Abstract

CLPTM1L πιστεύεται ότι σχετίζεται με τον καρκίνο του πνεύμονα. Ωστόσο, υπάρχει μικρή πληροφορίες σχετικά με την έκφραση και τη λειτουργία του. Εδώ χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία, βρήκαμε ότι η έκφραση CLPTM1L ήταν σημαντικά αυξημένη σε ιστούς καρκίνου του πνεύμονα σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς, ειδικά σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. CLPTM1L έκφραση δεν βρέθηκε να σχετίζεται με τα στάδια, κατάσταση καπνίσματος, λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες, ή διήθηση των Τ λεμφοκυττάρων, αλλά με το στάδιο διαφοροποίησης. Βρήκαμε CLPTM1L να εμπλουτιστεί στο μιτοχονδριακό σύγκριση με το πλάσμα εκχυλίσματα πρωτεΐνης μεμβράνης. CLPTM1L-EGFP διαμόλυνση έδειξε ότι το μόριο προϊόν εκφράστηκε σε κυτταρόπλασμα και έδειξε την μιτοχονδριακή εντοπισμός χρωματίστηκαν με μιτοχονδριακή Mitotracker δείκτη. CLPTM1L μεταφέρθηκε πνεύμονα κυτταρική σειρά καρκίνου του 95-D δεν έδειξαν αναστολή της ανάπτυξης ή κυτταρικής απόπτωσης, αλλά το έκανε επίδειξη ανέστειλε ευαισθησία σε cis-διαμινοδιχλωρολευκόχρυσος (II) (σισπλατίνη, CDDP). Εξόντωση CLPTM1L με RNAi δεν παρεμβαίνει με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αλλά το έκανε αύξηση της ευαισθησίας των κυττάρων προς CDDP και ενεργοποίηση της κασπάσης-9 και κασπάσης-3/7. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν CLPTM1L είναι μια πρωτεΐνη μιτοχόνδρια και ότι μπορεί να συνδέεται με αντι-αποπτωτικό μηχανισμό που επηρεάζει φαρμακευτικής αντίστασης με τη σειρά

Παράθεση:. Ni Ζ, Tao Κ, Chen G, Chen Q, Tang J, Luo Χ, et al. (2012) CLPTM1L υπερεκφράζεται στον καρκίνο του πνεύμονα και των συνδεδεμένων με την απόπτωση. PLoS ONE 7 (12): e52598. doi: 10.1371 /journal.pone.0052598

Επιμέλεια: Klaus Roemer, του Πανεπιστημίου του Saarland Ιατρική Σχολή, Γερμανία

Ελήφθη: 5 Σεπ, 2012? Αποδεκτές: 16 Νοεμβρίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 26, Δεκ 2012

Copyright: © 2012 Ni et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από την Επιστήμη και την Τεχνολογία Επιτροπή της Σαγκάης (No.09JC1412900, No.10411969100), της Εκπαιδευτικής Επιτροπής της Σαγκάης (No.10YZ54), η Επιτροπή Σαγκάη Πουτούο Περιοχή Επιστήμης και Τεχνολογίας (2010), και το Πρόγραμμα Καινοτομίας της Σαγκάης Δημοτική Επιτροπή Παιδείας (13ZZ096). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Palate διαμεμβρανική 1-όπως (CLPTM1L), που ονομάζεται επίσης

γ

isplatin

r

esistance

r

συνεπαρμένος γονίδιο 9 (CRR9), εντοπίστηκε μεταξύ τα γονίδια που εμπλέκονται στην αντοχή στην σισπλατίνη αντικαρκινικών φαρμάκων στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [1]. CLPTM1L βρίσκεται στο 5p15.33 θέση κοντά τελομεράσης ανάστροφης μεταγραφάσης [τ]. Πρόσφατες γενετικές μελέτες αποκάλυψαν ότι αυτό τόπος είναι μια περιοχή ευαισθησίας για πνεύμονα και αρκετές άλλες μορφές καρκίνου [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [ ,,,0],10], [11], [12], [13], [14], [15], [16]. Φαίνεται πιθανό φυσικό ότι γενετικές παραλλαγές θα προκαλούσε ανώμαλη έκφραση στο επίπεδο της πρωτεΐνης και ότι αυτό μπορεί να επηρεάσει την λειτουργία του γονιδίου στον καρκίνο του πνεύμονα. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει CLPTM1L να εκφράζεται υψηλά σε νεφρική κυτταρική γραμμή καρκινώματος του λάρυγγα και του καρκινώματος των πλακωδών κυττάρων [17], [18].

Το γεγονός ότι CLPTM1L είναι τόσο εξαιρετικά διατηρημένη δείχνει ότι είναι πιθανώς σημαντικά σε κάποιον βασικό λειτουργία. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά σχετικά με το τι πραγματικά κάνουμε CLPTM1L και το προϊόν ή τα προϊόντα της. Το μόριο έχει, ωστόσο, έχει βρεθεί ότι είναι ένας παράγοντας της ανθεκτικότητας στα φάρμακα [1]. Η έκφραση του CLPTM1L βρέθηκε να ρυθμίζεται προς τα πάνω σε όλες τις κυτταρικές σειρές σισπλατίνη ανθεκτικές εξετάστηκαν. Η υπερέκφραση του CLPTM1L σε σισπλατίνη ευαίσθητη κυτταρική γραμμή βρέθηκε να προκαλεί απόπτωση, και CLPTM1L υπερ-έκφραση βρέθηκε να έχει καμία επίδραση στην cisplatin ανθεκτικά κύτταρα.

πρωτοπαθή καρκίνο του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο στις περισσότερες βιομηχανικές χώρες [19]. Η ισχυρή γενετική συσχέτιση μεταξύ CLPTM1L και του καρκίνου των πνευμόνων μας ενέπνευσε να αντιμετωπίσει την έκφραση και τη λειτουργία αυτού του γονιδίου με λεπτομέρεια. Στην παρούσα μελέτη, περιγράφουμε την έκταση της CLPTM1L ανοσοϊστοχημικής έκφρασης σε δείγματα όγκων του καρκίνου του πνεύμονα, και αναλύουμε τη σχέση ανάμεσα στην έκφραση τους και κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές. Μπορούμε επίσης να προβεί σε δοκιμή για να καθοριστεί η πιθανή λειτουργία αυτού του γονιδίου.

Υλικά και Μέθοδοι

Χαρακτηριστικά ασθενούς

Πρωτοβάθμια δείγματα όγκου λήφθηκαν χειρουργικά από 151 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα (110 άνδρες, ηλικίας 39-81, διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση 67 χρόνια? 41 γυναίκες, ηλικίας 36 έως 85, η διάμεση ηλικία κατά τη διάγνωση 64 χρόνια), οι οποίοι δεν είχαν υποστεί καμία προεγχειρητική θεραπεία. Η χειρουργική επέμβαση πραγματοποιήθηκε στο Shanghai Changning Κεντρικό Νοσοκομείο, Σαγκάη της Κίνας, μεταξύ του 2003 και του 2010. Οι όγκοι αυτοί περιλαμβάνονται 55 περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος, 63 περιπτώσεις ακανθοκυτταρικού καρκινώματος, 13 περιπτώσεις πλακώδους-αδενοκαρκίνωμα, 5 περιπτώσεις καρκίνου των πνευμόνων μικρών-κυττάρων και 15 περιπτώσεις καρκίνου του πνεύμονα μεγάλου-κυττάρου. Οι ασθενείς οργανώθηκαν σύμφωνα με τις χειρουργικές και παθολογικά ευρήματα με βάση τις οδηγίες που περιγράφονται στο

μεικτής επιτροπής της Αμερικής για τον Καρκίνο Σταδιοποίηση Εγχειρίδιο

[20]. Είκοσι δύο ασθενείς ήταν αποφασισμένοι να είναι σε στάδιο Ια, 51 στο στάδιο Ib, 6 στο στάδιο ΙΙα, 16 στο στάδιο ΙΙβ και 56 στο στάδιο IIIa. Για όλους αυτούς τους ασθενείς, τα αρχεία της χειρουργικής επέμβασης, ο ασθενής σε ιατρικά αρχεία, το στήθος ταινίες ακτινογραφία, σε ολόκληρο το σώμα αξονική τομογραφία (CT) ταινίες και ταινίες σάρωσης των οστών εξετάστηκαν. Ελήφθησαν δείγματα κατά ζεύγη φυσιολογικούς ιστούς για να ταιριάζει με τα δείγματα. Η μελέτη εγκρίθηκε από την ηθική επιτροπή Πουτούο Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο της Σαγκάης Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής και όλοι οι ασθενείς παρέχεται έγγραφη συγκατάθεση.

Γραμμή τηλέφωνα και Συντήρηση

καρκινικές κυτταρικές σειρές ανθρώπινου πνεύμονα 95-D αγοράστηκε από το Ινστιτούτο Κυτταρικής Βιολογίας (Shanghai, Κίνα) και διατηρήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% FBS.

Έκφραση CLPTM1L Ανάλυση Χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR

Ολικό RNA απομονώθηκε από καλλιεργημένα κύτταρα χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Σαγκάη, Κίνα), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του manufactuery του. Πρώτο σκέλος cDNA που παρασκευάστηκε με χρήση τυχαίων εξαμερών αστάρι σύμφωνα με τις οδηγίες που περιλαμβάνονται με το ™ πρώτου κλώνου κιτ σύνθεσης SuperScriptIII (Invitrogen). Ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR χρησιμοποιώντας ένα Παγκόσμιος Διδάσκαλος Mixer (Roche Applied Science, Σαγκάη, Κίνα) σε 7300 Real-time PCR System (Applied Biosystems, Σαγκάη, Κίνα). Οι εκκινητές και ανιχνευτές που χρησιμοποιήθηκαν ήταν ως ακολούθως: Επίθεση Ο 5′- TGCATTACCTGCCCATCCT -3 ‘? Αντίστροφη, 5’-CGCCCCAGTGAGACCTTG -3 ‘? Probe, 5’-φώνων TCATCGACCAGCTCAGCAACCGC -tamra-3 ‘. GAPDH χρησίμευσε ως έλεγχος, F: 5’- CCACTCCTCCACCTTTGAC -3 ‘, R: 5′-ACCCTGTTGCTGTAGCCA -3′, Probe: 5’-φώνων TTGCCCTCAACGACCACTTTGTC -tamra-3 ‘. Κάθε δοκιμασία διεξήχθη εις τριπλούν. Οι PCR συνθήκες που χρησιμοποιούνται σε όλες τις αντιδράσεις ήταν ως ακολούθως: 10 λεπτά στους 95 ° C, που ακολουθείται από 40 κύκλους δύο σταδίων (95 ° C για 15 s και 60 ° C για 1 λεπτό). Τα σχετικά επίπεδα έκφρασης του γονιδίου CLPTM1L ομαλοποιήθηκαν ενάντια GAPDH και αναλύθηκαν από το 2

-ΔΔCt μέθοδο [ΔΔCt = (Ct

CLPTM1L – Ct

GAPDH) του δείγματος – (Ct

CLPTM1L – Ct

GAPDH) ελέγχου].

Κλωνοποίηση και προσδιορισμός αλληλουχίας του Ανθρώπου CLPTM1L

Ολικό RNA απομονώθηκε από κύτταρα 95-D χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen) και χρησιμοποιήθηκε ως μήτρα για σύνθεση cDNA πρώτου κλώνου χρησιμοποιώντας ένα ™ πρώτου κλώνου κιτ σύνθεσης RT-PCR SuperScriptIII (Invitrogen). Η CLPTM1L ανοικτό πλαίσιο (1617 bp, GenBank αριθμός πρόσβασης NM_030782) ενισχύθηκε με PCR από cDNA που παράγεται με αντίστροφη μεταγραφή του mRNA. Οι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν για να ενισχυθεί το γονίδιο CLPTM1L ήταν ως ακολούθως: F: 5′- GGAAGATCTACCATGTGGAGCGGCCGCAG -3 ‘? R: 5’-AGACGTCGACGTCCGTGTGGGGCGCC -3 ‘. Το ενισχυμένο προϊόν καθαρίστηκε και κλωνοποιήθηκε σε ένα pMD18-T Απλό διάνυσμα (Takara, Σαγκάη, Κίνα). Η σύνθεση του πλασμιδίου επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση.

Κατασκευή πλασμιδίου και Gene Μορφομετατροπή

Η περιοχή CDS CLPTM1L εκχυλίστηκε από pMD18-Τ- CLPTM1L πλασμίδια με πέψη περιορισμού και κλωνοποιήθηκε σε ένα pEGFP-N3 διάνυσμα. Το κατασκευασμένο πλασμίδιο ονομάστηκε pEGFP-N3-CLPTM1L και χρησιμοποιήθηκε καθορίζουν την κυτταρική εντόπιση του CLPTM1L. Εκκινητές (F: 5′- GGAAGATCTACCATGTGGAGCGGCCGCAG -3’and R: 5′-CCGCTCGAGTCAGTCCGTGTGGGGCGCC-3 ‘) χρησιμοποιήθηκαν για να ενισχύσουν την περιοχή CDS CLPTM1L για την κατασκευή του pcDNA3.1 (+) -CLPTM1L φορέα. Το ενισχυμένο προϊόν καθαρίστηκε και υποβλήθηκε σε πέψη χρησιμοποιώντας Bgl II και Xho Ι Ακολούθως κλωνοποιήθηκε σε pcDNA3.1 (+) φορέα σε πέψη με BamH Ι και Xho Ι Η κατασκευασμένη πλασμίδιο ονομάστηκε pcDNA3.1 (+) -CLPTM1L και χρησιμοποιούνται για CLPTM1L υπερέκφραση. 3 × 10

5 κύτταρα 95-D στη συνέχεια μεταμολύνθηκαν πρόσκαιρα είτε με pEGFP-N3-CLPTM1L ή pEGFP-N3 χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Σαγκάη, Κίνα) για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια συλλέχθηκαν για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ή σισπλατίνη ανάλυση ευαισθησίας.

μικροσκόπιο φθορισμού

Για να προσδιοριστεί η υποκυτταρική εντόπιση του CLPTM1L-EGFP, τα κύτταρα πρώτα παροδικά επιμολυσμένα με pEGFP-N3-CLPTM1L χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη 2000. Σαράντα οκτώ ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα επωάστηκαν με Mitotracker χρωστική (Invitrogen) επί 30 λεπτά υπό συνθήκες ανάπτυξης. Μετά την επώαση, τα κύτταρα παρατηρήθηκαν με τη χρήση μικροσκοπίου φθορισμού.

Ανοσοϊστοχημεία

χειρουργικά παρασκευά- ιστού μονιμοποιήθηκαν σε φορμαλίνη, εγκλείστηκαν σε παραφίνη, κόπηκαν σε 4 μm διαδοχικές τομές, και στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε υάλινες αντικειμενοφόρες πλάκες. Το αντιγόνο ανάκτηση εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας διάλυμα κιτρικού οξέος (0.01 mmol /L, ρΗ 6. 0) .Μετά ανάκτηση του αντιγόνου, τα πλακίδια πλύθηκαν τρεις φορές με PBS και επωάζονται σε 10% φυσιολογικό ορό κατσίκας για να εμποδίσει μη ειδική χρώση υποβάθρου. Οι τομές στη συνέχεια όλη τη νύκτα επωάστηκαν με αντι-ανθρώπινα αντισώματα CLPTM1L κουνελιού (Sigma, Shanghai, China) στους 4 ° C. Οι τομές πλύθηκαν τρεις φορές με PBS και επωάστηκαν με υπεροξειδάση (HRP) IgG -αντι-κουνελιού (Bio Maixin, Fuzhou, Κίνα) για 30 λεπτά. Αυτά στη συνέχεια πλύθηκαν τρεις φορές με PBS. Τα τμήματα οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας διαμινοβενζιδίνη διάλυμα (DAB). Πλακίδια αξιολογήθηκαν ταυτόχρονα από δύο παθολόγους, χρησιμοποιώντας ένα δικέφαλο οπτικό μικροσκόπιο. Οι παθολόγους δεν είχαν ενημερωθεί από κλινικό ιστορικό του κάθε ασθενούς. CLPTM1L έκφραση ήταν ημι-ποσοτικά άνοιξε με βάση την ένταση της χρώσης και σχετικός αριθμός των κυττάρων χρωματίζονται. Μη προετοιμασμένο ιστών βαθμολογήθηκε ως 0, αμυδρή χρώση, μέτρια ή έντονη χρώση στο & lt? 25% των κυττάρων βαθμολογήθηκε ως 1, μέτρια χρώση ή ισχυρή χρώση στο 25-50% των κυττάρων βαθμολογήθηκε με 2 και ισχυρή χρώση στο & gt? 50% κύτταρα βαθμολογήθηκε ως 3. οι μετρήσεις κυττάρων πραγματοποιήθηκαν στους × 400 σε τουλάχιστον πέντε πεδία σε τυχαία επιλεγμένα καρκινικές περιοχές.

Για να μελετηθεί η σχέση μεταξύ CLPTM1L και το επίπεδο των TIL διείσδυση, έχουμε επιλέξει το πεδίο με το μεγαλύτερο ποσό της έκφρασης CLPTM1L, και μετρήθηκε ο αριθμός των CD45

+ κύτταρα ανά 1.000 σύνολο πυρήνων.

η ανοσοκυτταροχημεία

η έκφραση της πρωτεΐνης CLPTM1L προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ανοσοκυτταροχημεία. Η ημέρα πριν από τη δοκιμασία, συνολικά 1 × 10

5 κύτταρα σπάρθηκαν σε Millicell EZ διαφανειών (Millipore, Σαγκάη, Κίνα). Μετά από 24 ώρες επώασης, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν σε αντικειμενοφόρες πλάκες χρησιμοποιώντας 4% παραφορμαλδεϋδη. Τα κύτταρα διαπερατά 3 φορές για 5 λεπτά με 0.1% Triton Χ-100 σε PBS και αποκλείστηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού (10% φυσιολογικό ορό κατσίκας, 0,1% Triton Χ-100) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά τον αποκλεισμό, τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS και επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με αντι-ανθρώπινα αντισώματα CLPTM1L κουνελιού (Sigma, Σαγκάη, Κίνα). Την επόμενη ημέρα, τα κύτταρα πλύθηκαν 3 φορές με PBS και επωάστηκαν με υπεροξειδάση (HRP) IgG -αντι-κουνελιού επί 30 λεπτά. Αυτά στη συνέχεια πλύθηκαν τρεις φορές με PBS. Οι τομές έγιναν ορατά χρησιμοποιώντας διάλυμα διαμινοβενζιδίνη.

μιτοχονδριακού Καθαρισμός και Ανάλυση Western Bolt

Κατ ‘αρχάς, 2 × 10

7 κυττάρων 95-D συλλέχθηκαν και μιτοχονδριακή και κυτοσολικά κλάσματα απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας μιτοχονδριακή κλασματοποίηση Kit (Activemotif, Σαγκάη, Κίνα). Το μιτοχονδριακό και κυτοσολικά κλάσματα διαχωρίστηκαν σε 10% SDS-PAGE, και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μία μεμβράνη PVDF. Η μεμβράνη PVDF μπλοκαρίστηκε με 5% BSA και πλένεται δύο φορές με TBST. Η μεμβράνη στη συνέχεια επωάστηκε με αντισώματα CLPTM1L (Abgent, Σαγκάη, Κίνα) όλη τη νύκτα στους 4 ° C και πλύθηκαν τρεις φορές με TBST και ακολούθησε επώαση με αντι-κουνελιού υπεροξειδάσης κρένου IgG δευτερεύον αντίσωμα (Cellsignal, Σαγκάη, Κίνα) για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Τέλος, ανοσοαντιδραστικές ζώνες ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα αντιδραστήριο ECL (Millipore).

Κατασκευή CLPTM1L RNAi Lentivirus

αλληλουχίες siRNA κατά του ανθρώπινου γονιδίου CLPTM1L (GenBank αριθμός πρόσβασης NM_030782) σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν με Genechem (Genechem, Σαγκάη, Κίνα). Μεταξύ τέσσερις κασέτες siRNAs έκφρασης υποψηφίου, βρήκαμε ακολουθία με νόημα siRNA (5-CAGTTTCTGGAAGAAGAAGAA-3) για να έχουμε το καλύτερο αποτέλεσμα παρεμβαίνει σε 95-D-μολυσμένο κυτταρικό σύστημα μας. εισήχθη εντός pGCSIL-GFP φορέα λεντοϊού Το siRNA. Ένα siRNA ελέγχου (5-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Λεντιϊοί κωδικοποιημένα με siRNA κατά CLPTM1L και ο έλεγχος παρήχθησαν με συνεπιμόλυνση των κυττάρων 293Τ χρησιμοποιώντας λιποφεκταμίνη 2000 (Invitrogen) σύμφωνα με πρότυπα πρωτόκολλα. 5 × 10

4 κύτταρα 95-D μολύνθηκαν είτε με CLPTM1L siRNA lentivirus ή αρνητικό φορέα ελέγχου siRNA σε ΜΟΙ περίπου 100 για 72 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια άλλαξαν σε πλήρες μέσο. Μετά από 72 ώρες καλλιέργειας, τα κύτταρα συλλέχθηκαν για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την ευαισθησία σισπλατίνη ή κασπάσης-3/7 και κασπάσης-9 ανάλυση.

Cisplatin Ανάλυση Ευαισθησίας και Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού Ανάλυση

Κατ ‘αρχάς, 1 × 10

4 κύτταρα ανά φρεατίων σπάρθηκαν σε 96 φρεατίων πλάκα. Μετά από 24 ώρες επώασης, 25 μΜ, 50 μΜ και 75 μΜ σισπλατίνη (Sigma) προστέθηκε και επωάστηκε για 24 ώρες. Μετά από 24 ώρες, ο πληθυσμός ζωντανών κυττάρων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας Αντιδραστήριο Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού WST-1 (Roche) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων εκτιμήθηκε σε διαφορετικά χρονικά σημεία χρησιμοποιώντας WST-1.

Ανάλυση της κασπάσης-3/7 και Caspase-9 Ανάλυση

Τα κύτταρα 95-D μολύνθηκαν με φακοϊό CLPTM1L και τον έλεγχο φακοϊό καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% FBS. Εν συντομία, 1 × 10

4 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων και επωάζονται όλη τη νύκτα. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα 95-D υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 50 μΜ σισπλατίνη (Sigma) για 24 ώρες. Μετά από 24 ώρες, 100 μΙ της κασπάσης-Glo 3/7 ή κασπάση-Glo 9 αντιδραστήριο (Promega, Σαγκάη, Κίνα) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες. Μετά την επώαση, φωτεινότητα μετρήθηκε χρησιμοποιώντας TD 20/20 φωτόμετρο (Promega). Κάθε δείγμα μετρήθηκε εις τριπλούν.

Στατιστική Ανάλυση

Οι συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης των CLPTM1L και κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητές αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher, chi-square τεστ ή διόρθωση συνέχειας chi-square τεστ από λογισμικό SPSS16.0, και οι σχέσεις μεταξύ του αριθμού των TIL και CLPTM1L αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την δοκιμή Mann-Whitney χρησιμοποιώντας Instat3.36. Για τη σχέση μεταξύ των διαφόρων δεικτών, απλή γραμμική παλινδρόμηση διεξήχθη χρησιμοποιώντας Statview SE + Graph.

Αποτελέσματα

1. Έκφραση CLPTM1L σε ανθρώπινο πνεύμονα Cancer

το πρότυπο έκφρασης των μορίων CLPTM1L στις επιφάνειες των κυττάρων του όγκου εμφανίστηκε πολύ διάχυτη στις περισσότερες περιπτώσεις. Μικροσκοπικά το μόριο CLPTM1L βρέθηκε στο κυτταρόπλασμα (Εικ. 1). Σε αυτά τα δείγματα, διεισδύοντας μαστοκύτταρα βρέθηκαν να εκφράζουν CLPTM1L έντονα αλλά λεμφοκύτταρα δεν ήταν. Από τους 151 ασθενείς που παρέχονται δείγματα, 136 (86,8%) έδειξε CLPTM1L έκφραση και CLPTM1L υπερεκφράστηκε σε ιστούς όγκου σε σύγκριση με γειτονικούς ιστούς, η οποία ήταν στατιστικά σημαντική διαφορετικές (ρ = 0,000, Πίνακας 1). Η κατανομή της έντασης της χρώσης σε όλα τα δείγματα παρουσιάζεται στον Πίνακα 1. Μια σχέση μεταξύ της έντασης της χρώσης και παθολογικών ταξινόμηση σημειώθηκε. Το ποσοστό των ισχυρή χρώση (++ ~ +++) του CLPTM1L έκφρασης σε αδενοκαρκίνωμα ήταν υψηλότερη από ότι σε ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (ρ = 0,000, Πίνακας 1). Λόγω της περιορισμένης κλίμακας της τρέχουσας μελέτης, οι θετικές αναλογίες καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου και καρκίνο του πνεύμονα μικρών κυττάρων δεν μπορούσε να προσδιοριστεί με βεβαιότητα. Ο σχετικός αριθμός των απειλητικά χρωματισμένων κυττάρων ήταν πολύ υψηλότερη σε δείγματα αδενοκαρκινώματος από ότι στους ελέγχους. Οι περισσότεροι παρακείμενους ιστούς έδειξαν είτε ασθενή χρώση ή καθόλου

(A) κανονικό ιστό των πνευμόνων (× 200).? (Β) Το τμήμα από το αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα (× 200)? (Γ) Το τμήμα από το καρκίνωμα του πνεύμονα πλακωδών κυττάρων (× 200)? (Δ) Το τμήμα από το αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα (× 400).

Η

2. Σχέση μεταξύ κλινικοπαθολογικοί Χαρακτηριστικά και CLPTM1L έκφραση σε πνεύμονα Καρκινοπαθών

Βρήκαμε CLPTM1L έκφραση συνδέθηκε με τους βαθμούς της διαφοροποίησης (p = 0,046, Πίνακας 2), παρατηρήθηκε όμως καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης CLPTM1L και την ηλικία του ασθενούς , το φύλο, το κάπνισμα, ή στάδιο ΤΜΝ σε 151 δείγματα πνεύμονα (Πίνακας 2). Δεν διαπιστώθηκε καμία συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των CLPTM1L και της διείσδυσης των λεμφοκυττάρων, η οποία έδειξε ότι η έκφραση του CLPTM1L δεν είχε σχέση με ανοσοκαταστολή (Τα δεδομένα δεν είναι γνωστή).

Η

3. Μιτοχονδριακή Εντοπισμός CLPTM1L

Η ακριβής κυτταρικό εντοπισμό των CLPTM1L σε σχέση με τους ρόλους της στην εξέλιξη του καρκίνου του πνεύμονα είναι σήμερα ασαφής. Η εξέταση της αλληλουχίας των CLPTM1L χρησιμοποιώντας MITOPROT (https://ihg2.helmholtz-muenchen.de/ihg/mitoprot.html) έδειξε μια πιθανότητα 84% ότι CLPTM1L εξαγόταν στα μιτοχόνδρια. Για να προσδιοριστεί η θέση της πρωτεΐνης CLPTM1L, μιτοχονδριακό και κυτοσολικό κλάσμα των κυττάρων 95-D εκχυλίστηκαν για ανάλυση στυπώματος Western. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2Α, CLPTM1L πρωτεΐνη βρέθηκε κυρίως στο μιτοχονδριακό κλάσμα των κυττάρων. Για να επιβεβαιωθεί αυτό, κατασκευάσαμε ένα φορέα έκφρασης CLPTM1L με σύντηξη του EGFP στο C άκρο του CLPTM1L (CLPTM1L-EGFP). Στη συνέχεια, τα κύτταρα 95-D διαμολύνθηκαν παροδικά με τον φορέα CLPTM1L-EGFP και βάφονται με την μιτοχονδριακή Mitotracker δείκτη. Οι εικόνες φθορισμού έδειξε σαφώς την μιτοχονδριακή εντοπισμός του CLPTM1L πρωτεΐνης (Σχήμα 2Β).

(Α):. Ανάλυση κηλίδας Western για έκφραση CLPTM1L σε εκχύλισμα ολικού κυττάρου, κυτοσολίου και μιτοχονδριακό κλάσμα των κυττάρων 95-D. (Β): κύτταρα 95-D διαμολύνθηκαν παροδικά με τον φορέα CLPTM1L-EGFP και βάφονται με την μιτοχονδριακή Mitotracker δείκτη

Η

4.. Επίδραση της CLPTM1L υπερέκφραση σε μολυσμένα 95-D κύτταρα

Για τον προσδιορισμό των λειτουργικών συνέπειες της αυξημένης έκφρασης CLPTM1L στον καρκίνο του πνεύμονα, CLPTM1L ήταν υπερεκφράζεται σε κύτταρα 95-D. Η υπερέκφραση επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας PCR πραγματικού χρόνου και ανοσοκυτταροχημεία (Σχ. 3Α και 3Β). Δεν βρήκαμε ανάπτυξη πρόκειται να ανασταλεί μετά από 72 ώρες υπερέκφρασης, όπως προσδιορίζεται με ανάλυση πολλαπλασιασμού. Τα κύτταρα που υπερεκφράζουν CLPTM1L έτειναν να είναι λιγότερο πιθανό να πεθάνουν όταν επωάστηκαν με 25-75 μΜ σισπλατίνη, αν και αυτή η διαφορά δεν βρέθηκε να είναι στατιστικά σημαντική (Εικ. 3C και 3D).

(α) στο επίπεδο CLPTM1L mRNA μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου σε pcDNA3.1 (+) – CLPTM1L ή pcDNA3.1 (+) πλασμίδιο επιμολυσμένα κύτταρα. *:

P

& lt? 0,05 έναντι ομάδας ελέγχου (p = 0,001). (Β) Η έκφραση της πρωτεΐνης CLPTM1L ερευνήθηκε χρησιμοποιώντας ανοσοκυτταροχημεία. (Γ) Αποτελέσματα της CLPTM1L υπερέκφραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων στον pcDNA3.1 (+) – CLPTM1L επιμολυσμένα κύτταρα 95-D κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα ελέγχου 95-D. (Δ) Η υπερέκφραση του CLPTM1L δεν άλλαξε χημειοευαισθησία στη σισπλατίνη σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα 95-D επιμολυσμένα με pcDNA3.1 (+) – CLPTM1L σχέση με τους μάρτυρες. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις σισπλατίνης για 24 ώρες.

Η

5. Επιδράσεις της CLPTM1L στο Knocked Down κύτταρα 95-D προσβληθεί από CLPTM1L shRNA Lentivirus

Χρησιμοποιήσαμε ένα φορέα λεντοϊού που περιέχει shRNA να στοχεύει ειδικά και να χτυπήσει κάτω την έκφραση της CLPTM1L στον καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων 95-D σταθερά. Real-time PCR ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση mRNA σε CLPTM1L shRNA-CLPTM1L-επιμολυσμένα κύτταρα ήταν σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη των κυττάρων ελέγχου 95-D (Σχ. 4Α). Μειωμένη έκφραση του CLPTM1L πρωτεΐνης επιβεβαιώθηκε επίσης με ανοσοκυτταροχημεία (Εικ. 4Β).

(Α) Το επίπεδο του mRNA CLPTM1L μετά τη θεραπεία RNAi μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου σε διαφορετικές ομάδες. *: P = 0.000 έναντι ομάδας ελέγχου NC. (Β) Η έκφραση της πρωτεΐνης CLPTM1L μετά τη θεραπεία RNAi διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας ανοσοκυτταροχημεία. (Γ) Η ανάπτυξη του shRNA-CLPTM1L επιμολυσμένα κύτταρα 95-D κύτταρα και κύτταρα μάρτυρες 95-D για 72 ώρες. κύτταρα 95-D και τον έλεγχο των κυττάρων 95-D (D) shRNA-CLPTM1L επιμολυσμένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ενδεικνυόμενη συγκέντρωση σισπλατίνης για 24 ώρες. *: P = 0,003 vs ομάδα NC ελέγχου (25 μΜ) και #: p = 0,006 vs ομάδα ελέγχου NC (50 μΜ)

Η

Για να αποδειχθεί η βιολογική δράση της CLPTM1L, εξετάσαμε τις επιπτώσεις της. μειώθηκε CLPTM1L έκφραση στην κυτταρική ανάπτυξη του καρκίνου του πνεύμονα in vitro. Χρησιμοποιώντας ένα προσδιορισμό κυτταρικού πολλαπλασιασμού, βρήκαμε ότι οι shRNA-CLPTM1L-επιμολυσμένα κύτταρα 95-D είχαν ένα ρυθμό ανάπτυξης παρόμοιο με εκείνο των κυττάρων ελέγχου σε περίοδο 72 h (Σχ. 4C). CLPTM1L νοκ ντάουν δεν επηρέασε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

6. Μεσολάβηση RNAi εξόντωση CLPTM1L Αυξημένη χημειοευαισθησία έναντι σισπλατίνης σε Ανθρώπινο Καρκίνο του Πνεύμονα 95-D κύτταρα και Cisplatin επαγόμενη ενεργοποίηση της κασπάσης-9 και Κασπάσης-3/7

CLPTM1L ανακαλύφθηκε για πρώτη φορά σε έναν όγκο των ωοθηκών σισπλατίνη ανθεκτικών κυτταρική σειρά. Εδώ εξακριβωθεί αν μειώθηκε CLPTM1L έκφραση θα μπορούσε να αυξήσει χημειοευαισθησία με σισπλατίνη στον καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων. Διαφορετικές συγκεντρώσεις σισπλατίνης χρησιμοποιήθηκαν για την κατεργασία shRNA-CLPTM1L-επιμολυσμένα κύτταρα 95-D για 24 ώρες. Βρήκαμε κυτταρική ανάπτυξη να αναστέλλεται σημαντικά τα knockdown κυττάρων μετά κατεργασία σισπλατίνη (Εικ. 4D). Αυτό έδειξε ότι CLPTM1L knockdown θα μπορούσε να αυξήσει χημειοευαισθησία στη σισπλατίνη σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα 95-D.

Τα μιτοχόνδρια είναι το κλειδί για την ρύθμιση της απόπτωσης [21], και παίζουν σημαντικό ρόλο στην σισπλατίνη απόπτωση. Μετά από θεραπεία με σισπλατίνη, κασπάσης-9 και κασπάσης-3/7 σε μιτοχόνδρια ενεργοποιήθηκαν. Από CLPTM1L πρωτεΐνης βρέθηκε να εξαχθούν τα μιτοχόνδρια, αναρωτηθήκαμε αν CLPTM1L συνδέθηκε με apoptostic πρωτεΐνη. Στη συνέχεια εξετάστηκε η ενεργοποίηση της κασπάσης-9 και κασπάσης-3/7 σε shRNA-CLPTM1L-επιμολυσμένα κύτταρα 95-D και ελέγχουν κύτταρα 95-D για να προσδιοριστεί αν CLPTM1L συμμετείχε στην μιτοχονδριακή μονοπάτι απόπτωσης. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η σισπλατίνη απόπτωση να αρχίσει με την ενεργοποίηση της κασπάσης-9, που ακολουθείται από την ενεργοποίηση της κασπάσης-3/7 σε δύο τύπους κυττάρων. Επιπλέον knockdown του CLPTM1L προκάλεσε αυξημένη ενεργοποίηση της κασπάσης-9 και κασπάσης-3/7 (εικ. 5). Αυτό σημαίνει ότι CLPTM1L knockdown κύτταρα είναι πιο ευαίσθητα στη σισπλατίνη.

shRNA-CLPTM1L επιμολυσμένα κύτταρα 95-D και κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 50 υΜ σισπλατίνη για 24 ώρες. Caspase-3/7 και δράση της κασπάσης-9 μετρήθηκαν και τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως πλάσια αύξηση της δραστικότητας των κυττάρων χωρίς θεραπεία cisplatin. *: P = 0,004 vs ομάδα NC ελέγχου (κασπάσης-3/7) και #:. P = 0,000 vs ομάδα ελέγχου NC (κασπάσης-9)

Η

Συζήτηση

Στο ελπίδα του ορισμού της παθογένεσης της CLPTM1L στον καρκίνο του πνεύμονα, εστιάσαμε στην CLPTM1L έκφραση, κυτταρική εντόπιση και λειτουργική συσχέτιση με τον καρκίνο του πνεύμονα. Βρήκαμε ότι CLPTM1L εκφράστηκε σε καρκινικό ιστό πνεύμονα, πιο έντονα σε αδενοκαρκίνωμα του ιστού. ανάλυση Western blot και-CLPTM1L-EGFP διαμόλυνση τόσο έδειξε ότι το μόριο μπορεί να βρίσκεται στα μιτοχόνδρια. Η ακριβής λειτουργία του μορίου είναι ακόμα ασαφής. Διαπιστώσαμε σύνδεσή της με χημειοευαισθησία να σισπλατίνη και ενεργοποίηση της μιτοχονδριακής αποπτωτικό μονοπάτι, ανάλογα με RNAi τεχνική knock-down. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη απόδειξη της θέσης του μορίου.

Η μελέτη παρέχει περισσότερα στοιχεία που αποδεικνύουν ότι CLPTM1L συνδέθηκε με καρκίνο του πνεύμονα [22], η οποία ήταν σύμφωνη με τη μελέτη που δημοσιεύθηκε από τον James et al και το έργο Ανθρώπινη πρωτεΐνη Atlas [23]. James et al ερεύνησαν την έκφραση του CLPTM1L σε επίπεδο mRNA και βρήκε έκφραση CLPTM1L mRNA ήταν κατά μέσο όρο 2,24 φορές υψηλότερη σε ιστούς όγκου σε σύγκριση με ιστούς όγκου γειτονικά [23]. Όταν συνδυάζεται με το έργο του Τζέιμς, η παρατήρηση μας φαίνεται να δείχνουν ότι τα αυξημένα επίπεδα της πρωτεΐνης CLPTM1L θα μπορούσε να προκύψει από την αύξηση των επιπέδων CLPTM1L mRNA. Επιπλέον, συγκρίναμε σχέση μεταξύ της έκφρασης CLPTM1L σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα με κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά των ασθενών. Βρήκαμε CLPTM1L έκφραση συνδέθηκε έντονα με τους βαθμούς της διαφοροποίησης (p = 0,046, Πίνακας 2), ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης CLPTM1L και την ηλικία του ασθενούς, το φύλο, το κάπνισμα, ή στάδιο ΤΜΝ σε 151 δείγματα πνεύμονα. Επιπλέον, το ποσοστό των ισχυρή χρώση των CLPTM1L έκφρασης σε αδενοκαρκίνωμα ήταν υψηλότερη από ότι σε ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα, αν και James et al δεν βρήκε διαφορά σε CLPTM1L έκφραση μεταξύ NSCLC υποτύπους. Η διαφορά μεταξύ των αποτελεσμάτων μας και των αποτελεσμάτων του James θα μπορούσε να προκληθεί από τον αριθμό των ασθενών. James ανέλυσε 22 αδενοκαρκίνωμα και 8 ασθενείς πλακώδες καρκίνωμα, ενώ αναλύσαμε 55 αδενοκαρκίνωμα και 63 ασθενείς με πλακώδες καρκίνωμα.

Εδώ επιβεβαίωσε ότι η πρωτεΐνη CLPTM1L ήταν περισσότερο εντόνως εκφρασμένο σε καρκίνο του πνεύμονα, ιδίως σε αδενοκαρκίνωμα, από ό, τι στην κανονική ιστού, Αυτό έδειξε ότι η πρακτική εφαρμογή των γενετικών παραλλαγών του γονιδίου δεν περιορίζεται στη χρήση ως γενετικούς δείκτες. Η συχνότητα εμφάνισης του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα έχει αυξηθεί σημαντικά. Η αιτιολογία είναι κοινώς πιστεύεται ότι περιλαμβάνει την ατμοσφαιρική ρύπανση και το παθητικό κάπνισμα. Ωστόσο, καρκινογένεση [19], [24] είναι περίπλοκη, και το γονίδιο CLPTM1L μπορεί επίσης να διαδραματίσει ένα σημαντικό ρόλο. Η γενετική ανάλυση αποκάλυψε ότι CLPTM1L συνδέεται στενά με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα και του γενετικού διακύμανση μπορεί να προκαλέσει μη φυσιολογική γονιδιακή έκφραση, η οποία διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην παθογένεση του καρκίνου του πνεύμονα.

Η πρωτεΐνη φαίνεται να εντοπίζεται σε μιτοχόνδρια, όπως που υποδεικνύεται από Western κηλίδας και CLPTM1L-EGFP επιμόλυνση. Αυτό το συμπέρασμα υποστηρίζεται από την πρόβλεψη της πρωτεΐνης. Ο υπολογισμός της υδροφιλικότητας υποδεικνύει ότι CLPTM1L πρωτεΐνη μπορεί να είναι μια διαμεμβρανική πρωτεΐνη. Σύμφωνα με αυτά τα δεδομένα, υποστήριξε ότι η πρωτεΐνη αυτή ήταν μια διαμεμβρανική πρωτεΐνη που βρίσκεται στην μεμβράνη των μιτοχονδρίων.

Η ακριβής λειτουργία του CLPTM1L είναι ακόμα άγνωστη. James et al ανέφεραν ότι CLPTM1L είχε αποπτωτικό ρόλο κατάντη της βλάβης του DNA και μέσω της ρύθμισης της έκφρασης Bcl-xL [23]. Σε αυτή τη μελέτη, δεν θα μπορούσαμε να καθορίσει τις ακριβείς αλλαγές βιολογικό συνδέονται με CLPTM1L υπερέκφραση και knock-down σε καρκινικές κυτταρικές σειρές πνεύμονα. Σε αντίθεση με το αποτέλεσμα της προηγούμενης έκθεσης [1], η υπερέκφραση του CLPTM1L σε 95-D πνεύμονα κυτταρική γραμμή δεν διεγείρει απόπτωση και τα κύτταρα τείνει να είναι λιγότερο χημειοευαίσθητων να σισπλατίνης [1]. Η διαφορά μπορεί να έχουν προκληθεί από φορείς έκφρασης, η οποία μπορεί να προκαλείται από διαφορετικά προϊόντα: CLPTM1L-του για την παρούσα μελέτη και CLPTM1L-GFP για προηγούμενη μελέτη. Μεσολάβηση RNAi knockdown του CLPTM1L αυξήθηκε χημειοευαισθησία στη σισπλατίνη σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα 95-D και σισπλατίνη που προκαλείται από την ενεργοποίηση της κασπάσης-9 και κασπάσης-3/7. Αυξημένη ενεργοποίηση της κασπάσης-9 και κασπάσης-3/7 μπορεί να σχετίζεται με αυξημένη ενεργοποίηση της μιτοχονδριακής οδού απόπτωσης. Έχουμε ακόμα διαπίστωσε ότι τα μαστοκύτταρα υψηλής έκφρασης της πρωτεΐνης. Είναι κοινώς αποδεκτό ότι οι μαστοκύτταρα σχετίζονται με τον καρκίνο, ενισχύουν την αγγειογένεση των όγκων και να καταστήσουν λιγότερο ευνοϊκή εξέλιξη [25]. Σύμφωνα με αυτά τα δεδομένα, προβλέψαμε ότι η πρωτεΐνη μπορεί να σχετίζεται με αντι-αποπτωτικό μηχανισμό που επηρέασε φαρμακευτικής αντίστασης. Περαιτέρω ανάλυση είναι απαραίτητη για να επιβεβαιώσει αυτήν την πρόβλεψη.

Οι συγκεκριμένοι ρόλοι των CLPTM1L στα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα χρήζουν περαιτέρω διερεύνησης. Είναι πιθανό ότι CLPTM1L μπορεί να είναι σημαντική για τη διατήρηση της κυτταρικής σταθερότητα και ότι μία απώλεια της λειτουργίας μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένη χημειοευαισθησία στη σισπλατίνη.