Αφηρημένο

Ιστορικό

Η μετάσταση είναι η κύρια αιτία θανάτου που σχετίζονται με τον καρκίνο και στόχευση τη διαδικασία της μετάστασης έχει προταθεί ως μια στρατηγική για την καταπολέμηση του καρκίνου. Ως εκ τούτου, για την ανάπτυξη υποψήφιων φαρμάκων που στοχεύουν η διαδικασία της μετάστασης είναι πολύ σημαντική. Στις προκαταρκτικές μελέτες, διαπιστώσαμε ότι Schisandrin Β (Sch Β), ένα φυσικώς απαντώμενο dibenzocyclooctadiene λιγνανών με πολύ χαμηλή τοξικότητα, θα μπορούσε να καταστείλει τη μετάσταση καρκίνου.

Μεθοδολογία

ποντίκια

BALB /c εμβολιάσθηκαν υποδορίως ή με ένεση μέσω της φλέβας της ουράς με καρκίνο του μαστού ποντικού 4Τ1 κύτταρα. Τα ποντίκια χωρίστηκαν σε Β-θεραπεία και έλεγχο ομάδες Sch. Η κύρια ανάπτυξη όγκου, την τοπική εισβολή, του πνεύμονα και των οστών μετάσταση, και ο χρόνος επιβίωσης παρακολουθήθηκε. βιοψίες των όγκων εξετάστηκαν ανοσοανεπάρκειας και ιστο-παθολογικά. Η ανασταλτική δραστικότητα των Sch Β επί ΤΟΡ-β επαγόμενη επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) του 4Τ1 και πρωτοπαθή καρκινικά κύτταρα ανθρώπινου μαστού αναλύθηκε.

Principal Εκτίμηση

Sch Β κατέστειλε σημαντικά την αυθόρμητη πνεύμονα και των οστών μετάσταση των κυττάρων 4Τ1 εμβολιάζονται sc χωρίς σημαντική επίδραση στην πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου και σημαντικά διευρυνθεί το χρόνο επιβίωσης των ποντικών αυτών. Sch Β δεν ανέστειλε μετάσταση στους πνεύμονες των 4Τ1 κύτταρα που ενέθηκαν μέσω της φλέβας της ουράς. Η καθυστερημένη έναρξη της θεραπείας με Sch Β σε ποντικούς με προϋπάρχουσα όγκοι δεν μειώνουν τη μετάσταση του πνεύμονα. Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι Sch Β έδρασε στο στάδιο της τοπικής εισβολής. Ιστοπαθολογική αποδείξεις έδειξαν ότι οι πρωτογενείς όγκοι στην ομάδα Sch Β ήταν σημαντικά λιγότερο τοπικά επεμβατική από όγκους ελέγχου. Ιη vitro δοκιμασίες έδειξαν ότι Sch Β θα μπορούσε να αναστείλει ΤΟΡ-β επαγόμενη EMT των 4Τ1 κυττάρων και πρωτογενών ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του μαστού.

Συμπεράσματα

Sch Β καταστέλλει σημαντικά το πνεύμονα και των οστών μετάσταση των κυττάρων 4Τ1 μέσω αναστολής της EMT, γεγονός που υποδηλώνει πιθανή εφαρμογή της στην στόχευση τη διαδικασία της μετάστασης του καρκίνου

Παράθεση:. Liu Ζ, Zhang Β, Liu Κ, Ding Ζ, Χου X (2012) Schisandrin Β Εξασθενεί Καρκίνος εισβολή και μετάσταση Via Αναστολής μεταβάσεως επιθηλίου-μεσεγχύματος. PLoS ONE 7 (7): e40480. doi: 10.1371 /journal.pone.0040480

Επιμέλεια: Jonas Fuxe, Ινστιτούτο Καρολίνσκα, στη Σουηδία

Ελήφθη: 30ης Ιανουαρίου 2012? Αποδεκτές: 8 Ιούν, 2012? Δημοσιεύθηκε: 25, Ιουλ 2012

Copyright: © 2012 Liu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από την Εθνική 863 του έργου (2007AA02Z143), έργα Κίνα Φυσικών Επιστημών Ίδρυμα (30772544, 81071802) και των Θεμελιωδών Κονδυλίων Έρευνας για τις Κεντρικές πανεπιστήμια, Υπουργείο Εθνικής Παιδείας, την Κίνα, για να X. Χου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του μαστού είναι η κορυφαία απειλή για τις γυναίκες, με εκτιμώμενο 1,4 εκατομμύρια νέα κρούσματα και 458.000 θανάτους το 2008 σε όλο τον κόσμο [1]. Για τις δύο τελευταίες δεκαετίες, εντάξεις των χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία, θεραπεία εμμηνόπαυση ορμονών, και αντι-HER2 φάρμακα συμβάλλουν σημαντικά στη μείωση της θνησιμότητας [2]. Παρ ‘όλα αυτά, παρά τις σημαντικές προόδους, περιφερικό μετάσταση του καρκίνου του μαστού σε σπλαχνικά όργανα και τα οστά είναι ακόμα ανεπαρκώς επιλυθεί [1], [3], [4].

μετάστασης του καρκίνου είναι μια διαδικασία πολλών σταδίων που περιλαμβάνει την τοπική εισβολή, ενδαγγείωση στους λεμφαδένες και το αίμα των συστημάτων, η επιβίωση στην κυκλοφορία του αίματος, εξαγγείωση από τα μικροαγγεία και αποικισμού σε δευτερεύοντα χώρο [5], [6]. Πολυάριθμες μελέτες έχουν αποκαλύψει την εικόνα των μηχανισμών κάθε βήμα της μετάστασης του καρκίνου [7], [8]. Η πολλαπλών βημάτων της μετάστασης του καρκίνου και την κατανόηση των σχετικών μηχανισμών παρέχει πολλές ευκαιρίες για τις χημικές παρεμβάσεις [9].

5 × 10

4 βιώσιμα κύτταρα 4Τ1 εμβολιάζονται

sc

προς τη σωστή δεύτερο μαστικού περιοχή μαξιλάρι λίπους για να καθοριστεί η αυθόρμητα μεταστατικό μοντέλο. Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα (0,5% paraxamer) δοσολογήθηκε ενδογαστρικά κάθε μέρα για ένα σύνολο 7 δόσεων. Ποντίκια (n = 20 για κάθε ομάδα) θυσιάστηκαν την ημέρα 30. (Α) τις καμπύλες αύξησης του πρωτογενούς όγκου (Β) ποντίκι σωματικού βάρους. (C) Πρωτογενής βάρος του όγκου κατά την ημέρα θυσιαστεί. (Δ) Ο αριθμός των ορατών οζιδίων του πνεύμονα μεταστατικό. (Ε) Ο δείκτης μεταστατικό πνεύμονα. *, P & lt? 0,05, **, Ρ & lt? 0,01

Η

Schisandrin Β (Sch Β) είναι η πιο άφθονη dibenzocyclooctadiene λιγνανών που υπάρχουν στο παραδοσιακό κινεζικό φαρμακευτικό φυτό

Σχιζάνδρα

(.

Turcz.

)

Baill

. Κατά τα τελευταία χρόνια, Sch Β έχει αποκαλυφθεί ότι διαθέτει πολλαπλές λειτουργίες κατά του καρκίνου. Εμείς και άλλοι έχουν αναφερθεί στο παρελθόν ότι Sch Β ήταν ένας διπλός αναστολέας της Ρ-γλυκοπρωτεΐνη και ανθεκτικότητα σε πολλαπλά φάρμακα πρωτεΐνη 1 (MRP1) [10], [11], [12], [13], [14], [15]. Sch Β θα μπορούσε επίσης να ενισχύσει την δοξορουβικίνη επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα, μέσω της ενεργοποίησης των μιτοχονδριακών αποπτωτικό μονοπάτι, χωρίς εμφανή ενισχυμένη τοξικότητα προς τα φυσιολογικά κύτταρα [16], τον μετριασμό δοξορουβικίνη επαγόμενη οξεία και χρόνια καρδιοτοξικότητα [17], [18], το μετριασμό σισπλατίνη επαγόμενη από οξειδωτικό στρες, γονιδιοτοξικότητας και νευροτοξικότητα [19], και αναστέλλουν την δραστικότητα κινάσης πρωτεΐνης ATR σε απόκριση σε βλάβη του DNA [20]. Σε μια πιλοτική μελέτη που είχε ως στόχο να παρατηρηθεί η επίδραση της Sch Β για την ενίσχυση της επίδρασης κατά του όγκου δοξορουβικίνη για τον καρκίνο του μαστού ποντικού 4Τ1 κύτταρα, παρατηρήσαμε ότι Sch Β και μόνο θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά την αυθόρμητη μετάσταση στους πνεύμονες του 4Τ1. Αυτή η προκαταρκτική παρατήρηση μας ώθησε να πραγματοποιήσει αυτή τη μελέτη για τη διερεύνηση του ανασταλτικού αποτελέσματος της Sch Β 4Τ1 in vivo μετάσταση.

5 × 10

4 βιώσιμα κύτταρα 4Τ1 εμβολιάζονται

sc

στην η δεύτερη δεξιά του μαστού περιοχή μαξιλάρι λίπους για να καθοριστεί η αυθόρμητα μεταστατικό μοντέλο. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα κάθε μέρα για ένα σύνολο 7 δόσεων. Πρωτογενή όγκοι αποκόπηκαν την ημέρα 10. Δύο τρίτα των ποντικών (n = 20 για κάθε ομάδα) θυσιάστηκαν την ημέρα 30 και το ένα τρίτο των ποντικών (n = 10 για κάθε ομάδα) ήταν για το πείραμα επιβίωση. (Α) Ο αριθμός των ορατών μεταστάσεων 4Τ1 πνεύμονα. μεταστατικού δείκτη (Β) του πνεύμονα υπολογίζεται από την H & amp? χρώση Ε. χρόνο επιβίωσης (C) Ποντίκι. (D) Mouse σωματικού βάρους. (Ε) Το βάρος του όγκου εκτομή την ημέρα 10. *, P & lt? 0,05, **, Ρ & lt?. 0.01

Η

Ποντίκια (n = 8 για κάθε ομάδα) που έλαβαν Sch Β (100, 30, 10 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα κάθε ημέρα για συνολικά 7 δόσεις, και πρωτογενείς όγκοι αποκόπηκαν την ημέρα ώρα 10. (Α) επιβίωση ποντίκι. (Β) ποντίκι σωματικού βάρους. (Γ) Το βάρος του όγκου εκτομή την ημέρα 10. *, P & lt? 0,05, **, Ρ & lt? 0,01, Sch Β σε σχέση με την ομάδα ελέγχου

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Χημικά και αντισώματα.

Sch Β ήταν από το Εθνικό Ινστιτούτο για τον έλεγχο Φαρμακευτικών και Βιολογικών Προϊόντων (Πεκίνο, Κίνα). Η ανασυνδυασμένη ανθρώπινη ανάπτυξη του όγκου παράγοντα-β1 (ΤΟΡ-β) αγοράστηκε από την PeproTech Inc. (Rocky Hill, NJ). Επιθηλιακά-μεσεγχυματικά σετ δειγματολήπτη μετάβαση αντίσωμα (# 9782, συμπεριλαμβανομένης της E-cadherin, σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας & amp? ZEB1 αντισώματα) αγοράστηκαν από Cell Signaling Technology (Beverly, ΜΑ). Vimentin (# 550513) και ινωδονεκτίνη (# 610078) αντισώματα ήταν προϊόντα της BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ). Ροδαμίνη phalloidin (# R415) αγοράστηκε από την Invitrogen Corporation (Carlsbad, CA)

Bone μετάσταση των 4Τ1 σε ποντίκια φαίνεται στο Σχήμα 2 αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας Η &?. Χρώση Ε όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Η συχνότητα εμφάνισης των οστικών μεταστάσεων αντικατοπτρίστηκε από την ορατή οστεόλυση. (Α) Εκπρόσωπος φωτογραφία μετάσταση στα οστά. Οστεόλυσης σημαδεύτηκε από το βέλος. (Β) Εκπρόσωπος φωτογραφία των οστών χωρίς οστεόλυση. (Γ) Η συχνότητα εμφάνισης μετάστασης οστών (n = 20) σε σύγκριση με χρήση ανάλυσης chi-square. *, P & lt?. 0.05, Σχ Β σε σχέση με την ομάδα ελέγχου

Η

Cell Culture

4Τ1 κύτταρα από την Κινεζική Ακαδημία Επιστημών κυττάρων Τράπεζας Type Culture Collection (Σαγκάη, Κίνα) και καλλιεργήθηκαν σε μονοστιβάδες σε μέσο RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), 100 μg /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη. MDA-MB-231 αγοράστηκαν από την American Tissue Culture Collection (Αρ ΗΤΒ-26? ATCC, Manassas, VA) και διατηρήθηκαν σε μέσο L-15 με 10% FBS Leibovitz, το 100 μg /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη (όλα από την Invitrogen). Αμφότερα τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε υγροποιημένο επωαστή στους 37 ° C 5% CO

2 ατμόσφαιρα

(Α) ουρά μοντέλο ένεση φλέβα:. Ποντικών (η = 10 για κάθε ομάδα) καθετηριάστηκαν με Sch Β ( ημερήσιες δόσεις: 30 ή 100 mg /kg σωματικού βάρους ή όχημα) για 3 ημέρες πριν από 4Τ1 κυτταρική ενοφθαλμισμό. Στη συνέχεια, κάθε ποντικός εμβολιάστηκε με 2 × 10

5 4Τ1 κύτταρα μέσω ένεσης στην ουραία φλέβα, που ακολουθείται από κατεργασία με Sch Β (ημερήσιες δόσεις: καθετηριάζονται με 30 ή 100 mg /kg σωματικού βάρους ή όχημα) για τις επόμενες διαδοχικές 7 ημέρα και θανατώθηκαν την ημέρα 18. (Β) Καθυστέρηση μοντέλο θεραπείας. Οι ποντικοί (η = 10 για κάθε ομάδα) εμβολιάστηκαν με 5 × 10

4 4Τ1 κύτταρα

s.c

. στο δεύτερο δεξιά περιοχή ταμπόν λίπος του μαστού, και πρωτογενείς όγκοι αποκόπηκαν την ημέρα 10. Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα χορηγήθηκε κάθε ημέρα από την ημέρα 13-19 για ένα σύνολο 7 δόσεων, και οι ποντικοί θανατώθηκαν την ημέρα 30. Η μετάσταση πνεύμονα βαθμολογήθηκε με μακροσκοπική μεταστατικό οζίδιο όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. *, P & lt? 0,05, Sch Β σε σχέση με την ομάδα ελέγχου

Η

Πρωτοβάθμια Cell Culture

Φρέσκα όγκους του μαστού ελήφθησαν από ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση με τη γραπτή συγκατάθεση.. επιλέχθηκαν δείγματα της διεισδύοντας πορογενές καρκίνωμα του μαστού χωρίς χημειοθεραπεία για την καλλιέργεια κυττάρων, όπως περιγράφεται από Speirs et al. [21]. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε HuMEC Ready Medium (Invitrogen) συμπληρωμένο με 2% FBS σε ένα υγροποιημένο επωαστή στους 37 ° C 5% CO

2 ατμόσφαιρα.

Ποντίκια (n = 20 για κάθε ομάδα) υποβλήθηκαν σε αγωγή με Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα ενδογαστρικά ημερησίως για 7 ημέρες. (Α) Πρωτοβάθμια όγκους και περιβάλλοντες ιστούς αποκόπηκαν την ημέρα 15 για αιματοξυλίνη-ηωσίνης (άνω, × 40, κάτω, × 100). (Β) ανοσοχρώση της Ε-καδερίνης και βιμεντίνη. (Χ 100).

Η

Ζώα

Θηλυκά BALB /c και BALB /c ηυ /ηυ ποντίκια (18-22 g) ελήφθησαν από τη Σαγκάη SLAC Laboratory Animal Co., Ltd (Σαγκάη, Κίνα? πιστοποιητικό των ζώων: Όχι SCXK [Hu] 2007 έως 0005). Τα ζώα στεγάστηκαν σε ένα πρότυπο κλουβί πολυπροπυλενίου που περιέχει στείρο κλινοσκεπάσματα υπό ελεγχόμενη συνθήκες θερμοκρασίας (23 ± 2 ° C), υγρασία (50 ± 5%), και το φως (10 και 14 ώρες φωτός και σκότους) σε Zhejiang University Laboratory Animal κέντρο (Αρ SYXK [Zhe] 2.007 έως 0.029).

4Τ1 Συγγενής μοντέλο ξενομοσχεύματος

το ζωικό μοντέλο βασίζεται στην προηγούμενη έκθεση [22]. Κάθε ποντίκι εμβολιάζεται με 5 × 10

4 βιώσιμα κύτταρα 4Τ1

υποδορίως

. στο δεύτερο δεξιά περιοχή μαξιλάρι λίπος του μαστού. Τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε Β ή ομάδα ελέγχου Sch την επόμενη μέρα μετά τον εμβολιασμό. Κάθε ποντικός καθετηριάζονται με είτε Sch Β (100, 30, ή 10 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα (0,5% paraxamer, Sigma) κάθε μέρα για ένα σύνολο 7 δόσεων. Για να διερευνηθεί η επίδραση της Sch Β επί 4Τ1 μετάσταση, χρησιμοποιήσαμε 3 πρωτόκολλα. Πρώτον, οι ποντικοί καθετηριάστηκαν με Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους), και οι όγκοι αυξήθηκαν χωρίς διακοπή. Δεύτερον, οι ποντικοί δοσολογήθηκαν με Sch Β (100 mg /kg βάρους σώματος) και, στη συνέχεια, πρωτογενείς όγκοι αποκόπηκαν την ημέρα 10 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23]. Τρίτον, οι ποντικοί χορηγήθηκαν με τρεις δόσεις του Sch Β (100, 30, ή 10 mg /kg σωματικού βάρους) και πρωτογενείς όγκοι αφαιρέθηκαν την ημέρα 10. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε με παχύμετρο δύο ή τρεις φορές εβδομαδιαία και υπολογίζεται από έλλειψη τύπος όγκου V = (L χ W

2) × 0,5, όπου L είναι το μήκος και το W είναι το πλάτος. πνευμονικών μεταστάσεων βαθμολογήθηκαν με απαρίθμηση των μακροσκοπικών μεταστατικά οζίδια βασίζεται στις προηγούμενες εκθέσεις [24], [25], και ο μέσος αριθμός των πνευμονικών μεταστάσεων ανά ποντικό προσδιορίσθηκε ως δείκτης της γενικής διάδοσης του καρκίνου [23], [26].

τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Sch Β (5 μg /ml) και ΤΟΡ-β (5 ng /ml) όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. (Α) Αντιπροσωπευτική φωτογραφίες του ΤΟΡ-β επαγόμενη μορφολογική αλλαγή των 4Τ1 κυττάρων με ή χωρίς προκατεργασία του Sch Β (Β) Fluorescence ανοσοχρώση κυτταρικών Ε-καδερίνης, βιμεντίνη, ινωδονεκτίνη, και F-ακτίνης. (Γ) Western στύπωμα της Ε-καδερίνης, βιμεντίνη, σαλιγκάρι, Slug, ZEB1, με β-ακτίνη ως εσωτερικό έλεγχο. (Δ) και (Ε), που προκαλείται από ΤΟΡ-β μετανάστευση και εισβολή 4Τ1 κυττάρων με ή χωρίς προκατεργασία του Sch Β (F) Αντιπροσωπευτική φωτογραφίες του ΤΟΡ-επαγόμενης τη μορφολογική αλλαγή του καρκίνου του μαστού πρωτογενών κυττάρων με ή χωρίς προκατεργασία των Sch Β και κηλίδωση Western της Ε-καδερίνης και βιμεντίνης πρωτογενών κυττάρων καρκίνου του μαστού από τρεις μεμονωμένους ασθενείς.

Η

Καθυστερημένη Μοντέλο Θεραπεία

Πρωτογενής όγκοι αποκόπηκαν την ημέρα 10, και Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα καθετηριάζονται την ημέρα 13-19. Όλα τα ζώα θανατώθηκαν την ημέρα 30 για τη συλλογή δεδομένων.

φλέβα της ουράς Injection Μοντέλο

Αυτή η in vivo μοντέλο βασίζεται στην προηγούμενη έκθεση [27]. Πριν τον εμβολιασμό με κύτταρα 4Τ1, κάθε ποντικός καθετηριάζονται με Sch Β (30, 100 mg /kg) ή φορέα (0,5% paraxamer) για 3 διαδοχικές ημέρες. Κάθε ποντικός στη συνέχεια εμβολιάζεται με 2 × 10

5 κύτταρα ενδοφλεβίως μέσω ένεσης στην ουραία φλέβα, που ακολουθείται από Sch Β ή θεραπεία όχημα για τις επόμενες 7 διαδοχικές ημέρες. Όλοι οι ποντικοί θανατώθηκαν την ημέρα 18.

MDA-MB-231 in vivo ζωικό μοντέλο

Κάθε ποντικός εμβολιάστηκε με 5 × 10

6 MDA-MB-231 κύτταρα

sc

. στο δεύτερο δεξιά περιοχή μαξιλάρι λίπος του μαστού. Τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε Β ή ομάδα ελέγχου Sch την επόμενη μέρα μετά τον εμβολιασμό. Κάθε ποντικός καθετηριάζονται με είτε Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους) ή όχημα (0,5% paraxamer, Sigma) για τις επόμενες 7 διαδοχικές ημέρες με συνολικά 7 δόσεις. Τα ποντίκια θανατώθηκαν την ημέρα 30 μετά τον εμβολιασμό

Κριτήριο για την αξιολόγηση της Mouse ετοιμοθάνατα Κατάσταση

Ένα ετοιμοθάνατα ποντίκι ορίζεται ως μία η οποία εμφανίζει περισσότερες από μία από τις ακόλουθες έξι κλινικά σημεία:. Ανικανότητα να φάνε ή το ποτό? σοβαρές λήθαργο (απροθυμία να κινηθεί, όταν σπρώχνεται απαλά με λαβίδες)? σοβαρά την ισορροπία ή βάδισμα διαταραχή, σύμφωνα με το κριτήριο ΝΙΗ [28].

Η ιστολογική Αναλύσεις

όγκου ιστού έχει καθοριστεί, ενσωματωμένο, και κομμένο σε 5 μm πάχους τομές. τομές παραφίνης χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) (Sigma). Για ανοσοϊστοχημεία, ανοσοχρώση της Ε-καδερίνης και βιμεντίνης διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα πρότυπο πρωτόκολλο [29]. Τα H & amp? Τμήματα Ε αξιολογήθηκαν και φωτογραφήθηκαν με Nikon Eclipse 50i μικροσκόπιο ελεγχόμενο από το λογισμικό ΝΑΚ-Στοιχεία (έκδοση 3.22). Η σχετική περιοχή των μεταστάσεων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ 1.45S (ΝΙΗ) [30]. Lung μετάσταση ποσοτικοποιήθηκε μετρώντας τη συνολική έκταση του ιστού ανά τμήμα πνεύμονα (D1) και τη μετάσταση παρόν στην ίδια περιοχή (D2). Το μεταστατικό δείκτης υπολογίστηκε από την αναλογία D2 /D1 [31]. Για μετάσταση στα οστά, το πόδι οστά (μηροί και κνήμες) σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη, απασβεστώθηκαν σε 1% HCl για 24 ώρες, και ενσωματωμένα σε παραφίνη. Οι τομές χρωματίστηκαν με Η &? Ε και εξετάσθηκαν μικροσκοπικά. Η συχνότητα εμφάνισης των οστικών μεταστάσεων αντανακλάται από την ορατή οστεόλυση [32].

Κυττάρου τοξικότητα του Sch Β κύτταρα 4Τ1

2 × 10

3 κύτταρα σπάρθηκαν ανά φρεάτιο σε 96- φρεατίων. Sch Β (5, 10, 20, 40, 80, 160 μg /ml) προστέθηκε και καλλιεργήθηκε για 60 ώρες, η βιωσιμότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε με αποκλεισμό trypan blue. Έξι φρεάτια μετρήθηκαν για κάθε συγκέντρωση. Οι μισοί ανασταλτική συγκέντρωση (IC 50

) προσδιορίστηκε.

Επίδραση του Sch Β TGF-β Induced EMT

Τα μυϊκά κύτταρα 4Τ1 και ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του μαστού πρωτογενή υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με Sch Β (5 μg /ml) για 24 ώρες, στη συνέχεια ΤΟΡ-β (5 ng /ml) προστέθηκε και καλλιεργήθηκε για άλλες 36 ώρες. Τα κυτταρολύματα χρησιμοποιήθηκαν στην κηλίδωση Western ανάλυση όπως περιγράφηκε προηγουμένως [33]. Ο φθορισμός ανοσοχρώση πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τα προηγούμενα αναφερθείσα μέθοδο μας [34].

κυτταρική μετανάστευση και εισβολή Δοκιμασίες

Για τις δοκιμασίες μετανάστευσης, 2 × 10

5 κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκες έξι φρεατίων . Μετά την προεπεξεργασία του Sch Β (5 μg /ml) για 24 ώρες, η συγκέντρωση FBS του μέσου καλλιέργειας αλλάχθηκε σε 2% και ένα τραύμα τέμνεται όπως περιγράφηκε προηγουμένως [35]. Στη συνέχεια, ΤΟΡ-β (5 ng /ml) προστέθηκε και καλλιεργήθηκε για άλλες 24 ώρες, φωτογραφίες λήφθηκαν με μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης. Transwell (Corning Costar, Cambridge, ΜΑ) με ένα φίλτρο επικαλυμμένο με Matrigel (BD Biosciences) χρησιμοποιήθηκε για προσδιορισμούς εισβολής. 4 × 10

3 κύτταρα σε άνευ ορού RPMI-1640 σπάρθηκαν σε 24 φρεατίων Transwell ανώτερο θάλαμο, οι κάτω θάλαμοι πληρώθηκαν με RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% FBS ως χημειο-προσελκυστικό. Μετά από 12 ώρες προεπεξεργασίας του Sch Β (5 μg /ml) και στις δύο άνω θάλαμο και κάτω θάλαμο, ΤΟΡ-β (5 ng /ml) προστέθηκε και υποβλήθηκε σε επεξεργασία για ακόμη 12 ώρες. Στο τέλος των δοκιμασιών, η πλευρά του φίλτρου του άνω θαλάμου καθαριζόταν με μια μπατονέτα και το φίλτρο χρωματίστηκε για μία ώρα με κρυσταλλικό ιώδες (Sigma) σε 2% αιθανόλη και στη συνέχεια ξεπλένονται με νερό. Στη συνέχεια, τα κύτταρα επί του φίλτρου μετρήθηκαν σε τουλάχιστον 10 πεδία κάτω από την όψη ενός μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης.

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση ± SD. επιβίωση του ποντικιού αξιολογήθηκε με ανάλυση Kaplan-Meier και τη δοκιμασία log rank. Ανάλυση Chi-square χρησιμοποιήθηκε για σύγκριση μετάσταση στα οστά. Student t τεστ χρησιμοποιήθηκαν για τη σύγκριση μεταξύ δύο μέσων τιμών. Οι τιμές Ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Ηθική Δήλωση

Η μελέτη σε ζώα εγκρίθηκε από το θεσμικό ζώο επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Zhejiang με την έγκριση του αρ zju-2009-1-01- 028. Ανθρώπινων όγκων ελήφθησαν με τη γραπτή συγκατάθεση από τους ασθενείς και μετά από ένα πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της δεύτερης συνδεδεμένες νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Zhejiang.

Αποτελέσματα

Sch Β μειώνει σημαντικά 4Τ1 μετάσταση στους πνεύμονες χωρίς Αναστολή επί πρωτογενούς όγκου

4Τ1 συνγονιδιακό μοντέλο ξενομοσχεύματος είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο για να μελετηθεί η αυθόρμητη μετάσταση του καρκίνου [36]. Η κύρια μεταστατική θέση αυτού του μοντέλου είναι πνεύμονα [22]. Χρησιμοποιώντας αυτό το μοντέλο, βρήκαμε ότι Sch Β μειωθεί σημαντικά 4Τ1 μετάσταση στους πνεύμονες, αλλά χωρίς σημαντική αναστολή σε πρωτογενείς όγκους (Εικ. 1).

Sch Β Αυξάνει σημαντικά την επιβίωση Χρόνος ποντίκια Via Ανασταλτικών 4Τ1 μετάσταση στους πνεύμονες

για να αποκλεισθεί η επίδραση του πρωτογενούς όγκου στο χρόνο ποντίκια επιβίωσης, απομακρύναμε πρωτογενούς όγκου με χειρουργική εκτομή την ημέρα 10 μετά τον εμβολιασμό 4Τ1. Στη συνέχεια, δύο πειράματα με διαφορετικούς σκοπούς πραγματοποιήθηκαν σε αυτά τα ποντίκια. Πείραμα 1 ήταν να παρατηρηθεί η μετάσταση πνεύμονα. Οι ποντικοί θανατώθηκαν την ημέρα 30 μετά τον εμβολιασμό, εξετάστηκε και μετάσταση πνεύμονα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι Sch Β ανέστειλαν σημαντικά 4Τ1 μετάσταση στους πνεύμονες (Εικόνα 2 Α & amp?. Β & amp? Εικ. S1). Πείραμα 2 ήταν να παρατηρήσει το χρόνο επιβίωσης. Σύκο. 2C έδειξαν ότι τα ποντίκια που έλαβαν Sch Β έζησαν σημαντικά περισσότερο από τον έλεγχο και το αποτέλεσμα αυτό ήταν δοσοεξαρτώμενη (Εικ. 3Α). Οι καμπύλες ανάπτυξης των ποντικών και το βάρος των όγκων ήταν συγκρίσιμα μεταξύ Sch Β και της ομάδας ελέγχου (Εικόνα 2D & amp?.. Ε, το Σχ 3Β & amp? C).

Σημειώνεται ότι το 10% των ποντικών που λαμβάνουν Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους, Σχήμα 2C & amp?. 3Α) επιβίωσαν για 3 μήνες, μετά το οποίο το πείραμα τερματίστηκε. Αυτό το φαινόμενο παρατηρήθηκε σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. Αυτοί οι ποντικοί εκτελέστηκαν και εξετάστηκαν παθολογικά. Δεν υπήρχαν ορατά μετάσταση στους πνεύμονες σε αυτά τα ποντίκια (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Έχει αποδειχθεί από Pulaski και Demaria [37], [38], ότι η μετάσταση του 4Τ1 συγγενικών όγκων θα μπορούσε να συμβεί σε πολύ πρώιμο στάδιο (π.χ. εντός της πρώτης εβδομάδας μετά sc τον εμβολιασμό), και η μελέτη μας δείχνει ότι Sch Β θα μπορούσε να παρέμβει με την πρώιμη μετάσταση. Σταθερά, δείξαμε ότι Sch Β θα μπορούσε να μετριάσει 4Τ1 τοπική εισβολή in vivo και αναστέλλουν EMT in vitro (βλέπε παρακάτω). Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η πρώιμη χειρουργική (π.χ., χειρουργική επέμβαση γίνεται μέσα σε 10 ημέρες μετά τον εμβολιασμό) σε συνδυασμό με θεραπεία Sch Β μπορεί να μπλοκάρουν πλήρως την in vivo μετάσταση των 4Τ1 κυττάρων.

Sch Β Εξασθενεί 4Τ1 μετάσταση σε Bone

Το μοντέλο ποντικού 4Τ1 χρησιμοποιείται συνήθως ως ένα μοντέλο μαστικού μετάστασης του καρκίνου στα οστά [32], [39]. Η αναστολή μαστικού μετάσταση όγκου στον πνεύμονα μπορεί να εκτρέψει τα καρκινικά κύτταρα να κάνουν μετάσταση σε εναλλακτικές όργανα όπως οστό [32]. Για να αποκλειστεί αυτό το ενδεχόμενο, ερευνήσαμε αν Sch Β θα εκτρέψει 4Τ1 με μετάσταση στα οστά. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι Sch Β μειωθεί σημαντικά 4Τ1 μετάσταση στα οστά (Σχήμα 4), όπως αντικατοπτρίζεται από τη σοβαρότητα της οστεόλυσης.

Sch Β Αναστέλλει Τοπική εισβολή των 4Τ1 κύτταρα

Αν και ανέφερε τα παραπάνω αποτελέσματα ότι Sch Β θα μπορούσε να αναστείλει 4Τ1 πνεύμονα και οστικές μεταστάσεις, δεν ήταν γνωστό πώς Sch Β παρενέβαινε με 4Τ1 μετάσταση. Δεδομένου ότι η μετάσταση του καρκίνου είναι μια πολύπλοκη διαδικασία που περιλαμβάνει τοπική εισβολή, ενδαγγείωση, η επιβίωση στην κυκλοφορία του αίματος, εξαγγείωση και ο αποικισμός σε δευτερεύοντα χώρο, θα ήταν σημαντικό να προσδιοριστούν κατά την οποία το βήμα Sch Β παρεμβαίνει 4Τ1 μετάσταση. Νομίζαμε ότι το μοντέλο μέσω ένεσης στην ουραία φλέβα των καρκινικών κυττάρων μπορεί να βοηθήσει για να πει εάν Sch Β διαταράσσει μετάσταση στο βήμα της τοπικής εισβολής ή όχι. Εάν Sch Β δεν αναστέλλει μετάσταση στους πνεύμονες των 4Τ1 κυττάρων με ένεση μέσω της φλέβας της ουράς, θα πρέπει να παρεμβαίνει με 4Τ1 μετάσταση στο στάδιο της τοπικής εισβολής. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι Sch Β δεν είχε σημαντικές ανασταλτικές επιδράσεις στη μετάσταση στους πνεύμονες των 4Τ1 κυττάρων μέσω ένεσης στην ουραία φλέβα (Εικ. 5Α).

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω εάν Sch Β επηρεάζει 4Τ1 μετάσταση στο στάδιο της πρώιμο στάδιο , πραγματοποιήσαμε ένα πείραμα της καθυστερημένης θεραπείας με Sch Β σε ποντικούς με προϋπάρχουσα όγκους. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η καθυστερημένη αγωγή με Sch Β δεν είχε σημαντική επίδραση επί 4Τ1 μετάσταση (Εικ. 5Β).

Με βάση τα παραπάνω αποτελέσματα, πραγματοποιήσαμε την ιστοπαθολογική εξέταση. Όπως φαίνεται στο Fig.6A, τα καρκινικά κύτταρα είχαν εισβάλει βαθιά μέσα στους μυς στα περισσότερα των πρωτογενών όγκων σε ομάδα ελέγχου (13 από 20), ενώ στην ομάδα Β Sch, οι περισσότεροι όγκοι έδειξαν μια σαφή διαχωριστική γραμμή μεταξύ της περιοχής των κυττάρων του όγκου και μύες (14 από 20). Επιπλέον, τα κύτταρα του περιθωρίου όγκου σε ομάδα ελέγχου ήταν ατρακτοειδή, περισσότερο σαν μεσεγχυματικά κύτταρα, ενώ στην ομάδα Sch Β, κύτταρα όγκου διατηρούνται «λιθόστρωτο» μορφολογία, περισσότερο σαν επιθηλιακά κύτταρα. Οι παρατηρήσεις αυτές πρότειναν ότι Sch Β μπορεί να αναστέλλουν επιθηλιακά μετάβαση mesynchymal (EMT).

Εκτός από μορφολογικές αλλαγές, EMT συνοδεύεται επίσης με εκφραστικές αλλαγές κάποιων βιολογικών δεικτών, όπως η E-cadherin, βιμεντίνη, κλπ [6], [ ,,,0],40], [41]. Όταν τα κύτταρα βρίσκονται κάτω από αυτή τη μετάβαση, E-cadherin θα ρυθμίζεται προς τα κάτω και βιμεντίνης ρυθμισμένη προς τα πάνω. Εξετάσαμε τις εκφράσεις του Ε-καδερίνης και βιμεντίνη σε όγκους. Η Εικόνα 6Β έδειξε καρκινικά κύτταρα στην ομάδα Sch Β είχε έκφραση υψηλότερη Ε-καδερίνης (ένα επιθηλιακό βιοδείκτης), αλλά η έκφραση κατώτερο βιμεντίνη (α μεσεγχυματικά βιοδείκτης) από εκείνες στον έλεγχο, γεγονός που υποδηλώνει ότι Sch Β ανέστειλαν 4Τ1 μετάσταση πιθανόν μέσω στόχευσης EMT.

Εκτός από 4Τ1 μοντέλο, διερευνήσαμε επίσης την επίδραση της Sch Β in vivo μετάσταση ανθρώπινου καρκίνου του μαστού κυτταρική γραμμή MDA-MB-231 (Εικ. S2). 30 ημέρες μετά τον εμβολιασμό, τα ποντίκια θυσιάστηκαν. Βρήκαμε ότι υπήρχαν ούτε μακροσκοπικά μεταστατικό οζίδια στον πνεύμονα ούτε οστών μετάσταση στον έλεγχο και Sch Β ποντίκια με αγωγή. Οι εκθέσεις σχετικά με μεταστατική ικανότητα αυτής της κυτταρικής σειράς από διαφορετικά εργαστήρια φαίνεται μικτή: ενώ αρκετές ομάδες ανέφεραν μια φτωχή μεταστατική ικανότητα του κυττάρου [42], [43], [44], ενώ άλλοι [45], μέσω της έντονης επιλογή, απέκτησε αρκετές υποκλώνοι (οστά αναζητούν MDA-231BO και του εγκεφάλου-αναζητούν MDA-231BR) με υψηλή μεταστατική ικανότητα. Παρ ‘όλα αυτά, παρά χωρίς προφανή μετάσταση, παρατηρήσαμε ότι, παρόμοια με 4Τ1 κύτταρα, MDA-MB-231 κύτταρα εισέβαλαν βαθύτερα στους μύες, στις περισσότερες των πρωτογενών όγκων σε έλεγχο από ό, τι στην ομάδα αγωγή Sch Β.

Sch Β ανέστειλε TGF-β Induced EMT των 4Τ1 και πρωτογενών ανθρώπινων κυττάρων του καρκίνου του μαστού

in vitro

η

TGF-β είναι ένας ισχυρός επαγωγέας EMT που μπορεί να επιδεινώσει τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων & amp? εισβολή

in vitro

[46]. Στη δοκιμασία αναστολής EMT, 5 μg /ml Sch Β, μια συγκέντρωση πολύ κάτω του IC

50 προς 4Τ1 κύτταρα (Σχ. S3), χρησιμοποιήθηκε.

4Τ1 κύτταρα έγινε ατρακτοειδή ή mesenchymal- όπως μετά από ΤΟΡ-β θεραπεία, συνοδεύεται από μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης και αυξημένη έκφραση της βιμεντίνης /Slug /σαλιγκάρι /ZEB1. Αυτό το αποτέλεσμα ήταν σημαντικά εξασθενημένο με προκατεργασία κυττάρων με Sch Β (Σχ. 7Α, 7Β, 7C).

με συνέπεια, σε δοκιμασία για επούλωση της πληγής, ΤΟΡ-β αύξησε το ποσοστό μετανάστευσης των 4Τ1 κυττάρων με περίπου δύο πτυχώσεις περισσότερο από εκείνη του ελέγχου, η οποία επίσης παρεμποδίζεται από προκατεργασία κυττάρων με Sch Β (Σχ. 7D, Σχ. S4A). Ομοίως, η ικανότητα εισβολής 4Τ1 κυττάρων ενισχύεται με ΤΟΡ-β ήταν σημαντικά εξασθενημένο από Sch Β (Σχ. 7Ε, το Σχ. S4B), η οποία επηρέασε μόνος ούτε κυτταρική μετανάστευση ούτε εισβολή.

Sch Β ανέστειλαν επίσης το αποτέλεσμα του ΤΟΡ-β επί των πρωτογενών ανθρώπινων κυττάρων καρκίνου του μαστού (Εικ. 7F).

Συζήτηση

ο καρκίνος σχετίζεται θνησιμότητα οφείλεται κατά κύριο λόγο μετάστασης του καρκίνου, για τη μείωση της μεταστάσεως είναι μια σημαντική στρατηγική για την καταπολέμηση Καρκίνος. Προτείνεται από μια ομάδα γνωστών επιστημόνων ότι «με δεδομένο το γεγονός ότι πρωτογενείς όγκους μπορεί συχνά να ελεγχθεί χρησιμοποιώντας συμβατικές θεραπείες, θα μπορούσε παράγοντες που δρουν ειδικά στην διαδικασία της μετάστασης είναι πιο πιθανό να αυξηθεί μακροπρόθεσμη επιβίωση των ασθενών» [47] . Σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε (1) Sch Β εξασθενεί σημαντικά 4Τ1 μετάσταση επεκτείνοντας έτσι το χρόνο επιβίωσης των ποντικών? (2) Sch Β εξασθενεί 4Τ1 μετάσταση στο στάδιο της τοπικής εισβολής? και (3), Sch Β αναστέλλει ΕΜΤ του 4Τ1 κυττάρων καθώς επίσης πρωτογενή ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του μαστού. Καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι Sch Β μπορεί να μετριάσει τη μετάσταση 4Τ1 κυττάρων μέσω αναστολής της EMT.

Ένας άλλος πιθανός μηχανισμός για την Sch Β για την αναστολή της μετάστασης θα μπορούσε να είναι κυτταροτοξική δράση της σε 4Τ1 κύτταρα. Αυτό φαίνεται απίθανο. Μελέτες σε ζώα έδειξαν ότι η Sch Β δεν επηρέασε σημαντικά την ανάπτυξη των πρωτογενών όγκων 4Τ1 (Εικ. 1, 2, 3), υποδεικνύοντας ότι δεν κυτταροτοξική δράση. Αυτό είναι σε γενικές γραμμές ευχάριστο με τις προηγούμενες αναφορές ότι αυτή η ένωση έχει χαμηλή κυτταροτοξικότητα έναντι καρκινικών κυττάρων, σε σύγκριση με την κλινική αντικαρκινικά φάρμακα [17], [48], [49]. Για να υποστηρίξει περαιτέρω ότι η κυτταροτοξικότητα δεν παίζουν σημαντικό ρόλο στην εξασθένηση μετάσταση των κυττάρων 4Τ1, συμπεριλάβαμε δοξορουβικίνη (Dox), ένα εξαιρετικά κυτταροτοξικό αντικαρκινικό φάρμακο, σε πειραματικό σχεδιασμό μας. Αν και η κυτταροτοξικότητα της Dox προς 4Τ1 είναι τρεις τάξεις μεγέθους ισχυρότερη από εκείνη του Sch Β (τα δεδομένα δεν φαίνονται), 4Τ1 μεταστάσεις στους πνεύμονες ήταν σημαντικά λιγότερο στην ομάδα Sch Β συγκριτικά με την ομάδα Dox ή ελέγχου, αλλά χωρίς σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο τελευταίων ομάδες (Εικ. S5A). Συλλογικά, Sch Β αναστέλλοντας 4Τ1 μετάσταση είναι απίθανο μέσω κυτταροτοξικές επιδράσεις της.

Αν και η παράταση της ζωής των ασθενών με καρκίνο είναι η πρώτη προτεραιότητα στη χημειοθεραπεία, η ποιότητα ζωής των ασθενών με καρκίνο είναι επίσης πολύ σημαντικό. Πολλές κλινικές αντικαρκινικά φάρμακα έχουν σοβαρές παρενέργειες, όπως νευροτοξικότητα, γαστρεντερική αντίδραση, η αναστολή του μυελού των οστών, απώλεια μαλλιών, κ.λπ., τα οποία μειώνουν σημαντικά την ποιότητα ζωής των ασθενών με καρκίνο. Ως εκ τούτου, ανακούφιση από τον πόνο αναγνωρίζεται όλο και περισσότερο στη χημειοθεραπεία του καρκίνου. Σε αυτό το πλαίσιο, η ανάπτυξη φαρμάκων που έχουν πολύ χαμηλή συστηματική τοξικότητα στο ανθρώπινο σώμα θα είναι πιο ιδανικό. Η ασφάλεια του Sch Β έχει τεκμηριωθεί καλά. Οι προηγούμενες αναφορές από άλλα εργαστήρια έδειξαν ότι στα πρωτόκολλα τους χρησιμοποιώντας Sch Β για την προστασία τετραχλωράνθρακα επαγόμενη ηπατοτοξικότητα σε ποντικούς, η δόση του Sch Β είναι 3 mmol /kg (1,2 g /kg), εμπλέκοντας την καλά ανοχή αυτής της ένωσης [ ,,,0],50]. Τα τοξικολογικά δεδομένα καθώς επανεξετάζονται από Hanke

et al.

Αποκάλυψε την υψηλή ασφάλεια αυτής της ένωσης [51]. Επιπλέον, υπάρχει μια επαρκής ποσότητα στοιχεία για να αποδείξει ότι η ένωση αυτή είναι ασφαλής για την ανθρώπινη. Sch Β είναι η πιο άφθονη παράγωγο dibenzocyclooctadiene στο

S. chinensis

(Turcz.) Baill, ένα κινεζικό παραδοσιακό φαρμακευτικό φυτό. Αυτό το βότανο έχει χρησιμοποιηθεί ως φάρμακο για τα τελευταία αρκετές χιλιάδες χρόνια και εξακολουθεί να ασκείται ενεργά στην Κίνα, τη Νότια Κορέα και την Ιαπωνία, χωρίς σοβαρές παρενέργειες που αναφέρθηκαν ποτέ.

Εκτός από την αναστολή της επί των καρκινικών κυττάρων μετάσταση, Sch Β σε συνδυασμό με άλλα αντικαρκινικά φάρμακα μπορεί να φέρει και άλλα πιθανά οφέλη. Έχει αναφερθεί ότι ορισμένοι αντικαρκινικοί παράγοντες θα μπορούσαν να ενισχύσουν τη μετάσταση μέσω ενεργοποίησης διεισδυτικότητα και τη μετάσταση καρκινικών κυττάρων ». Για παραδείγματα, η αναστολή της αγγειογένεσης μειωμένη πρωτογενούς ανάπτυξης του όγκου και της πυκνότητας μικροαγγείων, αλλά επιταχύνθηκε εισβολή και μετάσταση όγκου [52], [53]? κυκλοφωσφαμίδη και η Hsp90 αναστολέα 17-AAG ανέστειλε πρωτογενών όγκων αλλά προωθείται εισβολή και μετάσταση όγκου [54], [55]? δοξορουβικίνη προωθείται μετάσταση στα οστά του καρκίνου του μαστού 4Τ1 κύτταρα [32]. Οραματιζόμαστε ότι ο συνδυασμός του Sch Β με αυτούς τους παράγοντες μπορεί να φέρει οφέλη για τον έλεγχο τόσο πρωτογενούς όγκου και των μεταστάσεων.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Επιδράσεις της Sch Β για μετάσταση στους πνεύμονες των 4Τ1 κυττάρων. Lung μετάσταση του 4Τ1 σε ποντίκια φαίνεται στο Σχήμα 2 αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας Η &? Χρώση Ε όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Τα ποντίκια (η = 20 για κάθε ομάδα) θυσιάστηκαν την ημέρα 30 και μετάσταση ποσοτικοποιήθηκε με Η &? Χρώση Ε μετρώντας τη συνολική έκταση του ιστού ανά τμήμα του πνεύμονα και τη μετάσταση παρόν στην ίδια περιοχή. (Α) Οι αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες του ορατού οζίδια της επιφάνειας των πνευμόνων. (B) H & amp? Ε χρώση των πνευμονικών μεταστάσεων. Κάτω από το μικροσκόπιο, δεν ήμασταν σε θέση να πάρετε μια πλήρη εικόνα με μια φωτογραφία, έτσι ώστε πήραμε αρκετές φωτογραφίες οι οποίες στη συνέχεια συνδυάζονται

doi:. 10.1371 /journal.pone.0040480.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

Επιδράσεις της Sch Β επί MDA-MB-231 ζωικό μοντέλο. 5 × 10

6 βιώσιμων κυττάρων MDA-MB-231 εμβολιάστηκαν s.c. στη δεύτερη δεξιά περιοχή μαξιλάρι λίπος του μαστού. Οι ποντικοί καθετηριάστηκαν με Sch Β (100 mg /kg σωματικού βάρους) κάθε μέρα για ένα σύνολο 7 δόσεων. Τα ποντίκια θανατώθηκαν την ημέρα 30 μετά τον εμβολιασμό. Πρωτογενή καρκινώματα, τα οστά και τους περιβάλλοντες ιστούς ήταν παθολογικά εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας Η &? Ε. (Α) Οι αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες των χωροκατακτητικών μπροστά, στην οποία καρκινικά κύτταρα εισέβαλαν στον περιβάλλοντα μυ στην ομάδα ελέγχου, ενώ η εισβολή ήταν εξασθενημένος στην ομάδα που έλαβε αγωγή Sch Β. καμπύλες (Β) Ανάπτυξη του πρωτογενούς όγκου. (C) καμπύλες βάρους σώματος. (D) Το βάρος του όγκου την ημέρα της θυσίας. (Ε) Εκπρόσωπος φωτογραφίες των πνευμόνων που δεν έχουν ορατά μεταστατικών οζιδίων. οστά (F) Leg (μηροί και κνήμες) σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη, απασβεστωμένες σε 1% HCl για 24 ώρες και ενσωματωμένα σε παραφίνη. Οι τομές χρωματίστηκαν με Η & amp? Ε, η οποία δεν παρουσιάζει κανένα παρατηρήσιμο μετάσταση

doi: 10.1371 /journal.pone.0040480.s002

(ΔΕΘ)

Εικόνα S3..

Η κυτταροτοξικότητα του Sch Β προς 4Τ1 κύτταρα. 2 × 10

3 κύτταρα σπάρθηκαν ανά φρεάτιο σε πλάκες 96 φρεατίων. Sch Β (5, 10, 20, 40, 80, 160 μg /ml) προστέθηκε και τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 60 ώρες. Η βιωσιμότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε με δοκιμασία εξαίρεσης κυανούν τρυπανίου.