Abstract

παράγοντα Β κυττάρων που ενεργοποιούν (BAFF) είναι μια κυτοκίνη που ανήκει στην παράγοντα νέκρωσης όγκου (TNF) υπεροικογένεια. Έχει αναφερθεί ότι BAFF είναι αυξημένη σε ασθενείς με αυτοάνοσες παγκρεατίτιδα και συμβάλλει στην κακοήθη δυναμικό των καρκίνων του αίματος και συμπαγείς όγκους. Σε αυτή τη μελέτη, λήφθηκε κλινικές ενδείξεις αυξημένων επιπέδων BAFF σε ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα παγκρεατικού πόρου (PDAC), και οι ρόλοι και οι μηχανισμοί του BAFF σε PDAC διευκρινίστηκαν σε ανθρώπινους ιστούς του PDAC και από

in vitro

δεδομένα του κυτταρικές σειρές PDAC. Τα επίπεδα ορού του BAFF σε ασθενείς με PDAC ήταν σημαντικά υψηλότερα από ό, τι στα υγιή άτομα (p = 0,0121). Οι ασθενείς με σταδίου IV UICC PDAC (T1-4, N0-1, M1) είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα BAFF στον ορό σε σύγκριση με τους ασθενείς με PDAC (p = 0,0182). BAFF ήταν αξιοσημείωτα εκφράζεται σε διηθητικά λεμφοκύτταρα Β που περιβάλλει τον καρκίνο του παγκρέατος σε ανθρώπινους παγκρεατικούς ιστούς, γεγονός που υποδηλώνει ότι BAFF μπορεί να παίζει ένα ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος. κυτταρικές γραμμές PDAC καλλιεργήθηκαν με ανασυνδυασμένη ανθρώπινη BAFF, και η μορφολογία και γονιδιακή έκφραση αναλύθηκαν? παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα άλλαξε σε ένα ινοβλάστη μορφολογία που μοιάζει, και έδειξε αλλαγμένη έκφραση γονιδίου Ε-καδερίνης, βιμεντίνη και σαλιγκάρι. Αυτά BAFF που προκαλείται από τις αλλαγές αντανακλούν αυξημένη κινητικότητα των κυττάρων και εισβολή. BAFF-R που υπερεκφράζουν κυτταρικών κλώνων επιβεβαίωσε τη συσχέτιση μεταξύ αυτών των BAFF-επέφερε αλλαγές και επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ)-σχετικών γονιδίων. BAFF ήταν αυξημένη σε ασθενείς με μεταστατικό προηγμένο PDAC και επάγεται μεταβολές στα κύτταρα μέσω PDAC ρύθμιση του ΕΜΤ-σχετικών γονιδίων. Διευκρίνιση του ακριβούς ρόλου και του μηχανισμού ελέγχου των BAFF μπορεί να οδηγήσει σε νέες θεραπευτικές προσεγγίσεις με στόχο τη βελτίωση του παγκρέατος επιβίωσης του καρκίνου

Παράθεση:. Κοϊζούμι Μ, Hiasa Υ, Kumagi Τ, Yamanishi Η, Azemoto Ν, Kobata Τ, et al. (2013) Αυξημένη Β κυττάρων-Παράγοντας Ενεργοποίησης Προωθεί Όγκου εισβολή και μετάσταση στο ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (8): e71367. doi: 10.1371 /journal.pone.0071367

Επιμέλεια: Srikumar Π Chellappan, H. Lee Moffitt Cancer Center δεν είναι σημαντική.

Η

Η

Έκφραση του BAFF και BAFF-R σε ανθρώπινο ιστό PDAC

πειράματα Ανοσοϊστοχημεία διεξήχθησαν για να προσδιοριστεί εάν BAFF εκφράζεται σε παγκρεατικά ιστό. Παγκρέατος ιστού από χειρουργικό είδος που λαμβάνεται από ασθενείς με PDAC χρωματίστηκε για BAFF και BAFF-R (Εικ. 2 και 3). Διηθούν όγκο κυττάρων του ανοσοποιητικού που περιβάλλει PDAC κύτταρα βρέθηκαν να αξιοσημείωτα ρητή BAFF και BAFF-R (Εικ. 2). Πρόσθετη χρώση CD20 (δείκτης Β λεμφοκύτταρα), CD3 (υποδοχέας Τ κυττάρου, ενός δείκτη Τ-λεμφοκυττάρων) και CD68 (δείκτης μονοκυττάρων /μακροφάγων) διεξήχθη για τον προσδιορισμό των τύπων τους διηθητικά κύτταρα που εκφράζουν BAFF ή BAFF-R. Η κατανομή των BAFF- και BAFF-R-θετικών κυττάρων εμφανίστηκε συνεπής με την κατανομή των Β λεμφοκυττάρων, και όχι εκείνη του Τ λεμφοκυττάρων ή μονοκυττάρων /μακροφάγων (Σχ. 2). Πρόσφατα, έχει δειχθεί ότι τα Β λεμφοκύτταρα μπορεί να εκκρίνουν BAFF [7], [8], [16]. Διπλή χρώση ανοσοφθορισμού με BAFF και CD20, CD3, CD68 (Σχ. 3Α), και χρώση με BAFF-R και CD20, CD3, CD68 (Σχ. 3Β) διεξήχθη. Η κατανομή των BAFF (πράσινο) και CD20 (κόκκινο) συγχωνεύθηκε και εμφανίστηκε κίτρινο (Εικ. 3Α). Επιπλέον, η κατανομή του BAFF-R (πράσινο) και CD20 (κόκκινο) επίσης συγχωνεύονται και εμφανίστηκε κίτρινο (Σχ. 3Β). Ωστόσο, η κατανομή του BAFF και BAFF-R δεν ήταν συν-εντοπισμένη με CD3 ή CD68. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι τα Β λεμφοκύτταρα, τα οποία εκφράζουν υψηλά επίπεδα BAFF και BAFF-R, είναι στη διεισδύσουν και να πολλαπλασιάζονται στον ιστό που περιβάλλει το PDAC

(Α) Χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. (Η &? Ε) και ανοσοϊστοχημεία του BAFF, BAFF-R, CD3, CD20 και CD68 σε PDAC και τους περιβάλλοντες ιστούς απεικονίζονται. Πρώτα Ab (-) δείχνει έλεγχος χρώση χωρίς πρώτο αντίσωμα. Τα Β λεμφοκύτταρα στον ιστό που περιβάλλει PDAC είχε ένα εξαιρετικά υψηλό επίπεδο έκφρασης BAFF. Η μεγέθυνση όπως υποδεικνύεται πάνω από κάθε μικροφωτογραφία. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 200 μm σύμφωνα με χαμηλή μεγέθυνση (x40), και 50 μm υπό υψηλή μεγέθυνση (x200 και × 400).

Η

(Α) χρώση ανοσοφθορισμού με BAFF (πράσινο), και CD20, CD3, CD68 (κόκκινο) εμφανίζονται. Η συγχωνευμένη εικόνα αναφέρεται ως «συγχώνευση». Εκφράσεις του BAFF και CD20 ήταν συν-εντοπισμένη (κίτρινο)? Ωστόσο, BAFF και CD3 ή CD68 δεν ήταν συν-εντοπισμένη. (Β) χρώση ανοσοφθορισμού με BAFF-R (πράσινο) και CD20, CD3, CD68 και (κόκκινο) δείχνονται. Η έκφραση του BAFF-R και CD20 συν-εντοπισμένα (κίτρινο)? Ωστόσο, BAFF-R και CD3 ή CD68 δεν ήταν συν-εντοπισμένη. Πρώτα Ab (-) δείχνει τον έλεγχο χρώση χωρίς το πρώτο αντίσωμα

Η

Η έκφραση του BAFF υποδοχέων σε ανθρώπινους ιστούς PDAC και ανθρώπινες κυτταρικές σειρές PDAC

Για να διερευνηθεί η έκφραση των υποδοχέων BAFF. σε PDAC, ανοσοϊστοχημεία πραγματοποιήθηκε επί PDAC ιστούς ελήφθησαν από ασθενείς καθώς και σε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές PDAC. BAFF-R που εκφράζεται σε κύτταρα PDAC, η οποία είχε θετικά σήματα από ΜΙΒ-1 και CA19-9 (Σχ. 4Α, αριστερή στήλη). Ωστόσο, άλλοι υποδοχείς BAFF (TACI και BCMA) δεν εκφράζεται στα κύτταρα PDAC (Σχ. 4Α, δεξιά στήλη). Οι ανθρώπινες κυτταρικές σειρές PDAC, PANC-1, BxPC-3, AsPC-1 και ΜΙΑ PaCa-2, χρησιμοποιήθηκαν για τις

in vitro

μελέτες. Ποιοτική RT-PCR για το γονίδιο έκφρασης του BAFF-R, TACI, και BCMA αποκάλυψε μόνο έκφραση του BAFF-R (σχ. 4Β). κύτταρα Ramos, γνωστό ως ιστός που εκφράζει BAFF-R, TACI και BCMA, χρησιμοποιήθηκαν ως θετικός έλεγχος [21]. Επιπλέον, κηλίδωση Western διεξήχθη για να αξιολογηθεί η πρωτεΐνη έκφραση αυτών των υποδοχέων BAFF (Σχ. 4C). Η έκφραση του BAFF-R επιβεβαιώθηκε σε όλες τις κυτταρικές σειρές PDAC, αλλά η έκφραση της ΤΑΟΙ και BCMA δεν μπορούσε να ανιχνευθεί. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αυξημένα επίπεδα BAFF προέκυψαν από τα διηθητικά και πολλαπλασιαζόμενων Β-λεμφοκυττάρων που περιβάλλει PDAC ιστούς? Αυτά τα αυξημένα επίπεδα BAFF μπορεί να διεγείρει PDAC μέσω BAFF-R σηματοδότηση. Για τον προσδιορισμό του ρόλου του BAFF σε PDAC, ένα

in vitro

δοκιμασία πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της κυτταρικής γραμμής PANC-1 PDAC, κλωνοποιήθηκε μορφομετατροπέα του BAFF-R, και ανασυνδυασμένη ανθρώπινη BAFF για περαιτέρω ανάλυση.

(Α) Χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε) και ανοσοϊστοχημεία του ΜΙΒ-1, CA19-9, BAFF-R, TACI και BCMA σε PDAC απεικονίζονται. Πρώτα Ab (-) δείχνει τον έλεγχο χρώση χωρίς το πρώτο αντίσωμα. Η μεγέθυνση είναι όπως υποδεικνύεται πάνω από κάθε μικροφωτογραφία. Ράβδοι κλίμακας αντιπροσωπεύουν 200 μm υπό χαμηλή μεγέθυνση (χ40) και 50 μm υπό υψηλή μεγέθυνση (χ400). (Β) Η ποιοτική ανάλυση RT-PCR των υποδοχέων BAFF σε κυτταρικές γραμμές PDAC. GAPDH ενδείκνυται ως ένα γονίδιο καθαριότητας. RNA που απομονώνεται από Ramos κύτταρο χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Ν.Ο. είναι ένας αρνητικός μάρτυρας χωρίς δείγμα. (Γ) ανάλυση κηλίδας Western των υποδοχέων BAFF σε κυτταρικές γραμμές PDAC. β-ακτίνη υποδεικνύεται ως πρωτεΐνη καθαριότητας. Ramos κύτταρο χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. NC είναι ένα αρνητικό έλεγχο χωρίς δείγμα.

Η

BAFF προκαλεί EMT σε μια PDAC κυτταρική σειρά

Στο

in vitro

δοκιμασία, η κυτταρική μορφολογία του PANC-1 παρατηρήθηκε να αλλάξει μετά την προσθήκη ανασυνδυασμένου ανθρώπινου BAFF στο μέσο καλλιέργειας (Εικ. 5Α). Τα κύτταρα φάνηκε να υιοθετήσει μια πιο μοιάζουν με ινοβλάστες (τύπου ατράκτου) μορφολογία και παρουσίασαν μειωμένη επαφή κυττάρου-κυττάρου. Αυτές οι μορφολογικές μεταβολές ήταν παρόμοιες με τις αλλαγές που παρατηρούνται με αγωγή ΤΟΡ-β. Από αυτό το αποτέλεσμα, η υπόθεση ότι αυξημένη BAFF ενδέχεται να επιφέρει μεταβολές στην γονίδια που σχετίζονται με τον μεταβάσεως επιθηλίου-μεσεγχύματος (ΕΜΤ) σε PDAC κύτταρα. PANC-1 απομονώνεται από αδιαφοροποίητη ιστό PDAC [22] και είναι θετική για το επιθηλιακό δείκτη Ε-καδερίνης και της μεσεγχυματικά πρωτεΐνη βιμεντίνη. Έτσι, PANC-1 χρησιμοποιήθηκε ως ένα μοντέλο ενός κυττάρου PDAC που εξακολουθεί να έχει επιθηλιακών δυναμικό. Ανάλυση για αλλαγμένη έκφραση αντιπροσωπευτικών γονίδια που σχετίζονται με EMT διεξήχθη με προσθήκη ανθρώπινη ανασυνδυασμένη BAFF στο μέσο καλλιέργειας. Μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του E-cadherin mRNA, καθώς και σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση της βιμεντίνης και σαλιγκάρι mRNAs, παρατηρήθηκαν σε έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο με τον BAFF (Σχ. 5Β). GAPDH mRNA χρησιμοποιήθηκε ως γονίδιο οικοκυρικής για την ποσοτική PCR, και επιβεβαιώθηκε ότι τα επίπεδα του mRNA GAPDH δεν επηρεάστηκε από τη θεραπεία με BAFF (Σχ. S1). Western blotting αποτελέσματα για αυτά τα μόρια ήταν παρόμοια με τα αποτελέσματα του πραγματικού χρόνου RT-PCR (Σχ. 5C). Οι BAFF-επαγόμενη μεταβολές στα PDAC κύτταρα ήταν παρόμοια σε μεταβολές κατά τη διάρκεια της ΕΜΤ δει. Αυξημένη BAFF σε PDAC θα μπορούσε να προωθήσει το γονίδιο αλλαγές που σχετίζονται με EMT μέσα από μια μείωση στο E-cadherin και την αύξηση vimentin μέσω των οδών σηματοδότησης σαλιγκάρι.

(Α) Η κυτταρική μορφολογία PANC-1 κύτταρα άλλαξε μετά την προσθήκη του BAFF στο υπερκείμενο. ΤΟΡ-β χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Παρόμοια με ΤΟΡ-β, η προσθήκη του BAFF προκάλεσε την μορφολογία των κυττάρων PANC-1 για να γίνει ατρακτοειδόμορφα. (Β) Ανάλυση πραγματικού χρόνου RT-PCR για δείκτες EMT (Ε-καδερίνης, βιμεντίνη και σαλιγκάρι) υποδεικνύονται. Τα γονίδια αυτά διαμορφώνονται σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο με τον BAFF. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SE των τεσσάρων ξεχωριστών πειραμάτων (* ρ & lt? 0,05 vs. BAFF 0 ng /mL). (C) Κηλίδωση Western ανάλυση δεικτών ΕΜΤ δείχνει ότι η έκφραση κάθε πρωτεΐνης διαμορφώνεται με την προσθήκη του BAFF. β-ακτίνης παρουσιάζεται ως μια πρωτεΐνη καθαριότητας.

Η

Η θεραπεία με ανασυνδυασμένη ανθρώπινη BAFF και την κινητικότητα και την εισβολή των κυττάρων PDAC

Σε συνδυασμό με μορφολογικές αλλαγές, προτάθηκε ότι BAFF προκαλεί EMT σε PDAC. Αυτά τα αποτελέσματα οδήγησαν μελέτη των άλλων επιδράσεων του BAFF, όπως η κινητικότητα και εισβολή. κύτταρα PANC-1 επωάστηκαν με ανθρώπινο ανασυνδυασμένο BAFF, και μεταβολές στην κινητικότητα αξιολογήθηκαν με τη δοκιμασία επούλωση της πληγής /μηδέν. Η θεραπεία με BAFF αύξησε την κινητικότητα των κυττάρων PANC-1 και είχε ως αποτέλεσμα το κλείσιμο του τραύματος επιταχύνθηκε (ρ & lt? 0,01) (Εικ 6Α και 6Β.). Επιπλέον, η θεραπεία με ανασυνδυασμένη ανθρώπινη BAFF βελτίωσε σημαντικά την ικανότητα των κυττάρων να εισβάλουν στο εξωκυτταρικό πλέγμα

in vitro

(Εικ. 6C).

(Α) Η /δοκιμή επούλωση τραύματος μηδέν έδειξε ότι το κινητικότητα των κυττάρων PANC-1 ενισχύθηκε από 24 ώρες επώασης με BAFF. (Β) Η επί τοις εκατό τραυματίες περιοχή γεμάτη στη δοκιμή επούλωση της πληγής /μηδέν εμφανίζεται ως ένα γράφημα (* ρ & lt? 0,01 έναντι BAFF 0 ng /mL). (Γ) Η δοκιμασία εισβολή δείχνει βελτίωση της εισβολής με BAFF σε κύτταρα PANC-1 (* ρ & lt? 0,05 vs. BAFF 0 ng /mL). (D) η πληγή δοκιμής επούλωσης /μηδέν με εξουδετερωτικά αντι-ΒΑΡΡ-Κ αντίσωμα έδειξε ότι η κινητικότητα των κυττάρων PANC-1 με BAFF ανεστάλη από το αντίσωμα. (Ε) Η επί τοις εκατό τραυματίες περιοχή γεμάτη στη δοκιμή επούλωση της πληγής /μηδέν εμφανίζεται ως ένα γράφημα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SE των έξι ξεχωριστά πειράματα (* ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0,01).

Η

Πρόσθετες αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με χρήση BAFF-R αντίσωμα αντι-ανθρώπου, η οποία μπορεί να εμποδίσει την σύνδεση του BAFF με τον BAFF-R [23]. Με την προσθήκη του ανθρώπινου ανασυνδυασμένου BAFF στο υπερκείμενο των καλλιεργημένων κυττάρων, η επί τοις εκατό τραυματίες περιοχή γεμάτη αυξήθηκε σημαντικά (15,1 ± 2,3 έναντι 27,2 ± 2,3? Ρ & lt? 0,01). Με την προσθήκη της ανθρώπινης ανασυνδυασμένης BAFF και αντι-ανθρώπινο αντίσωμα BAFF-R, το κλείσιμο του τραύματος ελαττώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με την προσθήκη αντισώματος κατσίκας ελέγχου (27,2 ± 2,3 έναντι 20,9 ± 2,4? Ρ & lt? 0,05). (Σχ 6D και 6Ε ). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι BAFF διέγερση προκαλείται αυξημένη κινητικότητα και διείσδυση των κυττάρων PANC-1.

BAFF-R που υπερεκφράζουν κυτταρικών κλώνων και έκφραση του ΕΜΤ-σχετικών γονιδίων

Τέσσερις κυτταρικοί κλώνοι που μπορεί να υπερεκφράζουν BAFF -R μέσω επιμόλυνση με ένα πλασμίδιο (pBCMGS-BAFF-R) [20] και την επιλογή με καλλιέργεια με G418 καθιερώθηκαν. Η υπερέκφραση του BAFF-R επιβεβαιώθηκε σε αυτούς τους κυτταρικούς κλώνους με κηλίδωση Western και ανάλυση FACS (Σχ. 7Α και S2). Λειτουργική σηματοδότηση σε μεταγωγή BAFF-R σε αυτές τις κυτταρικές κλώνοι επιβεβαιώθηκαν με επώαση με BAFF (Σχ. S3). Αυξημένη έκφραση της πρωτεΐνης ρ52 ΝΡ-κΒ παρατηρήθηκε σε κηλίδωση Western, υποδεικνύοντας ότι η οδός ΝΡ-κΒ ενεργοποιείται από υπερέκφραση BAFF-R? Αυτή η ενεργοποίηση του μονοπατιού ΝΡ-κΒ αντανακλάται επίσης στην μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης και αυξημένη έκφραση του βιμεντίνη και σαλιγκάρι σε αυτούς τους κλώνους. Αυτές οι μεταβολές ήταν παρόμοιες με τα αποτελέσματα της δοκιμασίας με ανασυνδυασμένη ανθρώπινη BAFF.

Τέσσερις κλώνοι PDAC κύτταρο, το οποίο μπορεί να υπερεκφράζουν BAFF-R μέσω επιμόλυνση με ένα πλασμίδιο (-ΒΑΡΡ-Κ pBCMGS), καθιερώθηκαν. (Α) Στις τέσσερις κλώνους, η υπερέκφραση του BAFF-R επιβεβαιώθηκε, και οι πρωτεΐνες που συνδέονται με EMT βρέθηκαν να είναι διαμορφωμένη σε ένα επίπεδο με τρόπο που εξαρτάται BAFF-R. επίπεδα (Β) mRNA του κάθε γονιδίου αξιολογήθηκαν με πραγματικού χρόνου RT-PCR. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SE των τεσσάρων ξεχωριστών πειραμάτων (* ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0,01 vs. PANC-1). (Γ) η πληγή δοκιμής επούλωσης /μηδέν έδειξε ότι η κινητικότητα αυτών των κυτταρικών κλώνων ενισχύθηκε σε σύγκριση με την αρχική PANC-1. (Δ) Η επί τοις εκατό τραυματίες περιοχή γεμάτη κάθε κλώνου στην δοκιμή επούλωση της πληγής /μηδέν εμφανίζεται ως ένα γράφημα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SE των έξι ξεχωριστά πειράματα (* ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0,01 vs. PANC-1).

Η

Επιπλέον, η έκφραση των mRNAs αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου RT -PCR (Εικ. 7Β). Μια μείωση στην Ε-καδερίνης mRNA παρατηρήθηκε σε όλες τις κλώνων BAFF-R-κυττάρου που υπερεκφράζει, ενώ παρατηρήθηκε μία αύξηση στην βιμεντίνη και Σαλιγκάρι mRNAs στις περισσότερες των κυτταρικών κλώνων. Κινητικότητα του κυττάρου κλώνων επιβεβαιώθηκε να είναι σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των μη-ΒΑΡΡ-Κ-επιμολυσμένα κύτταρα PANC-1 στο τεστ επούλωση του τραύματος /μηδέν (Σχ. 7C και D). Σε συνδυασμό με τα αποτελέσματα των κυτταρικών κλώνων, επιβεβαιώθηκε ότι η διέγερση με BAFF προκαλεί γονίδιο αλλαγές που συνδέονται με την EMT στην PDAC κύτταρα.

Συζήτηση

Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που αναφέρουν ότι τα επίπεδα ορού του BAFF είναι αυξημένη σε ασθενείς με PDAC, και η πρώτη μελέτη για τη διερεύνηση του ρόλου του BAFF σε ανθρώπινο PDAC. Σε αυτή τη μελέτη, αποκαλύφθηκε ότι: i) τα επίπεδα στον ορό του BAFF σε ασθενείς με PDAC (ιδίως σε εκείνες με μετάσταση) ήταν αυξημένα σε σύγκριση με υγιή άτομα? ii) που διηθούν όγκο λεμφοκύτταρα Β εκφράζεται BAFF και PDAC ιστούς εκφράζονται BAFF-R? και iii) αυξήθηκε BAFF-επαγόμενη γονίδιο αλλοιώσεις συνδέθηκαν με EMT σε ένα PDAC κυτταρική γραμμή, και με ενισχυμένη κινητικότητα των καρκινικών κυττάρων και εισβολή.

BAFF είναι γνωστό ότι εκφράζεται από μονοκύτταρα, δενδριτικά κύτταρα, Τ λεμφοκύτταρα, Β λεμφοκύτταρα και τα επιθηλιακά κύτταρα [6] – [8], [24], [25]? Ωστόσο, η ακριβής προφίλ έκφρασης του σε ασθενείς με PDAC δεν έχει οριστεί προηγουμένως. Πρόσφατα, Nakajima et al. έδειξε μέσω ανοσοϊστοχημείας που BAFF-εκφράζουν Β λεμφοκύτταρα διεισδύουν αρθρικούς ιστούς της ρευματοειδούς αρθρίτιδας [26]. Η πλειονότητα των διηθητικών κυττάρων στον ιστό που περιβάλλει PDAC στην παρούσα μελέτη ήταν BAFF-εκφράζουν Β λεμφοκύτταρα. Επιπλέον, πολλά από αυτά τα λεμφοκύτταρα Β εξέφρασε επίσης BAFF-R. Από αυτά τα αποτελέσματα, οι BAFF-εκφράζουν Β λεμφοκύτταρα διηθούντα θα μπορούσε να θεωρηθεί ότι έχει ένα σημαντικό ρόλο στην ρύθμιση προς τα άνω του BAFF σε PDAC ασθενείς. Η αυξημένη BAFF έχει πιθανόν ένα ρόλο στην πρόοδο της PDAC, επειδή τα επίπεδα του BAFF ορού αξιοσημείωτα ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ασθενείς με προχωρημένο PDAC. BAFF που παράγονται από αυτά τα λεμφοκύτταρα Β μπορεί επίσης να έχει ένα σημαντικό ρόλο στην επιβίωση, ενεργοποίηση και εξάπλωση των διηθητικών λεμφοκυττάρων Β γύρω PDAC.

BAFF ανήκει στην υπεροικογένεια TNF, και είναι στενά συνδεδεμένη με τον Απρίλιο. Και οι δύο έχουν ένα σημαντικό ρόλο στην ενεργοποίηση και πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων Β. BAFF συνδέεται με τρεις υποδοχείς BAFF (BAFF-R, BCMA και TACI), ενώ Απρίλιο προσδένεται σε δύο από αυτές (BCMA και TACI). Στην παρούσα μελέτη, μόνο επίπεδα BAFF (δεν APRIL) που ορό ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ασθενείς με PDAC, και μόνο η έκφραση του BAFF-R μπορεί να ανιχνευθεί σε ιστούς PDAC. Έτσι, ο ρόλος του BAFF και BAFF-R σε PDAC διερευνήθηκε περαιτέρω. Ένα από τα πιο σημαντικά BAFF-επαγόμενη μηχανισμών είναι η ενεργοποίηση του NF-κΒ. Έχει αναφερθεί ότι BAFF-R ενεργοποιεί κινάση ΝΡ-κΒ επαγωγής (ΝΙΚ), και ότι η ενεργοποίηση του ΝΙΚ επάγει την επεξεργασία του παράγοντα μεταγραφής ΝΡ-κΒ2 P100 για NF-P52 κΒ2 [27], [28]. Η συσχέτιση μεταξύ της ενεργοποίησης του NF-κΒ και την έκφραση του σαλιγκαριού έχει προηγουμένως αναφερθεί [29]. ΝΡ-κΒ φαίνεται να έχει ένα σημαντικό ρόλο στην επαγωγή ΕΜΤ

ΕΜΤ είναι το φαινόμενο κατά το οποίο τα επιθηλιακά κύτταρα να μετατραπούν σε μεσεγχυματικά κύτταρα.? είναι θεμελιώδης για την εμβρυϊκή ανάπτυξη και περιλαμβάνει βαθιές φαινοτυπικές αλλαγές, συμπεριλαμβανομένης της απώλειας της προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου και κυττάρου πολικότητα και την απόκτηση των μεταναστευτικών και επεμβατική ιδιότητες [30]. Σε προηγούμενες εκθέσεις, EMT έχει χαρακτηριστεί από την απόκτηση ενός ατρακτοειδόμορφα /ινοβλαστική μορφολογία, αυξητική ρύθμιση των δεικτών μεσεγχυματικών όπως βιμεντίνη, και προς τα κάτω ρύθμιση των επιθηλιακών δείκτη όπως E-cadherin [31], [32]. Σαλιγκάρι έχει θεωρηθεί ότι είναι μια σκανδάλη του ΕΜΤ μέσω μειορρύθμιση της έκφρασης των επιθηλιακών δεικτών και αυξορρύθμιση της έκφρασης δεικτών μεσεγχυματικών [33]. Αυτά τα μόρια απορυθμίζεται από BAFF σε κύτταρα PDAC? προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και προς τα πάνω ρύθμιση του βιμεντίνης παρατηρήθηκαν επίσης σε αυτά τα κύτταρα.

Από τα παρόντα αποτελέσματα, προτείνεται ότι BAFF και BAFF-R σηματοδότηση επάγει ΕΜΤ σε κύτταρα PDAC (Εικ. 8). κύτταρα PDAC διαμορφώνεται με αυξημένη BAFF δείχνουν μια ατρακτοειδή μορφολογία, χάνουν προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου και κυττάρου πολικότητα, και αποκτούν την ικανότητα της κυτταρικής κινητικότητας και εισβολή. Είναι ευρέως αποδεκτό ότι το E-cadherin διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην EMT, μια πρώιμη εκδήλωση σε καρκινικές κυτταρικές εισβολή και τη μετάσταση [34]. EMT θεωρείται ένα σημαντικό γεγονός κατά την διάρκεια κακοήθους προόδου του όγκου και τη μετάσταση [35], [36].