Abstract

Η ιντερλευκίνη-23 (IL-23) είναι μια συμβατική κυτοκίνη προφλεγμονωδών που παίζει ένα ρόλο στην πρόοδο του όγκου με επαγωγή της φλεγμονής στο μικροπεριβάλλον του όγκου. Ωστόσο, ο ρόλος της IL-23 σε μετανάστευση του καρκίνου του θυρεοειδούς και εισβολή παραμένει ασαφής. Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε ότι η αγωγή με IL-23, που επάγεται μετανάστευση και εισβολή σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς. Πρόσθετα στοιχεία δείχνουν ότι

SOCS4

ρυθμίζει αρνητικά την IL-23 με τη μεσολάβηση της μετανάστευσης και της εισβολής. Στις διερεύνηση των μηχανισμών που εμπλέκονται στην IL-23 με τη μεσολάβηση μετανάστευση και εισβολή, παρατηρήσαμε ότι miR-25 προάγει την μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων με απευθείας σύνδεση προς το 3′-UTR του

SOCS4

που οδηγεί στην αναστολή της

SOCS4

. Επιπλέον, αποδείξαμε επίσης ότι η IL-23 αυξάνει miR-25 επίπεδα έκφρασης, και υπερεκφράζεται miR-25 εμπλέκεται σε IL-23 που σχετίζεται με

SOCS4

αναστολή και κυτταρική μετανάστευση και εισβολή. Μαζί, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η IL-23 επάγει τη μετανάστευση και την εισβολή στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα με τη μεσολάβηση του miR-25 /

SOCS4

μονοπατιού σηματοδότησης

Παράθεση:. Mei Z, Τσεν S, Chen C , Xiao Β, Li F, Wang Υ, et al. (2015) Η ιντερλευκίνη-23 Διευκολύνει καρκίνο του θυρεοειδούς μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή από ανασταλτικός

SOCS4

Έκφραση μέσω microRNA-25. PLoS ONE 10 (10): e0139456. doi: 10.1371 /journal.pone.0139456

Επιμέλεια: Zhiqian Zhang, το Πανεπιστήμιο του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο & amp? Ινστιτούτο, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 19 Ιουνίου 2015? Αποδεκτές: 12 Σεπτέμβρη του 2015? Δημοσιεύθηκε: 5 Οκτώβρη 2015

Copyright: © 2015 Mei et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τις επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (No.81372880)? η Ανεξάρτητη ερευνητικό έργο του Πανεπιστημίου Wuhan (Αρ 2042014kf0184? ΟΧΙ 2042014kf0119.)? το διδακτορικό πρόγραμμα της Ανώτατης Εκπαίδευσης Ταμείου Έρευνας (Αρ 20130141120093? Όχι. 20110141110062)? το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Hubei (No.2012FFA045). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του θυρεοειδούς είναι ένα κοινό είδος των ενδοκρινικών κακοήθειας που έχει δείξει μια ταχεία αύξηση στην παγκόσμια συχνότητα κατά τη διάρκεια των τελευταίων [1] δεκαετίες. Παρά τις βελτιώσεις σε θεραπευτικές στρατηγικές, μερικοί ασθενείς είναι δύσκολο να θεραπευτούν και να αναπτύξουν εισβολή και μετάσταση [2]. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να προσδιοριστούν οι μοριακοί μηχανισμοί που διέπουν την εισβολή καρκίνου του θυρεοειδούς και μετάσταση. Πρόσφατες αναφορές έδειξαν ότι η φλεγμονή είναι ένας ισχυρός υποκινητής της καρκινογένεσης και κακοήθειας σε πολλές μορφές καρκίνου [3,4]. Φλεγμονή φαίνεται να είναι ένας σημαντικός μεσολαβητής για την ανάπτυξη του καρκίνου και παρέχει τα καρκινικά κύτταρα ένα φιλόξενο μικροπεριβάλλον [5]. Η ιντερλευκίνη-23 (IL-23), μια ετεροδιμερής κυτοκίνη τύπου 1 αποτελείται από την IL-12 /ρ40 υπομονάδα και την ειδική υπομονάδα ρ19, ανήκει στην ιντερλευκίνης-6 υπεροικογένειας [6]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η IL-23 συνδέεται με την καρκινογένεση, καθώς και φλεγμονή. Υψηλά επίπεδα της IL-23 βρέθηκαν σε ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, ορθοκολικό καρκίνωμα, πλακώδες καρκίνωμα, καρκίνωμα του οισοφάγου και [7-10]. Τα στοιχεία δείχνουν ότι η IL-23 υπερέκφραση μπορεί να προκαλέσει μετάσταση σε ορθοκολικό, πνεύμονα και τον καρκίνο του στόματος [7-10].

Οι καταστολείς της σηματοδότησης κυτοκίνης (SOCS) είναι σημαντικοί αρνητικοί ρυθμιστές ανάδρασης κυτοκίνης σηματοδότησης [11]. Οι πρωτεΐνες SOCS είναι μία οικογένεια πρωτεϊνών 8 (SOCS1-7 και μία κυτοκίνη που επάγεται SH2 ​​που περιέχει πρωτεΐνη ή CIS). Κάθε πρωτεΐνη SOCS περιλαμβάνει ένα κεντρικό τομέα SH2 που αλληλεπιδρά με φωσφορυλιωμένη τυροσίνες [12]. SOCS πρωτεΐνες έχουν πρόσφατα διερευνηθεί για το ρόλο τους στην ανάπτυξη διαφόρων καρκίνων [13-18]. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τον ρόλο των SOCS4 σε καρκίνωμα, και η πιθανή τους επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου και κακοήθεια.

Τα microRNAs (miRNAs) αποτελούν ένα είδος μικρών μη κωδικεύοντα κλώνου RNAs single που παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη διαφορετικών καρκίνων με σύνδεση του 3′-αμετάφραστη περιοχή (3′-UTR) στοχευμένων γονιδίων [19]. Παρεκκλίνουσα έκφραση miRNA έχει επίσης συχνά αναφερθεί σε πολλές όγκων [20]. Τα τελευταία χρόνια, πολλαπλές σημείο αποδείξεις για έναν ρόλο για miRNAs σε βιολογικές διεργασίες των καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, τη διαφοροποίηση, τη μετανάστευση, και εισβολή [21]. MicroRNA-25 ανήκει στο σύμπλεγμα των miR-106b-25 που περιλαμβάνει miR-106b, miR-93, και miR-25. MicroRNA-25 έχει αναφερθεί ότι υπερεκφράζεται σε διάφορους παρεκκλίνοντα όγκους, όπως ο καρκίνος των ωοθηκών, ο καρκίνος του πνεύμονα, γαστρικό καρκίνο, και καρκίνο του παχέος εντέρου [22-26]. Αν και έχει περιγραφεί η έκφραση του miR-25 σε διαφορετικούς όγκους, ένα σαφή ρόλο για miR-25 στο καρκίνωμα του θυρεοειδούς παραμένει ασαφής.

Σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε ότι η IL-23 προάγει την μετανάστευση καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων και εισβολής . Έχουμε αποδείξει περαιτέρω ότι η IL-23 ρυθμίζει τη μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων μέσω ενός μονοπατιού σηματοδότησης miR-25 /SOCS4.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Όλα οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή συγκατάθεση για να συμμετάσχουν στη μελέτη. Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις αρχές της Διακήρυξης του Ελσίνκι και εγκρίθηκαν από το Διοικητικό Institutional Review της Remin Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Wuhan, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της για την προστασία των ανθρώπινων υποκειμένων.

Δείγματα και περιπτώσεις

ιστούς του θυρεοειδούς συλλέχθηκαν στο Remin Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Wuhan από το Φεβρουάριο του 2010 έως τον Φεβρουάριο του 2014. τα δείγματα ιστού κόπηκαν σε δύο μέρη, το ένα εξετάστηκε από δύο παθολόγους εμπειρογνώμονα για να ελέγξει την ιστολογική διάγνωση, ο άλλος αμέσως καταψύχονται σε υγρό άζωτο, και αποθηκεύεται σε υγρό άζωτο μέχρι την εκχύλιση του RNA. Κανένας από τους ασθενείς είχαν λάβει καμία προεγχειρητική θεραπεία. Οι όγκοι οργανώθηκαν σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC) παθολογική όγκου-node-μετάσταση (TNM) classiication. Τα χαρακτηριστικά των ασθενών που περιγράφονται στο S1 και S2 πίνακες.

Κυτταρική καλλιέργεια

καρκινικές κυτταρικές σειρές ανθρώπινου θυρεοειδούς Κ1 (θηλώδες) και WRO (θυλακιώδη) καλλιεργήθηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (DMEM) (Gibco BRL, Grand Island, ΝΥ) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Gibco BRL), 100 μονάδες /ml πενικιλίνη, και 100 μg /ml θειική στρεπτομυκίνη. Τα κύτταρα διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε ένα 5% CO

2 θερμοκοιτίδα. Όλες αυτές οι κυτταρικές σειρές που αγοράστηκε αρχικά από το κελί τράπεζα της Κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών, Σαγκάη

Αντιδραστήρια

Η ανασυνδυασμένη ανθρώπινη IL-23 (rhIL-23) αγοράστηκε από την R & amp?. D Systems ( Minneapolis, ΜΝ). Τα μονοκλωνικά αντισώματα (Ab) κατά της ανθρώπινης SOCS4 και GAPDH αγοράστηκαν από την Sigma (St Louis, ΜΟ). Συντίθεται χημικά miRNA μιμείται και αναστολείς miRNA αγοράστηκαν από την Ambion (Austin, TX, USA). ΤΚΙζοΙ, Lipfectamine-2000, Enzyme ΜΙΧ αγοράστηκαν από την Invitrogen (Basel, Switzerland).

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Ποσοτική ανάλυση πραγματικού χρόνου PCR διεξήχθη για να προσδιοριστεί το ώριμο επίπεδα miRNA και mRNA. Για την ποσοτική ανίχνευση ώριμη microRNAs, Total miRNAs απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ απομόνωσης mirVana miRNA (Ambion), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό RNA (2 μα) reversetranscribed με Bulge-Loop ώριμο miRNA-ειδικούς εκκινητές αντίστροφης μεταγραφής (Ambion) και ιού λευχαιμίας ποντικού ΜοΙοηβγ ανάστροφης μεταγραφάσης (Promega). Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου που βασίζονται ποσοτικοποίηση των miRNAs πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ ανάλυσης miRNA (Ambion), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα επίπεδα miRNAs κανονικοποιήθηκαν με εκείνα της εσωτερικής snRNA U6 ελέγχου. Για την ανίχνευση κυτταρικών mRNAs, ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Basel, Switzerland). Δείγματα κυτταρικού RNA υποβλήθηκαν αντίστροφη μεταγραφή με χρήση τυχαίων εκκινητών. Real-time PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα LightCycler 480 (Roche) και το σύστημα SYBR Green (Applied Biosystems). GAPDH ενισχύθηκε ως εσωτερικό έλεγχο. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν αυτή τη μελέτη περιλαμβάνονται στο S3 πίνακα και του SYBR πράσινα προϊόντα επαληθεύεται με προσδιορισμό της αλληλουχίας.

Transwell δοκιμασία

μετανάστευση των κυττάρων και προσδιορισμού εισβολή διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27]. Εν συντομία, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία είτε με 50 ng /mL rhIL-23 ή ρυθμιστικό BSA ελέγχου για περιγράφηκε χρόνου και της δόσης και παρατηρήθηκαν ανάλογα. Ο μέσος αριθμός που μεταναστεύουν και εισβάλλουν κυττάρων εκφράστηκε ως ποσοστό σε σχέση με τον έλεγχο, η οποία ορίζεται ως 100%.

Το κλείσιμο της πληγής δοκιμασία

Μια πληγή εισήχθη στα κύτταρα σε συρροή μονοστοιβάδας χρησιμοποιώντας μια συμβουλή μικροπιπέττα. Οι φωτογραφίες ελήφθησαν σε 40 Χ μεγέθυνση χρησιμοποιώντας μικροσκοπία αντίθεσης φάσης αμέσως μετά την τομή του τραύματος και σε επιλεγμένα χρονικά σημεία. Το κλείσιμο της πληγής μετρήθηκε υπολογίζοντας πυκνότητες pixel στην περιοχή του τραύματος από το λογισμικό Cella (Όλυμπος Biosystem GMB, Αμβούργο, Γερμανία) και εκφράζεται ως ποσοστό του κλεισίματος των τριπλών περιοχών πληγών ± SD.

δοκιμασίας ΜΤΤ

Ο (-2-υλ 4,5-διμεθυλοθειαζολο) -2,5-διφαινυλοτετραζολίου (ΜΤΤ) 3- χρησιμοποιήθηκε στην αξιολόγηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων σε 5 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο. Είκοσι-τέσσερις ώρες αργότερα, ΜΤΤ δοκιμασία διεξήχθη. Τέλος, η οπτική πυκνότητα προσδιορίστηκε στα 570 nm χρησιμοποιώντας τον αναγνώστη ELISA πλάκα (Model 550? Bio-Rad). εξασφαλίστηκαν τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων.

Επιμόλυνση και αναφοράς λουσιφεράσης δοκιμασία

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε 24 φρεατίων ή 6-φρεατίων, ανάλογα με το πείραμα, και αναπτύχθηκαν σε συμβολή φθάνοντας περίπου 80-90% κατά τη στιγμή της διαμόλυνσης. Κύτταρα επιμολύνθηκαν χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο που παρέχεται από τον κατασκευαστή. Ένα Renilla φορέα αναφοράς λουσιφεράσης ρΡΙ_-ΤΚ χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Λουσιφεράσης δοκιμασίες διεξήχθησαν με kit διπλής ειδική δοκιμασία luciferse (Promega, Madison, WI). Firefly λουσιφεράσης δραστηριότητες ομαλοποιήθηκαν βάσει των δραστηριοτήτων λουσιφεράσης Renilla. Ολες οι δοκιμασίες ρεπόρτερ επαναλήφθηκαν για τουλάχιστον τρεις φορές. Τα δεδομένα που παρατίθενται ήταν μέσες τιμές ± SD από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα.

RNA

παρεμβολές

SOCS4 shRNA και άσχετο έλεγχο shRNA (shRNA-ελέγχου) αγοράστηκαν από GenePharma (GenePharma, Σαγκάη) και παρασκευάζονται με απολίνωση των αντίστοιχων ζευγών ολιγονουκλεοτιδίων να PGPU6 /GFP /Neo. Η αλληλουχία στόχος μπορεί να βρεθούν στον Πίνακα S4.

Western ανάλυση κηλίδος

ολόκληρου-κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν με λύση των κυττάρων με PBS ρΗ 7,4 που περιείχε 0,01% Triton Χ-100, 0,01% EDTA, και 10% αναστολέα πρωτεάσης κοκτέιλ (Roche, Applied Science). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με τη δοκιμασία Bradford (Bio-Rad). Τα πολυπεπτίδια από κυτταρολύματα διαχωρίστηκαν σε SDS πηκτές πολυακρυλαμιδίου 12% διασυνδεδεμένου με Ν, Ν -methylenebisacylamide, και μεταφέρθηκαν ηλεκτρικά σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης (Millipore, Billerica, ΜΑ). Η μη ειδική δέσμευση αποκλειστεί με 5% γάλα σε PBST πριν από την προσθήκη πρωτογενών αντισωμάτων που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη. αντισώματα υπεροξειδάση χράνου-συνδεδεμένο αντι-κουνελιού και αντι-ποντικού (Sigma, St Louis, ΜΟ) χρησιμοποιήθηκαν ως δεύτερα αντισώματα. Τα επίπεδα πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκαν με σάρωση κηλίδες επί ενός απεικονιστού Gel Doc EZ (Bio-Rad) και ανάλυση με Ποσότητα One 1D λογισμικό ανάλυσης εικόνας 4.4.0 (Bio-Rad)

Στατιστική ανάλυση

Στατιστική αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Οι παραμετρικές και μη παραμετρικές δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας δύο-tailed t-test και το Mann-Whitney U, αντίστοιχα. Μια τιμή της P & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± Τ.Α. ή μέση ± SEM

Αποτελέσματα

IL-23 προάγει την μετανάστευση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς

Θελήσαμε να δοκιμαστεί η επίδραση του IL-23 επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού του καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα, προκειμένου να παρατηρηθεί εάν κυτταρικό πολλαπλασιασμό διαταράσσει την μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των κυττάρων. Η δοκιμασία ΜΤΤ έδειξε ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων Κ1 και κύτταρα WRO επηρεάστηκαν ελάχιστα από οποιαδήποτε δόση της IL-23 (S1 Εικ). Στην συνέχεια διερευνήσαμε εάν η IL-23 μπορεί να επηρεάσει την μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων. Ενισχυμένη κίνηση και εισβολή των κυττάρων K1 ανιχνεύθηκαν με την παρουσία 50 και 100 ng /ml IL-23 (Σχήμα 1Α και 1Β). Παρομοίως, αυξημένη μετανάστευση και εισβολή ανιχνεύθηκαν επίσης ήδη 48 ώρες (h) μετά από αγωγή με 50 ng /ml πρωτεΐνης IL-23 (Σχήμα 1 C και 1 D). Δείξαμε επίσης ότι η IL-23 αύξησε την μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων WRO σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο (S2 Εικ). Επιπλέον, επούλωσης τραύματος δοκιμασία δείχνουν επίσης ότι η IL-23 αύξησε την μετανάστευση κυττάρων Κ1 (Εικ 1 Ε και 1 F). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν την δόση και το χρόνο-εξαρτώμενη promigratory και proinvasive επίδραση της IL-23.

(Α) κύτταρα K1 υπέστησαν κατεργασία με rhIL-23 για 48 ώρες στις δεικνυόμενες συγκεντρώσεις, που ακολουθείται από καλλιέργεια σε ένα σύστημα transwell επί 24 ώρες. Πειράματα προσδιορισμού κυττάρων εισβολής (Β) πραγματοποιήθηκαν με κύτταρα K1 που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως στο (Α). (C) κύτταρα K1 υπέστησαν κατεργασία με συγκέντρωση 50 ng /ml rhIL-23 για τα υποδεικνυόμενα χρονικά σημεία, που ακολουθείται από καλλιέργεια σε ένα σύστημα transwell επί 24 ώρες. (D) Τα πειράματα διεξήχθησαν όπως στο (C) για τη δοκιμασία των κυττάρων εισβολής. (Ε) κύτταρα K1 υπέστησαν κατεργασία με rhIL-23 για 48 ώρες στις δεικνυόμενες συγκεντρώσεις, που ακολουθείται από την εισαγωγή ενός τραύματος. μετανάστευση κυττάρων εντός του τραύματος παρακολουθείται εις 24 ώρες. (F) κύτταρα K1 υπέστησαν κατεργασία με συγκέντρωση 50 ng /ml rhIL-23 για τα υποδεικνυόμενα χρονικά σημεία, που ακολουθείται από την εισαγωγή ενός τραύματος. μετανάστευση κυττάρων εντός του τραύματος παρακολουθείται εις 24 ώρες. Το κλείσιμο της πληγής μετρήθηκε υπολογίζοντας πυκνότητες pixel στην περιοχή του τραύματος και εκφράζεται ως ποσοστό του κλεισίματος των τριπλών περιοχών ± τυπικές αποκλίσεις στη μετανάστευση transwell, εισβολή τραυμάτων και πληγών δοκιμασία επούλωσης, τα δεδομένα εκφράζονται ως ποσοστό του μάρτυρα. Δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SD, η = 3 (** Ρ & lt? 0,01? * Ρ & lt? 0,05).

Η

IL-23 επάγει την μετανάστευση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς μέσω

SOCS4

η

για τον προσδιορισμό του ρόλου της IL-23 στην έκφραση του SOCS4, Κ1 κύτταρα διεγέρθηκαν με IL-23 πρωτεΐνη επί 24 ώρες σε συγκέντρωση 50 ng /ml. Οι καταστολείς της σηματοδότησης κυτοκίνης (

SOCS4

) mRNA και η πρωτεΐνη ανιχνεύθηκαν με PCR πραγματικού χρόνου και κηλίδα western, αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η IL-23 κατέστειλε

SOCS4

έκφραση mRNA και πρωτεΐνης σε κύτταρα Κ1 (σχήμα 2Α). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν επίσης στην κυτταρική γραμμή WRO (Σχήμα 2Β). Για να προσδιορίσετε αν SOCS4 συμμετέχει στην IL-23 με τη μεσολάβηση της μετανάστευσης και της εισβολής του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων, κατασκευάσαμε 4 ανθρώπινο SOCS4 ειδικά μικρή φουρκέτα RNA (shRNA). Real-time PCR αποτελέσματα έδειξαν ότι τα # 2 shRNA πλασμίδια θα μπορούσαν σημαντικά αναστέλλουν την έκφραση του σε κύτταρα SOCS4 Κ1, ενώ τα άλλα πλασμίδια shRNA είχε μικρή επίδραση επί της έκφρασης του SOCS4 (Σχήμα 2C). τα επίπεδα της πρωτεΐνης SOCS4 έδειξε μια παρόμοια τάση, όπως καθορίζεται από κηλίδα Western (Σχήμα 2D). Σε πειράματα κυτταρική μετανάστευση, η υπερέκφραση του

SOCS4

ανέστειλε IL-23-επαγόμενη μετανάστευση σε κύτταρα Κ1 (Εικ 2Ε). Αντιστρόφως, η knockdown του

SOCS4

έκφραση ενισχυμένη IL-23-επαγόμενη μετανάστευση σε κύτταρα Κ1 (Εικ 2F). Οι βαθμοί της επαγωγής συσχετίστηκαν με τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας των

SOCS4

νοκ ντάουν από κάθε shRNA πλασμίδιο (Σχήμα 2F). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με επικοινωνούντα πειράματα εισβολή (Σχ 2G και 2Η). Από SOCS4 ρυθμίζει αρνητικά τη μετανάστευση, έχουμε την επόμενη ανέλυσε το ρόλο του SOCS4 στο κύτταρο πολλαπλασιασμού του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων. Τα αποτελέσματα από δοκιμασία ΜΤΤ έδειξαν ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων K1 επηρεάστηκαν ελάχιστα από την έκφραση του SOCS4. Επιπλέον, η υπερέκφραση ή εξόντωση SOCS4 και θεραπεία με IL-23 δεν μπορεί να επηρεάσει την κυτταρική πολλαπλασιασμού του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων (S3 Εικ). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η ενεργοποίηση της IL-23-ρυθμιζόμενη μετανάστευση και εισβολή μπορεί να απαιτούν SOCS4.

(Α) κύτταρα K1 υπέστησαν κατεργασία με 50 ng /ml rhIL-23 για 48 ώρες.

SOCS4

επίπεδα RNA ήταν ποσοτικά με qRT-PCR (αριστερό πάνελ) και τα επίπεδα της πρωτεΐνης του SOCS4 ανιχνεύθηκαν με western blot (δεξιά πλευρά). (Β) Πειράματα με κύτταρα WRO πραγματοποιήθηκαν όπως στο Α (C, D) κύτταρα K1 επιμολύνθηκαν με διαφορετικά

SOCS4

shRNA (shRNA # 1, shRNA # 2, shRNA # 3 και shRNA # 4) ή shCtrl ως παρωδία. Μετά από 48 ώρες,

SOCS4

mRNA επίπεδα μετρήθηκαν με qRT-PCR (C) και στύπωμα Western (D). (Ε) κύτταρα Κ1 διαμολύνθηκαν με την υποδεικνυόμενη πλασμίδιο, στη συνέχεια κατεργάζεται με rhIL-23 (50 ng /ml) για 48 ώρες και αφέθηκαν να μεταναστεύσουν προς τον ορό για 24 ώρες (άνω πάνελ). τα επίπεδα πρωτεΐνης του SOCS4 ανιχνεύθηκαν με western blot (κάτω πίνακας). (F) Τα κύτταρα διαμολύνθηκαν με υποδεικνύεται shRNA-SOCS4 και τα πειράματα διεξήχθησαν όπως στο (Ε). (G, H) Τα πειράματα κυτταρική ανάλυση εισβολής διεξήχθησαν υπό παρόμοιες συνθήκες όπως περιγράφεται στο (Ε) και (F). Στον πραγματικό χρόνο πειράματα RT-PCR, ο έλεγχος ορίστηκε ως 1. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον 3 φορές με παρόμοια αποτελέσματα. ιστογράμματα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SD, η = 3 (** P & lt? 0,01? * P & lt? 0,05).

Η

microRNA-25 ρυθμίζει προς τα κάτω

SOCS4

έκφραση με την άμεση στόχευση της 3′-UTR

για την ανάλυση των miRNAs που μπορεί να στοχεύουν το 3′-UTR του

SOCS4

, χρησιμοποιήσαμε 3 σε απευθείας σύνδεση βάσεις δεδομένων, TargetScanHuman, miRDB, και miRWalk2.0, να αναζητήσουν πιθανούς υποψηφίους. Δεκατέσσερις από τους κοινούς δυνητικών miRNAs βρέθηκαν στα 3 βάσεις δεδομένων. Για να προσδιοριστεί η επίδραση των προβλεπόμενων miRNAs στην έκφραση του

SOCS4

, η

SOCS4

3′-UTR κλωνοποιήθηκε σε πυγολαμπίδας πλασμίδιο αναφοράς λουσιφεράσης. Οι δοκιμασίες ενεργότητας λουσιφεράσης έδειξαν ότι 6 miRNAs ανέστειλε την δραστικότητα λουσιφεράσης SOCS4 κάτω του 50% σε σύγκριση με την miR-Ctrl (S4A Εικ). Στη συνέχεια ερευνήσαμε το οποίο miRNAs ενεργοποιήθηκαν με IL-23 που προκαλείται από τη μετανάστευση και την εισβολή. Κ1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-23 πρωτεΐνη σε 50 ng /ml για 48 ώρες. Τα αποτελέσματα από πραγματικού χρόνου PCR έδειξε ότι μεταξύ των miRNAs που θα μπορούσε να μετριάσει

SOCS4

δραστηριότητα λουσιφεράσης, η έκφραση του miR-25 ήταν σημαντικά επάγεται (S4B σχήμα).

Από τα δεδομένα μας υποθέσαμε ότι miR-25 μπορεί να παίζει ρόλο στην οδό IL-23 /SOCS4 σηματοδότησης. Στη συνέχεια διερευνήθηκε κατά πόσον miR-25 ρυθμίζει

SOCS4

έκφραση με μετα-μεταγραφική στόχευση του 3′-UTR της. Μια ξεχωριστή μετάλλαξη δημιουργήθηκε στην 3′-UTR του

SOCS4

σε προβλεπόμενες θέσεις σπόρων που ταιριάζουν για να δοκιμαστεί η αλληλεπίδραση μεταξύ miR-25 και

SOCS4

3′-UTR (Σχήμα 3Α). Παροδική διαμόλυνση κυττάρων K1 με άγριου τύπου (WT)

SOCS4

3′-UTR, και ΜΙΚ-25 μιμητικό, οδηγεί σε σημαντική μείωση της δραστικότητας ανταποκριτή σε σχέση με εκείνη του miR-μάρτυρα (Σχ 3Β ). Αυτό το φαινόμενο διαταράχθηκε όταν οι ίδιες κυτταρικές σειρές επιμολύνθηκαν με το

SOCS4

3′-UTR μεταλλάγματα (Σχήμα 3Β). Ο αναστολέας miR-25 (miR-25-INH) τόνωσε σημαντικά την λουσιφεράσης δραστηριότητα του WT

SOCS4

3′-UTR, χωρίς καμία επίδραση στην Μουτ

SOCS4

3′-UTR στο K1 κύτταρα (Σχ 3C). MicroRNA-25 υπερέκφραση σε κύτταρα K1 κατέστειλε σημαντικά τόσο το mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης του SOCS4 (Εικ 3D). Αντίθετα, miR-25 αναστολέας μεσολάβηση νοκ ντάουν της ενδογενούς miR-25 αυξήθηκε

SOCS4

έκφραση του mRNA και της πρωτεΐνης στα κύτταρα Κ1 (Σχήμα 3Ε). Για να προσδιορίσετε αν το miR-25-μεσολάβηση προς τα κάτω ρύθμιση του

SOCS4

έκφρασης είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό σε καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς, παρόμοια πειράματα διεξήχθησαν σε κύτταρα WRO (Σχήμα 3F και 3G). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι SOCS4 είναι ο στόχος του miR-25 σε κύτταρα Κ1 και κύτταρα WRO.

(Α) Οι ακολουθίες των θέσεων δέσμευσης miR-25 μέσα στο ανθρώπινο

SOCS4

3 ‘ UTRs και οι σχηματικές κατασκευές δημοσιογράφος. Σε αυτό το πλαίσιο, η WT αντιπροσωπεύει τα κατασκευάσματα ανταποκριτή που περιέχει το σύνολο των 3’UTR ακολουθίες

SOCS4

.

SOCS4

-MUT αντιπροσωπεύει τα κατασκευάσματα ανταποκριτή που περιέχει μεταλλαγμένα νουκλεοτίδια. (B, C) Κ1 κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν με είτε WT ή MUT

SOCS4

3’UTR πλασμίδια ανταποκριτές και είτε miR-25 μιμούνται (Β) ή miR-25 αναστολέα (C). Οι δραστικότητες της λουσιφεράσης μετρήθηκε μετά από 48 ώρες χρησιμοποιώντας ένα κιτ διπλής λουσιφεράσης δοκιμασίας και ομαλοποιήθηκε ως προς λουσιφεράση της Renilla. (D) κύτταρα K1 επιμολύνθηκαν με miR-25 μιμούνται ή μάρτυρες για 48 ώρες.

SOCS4

mRNA (αριστερό πάνελ) και πρωτεΐνης (δεξιό πλαίσιο) ανιχνεύθηκαν με qRT-PCR και στύπωμα Western, αντιστοίχως. (Ε) Τα κύτταρα διαμολύνθηκαν με miR-25 αναστολέα ή του ελέγχου και τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν όπως στο D. (F, G) κύτταρα WRO χρησιμοποιήθηκαν και τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν όπως στο D και Ε Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον 3 φορές με παρόμοια αποτελέσματα. γραφικές παραστάσεις Bar αντιπροσωπεύουν μέση ± SD, η = 3 (** Ρ & lt? 0,01? * Ρ & lt? 0,05).

Η

microRNA-25 προάγει την κινητικότητα του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων με τη στόχευση

SOCS4

η

από miR-25 μπορεί να καταστείλει

SOCS4

έκφρασης με αλληλουχία-ειδική σύνδεση με 3′-UTR του, υποθέσαμε ότι miR-25 μπορεί να επηρεάσει την μετανάστευση και εισβολή καρκίνου του θυρεοειδούς μέσω SOCS4. Για να ελεγχθεί η υπόθεση, Κ1 ήταν συν-επιμολυσμένα με το

SOCS4

φορέα έκφρασης (ή κενό φορέα) και τα miR-25 μιμείται (ή miR-Ctrl). Transwell δοκιμασίες μετανάστευσης αποδεικνύουν ότι miR-25 προάγει την μετανάστευση των κυττάρων Κ1 και μετανάστευση κυττάρων που προκαλείται από miR-25 αντιστρέφεται από

SOCS4

υπερέκφραση (Σχήμα 4Α). Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι η knockdown του

SOCS4

μπορεί να ενισχύσει σημαντικά την επίδραση του miR-25 για τη μετανάστευση κυττάρων (Σχήμα 4Β). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν στις δοκιμασίες εισβολής και επούλωσης πληγών δοκιμασία (Σχήμα 4C-4F). Η επίδραση του /μονοπατιού σηματοδότησης miR-25 SOCS4 για τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς αξιολογήθηκε περαιτέρω με τη χρήση του αναστολέα miR-25. Όπως φαίνεται στο Σχ 4G, miR-25 αναστολέας αναστέλλει σημαντικά τη μετανάστευση των κυττάρων Κ1. Επιπλέον, ο αναστολέας miR-25 και το

SOCS4

φορέα έκφρασης συνεργιστικά αναστέλλουν τη μετανάστευση των κυττάρων Κ1 (Εικ 4G). Αντίθετα, τα υψηλά επίπεδα της μετανάστευσης ήταν παρόντες στα κύτταρα Κ1 όταν

SOCS4

χτυπήθηκε κάτω από shRNA-SOCS4 # 2 (Σχήμα 4Η). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν επίσης σε προσδιορισμούς εισβολής και επούλωσης πληγών ανάλυσης (Σχ 4I-4L). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η αναστολή της

SOCS4

έκφραση είναι υπεύθυνη για την ικανότητα του miR-25 για την προώθηση της κυτταρικής εισβολής και της μετανάστευσης.

(Α, Β) Κ1 κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν με υποδεικνύεται miR-RNA μιμούνται και πλασμίδιο (Α) ή shRNA (Β) για 48 ώρες και αφέθηκαν να μεταναστεύσουν προς τον ορό για 24 ώρες. Πειράματα προσδιορισμού κυττάρων εισβολής (C, D) διεξήχθησαν με τις ίδιες συνθήκες όπως στο Α και Β (Ε, F) επούλωσης τραυμάτων πειράματα προσδιορισμού διεξήχθησαν με τις ίδιες συνθήκες όπως στο Α και Β (G, H) Τα κύτταρα διαμολύνθηκαν με miR-25 αναστολέα ή του ελέγχου και τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν όπως στο Α και Β (i, j) πειράματα δοκιμασία κυττάρων εισβολή εκτελέσθηκαν με τις ίδιες συνθήκες όπως στο G και η (Κ, L) επούλωσης τραυμάτων πειράματα προσδιορισμού διεξήχθησαν με τους ίδιους όρους όπως και στο G και H. Bar γραφήματα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SD, η = 3 (** P & lt? 0,01? * P & lt? 0,05).

η

IL-23 διεγείρει ΜΙΚ 25 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς

για τον προσδιορισμό του ρόλου της IL-23 στην έκφραση του miR-25, τα κύτταρα K1 διεγέρθηκαν με ανθρώπινη πρωτεΐνη IL-23 σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για 48 ώρες. MicroRNA-25 επίπεδα ανιχνεύτηκαν με PCR πραγματικού χρόνου. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι miR-25 επίπεδα απορυθμίζεται από την πρωτεΐνη IL-23 σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 5Α). Σταθερά, Κ1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με πρωτεΐνη IL-23 σε διαφορετικές χρονικές στιγμές, σε συγκέντρωση 50 ng /ml. Τα αποτελέσματα από πραγματικού χρόνου PCR αναλύσεις δείχνουν ότι το miR-25 επίπεδα αυξάνουν καθώς ο χρόνος αυξάνεται (Σχήμα 5Β). Ο ρόλος της IL-23 σε Mir-25 έκφραση επιβεβαιώθηκε με επανάληψη των πειραμάτων χρησιμοποιώντας κύτταρα WRO (Σχ 5C και 5D). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η IL-23 ενεργοποιεί miR-25 έκφρασης.

microRNA-25 επίπεδα ποσοτικοποιήθηκαν με πραγματικού χρόνου PCR και τα πειράματα διεξήχθησαν όπως περιγράφεται στο Σχήμα 1. Τα επίπεδα έκφρασης κανονικοποιήθηκαν προς U6 snRNA. Δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SD, η = 3 (** Ρ & lt? 0,01? * Ρ & lt? 0,05)

Η

microRNA-25 παίζει ένα σημαντικό ρόλο σε IL-23-διαμεσολαβούμενη

SOCS4.

αναστολή και τη μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή

Για να καθορίσει το ρόλο του miR-25 στην αρνητική ρύθμιση της IL-23 με τη μεσολάβηση

SOCS4

έκφρασης, τα κύτταρα K1 επιμολύνθηκαν είτε με miR-25 μιμείται ή miR-Ctrl και αντιμετωπίζονται με ή χωρίς πρωτεΐνη IL-23 για 48 ώρες. Τα αποτελέσματα από πραγματικού χρόνου PCR και κηλίδος western αναλύσεις δείχνουν ότι επιμόλυνση με miR-25 μιμείται αυξάνει IL-23-διαμεσολαβούμενη αναστολή της

SOCS4

mRNA και η έκφραση της πρωτεΐνης (Σχήμα 6Α). Σε αντίθεση, τα υψηλά επίπεδα του

SOCS4

mRNA και η πρωτεΐνη υπάρχουν σε Κ1 κύτταρα, όταν η έκφραση του miR-25 αναστέλλεται από τον αναστολέα miR-25 (Σχήμα 6Β). Εξετάσαμε επίσης κατά πόσο miR-25 εμπλέκεται σε IL-23-διαμεσολαβούμενη καρκίνο του θυρεοειδούς κινητικότητα κυτταρική γραμμή. Χρησιμοποιώντας Transwell δοκιμασίες μετανάστευσης και εισβολής, δείξαμε ότι miR-25 υπερέκφραση διεγείρει IL-23-διαμεσολαβούμενη ενεργοποίηση της μετανάστευσης και της εισβολής (Σχ 6C και 6D), και knockdown του miR-25 έκφραση αναστέλλει την IL-23-διαμεσολαβούμενη ενεργοποίηση της μετανάστευσης και της εισβολής (Σχήμα 6Ε και 6F). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν επίσης σε δοκιμασία επούλωσης πληγών (Σχ 6G και 6Η) .Taken μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι miR-25 είναι το βασικό συστατικό που εμπλέκονται στην IL-23-διαμεσολαβούμενη μετανάστευση καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων και εισβολή μέσω της αναστολής της

SOCS4

έκφρασης.

(Α) κύτταρα K1 επιμολύνθηκαν με την υποδεικνυόμενη πλασμίδιο, στη συνέχεια κατεργάζεται με rhIL-23 (50 ng /ml) για 48 ώρες. SOCS4 mRNA (αριστερό πάνελ) και πρωτεΐνης (δεξιό πλαίσιο) ανιχνεύθηκαν με qRT-PCR και στύπωμα Western, αντιστοίχως. (Β) Τα κύτταρα διαμολύνθηκαν με miR-25 αναστολέα ή του ελέγχου, και τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν όπως στο Α (C, D) κύτταρα K1 επιμολύνθηκαν με miR-25 μιμούνται (C) ή αναστολέα (Δ) και των ελέγχων, στη συνέχεια κατεργάζεται με rhIL-23 (50 ng /ml) για 48 ώρες και αφέθηκαν να μεταναστεύσουν προς τον ορό για 24 ώρες. (Ε, F) πειράματα δοκιμασία κυττάρων εισβολή εκτελέσθηκαν με τις ίδιες συνθήκες όπως στο C και D. (G, H) επούλωσης τραυμάτων πειράματα προσδιορισμού διεξήχθησαν με τις ίδιες συνθήκες όπως στο C και D. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον 3 φορές με παρόμοια αποτελέσματα. ιστογράμματα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SD, η = 3 (** P & lt? 0,01? * P & lt? 0,05)

Η

Η έκφραση της IL-23, miR-25 και

SOCS4

στο θυρεοειδή καρκινικούς ιστούς

Για να επικυρώσετε το ρόλο της IL-23, miR-25 και

SOCS4

στον καρκίνο του θυρεοειδούς, η έκφραση της IL-23, miR-25 και SOCS4 αναλύθηκαν σε 35 ζεύγη των κλινικών PTC, 26 ζεύγη των κλινικών FTC, και 22 δείγματα φυσιολογικού θυρεοειδούς. Όπως φαίνεται στο S5A-S5c Σχ, η έκφραση του

SOCS4

ήταν χαμηλότερο και το επίπεδο έκφρασης της IL-23 και miR-25 ήταν υψηλότερη σε PTC και FTC δείγματα από φυσιολογικά δείγματα θυρεοειδούς. Επιπλέον, τα υψηλά επίπεδα της IL-23 συσχετίστηκαν με υψηλά επίπεδα miR-25 (Εικ S5D). Είναι ενδιαφέρον, τα χαμηλά επίπεδα του

SOCS4

έκφρασης συσχετίζονται με υψηλά επίπεδα της IL-23 και miR-25 έκφρασης σε δείγματα PTC και FTC (S5E και S5F σχήμα). Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν έντονα ότι οι μεταβολές της IL-23, miR-25 και της έκφρασης SOCS4 θα μπορούσε να συμμετέχει στην εξέλιξη του καρκίνου του θυρεοειδούς.

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, ορίσαμε ένα νέο σηματοδοτικό μονοπάτι που εμπλέκονται στην ο έλεγχος της μετανάστευσης καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων και εισβολή. Πρώτον, αποδείξαμε ότι η IL-23 προς τα πάνω ρυθμισμένη miR-25 έκφρασης, καθώς και ρυθμίζεται προς τα κάτω

SOCS4

έκφραση σε μετανάστευση καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων και εισβολή. Περαιτέρω, δείξαμε επίσης ότι το miR-25 προάγει την μετανάστευση καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων και εισβολή με στόχευση SOCS4. Τέλος, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι το miR-25 συμμετέχει στην IL-23 που σχετίζονται με

SOCS4

έκφρασης και της μετανάστευσης κυττάρων και εισβολής.

μετανάστευση του όγκου των κυττάρων και εισβολή είναι μια πολύ περίπλοκη διαδικασία στην οποία καρκίνου κύτταρα εξαπλώνονται από τον πρωτογενή όγκο, επιβιώνουν στην κυκλοφορία, και να αναπτυχθούν σε απομακρυσμένα σημεία του σώματος [28]. Κάθε διεργασία καθορίζεται από την μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των κυττάρων του όγκου και την τοπική μικροπεριβάλλον του όγκου που παρέχουν ένα ευνοϊκό περιβάλλον για τα καρκινικά κύτταρα για να επιβιώσουν και μετάσταση [29]. Πρόσφατες έρευνες έχουν δείξει ότι η υψηλή έκφραση των επιπέδων της IL-23, το οποίο μπορεί να ανιχνευθεί στο μικροπεριβάλλον, θα μπορούσε να διευκολύνει τη μετάσταση του όγκου. Για παράδειγμα, η IL-23 προάγει την μετάσταση στο ήπαρ καρκίνωμα με ΝΡ-κΒ-απορυθμίζεται έκφραση ΜΜΡ9 [9]. IL-23 εκφράζεται έντονα σε μεταστάσεις που σχετίζονται με αστροκύτταρα, και IL-23 επάγει την εξέλιξη του εγκεφάλου μελανώματος μετάσταση [8]. IL-23 παίζει έναν κεντρικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του οισοφάγου μέσω ενός μετάβαση επιθηλίου-μεσεγχύματος [7]. IL-23 μπορεί να ενισχύσει τον πολλαπλασιασμό και εισβολή των κυττάρων του ορθοκολικού καρκινώματος [10]. Ωστόσο, ο ρόλος της IL-23 σε μετανάστευση καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων και εισβολή είναι ακόμα άγνωστη. Απ ‘όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να αποδείξουν τις άμεσες επιδράσεις της IL-23 για τη μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι η IL-23 ρυθμίζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα [30]. Παρ ‘όλα αυτά, σε αντίθεση με τον καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων, δεν βρήκαμε στοιχεία που να υποστηρίζουν ότι η IL-23 επάγει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς (S1 Σχήμα). Υποθέτουμε ότι μπορεί να υπάρχουν κάποιες ενδογενείς διαφορές μεταξύ καρκίνου του θυρεοειδούς και του καρκίνου του πνεύμονα. Από την άλλη πλευρά, η IL-23 προάγει την μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων.

Προς το παρόν, δύο εκθέσεις συνεπαγόταν τον πιθανό ρόλο των SOCS4 στον καρκίνο. Μια μελέτη χρησιμοποίησε μια διπλή ανάλυση συνδυασμό σειρά για να αποδείξει ότι SOCS4 είναι ένα μυθιστόρημα γαστρικό καρκίνο κατασταλτικού γονιδίου [31]. Η άλλη μελέτη συνέκρινε τις διαφορές έκφραση

SOCS1-7

μεταξύ ιστών καρκίνου του μαστού και των ιστών φόντο του μαστού [32]. Υψηλή έκφραση του

SOCS4

συνδέεται σημαντικά με προγενέστερο στάδιο του όγκου και ένα καλύτερο κλινικό αποτέλεσμα στον ανθρώπινο καρκίνο του μαστού [32]. Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι τα επίπεδα των SOCS4 μειώθηκε σε IL-23-επαγόμενη μετανάστευση και εισβολή του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων (Σχήμα 2). Η θεραπεία με IL-23 είχε σαν αποτέλεσμα μειωμένα επίπεδα έκφρασης του

SOCS4

στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα (Σχήμα 2). Μέσω υπερέκφραση και knockdown πειραμάτων, δείχνουν ότι

SOCS4

ρυθμίζει αρνητικά IL-23 που προκαλείται από τη μετανάστευση και την εισβολή (Σχήμα 2). Πρόσφατα, αρκετές μελέτες έχουν δείξει αποδείξεις ότι η οικογένεια SOCS έχει ένα ισχυρό καταστολής όγκων ρόλο σε διάφορους τύπους στερεών και αιματολογικών όγκων [32,33].