Αφηρημένο

σιλυμπίνη ή silibinin, ένα flavonolignan απομονωθεί από σπόρους γαϊδουράγκαθο γάλα, είναι ένα από τα δημοφιλή συμπληρώματα διατροφής και έχει μελετηθεί εκτενώς για τις αντιοξειδωτικές, το συκώτι και έχει αντικαρκινικές ιδιότητες. Έχουμε Προβλέπεται ότι δραστικότητα της σιλυβίνης θα μπορούσε να ενισχυθεί περαιτέρω μέσω κατάλληλων τροποποίηση /s στη χημική δομή του. Επομένως, εδώ, συνθέσαμε και χαρακτηρίζεται από μία σειρά παραγώγων σιλυβίνης δηλαδή 2,3-διυδροσιλυβίνη (DHS), 7-

O

-methylsilybin (7OM), 7-Ο-galloylsilybin (7OG), 7,23 -disulphatesilybin (DSS), 7-

O

-palmitoylsilybin (7OP), και 23-

O

-palmitoylsilybin (23OP)? και συγκρίθηκε η αποτελεσματικότητα αντικαρκινικών τους χρησιμοποιώντας ανθρώπινης κύστης HTB9 καρκίνο, καρκίνο του παχέος εντέρου HCT116 και του προστάτη PC3 κύτταρα καρκινώματος. Σε όλες τις 3 κυτταρικές σειρές, DHS, 7OM και 7OG καταδειχθεί καλύτερα ανασταλτικά αποτελέσματα ανάπτυξης και σε σύγκριση με σιλυβίνη, ενώ άλλα παράγωγα σιλυβίνης έδειξαν μικρότερο ή καθόλου αποτελεσματικότητα. Στη συνέχεια, παρασκευάσαμε τα οπτικά ισομερή (Α και Β) της σιλυβίνης, DHS, 7OM και 7OG, και συγκρίθηκε η αποτελεσματικότητα αντικαρκινικών τους. Τα ισομερή αυτών των τριών παραγώγων σιλυβίνης έδειξαν επίσης καλύτερη αποτελεσματικότητα σε σύγκριση με αντίστοιχα ισομερή σιλυβίνη, αλλά σε κάθε μία, δεν υπήρξε σαφής σιλυβίνης Α έναντι προτίμηση δραστικότητα ισομερές Β. Περαιτέρω μελέτες σε κύτταρα ΗΤΒ διαπίστωσε ότι το DHS, 7OM και 7OG ασκούν καλύτερη αποπτωτική δράση από silibinin. Δοκιμασίες κλωνογονικότητας σε κύτταρα HTB9 επιβεβαίωσε περαιτέρω ότι τόσο οι ρακεμικά μείγματα, καθώς και καθαρά οπτικά ισομερή του DHS, 7OM και 7OG ήταν πιο αποτελεσματικό από σιλυβίνη. Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν σαφώς ότι η αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου της σιλυβίνης θα μπορούσε να ενισχυθεί σημαντικά μέσω δομικές τροποποιήσεις, και να προσδιορίσει ισχυρή αποτελεσματικότητα αντικαρκινικών παραγώγων σιλυβίνης, δηλαδή DHS, 7OM, και 7OG, που σημαίνει ότι θα πρέπει να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα και η τοξικότητα τους σε σχετικές προ-κλινικά μοντέλα καρκίνου σε τρωκτικά

Παράθεση:. Agarwal C, Wadhwa R, Deep G, Μπίντερμαν D, Gažák R, Kren V, et al. (2013) Αντικαρκινική Αποτελεσματικότητα της σιλυβίνης Παραγώγων – Ένα σχέσης δομής-δραστικότητας. PLoS ONE 8 (3): e60074. doi: 10.1371 /journal.pone.0060074

Συντάκτης: Stephen J. Polyak, του Πανεπιστημίου της Ουάσινγκτον, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 10 Δεκεμβρίου του 2012? Αποδεκτές: 21 Φεβρουαρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 28, Μαρτίου, 2013

Copyright: © 2013 Agarwal et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το παρόν έργο υποστηρίχθηκε από NCI RO1 χορηγεί CA102514 και CA112304, AMVIS CZ-ΗΠΑ συνεργασίας ME10027 έργου από το Υπουργείο Παιδείας της Δημοκρατίας της Τσεχίας (VK και RA), και RVO61388971 (Θεσμικές Έννοια του Ινστιτούτου Μικροβιολογίας, Πράγα). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

σιλυμπίνη ή silibinin (C

25Η

22o

10, CAS Νο 22888-70-6, Σχήμα 1α) είναι ένα δημοφιλές συμπλήρωμα διατροφής απομονωθεί από τους σπόρους του

Silybum marianum

(L.) Gaertn (Οικογένεια Asteraceae), γνωστή ως γαϊδουράγκαθο γάλα. εκχύλισμα γαϊδουράγκαθο υποδηλώνονται ως σιλυμαρίνη έχει μια μακρά ιστορία της χρήσης στη λαϊκή ιατρική και τώρα συχνά χρησιμοποιούνται για την πρόληψη ή /και θεραπεία διαταραχών του ήπατος, συμπεριλαμβανομένων ιογενή ηπατίτιδα, κίρρωση του ήπατος που σχετίζεται με την κατάχρηση οινοπνεύματος, ηπατική βλάβη από τα ναρκωτικά & amp? βιομηχανικές τοξίνες [1] – [3]. Σιλυμπίνη θεωρείται, επίσης, ένα αποτελεσματικό αντίδοτο κατά των δηλητηριάσεων από καπάκι θάνατο μανιταριών (

phalloides Amanita

) [2], [4]. Επιπλέον, σιλυμπίνη παρουσιάζει επίσης ισχυρή αντιοξειδωτική δράση μέσω σαρώσεως ρίζες υδροξυλίου και αναστέλλοντας την υπεροξείδωση των λιπιδίων δρώντας ως αντιοξειδωτικό αλυσίδα-σπάζοντας [5], [6]. Κατά τις δύο τελευταίες δεκαετίες, εκτός από το συκώτι και έχει αντιοξειδωτική δράση, σιλυβίνη απέδειξε αξιοσημείωτη αντικαρκινική καθώς και αποτελεσματικότητα χημειοπροληπτική καρκίνου σε προ-κλινικές κυτταρική καλλιέργεια και ζωικά μοντέλα διαφόρων επιθηλιακών καρκίνων συμπεριλαμβανομένου του δέρματος, της ουροδόχου κύστης, του παχέος εντέρου, του προστάτη, του πνεύμονα κλπ [7], [8]. Με βάση αυτά τα ενθαρρυντικά αποτελέσματα από την προ-κλινικές μελέτες, σιλυβίνη έχει επίσης δοκιμαστεί σε ασθενείς με καρκίνο του ανθρώπου σε πιλοτική φάση των κλινικών δοκιμών I-II, όπου αναφέρθηκε να είναι καλά ανεκτή και έδειξε βιοδιαθεσιμότητα του πλάσματος και του στόχου του ιστού [7], [ ,,,0],9] – [11]. Αρκετά παραδοσιακά τοξικολογικές δοκιμές έχουν αποδείξει τη μη-τοξική φύση της σιλυβίνης, και φέρεται να είναι ασφαλή για κατανάλωση από τον άνθρωπο [10], [12]. Με βάση την αποδεδειγμένη της, καθώς και των αναδυόμενων προληπτική και θεραπευτική αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου, θα ήταν μεγάλης σημασίας και αξίας μεταφραστική εάν η αποτελεσματικότητα της σιλυβίνης θα μπορούσε να ενισχυθεί περαιτέρω μέσω κατάλληλων χημικής τροποποίησης /s στη δομή του, καθώς είναι προφανές ότι σιλυβίνης έχει ένα αποτελεσματικό «μολύβδου δομή».

(α-Η) Χημικές δομές της σιλυβίνης, σιλυμπίνη α, σιλυμπίνη Β, 2,3-διυδροσιλυβίνη, 7-

O

-methylsilybin, 7-

O

-galloylsilybin, 7,23-διθειική σιλυμπίνη, 7-

O

-palmitoylsilybin, και 23-

O

-palmitoylsilybin.

Η

τα τελευταία χρόνια, υπήρξε μια μεγαλύτερη έμφαση στην κατανόηση της λεπτομερούς χημικής δομής της σιλυβίνης, τον εντοπισμό και την σύνθεση στερεοϊσομερή της καθώς και την αξιολόγηση βιολογική αποτελεσματικότητα τους [13] – [17]. Σιλυμπίνη τώρα επιβεβαιώνεται για να είναι ένα μίγμα 1:01 των δύο οπτικά ισομερή και συγκεκριμένα σιλυμπίνη Α και Β σιλυμπίνη (Σχήμα 1β και 1γ). Επιπλέον, η λεπτομερής ρόλος των αντίστοιχων ομάδων υδροξυλίου και ομάδες της σιλυβίνης έχει τώρα χαρακτηριστεί καλά, και ότι η γνώση έχει επιτρέψει την ταυτοποίηση των κατάλληλων θέσεων για τον σχεδιασμό και τη σύνθεση των νέων παραγώγων σιλυβίνης χωρίς να επηρεάζει τη βιολογική δραστικότητα των προκυπτόντων συζευγμάτων [18] , [19]. Αυτές οι μελέτες έχουν προσδιορίσει ότι οι πιο κατάλληλες θέσεις για τροποποιήσεις σιλυβίνης είναι 7-ΟΗ και /ή 23-OH [18], [19]? και με βάση αυτές τις κρίσιμες παρατηρήσεις, αρκετά παράγωγα της σιλυβίνης έχουν σχεδιαστεί, συντεθεί και χαρακτηριστεί [20] – [23]. Για παράδειγμα, έχουμε συντεθεί και χαρακτηριστεί 7

-Ο

– και 23

-Ο

ακυλο-παράγωγα του silibinin με ποικίλα μήκη αλυσίδας ακυλίου, και επιβεβαίωσαν αντιοξειδωτική τους και αντι-ιικά δραστηριότητες [20]. Παρομοίως, μια σειρά από σιλυβίνης εστέρων galloyl έχουν επίσης συντεθεί και 7

-Ο

-galloylsilybin ταυτοποιήθηκε ως η πιο αποτελεσματική ένωση από την άποψη της αντι-αγγειογόνου αποτελεσματικότητα [21]. Έχουμε επίσης αναφερθεί ότι η αντι-αγγειογενετική δραστικότητα των Β ισομερούς της 7ης

-Ο

-galloylsilybin είναι σημαντικά υψηλότερο από το ισομερές Α [21]. Ομοίως, σιλυβίνη προϊόν οξείδωσης, 2,3-διυδροσιλυβίνη, έχει επίσης συντεθεί η οποία έδειξε καλύτερη αντιοξειδωτικό δυναμικό από σιλυβίνης? το παράγωγο καρβοξυλικού οξέος του 2,3-διυδροσιλυβίνη, δηλαδή 2,3-dehydrosilybinic οξύ, έχει δείξει καλύτερα αντι-λιπίδιο υπεροξείδωση και αντι-ρίζα δραστηριότητες σάρωσης και εμφανίζει καλύτερη διαλυτότητα στο νερό [22], [24]. Έχουμε ετοιμάσει επίσης μια μεγάλη σειρά από

O

αλκύλιο παράγωγα (μεθυλο και βενζυλο) της σιλυβίνης και 2,3-διυδροσιλυβίνη, και έχουν εντοπίσει κάποια νέα παράγωγα με ισχυρή αποτελεσματικότητα εναντίον P-γλυκοπρωτεΐνη μεσολάβηση δραστηριότητα αποβολής του φαρμάκου [23]. Στο σύνολό τους, οι παραπάνω μελέτες υποδηλώνουν σαφώς ότι η βιολογική αποτελεσματικότητα της σιλυβίνης θα μπορούσε να ενισχυθεί σημαντικά μέσω κατάλληλων χημικών τροποποιήσεων.

Με την άποψη ότι πολλά από τα παράγωγα σιλυβίνης έχουν δείξει καλύτερη δραστηριότητα, η οποία μητρικού μορίου σε διάφορα βιολογικά συστήματα και ότι σιλυβίνη ίδια εξασκεί ισχυρή αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου, στην παρούσα μελέτη, συγκρίναμε την αποτελεσματικότητα αντικαρκινικών διαφόρων παραγώγων σιλυβίνης (τόσο τα υπάρχοντα καθώς και πρόσφατα σχεδιασμένο) σε τρεις διαφορετικές ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές, και προσδιορίστηκαν τρεις παράγωγα σιλυβίνης με αντι- δραστηριότητα του καρκίνου καλύτερα από σιλυμπίνη.

Υλικά και Μέθοδοι

Cell Culture, Θεραπεία και Αντιδραστήρια

Ανθρώπινα κύτταρα HTB9 καρκίνου της ουροδόχου κύστης, κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου HCT116 και τα κύτταρα PC3 καρκίνου του προστάτη είχαν αγοραστεί από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). HTB9 και PC3 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI1640 συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό και 100 U /mL πενικιλλίνη G και 100 μg /mL θειική στρεπτομυκίνη στους 37 ° C σε υγροποιημένη 5% CO

2 θερμοκοιτίδα. κύτταρα HCT116 αναπτύχθηκαν σε κατά Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό και 100 U /mL πενικιλλίνη G και 100 μg /mL θειική στρεπτομυκίνη στους 37 ° C σε υγροποιημένη 5% CO

2 θερμοκοιτίδα. Όλα τα υλικά καλλιέργειας κυττάρων ήταν από την Invitrogen Corporation (Gaithersburg, MD). Τα κύτταρα επιστρώθηκαν και υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε 40-50% συρροή με διαφορετικές δόσεις της σιλυβίνης ή τα παράγωγά του (5-60 μΜ εντός μέσου) διαλύεται αρχικά σε DMSO για τα επιθυμητά χρονικά διαστήματα υπό συνθήκες ορού. Μία ίση ποσότητα DMSO (όχημα) ήταν παρούσα σε κάθε θεραπεία, περιλαμβανομένου του ελέγχου? συγκέντρωση του DMSO δεν υπερέβαινε το 0,1% (ν /ν) σε κάθε θεραπεία. Στο τέλος της επιθυμητής θεραπειών, διάφορες αναλύσεις διεξήχθησαν όπως περιγράφεται αργότερα. Πρωτογενής αντισώματος για cPARP και υπεροξειδάσης συζευγμένο δευτερεύον αντίσωμα αντι-κουνελιού αγοράστηκαν από Cell Signaling (Beverly, ΜΑ). Αντίσωμα για τουμπουλίνη ήταν από την NeoMarkers (Fremont, CA). Hoechst 33342, κρυσταλλικό ιώδες και ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) ήταν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ). σύστημα ανίχνευσης ECL και συζευγμένο με υπεροξειδάση δευτερογενές αντίσωμα αντι-ποντικού ήταν από GE Healthcare (Buckinghamshire, UK). Όλα τα άλλα αντιδραστήρια ελήφθησαν σε εμπορικά διαθέσιμα υψηλότερο βαθμό καθαρότητας τους.

Χημεία

Silymarin ως βασική ύλη για όλες τις διαδοχικές προϊόντα ελήφθη από Λιαονίνγκ Senrong Pharm. Co, LTD (Panjin επαρχία Liaoning, Κίνα). Η οπτικά καθαρή σιλυβίνη Α και Β σιλυβίνης ελήφθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25], [26]? κυρίως, μια νέα μέθοδος παρασκευαστική διαχωρισμού που αναπτύχθηκε από εμάς πρόσφατα [25], [26], το οποίο βασίζεται σε λιπάση που καταλύεται ενζυματική διάκριση των δύο σιλυβίνης στερεοϊσομερών, επέτρεψε την παρασκευή όλων των παραγώγων που αναφέρονται σε αυτή την εργασία σε οπτικά καθαρή μορφή στο μεγάλο κλίμακα. Οι μέθοδοι σύνθεσης, τα συνθετικά σχήματα, και τα αναλυτικά δεδομένα επιβεβαιώνουν την δομή του προηγουμένως συντίθεται και αναφερθεί σιλυβίνης παραγώγων (οι οποίες αξιολογήθηκαν για αντικαρκινική δράση τους στην παρούσα μελέτη) συνοψίζονται στο Methods S1 και σχήματα S1, S2, S3, S4, S5 και πίνακες S1, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S8, αντίστοιχα. Εν συντομία, 2,3-διυδροσιλυβίνη (DHS) Α και Β παρασκευάστηκαν με μία καταλυόμενη με βάση την οξείδωση των αντίστοιχων σιλυβίνης Α και Β όπως περιγράφεται πρόσφατα [22], [24]? 7-

O

-Methylsilybin (7OM) Α και Β παρασκευάστηκαν με την καταλυόμενη με βάση μεθυλίωση των αντίστοιχων σιλυβίνης Α και Β [23]? και 7-

O

-palmitoylsilybin (7OP), 23-

O

-palmitoylsilybin (23OP) και 7-

O

-galloylsilybin (7OG) τόσο από σιλυμπίνη Α και Β συντέθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως από εμάς [20] – [23].

Παρασκευή 7,23-διθειικού σιλυβίνης [σιλυβίνης-7,23-διυλο ​​

δις

(θειικό υδρογόνο), DSS], και Χαρακτηρισμός με μάζας και NMR φάσματα

σε ένα αναδευόμενο διάλυμα της σιλυβίνης [σιλυβίνης A, B σιλυβίνη ή φυσικό σιλυβίνης Α & amp? Β (1:01), 200 mg, 0.43 mmol] σε DMF (2 mL), Py⋅SO

3 (200 mg, 1.26 mmol) προστέθηκε. Η αντίδραση σβήστηκε μετά από 1 ώρα ανάδευσιν εις 40 ° C με την προσθήκη EtOH (0.5 mL). Μετά από μια σύντομη ανάδευση, το μίγμα της αντίδρασης φορτώθηκε σε στήλη πυριτικής πηκτής και χρωματογραφήθηκε με το διαλύτη EtOH /MeOH /CH

2Cl

2 /νερό (2/1/9 /0,3) για να δώσει ένα ανοιχτό κίτρινο έλαιο, το οποίο λυοφιλοποιήθηκε για να ληφθεί η ένωση του τίτλου είτε ως καθαρό διαστερεομερές Α ή Β ή του μείγματος Α & amp? Β (CCA 160 mg, 60%) ως ωχροκίτρινο προϊόν λυοφίλισης

Τα φάσματα μάζης του συντεθεί. ένωση μετρήθηκαν σε υποβοηθούμενης από μήτρα εκρόφησης λέιζερ /ιονισμού ανακλαστήρα χρόνο-πτήσης φασματόμετρο μάζας MALDI-TOF ULTRAFLEX (Bruker-Daltonics, Βρέμη, DE). Θετικά φάσματα βαθμονομηθεί εξωτερικά χρησιμοποιώντας το μονο-ισοτοπικό [Μ + Η] + ιόν της ανθρώπινης αγγειοτενσίνης Ι 1296,69

m /z

, MRFA πεπτίδιο 524.26

m /z

και CCA κορυφή μήτρα 379,09

m /z

. Ένα mL διαλύματος /10 mg α-κυανο-4-υδροξυ-κινναμωμικού οξέος ή 2,5- dihydrobenzoic οξέος σε 50% MeCN /0.3% οξικό οξύ χρησιμοποιήθηκε ως μήτρα MALDI. 1 μl του δείγματος διαλύεται σε νερό αφέθηκε να ξηρανθεί σε θερμοκρασία περιβάλλοντος και επί διαστρωμάτωσης με 0,3 μΙ του διαλύματος μήτρας επί του στόχου. Τα θετικά ή αρνητικά φάσματα MALDI-TOF συλλέχθηκαν σε λειτουργία ανακλαστήρα. MS (MALDI-TOF):

m /z

(%) = 643 (17, Μ

+ + Η.), 561 (32), 547 (36), 545 (100), 481 (25), 465 (69).

Τα φάσματα NMR μετρήθηκαν σε Bruker AVANCE III 400 (συχνότητα παρατήρησης 400,13 MHz για

1, 100.62 MHz για

13C) σε DMSO-

d

6

(Sigma Aldrich) στους 30 ° C. Υπολειμματικό σήμα διαλύτη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό πρότυπο ((δ

Η 2.500, δ

C 39.60). Οι χημικές μετατοπίσεις και οι σταθερές αλληλεπίδραση καταγράφηκαν από τα φάσματα στα οποία εφαρμόστηκαν λειτουργίες στάθμιση (εκθετική με αρνητικό εκθέτη και τη λειτουργία Gauss). οι χημικές μετατοπίσεις εκφράζονται σε δ κλίμακας (ppm) και σταθερές αλληλεπίδρασης σε Hz. Ψηφιακή ανάλυση επιτρέπει την έκφραση χημικές μετατοπίσεις των πρωτονίων με τρία και άνθρακες με δύο δεκαδικά ψηφία, αντίστοιχα, και σταθερές αλληλεπίδραση πρωτονίων-πρωτονίων με ένα δεκαδικό ψηφίο. Πολλαπλότητα των σήματα άνθρακα προσδιορίστηκε από πρωτόνιο φτιαγμένος φάσματα HSQC ανάθεσης σημάτων βασίζεται σε πειράματα 2D NMR. – COSY, HSQC, HMBC, τα οποία διεξήχθησαν με τη χρήση τυποποιημένων προγραμμάτων (Bruker BioSpin GmbH, Rheinstetten, DE)

1 και

. τα φάσματα 13C NMR των δύο οπτικά καθαρής silybinA-7,23-διυλο ​​

δις

(θειικό υδρογόνο) και silybinB-7,23 διυλο-

(θειικό υδρογόνο) δις

, οι οποίες δεν έχουν αναφερθεί μέχρι στιγμής, περιγράφονται στους πίνακες 1 και 2, αντίστοιχα.

Η

δοκιμασίες ανάπτυξης κυττάρου

σε κάθε περίπτωση, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε περίπου 40-50% συρροή και κατεργάζεται με σιλυβίνη ή τα παράγωγά του ή καθαρά ισομερή της κάθε ένωσης υπό συνθήκες ορό όπως περιγράφεται παραπάνω. Μετά από 24 και 48 ώρες από θεραπείες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν με σύντομη επεξεργασία με θρυψίνη και πλύθηκαν με PBS. Συνολικός αριθμός των κυττάρων προσδιορίστηκε με καταμέτρηση σε κάθε δείγμα εις διπλούν χρησιμοποιώντας αιμοκυτόμετρο υπό ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο. Κάθε σημείο της θεραπείας και ο χρόνος είχε τρεις ανεξάρτητες πλάκες.

Προσδιορισμός απόπτωσης

Ποσοτική κυτταρικό θάνατο αποπτωτικών από σιλυβίνης και των παραγώγων της σε κύτταρα HTB9 μετρήθηκε με δοκιμασία Hoechst όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27]. Εν συντομία, μετά επιθυμητό θεραπείες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και στη συνέχεια βάφονται με χρωστική ουσία δέσμευσης DNA Hoechst 33342 και ΡΙ. Τα αποπτωτικά κύτταρα ποσοτικά χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού (Axioskope 2 συν-HBO 100, Zeiss, Jena, DE) με μέτρηση των κυττάρων /μικροσκοπικού πεδίου (στα 400 χ) σε έξι πεδία για κάθε δείγμα (εις τριπλούν). Αποπτωτικών κυττάρων έδειξαν έντονο μπλε (πρώιμων αποπτωτικών) ή πορτοκαλί-κόκκινο φθορισμό (τέλη αποπτωτικών), η οποία διακρίνεται από νεκρωτικό κύτταρα που δείχνουν έντονο κόκκινο φθορισμό (ΡΙ-χρώση).

Δυτική Blotting

Για κηλίδωση Western, λύματα (80 μα) μετουσιώθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα δειγμάτων SDS-PAGE 2Χ και αναλύθηκαν σε 8% πηκτές Τπδ-γλυκίνης. Οι διαχωρισμένες πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης και ακολουθεί αποκλεισμός με 5% άπαχο γάλα σε σκόνη (w /v) σε Tris-ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα (10 mM Tris-HCl, ρΗ 7.5, 100 mM NaCl, 0,1% Tween 20) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά τον αποκλεισμό, οι μεμβράνες ανιχνεύθηκαν με πρωτογενές αντίσωμα για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια όλη τη νύκτα στους 4 ° C που ακολουθείται από κατάλληλο δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και έγινε ορατό με σύστημα ανίχνευσης ECL. Σε κάθε περίπτωση, οι κηλίδες υποβλήθηκαν σε πολλαπλές εκθέσεις σχετικά με την ταινία για να βεβαιωθείτε ότι η πυκνότητα μπάντα είναι στη γραμμική περιοχή. Για όλα τα αποτελέσματα, αυτοραδιόγραμμα /ζώνες σαρώθηκαν με το Adobe Photoshop 6.0 (Adobe Systems Inc., San Jose, CA). Για να διασφαλιστεί η ίση πρωτεΐνη φόρτωσης, κάθε μεμβράνη γδύθηκε και εκ νέου ανιχνεύθηκαν με αντίσωμα α-τουμπουλίνης.

κλωνογονική δοκιμασία

κύτταρα HTB9 απλώθηκαν σε 6-φρεατίων και επιτρέπεται να αποδίδουν στις πλάκες για 24 ώρες. Στη συνέχεια, ανάλογα με το πρωτόκολλο θεραπείας, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με κάθε ένωση κάθε 72 ώρες ή κατεργασμένα μόνο για 2 ώρες κάθε 24 ώρες. Στο τέλος της προκαθορισμένης περιόδου, τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με παγωμένο PBS, μονιμοποιήθηκαν με το μίγμα μεθανόλης και παγόμορφου οξικού οξέος (3:01) για 10 λεπτά και στη συνέχεια βάφονται με 1% κρυσταλλικό ιώδες σε μεθανόλη για 15 λεπτά που ακολουθείται από έκπλυση με απιονισμένο νερό. Αποικίες με περισσότερα από 50 κύτταρα μετρήθηκαν.

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση SigmaStat 2,03 λογισμικού (Jandel Scientific, San Rafael, CA). Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μια μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από Tukey t-test, και μια στατιστικά σημαντική διαφορά θεωρήθηκε σε

σ

≤0.05.

Αποτελέσματα

Επίδραση της σιλυβίνης και της παράγωγα επί ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων

Αρχικά, συνέκρινε την επίδραση αναστολής της ανάπτυξης της σιλυβίνης και των παραγώγων της (χημικές δομές που φαίνεται στο Σχήμα 1) DHS, 7OM, 7OG, DSS, 7OP και 23OP σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές γραμμές από την κύστη , του παχέος εντέρου και του προστάτη προέλευσης, δηλαδή HTB9, HCT116 και PC3, αντίστοιχα? κυρίως, silibinin έδειξε ισχυρή αποτελεσματικότητα αντικαρκινικών σε μοντέλα προ-καρκίνο ουροδόχου κύστης, του παχέος εντέρου και καρκίνοι του προστάτη [7], [8]. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, σε κύτταρα HTB9 στους 30 και 60 μΜ δόσεις, DHS, 7OM και 7OG ήταν πιο αποτελεσματικό από σιλυβίνης μετά από 24 και 48 ώρες από θεραπείες σε αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης άποψη? Ωστόσο, σε ισομοριακές συγκεντρώσεις, οι ανασταλτικές επιδράσεις στην ανάπτυξη των άλλων παραγώγων, δηλαδή DSS, 7OP και 23OP, ήταν ασυνεπής και είτε ίσο ή χαμηλότερο από σιλυμπίνη. Ομοίως σε κύτταρα HCT116, DHS, 7OM και 7OG ήταν πιο αποτελεσματικές στην αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης σε σχέση με σιλυβίνη και άλλα παράγωγα σιλυβίνης (Πίνακας 3). Σε κύτταρα PC3, σιλυβίνη παράγωγο (30 και 60 μΜ δόσεις) έδειξε ίση ή καλύτερη αναστολή της ανάπτυξης από σιλυβίνης μετά από 24 ώρες θεραπείας (Πίνακας 3). Και πάλι, το DHS, 7OM και 7OG ήταν πολύ πιο αποτελεσματική από σιλυβίνης ή άλλα παράγωγα μετά από 24 και 48 ώρες από θεραπείες από την άποψη της αναστολής της κυτταρικής ανάπτυξης? Ωστόσο, η επίδραση των άλλων παραγώγων σιλυβίνης (DSS, 7OP και 23OP) χάθηκε σε μεγάλο βαθμό σε 48 ώρες χρονικό σημείο (Πίνακας 3). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν σαφώς ότι μόνο DHS, 7OM και 7OG παράγωγα σιλυβίνης έχουν πολύ ισχυρότερη αποτελεσματικότητα αντικαρκινικών από μητρική δομή, και ως εκ τούτου, αυτά τα τρία παράγωγα χρησιμοποιήθηκαν μόνο σε μετέπειτα μελέτες.

Η

Επίδραση της σιλυβίνης και των παραγώγων του στην απόπτωση επαγωγή σε HTB9 κύτταρα

στη συνέχεια, συγκρίναμε το αποτέλεσμα της σιλυβίνης και τρεις πιο δραστικά παράγωγα του (DHS, 7OM και 7OG) στους 30 μΜ δόση στην επαγωγή αποπτωτικού κυτταρικού θανάτου σε HTB9 κύτταρα. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2Α-κάτω πλαίσιο, μετά από 24 ώρες θεραπείας, σιλυβίνης και τα παράγωγά της αύξησε σημαντικά τον αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε κυτταρικές HTB9 και 7OG ήταν πιο ισχυρό στην επαγωγή της απόπτωσης. Ωστόσο, οι αναλύσεις κηλίδας Western για cPARP δείκτη απόπτωσης έδειξαν ισχυρή αύξηση μόνο με 7OG (Σχήμα 2Α-επάνω πίνακα). Η καλύτερη αποτελεσματικότητα των παραγώγων σιλυβίνης ήταν πιο έκδηλη μετά από 48 ώρες θεραπείας όπου DHS, 7OM και 7OG αύξησε σημαντικά τον πληθυσμό αποπτωτικών κυττάρων (Σχήμα 2Β-κάτω πλαίσιο), καθώς και την αύξηση του επιπέδου των cPARP σε κύτταρα HTB9 (Σχήμα 2Β-επάνω πίνακας). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν περαιτέρω την ισχυρή και καλύτερη αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου του DHS, 7OM και 7OG σύγκριση με σιλυβίνη έναντι κυττάρων HTB9.

(Α-Β) κύτταρα HTB9 υποβλήθηκαν σε αγωγή με 30 μΜ δόση της σιλυβίνης (SB), 2,3-διυδροσιλυβίνη (DHS), 7-

O

-methylsilybin (7OM), και 7-

O

-galloylsilybin (7OG). Μετά από 24 ή 48 ώρες για κάθε επεξεργασία, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και αποπτωτικά πληθυσμός προσδιορίστηκε με δοκιμασία Hoechst όπως περιγράφεται λεπτομερώς στο «Υλικά και Μέθοδοι». Στα διαγράμματα μπαρ, κάθε δεδομένα σημείων είναι αντιπροσωπευτική της μέσης ± SD 3 δειγμάτων. (Α-Β, δυτική ένθετο κηλίδα) Κύτταρα συλλέχθηκαν επίσης ακόλουθη σιλυβίνης ή των παραγώγων της θεραπείας και αναλύθηκαν για επίπεδο πρωτεΐνης cPARP με κηλίδωση Western. Σε κάθε περίπτωση, οι μεμβράνες επίσης απογυμνώνεται και επανα-διερευνήθηκαν με αντίσωμα α-τουμπουλίνης να ελέγξει πρωτεΐνη φόρτωσης. * P≤0.001.

Η

Επίδραση των καθαρά οπτικά ισομερή της σιλυβίνης και των παραγώγων του στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων

Όπως αναφέρθηκε παραπάνω ότι σιλυμπίνη είναι ένα μίγμα (1:01 αναλογία) των οπτικών ισομερή σιλυβίνη Α και σιλυβίνη Β, έχουμε την επόμενη παρασκευάζονται μεγάλες ποσότητες αυτών των δύο σιλυβίνης ισομερή και τους χρησιμοποιούνται για να συνθέσουν σημαντικές ποσότητες των παραγώγων τους DHS (Α και Β), 7OM (Α και Β) και 7OG (Α και Β) όπως συνοψίζεται στο παραπάνω μεθόδους. Αυτά τα καθαρά οπτικά ισομερή της σιλυβίνης και των παραγώγων τους στη συνέχεια αξιολογούνται για ανασταλτικές επιδράσεις της ανάπτυξης καρκινικών κυττάρων τους. Σε όλες τις τρεις κυτταρικές σειρές καρκίνου, δηλαδή HTB9, HCT116 και PC3, καθαρά ισομερή (30 και 60 μΜ δόσεις) του DHS, 7OM και 7OG ήταν πιο αποτελεσματικές σε σύγκριση με τις αντίστοιχες ισομερές της σιλυβίνης μετά από 24 και 48 ώρες των θεραπειών (Πίνακας 4) . Όταν συγκρίναμε την ανάπτυξη των κυττάρων ανασταλτικές επιδράσεις του ισομερούς Α έναντι Β ισομερές και τα αντίστοιχα παράγωγά τους, δεν υπάρχει σαφής παρατήρηση τομή θα μπορούσε να γίνει, όμως, σιλυβίνη ισομερούς Β και των παραγώγων του φαινόταν πιο αποτελεσματικό από το ισομερές Α και τα παράγωγά της (Πίνακας 4).

Στη συνέχεια, συγκρίναμε τα ανασταλτικά αποτελέσματα αύξησης του χαμηλότερες δόσεις (5 και 10 μΜ) οπτικών ισομερών της σιλυβίνης (σιλυβίνης Α και σιλυβίνης Β), καθώς και τα παράγωγά του DHS (Α και Β), 7OM (Α και Β) και 7OG (Α και Β) σε κύτταρα HTB9. Όπως φαίνεται στο σχήμα 3, στα 5 μΜ δόση, η διαφορά μεταξύ σιλυβίνης και των παραγώγων του ήταν λιγότερο εντυπωσιακή. Ωστόσο, σε συγκέντρωση 10 μΜ, η διαφορά στην αποτελεσματικότητα ισομερών σιλυβίνης με παράγωγα και τα ισομερή τους ήταν σαφώς εμφανής με ισχυρότερη αναστολή αύξησης με παράγωγα σχέση με το μητρικό δομές, ειδικά μετά από 48 ώρες από θεραπείες (Σχήμα 3). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι είναι παρόμοια με μια καλύτερη δραστηριότητα της ρακεμικής ισομερή σιλυβίνης δηλαδή DHS, 7OM και 7OG σχέση με το μητρικό ρακεμική σιλυβίνη, τα παράγωγα της καθαρής σιλυβίνης ισομερή Α και Β είναι επίσης περισσότερο αποτελεσματικά σε σύγκριση με τις αντίστοιχες καθαρό σιλυβίνης Α και τα ισομερή Β .

κύτταρα HTB9 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 5 και 10 μΜ δόσεις της σιλυβίνης Α, 2,3-διυδροσιλυβίνη Α, 7-

O

-methylsilybin Α, 7-

O

-galloylsilybin Α ή Β σιλυβίνη, 2,3-διυδροσιλυβίνη Β, 7-

O

-methylsilybin Β, 7-

O

-galloylsilybin B. Μετά από 24 ή 48 ώρες της κάθε θεραπείας, η συνολική ο αριθμός των κυττάρων προσδιορίστηκε όπως περιγράφεται λεπτομερώς στο «Υλικά και Μέθοδοι». Στα διαγράμματα μπαρ, κάθε δεδομένα σημείων είναι αντιπροσωπευτική της μέσης ± SD 3 δειγμάτων. * P≤0.001? # P≤0.01? $ P ≤ 0,05.

Η

Επίδραση των ρακεμικά μίγματα και τα καθαρά οπτικά ισομερή της σιλυβίνης και των παραγώγων του σε αποικία Συγκρότηση σε HTB9 κύτταρα

Στη συνέχεια, συνέκρινε την επίδραση των ρακεμικών μιγμάτων και καθαρών ισομερή της σιλυβίνης και τρία πιο αποτελεσματικά τα παράγωγά του DHS, 7OM και 7OG για το σχηματισμό αποικιών από κύτταρα HTB9. Στο πρώτο πείραμα, χρησιμοποιήσαμε μια δόση των 20 μΜ όλων των ενώσεων και παρατηρήσαμε μια πλήρη αναστολή του σχηματισμού αποικιών από σιλυβίνη καθώς και τα παράγωγά του (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ως εκ τούτου, το επόμενο χρησιμοποιήσαμε χαμηλότερες δόσεις ρακεμικών μιγμάτων, καθώς και καθαρά ισομερή της σιλυβίνης και των παραγώγων του. Όπως φαίνεται στο σχήμα 4Α, DHS, 7OM και 7OG (5 και 10 μΜ δόσεις κάθε 72 ώρες) ανέστειλε το σχηματισμό αποικίας από κύτταρα HTB9, και όλα τα τρία παράγωγα ήταν πιο αποτελεσματικό από σιλυβίνη στα δύο δόσεις. Ομοίως, η κατεργασία (5 και 10 μΜ δόσεις) με καθαρά ισομερή (Α και Β) του DHS, 7OM, και 7OG επίσης ανέστειλαν έντονα την σχηματισμό αποικιών από κύτταρα HTB9? ισομερή και των τριών παραγώγων ήταν συμπερασματικά πιο αποτελεσματική σε σύγκριση με τα αντίστοιχα ισομερή σιλυβίνης Α και Β σιλυβίνης (Σχήμα 4Α). Μεταξύ όλων των καθαρών ισομερών σε αυτή τη δοκιμασία, 7OG-Β έδειξαν την υψηλότερη αποτελεσματικότητα (Σχήμα 4Α).

(Α) κύτταρα HTB9 (περίπου 1000 κύτταρα) επιστρώθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία κάθε 72 ώρες με 5 και 10 μΜ δόσεις της σιλυβίνης (SB), 2,3-διυδροσιλυβίνη (DHS), 7-

O

-methylsilybin (7OM), 7-

O

-galloylsilybin (7OG), σιλυμπίνη Α (SB-Α), 2,3-διυδροσιλυβίνη Α (DHS-Α), 7-

O

-methylsilybin Α (7OM-Α), 7-

O

-galloylsilybin Α ( 7OG-Α) ή σιλυμπίνη Β (SB-Β), 2,3-διυδροσιλυβίνη Β (DHS-Β), 7-

O

-methylsilybin Β (7OM-Β), 7-

Ο

-galloylsilybin Β (7OG-Β). Στις 11

ης ημέρας, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία και μετρήθηκαν οι αποικίες με περισσότερα από 50 κύτταρα. (Β) κύτταρα HTB9 (περίπου 1000 κύτταρα) επιστρώθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία για 2 ώρες κάθε 24 ώρες με 20 μΜ δόση της σιλυβίνης (SB), σιλυβίνη Α (SB-Α), 2,3-διυδροσιλυβίνη Α (DHS -A), 7-

O

-methylsilybin Α (7OM-Α), 7-

O

-galloylsilybin Α (7OG-Α) ή σιλυμπίνη Β (SB-Β), 2, 3-διυδροσιλυβίνη Β (DHS-Β), 7-

O

-methylsilybin Β (7OM-Β), 7-

O

-galloylsilybin Β (7OG-Β). Μετά από 7 ημέρες, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία και μετρήθηκαν οι αποικίες με περισσότερα από 50 κύτταρα. Στα διαγράμματα μπαρ, κάθε δεδομένα σημείων είναι αντιπροσωπευτική της μέσης ± SD 3 δειγμάτων. *, P≤0.001? #, P≤0.01? $, P ≤ 0,05.

Η

Σε μία άλλη θεραπευτική αγωγή, τα κύτταρα HTB9 εκτέθηκαν σε 20 μΜ δόση της σιλυβίνης ή τα ισομερή της σιλυβίνης και των παραγώγων της (DHS, 7OM, και 7OG) για 2 ώρες, και στη συνέχεια, προστέθηκαν νωπά μέσα, χωρίς τις ενώσεις, και ίδιο πρωτόκολλο θεραπείας ακολουθήθηκε κάθε 24 ώρες. Αυτές οι πειραματικές συνθήκες βασίστηκαν παρατήρηση μας σε ολοκληρωμένες κλινικές δοκιμές όπου έχουμε αναφερθεί σιλυβίνης ημίσεια ζωή και η συγκέντρωση στο πλάσμα των ασθενών με καρκίνο στο ίδιο εύρος, δηλαδή 20 μΜ σιλυβίνης για περίπου 2 ώρες [28] Όπως φαίνεται στο σχήμα 4Β, κάτω από αυτές οι συνθήκες επεξεργασίας, η αποτελεσματικότητα όλων των ενώσεων κίνδυνο για κάποιο βαθμό, αλλά εξακολουθούν να 7OG και το DHS διατήρησε υψηλότερη ανασταλτική αποτελεσματικότητα έναντι σχηματισμού αποικιών HTB9. Αυτή η ανάλυση επιβεβαίωσε ότι 7OG είναι η πιο αποτελεσματική μεταξύ όλων των παραγώγων σιλυμπίνη ακολουθούμενη από το DHS και 7OM.

Συζήτηση

Ο καρκίνος είναι μία από τις κύριες αιτίες θνησιμότητας και νοσηρότητας σε όλο τον κόσμο. Στις Ηνωμένες Πολιτείες μόνο, συνολικά 1.638.910 νέες περιπτώσεις καρκίνου και 577.190 θάνατοι από καρκίνο ήταν προβλέπεται να συμβεί το 2012 [29]. Με την αυξανόμενη χρήση των εργαλείων απεικόνισης και βιοδείκτες, οι πολλοί καρκίνοι διαγνωσθεί σε πρώιμα στάδια, όπου οι θεραπευτικές επιλογές είναι περιορισμένες λόγω της εγγενούς παρενέργειες που σχετίζονται με αυτές τις θεραπείες. Σε αυτούς τους ασθενείς, χημειοπρόληψη καρκίνου και /ή παρέμβαση μέσω μη τοξικούς παράγοντες όπως σιλυβίνης μπορούσε να είναι μια ελκυστική εναλλακτική επιλογή σε συνδυασμό με άγρυπνο αναμονή. Επιπλέον, η χημειοθεραπεία του καρκίνου είναι συχνά περιορίζεται από συνοδεύουν την οξεία τοξικότητα ειδικά ηπατοτοξικότητα, η οποία οδηγεί σε μειώσεις της δόσης ή καθυστερήσεις στη θεραπεία, αυξάνοντας ενδεχομένως τον κίνδυνο υποτροπής [8]. Σιλυβίνη έχει μια μακρά ιστορία της χρήσης για παροχές ηπατοπροστατευτικά του, και ως εκ τούτου, θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με χημειοθεραπευτικούς παράγοντες ως ηπατοπροστατευτικούς [8]. Εκτός χαμήλωμα τοξικότητα, σιλυβίνη θα μπορούσε να ενισχύσει την αποτελεσματικότητα των χημειοθεραπευτικών φαρμάκων [30]. Σε αυτό το πλαίσιο, έχουν αναφέρει ότι σιλυβίνης συνεργεί ισχυρά κύτταρα ανθρώπινου καρκινώματος του προστάτη να doxorubicin-, σισπλατίνη, carboplatin-, και μιτοξαντρόνη επαγόμενη αναστολή της ανάπτυξης και αποπτωτικό θάνατο [31] – [33]. Παρόμοιες συνεργιστικές επιδράσεις της σιλυβίνης με δοξορουβικίνη και σισπλατίνη έχουν επίσης αναφερθεί σε διάφορες άλλες κυτταρικές γραμμές καρκίνου [34] – [37]. Άλλα κοινά στοιχεία που συμβάλλουν σημαντικά στην καρκινογένεση είναι χρόνιες φλεγμονές και του οξειδωτικού στρες [38]. Ως εκ τούτου, τα φρούτα και τα λαχανικά που είναι πλούσια σε αντιοξειδωτικά, καθώς και αντι-φλεγμονώδεις παράγοντες συνιστώνται για τις στρατηγικές καρκίνο χημειοπροφύλαξη [38]. Σιλυμπίνη έχει αποδειχθεί αντιφλεγμονώδεις και αντιοξειδωτικές ιδιότητες [38], παρέχοντας μια επιπλέον λογική για την εφαρμογή της στον τομέα της πρόληψης και παρέμβασης του καρκίνου.

Ένας από τους σημαντικότερους περιορισμούς, που έχουν εμποδίσει θεραπευτική χρησιμότητα σιλυμπίνη στο παρελθόν, είναι της βιοδιαθεσιμότητα, η οποία οφείλεται στην μεγάλη δομή πολλαπλών δακτυλίων και χαμηλή διαλυτότητα στο νερό [22] σε μεγάλο βαθμό. Αρκετές σιλυβίνη σκευάσματα (φωσφατιδυλοχολίνη, νανο-εναιωρήματα, κλπ) έχουν δοκιμαστεί για την περαιτέρω βελτίωση της βιοδιαθεσιμότητας της και αυτά τα σκευάσματα έδειξαν σημαντική βελτίωση στην βιοδιαθεσιμότητα σιλυβίνης [12]. Για παράδειγμα, η διαμόρφωση σιλυβίνη με φωσφατιδυλοχολίνη (γνωστή ως «Silipide», εμπορική επωνυμία «Siliphos») δοκιμάστηκε σε καρκίνο του προστάτη και του παχέος εντέρου ασθενών και αποκάλυψε υψηλή βιοδιαθεσιμότητα του πλάσματος [9] – [11]. Μια άλλη προσέγγιση για τη βελτίωση της βιοδιαθεσιμότητας σιλυβίνης καθώς και βιολογική αποτελεσματικότητα είναι μέσω κατάλληλων χημικής τροποποίησης /s στη δομή του? κυρίως, σιλυβίνη δομή καθώς και ο ρόλος των λειτουργικών τμημάτων της είναι καλά χαρακτηρισμένες σε πρόσφατες μελέτες [13], [18], [19]. Συναφώς, έχουμε ήδη επιτυχώς συνετέθη και χαρακτηρίζεται από μία σειρά παραγώγων σιλυβίνης, που προσδιορίζονται αρκετά από αυτά με την ανώτερη αντιοξειδωτική και αντι-αγγειογενετική δραστηριότητα και ότι είναι υδατοδιαλυτές, σε σύγκριση με σιλυβίνης [20] – [23]. Με βάση αυτά τα σημαντικά ευρήματα και σε παρόμοιες γραμμές, εδώ είμαστε συντίθενται και χαρακτηρίζονται άλλο παράγωγο σιλυμπίνη, δηλαδή 7,23-διθειϊκό σιλυμπίνη (DSS), το οποίο είναι ένα δυναμικό σιλυμπίνη μεταβολίτη στη Φάση ΙΙ βιομετατροπή και σε σύγκριση silibinin αντικαρκινική δράση με DSS καθώς και αρκετές παλαιότερες συντίθεται παράγωγα σιλυμπίνη, όπως το DHS, 7OM, 7OG, 7OP και 23OP. Τα σημαντικότερα αποτελέσματα αυτών των μελετών αποτελεσματικότητας είναι: α) 7OG, το DHS, 7OM έδειξε με συνέπεια η αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου καλύτερα από σιλυμπίνη, ενώ σιλυμπίνη παράγωγα DSS, 7OP και 23OP έδειξαν μικρότερο ή ασυνεπής αποτελεσματικότητα? υποστηρίζει μια συνολική σχέση δομής-δραστικότητας? β) τα καθαρά οπτικά ισομερή του 7OG, DHS, και 7OM εξασκείται επίσης καλύτερη αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου σε σύγκριση με αντίστοιχα ισομερή σιλυβίνης (Α και Β)? γ) δεν υπήρχε σαφής προτίμηση μεταξύ ισομερή Α και Β σε σχέση με την αποτελεσματικότητα της σιλυβίνης ή των παραγώγων της? και δ) η συνολική αποτελεσματικότητα αυτών των παραγώγων σιλυβίνης ήταν εξαρτάται τόσο από τον τύπο της λειτουργικής ομάδας που υπάρχει, καθώς και χωρική εντοπισμός τους.

Συνοπτικά, τα αποτελέσματα από την παρούσα μελέτη έδειξε ότι η αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου του σιλυμπίνη θα μπορούσε να ενισχυθεί σημαντικά μέσω κατάλληλες τροποποιήσεις στη χημική δομή του, και προσδιόρισε 7OG, το DHS, και 7OM ως πιο αποτελεσματική παράγωγα σιλυμπίνη. Το εύρημα αυτό είναι σύμφωνο με τις προηγούμενες παρατηρήσεις που δείχνουν ότι η υποκατάσταση στο C-7 της σιλυβίνης δομή βελτιώνει σημαντικά τις αντιοξειδωτικές και /ή των ριζών δράση. Επιπλέον, δεδομένου ότι τα αποτελέσματά μας με τρία μόλυβδο παράγωγα σιλυβίνης ήταν συνεπής σε τρία εντελώς διαφορετικά ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές, προτείνουμε ότι η παρατηρούμενη αντικαρκινική δράση σε μη κυτταρική σειρά ειδικών.