Αφηρημένο

Ιστορικό

Αυτή η μελέτη διεξήχθη για να αξιολογήσει την έκφραση του μορίου ενεργοποιημένα λευκοκύτταρα κυτταρικής προσκόλλησης (ALCAM) σε καρκίνο του παγκρέατος (PAC) και για να προσδιοριστεί κατά πόσο ή όχι ο εξωτερικός τομέας απόπτωση ALCAM (s-ALCAM) θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως βιοδείκτη στο περιφερικό αίμα ασθενών με PAC.

Υλικά και Μέθοδοι

Tissue δείγματα και οροί αίματος ασθενών με PAC (n = 264 και n = 116, αντίστοιχα) και οι οροί των 115 ασθενών με χρόνια παγκρεατίτιδα (CP) αναλύθηκαν μέσω δοκιμές ALCAM ανοσοϊστοχημεία και s-ALCAM ELISA. Τα αποτελέσματα συσχετίστηκαν με τα δεδομένα των κλινικών, ιστοπαθολογικές, και ο ασθενής επιβίωση (Chi-square test, ανάλυση Kaplan-Meier, δοκιμασία log-rank, αντίστοιχα).

Αποτελέσματα

ALCAM εκφράστηκε στην πλειοψηφία του PAC βλαβών. Ανοσοϊστοχημεία και ELISA ορό δοκιμές αποκάλυψαν καμία συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ALCAM σε πρωτογενείς όγκους ή s-ALCAM και κλινικών ή ιστοπαθολογικών δεδομένων. Ούτε ALCAM ούτε s-ALCAM έδειξε σημαντική επίδραση όσον αφορά τη συνολική επιβίωση (ρ = 0,261 και ρ = 0,660, αντίστοιχα). επίπεδα ορού S-ALCAM ήταν σημαντικά αυξημένα σε σύγκριση με τους ορούς των ασθενών CP (ρ Φυσικά, πολλαπλούς παράγοντες επηρεάζουν την ένταση χρώσης και την εξειδίκευση των ανοσοϊστοχημεία, και συγκέντρωση αντισώματος είναι μόνο μία από αυτές. Μεταχειρισμένα αραιώσεις κυμαίνονται από 1:100 να 1:450 και διαφορετικά προ-επεξεργασίες περιγράφονται στις μελέτες, γεγονός που αντικατοπτρίζει το γενικό πρόβλημα της συγκρισιμότητας σε ανοσοϊστοχημικές μελέτες. Δυστυχώς, είναι γενικά αποδεκτές κατευθυντήριες γραμμές για τη βέλτιστη ανάπτυξη του πρωτοκόλλου ανοσοϊστοχημεία λείπει [40], [41]. Πρόσφατα, σε μια μελέτη που διερεύνησε την κλινική σημασία των p53 μεταβολές στον καρκίνο του προστάτη, ένα πρωτόκολλο ανοσοϊστοχημεία που είχε σκόπιμα σχεδιαστεί για να είναι «υπερευαίσθητος» οδήγησε σε ένα πολύ υψηλότερο ποσοστό θετικών ανοσοϊστοχημικά ευρήματα (2,5% θετικότητα με το πρότυπο πρωτόκολλο σε σύγκριση με περισσότερο από 90% θετικότητα με την «υπερευαισθησία» πρωτόκολλο) [42]. Αντιμετωπίζει αυτό το πρόβλημα, η ομάδα μας έχει δημιουργήσει ένα ολοκληρωμένο και εξαιρετικά τυποποιημένο πρωτόκολλο για ένα στόχο τη βελτιστοποίηση της ανοσοϊστοχημικές χρώσεις [40]. Εν κατακλείδι, διαφορετικά πρωτόκολλα παράγουν διαφορετικές ποιότητες ευαισθησίας και ειδικότητας, η οποία οδηγεί σε σημαντικές αποκλίσεις στα πρότυπα χρώσης και, ως εκ τούτου, στα στατιστικά στοιχεία. Μια άλλη πηγή για στατιστικές διαφορές είναι οι διαφορές στο μέγεθος των δειγμάτων και αποκλίνοντα συστήματα βαθμολόγησης. Ενώ το πρωτόκολλο μας είναι βελτιστοποιημένο για τη μέτρηση τόσο, η ποσότητα και η tha ένταση της χρώσης, Kahlert και οι συνεργάτες του έχουν επικεντρωθεί στην ένταση μόνο [29], [40]. Για να αποκλείουν αυτό ως αιτία για τα αντιφατικά αποτελέσματα, έχουμε διενεργήσει ανάλυση χρησιμοποιώντας μόνο χρώση έντασης, που επίσης διαπίστωσε καμία στατιστικά σημαντικά αποτελέσματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Παρ ‘όλα αυτά, όχι μόνο έκανε την πλειοψηφία των πρωτογενών PAC αλλοιώσεις εκφράζουν ALCAM, αλλά μεταστατικών και υποτροπιάζουσες αλλοιώσεις έδειξε επίσης ένα μέσο για την ισχυρή έκφραση (λεμφαδένας μεταστάσεις 46%, η = 50? απομακρυσμένες μεταστάσεις 85%, η = 7? υποτροπιάζοντα καρκινικών βλαβών του 67%, η = 15, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται) . Ομοίως, Piscuoglio και συνεργάτες περιέγραψαν μια σημαντικά αυξημένη έκφραση στον καρκίνο του λήκυθο του Vater σε σύγκριση με υγιή παγκρεατικά δείγματα και αδένωμα [17]. Τα ευρήματα αυτά θα πρότεινα μια πιθανή συμμετοχή αυτού του παράγοντα στην εξέλιξη του όγκου της ΕΑΣ [17].

Αυτή η υπόθεση έρχεται σε αντίθεση με τις πρόσφατες παρατηρήσεις από τον Zhang και οι συνεργάτες του, οι οποίοι εντοπίστηκαν μη καρκίνου των πνευμόνων μικρών κυττάρων (NSCLC) στέλεχος κύτταρα, ή ογκογενή-κυττάρων από ALCAM ειδικές FACS διαλογής [13]. ALCAM θετικά κύτταρα NSCLC έδειξε ένα υψηλό πολλαπλασιαστικό δυναμικό in-vitro και in-vivo σε αντίθεση με κύτταρα αρνητικά ALCAM. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια knock-down του ALCAM δεν είχε ως αποτέλεσμα μείωση της ογκογονικότητας, η οποία είναι σύμφωνη με τη μελέτη από Hong και συναδέλφους που παρατηρήθηκαν παρόμοια αποτελέσματα σε ένα πείραμα ALCAM αποσιώπηση μιας κυτταρικής γραμμής PAC μέσω ALCAM RNAi [37]. Καμία επίδραση στον πολλαπλασιασμό ή τη μετανάστευση παρατηρήθηκε. Επιπλέον, Zhang και οι συνεργάτες του παρουσίασε ανοσοϊστοχημική αποτελέσματα σχετικά με τον αντίκτυπο της έκφρασης ιστού ALCAM στην επιβίωση σε μορφή TMA με 143 ασθενείς με NSCLC, βρίσκοντας καμία στατιστικά σημαντική επίδραση. Κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι ALCAM θα ​​είναι ένα πολύ ισχυρό, αλλά αδρανή δείκτη κυτταρικής επιφάνειας για NSCLC όγκου-κίνηση-κύτταρα. Δεδομένου ότι δεν έχουμε βρει σημαντική κλινική συσχέτιση της έκφρασης ALCAM, ALCAM θα ​​μπορούσε κάλλιστα να έχει ένα παρόμοιο ρόλο σε βλαστικά κύτταρα PAC. Εάν αυτή η υπόθεση μπορεί να επιβεβαιωθεί με περαιτέρω in-vitro και in-vivo πειράματα, ALCAM θα ​​μπορούσε να γίνει ένας πιθανός στόχος για νέες στρατηγικές θεραπείας που βασίζονται σε αντισώματα. Η χρησιμότητα του ALCAM ως δομή-στόχο φαρμάκου μπορεί να ενισχυθεί περαιτέρω με τον συνδέτη που προκαλείται από ενδοκυττάρωση του ALCAM [23]. Επιπλέον, ένα περιγράφηκε πρόσφατα εσωτερίκευσης αντισωμάτων μονής αλυσίδας [23], [24], η στόχευση ALCAM έχει προταθεί για την πιθανή ενδοκυτταρική απελευθέρωση διαφόρων θεραπευτικών παραγόντων σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Ωστόσο, ένα σημαντικό αντίρρηση πρέπει να αυξηθεί: ALCAM είναι ένα εκφράζεται παντού μόριο με φυσιολογικό ρόλους στον εντερικό βλεννογόνο [43]. Σοβαρή αποτελέσματα επί κανονικών ιστών μπορεί έτσι να έχει ως αποτέλεσμα και θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη όταν θεωρείται μια εφαρμογή συστηματικών ειδικών θεραπειών του καρκίνου [43].

Λόγω της αυξημένης έκφρασης του ALCAM στην πλειονότητα των καρκινικών αλλοιώσεων , αξιολογήσαμε επίσης τα επίπεδα του s-ALCAM (από τον εξωτερικό τομέα απόπτωση ALCAM) σε ορούς αίματος. Οι τιμές s-ALCAM ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς PAC σε σύγκριση με ασθενείς με CP και τις υγιείς δότες αίματος (ρ το υπόστρωμα. Η αντίδραση χρώματος σταμάτησε με την προσθήκη 10 mM H

2SO

4, και αναλύθηκαν σε 450 nm χρησιμοποιώντας αναγνώστη ELISA (Dynatech MR 5000? Πήγασος Scientific, Rockville, MD, USA). Ανθρώπινη Alcam-Fc πρωτεΐνη (R &? D Systems). Χρησίμευσε ως εσωτερικό πρότυπο για την δοκιμασία

Προκειμένου να διασφαλιστεί ότι η ανοσοδοκιμασία ήταν κατάλληλο για τη μέτρηση κλινικά δείγματα ορού, εξετάστηκαν αναπαραγωγιμότητα και γραμμικότητα. Η ανάλυση έδειξε εξαιρετική γραμμικότητα με διαδοχικές αραιώσεις και έδειξε & lt?. Συντελεστής 10% της διακύμανσης (CV) για τις ενδο- και δια-δοκιμασίας μελέτες μεταβλητότητα

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση SPSS Statistics for Windows (έκδοση 17, SPSS Inc., Chicago άρρωστος, USA). Η αλληλεξάρτηση μεταξύ ανοσοχρώση και ELISA αποτέλεσμα καθώς και η κλινικά δεδομένα υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας Chi-square και ακριβή τεστ του Fisher και εμφανίζεται στο σταυρό πίνακες. Το επίπεδο αποκοπής για s-ALCAM ποσοτικοποίηση προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το Youden-δείκτη. διαφορές Ομάδα υπολογίστηκαν από το t-test, ANOVA? Mann-Whitney ή τεστ Kruskal-Wallis. Δέκτης καμπυλών χρησιμοποιήθηκαν για να περιγράψουν την απόδοση των s-ALCAM. Οι καμπύλες επιβίωσης απεικονίζονται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων και p-τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τους ασθενείς, οι οποίοι πρόθυμα και γενναιόδωρα παρείχαν στοιχεία και δείγματα για ερευνητικούς σκοπούς, καθώς και Πέτρα Σρέντερ και η Χριστίνα Koop για την εξαιρετική τεχνική υποστήριξή τους.