Αφηρημένο

Το μυκοφαινολικό οξύ (MPA) είναι ο μεταβολίζεται προϊόντος και ενεργό στοιχείο της μυκοφαινολάτης μοφετίλ (MMF) που έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για την πρόληψη της οξείας απόρριψης μοσχεύματος. MPA αναστέλλει αποτελεσματικά αφυδρογονάσης μονοφωσφορικής ινοσίνης (ΙΜΡϋΗ) που είναι επάνω ρυθμισμένο σε πολλούς όγκους και MPA είναι γνωστό ότι αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του καρκίνου, καθώς και των ινοβλαστών και μετανάστευση ενδοθηλιακών κυττάρων. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε για πρώτη φορά antimigratory και αντι-εισβολής ικανότητες του MPA-ευαίσθητων AGS ΜΡΑ κυττάρων (γαστρικός καρκίνος). έκφραση του γονιδιώματος σε επίπεδο αναλύσεων, χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες Illumina ολόκληρο το γονιδίωμα εντοπίστηκαν 50 γονίδια με ≥2 φορές αλλαγές και 15 γονίδια με & gt? 4 φορές αλλαγές και πολλαπλές μοριακών οδών που εμπλέκονται στην κυτταρική μετανάστευση. Σε πραγματικό χρόνο αναλύσεις RT-PCR επιλεγμένων γονιδίων επιβεβαίωσε επίσης τις διαφορές έκφρασης. Επιπλέον, στοχευμένη πρωτεομική ανάλυση εντόπισε αρκετές πρωτεΐνες μεταβληθεί από τη θεραπεία MPA. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι MPA ρυθμίζει γαστρική μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων μέσω της ρύθμισης προς τα κάτω από ένα μεγάλο αριθμό γονιδίων (

PRKCA

,

DOCK1

,

INF 2, HSPA5, LRP8

και

PDGFRA

) και πρωτεΐνες (PRKCA, ΑΚΤ, SRC, CD147 και ΜΜΡ1) με promigratory λειτουργίες, καθώς και τη ρύθμιση ενός αριθμού γονιδίων με antimigratory λειτουργίες (

ATF3

,

Smad3

,

CITED2

και

CEAMCAM1

). Ωστόσο, μερικά γονίδια που μπορεί να προωθήσει τη μετανάστευση (

CYR61

και

NOS3

) ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω. Ως εκ τούτου, η συνολική antimigratory ρόλο ΜΠΕ για καρκινικά κύτταρα αντανακλά την ισορροπία μεταξύ promigratory και antimigratory σήματα επηρεάζονται από τη θεραπεία MPA

Παράθεση:. Dun Β, Sharma A, Teng Υ, Liu H, Purohit S, Xu H, et al . (2013) Μυκοφαινολικό οξύ αναστέλλει τη μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου του στομάχου κύτταρα μέσω πολλαπλών μοριακών οδών. PLoS ONE 8 (11): e81702. doi: 10.1371 /journal.pone.0081702

Επιμέλεια: Ying Xu, University of Georgia, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 27 του Ιούλη του 2013? Αποδεκτές: 15 του Οκτώβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 15 Νοέμβρη, 2013

Copyright: © 2013 Dun et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη υποστηρίχθηκε από τα ταμεία της από την Γεωργία Regents του Πανεπιστημίου. JXS υποστηρίζεται μερικώς από τη Γεωργία Research Alliance ως επιφανής μελετητής. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

οι περισσότεροι συμπαγείς όγκοι είναι σε μεγάλο βαθμό ιάσιμες εφόσον διαγνωστεί και αντιμετωπιστεί πριν από τη διάδοση πέρα ​​από την αρχική αρχική τοποθεσία. Ωστόσο, όταν οι όγκοι εξαπλωθεί και σε άλλες περιοχές, συνήθως γίνονται πολύ νοσηρή και την πιθανή του εμβρύου. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να περιοριστεί η αρχική διάδοση και την πρόληψη της δευτερογενούς εξάπλωσης. Εισβολή και μετάσταση είναι δύο μείζονες τρόπους διάδοσης του όγκου, το καθένα οδηγείται από διάφορους μηχανισμούς και οδηγεί σε διακριτές θεραπευτικές προκλήσεις [1]. Ωστόσο, και οι δύο μορφές διάδοσης απαιτούν κυτταρική κίνηση από τις πρωτογενείς θέσεις στη δευτερεύουσα θέση, καθώς και αποκατάσταση και την επιβίωση των κυττάρων του όγκου σε δευτερογενείς θέσεις. Αυτές οι διαδικασίες επιτευχθεί μέσω ενός καταρράκτη των μοριακών αλλαγών μέσα στα καρκινικά κύτταρα. Αν και ο μοριακός μηχανισμός μετανάστευση υποκείμενη κυττάρων έχει μελετηθεί εκτεταμένα, νέες γνώσεις για τις μοριακά γεγονότα μπορούν να παρέχουν νέες θεραπευτικές προσεγγίσεις. Πράγματι, η αναστολή των μορίων που προάγουν την κυτταρική μετανάστευση και πάνω ρύθμιση μορίων που αναστέλλουν την μετανάστευση των κυττάρων μέσω φαρμακολογικές παρεμβάσεις έχουν γίνει ένα σημαντικό μέρος των weaponries την καταπολέμηση του καρκίνου. Ανάπτυξη ή αναπροσανατολισμό των επιπλέον φαρμάκων που αναστέλλουν τη μετανάστευση και την εισβολή είναι ένας μείζων συνεχής προσπάθεια για θεραπευτικά του καρκίνου.

Mycophenolate mofetil (MMF), έχει εγκριθεί για την πρόληψη της οξείας απόρριψης μοσχεύματος σε νεφρό, καρδιά, και μεταμόσχευση ήπατος [ ,,,0],2,3]. MMF είναι ο μορφολινοαιθυλικός εστέρας προφάρμακο του μυκοφαινολικού οξέος (ΜΡΑ), η οποία είναι ένας ισχυρός μη ανταγωνιστικός αναστολέας της μονοφωσφορικής ινοσίνης αφυδρογονάσης (ΙΜΡϋΗ), το περιοριστικό του ρυθμού ένζυμο για την

de novo

σύνθεση νουκλεοτιδίων γουανοσίνης [4,5 ], οι οποίες παίζουν κρίσιμους ρόλους στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και άλλες κυτταρικές λειτουργίες όπως αναδιπλασιασμό του DNA, σύνθεση RNA και πρωτεϊνών και κυτταρικής σηματοδότησης [6]. Κατά συνέπεια, μπλοκ MPA Τ και Β λεμφοκυττάρων και τον πολλαπλασιασμό κλωνική επέκταση, και εμποδίζει την δημιουργία κυτταροτοξικών Τ κυττάρων και άλλων δραστικά Τ κύτταρα. Άλλοι μηχανισμοί μπορεί επίσης να συνεισφέρουν στην αποτελεσματικότητα του MPA στην πρόληψη της απόρριψης αλλομοσχεύματος. Μέσω εξάντληση των νουκλεοτιδίων γουανοσίνης, MPA μπορεί να καταστείλει γλυκοζυλίωση και την έκφραση αρκετών μορίων προσκόλλησης, μειώνοντας έτσι την πρόσληψη λεμφοκυττάρων και μονοκυττάρων σε περιοχές φλεγμονής και απόρριψη μοσχεύματος [5].

Δεδομένου ότι η έκφραση ΙΜΡϋΗ είναι σημαντικά πάνω ρυθμισμένα σε πολλά κύτταρα όγκου [7,8], είναι, ως εκ τούτου, ενδεχομένως ένας στόχος για θεραπεία καρκίνου πέραν της ανοσοκατασταλτική χημειοθεραπεία. MPA /MMF έχει αναφερθεί ότι αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και επάγει την απόπτωση σε πολλά καρκινικά κύτταρα [9-14]. MPA /MMF έχει επίσης αναφερθεί ότι αναστέλλει τη μετανάστευση των κυττάρων ινοβλαστών [15] και της ανθρώπινης ομφαλικής φλέβας ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVECs) [16]. Ωστόσο, είναι άγνωστο αν MPA μπορεί να μεταβάλει το μετανάστευση και εισβολή ικανότητα των καρκινικών κυττάρων. Επιπλέον, τα ακριβή μονοπάτια σηματοδότησης μετανάστευσης και ενεργά μόρια που διέπουν τις δραστηριότητες MPA παραμένουν ασαφείς.

Στην παρούσα μελέτη, αποδείξαμε πρώτα ότι MPA αλλάζει σημαντικά τη μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των κυττάρων AGS και στη συνέχεια χρησιμοποιείται για την έκφραση των γονιδίων και πρωτεομικής τεχνολογίες για τον εντοπισμό γονιδίων και πρωτεϊνών που διέπουν αυτές τις λειτουργίες.

Υλικά και Μέθοδοι

οι κυτταρικές γραμμές, τα αντιδραστήρια και τα αντισώματα

Δύο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου (AGS και Hs746T) λήφθηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC). Αμφότερες οι κυτταρικές γραμμές αναπτύχθηκαν σε μέσο RPMI 1640 που περιέχει 10% βόειο εμβρυϊκό ορό, 100 μονάδες /ml πενικιλλίνης και 100 μg /ml στρεπτομυκίνης στους 37 ° C με 5% CO2. MPA αγοράστηκε από την VWR. Το CD147, το αντίσωμα ιντεγκρίνης beta5 αγοράστηκε από Abcam, το GAPDH και ICAM-1antibodies από Santa Cruz? Src, Akt, και ρ-Ακί (Ser473) αντισώματα από την Cell Signaling.

In vitro μετανάστευση και εισβολή δοκιμασίες trans-φρεατίων

Η μετανάστευση των κυττάρων πραγματοποιήθηκε με το σύστημα Transwell (Costar), το οποίο επιτρέπει στα κύτταρα να μεταναστεύουν μέσω 8-μm μεμβράνη μεγέθους πόρων πολυανθρακικό. Εν συντομία, οι AGS πέθαναν από ορό ή κύτταρα HS746T προστέθηκαν στον άνω θάλαμο (5 χ 104 κύτταρα ανά ένθεμα) και ϋΜΕΜ μέσο με διαφορετική συγκέντρωση MPA (1 μg /ml, 1.5μg /ml και 2 μg /ml) χρησιμοποιήθηκε ως ένας χημειοελκτικό στον κατώτερο θάλαμο. Μετά από επώαση στους 37 ° C για 8 ώρες, τα κύτταρα στον κατώτερο θάλαμο μονιμοποιήθηκαν σε μεθανόλη και χρωματίστηκαν με 0.2% κρυσταλλικό ιώδες. Αριθμούς των κυττάρων που μεταναστεύουν σε εννέα τυχαία επιλεγμένα πεδία από θαλάμους τριπλούν μετρήθηκαν σε κάθε πείραμα κάτω από ένα μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης. Η επεμβατική δυναμικό των κυττάρων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας επικαλυμμένα με Matrigel τροποποιημένου θαλάμου Boyden (Biosciences BD, San Jose, CA, USA) όπως περιγράφεται προηγουμένως [17]. DMEM που περιέχει MPA προστέθηκε στον κάτω θάλαμο. Μετά από επώαση στους 37 ° C για 24 ώρες, μετρήθηκε ο αριθμός των κυττάρων που εισέβαλαν στην κάτω πλευρά του άνω θαλάμου.

μικροσυστοιχίας πειράματα

Ολικό RNA εξήχθη από κύτταρα χρησιμοποιώντας AGS ένα magnatic κιτ εκχύλισης χάντρες RNA (Jinfiniti Βιοεπιστημών, Augusta, GA). προφίλ γονιδιακής έκφρασης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το ανθρώπινο Illumina HumanHT-12 V4 BeadChip (Illumina, San Diego, CA). Ένα κλάσμα 200 ng ολικού RNA μετατράπηκε σε δίκλωνο cDNA (ds-cDNA) χρησιμοποιώντας το κιτ σήμανσης Illumina TargetAmp-Nano με εκκινητή ολιγο-άΤ περιέχον έναν υποκινητή Τ7 RNA πολυμεράσης (Genset, St. Louis, ΜΟ).

In vitro

μεταγραφή πραγματοποιήθηκε επί των ανωτέρω ds-cDNA με χρήση του κιτ επισήμανσης μεταγραφής RNA Enzo. Βιοτίνη σημασμένο cRNA καθαρίστηκε με χρήση στήλης συγγένειας RNeasy (Qiagen), και κατακερματισμένη τυχαία σε μεγέθη που κυμαίνονται από 35-200 βάσεις με επώαση στους 94 ° C για 35 λεπτά. Τα διαλύματα υβριδισμού περιείχε 100mM MES, 1Μ Na

+, 20 mM EDTA, και 0,01% Tween 20. Η τελική συγκέντρωση του κατακερματισμένου cRNA ήταν 0,05 μg /μΙ σε διάλυμα υβριδισμού. Στόχος για υβριδοποίηση παρασκευάστηκε με συνδυασμό 40 μΐ κατακερματισμένη μεταγραφής με υπερήχους DNA σπέρματος ρέγγας (0,1 mg /ml), BSA και 5 ηΜ ολιγονουκλεοτίδιο ελέγχου σε ένα ρυθμιστικό που περιέχει 1.0 Μ NaCl, 10 mM Tris.HCl (ρΗ 7.6), και 0,005 % Triton Χ-100. Target υβριδοποιήθηκε για 16 ώρες στους 45 ° C σε φούρνο υβριδοποίησης Illumina. Chips στη συνέχεια πλύθηκαν στους 50 ° C με αυστηρό διάλυμα, τότε και πάλι στους 30 ° C με μη αυστηρή πλύσεις. Συστοιχίες στη συνέχεια χρωματίστηκαν με στρεπταβιδίνη-Cy3. Τα δεδομένα μικροσυστοιχιών είναι MIAME συμβατό και έχουν κατατεθεί στο NCBI Gene Expression Omnibus και είναι προσβάσιμα μέσω του αριθμού ένταξη GEO Σειρά GSE46671.

Real-time RT-PCR ανάλυση

Ένα κλάσμα του συνολικού RNA ( 2 μα ανά δείγμα) παρατάσσονται σε πλάκες 96-φρεατίων και στη συνέχεια μετατράπηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας ένα υψηλής χωρητικότητας cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems) και ένα PTC-100 ™ προγραμματιζόμενου θερμικού ελεγκτή (MJ Research, Inc). Τα προϊόντα cDNA χρησιμοποιήθηκαν για ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR χρησιμοποιώντας δοκιμασίες έκφρασης έτοιμα προς χρήση γονίδιο TaqMan από τις Applied Biosystems. Πέντε γονίδια αναφοράς με σχετικά σταθερή έκφραση (GAPDH, ESD, GUSB, IPO8 και MRPL19) χρησιμοποιήθηκαν για την ομαλοποίηση συγκέντρωση του RNA. Real-time PCR πραγματοποιήθηκε με 96×96 Fluidigm Έκφραση μάρκες. Τυπική κατάσταση θερμικής ανακύκλωσης (10 λεπτά στους 95 ° C, 40 κύκλοι για 15 δευτερόλεπτα στους 95 ° C, 1 λεπτό στους 60 ° C) χρησιμοποιήθηκε για όλα τα γονίδια. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν στην ίδια πλάκα και κάθε δείγμα αναλύθηκε εις διπλούν.

κηλίδωση Western

Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε PBS. Μετά από φυγοκέντρηση στις 2000 rpm για 5 λεπτά, ο σβώλος σε λύση σε αντιδραστήριο εκχύλισης παγωμένο M-PER πρωτεΐνης θηλαστικού που περιέχει 1% Protease Halt και Φωσφατάση Κοκτέιλ Αναστολέα (Thermo Scientific) για 30 λεπτά. Το υπερκείμενο συλλέχθηκε μετά από 10 λεπτά από φυγοκέντρηση στα 12000rpm, διαμορφώθηκαν με φασματοφωτομετρία, μετουσιώθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης δείγματος για 10 λεπτά σε 95ᵒC και αποθηκεύεται στους 4 ° C για μελλοντική χρήση. Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με 10% πηκτώματα SDS-πολυακρυλαμιδίου και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη PVDF (Bio-Rad), και επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα ενδιαφέροντος στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Το κατάλληλο δευτερογενές αντίσωμα horseradish συζευγμένη με σε αραίωση 1: 10.000 σε ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού (3% BSA-TBST) προστέθηκε και επωάστηκε για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Όλα τα αντισώματα αραιώθηκαν σε 3% BSA-TBST. Τα ανοσοστυπώματα εμφανίστηκαν χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ECL χημειοφωταύγειας (Thermo Scientific).

Η κυτταρομετρία ροής

Τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν και πλύθηκαν δύο φορές σε PBS. Περίπου 1×10

6 κύτταρα επωάστηκαν με 1 μα αντι-CD147, αντι-ΙΟΑΜ-1 και αντι-ιντεγκρίνης βήτα 5 αντισώματα για 30 λεπτά, πλύθηκαν με PBST δύο φορές, στη συνέχεια επωάστηκαν με ένα δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με TRITC ή APC για 30 λεπτά, και πλένεται δύο φορές με PBST. αναλύσεις κυτταρομετρίας ροής εκτελέστηκαν σε FACScaliburTM κυτταρομετρητή ροής με λογισμικό CELLQuestTM (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA).

Luminex

δοκιμασία

MMP πρωτεΐνες στο μέσο καλλιέργειας μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας Luminex σετ από Millipore Company (Billerica, ΜΑ, USA) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. μέσο καλλιέργειας κυττάρων (1:10 αραίωση) επωάστηκε με τις μικροσφαίρες αντίσωμα συζευγμένο και στη συνέχεια με βιοτινυλιωμένο αντίσωμα ανίχνευσης πριν από την προσθήκη στρεπταβιδίνης-φυκοερυθρίνης. Οι κατέλαβε χάντρα-συγκροτήματα μετρήθηκαν με το σύστημα FLEXMAP 3D (Luminex, Austin, TX). Διάμεση ένταση φθορισμού (MFI) συλλέχθηκε και χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό των συγκεντρώσεων της πρωτεΐνης.

Η στατιστική ανάλυση

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση της γλώσσας R και το περιβάλλον για στατιστικούς υπολογισμούς (www.r έργου. org). Οι συγκρίσεις μεταξύ των μέσων τιμών των ομάδων έγιναν με ANOVA (για ≥ 3 ομάδες) που ακολουθείται από ζεύγη συγκρίσεις χρησιμοποιώντας Bonferroni post-hoc δοκιμές. Η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών ορίστηκε στο P & lt? 0.05.

Το πακέτο lumi χρησιμοποιήθηκε για τα δεδομένα προ-επεξεργασία μικροσυστοιχιών. Διαφορική έκφραση αναλύσεις διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το πακέτο limma από το έργο Bioconductor [18]. Χρησιμοποιήσαμε το ποσοστό εσφαλμένης ανακάλυψη (FDR) για την προσαρμογή για πολλαπλές δοκιμές [19]. Ένας συνδυασμός ρυθμίζεται p-value και η απόλυτη τιμή του φορές μεταβολής (FC) χρησιμοποιήθηκαν για την επιλογή των διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων.

Cluster ανάλυση έγινε για την ομαδοποίηση των διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων που εμφανίζουν παρόμοια πρότυπα έκφρασης χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα HPCluster [20]. Το πακέτο Bioconductor «GOstats» χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμή της σύνδεσης των όρων Gene Ontology (βιολογικές διεργασίες) στα διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων [21] Μια τιμή-p με βάση την Υπεργεωμετρική τεστ υπολογίστηκε να εκτιμήσει κατά πόσον ο αριθμός των γονιδίων που σχετίζονται με τον όρο είναι μεγαλύτερο από το αναμενόμενο. Οι p-τιμές που ελήφθησαν προσαρμόστηκαν για πολλαπλές δοκιμές με τη χρήση του FDR. Ο κατάλογος γονιδίου αναλύθηκε επίσης με βάση prebuild μονοπάτια KEGG. Χρησιμοποιήσαμε το «SPIA» (σηματοδότηση ανάλυση των επιπτώσεων της οδού) πακέτο για τον εντοπισμό οδών επηρεάζονται από τις παρατηρούμενες αλλαγές στη γονιδιακή έκφραση [22]. ανάλυση Network διεξήχθη για να κατασκευάσει δίκτυα μοριακή αλληλεπίδραση με τη χρήση της βάσης δεδομένων string [23]. Τα δίκτυα εισήχθησαν σε απλή μορφή αλληλεπίδρασης με Cytoscape για την απεικόνιση [24].

Αποτελέσματα

MPA αναστέλλει AGS μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή

Η μεταναστευτική ικανότητα των δύο κυτταρικών γραμμών γαστρικού καρκίνου (AGS και Hs746T) με και χωρίς θεραπεία MPA αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας 8 μm πόρων μεταξύ φρεατίων θαλάμους χωρίς matrigel. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, τα ποσοστά που μεταναστεύουν AGS κυττάρων μειώθηκε σε ένα MPA δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, μειώνοντας σε λιγότερο από το 50% των κυττάρων AGS ελέγχου στις συγκεντρώσεις των & gt? 1.5μg /ml. Ωστόσο, η μεταναστευτική ικανότητα των κυττάρων Hs746T δεν επηρεάστηκε από MPA σε παρόμοιες συγκεντρώσεις. Παρομοίως, κύτταρο εισβολή προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας 8 μm πόρου Biocoat Matrigel θαλάμους 8-micron εισβολή (Εικόνα 1Β). θεραπεία MPA επίσης μείωσε σημαντικά την ικανότητα εισβολής των κυττάρων AGS αλλά όχι κύτταρα Hs746T

Α:. Εικόνες μεταναστευτικά κύτταρα μετά από θεραπεία με όχημα (DMSO) ή διαφορετική συγκέντρωση του MPA για 24 ώρες. Οι μέσες σχετικές μεταναστευτικά κύτταρα που φαίνεται στο κάτω μέρος. Β: Εικόνες εισβάλλοντα κύτταρα μετά από θεραπεία με όχημα (DMSO) ή διαφορετική συγκέντρωση του MPA για 24 ώρες. Οι μέσες σχετικές κύτταρα εισβάλλοντος εμφανίζεται στο κάτω μέρος. * P & lt? 0.05 σε σύγκριση με τον έλεγχο DMSO.

Η

MPA που προκαλείται από τις αλλαγές της γονιδιακής έκφρασης που σχετίζονται με τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων

Για την αναγνώριση των γονιδίων μεταβάλλεται με αγωγή MPA, πραγματοποιήσαμε ένα παγκόσμιο πείραμα transcriptomic προφίλ με AGS κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με MPA. Χρησιμοποιώντας ολόκληρο το σύνολο δεδομένων γονιδιακής έκφρασης, εντοπίσαμε μονοπάτια KEGG που έχουν αλλοιωθεί σημαντικά από MPA. Οκτώ από τους δέκα σημαντικά αλλάξει οδούς (ρ53 σηματοδότησης, του κυτταρικού κύκλου, μονοπάτια στον καρκίνο, σηματοδότηση PPAR, καρκίνο ουροδόχου κύστης, επεξεργασίας πρωτεΐνης σε ER, μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα και σηματοδότηση ΜΑΡΚ) είναι καλά γνωστό ότι είναι σχετίζονται με τον καρκίνο. Τα διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια χαρτογραφήθηκαν επίσης να Gene Ontology βιολογικές διεργασίες και μια υπεργεωμετρικών δοκιμή διεξήχθη για να αξιολογηθεί η σημασία του εμπλουτισμού για κάθε κατηγορία. Η ανάλυσή μας έδειξε ότι τα σημαντικά εμπλουτισμένη γονίδια που εμπλέκονται στην κυτταρικού κύκλου (1,6 φορές εμπλουτισμό, σ & lt? 10

-5), κυτταρικό θάνατο (εμπλουτισμός 1,7 φορές, σ & lt? 10

-7), τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (εμπλουτισμός 1,8 φορές, σ & lt? 10

-7), και τη μετανάστευση των κυττάρων (1.5 εμπλουτισμό φορές, σ & lt? 0.005). Οι παγκόσμιες δεδομένα γονιδιακής έκφρασης είναι συνεπή με δραστηριότητα MPA στην αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων, επαγωγή της απόπτωσης και αναστολή της μετανάστευσης.

Δεδομένου ότι ο κύριος στόχος της μελέτης αυτής είναι να διευκρινιστεί η μοριακός μηχανισμός που διέπουν επιπτώσεις ΜΠΕ για τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων, αναλύσαμε διεξοδικά τα 50 γονίδια που σχετίζονται με τη μετανάστευση με 2-4 φορές διαφορές και 15 σχετίζονται με τη μετανάστευση γονίδια με & gt? 4-φορές διαφορές μεταξύ επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων AGS κύτταρα (Σχήμα 2). Οι τέσσερις διαφορετικές ομάδες γονιδίων που αναγνωρίζονται. Τα γονίδια συστάδα 1 είναι γρήγορα πάνω ρυθμισμένα στο χρονικό σημείο 12h και κορυφώθηκε στο χρονικό σημείο 24h αλλά ελαφρώς προς τα κάτω ρυθμισμένα αργότερα. Τα 2 γονίδια συμπλέγματος είναι ελαφρώς αυξημένη στο χρονικό σημείο 24h, αλλά στη συνέχεια να γίνει πιο up-ρυθμίζονται σε 48 ώρες και 72 ώρες χρονικά σημεία. Τα γονίδια σύμπλεγμα 3 είναι γρήγορα ρυθμίζεται προς τα κάτω στις 12h και 24h χρονικά σημεία αλλά κάτω ρύθμιση γίνεται πολύ λιγότερο σε μεταγενέστερα χρονικά σημεία, ενώ το σύμπλεγμα 4 γονίδια ρυθμισμένα προς τα κάτω στο 24 ώρες και αργότερα χρονικά σημεία. Οι λειτουργικές σχέσεις μεταξύ αυτών των γονιδίων που απεικονίζεται σε ένα ρυθμιστικό δίκτυο γονίδιο (Σχήμα 3). Ακολούθως, αξιολογήσαμε επίσης την εγκυρότητα των δεδομένων έκφρασης με ανάλυση ενός υποσυνόλου υποψήφιων γονιδίων χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT-PCR (Σχήμα 4). Ένα διαφορετικό σύνολο δειγμάτων RNA λήφθηκαν σε διαφορετικά χρονικά μεταχείριση σημεία (0, 12, 24 και 48 ώρες μετά την θεραπεία) από τα MPA ευαίσθητα AGS κύτταρα και MPA-αναίσθητη κύτταρα Hs746T.

Heatmap για τα γονίδια που εκφράζονται διαφορικά μετά την επεξεργασία MPA για 0h, 12h, 24h, 48h και 72h. Κάθε δείγμα αντιπροσωπεύεται σε μια στήλη και κάθε γονίδιο αντιπροσωπεύεται σε μια σειρά. Η αυξημένη έκφραση ενδείκνυται ως κόκκινο και μειωμένη έκφραση υποδεικνύεται ως πράσινο. Αντιπροσωπευτικά γονίδια που φαίνεται στα δεξιά του πίνακα και συμπλέγματα γονιδίων υποδεικνύονται στα αριστερά.

Η

Οι κηλίδες ασφαλείας εμφανίζεται για κάθε γονίδιο. Τα σχετικά επίπεδα έκφρασης φαίνονται σε λογαριθμική κλίμακα 2. FC (fold change) για κάθε χρονικό σημείο (12h, 24h και 48h) συγκρίνεται με μη επεξεργασμένους μάρτυρες (0h) με τις αντίστοιχες τιμές p.

Η

MPA θεραπεία σοβαρά κάτω-ρυθμίζονται δύο γονίδια των υποδοχέων της κυτταρικής επιφάνειας (

PDGFRA

και

LRP8

), ένα γονίδιο πρωτεϊνικής κινάσης (

PRKCA

), και πέντε άλλα γονίδια (

INF2

,

DOCK1

,

HSPA5

,

ARRB1

, και

ΙΟΡΒΡ5

) (Σχήμα 2). Έξι από αυτά τα γονίδια επιλέχθηκαν για RT-PCR επιβεβαίωση και τα έξι γονίδια επιβεβαιώθηκε ότι είναι σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται από MPA σε AGS κύτταρα που είναι ευαίσθητα σε MPA (Σχήμα 4). Είναι ενδιαφέρον ότι, τα περισσότερα από αυτά τα γονίδια δεν ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω με κατεργασία MPA στα κύτταρα Hs746T που είναι ευαίσθητα στην αγωγή MPA (Σχήμα 4).

Επιπλέον, η θεραπεία των κυττάρων MPA AGS σημαντικά επάνω ρυθμισμένη η έκφραση του ένας μεγάλος αριθμός γονιδίων που εμπλέκονται στην κυτταρική μετανάστευση. Επτά γονίδια (

ATF3

,

Smad3

,

CITED2

,

CEAMCAM1

,

CYR61

,

NOS3

και

CDH10

) έχουν περισσότερες από τέσσερις φορές τη διαφορά και τονίζονται στην heatmap μικροσυστοιχιών (Σχήμα 2). Real-time RT-PCR επιβεβαίωσε ότι

ATF3

αυξάνεται κατά 10-20 διπλώνει στα κύτταρα μετά την επεξεργασία AGS MPA, ενώ αυξάνεται μόνο κατά 2-3 διπλώνει στα κύτταρα Hs746T (Σχήμα 4). Ομοίως, η θεραπεία με ΜΡΑ αυξήθηκαν σημαντικά

CDH10

έκφραση σε κύτταρα AGS αλλά όχι σε κύτταρα Hs746T (Σχήμα 4).

Επίσης, πραγματοποιήθηκε ανάλυση εμπλουτισμό μονοπάτι για τα γονίδια της μετανάστευσης 65 κυττάρων που εκφράζονται διαφορικά μετά τη θεραπεία MPA. Οι πέντε πρώτες πορείες KEGG που μεταβάλλονται σημαντικά από MPA παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Οι οδοί καθοδήγηση εστιακής προσκόλλησης, κυτταροσκελετού της ακτίνης και νευράξονα είναι ιδιαίτερα σχετίζονται με τη μετανάστευση των κυττάρων και αναστέλλονται σημαντικά από κατεργασία MPA, συνεπής με την παρατηρούμενη μείωση στην ικανότητα μετανάστευσης του MPA-θεραπεία AGS κύτταρα. Επιπλέον, η οδός στον καρκίνο αναστέλλεται επίσης σημαντικά ως αρκετά γονίδια παίζουν σημαντικό ρόλο στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την απόπτωση. Το ΤΟΡ-β οδού σημαντικά ενεργοποιείται με κατεργασία MPA και αυτό το εύρημα είναι συνεπές με την λειτουργία καταστολής του TGF-β και δραστηριότητα ΜΡΑ στην αναστολή της μετανάστευσης των κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό.

Διαδρομή Όνομα

ID

pFDR

Κατάσταση

Focal adhesion45101.46E-06InhibitedRegulation ακτίνης cytoskeleton48101.22E-05InhibitedPathways στο cancer52002.21E-05InhibitedAxon guidance43600.00016InhibitedTGF-βήτα σηματοδότησης pathway43500.00021ActivatedTable 1. κορυφαία πέντε KEGG-μονοπάτια των γονιδίων μετανάστευσης 65 κυττάρων μεταβληθεί σημαντικά από την επεξεργασία MPA.

CSV Λήψη CSV

MPA που προκαλείται από μεταβολές της σηματοδότησης που σχετίζονται με τη μετανάστευση

ΑΚΤ

αποτελεί βασικό γονίδιο που συνδέει με ένα μεγάλο αριθμό γονιδίων διαφορικά εκφραζόμενων μετανάστευσης στα δεδομένα μικροσυστοιχίας. Ωστόσο, η έκφραση του

ΑΚΤ

γονίδια δεν είχε μεταβληθεί από τη θεραπεία MPA. Περαιτέρω, η συνολική πρωτεΐνη ΑΚΤ έδειξε μόνο μικρή αλλαγή σε μεταγενέστερα χρονικά σημεία (Σχήμα 5Α). Είναι ενδιαφέρον ότι, φωσφο-Ακί (Ser473) ήταν σοβαρά μειωμένη με κατεργασία MPA (Σχήμα 5Α). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι MPA μπορεί επίσης να μεταβάλλει την ικανότητα μετανάστευση των κυττάρων μέσω AGS επίδραση στην κατάσταση ενεργοποίησης των βασικών πρωτεϊνών σηματοδότησης όπως ΑΚΤ, εκτός από την ρύθμιση της έκφρασης των γονιδίων

Α:. Western blots για επιλεγμένες πρωτεΐνες . Β:. Ανάλυση FACS

Η

Η έκφραση των γονιδίων που κωδικοποιούν την κινάση της τυροσίνης Src είναι μόνο οριακά κάτω-ρυθμίζονται στα δεδομένα μικροσυστοιχιών. Από Src λειτουργικά σχετίζεται με ένα μεγάλο αριθμό γονιδίων διαφορικά εκφραζόμενων μετανάστευσης στα δεδομένα μικροσυστοιχίας (Σχήμα 3), προσδιορίσαμε το επίπεδο έκφρασης πρωτεΐνης Src και διαπίστωσε ότι η πρωτεΐνη είναι δραστικά προς τα κάτω ρυθμισμένα με κατεργασία MPA (Σχήμα 5Α). Ωστόσο, η ακριβής αιτία για τις παρατηρούμενες διαφορές γονίδιο και η έκφραση πρωτεΐνης είναι ασαφής και παραμένει να διερευνηθεί περαιτέρω.

MPA-επαγόμενη CD147 μείωση

Η κινάση της τυροσίνης Src μεταδίδει επίσης σήματα ιντεγκρίνης που εξαρτώνται από την κεντρική στην κίνηση των κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό. Αρκετές απόκλιση εκφραζόμενα γονίδια (

λειτουργίας του CEACAM1

και

CYR61

) εμπλέκονται επίσης στην ιντεγκρίνης μονοπάτι σηματοδότησης. Ως εκ τούτου, αναλύσαμε την έκφραση αρκετών ιντεγκρινών στην κυτταρική επιφάνεια AGS και Hs746T χρησιμοποιώντας ανάλυση FACS. Αν και η έκφραση του

CD147

γονίδιο δεν αλλοιώνεται από τη θεραπεία MPA (Σχήμα 4), η έκφραση της πρωτεΐνης επιφανείας CD147 ήταν δραματικά κάτω ρυθμίζεται μετά τη θεραπεία MPA (Σχήμα 5Β). Επιπλέον, ανάλυση κηλίδος Western επιβεβαίωσε επίσης ότι η συνολική πρωτεΐνη CD147 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω με επεξεργασία MPA (Σχήμα 5Α). Είναι ενδιαφέρον ότι, η θεραπεία MPA των κυττάρων Hs746T δεν μετέβαλλε σημαντικά την επιφανειακή έκφραση CD147. Η έκφραση του ICAM-1 και ιντεγκρίνης βήτα 5 δεν άλλαξε με επεξεργασία MPA (Σχήμα 5Β).

MPA μειώνει μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας 1 (ΜΜΡ-1)

Τρεις ΜΜΡ πρωτεΐνες μετρήθηκαν στο μέσο καλλιέργειας των κυττάρων AGS και Hs746T μετά τη θεραπεία MPA χρησιμοποιώντας δοκιμασίες Luminex (Σχήμα 6). Τα επίπεδα πρωτεΐνης της ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 ήταν πολύ χαμηλές σε AGS μέσο κυτταρικής καλλιέργειας (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). ΜΜΡ1 μειώθηκε σημαντικά με κατεργασία MPA με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο σε AGS μέσο κυτταρικής καλλιέργειας (Σχήμα 6Α), ενώ καμία σημαντική αλλαγή δεν παρατηρήθηκε σε κύτταρα Hs746T (Σχήμα 6Β).

Α: AGS κύτταρα. κύτταρα Hs746T: Β.

Η

Συζήτηση

MPA είναι γνωστό ότι αναστέλλει ειδικώς ΙΜΡϋΗ, το ένζυμο περιορισμού του ρυθμού για το

de novo

σύνθεση νουκλεοτιδίων γουανοσίνης, τα οποία είναι απαραίτητα για την αντιγραφή του DNA καθώς και RNA και της πρωτεϊνικής σύνθεσης. MPA είναι επίσης γνωστό ότι αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και επάγει την απόπτωση. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε για πρώτη φορά ότι MPA μπορεί να μειώσει σημαντικά τις μετανάστευση και την εισβολή ικανότητες των κυττάρων AGS. Δεδομένου ότι η μετάσταση είναι ένα σημαντικό πρόβλημα που αντιμετωπίζουν οι ασθενείς με καρκίνο, η ικανότητα MPA να αναστέλλει τη μετανάστευση των κυττάρων του καρκίνου και την εισβολή, εκτός από την ικανότητά του να αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και επάγει την απόπτωση, καθιστά MPA ένας εξαιρετικός υποψήφιος αντικαρκινικό φάρμακο.

αυτή η μελέτη χρησιμοποιήσαμε επίσης μια ποικιλία μοριακών τεχνικών για τη διαλεύκανση των μοριακών μηχανισμών στους οποίους βασίζεται η λειτουργία MPA να αναστέλλει τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων. Χρησιμοποιήσαμε πρώτη παγκόσμια transcriptomic αναλύσεις για τον εντοπισμό υποψήφιων μετανάστευση γονίδια μεταβληθεί από τη θεραπεία MPA. Αυτές οι μελέτες πρότειναν 50 γονίδια με 2-4 φορές διαφορές και 15 γονίδια με & gt? 4 φορές διαφορές (Σχήμα 2). Τα γονίδια αυτά περιλαμβάνουν υποδοχείς κυτταρικής επιφάνειας, πρωτεϊνικές κινάσες, και άλλα γονίδια που εμπλέκονται στη ρύθμιση της μετανάστευσης. Η εγκυρότητα των δεδομένων των μικροσυστοιχιών έχει επιβεβαιωθεί από πραγματικού χρόνου RT-PCR για επιλεγμένα γονίδια με & gt? διαφορές 4-φορές (Σχήμα 4). Εκτός από την ανάλυση transcriptomic, χρησιμοποιήσαμε επίσης αρκετά πρωτεομικής και λειτουργικές τεχνολογίες για τη διαλεύκανση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν τη δράση αντι-μετανάστευση του MPA. Transcriptomic προφίλ είναι μια ισχυρή τεχνολογία για την αξιολόγηση της παγκόσμιας μοριακές αλλαγές. Το σημαντικότερο πλεονέκτημα της γονιδιακής έκφρασης μικροσυστοιχιών είναι η ικανότητά του για την ταχεία και οικονομική αξιολόγηση του προτύπου έκφρασης του σχεδόν όλα τα γονίδια που εκφράζονται στα κύτταρα του ενδιαφέροντος. Παρά τη δύναμη αυτής της κατηγορίας των τεχνολογιών, υπάρχει ένας αριθμός θεμάτων που περιορίζουν μικροσυστοιχιών κυρίως ως εργαλείο υποθέσεις ροών. Η πιο σοβαρή περιορισμός είναι η ατελής συσχέτιση ή η έλλειψη συσχετισμού μεταξύ της έκφρασης του γονιδίου και της πρωτεΐνης έκφρασης /λειτουργίας. Η ανεπάρκεια αυτή και παρουσιάζεται σε αυτή τη μελέτη ως σημαντικές διαφορές στην πρωτεϊνική έκφραση της κατάστασης ενεργοποίησης είχαν μεταβληθεί από MPA, ενώ τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης παρέμειναν αμετάβλητες. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να συνδυάσουμε transcriptomic και πρωτεομικής τεχνολογίες για την παγκόσμια χαρακτηρισμό των βιολογικών λειτουργιών.

Τουλάχιστον τρία γονίδια που είναι γνωστό ότι προάγει την κυτταρική μετανάστευση (

INF2

,

DOCK1

και

HSPA5

) είναι σοβαρά τα κάτω ρυθμισμένα (& gt? 4 φορές) δι ‘επεξεργασίας ΜΡΑ (Σχήμα 2).

INF 2

κωδικοποιεί την ανεστραμμένη πρωτεΐνη formin 2, το οποίο προάγει τον σχηματισμό detyrosinated μικροσωληνίσκων που απαιτούνται για κεντρομερίδιο επαναπροσανατολισμό σε μεταναστευτικά κύτταρα [25]. Αναθέτη του κυτταροκίνηση 1 πρωτεΐνης (DOCK1) αλληλεπιδρά με HER2 και προωθεί την ενεργοποίηση Rac HER2 που προκαλείται και κυτταρική μετανάστευση [26]. HSPA5 είναι μια πρωτεΐνη αντίδραση στο στρες που προκαλείται από παράγοντες ή συνθήκες που επηρεάζουν αρνητικά ενδοπλασματικό λειτουργία δίκτυο. Ρυθμίζει ενεργά πολλαπλές κακοήθη φαινοτύπων συμπεριλαμβανομένης της κυτταρικής ανάπτυξης, μετανάστευση, και διείσδυση. Τα κάτω ρύθμιση αυτών των γονιδίων μέσω MPA είναι συνεπής με τη μειωμένη ικανότητα των μεταναστευτικών κυττάρων AGS μετά τη θεραπεία MPA. Σε αντίθεση, η υπερέκφραση του β-αρρεστίνης-1 (

ARRB1

) μείωσε τη μεταναστευτική τάση των καρκινικών κυττάρων του μαστού γραμμές, ενώ φίμωση αυξημένη μετανάστευση [27]. Σε μια πιο πρόσφατη μελέτη [28],

ARRB1

βρέθηκε να προωθήσει την μεταναστευτική ικανότητα μετανάστευσης καρκίνου του πνεύμονα. Ως εκ τούτου, δεν είναι σαφές αυτή τη στιγμή εάν

ARRB1

αναστέλλει ή να προάγει την μετανάστευση στην AGS κύτταρα. Ένα άλλο δραστικά ρυθμισμένα προς τα κάτω γονίδιο,

ΙΟΡΒΡ5

, επάγει κυτταρική προσκόλληση και αυξάνει την επιβίωση των κυττάρων σε MCF-7 ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του μαστού [29]. ΙΟΡΒΡ5 φαίνεται να αναστέλλει τη μετανάστευση των κυττάρων MCF7 [29], αλλά προωθεί τη μετανάστευση των μονοπύρηνων κυττάρων περιφερικού αίματος [30]. Ως εκ τούτου, ο ρόλος του ΙΟΡΒΡ5 επί AGS κυτταρική μετανάστευση μένει να καθοριστεί.

θεραπεία MPA κυττάρων AGS επίσης σημαντικά επάνω ρυθμισμένη την έκφραση ενός αριθμού γονιδίων που εμπλέκονται στην κυτταρική μετανάστευση. Μεταξύ αυτών, επτά γονιδίων (

ATF3

,

Smad3

,

CITED2

,

CEAMCAM1

,

CYR61

,

NOS3

και

CDH10

) έχουν μεγάλο ενδιαφέρον, όπως δείχνουν περισσότερο από τέσσερις φορές διαφορές στην heatmap μικροσυστοιχιών (Σχήμα 2). Δύο από τα επτά γονιδίων (

ATF3

και

CDH10

) επιλέχθηκαν και επιβεβαιώθηκε από πραγματικού χρόνου RT-PCR.

ATF3

έκφραση είναι αυξημένη κατά 11 φορές 12 ώρες μετά τη θεραπεία MPA και κατά 19 φορές σε 48 ώρες.

CDH10

έκφραση μεταβάλλεται σε AGS κύτταρα αλλά όχι σε κύτταρα Hs746T (Σχήμα 4). ATF3 έχει πρόσφατα δειχθεί ότι καταστέλλει την μετάσταση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης μέσω της ρύθμισης Γκέλσον μεσολάβηση αναδιαμόρφωση του κυτταροσκελετού της ακτίνης. Η υπερέκφραση του

ATF3

σε εξαιρετικά μεταστατικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης κυττάρων μειώνει τη μετανάστευση

in vitro

και

in vivo

[31]. Το ΤΟΡ-β /Smad οδό σηματοδότησης διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα, τη μετανάστευση και τη μετάσταση. SiRNA μεσολάβηση αποσιώπηση της Smad3 αυξάνει ΤΟΡ-β επαγόμενη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων [32]. Συνεπής με τη μειωμένη μεταναστευτικά ικανότητα των κυττάρων μετά τη θεραπεία AGS MPA, Smad3 είναι σημαντικά πάνω ρυθμισμένα με κατεργασία MPA (Σχήμα 2).

CITED2

κωδικοποιεί την /p300-πρωτεΐνη αλληλεπίδρασης CBP τρανσενεργοποιητή 2, η οποία ρυθμίζει θετικά ΤΟΡ-β σηματοδότηση μέσω σύνδεσης του με το SMAD /p300 /CBP μεσολάβηση μεταγραφικό σύμπλοκο συνενεργοποιητή και διεγείρει διάφορες άλλες μεταγραφικές δραστηριότητες. Έχει δειχθεί ότι

Cited2

knockout ποντικών αυξήθηκαν γονάδων κυτταρική μετανάστευση [33]. Ως εκ τούτου, τα επάνω ρυθμισμένη

CITED2

γονιδιακή έκφραση μπορεί να συμβάλλει στη μειωμένη μεταναστευτικά ικανότητα των κυττάρων AGS που έλαβαν θεραπεία με ΜΡΑ.

λειτουργίας του CEACAM1

κωδικοποιεί το καρκινοεμβρυονικό αντιγόνο που σχετίζονται με μορίου προσκόλλησης κυττάρου (CD66a), η οποία επηρεάζει ιντεγκρίνη εξαρτώμενη σηματοδότηση και ρυθμίζει εξωκυτταρική μήτρα πρωτεΐνη-ειδική μορφολογία και τη μετανάστευση των ενδοθηλιακών κυττάρων [34]. Αν και οι περισσότερες μελέτες έχουν δείξει ότι παίζει λειτουργίας του CEACAM1 μάλλον ένα promigratory ρόλο, την αλληλεπίδραση της λειτουργίας του CEACAM1 και filamin δραστικά μειωμένο μετανάστευση και κυψελίδας σκέδασης [35]. Ως εκ τούτου, ο ρόλος της λειτουργίας του CEACAM1 στη μετανάστευση των κυττάρων μπορεί να εξαρτάται από τον κυτταρικό περιβάλλον.

Ωστόσο, δύο από τα γονίδια ιδιαίτερα up-ρυθμίζεται από MPA (

CYR61

και

NOS3

) να προωθήσουν στην πραγματικότητα της μετανάστευσης.

CYR61

κωδικοποιεί την πλούσια σε κυστεΐνη πρωτεΐνη 61, η οποία προάγει κυτταρική μετανάστευση μέσω μεταβολή των λειτουργιών του ιντεγκρίνης [36]. Το up-ρύθμιση του

CYR61

με επεξεργασία MPA μπορεί να μειώσει την αντι-μεταναστευτικά ρόλο του MPA. Το νιτρικό οξείδιο προωθεί μαστικού μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων μέσω διαδοχική ενεργοποίηση της συνθάσης νιτρικού οξειδίου, γουανυλικής κυκλάσης και που ενεργοποιείται από μιτογόνο πρωτεϊνική κινάση [37].

NOS3

κωδικοποιεί την συνθάσης νιτρικού οξειδίου 3 και είναι ιδιαίτερα ρυθμίζεται προς τα πάνω με κατεργασία MPA. Και πάλι, πάνω ρύθμιση του

NOS3

μπορεί να μειώσει την antimigratory λειτουργία του MPA. Η

CDH10

γονίδιο κωδικοποιεί μία από τις πρωτεΐνες καντερίνης που παίζουν κρίσιμους ρόλους στην προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου. Έχει εξαχθεί το συμπέρασμα ότι CDH10 μπορεί να παίζει ένα κρίσιμο ρόλο στη μετανάστευση των κυττάρων mesendodermal αν και αυτό συνήγαγε σχέση δεν έχει πειραματικά δοκιμαστεί.

CDH10

αυξάνεται δραστικά με επεξεργασία MPA των κυττάρων AGS, αλλά όχι σε κύτταρα Hs746T και ο ρόλος της στη μετανάστευση θα πρέπει να δοκιμαστεί πειραματικά.

PDGFRA

κωδικοποιεί ένα μέλος υποδοχέα κινάσης τυροσίνης της κυτταρικής επιφάνειας της οικογένειας παράγοντα ανάπτυξης που προέρχεται από αιμοπετάλια και είναι γνωστό ότι σχετίζεται στενά με την κυτταρική μετανάστευση [38].