Αφηρημένο

πλακώδες καρκίνωμα κεφαλής και τραχήλου (HNSCC) είναι μια σημαντική αιτία νοσηρότητας και θνησιμότητας υπογραμμίζοντας την ανάγκη για ασφαλή και αποτελεσματική chemopreventive στρατηγικές. Στόχευση υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) είναι ελκυστική κατά το ότι είναι ένα πρώιμο γεγονός στην κρίσιμη HNSCC παθογένεση. Ωστόσο, οι τρέχουσες πράκτορες έλλειψη αποτελεσματικότητας ή έχουν μη αποδεκτή τοξικότητα. Διάφορες ομάδες έχουν αποδείξει ότι το φάρμακο over-the-counter, πολυαιθυλενογλυκόλη (PEG) έχει αξιοσημείωτη αποτελεσματικότητα έναντι χημειοπροληπτική καρκινογένεση του παχέος εντέρου. Είναι σημαντικό ότι, αναφέραμε ότι αυτό το αποτέλεσμα επιτυγχάνεται με τη μεσολάβηση του EGFR εσωτερίκευσης /αποικοδόμηση. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήσαμε την χημειοπροληπτική αποτελεσματικότητα αυτού του παράγοντα έναντι HNSCC, χρησιμοποιώντας τόσο το φρέαρ επικυρωμένη ζωικό μοντέλο 4-NQO (4-νιτροκινολίνη 1-οξείδιο) μοντέλο αρουραίου και κυτταρικής καλλιέργειας με την HNSCC ανθρώπινη κυτταρική σειρά SCC-25. Δείξαμε ότι η καθημερινή τοπική εφαρμογή του 10% PEG-8000 στη στοματική κοιλότητα (γλώσσα και τοιχώματος της κοιλότητας) μετα 4NQO έναρξη οδήγησε σε σημαντική μείωση του φορτίου του όγκου (και τα δύο, το μέγεθος του όγκου και αρουραίου όγκους /φέρει όγκο) χωρίς οποιαδήποτε ένδειξη τοξικότητας . Ανοσοϊστοχημικές μελέτες απεικονίζεται μειωμένο πολλαπλασιασμό (αριθμός Κί67-θετικών κυττάρων) και μειωμένη έκφραση του EGFR και κατάντη επενεργητές κυκλίνης D1 του στην βλεννογόνο γλώσσα του 4NQO-αρουραίων που έλαβαν θεραπεία με PEG. Δείξαμε ότι ο EGFR ήταν επίσης σημαντικά προς τα κάτω σε SCC-25 κύτταρα με PEG-8000 με ταυτόχρονη επαγωγή της G1-S φάσης διακοπή του κυτταρικού κύκλου, η οποία ενδεχομένως μεσολάβηση απορυθμίζεται ρ21

Cip1 /WAF1. Εν κατακλείδι, έχουμε αποδείξει, για πρώτη φορά, ότι η PEG έχει πολλά υποσχόμενο αποτελεσματικότητα και την ασφάλεια ως την αποτελεσματικότητα chemopreventive εναντίον του στόματος καρκινογένεση

Παράθεση:. Wali RK, Kunte DP, De La Cruz Μ, Tiwari AK, Brasky J , Weber CR, et al. (2012) Επίκαιρα γλυκόλη πολυαιθυλενίου ως Novel Χημειοαποτρεπτική Agent για τον καρκίνο του στόματος μέσω της στόχευσης των επιδερμικού αυξητικού παράγοντα απόκρισης. PLoS ONE 7 (6): e38047. doi: 10.1371 /journal.pone.0038047

Επιμέλεια: David L. McCormick, IIT Research Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 26η Σεπτεμβρίου, 2011? Αποδεκτές: 2 Μαΐου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 4, Ιουνίου, 2012

Copyright: © 2012 Wali et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η χρηματοδότηση που προβλέπεται από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας U01CA111257, R21CA141112, 1R21CA156944-01, RO3CA139528, RO1CA156186. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. RKW, SS και HKR είναι συν-ιδρυτές της Πήγασος Biosolutions LLC. Υπάρχει μια εκκρεμότητα προσωρινό δίπλωμα ευρεσιτεχνίας Ηνωμένων Πολιτειών. Δεν υπάρχουν προϊόντα στην ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

πλακώδες καρκίνωμα της περιοχής κεφαλής και του τραχήλου (HNSCC) είναι η έκτη πιο διαδεδομένη καρκίνο παγκοσμίως, αντιπροσωπεύοντας το 3% όλων των καρκίνων [1]. Το 2010, μόνο στις ΗΠΑ υπήρχαν περίπου 49.000 νέες περιπτώσεις HNSCC και 11.500 HNSCC σχετίζονται θανάτων [2]. Σημαντικά, οι αριθμοί αυτοί δεν λαμβάνουν υπόψη σοβαρά νοσηρότητα από την παραμόρφωση του προσώπου και αναπνευστικής δυσλειτουργίας που σχετίζεται με τη χειρουργική επέμβαση /ακτινοθεραπεία. Η πρόληψη αυτής της κακοήθειας, ως εκ τούτου, αντιπροσωπεύει μια σημαντική επιταγή της υγειονομικής περίθαλψης. Τροποποιήσεις ορισμένων παραγόντων κινδύνου του τρόπου ζωής θα ήταν ιδανικό, αλλά είναι δύσκολο να επιτευχθεί, παρά σημαντικές προσπάθειες για τη δημόσια υγεία από τη χρήση του καπνού (τόσο τα καπνιστά και μάσημα), betel καρύδι μάσημα, η κατανάλωση αλκοόλ και HPV (λοίμωξη) κατάσταση.

Ως εκ τούτου, , το ενδιαφέρον έχει επικεντρωθεί στην χημειοπροφύλαξη, δεδομένου ότι οι ομάδες υψηλού κινδύνου είναι σαφώς καθορισμένες για τις προσπάθειές της πρωτογενούς πρόληψης? εκείνους με πρώιμη νεοπλασματικό μετασχηματισμό (στοματική λευκοπλακία), η οποία μπορεί να προσδιοριστεί από μια τυποποιημένη φυσική εξέταση. Μια εξίσου σημαντική εφαρμογή θα είναι δευτερεύουσα χημειοπροφύλαξη (πρόληψη δεύτερη προκριματικές HNSCC σε ασθενείς με προηγούμενο ιστορικό καρκίνου)

Έχει παρατηρηθεί ότι ακόμη και μετά την επιτυχή εκτομή του όγκου (ιστοπαθολογικά σαφή περιθώρια).? -20% Των ασθενών μπορεί να εξακολουθούν να έχουν υποτροπή της HNSCC σε διαφορετικό χώρο (περίπου 2% ετησίως) [3]. Αυτό έχει σε μεγάλο βαθμό αποδίδεται σε et «πεδίο σχηματισμός καρκίνου» [4]. Πράγματι, κλασικό μελέτες έχουν δείξει ότι διάφορα μεταλλακτικά γεγονότα στην μικροσκοπικά φυσιολογικού βλεννογόνου μπορεί να είναι προγνωστικά της υποτροπιάζουσας HNSCC και τη συνολική επιβίωση [5]. Αυτή η έννοια «καταδίκασε βλεννογόνο» είναι ισχυρή, όχι μόνο για την πρόληψη της υποτροπής (δευτερογενής πρόληψη), αλλά παρουσιάζει επίσης ένα πιθανό στόχο για πρωτογενή χημειοπροφύλαξη (ασθενείς χωρίς καρκίνο, αλλά έχουν προκαρκινικές αλλοιώσεις).

Έτσι, η εύρεση μοριακών στόχων στο προκαρκινικών βλεννογόνος έχει ένα κυρίαρχο θέμα στην πρόληψη HNSCC με τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) που λαμβάνουν κάποια προσοχή. EGFR είναι μια κρίσιμη πρώιμη εκδήλωση στο HNSCC και υπερεκφράζεται σε & gt? 80% των HNSCC. EGFR υπερέκφραση και αυξημένο αριθμό αντιγράφων σε στοματικές προκαρκινικές αλλοιώσεις είναι ένα εξαιρετικό προγνωστικό του κινδύνου εξέλιξης σε HNSCC [6]. Επιπλέον, η υπερέκφραση EGFR έχει βρεθεί σε ιστολογικά φυσιολογικό βλεννογόνο από ασθενείς HNSCC υποδεικνύοντας ότι μεταβάλλεται σηματοδότηση EGFR συμβάλλει στη σχηματισμός καρκίνου πεδίο παρατηρείται σε αυτούς τους ασθενείς [7]. Είναι σημαντικό, η στόχευση του EGFR είναι ένα παλληκάρι για θεραπείες αντι-HNSCC υπογραμμίζοντας τη σημασία αυτής της οδού. Ωστόσο, όπως με τις περισσότερες άλλες μοριακές στόχευση φαρμάκων, τα μεγάλα θέματα που αφορούν τη χρήση παραγόντων αντί-EGFR (μονοκλωνικά αντισώματα, αναστολείς μικρού μορίου, κλπ) για τη χημειοπρόληψη είναι υψηλό το κόστος τους για παρατεταμένη χρήση και σχετική τοξικότητα, ιδιαίτερα δεδομένου ότι η πλειοψηφία των ασθενών που προσφέρονται chemopreventive παράγοντες δεν έχουν καρκίνο. Ως εκ τούτου, η εξεύρεση μια φθηνή, καλά ανεκτή μηχανισμό για τη στόχευση του EGFR στο βλεννογόνο του στόματος, θα είναι ένα σημαντικό βήμα προς τα εμπρός στην HNSCC χημειοπροφύλαξη προσπάθεια.

Η ομάδα μας έχει να εξερευνήσετε το καθαρτικό πολυαιθυλενογλυκόλη over-the-counter (PEG) για αξιοσημείωτη δραστικότητα του σε αρνητική ρύθμιση EGFR και παρέχοντας έτσι μια πιθανή εξήγηση για τον καρκίνο του παχέος εντέρου χημειοπροληπτική αποτελεσματικότητα του (τεκμηριώνεται από διάφορες ομάδες σε ένα αριθμό προ-κλινικά μοντέλα) [8], [9], [10], [11], [12 ], [13]. Από μηχανιστική άποψη, παρατηρήσαμε ότι PEG είχε ως αποτέλεσμα την ταχεία εσωτερίκευση του δεσμεύεται μεμβράνη EGFR με ταυτόχρονη υποβάθμιση proteosomal. Αυτό οδηγεί σε μειωμένη κυκλίνη D1 και ΣΑΛΙΓΚΑΡΙΟΥ (ενοχοποιηθεί σε καρκίνο του παχέος εντέρου τόσο και HNSCC) μεταγωγή έτσι τις αντι-νεοπλασματικές επιδράσεις της PEG [13].

Συνεπώς υποθέσαμε ότι η τοπική PEG μπορεί να είναι ένας αποτελεσματικός παράγοντας έναντι χημειοπροληπτική HNSCC . Για τις μελέτες αυτές χρησιμοποιήσαμε ένα καλά επικυρωμένη καρκινογόνο, 4-νιτροκινολίνη 1-οξείδιο (4-NQO) μοντέλο κατεργασμένα αρουραίου HNSCC και καρκίνο πλακωδών κυττάρων γραμμή, τα κύτταρα SCC25. Με δεδομένη την ανησυχία που PEG μπορεί να συγχύσει το αποτέλεσμα με μια άμεση αλληλεπίδραση βλεννογόνου καρκινογόνος-στόματος, χρησιμοποιήσαμε ένα σχέδιο μετά την έναρξη χρησιμοποιώντας το μέγεθος του όγκου και της πολλαπλότητας ως κύρια τελικά σημεία μας και τα καλά επικυρωμένες ενδιάμεσων βιοδεικτών του πολλαπλασιασμού ως δευτερεύον καταληκτικό σημείο. Εμείς, εδώ για πρώτη φορά, αποδεικνύουν ότι η ημερήσια τοπική εφαρμογή από το στόμα του PEG-8000 για ένα σύντομο διάστημα μείωσε σημαντικά την από του στόματος φορτίο του όγκου (τόσο το μέγεθος του όγκου και τον αριθμό).

Υλικά και Μέθοδοι

Ζώα Μελέτες και όγκου επαγωγή

Όλα τα πρωτόκολλα των ζώων εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Θεσμικών ζωικά Φροντίδα και Χρήση των NORTHSHORE Πανεπιστημίου HealthSystem (IACUC Διασφάλισης # A3444-01? πρωτόκολλο # 07-230). Εικοσιτέσσερις αρσενικοί αρουραίοι Fisher (F 344? 150-200 g? Harlan, Indianapolis, ΙΝ) στεγάσθηκαν σε ένα ελεγχόμενο περιβάλλον κλίμα (25 ° C θερμοκρασία, 60% υγρασία και μια /κύκλο ημέρας 12 ώρες φως). Δεκαέξι ζώα δόθηκαν

κατά βούληση

τροφή για αρουραίους και πόσιμο νερό συμπληρώθηκε με 4-νιτροκινολίνη 1-οξείδιο (4NQO? 20 ppm? Sigma Chemicals). Φρέσκα 4NQO συμπληρώνεται νερό διανεμήθηκε σε αρουραίους σε φως αδιαφανείς φιάλες που είχαν αναπληρώνονται δύο φορές την εβδομάδα. Τα υπόλοιπα 8 αρουραίοι παρέχεται καθαρό νερό (ομάδα ελέγχου) πόσιμο. Μετά από 14 εβδομάδες, η 4NQO συμπληρώνεται νερό αντικαταστάθηκε με κανονικό νερό και οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε δύο ομάδες αγωγής. Η πρώτη ομάδα (8 αρουραίοι) έλαβε μία ημερήσια τοπική εφαρμογή 10% (W /V) PEG-8000 (η δοσολογία /σκεύασμα αποτελεσματικό στη χημειοπρόληψη του καρκίνου του παχέος εντέρου) με βάψιμο της παρειάς δάπεδο /οροφή της στοματικής κοιλότητας αρουραίου χρησιμοποιώντας μία κοκκώδης βούρτσα (# 4) για έως 3-4 λεπτά. Για αυτές τις θεραπείες, οι αρουραίοι ήπια καταστολή σε καλά οργανωμένη θάλαμο αναισθητικό ισοφλουράνη /οξυγόνο. Η δεύτερη ομάδα (8 αρουραίοι), που χρησιμεύει ως τον έλεγχο, ήταν εικονική ζωγραφισμένα με το πινέλο βουτηγμένο σε μόνο φυσιολογικό ορό. Αυτή η αγωγή συνεχίστηκε για 14 επιπλέον εβδομάδες. Κατά την νεκροψία, οι γλώσσες αρουραίου αποκόπηκαν και υποβλήθηκαν σε μακροσκοπική εκτίμηση του όγκου. Τα τμήματα της γλώσσας ήταν σε φέτες, φορμόλη σταθερό, ενσωματωμένα σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν και υποβλήθηκαν σε ιστολογική και ανοσοϊστοχημική επεξεργασία.

Καταμέτρηση όγκου και έντασης

Οι τεμαχίζεται γλώσσες εξετάστηκαν για την παρουσία έκδηλης όγκων. Συνολικός αριθμός των όγκων (& gt? 0,2 cm) σε κάθε γλώσσα μετρήθηκαν και μετρήθηκε ο όγκος του όγκου (μέγεθος), σύμφωνα με το πλάτος τύπου Χ μήκος Χ ύψος × π /6 [14]. Ιστολογικές αξιολογήσεις για την παρουσία των επιθηλιακών ατυπίας και δυσπλασία στο μη εμπλεκόμενο ιστό γλώσσα διεξήχθησαν μετά από χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη.

Ανοσοϊστοχημική (IHC) Ανάλυση

Οι τομές γλώσσα υποβλήθηκαν σε ανάλυση IHC να προσδιοριστεί η επίδραση της PEG επί της έκφρασης των δεικτών πολλαπλασιασμού Κί67, EGFR και Κυκλίνη D1. Τέσσερις micron ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές τοποθετήθηκαν σε Superfrost

+ διαφάνειες (Vector Laboratories, Burlingame, CA) και αποπαραφινοποιήθηκαν πρώτα με ψήσιμο στους 55-60 ° C για 1 ώρα και στη συνέχεια υποβολή σε δύο πλύσεις 5 λεπτών σε ξυλόλιο. Οι τομές του ιστού στη συνέχεια ενυδατώνονται σε διαβαθμισμένη σειρά από πλύσεις αιθανόλης. Η ανάκτηση επιτόπου διεξήχθη υποβάλλοντας τις διαφάνειες ιστού σε μικροκύματα πίεση (NordicWare, Minneapolis, ΜΝ) σε διάλυμα αποκάλυψης αντιγόνο (Vector Laboratories). Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξείδιο σβήστηκε με κατεργασία με 3% Η

2O

2 σε μεθανόλη για 10 λεπτά και το μη ειδική σύνδεση παρεμποδίστηκε με επώαση των τομών ιστού με 5% ορό αλόγου για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν στους 4 ° C για 4-6 ώρες με πρωτεύοντα αντισώματα [αντι-Κί67 (1:250? Abcam, Cambridge, ΜΑ), αντι-EGFR (1:200? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) και αντί-Κυκλίνη D1 (1:100? Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ)], ακολουθούμενη από κατάλληλες βιοτινυλιωμένα δευτερογενή αντισώματα. Τα σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος ανιχνεύθηκαν με το κιτ Vectastatin Elite ABC (Vector Laboratories) χρησιμοποιώντας 3, 3 ‘-diaminobenzidine (DAB) ως χρωμογόνο (Vector Laboratories). Για αρνητικούς ελέγχους, οι τομές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία υπό την απουσία των πρωτογενών αντισωμάτων. Τα δείγματα αντιχρώσθηκαν σε διάλυμα αιματοξυλίνης Gill και το μπλε χρώμα σταθεροποιείται από μία δεύτερη πλύση 20 σε κορεσμένο ανθρακικό λίθιο (1 g /100 ml). IHC βαθμολογήθηκε από τον παθολογοανατόμο (CW) χωρίς προηγούμενη γνώση του σχεδίου θεραπείας. Μια ημι-ποσοτική κλίμακα χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει ανοσοαντιδραστικότητα των βασικών πλακωδών επιθηλιακών κυττάρων. Η έκταση της χρώσης βαθμολογήθηκε και βαθμολογήθηκε ως 0, αρνητική χρώση? 1+, & lt? 10% δραστικότητα, 2 + 10-50% αντιδραστική, και 3+ για & gt?. 50% θετική αντίδραση [15]

Cell Culture

SCC-25 κύτταρα που ελήφθη από την American Type Tissue Culture (ATCC), Rockville, MD. Αυτά είναι ελάχιστα διαφοροποιημένα πλακώδη κύτταρα που λαμβάνονται από ανθρώπινο γλώσσα. Η ταυτότητα και η ποιότητα αυτών των κυττάρων επικυρώνονται από ATCC. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε DMEM /F-12 μέσο (που περιέχει 2.5 mM L-γλουταμίνη, 15 mM HEPES, 0,5 mM πυροσταφυλικό νάτριο, και όξινο ανθρακικό 1200 mg /L νάτριο) συμπληρωμένο με 400 ng /ml υδροκορτιζόνη (Sigma /Aldrich), 10% FBS (ATCC), και 0,5% Pen /Strep (ATCC). Για να αξιολογηθεί η επίδραση της PEG, αυτά τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία είτε με PEG-8000 ή όχημα (PBS) για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε στύπωμα western και κυτταρομετρίας ροής αναλύσεις.

Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού Προσδιορισμός

Ο αριθμός των κυττάρων εκτιμήθηκε με WST-1 (4- [3- (4-ιωδοφαινυλ) -2 – (4-νιτροφαινυλ) -2Η-5-τετραζολιο] -1, 3-βενζόλιο δισουλφονικό) δοκιμασίας σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Roche Diagnostics, Indianapolis, ΙΝ). Εν συντομία, SCC-25 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε τρυβλία 96 φρεατίων σε τελικό όγκο 100 μΐ και ακολούθως επωάζονται με 10 μΐ αντιδραστηρίου WST-1 στους 37 ° C για 30 λεπτά σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2 θερμοκοιτίδα. Μετατροπή του άλατος τετραζολίου σε φορμαζάνη προσδιορίστηκε φασματοφωτομετρικά στα 440 nm απορρόφηση (Molecular Devices, Sunnyvale, CA)

Κύκλου Κυττάρου Ανάλυση

SCC-25 κύτταρα επωάστηκαν με όχημα (αλατούχο φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα.? PBS) ή 10% PEG σε υγροποιημένη 5% CO

2 επωαστήρα στους 37 ° C για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν σε λευκωματίνη ορού /PBS βοοειδούς (BSA), σε επεξεργασία με θρυψίνη, επαναιωρήθηκαν σε φρέσκο ​​PBS /BSA και στερεώνονται σε 70% αιθανόλη στους -20 ° C για 30 λεπτά. Μετά από 2 πλύσεις, τα κύτταρα επωάστηκαν για 3 ώρες (σε θερμοκρασία δωματίου) σε διάλυμα PBS /BSA που περιείχε ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ? 40-μg /ml, Sigma) και RNase Α (200 μg /ml? Sigma). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε μέτρηση του περιεχομένου ϋΝΑ χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής (Becton Dickinson Labware). Τα δεδομένα εκφράζονται ως ποσοστό των κυττάρων σε G

o-G

1 έως G

2-Μ πληθυσμών και λογισμικό πρόγραμμα CellQuest 3.1 χρησιμοποιήθηκε για την ανάπτυξη του ιστογράμματα συχνότητας περιεχόμενο DNA.

Ανάλυση Western Blot

κηλίδωση Western εφαρμόστηκε χρησιμοποιώντας πρότυπες τεχνικές. Εν συντομία, 30 μg πρωτεΐνης υποβλήθηκε σε SDS-PAGE, μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ), αποκλείστηκαν με 5% BLOTTO και ανιχνεύθηκαν με ειδικά αντισώματα, συμπεριλαμβανομένων πυρηνικό αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων (PCNA), Ρ21

Cip1 /WAF1, Κυκλίνη D1, υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR). Xerograms αναπτύχθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια (Santa Cruz Biotechnology). Εικόνες αποκτήθηκαν μέσω Συστήματα Bio-απεικόνισης UVP και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Labworks 4.6 του λογισμικού. Ομοιογένεια σε πρωτεΐνη φόρτωση επιτεύχθηκε με κανονικοποίηση μετά διερεύνηση μεμβράνες με αντι-β-ακτίνης (1:1000).

Στατιστικές Μέθοδοι

Οι τιμές εκφράζονται ως μέση τιμή + SE όπως υποδεικνύεται. Ποσοτικές τιμές πυκνότητας συγκρίθηκαν με το τεστ ζεύγη του Student. Οι διαφορές με ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

PEG Αναστέλλει 4NQO που προκαλείται από του στόματος Tumor έναρξη και την εξέλιξη

Ο αρουραίος 4NQO που προκαλείται από το στόμα μοντέλο καρκινογένεσης είναι μια ρουτίνα. χρησιμοποιούμενο μοντέλο για μελέτες HNSCC χημειοπροφύλαξη που μοιράζεται έναν αριθμό χαρακτηριστικών με την ανθρώπινη καρκινογένεση HNSCC, από την άποψη της πολλαπλών σταδίων μοριακών γεγονότων και διαδοχική αλλαγές στα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά της στοματικής κοιλότητας βλεννογόνο [16], [17]. Ένα από τα άλλα πλεονεκτήματα αυτού του μοντέλου είναι η σχετικά υψηλή ειδικότητα προς το κεφάλι και το λαιμό όγκους, καθώς και ένας ελάχιστος εξουθενωτικές επίδραση στη γενική υγεία των αρουραίων. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1 (Α), στη νεκροψία (14 εβδομάδες μετά το τέλος της καρκινογόνου θεραπείας), 4NQO αγωγή αρουραίοι ανέπτυξαν πολλαπλές μεγάλους όγκους στη στοματική κοιλότητα, ως επί το πλείστον προέρχονται από τη γλώσσα και κάποια από την στοματοφαρυγγική βλεννογόνο. Η χορήγηση του PEG-8000 για 14 εβδομάδες μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας 4NQO κατέδειξε δύο σημαντικές αλλαγές: 1) PEG-8000 αγωγή αρουραίοι ανέπτυξαν σημαντικά μικρότερους όγκους (όγκος του όγκου) από ό, τι ηλικία και 4NQO ομολόγους θεραπεία αντιστοίχιση τους (~58% μείωση? P = 0,02)? 2) ο συνολικός αριθμός των όγκων (όγκοι /όγκο έδρανο αρουραίος) σε αρουραίους υπό αγωγή με PEG-8000 ήταν επίσης χαμηλότερη από την ηλικία και το 4NQO αρουραίους θεραπεία αντιστοίχιση η οποία δεν έλαβε PEG-8000 σε οποιοδήποτε σημείο (~ 25% μείωση? P = 0.05 ) (Σχήμα 1Β). Τα αποτελέσματα αυτά υποδηλώνουν ότι η PEG-8000 εφαρμογή μπορεί να μειώσει αποτελεσματικά το σχηματισμό νέων όγκων (αναστολή της έναρξης), καθώς και την αναχαίτιση της εξελίξεως των προϋπαρχόντων όγκων προς advanced HNSCC (αναστολή της εξέλιξης).

Η πρώτη ομάδα έλαβε μια καθημερινή (3-4 λεπτά) από τοπική εφαρμογή 10% PEG-8000 μέσω του στόματος ζωγραφική και η δεύτερη ομάδα sham ζωγραφισμένο (ομάδα PEG-ελέγχου). Αυτή η αγωγή συνεχίστηκε για 14 επιπλέον εβδομάδες πριν ευθανασία. Οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε ευθανασία μετά από 14 εβδομάδες και της στοματικής κοιλότητας υποβλήθηκε σε μακροσκοπικές εκτίμηση του όγκου του συνόλου των όγκων (≥0.2 cm). Όπως φαίνεται, 4NQO αγωγή αρουραίοι ανέπτυξαν πολλαπλές μεγάλους όγκους στη στοματική κοιλότητα ως επί το πλείστον προέρχονται από τη γλώσσα και λίγοι από το τοίχωμα της στοματικής κοιλότητας. PEG μείωσε το συνολικό αριθμό των όγκων (όγκοι /όγκο έδρανο αρουραίος) (p = 0.05) και την ανάπτυξη των όγκων (όγκος του όγκου) σε σύγκριση με τους ομολόγους της ίδιας ηλικίας τους (p = 0.02). Ο όγκος του όγκου (μεγέθους) μετρήθηκε σύμφωνα με το πλάτος τύπο × μήκος × ύψος × π /6.

Η

PEG Καταστέλλει Προκακοήθεις υπερπολλαπλασιασμό των επιθηλιακών

Μια ακριβής χρονική και χωρική ρύθμιση της διάχυτη κυτταρικός πολλαπλασιασμός είναι ένα σημαντικό χαρακτηριστικό του πρώιμου σταδίου HNSCC καρκινογένεση, και χρησιμεύει ως ένα σημαντικό εργαλείο για την αξιολόγηση chemopreventive αποτελεσματικότητα των παραγόντων. Σε 4NQO επεξεργασμένο μοντέλο αρουραίου HNSCC καρκινογένεσης, γενικευμένη κυτταρικό υπερπολλαπλασιασμό στο επιθήλιο της γλώσσας έχει προηγουμένως αναφερθεί [18]. Μικροσκοπική αξιολόγηση του βλεννογόνου σε 4NQO αγωγή αρουραίους έδειξαν πολλές εντοπισμένες περιοχές ήπιας έως μέτριας επιθηλιακή δυσπλασία σε μορφολογικώς φυσιολογικά γλώσσας και του βλεννογόνου του στόματος που ομαλοποιήθηκαν με PEG (Σχήμα 2Α). Για περαιτέρω μελέτη των επιπτώσεων της εφαρμογής PEG-8000 επί του πολλαπλασιασμού στην γλώσσα /στοματικού βλεννογόνου του 4NQO αγωγή αρουραίους, εξετάσαμε την ανοσοϊστοχημική έκφραση του πυρηνικού αντιγόνου Κί67, μια καλά καθορισμένη δείκτη πολλαπλασιασμού. Για το σκοπό αυτό, ένα σύνολο 1.000 επιθηλιακών κυττάρων αξιολογήθηκαν σε 6-7 πεδία σε 400 χ μεγέθυνση και όλες οι τιμές χρησιμοποιήθηκαν για τους δείκτες σήμανσης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α και Β, 4NQO-αγωγή αύξησε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό σε μορφολογικά φυσιολογικού βλεννογόνου γλώσσα όπως απεικονίζεται (αριθμός Κί67 επισημασμένου επιθηλιακά κύτταρα /ανά οπτικό πεδίο: 30 + 8 στην ομάδα 4NQO-θεραπεία έναντι 14 + 6 σε συμφωνημένα ελέγχους? p & lt? 0,01). Η τοπική εφαρμογή του PEG-8000 δραματικά κανονικοποιημένων δεικτών πολλαπλασιασμού σε 4NQO-αγωγή αρουραίους (αριθμός Κί67 επισημασμένου επιθηλιακά κύτταρα /ανά οπτικό πεδίο: 30 + 8 σε αρουραίους που έλαβαν θεραπεία με 4NQO-alone έναντι 17 + 4 σε 4NQO αρουραίους που έλαβαν αγωγή με PEG-8000? μείωσης ~43%? p & lt? 0,01). Στο επιθήλιο του βλεννογόνου του 4NQO αγωγή αρουραίους, σε αντίθεση με την κανονική πλακώδες επιθήλιο όπου πολλαπλασιασμός περιορίζεται στο βασικό διαμέρισμα, η ζώνη πολλαπλασιασμός επεκτείνεται στο υπερ-βασικό διαμέρισμα του στρωματοποιημένο πλακώδες επιθήλιο της γλώσσας. Ωστόσο, PEG-8000 αίτηση περιείχε την πολλαπλασιαστική ζώνη πίσω στο βασικό διαμέρισμα του στρωματοποιημένων πλακωδών επιθηλίων, υποδεικνύοντας ισχυρή αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της παρούσας τοπικού παράγοντα

Όπως φαίνεται (άνω πάνελ? Σχήμα 2Α)., 4NQO- αντιμετωπίζονται τμήματα του αρουραίου αποκάλυψε πολλές εντοπισμένες περιοχές ήπιας έως μέτριας επιθηλιακή δυσπλασία στα μορφολογικά φυσιολογικό βλεννογόνο εμφανίζεται που ομαλοποιήθηκε με PEG [μεγαλύτερη μεγέθυνση (63 ×? περικομμένη εικόνα) ένθετα αποδεικνύουν την παρουσία της μιτωτικής στοιχεία στην ομάδα 4 NQO αγωγή μόνη της]. Για την περαιτέρω μελέτη των συνεπειών της PEG επί της βλεννογόνου υπερ-πολλαπλασιασμού, εκτελέσαμε την ανοσοϊστοχημική ανάλυση του πυρηνικού αντιγόνου Κί67, μια καλά καθορισμένη δείκτη πολλαπλασιασμού. Ένα σύνολο 1.000 επιθηλιακών κυττάρων αξιολογήθηκαν 6-7 πεδία. Όπως φαίνεται (κάτω πάνελ? Σχήμα 2Α-Β), 4NQO-αγωγή αύξησε τον πολλαπλασιασμό σε μορφολογικά φυσιολογικού βλεννογόνου γλώσσα όπως απεικονίζεται από αύξηση του αριθμού των Κί67 επισημασμένου επιθηλιακά κύτταρα /ανά οπτικό πεδίο σε σύγκριση με αντίστοιχης ηλικίας καρκινογόνο δωρεάν ελέγχους. (P & lt? 0,01). Η τοπική εφαρμογή της PEG από την άλλη πλευρά μειώνεται δραματικά τον αριθμό των Κί67 επισημασμένου επιθηλιακά κύτταρα /ανά οπτικό πεδίο (ρ & lt? 0,01).

Η

PEG ρυθμίζει προς τα κάτω γλώσσα βλεννογόνου EGFR και Κυκλίνη D1 Έκφραση σε 4 NQO- αγωγή αρουραίοι

υπερέκφραση EGFR στις προκαρκινικές κεφαλής και του τραχήλου βλαβών συσχετίζεται με τον αυξημένο κίνδυνο εξέλιξης σε HNSCC και κακή επιβίωση [19], [20]. Διαμόρφωση της έκφρασης EGFR μπορεί να χρησιμεύσει ως βασικό στοιχείο της στρατηγικής chemopreventive. Αρκετές ομάδες, συμπεριλαμβανομένων δική μας έχουν δείξει προηγουμένως ότι το αντι-πολλαπλασιαστική και chemopreventive επιδράσεις της PEG έναντι ορθοκολικού καρκινογένεση είναι EGFR μεσολάβηση, όπως χορήγηση ΡΕΟ-gavages σε αρουραίους που έλαβαν αγωγή καρκινογόνο μείωσε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό στο κολονικό βλεννογόνο μέσω μειορρύθμιση της έκφρασης EGFR [13]. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε αν ένας παρόμοιος μηχανισμός είχε εμπλακεί στις χημειοπροληπτικές δράσεις της τοπικής PEG-8000 εναντίον HNSCC. Τα τμήματα της γλώσσας σταθεροποιήθηκαν σε φορμαλίνη και εξετάζεται από ανοσοχρώση να αξιολογηθούν οι αλλαγές στα επίπεδα έκφρασης του EGFR. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α και Β, η τοπική εφαρμογή του PEG-8000 μείωσε σημαντικά την ένταση, καθώς και τον αριθμό των περιοχών που υπερεκφράζουν EGFR σε 4NQO αρουραίους που έλαβαν όπου η έκφραση βασικής γραμμής EGFR ήταν πολύ υψηλότερη από τη γλώσσα /στοματικού βλεννογόνου υγιών αρουραίων ελέγχου. Αυτό εμπλέκει ρύθμιση προς τα κάτω του EGFR ως ένας από τους πιθανούς μηχανισμούς PEG-προκαλούμενη χημειοπρόληψη του HNSCC. Δείξαμε επίσης ότι PEG μείωσε σημαντικά την έκφραση της κυκλίνης D1, ένα καθοδικός τελεστής του EGFR που υπερεκφράζεται σε HNSCC [21] και εμπλέκονται στην πρόκληση αντίστασης σε θεραπευτικά φάρμακα όπως η σισπλατίνη [22] και gefitinib [23].

Όπως φαίνεται (αριστερό πάνελ – Σχήμα 3Α και 3Β), η έκφραση EGFR γραμμή βάσης στο βλεννογόνο γλώσσα του 4NQO-αρουραίους ήταν υψηλότερη από εκείνη των αρουραίων ελέγχου (ρ & lt? 0,00001). Η τοπική εφαρμογή της PEG, ωστόσο, προκάλεσε σημαντική μείωση της έκφρασης του EGFR (p & lt? 0.005). Επιπλέον, η τοπική εφαρμογή PEG σε αρουραίους 4-NQO προκάλεσε παρόμοια αποτελέσματα στην έκφραση της κυκλίνης D1, ένα από τα κατάντη τελεστών του EGFR. (Δεξί πάνελ – Σχήμα 3Α και 3Β)

Η

PEG Αναστέλλει Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού και προκαλεί κυτταρικού κύκλου σύλληψης σε SCC-25 κύτταρα

για να κατανοήσουμε το μηχανισμό δράσης PEG επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε HNSCC? χρησιμοποιήσαμε ένα

in vitro

μοντέλο κυτταρικής καλλιέργειας (πλακωδών κυττάρων καρκινώματος γραμμή? SCC-25) για να εξετάσει την επίδραση της PEG επί του πολλαπλασιασμού και της διανομής του κυτταρικού κύκλου. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, η δοκιμασία πολλαπλασιασμού WST-1 αποκάλυψε μια εξαρτώμενη από τη δόση μείωση στην κυτταρική ανάπτυξη SCC-25 όταν υποβάλλεται σε επεξεργασία με PEG για 24 ώρες, με μέγιστη μείωση 43% που λαμβάνεται σε 10% PEG-8000. Ως εκ τούτου, για τα επόμενα πειράματα 24 ώρες θεραπείες του 10% PEG-8000 χρησιμοποιήθηκαν. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ανοσοκηλίδος PEG προκάλεσε επίσης ~ 50% μείωση στην δείκτη πολλαπλασιασμού, PCNA (Σχήμα 4Β). διακοπή του κυτταρικού κύκλου είναι ένας από τους σημαντικούς μηχανισμούς των χημειοαποτρεπτικών παραγόντων. Για να διερευνηθεί η επίδραση της PEG-8000 για την κυτταρική κατανομή εκτελέσαμε ανάλυση κυτταρομετρίας ροής ΡΙ σημασμένων κυττάρων. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι 24 ώρες θεραπεία του SCC-25 κυττάρων με 10% PEG-8000 είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντική μείωση σε κύτταρα S-φάση (πολλαπλασιαστική) (62% του ελέγχου του οχήματος? ρ & lt? 0.002) και σημαντική αύξηση σε G2-M κύτταρα φάσης (138% του ελέγχου του οχήματος? ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 4C). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν σαφώς ότι η θεραπεία με PEG προκαλεί διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε υπερπλαστικά κύτταρα, και ως εκ τούτου θα μπορούσε να βοηθήσει στην αποκατάσταση της κυτταρικής ομοιόστασης τροποποιώντας τις μεταβάλλεται ρυθμούς ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων και του θανάτου.

Όπως φαίνεται (Εικόνα 4Α), υπήρχε μια εξαρτώμενη από τη δόση μείωση στην ανάπτυξη των κυττάρων, με μέγιστη μείωση 43% που λαμβάνεται σε 10% PEG-8000. Το Σχήμα 4Β δείχνει μία μείωση ~ 50% για την έκφραση του PCNA δείκτη πολλαπλασιασμού με PEG. Η Εικόνα 4C δείχνει την επίδραση της PEG στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου. Τα 24 h κύτταρα επεξεργασμένα PEG βάφτηκαν με ιωδιούχο προπίδιο και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. PEG μπλοκάρει τα κύτταρα στην φάση S (κατά 62%) και αντιστοίχως αυξάνει τα κύτταρα σε φάση G2-M (κατά 38%).

Η

Θεραπεία της SCC-25 κύτταρα με PEG Μειώνει EGFR και Κυκλίνη D1 και ρυθμίζει την έκφραση του κυτταρικού κύκλου ρυθμιστικής πρωτεΐνης p21

Cip1 /WAF1

από μας

in vivo

πειράματα με αρουραίους 4NQO, EGFR και κυκλίνης D1 ήταν οι δύο σημαντικοί στόχοι μειωτικά από PEG? θελήσαμε να μελετήσουμε αν παρατηρήθηκαν παρόμοια αποτελέσματα σε HNSCC κυτταρικές σειρές. Πραγματοποιήσαμε πρώτα πειράματα ανοσοαποτυπώματος να εκτιμηθεί η έκφραση του EGFR και κυκλίνη D1 κατά 24 h θεραπεία της PEG-8000 σε SCC25 κύτταρα. Σύμφωνη με το

in vivo

πειράματα βρήκαμε ότι η θεραπεία των κυττάρων SCC25 με PEG-8000 προκάλεσε EGFR σημαντική μείωση (-45% σε σχέση με τον έλεγχο του οχήματος? P & lt? 002) και κυκλίνης D1 (-57% σε σχέση με όχημα ελέγχου? ρ & lt? 0.005) έκφρασης (Σχήμα 5 Α). Στην PEG-προκαλούμενη χημειοπρόληψη του καρκίνου του παχέος εντέρου, έχουμε δείξει προηγουμένως ότι η διακοπή του κυτταρικού κύκλου που επάγεται από PEG-8000 εμπλέκει έναν EGFR μεσολάβηση ρύθμιση προς τα πάνω ενός αναστολέα κινάσης που εξαρτάται από κυκλίνη, ρ21

Cip1 /WAF1 [24]. Σε μια παρόμοια πειραματικό πρωτόκολλο, βρήκαμε ότι η PEG-8000 πράγματι προκάλεσε αύξηση ~54% σε έκφραση ρ21 (ρ & lt? 0.001) σε SCC25 κύτταρα (Σχήμα 5Β). Περαιτέρω μελέτες βρίσκονται σε εξέλιξη για το χαρακτηρισμό των ανάντη οδούς που εμπλέκονται στην διαμόρφωση αυτών των ρυθμιστών κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα SCC25 κατά την κατεργασία PEG.

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, σύμφωνο με τις

in vivo πειράματα

Peg προκαλείται μια σημαντική μείωση του EGFR (-45% σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος? ρ & lt? 002) και κυκλίνης D1 (-57% σε σχέση με τον έλεγχο του οχήματος? ρ & lt? 0.005) έκφρασης. Σε μια παρόμοια πειραματικό πρωτόκολλο (Σχήμα 5Β), PEG-8000 προκάλεσε αύξηση ~54% σε έκφραση ρ21 (ρ & lt? 0.001).

Η

Συζήτηση

εδώ καταδεικνύουν, για πρώτη φορά, ότι η τοπική εφαρμογή του PEG-8000 που προσφέρεται αποτελεσματική προστασία έναντι της ανάπτυξης καρκίνου του στόματος. τα δεδομένα της κυτταρικής καλλιέργειας μας δείχνει αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις της PEG σε SCC-25 κύτταρα συμπληρώνεται από τη μειωμένη επιβάρυνση του όγκου στο καλά επικυρωμένο μοντέλο HNSCC 4-NQO-αρουραίου (όταν δίνεται στην μετα-έναρξη φάση). Από μια μηχανιστική προοπτική, έχουμε αποδείξει την προς τα κάτω ρύθμιση του EGFR με ταυτόχρονη αναστολή του άξονα κυκλίνης D1-πολλαπλασιασμού.

HNSCC θα πρέπει να είναι κατ ‘εξοχήν chemopreventable επειδή το ποσοστό κινδύνου ομάδες είναι εύκολα αναγνωρίσιμα τόσο για την πρωτογενή πρόληψη (μάσημα του καπνού, αλκοόλ, HPV κλπ) και δευτερογενή πρόληψη. Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι οι ασθενείς HNSCC με ένα μόνο πρωτοπαθή όγκο έχουν σημαντικό κίνδυνο εμφάνισης δεύτερου πρωτογενών όγκων κατά τις επόμενες δεκαετίες. Επίσης, οι ασθενείς με από του στόματος λευκοπλακία (επιπολασμός του -0,5%) που γεννούν έναν κακοήθη ποσοστό μετατροπής των περίπου 5% ετησίως μπορούν να επωφεληθούν από αυτή τη χημειοπροφύλαξη [25]. Έτσι, PEG για την πρόληψη HNSCC αντιπροσωπεύει μια δυνητικά κλινικά βιώσιμη στρατηγική.

Στο πλαίσιο αυτό, πολυάριθμες χημειοπροληπτική παράγοντες, όπως NSAIDS [26], η βιταμίνη Ε [27] και το ρετινοϊκό οξύ [28] έχουν δοκιμαστεί κατά HNSCC αλλά απέτυχαν είτε λόγω έλλειψης αποτελεσματικότητας ή τοξικότητας [29]. Για παράδειγμα, μια πρόσφατη τυχαιοποιημένη δοκιμή φάσης II, celecoxib σε 100 ή 200 mg δύο φορές ημερησίως βρέθηκε να είναι αναποτελεσματικές στον έλεγχο του στόματος προκαρκινικές αλλοιώσεις και είχε σημαντική συστηματική τοξικότητα όπως καρδιαγγειακές παρενέργειες [30]. Ομοίως, τα ρετινοειδή βρέθηκαν να προσφέρουν μόνο μέτρια προστασία έναντι της ανάπτυξης του SCC σε ασθενείς λευκοπλακία, και με ένα προφίλ απαράδεκτη παρενέργεια [31]. Ο μόνος άλλος παράγοντας που έχει δείξει ενθαρρυντικά αποτελέσματα μέχρι σήμερα υπήρξε εκχύλισμα πράσινου τσαγιού (GTE), η οποία, ενώ δεν μπορούν να επιτύχουν στατιστική σημαντικότητα σε ποσοστό κλινικής ανταπόκρισης από το στόμα προκαρκινικές αλλοιώσεις, ακόμα αύξησε τη μέση διάρκεια της εξέλιξης (27,5 έως 46,4 μήνες ) [32].

Η έλλειψη συναρπαστικό αποτελέσματα με το πρότυπο παράγοντες προφύλαξης έχει οδηγήσει σε ενδιαφέρον χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση μοριακά ορίζεται υποψήφιος παράγοντας [33]. Υπήρξαν δύο πρόσφατες ολοκληρωμένες μελέτες αξιολόγησης της μετάλλαξης τοπίο της HNSCC [34], [35]. Αυτές οι μελέτες αποκάλυψαν έναν αριθμό γονιδίων τα οποία συνήθως μεταβάλλονται σε HNSCC. Ωστόσο, οι περισσότερες από τις υποθετικές πρώιμα γεγονότα (π.χ., ρ53 και Notch 1) φαίνεται να είναι ογκοκατασταλτικά γονίδια τα οποία γενικά δεν είναι «druggable» (αναστολή περισσότερο πιθανό να είναι επωφελής για πρωτο-ογκογονίδια). Ως εκ τούτου, για την πρόληψη του καρκίνου, όχι μόνο κάνουν υποψήφιων στόχων πρέπει να είναι πρωτο-ογκογονίδια αλλά αυτές οι βλάβες πρέπει να είναι διάχυτα παρούσα στο στοματικό βλεννογόνο των ασθενών σε κίνδυνο, ιδιαίτερα σε στοματικές αλλοιώσεις προκαρκινικές (OPLs? Που περιλαμβάνει κυρίως από λευκοπλακία). EGFR έχει δειχθεί ότι είναι ένας στόχος στη θεραπεία της HNSCC τόσο με μονοκλωνικά αντισώματα και αναστολέων μικρών μορίων ως βασικά συστατικά της θεραπευτικής οπλοστάσιο. Εκτός αυτού, τα δεδομένα μας δείχνει σαφώς μια βαθιά προς τα πάνω ρύθμιση σε EGFR στην ιστολογικά φυσιολογικό βλεννογόνο του στόματος /γλώσσας στις 4NQO-αγωγή αρουραίους. Η σημασία του EGFR στις αρχές καρκινογένεση τονίζεται από μία πρόσφατη κλινική δοκιμή, η οποία κατέδειξε ότι στις περισσότερες των OPLs, EGFR ρύθμιση προς τα άνω (τόσο από τον αριθμό αντιγράφων και την έκφραση) συσχετίζεται με υψηλό κίνδυνο εξέλιξης σε ειλικρινή κακοήθειας [36], [37]. Από chemopreventive προοπτική EGFR μπορεί να είναι ένας σημαντικός στόχος, όπως αποκαλύπτεται από την μηχανιστική αξιολόγηση των εκχύλισμα πράσινου τσαγιού για χημειοπροφύλαξη του καρκίνου.

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η PEG μπορεί να προκαλέσει μια δραματική ρύθμιση προς τα κάτω του EGFR, τόσο σε κυτταρική καλλιέργεια και στην προκαρκινικές στοματικού βλεννογόνου, συνεπής με την εκτεταμένη μας δεδομένα της PEG σε ορθοκολικό καρκινογένεση. Πράγματι, η PEG είναι ένα από τα πιο ισχυρά χημειοπροληπτικός παράγοντας κατά του καρκίνου του παχέος εντέρου [8], [38]. Η αποτελεσματικότητα της PEG σε καρκίνο του παχέος εντέρου έχει υποστηριχθεί από προκαταρκτικά επιδημιολογικά δεδομένα [39]. Από μηχανιστική άποψη, το εργαστήριο μας απέδειξε προηγουμένως ότι EGFR ήταν κατιούσα ρύθμιση με PEG σε κυτταρική καλλιέργεια και σε καρκινογόνο κόλον (αζοξυμεθάνιο) κατεργασμένα μοντέλο αρουραίου, [13]. Αυτό το αποτέλεσμα φαίνεται να είναι μέσω εσωτερίκευσης μεμβράνη με επακόλουθη αποδόμηση proteosomal. Οι μεταγενέστεροι συνέπειες φαίνεται να ακολουθούν το παράδειγμα του EGFR → ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ → E-καδχερίνη → β-κατενίνης → Tcf μεταγραφική ρύθμιση [13]. Είναι σημαντικό ότι, το ολοκλήρωμα φύση του EGFR δείχθηκε από την απόδειξη ότι EGFR knockdown (μέσω shRNA) αμβλύνθηκε την αποτελεσματικότητα χημειοπροληπτική της PEG σε αυτό το μοντέλο καρκίνου του παχέος εντέρου. Μελέτες βρίσκονται σε εξέλιξη για να προσδιοριστεί η ακριβής μηχανισμός μέσω του οποίου PEG εσωτερικεύει EGFR. Επιπλέον, σύμφωνα με τα τρέχοντα δεδομένα μας σε HNSCC, δείξαμε προηγουμένως, σε αμφότερες κυτταρική καλλιέργεια και ζωικά μοντέλα του καρκίνου του παχέος εντέρου, ότι η PEG-προκαλούμενη μειορύθμιση EGFR κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό δυνητικά μέσω κυκλίνης D1. Επιπλέον, η G1 → S φάση διακοπή του κυτταρικού κύκλου που παρατηρήθηκε μπορεί να προκαλείται, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω της επαγωγής της ρ21

Cip1 /WAF1, μια κυκλίνη εξαρτώμενη από την κινάση αναστολέα, που μπορεί να παρέχουν ένα άλλο τροπικότητα καταστολής πολλαπλασιασμού [24].