You must be logged into post a comment.
Αφηρημένο
Ιστορικό
Η υπερέκφραση του RRM1 και RRM2 έχει συνδεθεί με την αντίσταση γεμσιταβίνη. BRCA1 υπερέκφραση αυξάνει την ευαισθησία στην πακλιταξέλη και δοκεταξέλη. Εξετάσαμε αναδρομικά την επίδραση των RRM1, RRM2 και έκφραση γονιδίων BRCA1 στην έκβαση γεμσιταβίνης σε συνδυασμό με docetaxel σε προχωρημένο μη μικροκυτταρικό καρκίνο των κυττάρων του πνεύμονα (NSCLC) ασθενείς.
Μεθοδολογία και ΚΥΡΙΟΤΕΡΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Όγκων δείγματα συλλέχθηκαν από 102 ασθενών με προχωρημένο NSCLC είχαν λάβει προηγουμένως χημειοθεραπεία θεραπεία με gemcitabine συν ντοσεταξέλη, ως μέρος της μια τυχαιοποιημένη μελέτη. RRM1, RRM2 και BRCA 1 mRNA επίπεδα αξιολογήθηκαν με ποσοτική PCR και συσχετίζονται με την απάντηση, ο χρόνος έως την εξέλιξη και την επιβίωση. Καθώς τα επίπεδα BRCA1 αυξάνεται, η πιθανότητα ανταπόκρισης αυξήθηκε (λόγος πιθανοτήτων [OR], 1,09:
σ
= 0,01) και ο κίνδυνος εξέλιξης μειώθηκε (Αναλογία κινδύνου [HR], 0,99?
p
= 0.36). Καθώς τα επίπεδα RRM1 και RRM2 αυξάνεται, η πιθανότητα ανταπόκρισης μειώθηκε (RRM1: Ή, 0,97?
σ
= 0,82? RRM2: Ή, 0,94?
σ
& lt? 0.0001) και ο κίνδυνος εξέλιξης αυξημένη (RRM1: HR, 1,02?
σ
= 0.001? RRM2: HR, 1.005?
σ
= 0,01). Μια αλληλεπίδραση παρατηρήθηκε μεταξύ BRCA1 και RRM1 επέτρεψε ασθενείς να ταξινομούνται σε τρεις ομάδες κινδύνου ανάλογα με τους συνδυασμούς των επιπέδων έκφρασης των γονιδίων, με χρόνοι μέχρι την πρόοδο της 10.13, 4.17 και 2.30 μήνες (
σ
= 0.001). χαμηλή έκφραση BRCA1 ήταν ο μόνος παράγοντας που συσχετίστηκε με μεγαλύτερο χρόνο μέχρι την εξέλιξη σε 31 ασθενείς που λαμβάνουν θεραπεία δεύτερης γραμμής σισπλατίνη βάση.
Συμπεράσματα
Η έκφραση του mRNA του BRCA1, RRM1 και RRM2 είναι δυνητικά ένα χρήσιμο εργαλείο για την επιλογή ασθενών με NSCLC για εξατομικευμένη χημειοθεραπεία και ΔΑΜ περαιτέρω έρευνα σε προοπτικές μελέτες
Παράθεση:. Μπουκοβίνας Ι, Παπαδάκη C, Mendez P, Τάρον Μ, Μαυρουδής D, Κουτσόπουλος A, et al. (2008) Tumor BRCA1, RRM1 και RRM2 mRNA επίπεδα έκφρασης και η κλινική ανταπόκριση στη Πρώτη Γραμμή γεμσιταβίνης σε συνδυασμό με docetaxel σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα ασθενείς. PLoS ONE 3 (11): e3695. doi: 10.1371 /journal.pone.0003695
Επιμέλεια: Torbjorn Ramqvist, του Ινστιτούτου Καρολίνσκα, στη Σουηδία
Ελήφθη: 2 Ιούνη, 2008? Αποδεκτές: 21 Οκτωβρίου 2008? Δημοσιεύθηκε: 11 Νοεμβρίου 2008
Copyright: © 2008 Μπουκοβίνας et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται
Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο εν μέρει υποστηρίζεται από το Σύλλογο Κρητών Ιατροβιολογικών Ερευνών (CABR). Ο Δρ John Souglakos είναι ο αποδέκτης μιας έρευνας CABR υποτροφία. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου
Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα
Εισαγωγή
μη μικροκυτταρικός καρκίνος των κυττάρων του πνεύμονα (NSCLC) παραμένει η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο [1], με μικρή βελτίωση στην επιβίωση, ανεξάρτητα από το είδος της χημειοθεραπείας που χρησιμοποιούνται, είτε σε συνδυασμό είτε ως μεμονωμένοι παράγοντες [2] . Συνδυασμοί κυτταροτοξικών παραγόντων τρίτης γενιάς, όπως οι ταξάνες, βινορελβίνη και γεμκιταβίνη, με σισπλατίνη έχουν αναδειχθεί ως νέα πρότυπα. Σε αρκετές κλινικές μελέτες φάσης ΙΙΙ σε προχωρημένο NSCLC, ο συνδυασμός της πλατίνας με ταξάνες επιτευχθεί μέσους χρόνους επιβίωσης των 8-11 μηνών και 1 έτους επιβίωση 31-46% [3]. συνδυασμοί μη-με βάση την πλατίνα με gemcitabine συν ντοσεταξέλη ή πακλιταξέλη έχουν αποδώσει ένα παρόμοιο όφελος επιβίωσης με ένα πιο ευνοϊκό προφίλ τοξικότητας [4], [5]. Προκειμένου να βελτιωθεί περαιτέρω επιβίωση, μια δοκιμή φάσης III εξατομικευμένων σισπλατίνης σύμφωνα με τα επίπεδα ERCC1 mRNA σε στάδιο IV NSCLC διεξήχθη. Οι ασθενείς στο σκέλος ελέγχου έλαβαν σισπλατίνη και ντοσεταξέλη, ενώ στη γονοτυπική βραχίονα, οι ασθενείς με χαμηλά επίπεδα ERCC1 έλαβαν σισπλατίνη και ντοσεταξέλη και τα άτομα με υψηλά επίπεδα έλαβε gemcitabine συν ντοσεταξέλη [6]. Αν και αντικειμενική ανταπόκριση ήταν υψηλότερη στο γονοτυπική χέρι από ό, τι στην ομάδα ελέγχου (50,7% έναντι 39,3%), αυτό δεν μεταφράζεται σε βελτίωση της επιβίωσης. Η δίκη Βρετανικής Πνευμονολογικής Oncology Group (BTOG1) βρέθηκε επίσης καμία συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων ERCC1 και την επιβίωση σε ασθενείς με προχωρημένο NSCLC αγωγή με docetaxel σε συνδυασμό με καρβοπλατίνη [7]. Αναδρομικές μελέτες του σταδίου IV NSCLC έχουν αναφέρει ότι οι ασθενείς με χαμηλά ERCC1 ή τα επίπεδα RRM1 mRNA είχε μια μέση επιβίωση μέχρι και 15 μήνες, όταν έλαβαν θεραπεία με γεμσιταβίνη και σισπλατίνη, με πιο σημαντικές διαφορές στην επιβίωση ανάλογα με τα επίπεδα RRM1 [8], [9], [10]. Μια μελέτη σκοπιμότητας εξατομικευμένη θεραπεία σε ασθενείς με NSCLC με υψηλή ERCC1 και χαμηλή υπομονάδα ριβονουκλεοτιδικής αναγωγάσης M1 (RRM1) mRNA έκφραση διαπίστωσε ότι γεμσιταβίνης σε συνδυασμό με docetaxel θα μπορούσε να είναι ο βέλτιστος συνδυασμός για αυτήν την υποομάδα ασθενών [11].
RRM1 και RRM2 κωδικοποιούνται από διαφορετικά γονίδια σε ξεχωριστές χρωμοσώματα και mRNAs τους εκφράζονται διαφορικά σε όλο τον κυτταρικό κύκλο. Μειωμένη έκφραση ας-7 microRNA (miRNA) συχνά παρατηρείται σε NSCLC [12] και συχνά οδηγεί σε υπερέκφραση του RRM1 και RRM2 [13]. Αντοχή σε γεμσιταβίνη έχει συσχετιστεί με τόσο RRM1 και RRM2 υπερέκφραση [14], [15]. Μικρά παρεμβαλλόμενα RNA που στοχεύουν RRM2 ενισχυμένη χημειοευαισθησία σε γεμσιταβίνη σε αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος [16]. Στη μελέτη μας ασθενείς με μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα που έλαβαν θεραπεία με gemcitabine συν ντοσεταξέλη, ασθενείς με χαμηλά επίπεδα τόσο RRM1 και RRM2 είχαν σημαντικά υψηλότερο ποσοστό ανταπόκρισης (60% έναντι 14,2%), ο χρόνος μέχρι την εξέλιξη (9,9 vs 2,3 μήνες), και τη συνολική επιβίωση (15.4 vs 3,6 μήνες) από ό, τι οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα και των δύο γονιδίων [17].
Ένας στενός συσχετισμός έχει επίσης παρατηρηθεί μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του RRM1 και BRCA1 [18], [19], [20], και η απώλεια του ας-7 έχει αποδειχθεί ότι ρυθμίζει προς τα πάνω
BRCA1
καθώς και
RRM1
και
RRM2
[13]. Επιπλέον, και τα δύο
BRCA1
και
RRM1
ρυθμίζονται προς τα άνω στο SV40 Τ /t-αντιγόνου υπογραφή [21]. BRCA1 έκφραση προσδίδει απόκλιση χημειοευαισθησία σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου [22], [23]. ασθενείς των ωοθηκών καρκίνο στις χαμηλότερες terciles έκφρασης BRCA1 έδειξαν ευαισθησία στη σισπλατίνη και αντίσταση στην πακλιταξέλη και δοκεταξέλη, ενώ εκείνοι στις υψηλότερες terciles έπρεπε αντοχή στη σισπλατίνη και ευαισθησία στο paclitaxel και docetaxel [23]. Τα χαμηλά επίπεδα BRCA1 συσχετίζονται επίσης με αυξημένη επιβίωση σε ασθενείς με NSCLC που έλαβαν θεραπεία με γεμσιταβίνη και σισπλατίνη [18].
Για να επικυρώσετε τα προηγούμενα ευρήματά μας για RRM1 και RRM2 [17] και να διερευνήσει περαιτέρω το ρόλο των γονιδίων BRCA1 σε ευαισθησία ταξάνη και την αντίσταση, μπορούμε αναδρομικά ανέλυσε μια σειρά από δείγματα όγκων από ασθενείς με προχωρημένο NSCLC έλαβαν θεραπεία με γεμσιταβίνη και ντοσεταξέλη σε μια τυχαιοποιημένη μελέτη φάσης ΙΙΙ που πραγματοποιούνται από την Ελληνική Ομάδα Ογκολογίας Ερευνών (HORG) [5].
Μέθοδοι
ασθενείς
δείγματα όγκων συλλέχθηκαν από πρωτογενείς όγκους από ασθενείς με ιστολογικά επιβεβαιωμένο ανεγχείρητο στάδιο IIIB και IV NSCLC, οι οποίοι περιλαμβάνονται στο πειραματικό σκέλος της μια τυχαιοποιημένη μελέτη HORG πραγματοποιείται από τον Απρίλιο 1999 έως το Σεπτεμβρίου 2002 [5] (δεν υπάρχει εγγραφή δίκη που απαιτείται πριν από το 2005). Τα κριτήρια επιλεξιμότητας αναφερθεί προηγουμένως. Η μελέτη εγκρίθηκε από τις επιτροπές δεοντολογίας των συμμετεχόντων νοσοκομείων, και όλοι οι ασθενείς έδωσαν υπέγραψε ενημέρωσε τη συγκατάθεσή τους πριν από την εισαγωγή στη μελέτη. Οι ασθενείς έλαβαν πρώτης γραμμής γεμσιταβίνη (Gemzar®? Eli Lilly, Indianapolis, IN, ΗΠΑ) 1000 mg /m
2 κατά τις ημέρες 1 και 8 και docetaxel (ντοσεταξέλη? Sanofi-Aventis, Collegeville, NJ, USA) 100 mg /m
2 την ημέρα 8, με την ανθρώπινη κοκκιοκυττάρων παράγοντας διέγερσης αποικίας υποστήριξη κάθε 3 εβδομάδες, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. αξιολόγηση του ασθενούς έγινε κατά την έναρξη και μετά από κάθε τρεις κύκλους χημειοθεραπείας [5].
Σχεδιασμός μελέτης
Η παρούσα μελέτη ήταν μια αναδρομική ανάλυση της προγνωστικής αξίας του BRCA1, έκφραση RRM1 και RRM2 mRNA σε NSCLC ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με πρώτης γραμμής gemcitabine συν docetaxel. Όλα τα διαθέσιμα βιοψίες όγκων του πρωτογενούς όγκου με περισσότερες από 100 κύτταρα ανά τμήμα συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση. Όλα τα αποτελέσματα αποτελεσματικότητας αξιολογήθηκαν για όλους τους ασθενείς που συμμετείχαν σε μια βάση πρόθεση για θεραπεία.
Η γονιδιακή έκφραση ανάλυση
Όλοι οι όγκοι παραφίνη-ενσωματωμένες εξετάστηκαν από δύο ανεξάρτητους παθολόγους να καθορίσουν την πλέον ενδεδειγμένη όγκου περιοχή για μικροδιατομής να εξασφαλίσει ένα ελάχιστο 90% των καρκινικών κυττάρων. Κακοήθη κύτταρα που προμηθεύονται χρησιμοποιώντας Eppendorf πιεζοηλεκτρικό microdissector (Eppendorf, Αμβούργο, Γερμανία). RNA καθαρίστηκε με την μέθοδο ΤπζοΙ LS (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) που ακολουθείται από καθίζηση με ισοπροπανόλη και θεραπεία ϋΝάσης (Ambion, Austin, ΤΧ, USA). cDNA σύνθεση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση SuperScript III αντίστροφης μεταγραφάσης (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Σχετική ποσοτικοποίηση της γονιδιακής έκφρασης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το ΑΒΙ Prism 7900HT Σύστημα Ανίχνευσης Αλληλουχίας (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). (Για περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με την ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης, δείτε Κείμενο S1).
Στατιστικές αναλύσεις
Εκτός από την ανάλυση των επιπέδων έκφρασης του κάθε γονιδίου ως συνεχής μεταβλητή, η έκφραση του γονιδίου ήταν επίσης κατηγοριοποιούνται σε terciles στην προκειμένου να διερευνηθεί η τάση κίνδυνο των μεταβλητών γονιδίων και προκειμένου να εντοπίσει εύκολα τις ομάδες των επιπέδων γονιδιακής έκφρασης με διαφορετικό κίνδυνο. Απαντήσεις καταγράφηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια RECIST [24]. Ο διάμεσος χρόνος για την εξέλιξη του όγκου και η συνολική επιβίωση υπολογίστηκαν από την έναρξη της θεραπείας με την πρώτη τεκμηριωμένη εξέλιξη της νόσου ή το θάνατο, αντίστοιχα.
Η πιθανή συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων βασικής γραμμής χαρακτηριστικά απόκρισης και η έκφραση του γονιδίου συγκρίθηκαν με είτε τα δύο ακριβής δοκιμασία Fisher -sided ή το Chi-square test για τις κατηγορικές μεταβλητές και η δοκιμασία Kruskal-Wallis για τις συνεχείς μεταβλητές. Η κανονικότητα των συνεχών μεταβλητών επαληθεύθηκε με δοκιμασία Kolmogorov-Smirnov. Το τεστ Spearman χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η συσχέτιση μεταξύ BRCA1, RRM1 και έκφραση RRM2 mRNA. Όλοι οι πιθανοί παράγοντες κινδύνου για την ανταπόκριση αξιολογήθηκε σε μια μονοπαραγοντική ανάλυση, και μια πολυπαραγοντική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης, με προσαρμοσμένο περίεργη αναλογίες και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% τους (CI), χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει ποια από τα στοιχεία που είχε σημαντική επιρροή στην απόκριση. Η δοκιμή πιθανότητα Hosmer-Lemeshow χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της καλής προσαρμογής.
Η συσχέτιση των παραγόντων κινδύνου με time-to-event τελικά σημεία αναλύθηκε με τη δοκιμασία log-rank, και η μέθοδος Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε να σχεδιάσετε τις αντίστοιχες καμπύλες χρόνου-to-εξέλιξη και την επιβίωση. Μία μονοπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox, με αναλογίες κινδύνου και 95% ΚΠ, χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η συσχέτιση μεταξύ των δυνητικών προγνωστικός παράγοντας και επιβίωση και ο χρόνος μέχρι την εξέλιξη. Οι παράγοντες αυτοί στη συνέχεια περιλαμβάνονται σε ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox με μια σταδιακή διαδικασία (προς τα εμπρός και προς τα πίσω) για να αξιολογηθεί η ανεξάρτητη σπουδαιότητα των διαφορετικών μεταβλητών για επιβίωση και ο χρόνος μέχρι την εξέλιξη. Η δοκιμή αναλογία πιθανότητας χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της καλής προσαρμογής και δοκιμασίας του Wald χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η σημασία του συντελεστή. Στην περίπτωση των πιθανών πολλαπλές συγκρίσεις, οι
σ
-τιμές διορθώθηκαν με τη διόρθωση Bonferroni.
Όλοι οι στατιστικοί υπολογισμοί πραγματοποιήθηκαν με SPSS, έκδοση 15.0 (SPSS Inc., Chicago, IL , ΗΠΑ). Δύο όψεων
σ
-τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές.
Αποτελέσματα
χαρακτηριστικά του ασθενούς και την κλινική έκβαση
Στην αρχική τυχαιοποιημένη μελέτη [ ,,,0],5], 209 ασθενείς με NSCLC υποβλήθηκαν σε θεραπεία με gemcitabine συν docetaxel? 107 δεν συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη λόγω έλλειψης ιστό του όγκου (Εικ. 1). Κλινικά δεδομένα και τα δείγματα από πρωτογενείς όγκους ήταν διαθέσιμα για 102 ασθενείς, οι οποίοι περιλαμβάνονται στην παρούσα μελέτη. Ενίσχυση του BRCA1, RRM1 και RRM2 ήταν επιτυχής σε 96 δείγματα. Ογδόντα-όνη ήταν αδενοκαρκινώματα, δέκα καρκινώματα πλακωδών κυττάρων, και πέντε καρκινώματα μεγάλων κυττάρων. Τα χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Στην αρχική δοκιμή, το ποσοστό ανταπόκρισης ήταν 30%, χρόνος έως την εξέλιξη 4 μήνες και η διάμεση επιβίωση τους 9 μήνες [5]. Αποτέλεσμα για τους 96 ασθενείς που αξιολογήθηκαν στην παρούσα μελέτη ήταν παρόμοιο:. Ποσοστό ανταπόκρισης 30,5%, χρόνος μέχρι την πρόοδο 4,2 μήνες και μέση επιβίωση 10,5 μήνες
Διακόσια εννέα ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία με gemcitabine συν ντοσεταξέλη, ως μέρος της μια τυχαιοποιημένη μελέτη φάσης ΙΙΙ σε προχωρημένο NSCLC [5]. βιοψία όγκου ελήφθη από ένα σύνολο 102 ασθενών? 68 ασθενείς είχαν αποκλειστεί διότι μόνο κυτταρολογικά δείγματα ήταν διαθέσιμα, και 39 βρογχικές βιοψίες περιείχαν πολύ λίγα κύτταρα του όγκου για ανάλυση. ανάλυση της έκφρασης mRNA ήταν εφικτή σε δείγματα όγκων από 96 102 ασθενείς.
Η
επίπεδα έκφρασης γονιδίων BRCA1, RRM1 και RRM2 mRNA
επίπεδα έκφρασης του mRNA διάμεσος ήταν 3,64 (εύρος 0- 34,37) για BRCA1, 0,82 (εύρος μηδέν έως 325,23) για RRM1 και 27,16 (εύρος 0,97 – 256,84) για RRM2 (Πίνακας 1). τα επίπεδα έκφρασης δεν ακολουθούν μια κανονική κατανομή (Εικ. S1). Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της ηλικίας, του φύλου, PS, ή το στάδιο της νόσου και BRCA 1, τα επίπεδα RRM1 ή RRM2 mRNA. Σημαντικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν συνολικά μεταξύ BRCA1 και RRM1 (ρ = 0,27?
σ
= 0.008) και μια μη σημαντική τάση για συσχέτιση μεταξύ RRM1 και RRM2 (ρ = 0,19?
σ
= 0,06 ) Τα επίπεδα mRNA. Υπήρξε επίσης μια σημαντική αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ BRCA1 και τα επίπεδα RRM2 mRNA (ρ = -0.25?
σ
= 0,02). Ο Πίνακας 1 δείχνει επίσης τα επίπεδα έκφρασης του mRNA των τριών γονιδίων, σύμφωνα με terciles.
Η γονιδιακή έκφραση και την ανταπόκριση στη θεραπεία
Για να προβλέψουν την ανταπόκριση στη θεραπεία, ένα μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης τοποθετηθεί για το έκφραση του κάθε γονιδίου ως συνεχή μεταβλητή. Καθώς τα επίπεδα BRCA1 αυξάνεται, η πιθανότητα ανταπόκρισης αυξήθηκε σημαντικά (Λόγος Αποδόσεις [OR] = 1,09? 95% CI, 01.02 – 01.16?
σ
= 0,01). Σε αντίθεση, τα επίπεδα RRM2 αυξάνεται, η πιθανότητα ανταπόκρισης μειώθηκε σημαντικά (OR = 0,94? 95% CI, 0,91 – 0,97?
σ
& lt? 0,0001). Μια παρόμοια αλλά μη σημαντική τάση παρατηρήθηκε για τα επίπεδα RRM1 (OR = 0,97? 95% CI, 0,77 – 1,23?
σ
= 0,82)
Όταν ανταποκρίθηκαν ταξινομήθηκαν ανάλογα με το γονίδιο τους. τα επίπεδα έκφρασης με terciles, η πλειοψηφία των ασθενών που ανταποκρίθηκαν είχαν υψηλή έκφραση BRCA1 και χαμηλή έκφραση RRM2: 58,6% στην υψηλότερη tercile έκφρασης BRCA1 (
σ
= 0,002) και 72,4% στην χαμηλότερη tercile έκφρασης RRM2 (
σ
& lt?. 0,0001) (Πίνακας 2)
Η
Η μονοπαραγοντική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης έδειξε ότι η έκφραση χαμηλή RRM2, κατά ECOG 0, και η έκφραση υψηλής BRCA1 σημαντικά σχετίζεται με μεγαλύτερη πιθανότητα ανταπόκρισης (Πίνακας 2). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης των μεταβλητών αυτών, μαζί με RRM1 και το στάδιο της νόσου, μόνο χαμηλή έκφραση RRM2 αναδειχθεί ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την απάντηση (Πίνακας 2).
Η γονιδιακή έκφραση και ο χρόνος έως την εξέλιξη
η μονοπαραγοντική ανάλυση για το χρόνο έως την εξέλιξη της αποκάλυψε ότι η μόνη κλινική μεταβλητή που σχετίζεται με το χρόνο έως την εξέλιξη ήταν PS (Αναλογία κινδύνου [HR] για το PS 1-2, 1,55? 95% CI, 0,99 – 2,41?
p
= 0,05) (Πίνακας 3). Η μονοπαραγοντική ανάλυση για το χρόνο έως την εξέλιξη ανάλογα με τα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου ως συνεχείς μεταβλητές έδειξε ότι RRM1 και RRM2 τιμές αυξάνονται, ο κίνδυνος εξέλιξης αυξηθεί σημαντικά: RRM1 (HR, 1,02? 95% CI, 01.01 – 01.02?
p
= 0.001)? RRM2 (HR, 1.005? 95% CI, 1,001 έως 1,008?
σ
= 0,01). Ωστόσο, τα επίπεδα BRCA1 αυξηθεί, ο κίνδυνος εξέλιξης μειώθηκε (HR, 0,99? 95% CI, 0,95 – 1,02?
σ
= 0,36).
Η
Όταν τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης ήσαν κατηγοριοποιούνται από terciles, ο κίνδυνος εξέλιξης ήταν μεγαλύτερη για τους ασθενείς στην ενδιάμεση και υψηλότερη terciles των RRM1 και RRM2 από ό, τι για εκείνους που έχουν το χαμηλότερο tercile: RRM1 ενδιάμεσο tercile (HR, 1,20? 95% CI, 0,72 – 1,97?
p
= 0,49)? RRM1 υψηλότερο tercile (HR, 1,51? 95% CI, 0,91 – 2,51?
σ
= 0,11)? RRM2 ενδιάμεσο tercile (HR, 1,28? 95% CI, 0,77 – 2,13?
σ
= 0,35)? RRM2 υψηλότερο tercile (HR, 1,93? 95% CI, 01.16 – 03.22?
σ
= 0,01) (Πίνακας 3). Ο κίνδυνος της εξέλιξης ήταν μεγαλύτερη για τους ασθενείς στο ενδιάμεσο και το χαμηλότερο tercile των γονιδίων BRCA1 από ό, τι για εκείνους με την υψηλότερη tercile: BRCA1 ενδιάμεσο tercile (HR, 1,33? 95% CI, 0,80 – 2,22?
σ
= 0,28) ? BRCA1 χαμηλότερη tercile (HR, 1,51? 95% CI, 0,91 – 2,49?
σ
= 0,11) (Πίνακας 3). Χρόνος έως την εξέλιξη, σύμφωνα με την έκφραση του γονιδίου από terciles παρουσιάζεται στον Πίνακα 3.
Ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο ήταν εξοπλισμένο με τις μεταβλητές που εξετάστηκαν στην μονοπαραγοντική ρύθμιση.
Όταν όρων αλληλεπίδρασης εξετάστηκαν για να διαπιστωθεί κατά πόσον βελτίωσε σημαντικά την προσαρμογή, καμία δεν ήταν σημαντική, εκτός από BRCA * RRM1, το οποίο έδωσε σημασία του
p
= 0.02 με το μοντέλο χωρίς τον όρο αλληλεπίδρασης (Πίνακας S1). Το πολυπαραγοντικό μοντέλο στη συνέχεια στρωματοποιημένη από RRM1 (Πίνακας S2) και χωρίς το στάδιο της νόσου. Σε αυτό το μοντέλο, οι ασθενείς στην χαμηλότερη tercile της RRM2 συνέχισαν να έχουν τον χαμηλότερο κίνδυνο εξέλιξης, ανεξάρτητα από τα επίπεδα RRM1.
Οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σε τρεις ομάδες ανάλογα με τον κίνδυνο της εξέλιξης, με βάση την αλληλεπίδραση παρατηρήθηκε μεταξύ RRM1 και BRCA1. Είκοσι-τέσσερις ασθενείς ήταν στην ομάδα χαμηλού κινδύνου (ενδιάμεσο BRCA 1 + χαμηλό RRM1? Υψηλό BRCA1 + χαμηλή RRM1? Υψηλό BRCA 1 + ενδιάμεσο RRM1)? 42 ασθενείς ήταν στην ομάδα ενδιάμεσου κινδύνου (χαμηλό BRCA 1 + χαμηλό RRM1? Ενδιάμεσο BRCA1 + υψηλής RRM1? Υψηλό BRCA1 + υψηλής RRM1)? και 30 ασθενείς ήταν στην ομάδα υψηλού κινδύνου (χαμηλό BRCA 1 + ενδιάμεσο RRM1? ενδιάμεσο BRCA 1 + ενδιάμεσο RRM1? χαμηλό BRCA1 + υψηλή RRM1).
Ο διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη ήταν 10,13 μήνες (95% CI, 7,65 -12.62) για τους ασθενείς στην ομάδα χαμηλού κινδύνου, 4.17 μήνες (95% CI, 72,90 – 5,44) για τους ασθενείς στην ομάδα ενδιάμεσου κινδύνου, και 2,30 μήνες (95% CI, 1,76 έως 2,84) για τους ασθενείς στην υψηλής ομάδα κινδύνου (
σ
= 0,001) (πίνακες S2, S3? Εικ. 2).
οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σε τρεις ομάδες ανάλογα με τον κίνδυνο της εξέλιξης, με βάση την αλληλεπίδραση παρατηρήθηκε μεταξύ RRM1 και BRCA1. Είκοσι-τέσσερις ασθενείς ήταν στην ομάδα χαμηλού κινδύνου (ενδιάμεσο BRCA 1 + χαμηλό RRM1? Υψηλό BRCA1 + χαμηλή RRM1? Υψηλό BRCA 1 + ενδιάμεσο RRM1)? 42 ασθενείς ήταν στην ομάδα ενδιάμεσου κινδύνου (χαμηλό BRCA 1 + χαμηλό RRM1? Ενδιάμεσο BRCA1 + υψηλής RRM1? Υψηλό BRCA1 + υψηλής RRM1)? και 30 ασθενείς ήταν στην ομάδα υψηλού κινδύνου (χαμηλό BRCA 1 + ενδιάμεσο RRM1? ενδιάμεσο BRCA 1 + ενδιάμεσο RRM1? χαμηλό BRCA1 + υψηλή RRM1). Ο διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη ήταν 10,13 μήνες (95% CI, 7,65 έως 12,62) για τους ασθενείς στην ομάδα χαμηλού κινδύνου, 4.17 μήνες (95% CI, 72,90 – 5,44) για τους ασθενείς στην ομάδα ενδιάμεσου κινδύνου, και 2,30 μήνες ( 95% CI, 1,76 έως 2,84) για τους ασθενείς στην ομάδα υψηλού κινδύνου (
σ
= 0.001) (Βλέπε επίσης πίνακες S2, S3).
η
η γονιδιακή έκφραση και την επιβίωση
στην μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης, η μόνη σημαντική κλινική μεταβλητή ήταν PS (HR για το PS 1-2, 1,94? 95% CI, 1.21 – 3.12?
σ
= 0,005) (Πίνακας 4 ). Όπως RRM1 και RRM2 τιμές αυξάνονται, ο κίνδυνος θανάτου αυξάνεται: RRM1 (HR, 1,01? 95% CI, 1,00 – 1,02?
σ
= 0.005)? RRM2 (HR, 1.004? 95% CI, 1,00 έως 1,008?
σ
= 0,06). Ωστόσο, τα επίπεδα BRCA1 αυξηθεί, ο κίνδυνος θανάτου μειώθηκε (HR, 0,99? 95% CI, 0,96 – 1,03?
σ
= 0,60). Όταν τα επίπεδα έκφρασης του γονιδίου ταξινομήθηκαν σε terciles, παρατηρήθηκε το ίδιο μοτίβο του αυξημένου κινδύνου θανάτου για υψηλότερα επίπεδα τόσο RRM1 και RRM2 και χαμηλότερα επίπεδα BRCA1 (Πίνακας 4). Στο πολυπαραγοντικό μοντέλο, συμπεριλαμβανομένων όλων των μεταβλητών από την μονοπαραγοντική ανάλυση, μόνο PS αναδειχθεί ως ένα σημαντικό παράγοντα για την επιβίωση (Πίνακας 4).
Η
Η γονιδιακή έκφραση και δεύτερης γραμμής θεραπεία
Δεύτερη -line θεραπεία χορηγήθηκε σε 31 ασθενείς, 90,3% των οποίων έλαβαν σισπλατίνη χημειοθεραπεία με βάση. Δεν υπήρχαν διαφορές στα επίπεδα έκφρασης γονιδίου μεταξύ των ασθενών που λαμβάνουν και εκείνων που δεν λαμβάνουν θεραπεία δεύτερης γραμμής. Χρόνος έως την εξέλιξη για όλους τους 31 ασθενείς που υπολογίζεται από την έναρξη της θεραπείας δεύτερης γραμμής ήταν 3,40 μήνες (95% CI, 2,73 έως 4,07). Σε αντίθεση με το πρότυπο που παρατηρείται με τη θεραπεία πρώτης γραμμής, τα χαμηλά επίπεδα του BRCA1 συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με το χαμηλότερο κίνδυνο εξέλιξης σε θεραπεία δεύτερης γραμμής. Ο διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη ήταν 6,60 μήνες για τους ασθενείς με το χαμηλότερο tercile, 2 μήνες για όσους στην ενδιάμεση tercile, και 2,40 μήνες για εκείνους με την υψηλότερη tercile της έκφρασης γονιδίων BRCA1 (
σ
= 0,004) (Πίνακας 5, Σχ. 3). mRNA έκφραση BRCA1 αναδειχθεί ως το μόνο σημαντικό παράγοντα τόσο στην μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση του χρόνου έως την εξέλιξη στους 31 ασθενείς που έλαβαν δεύτερης γραμμής θεραπεία (Πίνακας 6).
Σε αντίθεση με το πρότυπο που παρατηρείται με πρώτης γραμμής θεραπείας, χαμηλά επίπεδα BRCA1 συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με τον χαμηλότερο κίνδυνο εξέλιξης σε θεραπεία δεύτερης γραμμής. Ο διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη ήταν 6,60 μήνες για τους ασθενείς με το χαμηλότερο tercile, 2 μήνες για όσους στην ενδιάμεση tercile, και 2,40 μήνες για εκείνους με την υψηλότερη tercile της έκφρασης γονιδίων BRCA1 (
σ
= 0,004) (Πίνακας 5) . (Για περισσότερες λεπτομέρειες, δείτε το κείμενο.)
Η
Η
Συζήτηση
Η παρούσα μελέτη έχει βρεθεί μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης RRM2 mRNA και την αντιμετώπιση της γεμσιταβίνης σε συνδυασμό με docetaxel σε ασθενείς με προχωρημένο NSCLC. Οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση του mRNA RRM2 επιτευχθεί σημαντικά υψηλότερο ποσοστό ανταπόκρισης και ο χρόνος έως την εξέλιξη από ό, τι τα άτομα με υψηλή έκφραση RRM2. Επιπλέον, η έκφραση του mRNA RRM2 αποκαλύφθηκε ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την απάντηση. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν προηγούμενα ευρήματα μας σε μια μικρή ομάδα των αδενοκαρκινώματα πνεύμονα αντιμετωπίζονται με το ίδιο σχήμα [17]. Αν και μεσαία επίπεδα RRM2 ήταν διαφορετική στις δύο μελέτες, πιθανώς λόγω μικρές διαφορές στους πληθυσμούς των ασθενών ή σε ορισμένες στάδια της εκχύλισης RNA και διαδικασίες ποσοτικοποίηση PCR, η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων mRNA και κλινικά αποτελέσματα ήταν παρόμοια και στις δύο μελέτες. Περιέργως, διαγονιδιακά ποντίκια ανέπτυξαν αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, αλλά όχι άλλων όγκων παρουσία RRM2 υπερέκφρασης [25]. Σε παλαιότερες αναδρομικές μελέτες [8], [9], βρήκαμε ότι υψηλά επίπεδα RRM1 προβλέπεται πλέον η επιβίωση σε ασθενείς με ΜΜΚΠ σταδίου IV που έλαβαν θεραπεία με γεμσιταβίνη και σισπλατίνη, αλλά όχι σε εκείνους που έλαβαν θεραπεία με σισπλατίνη σχήματα χωρίς γεμσιταβίνη.
Η σημαντική συσχέτιση μεταξύ της κορυφής tercile της έκφρασης του mRNA των γονιδίων BRCA1 και βελτιωμένη ανταπόκριση που παρατηρήθηκε στην παρούσα μελέτη προσθέτει στο αυξανόμενο σώμα της στοιχεία που αποδεικνύουν ότι το BRCA1 είναι ένα κρίσιμο μεσολαβητής της απόκρισης βλάβης του DNA [26]. έκφραση Χαμηλή BRCA1 προσδίδει αυξημένη ευαισθησία στη σισπλατίνη [22], [23], [27], [28] και ετοποσίδη [22] και την αντίσταση σε Antimicrotubule φάρμακα, όπως η πακλιταξέλη [22], [23], [28], docetaxel [23] και βινορελβίνη [22], ενώ η έκφραση υψηλού BRCA1 οδηγεί σε αντίσταση στη σισπλατίνη [22], [23], [27], [28] και ετοποσίδη [22] και την ευαισθησία στην πακλιταξέλη [22], [23], [28], η docetaxel [23] και βινορελμπίνη [22]. Στην παρούσα μελέτη, οι ασθενείς με την έκφραση του mRNA χαμηλή BRCA1 είχαν μικρή ανταπόκριση και το χρόνο μέχρι την πρόοδο στην πρώτη γραμμή gemcitabine συν docetaxel? Αντίθετα, θα ληφθεί το μέγιστο όφελος από τη θεραπεία με σισπλατίνη με βάση δεύτερης γραμμής, την επίτευξη διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη της 6,6 μηνών.
Πολλά στρώματα αποδείξεις δείχνουν ότι η κατάργηση της λειτουργίας BRCA1 οδηγεί σε αντίσταση στην μικροσωληναρίων φάρμακα . Οι άτρακτο ελαττώματα σημείο ελέγχου που σχετίζονται με την αντίσταση σε ταξάνες και τα αλκαλοειδή της βίνκα. Καταστολή της
ΜΑϋ2
ή
BubR1
στα καρκινικά κύτταρα του μαστού πακλιταξέλη επεξεργασμένα MCF-7 καταργεί τη λειτουργία του σημείου ελέγχου της ατράκτου, με αποτέλεσμα την αυξημένη αντοχή paclitaxel [29]. Επιπλέον, προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης BRCA1 προκαλεί αντίσταση paclitaxel μέσω πρόωρη αδρανοποίηση του άξονα οδοφράγματος σε κύτταρα MCF-7 μέσω της προς τα κάτω ρύθμιση BubR1 [30].
BRCA1
δυσλειτουργία σχετίζεται στενά με την άτρακτο οδοφράγματος ελαττώματα αλλά όχι να G2 μεταβολές φάσης. Πράγματι, ένα σύνολο μεταβολών γονιδιακής έκφρασης, λόγω της knockdown του ενδογενούς BRCA1 έχει εντοπισθεί σε προστάτη (DU-145) και του μαστού (MCF-7) τα καρκινικά κύτταρα με ανάλυση μικροσυστοιχιών DNA [31]. Διάφορες κατηγορίες γονιδίων προς τα κάτω σε BRCA1-knockdown κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των γονιδίων που εμπλέκονται στην ρύθμιση της μεταγραφής και του κυτταρικού κύκλου και στην αντιγραφή και επιδιόρθωση του DNA. RNAs παρεμβολή BRCA1-short (siRNAs) προκάλεσε επίσης την προς τα κάτω ρύθμιση του DNA τοποϊσομεράσης II άλφα (TOP2A), ενός ενζύμου που εμπλέκεται στην αντιγραφή του DNA και τόσο στην DNA βλάβη που ανταποκρίνεται G2 σημείου ελέγχου και το G2 σημείο ελέγχου decatenation. Αυτό το σημείο ελέγχου απαιτεί TOP2A, ATR, WRN (σύνδρομο ελικάση του Werner), και BRCA 1? είναι ελαττωματικά σε κύτταρα με μεταλλαγμένα
BRCA1
. Ωστόσο, σε αντίθεση με
BRCA1
μεταλλαγμένου κυτταρικές σειρές, knockdown του άγριου τύπου BRCA1 δεν εξασθενούν αυτό το σημείο ελέγχου, αλλά έδειξε εξασθένηση της μιτωτικής ατράκτου οδοφράγματος [31]. BRCA1 ρυθμίζει θετικά την έκφραση πολλών γονιδίων που εμπλέκονται στο σημείο ελέγχου ατράκτου, όπως
Bub1
και
BubR1
. Συνεπής με αυτά τα ευρήματα, τα κύτταρα προεπεξεργασία με BRCA1-siRNAs απέτυχε να συλλάβει σε μετάφαση μετά από θεραπεία με νοκοδαζόλη [31].
Είναι ενδιαφέρον, το BRCA1-siRNAs προκάλεσε επίσης αρνητική ρύθμιση των γονιδίων του μεταβολισμού, συμπεριλαμβανομένων των
RRM2
και
διυδροφολικής αναγωγάσης (DHFR)
[31]. Επιπλέον, ένα ολοκληρωμένο γονίδιο υπογραφή από πολλαπλά διαγονιδιακά μοντέλα των επιθηλιακών καρκίνων εγγενείς στις λειτουργίες των Simian 40T ιού /t-αντιγόνα αποτελείται από τα γονίδια που ρυθμίζουν την αντιγραφή των κυττάρων, τον πολλαπλασιασμό και την επιδιόρθωση του DNA. BRCA1 υπερεκφράζεται σε τρεις Τ /Τ-αντιγονικές διαγονιδιακά μοντέλα ποντικών (μαστού, του πνεύμονα, του προστάτη), όπως και άλλα γονίδια, συμπεριλαμβανομένων των
Bub1b
,
TOP2A
,
DHFR
,
θυμιδυλικής συνθάσης (TS)
, και
RRM1
[21].
Η περιορισμένη αποτελεσματικότητα της τρέχουσας χημειοθεραπεία προσεγγίσεις συνοψίζεται στο μεταστατικό NSCLC, όπου ο χρόνος έως την εξέλιξη κυμαίνεται από 05.02 – 05.05 μηνών με διαφορετικούς συνδυασμούς χημειοθεραπείας, όπως η docetaxel σε συνδυασμό με σισπλατίνη [32] ή νέες ενώσεις όπως πεμετρεξίδη (ένας αναστολέας της TS και DHFR) συν σισπλατίνη [33]. Ως εκ τούτου, παρά την αναδρομική φύση της παρούσας μελέτης, ένα χρόνο έως την εξέλιξη 10 μηνών σε 24 από 96 ασθενείς στην ομάδα χαμηλού κινδύνου (υψηλή BRCA1 και χαμηλά επίπεδα RRM1), υπό αγωγή με docetaxel συν γεμσιταβίνη, αντιπροσωπεύει μια πολλά υποσχόμενη νέα ορόσημο που αξίζει επικύρωση σε μια προοπτική μελέτη των εξατομικευμένων χημειοθεραπείας. Αυτά τα κλινικά ευρήματα είναι παρόμοια με αυτά που λαμβάνονται με αναστολείς τυροσίνης κινάσης του EGFR σε ασθενείς με NSCLC που φιλοξενούν
EGFR
μεταλλάξεις. Στη μόνη προοπτική μελέτη αναφερόμενη θεραπείας με gefitinib σε 31 ασθενείς με NSCLC με
EGFR
μεταλλάξεις, ένας χρόνος έως την εξέλιξη της 9,2 μηνών επιτεύχθηκε [34].
Από την παρούσα μελέτη, δεν μπορούμε καθοριστεί εάν η έκφραση του mRNA του BRCA1, RRM1 ή RRM2 θα μπορούσαν να έχουν προγνωστική – καθώς επίσης και μια προγνωστική – ρόλο. Σε πρώιμο στάδιο, είχαν λάβει προηγούμενη χημειοθεραπεία, εκτομή ασθενείς με NSCLC, η έκφραση BRCA1 mRNA ήταν ο μόνος ανεξάρτητος προγνωστικός μεταβλητή [20]. Παρομοίως, η υψηλή έκφραση του mRNA του BRCA1-πρωτεΐνη αλληλεπίδρασης BACH1 /Brip1 έχει βρεθεί σε επιθετικών καρκίνων του μαστού [35]. Επιπλέον, BRCC36 έχει αποδειχθεί ότι είναι παρόντες στο σύμπλοκο BRCA1-RAP80 [36] και υπερεκφράζεται στον καρκίνο του μαστού, όπου προσδίδει ραδιοαντοχή [37]. Αυτό υπογραμμίζει την πιθανότητα ότι BRCA1 – ή πολλές αλληλεπιδρούν εταίρους -. Μπορεί να προσδώσει κακή πρόγνωση, καθώς και αντοχή στην σισπλατίνη ή άλλους παράγοντες που βλάπτουν το DNA
Εν ολίγοις, τα ευρήματά μας δείχνουν ότι η αποτελεσματικότητα της gemcitabine συν docetaxel μπορεί να είναι βελτιώνεται όταν προσαρμοστεί σύμφωνα με την έκφραση του mRNA του BRCA1, RRM1 και RRM2. Είναι ενδιαφέρον να προβούμε σε εικασίες ότι BRCA 1 θα μπορούσε να γίνει ένα σημαντικό προγνωστικό δείκτη για την προσαρμογή πεμετρεξίδη συν σισπλατίνη σε ασθενείς με χαμηλά επίπεδα BRCA1, αφού BRCA1 θα μπορούσε να είναι ένα υποκατάστατο της DHFR και TS επίπεδα [21], [31]. Οι προοπτικές μελέτες των εξατομικευμένων χημειοθεραπείας με βάση την έκφραση των γονιδίων αυτών έχουν ανοίξει.
Υποστήριξη Πληροφορίες
Εικόνα S1. οικόπεδα
Box δείχνει τιμές έκφρασης mRNA για BRCA1, RRM1 και RRM2. Αριθμητικές τιμές που παρουσιάζονται σε κάθε Θηκόγραμμα είναι αξίες που διαφέρουν από τη μέση. Αυτές οι αριθμητικές τιμές έχουν την πιθανότητα να ανήκουν στην κατανομή αυτών των γονιδίων
doi:. 10.1371 /journal.pone.0003695.s001
(2.25 MB ΔΕΘ)
Πίνακα S1.
Αλληλεπιδράσεις για το χρόνο έως την εξέλιξη
doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s002
(0,05 MB DOC)
Πίνακας S2.
πολυπαραγοντική ανάλυση του χρόνου έως την εξέλιξη στρωματοποιημένη κατά RRM1
doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s003
(0,04 MB DOC)
Πίνακα S3.
Ο διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη στρωματοποιημένη κατά RRM1
doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s004
(0,04 MB DOC)
Κείμενο S1.
Μπουκοβίνας et al – BRCA1
doi: 10.1371 /journal.pone.0003695.s005
(0,04 MB DOC)
You must be logged into post a comment.