Αφηρημένο

Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η προγνωστική αξία της έκφρασης CCR7 υποδοχέα χημειοκινών και εντός του όγκου FoxP3

+ ρυθμιστικά Τ κύτταρα (Tregs) στον καρκίνο του στομάχου. CCR7

+ καρκινικά κύτταρα και FoxP3

+ Tregs αξιολογήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία σε μικροσυστοιχίες ιστού που περιέχει καρκίνο του στομάχου από 133 ασθενείς. Προγνωστικές συνέπειες της χαμηλής ή υψηλής έκφρασης CCR7 και FoxP3 αξιολογήθηκαν με Cox παλινδρόμησης και ανάλυση Kaplan-Meier, καθώς και την συσχέτιση μεταξύ CCR7 θετική βαθμολογία και ενδοογκική FoxP3

+ αριθμός κυττάρων σε μία διαμήκη αξιολόγησης. Η ανάλυση έδειξε ότι τα υψηλά επίπεδα έκφρασης του CCR7 και Foxp3 ανιχνεύθηκαν σε 69,9% και 65,4% των περιπτώσεων, αντιστοίχως. Υψηλή έκφραση CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα ήταν σημαντικά σχετίζονται με την κακή συνολική επιβίωση (OS) (

P

= 0,010) και λεμφαδένα μετάσταση (

P

= 0,009), και ήταν ένας ανεξάρτητος παράγοντας για την χειρότερο λειτουργικό σύστημα (

P

= 0,023) από πολυπαραγοντική ανάλυση. Υψηλούς αριθμούς εντός του όγκου Foxp3

+ Tregs συσχετίστηκε σημαντικά με μικρότερη OS (

P

= 0,021) και μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

= 0.024), και ήταν επίσης ένας ανεξάρτητος παράγοντας για ανεπιθύμητες OS (

P

= 0,035). Επιπλέον, υπήρχε μια σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ CCR7 θετική βαθμολογία και εντός του όγκου FoxP3

+ αριθμός κυττάρων (r = 0,949,

P

& lt? 0.001). Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι η έκφραση CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα και εντός του όγκου FoxP3

+ Tregs θα μπορούσε να θεωρηθεί ως ένα συν-δείκτης κλινική πρόγνωση του καρκίνου του στομάχου

Παράθεση:. Zhou S, Xu S, Τάο Η, Τζεν Ζ, Chen G, Zhang Ζ, et al. Οι (2013) CCR7 Έκφραση και ενδονεοπλασματική FoxP3

+ ρυθμιστικά Τ κύτταρα σχετίζεται με τη συνολική επιβίωση και την μετάσταση λεμφαδένα στον καρκίνο του στομάχου. PLoS ONE 8 (9): e74430. doi: 10.1371 /journal.pone.0074430

Επιμέλεια: Udai Π Singh, του Πανεπιστημίου της Νότιας Καρολίνας της Ιατρικής Σχολής, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 26 Απριλίου, 2013? Δεκτές: 1 Αυγούστου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 5 Σεπτέμβρη του 2013

Copyright: © 2013 Zhou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 31000527), Σαγκάη Υγεία Γραφείο του Ταμείου Έρευνας για νέους ερευνητές (με τον Δρ Shuang Zhou) και το πρόγραμμα Χονγκ Κονγκ Μελετητή (Νο XJ2011025). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

CCR7 είναι επτά διαμεμβρανικές G χημειοκινικό υποδοχέα που συζευγνύονται με πρωτεΐνη, που εκφράζεται κυρίως στην κυτταρική επιφάνεια των naive Τ κύτταρα και δενδριτικά κύτταρα (DCs), SLC (δευτερεύουσα λεμφοειδή χημειοκίνη, CCL21) και ELC (χημειοκίνη EB11-συνδετήρα , CCL19) είναι δύο προσδέματα υψηλής συγγένειας της. CCR7 είναι απαραίτητα για τη μετανάστευση των κυττάρων Τ και δενδριτικά κύτταρα στον περιβάλλοντα ιστό ή λεμφοειδή θέση της ανοσολογικής απόκρισης με σύνδεση προς τους συνδετήρες της [1].

CCR7

είναι

εκφραστεί όχι μόνο

σε παρθένα κύτταρα Τ και δενδριτικά, αλλά επίσης και σε μερικά κύτταρα του όγκου. Όγκοι με έκφραση υψηλού CCR7 είναι πιο πιθανό να παρουσιάζουν εξωθυρεοειδική επέκταση, angiolymphatic εισβολή, λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες, αντι-απόπτωση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [2] – [4]. CCR7 προωθεί την ανάπτυξη και μετάσταση όγκου σε απόκριση προς ενδογενή SLC ή ELC. Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι τα κακοήθη κύτταρα με έκφραση CCR7 μπορεί να κατευθύνονται προς τα αντίστοιχα όργανα με την υψηλή παρουσία τους συνδέτες τους [5] – [8]. Ως εκ τούτου, CCR7 μεσολάβηση κυττάρων χημειοταξία δεν σχετίζεται μόνο με τη δημιουργία της αντικαρκινικής ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλον, αλλά επίσης μπορεί να βοηθήσει στην έγκαιρη αξιολόγηση της βιολογικής συμπεριφοράς των όγκων. έκφραση CCR7 στα καρκινικά κύτταρα συσχετίζεται στενά με μετάσταση και κακοήθεια τους [2].

Οι κανονιστικές Τ κύτταρα (Tregs) πιστεύεται ότι αμβλύνουν Τ-κυττάρων ανοσίας και να είναι το κύριο εμπόδιο βαφής ανοσοθεραπεία. Ένα αυξανόμενο σώμα της στοιχεία δείχνουν ότι Tregs εντός μικροπεριβάλλον του όγκου θα μπορούσε να παίξει σημαντικό ρόλο στην καταστολή της τοπικής αντικαρκινικών ανοσοαποκρίσεων [9], [10]. Foxp3, ένας παράγοντας μεταγραφής έλικα forkhead /φτερωτό, είναι ο πιο ειδικός δείκτης των Tregs και είναι δυνατόν να οριστούν Tregs πιο αυστηρά ως CD4

+ CD25

+ ρυθμιστικά Τ κύτταρα [11]. Foxp3 φαίνεται να είναι κρίσιμη για την ανάπτυξη και τη λειτουργία των Tregs, και η απώλεια της έκφρασης Foxp3 οδηγεί στην έλλειψη Tregs και υπερενεργοποίηση CD4

+ Τ κύτταρα, οδηγώντας σε θανατηφόρο αυτοεπιθετικά λεμφοπολλαπλασιασμού, ενώ η υπερέκφραση των αποτελεσμάτων Foxp3 σε σοβαρή ανοσοανεπάρκεια [11] – [13]. Έχει αναφερθεί ότι η αυξημένη FoxP3

+ Tregs σχετίζονται με υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής και η κακή συνολική επιβίωση των ασθενών με κάποια στερεά νεοπλάσματα [14] – [20]

γαστρικός καρκίνος είναι η τέταρτη πιο κοινή. καρκίνου στον κόσμο, και η συνολική επιβίωση των ασθενών παραμένει ανεπαρκής παρά τις βελτιωμένες διαγνωστικές και θεραπευτικές στρατηγικές, μεταξύ των οποίων εκτομή είναι μία από τις πρώτες προτεραιότητες [21]. Περαιτέρω έρευνα συνιστάται να εξετάσει την προγνωστική επίδραση της έκφρασης CCR7 και Tregs σε γαστρικό καρκίνο.

Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε την προγνωστική αξία της έκφρασης CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα και εντός του όγκου FoxP3

+ Tregs, και η σχέση μεταξύ τους σε γαστρικό καρκίνο. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι δεν ήταν μόνο σχετίζεται με χαμηλά ποσοστά επιβίωσης και της λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες, αλλά και συσχετίζεται θετικά με το άλλο.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας σε Tongji Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς πριν από την εγγραφή. Η διαδικασία της συλλογής ανθρώπινου γαστρικού δείγματα καρκίνου εκτομή από τους ασθενείς ήταν σύμφωνη με τις αρχές που περιγράφονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι.

Ασθενείς και Παρακολούθηση

133 ασθενείς με καρκίνο του στομάχου που υποβλήθηκαν σε επεκταθεί στους λεμφαδένες ανατομή (D2 εκτομή) μεταξύ του 2001 και του 2007 σε Tongji Νοσοκομείο (Σαγκάη, Κίνα) εντάχθηκαν στη μελέτη μας. Η αξιολόγηση των δειγμάτων εκτομή έγινε σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της ιαπωνικής γαστρικού Association Καρκίνο (JGCA) το 1998. Κανένας από τους ασθενείς έλαβαν ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία ή άλλες ιατρικές επεμβάσεις, πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Δείγματα επιλέχθηκαν μόνο με βάση τη διαθεσιμότητα των κατάλληλων φορμόλη-σταθερό, έχει εμπεδωθεί με παραφίνη ιστό και πλήρη κλινικοπαθολογική και τα δεδομένα παρακολούθησης για τους ασθενείς.

Συνέχεια ολοκληρώθηκε στις 15 Νοεμβρίου, 2010. A όφειλε τουλάχιστον 3 χρόνια παρακολούθησης. Η διάμεση παρακολούθηση ήταν 43 μήνες (εύρος 36 έως 104 μήνες). Παρακολούθηση διαδικασιών αποτελούνταν από ενδιάμεση ιστορικό, κλινική εξέταση, οι δείκτες όγκου (CEA, CA199), κοιλιακό υπερηχογράφημα και ακτινογραφία κάθε 4-6 μήνες, ανάλογα με την μετεγχειρητική περίοδο. Για τους ασθενείς με τα αποτελέσματα των δοκιμών που υποδηλώνουν υποτροπή, αξονική τομογραφία (CT) και η μαγνητική τομογραφία (MRI) χρησιμοποιήθηκαν για επιβεβαιωτικά στοιχεία της υποτροπής. Οι υποτροπές του καρκίνου του στομάχου έπρεπε να επιβεβαιωθούν με βιοψία κυτταρολογίας ή χειρουργική επέμβαση. Συνολική επιβίωση (OS) ορίστηκε ως το διάστημα μεταξύ χειρουργική επέμβαση και θανάτου ή μεταξύ χειρουργική επέμβαση και την τελευταία παρατήρηση για ασθενείς που επιβίωσαν. Τα δεδομένα περικόπηκαν κατά την τελευταία παρακολούθησης για τη ζωή των ασθενών.

ιστικές μικροσυστοιχίες και ανοσοϊστοχημεία

μικροσυστοιχίες ιστών κατασκευάστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22], [23]. Όλες οι περιπτώσεις ήταν ιστολογικά επανεξετάζονται από αιματοξυλίνη και ηωσίνη και αντιπροσωπευτικές περιοχές του όγκου με μικρά στρογγυλά λεμφοκυττάρων διήθηση ήταν premarked στα μπλοκ παραφίνης, μακριά από νεκρωτικές και αιμορραγική υλικά. Διπλότυπο κυλίνδρους διαμέτρου 1 mm από το κέντρο του όγκου (που ορίζεται ως εντός του όγκου) επιλέχθηκαν από κάθε περίπτωση, χρησιμοποιώντας ένα αυτοματοποιημένο arrayer ιστού (Shanghai Biochip Co., Ltd, Shanghai, Κίνα), μαζί με paracancerous καλοήθη γαστρικό ιστούς, όπως οι έλεγχοι για να εξασφαλίζεται η επαναληπτικότητα και ομοιογενής χρώση των διαφανειών. Τμήματα πάχους 4-μm ελήφθησαν σε 3-αμινοπροπυλοτριαιθοξυσιλάνιο επικαλυμμένα πλακίδια.

Το ποντίκι χρησιμοποιείται μονοκλωνικά αντισώματα ήταν αντι-ανθρώπινο CCR7 (eBioscience, San Diego, CA) και FoxP3 (Biolegend, San Diego, CA) . Ανοσοϊστοχημεία των τομές παραφίνης πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ενός πρωτοκόλλου δύο σταδίων (Novolink Polymer Detection System, Novocastra, Newcastle, UK) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, οι τομές αποπαραφινώθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν εντός αιθανόλης. Μετά ενδογενής δράση υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με επώαση των διαφανειών σε 0,3% Η

2O

2, ανάκτηση αντιγόνου έγινε με την τοποθέτηση των τμημάτων σε ένα ηλεκτρικό δοχείο κουζίνα γεμίζουν με βραστό κιτρικό ρυθμιστικό για 20 λεπτά, και μη ειδικές θέσεις δέσμευσης αποκλείστηκαν με πρωτεΐνη Block (RE7102). Μετά από σειριακές επώαση με πρωτογενή αντισώματα, Ταχυδρομείο Primary Block (RE7111), και δευτερογενή αντισώματα (RE7112), οι τομές αναπτύχθηκαν σε διάλυμα 3,3′-diamiobenzidine κάτω από ένα μικροσκόπιο και αντίθετα με Αιματοξυλίνη. Πλακίδια αρνητικού ελέγχου παραλείποντας τα πρωτογενή αντισώματα είχαν συμπεριληφθεί σε όλες τις δοκιμασίες.

Αξιολόγηση των Ανοσοϊστοχημική μεταβλητές

Η CCR7 θετική βαθμολογία των καρκινικών κυττάρων αναλύθηκε με τη χρήση του λογισμικού ανάλυσης εικόνας (Leica Qwin Επεξεργασία Εικόνας και ανάλυση λογισμικού Εφαρμογών, Wetzlar, Γερμανία). Για κάθε διαφάνεια, όλα ανέπαφα πεδίο υψηλής ισχύος (HPF) (× 400) ψηφιακές εικόνες ελήφθησαν από τον προαναφερθέντα εξοπλισμό και στη συνέχεια αναλύονται από το λογισμικό ανάλυσης εικόνας για να αποκτήσει το θετικό αποτέλεσμα της CCR7 για κάθε πεδίο. Τέλος, ο μέσος αριθμός για ένα HPF (× 400) υπολογίστηκε για την εξασφάλιση της αντιπροσωπευτικότητας και της ομοιογένειας.

Ο αριθμός των Foxp3

+ Tregs σε μικροσυστοιχίες μετρήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14], με τη χρήση μηχανογραφικών ανάλυση εικόνας σύστημα που αποτελείται από μια κάμερα Hitachi HV-C20A CCD (Hitachi, Tokyo, Japan), εγκατεστημένο σε ένα ελαφρύ μικροσκόπιο Leica DMLA (Leica Microsystems, Wetzlar, Γερμανία) και συνδέεται με ένα προσωπικό υπολογιστή. Υπό × 400 μεγέθυνση, υπήρχαν τουλάχιστον 12 ανεξάρτητα και ακέραια μηχανογραφημένο μικροσκοπικά πεδία για τα αντίγραφα της κάθε δείγμα ασθενούς. 8 ανεξάρτητες μικροσκοπικά πεδία (× 400), που εκπροσωπεί τα πυκνότερα λεμφοκυτταρική διηθήσεις, επιλέχθηκαν για κάθε δείγμα ασθενούς για να εξασφαλιστεί η αντιπροσωπευτικότητα και η ομοιογένεια. Οι αριθμοί των 12 πεδίων σωρεύτηκαν και, στη συνέχεια, κατά μέσο όρο για τον υπολογισμό του τελικού αριθμού για ένα ηλεκτρονικό × 400 μικροσκοπικού πεδίου (0,0768 χιλιοστά

2 /πεδίο). Η αξιολόγηση των Foxp3

+ Tregs έγινε από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές με τυφλό τρόπο. Αποκλίσεις στην καταμέτρηση, μέσα σε ένα εύρος από 5%, ήταν επανεκτιμηθεί και η απόφαση συναίνεσης έγινε.

Στατιστική Ανάλυση

Αναλογιστικών ποσοστά OS υπολογίστηκαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier και αναλύθηκαν με η δοκιμασία log-rank. Μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική αναλύσεις με βάση το μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox. Μια δευτερεύουσα ανάλυση διεξήχθη για να αξιολογήσει τη σχέση μεταξύ των μεταβλητών και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά. Για τη σύγκριση των ατομικών μεταβλητών, chi-square τεστ και ακριβείς δοκιμές του Fisher διεξήχθησαν κατά περίπτωση. Δύο ουρά

P

& lt? 0.05 κρίθηκε ότι είναι σημαντική. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 16.0 (SPSS, Chicago, IL).

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά Ασθενών

Τα χαρακτηριστικά των 133 ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Τα δείγματα περιλαμβάνονται 89 (66,9%) άνδρες και 44 (33,1%) γυναίκες ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. 68 (51,1%) ασθενείς ήταν λιγότερο από 60 χρονών και άλλοι ήταν μεγαλύτερη ή ίση με το 60 year-old. Το μέγεθος του όγκου των 79 (59,4%) ασθενείς ήταν λιγότερο από 40 mm και ότι άλλοι ήταν περισσότερο από ή ίσο με 40 mm. 75 (56,4%) ασθενείς είχαν λεμφική εισβολή και 84 (63,2%) ασθενείς είχαν μετάσταση λεμφαδένα. 61 (45,9%) όγκοι αδιαφοροποίητα και άλλα διαφοροποιήθηκαν. 50 (37,6%), οι όγκοι είχαν χαρακτηριστεί ως Τ1Τ2, και 83 (62,4%) ως T3T4 σύμφωνα με JGCA.

Η έκφραση των CCR7 και Foxp3 στο γαστρικός καρκίνος ιστοί

Τα επίπεδα έκφρασης

του CCR7 και Foxp3 σε μικροσυστοιχίες ιστό του καρκίνου του στομάχου εξετάστηκαν με ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Σύκο. 1 και το Σχ. 2 έδειξε εκπρόσωπος ανοσοκηλιδώσεις των CCR7 και Foxp3. Θετική χρώση CCR7 ταυτοποιήθηκε στο κυτταρόπλασμα και κυτταρική μεμβράνη των γαστρικών καρκινικών κυττάρων (Εικ. 1 Α-ϋ). Υψηλή έκφραση CCR7 ανιχνεύθηκε στο 69,9% των γαστρικών δειγμάτων καρκίνου (93 περιπτώσεις 133 ασθενείς). Τα κύτταρα θεωρούνται ως FoxP3

+ Tregs βασίζεται σε διακριτές intranuclear έκφρασης (Εικ. 2 Α-ϋ). Υψηλή έκφραση Foxp3 ανιχνεύθηκε στο 65,4% των γαστρικών δειγμάτων καρκίνου (87 περιπτώσεις 133 ασθενείς). Από την άποψη της βαθμολογίας των θετικών καρκινικών κυττάρων CCR7 και FoxP3

+ αριθμός Tregs, τα στατιστικά αποτελέσματα για τις ανοσοϊστοχημικές μεταβλητές παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Δεδομένου ότι οι έλεγχοι, δεν υπήρχαν έκφραση CCR7 και πολύ λίγοι FoxP3

+ Tregs σε φυσιολογικό γαστρικό ιστούς (Εικ. S1).

(Α-Δ) Αντιπροσωπευτικά ανοσοκηλιδώσεις της έκφρασης χαμηλής και υψηλής CCR7. CCR7 θετικά κύτταρα ταυτοποιήθηκαν στο κυτταρόπλασμα και κυτταρική μεμβράνη των γαστρικών καρκινικών κυττάρων. μπαρ κλίμακα, 200 και 50 μm.

Η

(Α-Δ) Εκπρόσωπος ανοσοκηλιδώσεις της έκφρασης χαμηλής και υψηλής Foxp3. Τα κύτταρα θεωρήθηκαν ως FoxP3

+ Tregs βασίζεται σε διακριτές intranuclear έκφρασης. μπαρ κλίμακα, 200 και 50 μm.

Η

CCR7 και FoxP3 Έκφραση συνδέθηκαν με τη συνολική επιβίωση σε γαστρικός καρκίνος

Κατά την τελευταία παρακολούθηση, 39 ασθενείς (29,3%) σπούδασε είχε πεθάνει, οι οποίοι έχασαν τη ζωή τους από την υποτροπή του καρκίνου του στομάχου. Τα ποσοστά OS ήταν 93,5% για 1 έτος, 81,2% για 2 χρόνια και 76,9% για 3 χρόνια, αντίστοιχα, για το σύνολο της μελέτης.

Προγνωστική επιπτώσεις των χαμηλών ή υψηλών έκφραση CCR7 και FoxP3 αξιολογήθηκαν από Cox παλινδρόμησης και ανάλυση Kaplan-Meier. Στη μονοπαραγοντική ανάλυση, την ηλικία, το φύλο, το μέγεθος του όγκου και τη διαφοροποίηση του όγκου δεν έδειξε προγνωστική σημασία για τα ποσοστά OS, αλλά λεμφικού εισβολή, τους λεμφαδένες μετάσταση και όγκου (Τ) ταξινόμηση συνδέθηκαν με τα ποσοστά OS (

P

= 0.019,

P

= 0,013,

P

& lt? 0.001, αντίστοιχα, Πίνακας 3). έκφραση CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα συνδέθηκε με τα ποσοστά OS (δοκιμή log-rank,

P

= 0.010 & lt? 0.05), ενός έτους, δύο ετών και τριών ετών τα ποσοστά OS ήταν 91,4%, 78,5 % και 72% για τις ομάδες έκφραση υψηλού CCR7, αντίστοιχα, σε σύγκριση με 100%, 97,5% και 92,4% για τις ομάδες χαμηλής έκφρασης CCR7 (Σχ. 3Α). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση υψηλής CCR7 ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για χειρότερη ποσοστά OS (Αναλογία κινδύνου [HR] 2.896, 95% εμπιστευτικά διάστημα [CI] 1,385 έως 7,276,

P

= 0.023 & lt? 0.05, Πίνακας 4 ). Υψηλή διείσδυση εντός του όγκου Foxp3

+ Tregs συσχετίστηκε επίσης με δυσμενείς OS (δοκιμή log-rank,

P

= 0.021 & lt? 0.05), ενός έτους, δύο ετών και τριών ετών τα ποσοστά OS ήταν 88,9%, 79,1% και 69,5% για τις ομάδες έκφραση υψηλού FoxP3, αντίστοιχα, σε σύγκριση με 97,8%, 89,6% και 87,2% για τις ομάδες χαμηλής έκφρασης FoxP3 (Σχ. 3Β). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, η παρουσία υψηλών εντός του όγκου Foxp3

+ Tregs επίσης έδειξε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για χειρότερη ποσοστά OS (HR 1.906, 95% CI 1,205 έως 4,238,

P

= 0.035 & lt? 0,05 , Πίνακας 5)

(Α) έκφραση υψηλής CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα συσχετίστηκε με κακή συνολική επιβίωση δοκιμής (log-rank,

P

= 0,010).? (Β) Υψηλή αριθμούς εντός του όγκου Foxp3

+ Tregs επίσης σχετίζεται με χειρότερη συνολική επιβίωση (δοκιμασία log-rank,

P =

0,021).

Απλή αναζήτηση

Ενώσεις μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του CCR7 και Foxp3 και κλινικά χαρακτηριστικά

Πίνακας 6 συνοψίζεται η σχέση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του CCR7 και Foxp3 και κλινικά χαρακτηριστικά των 133 ασθενών με καρκίνο του στομάχου. Τόσο CCR7 και έκφραση FoxP3 συσχετίζονταν σημαντικά με λεμφαδένα μετάσταση (

P

= 0.009 και 0.024, αντίστοιχα). Υπήρξε επίσης μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης CCR7 και του λεμφικού εισβολή (

P

= 0,012). Ωστόσο, η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ CCR7 και της έκφρασης Foxp3 και άλλα κλινικά χαρακτηριστικά, όπως το φύλο, την ηλικία, το μέγεθος του όγκου, τη διαφοροποίηση και την ταξινόμηση Τ.

Η

Συσχέτιση μεταξύ CCR7 θετική βαθμολογία και ενδονεοπλασματική FoxP3

+ αριθμός Cell

Η συσχέτιση μεταξύ CCR7 θετική βαθμολογία και εντός του όγκου FoxP3

ο αριθμός των κυττάρων + Treg αξιολογήθηκε σε μια διαμήκη αξιολόγησης. CCR7 θετική βαθμολογία του γαστρικού καρκίνου κύτταρα και εντός του όγκου FoxP3

ο αριθμός των κυττάρων + Treg θα μπορούσαν να εκπροσωπούνται στην ίδια σκέδασης, από το διάγραμμα διασποράς, δύο μεταβλητές φαινόταν να έχουν μια γραμμική τάση που θα μπορούσε να πραγματοποιηθεί ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης. Και στη συνέχεια τοποθέτηση δύο μεταβλητές στην εφαρμοσμένη στατιστική ανάλυση γραμμικής συσχέτισης διεξήχθη για να αναλύσει περαιτέρω μεταξύ τους συσχέτιση. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι υπήρχε σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ CCR7 θετική βαθμολογία του γαστρικού καρκίνου κύτταρα και εντός του όγκου FoxP3

+ αριθμός κυττάρων Treg (r = 0,949,

P

& lt? 0.001, Εικόνα 4).

Υπήρξε μια σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ CCR7 θετική βαθμολογία του γαστρικού καρκίνου κύτταρα και εντός του όγκου FoxP3

+ αριθμός κυττάρων Treg (r = 0,949,

P

& lt? 0.001). σε μία διαμήκη αξιολόγηση

Συζήτηση

Κατά τη διαδικασία της εμφάνισης και ανάπτυξης των όγκων, CCR7 στην επιφάνεια των κυττάρων του όγκου σύνδεση προς SLC πρόσδεμά της μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, αγγειογένεση στον ιστό του όγκου, και κατευθυνόμενη μετανάστευση [24]. SLC σύμπλοκο /CCR7 μπορεί να προκαλέσει τα κύτταρα να επάγουν τον πολυμερισμό της ακτίνης, η οποία συσχετίζεται στενά με ψευδοποδίου σχηματισμό του καρκινικού κυττάρου και αναγκαίο για την εισβολή και τη μετάσταση [25] της. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι υψηλά επίπεδα έκφρασης CCR7 στον καρκίνο του πνεύμονα, καρκίνωμα του οισοφάγου, καρκίνο στο ήπαρ, τον καρκίνο του μαστού και μελάνωμα σχετίζεται στενά με εισβολή και μετάσταση όγκου λεμφαδένα [5] – [7], [26] – [28]. Έτσι, εάν η έκφραση CCR7 ή όχι και το επίπεδο της έκφρασης του μπορεί να επηρεάσει άμεσα μετάστασης του καρκίνου και την πρόγνωση. έκφραση CCR7 σε μερικά κύτταρα του όγκου ακόμη και μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως μοριακοί δείκτες για τον προσδιορισμό εάν οι όγκοι είναι

μεταστατικό

[29]. Ωστόσο, τα ευρήματα αυτά και άλλα θέματα, όπως προγνωστικούς παράγοντες χρειάζονται περαιτέρω έρευνες in vivo και η κλινική επιβεβαίωση.

Ο μεταγραφικός παράγοντας FoxP3 πυρηνικό έχει γίνει ευρέως αποδεκτή ως το καλύτερο δείκτη για την ταυτοποίηση Tregs στους ανθρώπους μέχρι στιγμής. Η έκφραση του Foxp3 σε Τ κύτταρα αντιστοιχεί με το ανοσοποιητικό ρυθμιστική λειτουργία στο μικροπεριβάλλον του όγκου [30]. Διηθούν όγκο FoxP3

+ Tregs αναφέρθηκαν να αυξηθεί σε μία ποικιλία όγκων [31] – [36]. Μερικές μελέτες έχουν επίσης διερευνηθεί το κλινικοπαθολογική σημασία των Tregs διείσδυσης [32] – [34]. Σημαντική διείσδυση των Tregs σε στρώμα του καρκίνου βρέθηκε να είναι ένας δυσμενής προγνωστικός παράγοντας στο ήπαρ [14], [20], [17], του μαστού [19], αμυγδαλών [32], παγκρεατικό [33] και του παχέος εντέρου [34] ωοθηκών . Μέχρι στιγμής, όπως γνωρίζουμε, αν FoxP3

+ Tregs είναι μια δυσμενής προγνωστικός δείκτης για καρκίνο του στομάχου είναι ακόμα αμφιλεγόμενη [37] – [39]

Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε εάν η έκφραση CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα. και ενδοογκική Foxp3

+ Tregs συνδέθηκαν με κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός δείκτης. Σε μικροσυστοιχίες ιστού των γαστρικών καρκίνων που συλλέγονται από 133 ασθενείς, οι οποίοι έχουν αποδειχθεί ότι είναι ένα ισχυρό εργαλείο για την αξιολόγηση δειγμάτων όγκου [40], χρησιμοποιήσαμε ένα ανοσοϊστοχημική μέθοδο για να εξεταστούν τα επίπεδα έκφρασης του CCR7 και Foxp3 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Υψηλή έκφραση CCR7 ανιχνεύθηκε στο 69,9% των 133 δειγμάτων γαστρικού καρκίνου. Το αποτέλεσμα ήταν σύμφωνο με την προηγούμενη μελέτη του Mashino et al., Οι οποίοι έχουν χρησιμοποιηθεί RT-PCR για την ανίχνευση 64 περιπτώσεις των δειγμάτων γαστρικού καρκίνου ιστού, από τα οποία 68,8% των γαστρικών ιστών καρκίνου είναι CCR7 mRNA θετική έκφραση [25]. Σημαντικά, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι έκφραση CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα συσχετίστηκε με το OS με ανάλυση Kaplan-Meier, ασθενείς με όγκους έκφραση υψηλού CCR7 είχαν σημαντικά μικρότερη επιβίωση από αυτούς με όγκους έκφραση χαμηλή CCR7. Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση CCR7 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτη σε γαστρικό καρκίνο. Στη σειρά μας, παρομοίως, χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο επιπολασμός της υψηλής ενδοογκική Foxp3

+ Tregs ήταν σημαντικά σχετίζονται με χαμηλά ποσοστά επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του στομάχου. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η εντός του όγκου FoxP3

+ Tregs θα μπορούσε να είναι επίσης ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τους ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. Ως εκ τούτου, η μελέτη μας έδειξε ότι αμφότερα έκφραση υψηλού CCR7 και αυξημένη ενδοογκική FoxP3

+ Tregs θα μπορούσε να θεωρηθεί ως δείκτης κακής πρόγνωσης σε καρκίνο του στομάχου.

Αύξηση στοιχεία δείχνουν ότι CCR7 μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην κατεύθυνση καρκινικά κύτταρα στα λεμφογάγγλια παροχέτευσης και συμβάλλουν στην συχνή παρουσία της μετάστασης λεμφαδένα σε ασθενείς με καρκίνο [7] – [9]. Η χημειοτακτική αλληλεπίδραση /CCR7 SLC μπορεί να είναι ένας πιθανός μηχανισμός για την επαγωγή από τα καρκινικά κύτταρα του λεμφαδένα μετάσταση και εισβολή ιστού. Αυτή η υπόθεση υποστηρίχθηκε από τα ευρήματα μας ότι η υψηλή έκφραση της CCR7 συσχετίστηκε σημαντικά με την παρουσία του λεμφαδένα μετάσταση και του λεμφικού εισβολή. Η συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης Foxp3 και κλινικά χαρακτηριστικά των 133 ασθενών με καρκίνο του στομάχου συμπεριλήφθηκε επίσης στην παρούσα μελέτη. Ήταν Αξίζει να σημειωθεί ότι τόσο CCR7 και η έκφραση Foxp3 συσχετίζονταν σημαντικά με μετάσταση στους λεμφαδένες. Nextly, πραγματοποιήσαμε ανάλυση γραμμικής συσχέτισης για να βρείτε μια σημαντικά θετική συσχέτιση μεταξύ CCR7 θετική βαθμολογία και εντός του όγκου FoxP3

ο αριθμός των κυττάρων + Treg. Αυτά τα ευρήματα έδειξαν ότι η υψηλή έκφραση της CCR7 σε γαστρικό καρκινικά κύτταρα και μεγάλη ποσότητα ενδοογκική Foxp3

+ Tregs διείσδυση μπορεί να παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην μετάσταση λεμφαδένα, και ως εκ τούτου επηρεάζουν τα αποτελέσματα της θεραπείας του καρκίνου του στομάχου.

η μελέτη μας επιβεβαιώνει τη σημασία της έκφρασης CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα και εντός του όγκου FoxP3

+ Tregs ως προγνωστικούς παράγοντες, οι οποίοι συσχετίζονται με τη συνολική επιβίωση και λεμφαδένα μετάσταση σε καρκίνο του στομάχου, σύμφωνα με τα προηγούμενα ευρήματα [25], [ ,,,0],38]. Στην παρούσα μελέτη, ήταν ενδιαφέρον το ότι ούτε η έκφραση CCR7 ή εντός του όγκου FoxP3

+ Tregs βρέθηκε να αποτελεί ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για καρκίνο του στομάχου. Αυτό είναι, στην καλύτερη των γνώσεών μας, η πρώτη έκθεση καταδεικνύει ότι η υψηλή έκφραση CCR7 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα ήταν παράλληλα με την έντονη διείσδυση της εντός του όγκου Foxp3

+ Tregs στο μικροπεριβάλλον του όγκου. Περαιτέρω μελέτες θα χρειαστούν για να καταλάβουμε αν ο αποκλεισμός της αλληλεπίδρασης /CCR7 SLC σε συνδυασμό με FoxP3

εξάντληση + Tregs μπορεί να εμποδίσει την μετάσταση του καρκίνου του στομάχου κυττάρων στους λεμφαδένες, και να οδηγήσει σε καλύτερα αποτελέσματα της θεραπείας ή όχι.

Συμπερασματικά, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι και οι δύο υψηλή έκφραση CCR7 σε καρκινικά κύτταρα και αυξημένη ενδοογκική FoxP3

+ Tregs συσχετίστηκαν με χειρότερη OS σε γαστρικό καρκίνο, συσχετίζεται θετικά με το άλλο, και θα μπορούσε να θεωρηθεί ως ένα συν-δείκτης της κλινικής πρόγνωση του γαστρικού καρκίνου. Με βάση αυτό, η ανάπτυξη θεραπείας μοριακό στόχο κατά CCR7 και FoxP3 θα μπορούσε να είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τη θεραπεία του καρκίνου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Έκφραση των CCR7 και Foxp3 στο φυσιολογικό γαστρικό ιστούς. Εκπρόσωπος ανοσοκηλιδώσεις για CCR7 και Foxp3. Ως μάρτυρες, δεν υπήρχε έκφρασης CCR7 και πολύ λίγοι FoxP3

+ Tregs σε φυσιολογικούς ιστούς γαστρικό. μπαρ κλίμακα, 50 μm

doi:. 10.1371 /journal.pone.0074430.s001

(TIFF)