Αφηρημένο

Η αντίσταση στη θεραπεία προγεστερόνης είναι ένα σημαντικό εμπόδιο στη θεραπεία του προχωρημένου και επαναλαμβανόμενο καρκίνο του ενδομητρίου. Φενρετινίδη είναι ένα συνθετικό ρετινοειδές το οποίο έχει αξιολογηθεί σε κλινικές δοκιμές ως θεραπευτικό του καρκίνου και χημειο-προληπτικός παράγων. Φενρετινίδη έχει καθιερωθεί να είναι κυτταροτοξική σε πολλά είδη καρκινικών κυττάρων. Στην παρούσα μελέτη, δείχνουμε ότι φενρετινίδη μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων και την απόπτωση που επάγεται σε κύτταρα Ishikawa, τα οποία είναι ένας καρκίνος του ενδομητρίου κυτταρική γραμμή, με δοσοεξαρτώμενο τρόπο

in-vitro

. Αυτή η επίδραση

βρέθηκε να είναι ανεξάρτητη από

μονοπατιού σηματοδότησης πυρηνικού υποδοχέα ρετινοϊκού οξέος.

Περαιτέρω

, έχουμε δείξει ότι αυτή η επαγωγή απόπτωσης από φενρετινίδης μπορεί να προκαλείται από αυξημένη πρόσληψη ρετινόλη μέσω Stra6. Αποσιώπηση του Stra6 έδειξε ότι μειώνει την απόπτωση που ανεστάλη από knockdown έκφρασης Stra6 σε κύτταρα Ishikawa. Αποτελέσματα μιας

in-vivo

μελέτη έδειξε ότι ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις φενρετινίδης σε καρκινικούς όγκους του ενδομητρίου (που δημιουργήθηκε χρησιμοποιώντας κύτταρα Ishikawa) σε ποντικούς ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου αποτελεσματικά. Ανοσοϊστοχημεία των όγκων ποντικών έδειξε μια μείωση στην έκφραση Κί67 και μια αύξηση στην σχάση χρώσης κασπάσης-3 μετά την αγωγή φενρετινίδη σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν φορέα. Συλλογικά, τα αποτελέσματά μας είναι η πρώτη που αποδεικνύουν την αποτελεσματικότητα των φενρετινίδης ως αντικαρκινικός παράγοντας για τον καρκίνο του ενδομητρίου και

in-vitro

και

in-vivo

, παρέχοντας ένα πολύτιμο σκεπτικό για την έναρξη περισσότερες προκλινικές μελέτες και κλινικές δοκιμές χρησιμοποιώντας φενρετινίδη για τη θεραπεία του καρκίνου του ενδομητρίου

Παράθεση:. Mittal Ν, Malpani S, M Dyson, Ono Μ, Coon JS, Kim JJ, et al. (2014) φενρετινίδη: Μια νέα θεραπεία για τον καρκίνο του ενδομητρίου. PLoS ONE 9 (10): e110410. doi: 10.1371 /journal.pone.0110410

Επιμέλεια: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 19 Φλεβάρη, 2014? Αποδεκτές: 15 του Σεπτέμβρη 2014? Δημοσιεύθηκε: 23η Οκτωβρίου του 2014

Copyright: © 2014 Mittal et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Οι μελέτες αυτές υποστηρίζονται από γενναιόδωρη κεφάλαια από τον Ιωάννη και Diane O’Donnell (με διαίρεση της Γυναικολογική Ογκολογία, NU) και Αναπαραγωγικής Τμήμα Βιολογίας, NU. Μελέτες έχουν επίσης υποστηρίζεται από K12HD050121 και το βραβείο ASRM Career Development που χορηγούνται στους Mary Ellen Pavone. Κέντρο Grant Υποστήριξης (NCI CA060553) χρησιμοποιήθηκε για την ενσωμάτωση, τομή και κηλίδωση των καρκινικών ιστών. NU κυττάρων Imaging Διευκόλυνση γενναιόδωρα υποστηρίζεται από NCI CCSG Ρ30 CA060553 που απονεμήθηκε στον Robert H Lurie Κέντρο Comprehensive Cancer

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή.

ο καρκίνος του ενδομητρίου είναι η πιο διαδεδομένη γυναικολογικό καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες, με κατ ‘εκτίμηση 49.560 νέα κρούσματα και 8.190 – θανάτων συμβαίνουν το 2013 [1]. Η πιθανότητα μια γυναίκα που διαγιγνώσκονται με αυτόν τον καρκίνο στη διάρκεια της ζωής της είναι περίπου μία στις 38 [2]. Η συχνότητα εμφάνισης αυτής της κακοήθειας αναπαραγωγικών οργάνων έχει αυξηθεί κατά μέσο όρο κατά 1,1% ετησίως 2004-2008 και τα ποσοστά θανάτου έχουν επίσης αυξηθεί κατά μέσο όρο κατά 0,3% ετησίως 1998-2007 [3]. Χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία είναι τρεις κύριες καθιερωμένες προσεγγίσεις για τη θεραπεία του ενδομητρίου καρκινώματος [4], [5]. Η χειρουργική αφαίρεση της μήτρας και ανοσοενισχυτικό αποτέλεσμα της θεραπείας σε ένα ποσοστό επιβίωσης μεγαλύτερο από το 90% των πέντε ετών. Υποτροπής λόγω της αντίστασης στη χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία παρουσιάζει μια άλλη σημαντική πρόκληση για τους επαγγελματίες υγείας. Ως εκ τούτου, είναι εξαιρετικά σημαντική για τον εντοπισμό νέων και αποτελεσματικών θεραπειών για ενδομητριακών καρκίνων.

Κλινικά, προγεστίνες, συμπεριλαμβανομένων Megace (οξική μεγεστρόλη), έχουν χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία του ενδομητρίου κακοήθειες, λόγω της ανταγωνιστικής δράσης της προγεστερόνης σχετικά με τη δράση των οιστρογόνων . Τα προγεσταγόνα χρησιμοποιούνται ως πρωτογενείς παράγοντες για τη θεραπεία του προχωρημένου ή υποτροπιάζουσα νόσο, εκείνοι που είναι φτωχοί υποψήφιοι για χειρουργική επέμβαση και σε νεότερες γυναίκες που θα ήθελαν να διατηρήσουν τη μελλοντική γονιμότητά τους. Μια πλήρης απόκριση μπορεί να επιτευχθεί όταν προγεστίνης θεραπεία χρησιμοποιείται σε γυναίκες με υπερπλασία του ενδομητρίου και καλά διαχωριζόμενες ενδομητρίου αδενοκαρκίνωμα? Ωστόσο, η αποτελεσματικότητα της θεραπείας προγεστίνης μειώνεται με την αύξηση της σοβαρότητας της νόσου. Επιπλέον, υποτροπές μπορεί να συμβεί μία φορά θεραπεία προγεστερόνης σταματήσει [6], [7].

Σε αναζήτηση του θεραπευτικού παράγοντα κατά του καρκίνου του ενδομητρίου, τα προηγούμενα

in-vitro

μελέτες από το εργαστήριο μας έδειξαν σημειώνονται αναστολή του πολλαπλασιασμού του ενδομήτριου κυτταρική σειρά καρκίνου Ishikawa με ρετινοϊκό οξύ (RA) και το RA ένωση AM580 αγωνιστή [8]. Ωστόσο, η κλινική χρήση τους έχει, μέχρι στιγμής, περιορίζεται από δυσμενείς προφίλ παρενεργειών τους [9]. RA και τα παράγωγά τους (είτε φυσικές ή συνθετικές ενώσεις) έχουν αναγνωρισμένο ρόλο στη ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης, διαφοροποίησης και απόπτωσης. RA έχει τη δυνατότητα για τη θεραπεία και την πρόληψη των καρκίνων [10], [11]. Ρετινόλη (η κυρίαρχη μορφή ρετινοειδών στο ανθρώπινο σώμα) πρέπει να μετατραπεί σε ρετινοϊκό οξύ για να δείξει βιολογική του δραστικότητα. Η κύρια πηγή της RA είναι διαιτητικές βιταμίνη Α, η οποία παραλαμβάνεται στο έντερο και συσκευάζονται ως εστέρες ρετινόλη στο ήπαρ. Οι εστέρες αυτοί ρετινύλιο εκκρίνεται εντός της κυκλοφορίας συνδέεται προς δέσμευσης ρετινόλης πρωτεΐνη (RBP), και που λαμβάνεται στη συνέχεια εντός κυττάρων μέσω

Stra6

(Παρακινημένοι από RA 6), ένα κρίσιμο υποδοχέα κυτταρικής επιφάνειας για RBP [12]. Προηγουμένως, το εργαστήριο μας έχει δείξει ότι Stra6 είναι ο κύριος ρυθμιστής της πρόσληψης ρετινόλης στο ενδομήτριο και ότι η μειωμένη έκφραση αυτού του γονιδίου σε ενδομητρίωση μπορεί να συμβάλει στην μείωση υδροξυστεροειδούς (17-β) αφυδρογονάση έκφραση 2 (HSD17β2) mRNA [13], που οδηγεί με επίμονα αυξημένα επίπεδα της οιστραδιόλης. Έχουμε επίσης δείξει ότι τα ρετινοειδή μειώνουν την παραγωγή οιστρογόνων με διέγερση έκφρασης HSD17β2 σε κύτταρα ενδομητρίου Ishikawa [14].

Stra6 είναι ο κύριος υποδοχέας κυτταρικής επιφάνειας υπεύθυνο για την πρόσληψη ρετινόλη. Μόλις στο εσωτερικό του κυττάρου, ρετινόλη μπορεί να οξειδωθεί προς την πιο βιολογικά ενεργό RA με αφυδρογονάσες αλκοόλ. RA στη συνέχεια κατευθύνεται από το κυτταρόπλασμα σε ειδικούς υποδοχείς πυρηνικής ορμόνης RA (RARs) και τους υποδοχείς ρητινοειδούς Χ (RXRs) δύο ενδο-κυτταροπλασματικές πρωτεΐνες φορείς, ειδικά κυτταρικής πρωτεΐνης δέσμευσης RA 2 (CRABP2) και λιπαρά πρωτεΐνη 5 δέσμευσης οξέος (FABP5 ) [15]. Τέλος, το αχρησιμοποίητο RA μεταβολίζεται και απορρίπτονται από τα κύτταρα με CYP26 οικογένεια ενζύμων [16].

[ρετιναμίδη Ν-4-υδροξυφαινυλ (4-HPR)] φενρετινίδη, ένα συνθετικό παράγωγο του all-trans ρετινοϊκό οξύ έχει την ικανότητα να κινήσει κυτταρικής απόπτωσης ακόμα και σε ΑΤΡΑ-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές με το πρόσθετο πλεονέκτημα της ύπαρξης ενός ανηλίκου προφίλ παρενεργειών. Ανθρώπινα μελέτες έχουν δείξει ότι οι σημαντικές παρενέργειες περιλαμβάνουν μειωμένη προσαρμογή στο σκοτάδι των ματιών, του δέρματος και των βλεννογόνων ξηρότητα, κνησμός, κνίδωση, γαστρεντερική δυσφορία και τις μεταβολές στην οφθαλμική επιφάνεια. Αυτές οι ανεπιθύμητες ενέργειες ήταν σχετικά συχνή, αλλά ήπια. Ως εκ τούτου, αναδύεται ως μία από τις πλέον υποσχόμενες αντικαρκινικών παραγόντων [17]. Μελέτες έχουν δείξει ότι φενρετινίδη μπορεί να επάγει κυτταροτοξικότητα σε πολλαπλές κυτταρικές γραμμές ανθρώπινου καρκίνου

in vitro

[18] – [23]. Κλινικά, φενρετινίδη έχει χρησιμοποιηθεί τόσο ως χημειοπροληπτικός παράγοντας στο μαστό [24], της ουροδόχου κύστης [25] και του στοματικού βλεννογόνου καρκίνων [26], και ως χημειοθεραπευτικό παράγοντα σε παιδιατρικούς [27], [28] και ενήλικων καρκίνων [29] – [31]. Ο μηχανισμός δράσης της επαγόμενης φενρετινίδης κυτταρικό θάνατο δεν έχει ακόμη πλήρως διαλευκανθεί. Ωστόσο, έχει προταθεί ότι ανασταλτικά αποτελέσματα της μπορεί να προκαλείται από τα δύο ρετινοϊκό οξύ εξαρτώμενη από τον υποδοχέα και ανεξάρτητη από τους μηχανισμούς [17].

Η παρούσα μελέτη διερευνήθηκε το θεραπευτικό δυναμικό του φενρετινίδης ως αντικαρκινικός παράγοντας, καθώς και πιθανός μηχανισμός δράσης της κατά του καρκίνου του ενδομητρίου και

in-vitro

και

in-vivo.

Η

Υλικά και Μέθοδοι

δήλωση Ηθικής

Όλα τα πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από το Πανεπιστήμιο Northwestern φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήσης.

ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα πολιτισμού

κυτταρικές σειρές του ενδομητρίου τα επιθηλιακά Ishikawa (ένα είδος δώρο από τον Dr. Masato Nishida Kasumigaura Εθνικό Νοσοκομείο , Tsuchiura, Ibaraki, Japan) που προέρχονται από ανθρώπινα κακοήθη ενδομητρίου επιθηλιακών κυττάρων [32]. κύτταρα Ishikawa καλλιεργήθηκαν σε μονοστιβάδες στους 37 ° C, 5% CO2 επωαστή σε ένα μίγμα DMEM και F12 (1:01) μέσο με ορό 5% εμβρυϊκό ορό (FBS), 1% πυροσταφυλικό νάτριο και 1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη, υγρομυκίνη λύση αντιβιοτικά (Life Technologies, Grand Island, Νέα Υόρκη).

Μικρές παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) νοκ ντάουν

κύτταρα Ishikawa αναπτύχθηκαν σε περίπου 80% συρροή, στη συνέχεια, επιμολυσμένα με nontargeting αρνητικό siRNA ελέγχου (siCTL) ή siRNAs έναντι Stra6 (ϋίβ Technologies) στους 30 ηΜ συγκέντρωση χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη RNAiMAX σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή (Life Technologies). Τα επιμολυσμένα κύτταρα επεξεργάστηκαν με είτε DMSO ή 6 μΜ φενρετινίδης (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ) διάλυμα 60 ώρες μετά την επιμόλυνση. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν μετά από 24 ώρες επεξεργασίας και υποβάλλονται σε επεξεργασία για PCR πραγματικού χρόνου ή κηλίδωση Western.

Κυτταρική βιωσιμότητα δοκιμασία

Prestoblue (Life Technologies) αντιδραστήριο βιωσιμότητας κυττάρων χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η βιωσιμότητα των κυττάρων. Prestoblue είναι μια ρεζαζουρίνης – βασισμένη μεμβράνη διαπερατή λύση που κατά την αναγωγή, μετατρέπεται σε ρεζορουφίνη, μία κόκκινη φθορίζουσα ένωση η οποία μπορεί να μετρηθεί ποσοτικά για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των κυττάρων [33]. κύτταρα Ishikawa σπάρθηκαν (5 × 10

3 κύτταρα ανά φρεάτιο) σε πλάκες 96 φρεατίων και καλλιεργήθηκαν για 24 ώρες στους 37 ° C. Τα κύτταρα στη συνέχεια χωρίς ορό για 16-18 ώρες [34], [35]. Τα κύτταρα στη συνέχεια αναπτύχθηκαν σε νέο μέσο και υποβάλλεται σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις φενρετινίδης και οξική μεγεστρόλη (Sigma-Aldrich) για 24 ώρες στους 37 ° C. Η κυτταροτοξικότητα του φενρετινίδης και μεγεστρόλη οξική μετρήθηκε με την προσθήκη του αντιδραστηρίου Prestoblue σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το σήμα φθορισμού μετρήθηκε για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των κυττάρων επί του αναγνώστη πλάκας Synergy ΗΤ από την Bio-Tek με το λογισμικό KC4 3,4 στα 530/590 nm.

Western ανάλυση κηλίδος

κύτταρα Ishikawa υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις φενρετινίδης και οξική μεγεστρόλη (Sigma-Aldrich) ή όχημα, λύθηκαν σε RIPA [50 mM Tris, ρΗ 8.0,150 mM χλωριούχο νάτριο, 1,0% Triton Χ-100, 0.5% δεοξυχολικό νάτριο, 0.1% SDS (δωδεκυλ θειικό νάτριο ) συμπληρωμένο με αναστολείς πρωτεάσης και φωσφατάσης (Sigma-Aldrich). Clear προϊόντα λύσης που λαμβάνεται μετά από φυγοκέντρηση σε 14,000 rpm για 15 λεπτά, και η συγκέντρωση πρωτεΐνης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ Micro BCA (Thermo Scientific, Rockford, Illinois). Οι πρωτεΐνες αναλύθηκαν με ηλεκτροφόρηση δωδεκύλ θειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου επί NOVEX NuPAGE 4-12% γέλες Δις-τρις (Life Technologies) και μεταφέρθηκε σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (Whatman, GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NJ). Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο ξηρό γάλα για μία ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και υβριδοποιήθηκε με ειδικό πρωτογενή αντισώματα για ολική και διασπασμένη PARP [πολυ (ADP-ριβόζη) πολυμεράσης], κασπάση-9 & amp? Διασπασμένη κασπάση 9 (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ) όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Οι πρωτεϊνικές ζώνες έγιναν ορατές με χρήση αντιδραστηρίου ενισχυμένης χημειοφωταύγειας κιτ ανίχνευσης ECL σήμα υπέρ West Femto (Thermo Scientific) μετά τον υβριδισμό με ένα χρένο αντι-κουνελιού δευτερογενές αντίσωμα κατσίκας συζευγμένο με υπεροξειδάση (Cell Signaling Technology). Οι μεμβράνες απογυμνώθηκαν με την Επαναφορά Western Blot απογύμνωσης Buffer (Thermo Scientific) και ανιχνεύθηκαν με βήτα-ακτίνης (β-ακτίνη) αντίσωμα (Sigma-Aldrich) για τον έλεγχο της πρωτεΐνης φόρτωση.

Real Time PCR

Ολικό RNA απομονώθηκε από κύτταρα Ishikawa χρησιμοποιώντας Quiagen RNaeasy Kit (Quiagen, Valencia, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η καθαρότητα και η συγκέντρωση του RNA εκχυλίζεται προσδιορίσθηκαν με τη χρήση του ND-1000 φασματοφωτόμετρο (NanoDrop). 1 μg του RNA μεταγράφηκε αντίστροφα με το cDNA Q-script σούπερ mix (Quanta Biosciences Inc., Gaithersburg, MD, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR πραγματοποιήθηκε με την ανίχνευση ΑΒΙ 7900 Sequence και τα συστήματα έκφρασης γονιδίων ΑΒΙ Ισχύς Syber Green (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Το mRNA ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας διαθέσιμα στο εμπόριο ειδικών εκκινητών για Stra6, CRBP1, CYP26A1, CRABP2, FABP5, ΚΑΚ-α, ΚΑΚ-β, και RXR-α (Quiagen) και το γονίδιο οικοκυρική GAPDH (Integrated DNA Technologies, Chicago, IL). Το φορές μεταβολή στην έκφραση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ΔΔCt [36] με GAPDH ως ένας εσωτερικός έλεγχος. PCRs διεξήχθησαν σε ένα ΑΒΙ PRISM 7000 Sequence Detection System (Applied Biosystems) για 40 κύκλους (95 ° C για 15 s, 60 ° C για 1 λεπτό) μετά από 10 λεπτά επώασης στους 95 ° C.

ξενομοσχεύματος ποντικού μοντέλο

Γυναίκα CD-1 αθυμικά γυμνά ποντίκια (ηλικίας 4-5 εβδομάδων, Charles River Laboratories International Inc., Wilmington, ΜΑ) διατηρήθηκαν κάτω από ειδικές συνθήκες ελεύθερες παθογόνων με βάση τις κατευθυντήριες γραμμές που καθορίζονται από το Πανεπιστήμιο Northwestern, ιδρυματική φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήσης. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ωοθηκεκτομή, και, ένα σφαιρίδιο οιστραδιόλη (1,7 mg /pellet, 60 απελευθέρωση ημέρα) (Innovative Research of America, Sarasota, Φλόριντα) εμφυτεύθηκε υποδορίως. ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του ενδομητρίου κυτταρική σειρά Ishikawa (2 × 10

6 /0.1 ml) αιωρήθηκαν σε 1:01 PBS /Matrigel (BD Biosciences, San Jose, California) και ενίεται υποδορίως σε αμφότερες δεξιά και αριστερά πλευρά κάθε ποντικού οι όγκοι αφέθηκαν να αναπτυχθούν και μόλις οι όγκοι έφθασαν 50-150 mm

3 (το οποίο συνέβη σε περίπου 2 εβδομάδες), τα ποντίκια χωρίστηκαν σε 4 ομάδες: 1. όχημα, 2. οξική μεγεστρόλη, 3 φενρετινίδης (Tocris Bioscience, Bristol , UK) και φενρετινίδη + οξική μεγεστρόλη. σφαιρίδια Megestrol actate (21 mg, απελευθέρωση 21 ημερών για 1 mg /ημέρα) (Innovative Research of America) εμφυτεύθηκαν υποδόρια. Οι ποντικοί έλαβαν 120 mg /kg φενρετινίδης σε όγκο 10 ml /kg σωματικού βάρους, 5 φορές την εβδομάδα για 3 εβδομάδες μέσω ενδοπεριτοναϊκής ένεσης. Τα ποντίκια μάρτυρες παρομοίως σε επεξεργασία με ε.π. ενέσεις 5% αιθανόλη σε διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9% που περιέχει 1,65 mg /ml λευκωματίνης βοείου ορού. Δεν υπήρξε καμία ένδειξη τοπικής ή συστηματικής τοξικότητας μετά ε.π. θεραπεία με την χορηγούμενη δόση [37] (Εικ. S2). Οι ποντικοί ζυγίστηκαν και τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν με παχύμετρο δύο φορές την εβδομάδα καθ ‘όλη τη διάρκεια της θεραπείας. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με χρήση ασφυξία με CO2 και οι όγκοι ανατμήθηκαν. ιστοί όγκου από ποντικούς ζυγίστηκαν, στη συνέχεια ενσωματώνονται σε ένα μπλοκ παραφίνης και υποβλήθηκε σε ανοσοϊστοχημεία ή αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) χρώση. Οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο:.

Όταν το «α» είναι η μικρότερη μεταξύ των δύο κάθετους άξονες [35]

Η ανοσοϊστοχημεία

Οι ιστοί μονιμοποιήθηκαν σε φορμόλη, παραφίνη ενσωματωμένα , και τα τμήματα 4 μm ιστού κόπηκαν. Μετά de-παραφινοποίησης τομών ιστού, ανάκτηση αντιγόνου επαγόμενη θερμότητα διεξήχθη σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα 10 mM κιτρικού νατρίου (ρΗ 6.0) με 0.05% Tween (Sigma) για 20 λεπτά σε μια χύτρα ταχύτητας. Τα πλακίδια αφέθηκαν να κρυώσουν για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια πλύθηκαν σε TBS-T για 5 λεπτά. Το κιτ Dako EnVision HRP IHC χρησιμοποιήθηκε (Dako North America, Inc., Carpinteria, CA). Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου (3%) για 10 λεπτά ακολουθούμενη από 2 πλύσεις ΤΒδ-Τ επί 10 λεπτά. Για Κί67 ανοσοσήμανση, μη ειδικές θέσεις σύνδεσης αποκλείστηκαν με μπλοκ πρωτεΐνη, και οι τομές ιστού στη συνέχεια επωάστηκαν με Κί67 πρωτογενές αντίσωμα (Dako) επί μία νύκτα στους 4 ° C σε υγροποιημένο θάλαμο. δευτερεύον αντίσωμα Αντι ποντικού στη συνέχεια εφαρμόστηκε στις τομές ιστού για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια πλένονται σε ΤΒδ-Τ δύο φορές για 5 λεπτά. Για διασπασμένης κασπάσης-3, μη-ειδικές πρωτεΐνες αποκλείστηκαν χρησιμοποιώντας 5% φυσιολογικό ορό γαϊδάρου, επωάστηκαν με διασπασμένη κασπάση 3 (Cell Signaling Technology) όλη τη νύκτα, στη συνέχεια, ένα πρωτόκολλο κιτ ABC (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA) ακολουθήθηκε. διάλυμα DAB χρησιμοποιήθηκε για την ανάπτυξη χρώματος, και αιματοξυλίνης Mayer χρησιμοποιήθηκε αιματοξυλίνης των τομών. Το υδροξείδιο του αμμωνίου 28% χρησιμοποιήθηκε ως αντιδραστήριο λουλάκι. Οι τομές αφυδατώθηκαν μέσω 2 αλλαγές από 95% αιθανόλη, 2 αλλαγές 100% αιθανόλη, και 3 αλλαγές ξυλένιου, και στη συνέχεια τοποθετείται πάνω καλυπτρίδες χρησιμοποιώντας Cytoseal XYL μέσα στερέωσης (Richard-Allan Scientific). Τα πλακίδια έγιναν ορατά χρησιμοποιώντας Zeiss όρθια Axio TissueFAXS έκδοση 3.5.5120.120 πεδίο (TissueGnostics GmbH, Βιέννη, Αυστρία).

Η στατιστική ανάλυση

Όλα τα ποσοτικά δεδομένα εκφράζονται ως μέσες τιμές ± τυπικό σφάλμα, και σημαντικές διαφορές προσδιορίστηκαν με μονόδρομη ANOVA χρησιμοποιώντας GraphPad Prism6. Μια τιμή πιθανότητα

P

& lt?. 0.05 χρησιμοποιήθηκε ως κριτήριο για την στατιστική σημαντικότητα

Αποτελέσματα

φενρετινίδη μειώνει τη βιωσιμότητα των κυττάρων και αυξάνει την απόπτωση των ενδομήτρια κύτταρα καρκίνου του Ishikawa

in-vitro

Η

Η επεξεργασία των κυττάρων με Ishikawa φενρετινίδη ανέστειλε σημαντικά κυτταρικής βιωσιμότητας και αυξημένη απόπτωση με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 1Α & amp? 1D). Φενρετινίδη σε 6 έως 20 μΜ προκάλεσε μία μείωση κατά 38% έως 99% αντίστοιχα στην βιωσιμότητα των κυττάρων και αύξηση στην απόπτωση όπως είναι εμφανές από τις αυξήσεις στα επίπεδα πρωτεΐνης διασπασμένη κασπάση -9 και διασπάστηκε-PARP σε σύγκριση με με φορέα επεξεργασμένα κύτταρα. Φενρετινίδη βρέθηκε να είναι τοξική για τα κύτταρα σε δόσεις υψηλότερες από 2 μΜ συγκέντρωση μετά από 24 ώρες θεραπείας (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για να προσδιοριστούν τα αποτελέσματα του Megace, τα κύτταρα Ishikawa υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Megace μόνη σε διαφορετικές συγκεντρώσεις και σε συνδυασμό με φενρετινίδη για 24 ώρες και κυτταρική βιωσιμότητα & amp? απόπτωση εκτιμήθηκαν. Megace δεν είχε καμία επίδραση στη βιωσιμότητα των κυττάρων και την απόπτωση Ishikawa έως 10 μΜ και μόνο καθώς και σε συνδυασμό με 6 μΜ φενρετινίδης (Σχήμα 1Β, 1C & amp? 1Ε). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η φενρετινίδη μειώνει τη βιωσιμότητα των κυττάρων και επάγει την απόπτωση σε κύτταρα Ishikawa

in-vitro

καθιστώντας το μια πολλά υποσχόμενη υποψήφια για να ελέγξετε την αποτελεσματικότητα του

in-vivo

.

Ishikawa κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DMSO (Veh), (α) 2-20μM φενρετινίδη, (Β) 0.1-10μM Megace ή (γ) συνδυασμό του Megace + φενρετινίδης για 24 ώρες και η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Prestoblue. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως φορές μεταβολής σε σχετικές μονάδες φθορισμού από δείγματα DMSO αγωγή και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM από 4-5 ανεξάρτητα πειράματα. Ένας αστερίσκος υποδηλώνει μία σημαντική (*

P

& lt? 0,05) μείωση της βιωσιμότητας των κυττάρων σε κύτταρα Ishikawa αντιμετωπίζονται με φενρετινίδη σε σύγκριση με την ομάδα που έλαβε αγωγή DMSO. (D) Κύτταρα Ishikawa υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DMSO (Veh) ή 1-10 μΜ φενρετινίδης που επάγεται απόπτωση σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο μέσα σε 24 ώρες της αγωγής όπως αποδεικνύεται από τις αυξήσεις στην διασπασμένης κασπάσης-9 και διασπάστηκε-PARP επίπεδα πρωτεΐνης με κηλίδωση Western. (Ε) Η επεξεργασία των κυττάρων Ishikawa με Megace δεν είχε καμία επίδραση στην αυτούς τους δείκτες απόπτωσης. Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Οι κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά 3 ανεξάρτητων πειραμάτων.

Η

φενρετινίδη ασκεί μια αύξηση στην πρόσληψη ρετινόλης μέσω Stra6 και CRBP1

Για να προσδιοριστεί η επίδραση της φενρετινίδης στο ρετινοϊκό οξύ μονοπάτι σηματοδότησης στον καρκίνο του ενδομητρίου, πραγματικού χρόνου RT PCR πραγματοποιήθηκε. Τα επίπεδα mRNA του Stra6, CRBP1 και CYP26A1 αυξήθηκε σημαντικά με την αγωγή φενρετινίδη [Fig.2 (Α-Ο)]. Το mRNA αυτών των γονιδίων παρέμεινε αμετάβλητο με τη θεραπεία Megace μόνο του ή σε συνδυασμό με φενρετινίδη [Σχ.3 (Α-C]. Ωστόσο, φενρετινίδη δεν έχει καμία επίδραση στα επίπεδα του mRNA των γονιδίων πυρηνικών υποδοχέων (RAR-α, ΚΑΚ-β , RXR- α), ή οι ενδο-κυτταροπλασματικές πρωτεΐνες φορείς CRABP2 και FABP5 (Σχήμα S1).

Ολικό RNA απομονώθηκε από κύτταρα Ishikawa σε επεξεργασία με DMSO (Veh) ή 0.25-10μM φενρετινίδη για 24 ώρες και το έκφραση των γονιδίων που εμπλέκονται στην πρόσληψη ρετινόλης μετρήθηκε με RT-qPCR. τα δεδομένα παρουσιάζονται ως φορές μεταβολής σε σχέση με την έκφραση του mRNA των κυττάρων που έλαβαν φενρετινίδης από DMSO επεξεργασμένα δείγματα κυττάρων και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM από 3 ανεξάρτητα πειράματα. ένας αστερίσκος υποδηλώνει μία σημαντική ( *

P

& lt? 0,05) αύξηση στην έκφραση του mRNA του (Α) Stra6, (Β) CRBP1 και (C) γονίδια CYP26A1 σε κύτταρα Ishikawa αντιμετωπίζονται με φενρετινίδη σε σύγκριση με ομάδα που υπέστη αγωγή DMSO

Ολικό RNA απομονώθηκε από κύτταρα Ishikawa σε επεξεργασία με DMSO (Vehicle), Megace, φενρετινίδη και ένα συνδυασμό Megace και φενρετινίδης δύο. Σχετική εκφράσεις mRNA του (Α) Stra6, (Β) CRBP1 και (C) CYP26A1 αναλύθηκαν με ΚΤ- qPCR. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως φορές μεταβολής σε σχέση με τις εκφράσεις του mRNA από δείγματα DMSO αγωγή και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM από 5 ανεξάρτητα πειράματα. Ένας αστερίσκος υποδηλώνει μία σημαντική (*

P

& lt? 0,05). Αύξηση στην έκφραση του mRNA αυτών των γονιδίων σε κύτταρα Ishikawa σε επεξεργασία με φενρετινίδη ή Megace + φενρετινίδη κύτταρα σε σύγκριση με DMSO επεξεργασμένα κύτταρα

Η

Stra6 knockdown επιρροές φενρετινίδη απόπτωση σε κύτταρα ενδομητρίου Ishikawa

Stra6 είναι ο κύριος υποδοχέας ρετινόλης κυτταρικής επιφάνειας στα κύτταρα που είναι υπεύθυνα για την πρόσληψη ρετινόλη. Για να διαπιστωθεί κατά πόσον Stra6 είναι απαραίτητη για φενρετινίδη επαγόμενη απόπτωση στα κύτταρα Ishikawa, ενδογενή έκφραση Stra6 χτυπήθηκε κάτω χρησιμοποιώντας siRNA. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Α, ήμασταν σε θέση να νοκ ντάουν σημαντικά (76%), η έκφραση Stra6 σε κύτταρα Ishikawa. Knockdown του Stra6 καταργεί την επαγόμενη φενρετινίδη απόπτωσης σε κύτταρα Ishikawa (Εικ. 4Β), όπως φαίνεται από μειωμένα επίπεδα της διασπασμένης κασπάσης-9 και διασπασμένη PARP όταν Stra6 έχει σιγήσει. Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν σθεναρά την υπόθεση μας ότι Stra6 είναι ζωτικής σημασίας για φενρετινίδη επαγόμενη απόπτωση σε κύτταρα του ενδομητρίου Ishikawa.

κύτταρα Ishikawa ήταν επιμολυσμένα με 30 nM siCTL (nontargeting αρνητικού ελέγχου siRNA) ή siSTRA6. (Α) ολικό RNA απομονώθηκε από μη επεξεργασμένα κύτταρα Ishikawa σε 3 διαδοχικές ημέρες μετά την επιμόλυνση και η έκφραση του γονιδίου Stra6 μετρήθηκε με RT-qPCR. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως φορές μεταβολής σε σχέση με την έκφραση του mRNA του Stra6 σε siSTRA6 επιμολυσμένα κύτταρα και siCTL επιμολυσμένα κύτταρα και αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM από 5 ανεξάρτητα πειράματα. Ένας αστερίσκος υποδηλώνει μία σημαντική (*

P

& lt? 0,05) μείωση της έκφρασης του mRNA του Stra6. (Β) κύτταρα διαμολυνθέντα Ishikawa υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DMSO (Veh) ή 6μΜ φενρετινίδη για 24 ώρες μετά και ανοσοαποτύπωση για αποπτωτικά δείκτες διεξήχθη. Stra6 έκφραση γονιδίου knockdown ανέστειλε φενρετινίδη επαγόμενη απόπτωση σε κύτταρα Ishikawa, όπως αποδεικνύεται από μειώσεις στα επίπεδα πρωτεΐνης της διασπασμένης κασπάσης-9 και διασπάστηκε-PARP. Οι κηλίδες είναι αντιπροσωπευτικά 3 ανεξάρτητων πειραμάτων

Η

φενρετινίδη αναστέλλει την εξέλιξη του όγκου: α. Μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού

Αρχική

in-vitro πρότεινε

παρατηρήσεις ότι η αντικαρκινική δράση της φενρετινίδης μπορεί να προκύψουν από τις δυνατότητές της για την προαγωγή της απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα. Για να εξεταστεί αυτό το αντικαρκινική δράση της φενρετινίδης

in-vivo

, οι ποντικοί εμφυτεύτηκαν με υποδόριους όγκους. θεραπεία φενρετινίδη κατέστειλε σημαντικά την εξέλιξη του όγκου σε ποντικούς σε σύγκριση με ποντικούς υπό αγωγή με όχημα (Εικόνα 5Β) με βάση φορές αλλαγή στο μέγεθος του όγκου. Οι μειώσεις στον όγκο του όγκου ήταν επίσης σημαντικό σε Megace αντιμετωπίζονται καθώς Megace + φενρετινίδη αγωγή (Σχήμα 5Β) συγκριτικά με ποντίκια με αγωγή με φορέα. Επιπλέον, τα ποντίκια φάνηκε να ανεχθούν φενρετινίδη και Megace θεραπείες χωρίς εμφανή συμπτώματα τοξικότητας ή σοβαρή απώλεια σωματικού βάρους σε σύγκριση με την ομάδα υπό αγωγή με όχημα (Εικόνα S2).

(Α) ωοθηκεκτομή nude CD-1 θηλυκά ποντίκια ενέθηκαν με τα κύτταρα Ishikawa και στις δύο πλευρές και σφαιρίδια οιστρογόνων εμφυτεύθηκαν. Οι όγκοι αφέθηκαν να αναπτυχθούν για 2 εβδομάδες. Μετά από 2 εβδομάδες εγκατάσταση του όγκου, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα (20 ποντικοί), Megace (19 ποντικοί), φενρετινίδη (21 ποντίκια) ή Megace + φενρετινίδης (20 ποντικοί) και οι όγκοι συλλέχθηκαν μετά από 3 εβδομάδες θεραπείας. (Β) Οι εικόνες των αντιπροσωπευτικών αποκόπηκε όγκων από κάθε ομάδα. (Γ) Το φορές αλλαγή στον όγκο του όγκου (από την ημέρα 1 έως την ημέρα θεραπεία της θυσίας) του οχήματος, fenretinde, meagce ή και τα δύο φενρετινίδη + ποντικούς που υπέστησαν αγωγή Megace απεικονίστηκε γραφικά μετά από 3 εβδομάδες θεραπείας. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσοι όροι ± min έως το μέγιστο όριο των δύο διαφορετικών πειραμάτων. Οι τιμές Ρ δείχνουν μια σημαντική αναστολή με φενρετινίδη, Megace ή Megace + φενρετινίδη τόσο στην αύξηση του όγκου (* Ρ & lt? 0,05). Η μεγαλύτερη μείωση του μεγέθους του όγκου παρατηρήθηκε στα ποντίκια που έλαβαν μόνο φενρετινίδη.

Η

Η θεραπεία με φενρετινίδη μειώνει τον πολλαπλασιασμό και αυξάνει απόπτωση σε ποντικούς όγκους

Η επίδραση της φενρετινίδης επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και απόπτωση εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία και η &? Ε χρώση τομών του ενδομητρίου όγκων Ishikawa μετά από 3 εβδομάδες θεραπείας. (Σχήμα 6). Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων, όπως μετράται με επίπεδα πρωτεΐνης Ki67, μειώθηκε με θεραπεία φενρετινίδη. Τα επίπεδα διασπασμένη κασπάση-3 (ένας δείκτης της απόπτωσης), ήταν αμελητέες στους όγκους του με φορέα ποντικούς που υπέστησαν αγωγή, ενώ οι πιο χρώση ήταν εμφανής στους όγκους των ποντικών που έλαβαν φενρετινίδης. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ανάπτυξη του όγκου Ishikawa καταστάλθηκε από φενρετινίδη μέσω της ικανότητάς της να αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την αύξηση στην απόπτωση των κυττάρων Ishikawa τόσο

in-vitro

& amp?

in-vivo

.

εκτομή όγκων μονιμοποιήθηκαν σε φορμόλη, παραφίνη και τομές. (Α) H & amp? Ε χρώση και ανοσοϊστοχημική χρώση με αντι-Κί67 αντίσωμα (δείκτης πολλαπλασιασμού) και αντι-διασπασμένη κασπάση -3 (δείκτης απόπτωσης) των ολόκληρα τμήματα της ξενομοσχευμάτων όγκου. (Β) Οι εικόνες είναι 100

μ

μ.

Η

Συζήτηση

φενρετινίδη έχει ήδη αποδειχθεί ότι είναι ένα αποτελεσματικό θεραπευτικό και chemopreventive εναλλακτική λύση του μαστού και των ωοθηκών καρκίνους [17]. Η παρούσα μελέτη καταδεικνύει τη χρήση φενρετινίδης ως ένα πιθανό αντικαρκινικό παράγοντα όγκου ενάντια στον καρκίνο του ενδομητρίου χρησιμοποιώντας τόσο

in-vitro

και

in-vivo μελέτες

. Φενρετινίδη μειώθηκε ανθρώπινου καρκίνου του ενδομητρίου Ishikawa η βιωσιμότητα των κυττάρων με διέγερση απόπτωσης, όπως καταδεικνύεται από την αύξηση των δεικτών κυτταρικού θανάτου (διασπασμένη κασπάση-9 και διασπασμένη PARP). Είναι επίσης ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου

in-vivo

, όπως φαίνεται από τη μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων (Ki67) και αύξηση στην απόπτωση (Διασπασμένη κασπάση 3) σε ξενομοσχεύματα όγκους ποντίκια. Επιπλέον, έχουμε δείξει ότι τα αντικαρκινικά αποτελέσματα της φενρετινίδης που προκαλούνται από την αύξηση στην πρόσληψη ρετινόλη, με αυξημένη έκφραση του Stra6 παρατηρήθηκαν σε κύτταρα επεξεργασμένα φενρετινίδη.

Πρόσφατα, μελέτες από Carrera et al έχουν δείξει το ρόλο του Stra6 σε μεσολάβηση ρ53 αποκρίσεις κυτταρικό θάνατο σε φυσιολογικά και καρκινικά κύτταρα, το οποίο είναι παρόμοιο με ευρήματα της έρευνας μας και βρέθηκε να είναι ανεξάρτητη από την προς τα κάτω ενεργοποίηση των στόχων RA [38]. Απέδειξαν ότι η επιμόλυνση με Stra6 προκάλεσε μία σημαντική ποσότητα απόπτωσης σε RA ευαίσθητα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών (ειδικά ΡΑ-1 και A1847), καθώς και στην RA αναίσθητη HCT116 του κόλου. Επιπλέον, οι συγγραφείς διαπίστωσαν ότι Stra6 επιμόλυνση που προκαλείται τόσο ένα προ-αποπτωτικών και όγκου κατασταλτική επηρεάζουν. Τα ευρήματα αυτά, σε συνδυασμό με τα ευρήματα της μελέτης μας, δείχνουν ότι η επαγωγή Stra6 μπορεί να έχει ένα δυναμικό ρόλο στην καταστολή των όγκων.

Προηγούμενη βιβλιογραφία προτείνει μια αλληλεπίδραση στην επιτυχή θεραπεία των καρκινικών κυττάρων με χημειοθεραπευτικά φάρμακα και τη δυνατότητά τους να προκαλέσουν αποπτωτικά μονοπάτια. Δεν είναι ακόμη σαφές εάν οι βιολογικές επιδράσεις των χημειοθεραπευτικών παραγόντων που προκαλούνται από μια άμεση αλληλεπίδραση με την πυρηνική υποδοχείς ρετινοειδών ή μέσω νέων οδών πυρηνικού υποδοχέα-ανεξάρτητη [39]. Βρήκαμε ότι η θεραπεία των κυττάρων με Ishikawa φενρετινίδη οδήγησε σε κυτταρική απόπτωση μέσω επαγωγής της κασπάσης-9, κασπάσης -3 και PARP. Η επαγωγή αυτών των αποπτωτικών οδών έχει επίσης παρατηρηθεί σε καρκίνο του μαστού [17] και τον καρκίνο των ωοθηκών [40]. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια φάσης III του μαστού δοκιμή πρόληψης του καρκίνου σε προεμμηνοπαυσιακές γυναίκες έδειξε ότι η θεραπεία με φενρετινίδη μείωσε την επίπτωση της δεύτερης κακοηθειών καρκίνους μαστού και ωοθήκης [41].

Σε αντίθεση με την παρούσα μελέτη μας, άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι ανάλογα ΡΑ μπορεί επίσης να δρουν ενεργοποιώντας τους πυρηνικούς υποδοχείς. Συγκεκριμένα, ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων Ishikawa μειώθηκε και απόπτωση που επάγεται μέσω σηματοδότησης RA περιλαμβάνουν ενεργοποίηση RAR /RXR [8].

Οι προγεστίνες έχουν από μακρού χρησιμοποιηθεί σε γυναίκες αναπαραγωγικής ηλικίας που θέλουν να διατηρήσουν τη γονιμότητά τους, καθώς και σε προχωρημένο και επαναλαμβανόμενες ενδομητρίου περιπτώσεων καρκίνου που δεν μπορεί να αντιμετωπιστεί με αντικαρκινικούς παράγοντες, ωστόσο, το 30% ή περισσότερο των ασθενών με καρκίνο του ενδομητρίου έκθεμα αντίσταση σε ορμονικές θεραπείες, περιορίζοντας τη χρήση της θεραπείας προγεστίνης [42]. Στην παρούσα μελέτη, Megace μόνη της δεν προκάλεσε καμία απόπτωση του ενδομητρίου μοντέλο καρκίνου μας, ούτε ενίσχυσε την αντι-δραστηριότητα του όγκου των φενρετινίδης

in-vitro

ή

in-vivo

.

Οι περιορισμοί της παρούσας μελέτης είναι η χρήση του ενιαίου μοντέλου του ποντικιού και η χρήση των καλλιεργημένων κυττάρων του ενδομητρίου Ishikawa, αντί των πρωτογενών ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα. Χρησιμοποιώντας πρωτογενή καλλιέργεια είναι δύσκολη λόγω της αδυναμίας να αναπτυχθούν πρωτογενή καρκινικά κύτταρα χωρίς παράγοντες στρωματικά. Περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται να διαπιστωθεί κατά του όγκου χωρητικότητα φενρετινίδης σε διαφορετικά ενδομητρίου καρκινικές κυτταρικές σειρές και τα μοντέλα όγκου ποντικού.

Εν κατακλείδι, έχουμε καταδείξει ότι φενρετινίδη μειώνει τη βιωσιμότητα των κυττάρων, αυξάνει την απόπτωση, και προκαλεί μείωση στο μέγεθος του όγκου. Πιστεύουμε ότι φενρετινίδη απόπτωση που επάγεται λόγω της αύξησης στην πρόσληψη ρετινόλη, ειδικά με αύξηση έκφρασης γονιδίου του Stra6. Πιστεύουμε ότι αυτή η μελέτη είναι οι πρώτοι που αποδεικνύουν ότι φενρετινίδη έχει πιθανές αντικαρκινικές κατά του καρκίνου του ενδομητρίου. Πιστεύουμε ότι οι μελλοντικές προκλινικές και κλινικές δοκιμές που απαιτούνται για την επικύρωση δυναμικό της ως μια νέα πιθανή θεραπευτική υποψήφιος για τη θεραπεία του καρκίνου του ενδομητρίου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Η επεξεργασία των κυττάρων με Ishikawa φενρετινίδη σε 0,25-10

μ

συγκεντρώσεις Μ για 24 ώρες δεν μετέβαλε την έκφραση των γονιδίων του πυρηνικού υποδοχέα ρετινοϊκού οξέος. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά του μέσου ± τυπικό σφάλμα από τρία διαφορετικά πειράματα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0110410.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

θεραπείες είτε με φενρετινίδη ή Megace δεν έχουν καμία επίδραση στο σωματικό βάρος του ποντικιού. Τα σωματικά βάρη μετρήθηκαν από το όχημα αντιμετωπίζεται ή ομάδες που έλαβαν το φάρμακο ποντικών δύο φορές την εβδομάδα καθ ‘όλη τη ρίμα πείραμα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0110410.s002

(ΔΕΘ)