσοστό της συνολικής επιβίωσης πέντε χρόνια ήταν περίπου το ίδιο για τους ασθενείς MSI, αν MSI νέους ασθενείς παρουσίασαν πιο συχνή πρώιμη υποτροπή (Σχήμα 2).

Κάθε ομάδα είχε ένα συγκεκριμένο συνολικό προφίλ επιβίωση αν και κανένα δεν ήταν σημαντικά διαφορετικό από κάθε άλλο (ρ = 0.15). MSS: μικροδορυφορικού σταθερή. MSI: μικροδορυφορικού ασταθή

Η

Γενετική και επιγενετική χαρακτηριστικά των σποραδικών EOCRC

προφίλ μεταλλάξεων του

KRAS

,

BRAF

και

TP53. ,

και η κατάσταση CIMP καθορίστηκαν για όλους τους ασθενείς (Πίνακας 2).

PI3KCA

γονοτυπική διεξήχθη για 74 όγκους. Η μετάλλαξης προφίλ των σποραδικών όγκων EOCRC ήταν παρόμοια με εκείνη του MSS όγκων από ασθενείς ηλικίας για

KRAS

,

TP53

και

PIK3CA

γονίδια, αλλά ήταν σαφώς διαφορετική για

BRAF

μεταλλάξεις και προφίλ CIMP. Σποραδικές όγκους EOCRC ούτε περιλαμβάνονται

BRAF

μεταλλάξεις (p = 0,022), ούτε εμφανίζεται ένα CIMP + προφίλ (p = 0,005) σε σύγκριση με τους όγκους από ασθενείς ηλικίας MSS. MSI όγκων σε ασθενείς ηλικίας είχε ένα υψηλό ποσοστό

BRAF

μετάλλαξη (36%) και συχνά εμφανίζεται μια CIMP + προφίλ (62%). MSI νεαρούς ασθενείς διέφεραν από ασθενείς ηλικίας MSI από την απουσία ενός φαινοτύπου methylator (p = 0,006) και

BRAF

μεταλλάξεις.

Η

μεταγραφικό ανάλυση

δεδομένα μικροσυστοιχιών ήταν λαμβάνονται για 70 ασθενείς. Χωρίς επίβλεψη αναλύσεις αποκάλυψαν ότι, ανεξάρτητα από τον αριθμό των συστάδων και το ποσοστό των γονιδίων παραλλαγή που χρησιμοποιείται, οι υποκείμενες χωρίσματα συνδέθηκαν με συνέπεια και έντονα με το καθεστώς MMR και ομάδες. Άλλες μεταβλητές σημαντικά που συνδέονται με τις ανεξέλεγκτους χωρίσματα ήταν θέση του όγκου, την κατάσταση CIMP και μεταλλαγμένο γονίδιο BRAF. Αυτές οι μεταβλητές ήταν οι ίδιοι που συνδέονται στενά με το καθεστώς του MMR. Ηλικία ελαφρώς σχετίζονται με κάποιες από ανεξέλεγκτους χωρίσματα (που ελήφθη με τη χρήση 5% και 20% από τις πιο ποικίλες γονιδίων). Η συναίνεση χώρισμα στις 5 συστάδες ήταν πιο στενά συνδεδεμένη με τις τέσσερις ομάδες που ορίζονται για MMR κατάσταση και την ηλικία (Σχήμα 3). Ομάδα 1 (C1) αποτελούνταν σχεδόν αποκλειστικά από ανεπάρκεια MMR όγκων. Cluster C2 εμπλουτίστηκε με καλά MMR και όγκους BRAF-μεταλλαγμένα. Clusters C3 και C4 περιείχε περισσότερα CIMP +, C4 είναι σχεδόν αποτελείται αποκλειστικά από καλά MMR όγκων από ασθενείς ηλικίας. Cluster 5 (C5) εμπλουτίστηκε με σποραδικές όγκους EOCRC βρεθεί στο αριστερό κόλον

επιβλεπόμενη ταξινόμηση των προφίλ έκφρασης:. Δενδρόγραμμα της πλησιέστερης ομαδοποίησης με τη συναίνεση διαμέρισμα για k = 5. Υπόμνημα: io, MSI /Παλιά ? Ιγ, MSI /Young? έτσι, MSS /Παλιά? sy, MSS /Young? d, ανεπάρκεια MMR? p, καλά MMR? R, το δικαίωμα του παχέος εντέρου? L, αριστερά του παχέος εντέρου? Re, του ορθού? Μ, μεταλλαγμένα? . W, άγριου τύπου

Η

επόμενο πραγματοποίησε μια εποπτευόμενη ανάλυση των MSS όγκους (n = 54) που παρέχεται μια λίστα με τις 297 σειρές ανιχνευτών που αντιπροσωπεύουν 219 γονίδια σημαντικές διακρίσεις (p & lt? 0.001). Αυτό το σετ παρέχεται μια σαφής διάκριση μεταξύ σποραδικών όγκων EOCRC και οι όγκοι από ασθενείς ηλικίας MSS (Σχήμα 4). Μία εκτεταμένη περιγραφή αυτών των γονιδίων παρέχονται στον Πίνακα S2. Το μόνο βασικό γονίδιο ογκογένεση CRC που ήταν ιδιαίτερα απελευθερωθεί σε σποραδικές EOCRC ήταν βήτα κατενίνης (

CTNNB1

). Ο μεγάλος αριθμός των γονιδίων διακρίσεις μας επέτρεψε να πραγματοποιήσει πορεία αναλύσεις για την καλύτερη κατανόηση σποραδικές καρκινογένεση EOCRC. Σαράντα-εννέα οδών ήταν σημαντικά εμπλουτισμένη για διαφορική έκφραση γονιδίων σε σποραδικές EOCRC σε σύγκριση με το MSS όγκους από ασθενείς ηλικίας. Μια πλήρης περιγραφή των οποίων παρέχεται στον Πίνακα S3. Μεταξύ αυτών, 20 συμμετείχαν σε κυτταρική σηματοδότηση, 10 στην φλεγμονή και την απόπτωση, 7 στην προσκόλληση και /ή κινητικότητα, 7 στην αναπτυξιακή βιολογία και 3 στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Σχήμα 5). Αρκετές οδοί που ήταν πάνω ρυθμισμένα σε σποραδικές EOCRC συνδέονταν με σημαντικές οδούς σηματοδότησης που εμπλέκονται στην CRC όπως ΜΑΡ κινάση και PI3KCA /ΑΚΤ ή σχετίζονται με αυξητικούς παράγοντες (EGF, HGFR και PDGF) και αγγειογένεση (VEGF). Δύο σημαντικές οδών που εμπλέκονται στην προσκόλληση ή /και ρύθμισης κινητικότητα (μονοπάτια σηματοδότησης ιντεγκρίνης και κυττάρου-προς-κύτταρο σηματοδότηση προσκόλληση) ήταν πάνω ρυθμισμένα σε σποραδικές EOCRC. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι περισσότερες από τις οδούς που σχετίζονται με φλεγμονή ή /και απόπτωση που βρέθηκαν επάνω ρυθμιζόμενη σε σποραδικές EOCRC συνδέονται άμεσα ή έμμεσα με την οδό TNF-R1 (TNFR1 μονοπάτι, HIV-1Nef, FAS οδό σηματοδότησης, TNF /Στρες Σχετικές σηματοδότηση) .

Ο χάρτης θερμότητας εμφανίζει την έκφραση 219 γονιδίων. Με βάση τα επίπεδα έκφρασης, τα γονίδια ομαδοποιήθηκαν σε τέσσερις συστάδες υψηλής υπερεκφράζεται γονιδίων (κόκκινα κουτιά που περιβάλλεται από μαύρο περίγραμμα) και ένα σύμπλεγμα των υποεκφράζονται γονιδίων σε όγκους MSS (μπλε κουτιά που περιβάλλεται από μαύρο περίγραμμα) από νεαρούς ασθενείς σε σύγκριση με το MSS όγκους από ηλικιωμένους ασθενείς. MSS: μικροδορυφορικού Σταθερό. MSI:. Μικροδορυφορικοί Αστάθεια

Η

ανάλυση Διαδρομή ομαδοποίηση των 49 πιο σημαντικά εμπλουτισμένη μονοπάτια για διαφορική γονιδιακή έκφραση μεταξύ σποραδικές EOCRC και MSS όγκων από ασθενείς ηλικίας. Οδοί ομαδοποιούνται σε πέντε βασικές κατηγορίες, δηλαδή των κυττάρων προσκόλλησης /κινητικότητα, φλεγμονή /απόπτωση, κυτταρικό πολλαπλασιασμό, κυτταρική σηματοδότηση και την αναπτυξιακή βιολογία. Η κατανομή των κύριων κανονικών μονοπατιών μεταξύ των κατηγοριών αναλυτικά, καθώς και σειρά κατάταξης τους. Αυτή η σειρά κατάταξης υποδεικνύεται με το σύμβολο # ακολουθούμενο από τον αριθμό σειράς (# 1 σημαίνει ότι αυτή η οδός είναι η πιο απελευθερωμένη από τις 49 οδούς).

Η

Beta κατενίνης ανοσοϊστοχημεία

Η δεδομένων των μικροσυστοιχιών παραπάνω προσδιορίζονται βήτα κατενίνης να είναι το μόνο κλειδί γονίδιο ογκογένεση CRC απελευθερωθεί σε σποραδικές EOCRC. Ως εκ τούτου, ζήτησε να αξιολογήσει βήτα ενεργοποίηση κατενίνης χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Όλες οι περιπτώσεις των MSS όγκων από τους νέους ασθενείς (39 περιπτώσεις) και 33 περιπτώσεις (33/36) των MSS όγκων από ασθενείς ηλικίας επικυρώθηκαν για την ενεργοποίηση βήτα κατενίνης χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Beta ενεργοποίηση κατενίνης ταυτοποιήθηκε σε 17 περιπτώσεις (44%) από MSS-νεαρούς ασθενείς και 5 περιπτώσεις (15%) από την MSS-old ασθενείς (p = 0.01) με μια πυρηνική +/- κυτταροπλασματική χρώση (Σχήμα 6).

Α. Διατομή ενός όγκου από ένα MSS-Παλιά ασθενής παρουσιάζει χρώση μόνο μεμβράνη. Β Διατομή ενός όγκου από σποραδικές EOCRC (MSS-Young) ασθενής παρουσιάζει έντονη κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώση με απώλεια της χρώσης της μεμβράνης, γεγονός που αντανακλά την ενεργοποίηση κατενίνης Wnt /β.

Η

Συζήτηση

Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης δείχνουν ότι η σποραδική EOCRC είναι μια ξεχωριστή κλινική και μοριακή οντότητα. Για πρώτη φορά παρέχουμε μια ολοκληρωμένη ανάλυση των δύο εκτεταμένων κλινικών δεδομένων και της γονιδιωματικής από ένα προσεκτικά προβληθεί σειρά διαδοχικών ασθενών που είχαν υποβληθεί σε θεραπεία και παρακολουθήθηκαν σε ένα μόνο φορέα. Αυτή η μεταφραστική προσέγγιση μας επέτρεψε να βελτιώσετε την ήδη περιορισμένη περιγραφή της συγκεκριμένης μορφής του CRC και να ρίξει διορατικότητα σε συγκεκριμένες βιολογία του όγκου του.

Αυτή τη στιγμή δεν υπάρχει αποδεκτή σαφής ορισμός της πρόωρης ηλικίας έναρξης στον τομέα της CRC. Ως εκ τούτου, οι περισσότερες μελέτες αναφέρουν για το θέμα αυτό περιλαμβάνονται οι ασθενείς στα 40-50 έτη της ηλικίας [22], [23]. Ωστόσο, υπάρχει μια προοδευτική αύξηση της συχνότητας του CRC μεταξύ 40 και 50 ετών, έτσι είναι πιθανό ότι σε αυτές τις μελέτες υπάρχει ένα μείγμα από ειδική οντότητα EOCRC και αργά CRC έναρξη. Για την αντιμετώπιση αυτού του ζητήματος χρησιμοποιήσαμε ένα πιο περιοριστικό ορισμό της τόσο νωρίς και αργά CRC έναρξης: ασθενείς ηλικίας μεταξύ 45 και 60 ετών είχαν αποκλειστεί προκειμένου να εξασφαλιστεί μια σαφή κατάτμηση των δύο οντοτήτων και να αποφευχθεί κάθε επικάλυψη αυτών των δύο μορφών της CRC. Ένας άλλος παράγοντας σύγχυση στην ανάλυση της EOCRC σε πολλές μελέτες είναι η έλλειψη διάκρισης μεταξύ των κληρονομικές μορφές CRC, ιδιαίτερα σύνδρομο Lynch, και την πραγματική σποραδική μορφή CRC. Ωστόσο, η ίδια σύνδρομο Lynch αντιπροσωπεύει το ένα τρίτο των περιπτώσεων EOCRC [24]. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη ένα πλήρες γενεαλογικό ιδρύθηκε από μια κλινική γενετιστής για όλους τους νεαρούς ασθενείς. Lynch περιπτώσεις συνδρόμου ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ισχυρά κριτήρια και σαφώς διαχωρισμένα από σποραδικές EOCRC. Παρά το γεγονός αυτό, σε αυτή τη μελέτη οι ασθενείς σποραδικές EOCRC είχαν υψηλό ποσοστό οικογενειακό ιστορικό (38%). Μια μειοψηφία από αυτούς παρουσιάζονται με μια κυρίαρχη κληρονομικότητα μετάδοσης αυτοσωματικό (8%) που πιθανότατα αντιστοιχεί σε μια κληρονομική ασθένεια για την οποία δεν έχει ακόμη προσδιοριστεί η ευαισθησία του γονιδίου (σύνδρομο Χ). Από την άλλη πλευρά, αναγνωρίζεται όλο και περισσότερο ότι μερικά ανήλικος προδιάθεση τόποι θα μπορούσαν να είναι υπεύθυνα για μια σύνθετη μορφή του CRC κληρονομικότητα [25]. Ως εκ τούτου, μια τέτοια γενετική προδιάθεση θα μπορούσε επίσης να εμπλέκονται σε ορισμένους ασθενείς με EOCRC. Αυτή η υπόθεση υποστηρίζεται από το χαμηλό ποσοστό της σύγχρονης αδενώματος παρατηρήθηκε σε ασθενείς σποραδικές EOCRC η οποία θα μπορούσε να αντανακλά την επιτάχυνση της καρκινογένεσης δευτερεύουσες σε καταστάσεις που προδιαθέτουν.

Από καιρό έχει αναγνωριστεί ότι οι μορφολογικές ιδιαιτερότητες των EOCRC είναι φτωχοί διαφοροποίηση των κυττάρων, κολλοειδή αντίδραση συστατικό και λεμφοκυτταρική στρώμα [22], [26] – [29]. Και πάλι, αυτά τα δεδομένα είναι πιθανό συγχέονται με την συμπερίληψη των ασθενών με σύνδρομο Lynch, τα οποία συνήθως σχετίζονται με αυτά τα ιστολογικά χαρακτηριστικά. Στις δύο μόνο μελέτες που έχουν αναλύσει ειδικά MSS-νεαρούς ασθενείς (ένα με 24 και ένα με 55 περιπτώσεις), δεν υπήρχε σχέση μεταξύ βλεννώδες ιστολογία, κακή διαφοροποίηση, ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα και πρώιμη έναρξη της νόσου [30], [ ,,,0],31]. Η μελέτη μας επιβεβαίωσε τα στοιχεία αυτά και επιπλέον δείχνουν ότι η κακή διαφοροποίηση των κυττάρων και ένα βλεννώδες συστατικό είναι σαφώς συνδέονται με το καθεστώς MSI ανεξάρτητα από την ηλικία του ασθενούς. Αντίθετα, εμείς δεν παρατηρούμε τη σύνδεση μεταξύ του λεμφικού εισβολή, περινευρικό εισβολή ή σφραγίδα κυττάρων δαχτυλίδι ιστολογία με σποραδικές EOCRC, όπως αναφέρθηκε στις δύο προηγούμενες μελέτες που αναφέρονται παραπάνω (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται) [30], [31].

από κλινική άποψη, τα αποτελέσματά μας συμφωνούν με την κλινική περιγραφή της σποραδικής EOCRC που δημοσιεύτηκε πρόσφατα από τον Chang et al .: σποραδικές EOCRCs παρόντες οι όγκοι με απώτερο τοποθεσία και τις συχνές μεταστατικής νόσου [30]. Στην παρούσα μελέτη, ο εντυπωσιακά υψηλό ποσοστό ταυτόχρονης μεταστατικής νόσου στην ομάδα EOCRC (41%) μας οδήγησε να ταιριάζει με ασθενείς ηλικίας MSS για το στάδιο του όγκου, ώστε να μην συγκρίσεις γονιδιακής έκφρασης προκατάληψη. Αν και δεν είναι στατιστικά σημαντική, νεαρούς ασθενείς έτειναν να έχουν καλύτερα ποσοστά επιβίωσης, ανάλογα με το στάδιο της νόσου σε σύγκριση με ηλικιωμένους ασθενείς. Φυσικά, οι νεότεροι ασθενείς είναι πιθανό να υποβληθούν σε πιο επιθετική θεραπεία που περιλαμβάνει τη χημειοθεραπεία ή επαναλαμβανόμενη χειρουργική εκτομή για μεταστατική νόσο που μπορεί να βελτιώσει τη φτωχότερη πρόγνωση δίνεται για EOCRC. Αν και εν μέρει αντιφατικές με παλαιότερες μελέτες, μερικές από τις οποίες ήταν παγκόσμια αναλύσεις βασίζονται σε μητρώα, η παρούσα εργασία παρέχει αξιόπιστα αποτελέσματα για τους ίδιους ως άνω λόγους [32] – [35]. Συνολικά, σποραδικές EOCRC παρουσιάζεται ως μια επιθετική ασθένεια με περιφερική τοποθεσία, το στάδιο υψηλού όγκου και χωρίς σαφή ιστολογική ειδικότητα.

Η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη που παρέχει μια επισκόπηση της συχνότητας ενός πρότυπου πάνελ των μεταλλάξεων του γονιδίου, καθώς και όπως επιγενετικές μεταβολές ειδικά για σποραδικές EOCRC. Ιδρύθηκε παχέος ταξινομήσεις καρκινογένεση, χρησιμοποιώντας ένα συνδυασμό KRAS και BRAF μεταλλάξεων με CIMP και την κατάσταση της MSI, επιτρέπουν τον προσδιορισμό των τριών έως πέντε διακριτές μοριακές υπο-ομάδες των CRC [36], [37]. Για παράδειγμα, KRAS και Ρ53 μεταλλάξεις είναι κλασικά συνδέονται με CIN-παχέος εντέρου, ενώ BRAF μεταλλάξεων συνδέονται στενά με σποραδικές μορφές CIMP + /MSI + CRC. Λίγες μελέτες έχουν διερευνήσει τα ποσοστά μετάλλαξης σε σποραδικές περιπτώσεις EOCRC και έδειξε ότι 0-8% έχουν

BRAF

μεταλλάξεις, 0-4%

PIK3CA

μεταλλάξεις, 6-78%

KRAS

μεταλλάξεις, και 64%

TP53

μεταλλάξεις [30], [31], [37] – [40]. Έχουμε εντοπίσει ένα ποσοστό για

KRAS

και

TP53

μεταλλάξεις (αντίστοιχα 37% και 44%) ως παρόμοια με εκείνη των όγκων CIN, αλλά με την απουσία του

BRAF

μεταλλάξεις και καμία ένδειξη ενός φαινοτύπου methylator [41]. Οι διαφορές με τα δεδομένα από τη βιβλιογραφία σχετικά με τα ποσοστά μετάλλαξης στο EOCRC θα μπορούσε να συνδέεται με την έλλειψη σαφούς διάκρισης μεταξύ MSS και MSI όγκων σε παλαιότερες μελέτες, οι οποίες μπορεί να έχουν επηρεάσει τα ποσοστά μετάλλαξης, ιδιαίτερα για

KRAS

και

BRAF

[39], [40]. Συνολικά, η γενετική μελέτη μας ευνοεί την υπόθεση ότι η σποραδική EOCRC είναι μια υπο-ομάδα των CIN όγκων ούτε με

BRAF

μετάλλαξη ούτε methylator φαινότυπο.

Η ομαδοποίηση που λαμβάνεται με ανεξέλεγκτους αναλύσεις έδειξαν ότι οι διαφορές στη γονιδιακή προφίλ έκφρασης (GEP) προσδιορίστηκαν κυρίως από το καθεστώς MMR και σε μικρότερο βαθμό από την κατάσταση CIMP, ενώ η ηλικία είχαν μικρή επίδραση. Τα αποτελέσματα αυτά έχουν ήδη αποδειχθεί από μελέτες που δείχνουν ότι η MSI και MSS όγκοι έχουν διαφορική προφίλ έκφρασης, η οποία επικυρώνει τα παρόντα αποτελέσματα [42]. Ωστόσο, αν και Geps ήταν ιδιαίτερα σημαντική στην εποπτευόμενη αναλύσεις περιορίζεται σε όγκους MSS, δείχνοντας ένα σύνολο 219 γονιδίων που διαφοροποιεί τους νέους από την παλιά τους ασθενείς, τα αποτελέσματα των συστοιχίες έκφρασης πρέπει να εξετάζεται με προσοχή, δεδομένου λίστες γονίδιο συχνά αποτυγχάνουν να αναπαραχθούν. Αντιθέτως, αναλύσεις μονοπάτι αποδείχθηκαν αναπαραγώγιμα, και θα φέρει βιολογική έννοια συστοιχίες γονιδιακής έκφρασης [43]. Πολυάριθμες οδών που εμπλέκονται στην κλασική CRC ογκογένεση ήταν πάνω ρυθμισμένα σε σποραδικές EOCRC, όπως ΜΑΡ-κινάσης, mTOR και VEGF /αγγειογένεση, αλλά μονοπάτια που σχετίζονται με σηματοδότηση αυξητικού παράγοντα εμπλέκονται επίσης (EGF, HGF υποδοχέα και PDGF). Πρέπει επίσης να προσδιορίζονται

CTNNB1

ως ένα από τα πιο πάνω, εκφρασμένα γονίδια στο MSS-νεαρούς ασθενείς σε σύγκριση με το MSS-old ασθενών και χρησιμοποιούνται ανοσοϊστοχημεία για να αποδείξει ότι αυτό οδηγεί σε μια υπερ-ενεργοποίηση των β-κατενίνης σε σποραδικές EOCRC.