Αφηρημένο

Εισαγωγή

Σε τυχαία μελέτες με μόνο EGFR ΤΚΙ ένα μικρό ποσοστό των ασθενών με NSCLC έχουν γενετικά προφίλ βιοψίες. Κατευθυντήριες γραμμές παρέχουν στοιχεία για να εκτελέσει την ανάλυση EGFR και μετάλλαξη KRAS σε μη-πλακώδες NSCLC. Διερευνήσαμε την ποιότητα της βιοψίας του όγκου που προσφέρονται για δοκιμές μετάλλαξης, διαφορετική κατανομή μεταλλάξεις, και το αποτέλεσμα με EGFR ΤΚΙ.

Ασθενών και Μέθοδοι

Τα κλινικά δεδομένα από 8 περιφερειακά νοσοκομεία μελετήθηκαν για τα χαρακτηριστικά των ασθενών και των όγκων, η θεραπεία και η συνολική επιβίωση. Οι βιοψίες αποστέλλονται στο κεντρικό εργαστήριο αξιολογήθηκαν για την ποιότητα του DNA και στη συνέχεια αναλύθηκαν ως προς μεταλλάξεις στα εξόνια 18-21 του EGFR και εξονίου 2 του KRAS με ανάλυση αμφίδρομης αλληλουχίας.

Αποτελέσματα

Όγκοι από 442 επακόλουθη ασθενείς αναλύθηκαν. Για 74 ασθενείς (17%) των όγκων ήταν ακατάλληλα για ανάλυση μετάλλαξης. Τριάντα-οκτώ ασθενείς (10,9%) είχαν μεταλλάξεις του EGFR με 79% γνωστών μεταλλάξεων ενεργοποίηση. Εκατόν οκτώ ασθενείς (30%) είχαν λειτουργική μεταλλάξεις KRAS. Το φάσμα μετάλλαξη ήταν συγκρίσιμη με την κοσμική βάση δεδομένων. Μετά την κατεργασία της πρώτης ή της δεύτερης γραμμής με EGFR ΤΚΙ διάμεση συνολική επιβίωση για τους ασθενείς με EGFR (n = 14), KRAS (n = 14) μεταλλάξεις και αγρίου τύπου EGFR /KRAS (n = 31) δεν επιτεύχθηκε, 20 έως 9 μήνες , αντίστοιχα.

Συμπέρασμα

Ένας από κάθε δειγμάτων 6 όγκων ήταν ανεπαρκής για την ανάλυση μετάλλαξης. Οι ασθενείς με EGFR ενεργοποίηση μεταλλάξεις που έλαβαν θεραπεία με EGFR-ΤΚΙ έχουν τη μεγαλύτερη επιβίωση

Παράθεση:. Kerner GSMA, Schuuring Ε, Sietsma J, Hiltermann TJN, Pieterman RM, de Leede GPJ, et al. (2013) κοινές και σπάνιες EGFR και KRAS μεταλλάξεις σε μια ολλανδική μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα Πληθυσμός και της κλινικής έκβασης τους. PLoS ONE 8 (7): e70346. doi: 10.1371 /journal.pone.0070346

Επιμέλεια: Surinder Κ Batra, Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8 Μαρτίου 2013? Αποδεκτές: 17 του Ιουνίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 29 του Ιούλη του 2013

Copyright: © 2013 Kerner et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από την κοινοπραξία CTMM Πολεμική Αεροπορία (https://www.ctmm.nl). CTMM πληρώνει για μισθό GSMAK και δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Δεν υπάρχουν άλλες εξωτερικές πηγές χρηματοδότησης για τη μελέτη αυτή

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Η CTMM Πολεμική Αεροπορία κοινοπραξία είναι μια ιδιωτική /δημόσια κοινοπραξία με τη συμμετοχή της ακαδημαϊκής κοινότητας, ιδιωτικές εταιρείες και την κυβέρνηση. Δεν είναι μια εμπορική πηγή χρηματοδότησης. Gerald Kerner χρηματοδοτείται από CTMM κοινοπραξία για την εκτέλεση του ερευνητικού έργου (μεταφραστική και απεικόνισης της έρευνας στον καρκίνο του πνεύμονα), η οποία αποτελεί μέρος της διατριβής του. Οι συγγραφείς δικαιούνται να δημοσιεύουν όλες τις εργασίες του και να μοιράζονται όλα τα δεδομένα τους στο κοινό. Δεν συμβουλών, διπλώματα ευρεσιτεχνίας, ή τα προϊόντα στην ανάπτυξη εμπλέκονται. Όλοι μαζί, αυτό δεν έχει καμία επίπτωση στην τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Όλοι οι συγγραφείς που δεν έχουν δηλωθεί έχει κανένα ανταγωνιστικών συμφερόντων.

Εισαγωγή

Η επίδραση των αναστολέων της τυροσινικής κινάσης του EGFR (ΤΚΙ) σε ασθενείς με μη μικροκυτταρικό καρκίνο των κυττάρων του πνεύμονα (NSCLC) εξαρτάται από την μετάλλαξη του EGFR κατάσταση. Ως εκ τούτου, την επιλογή των κατάλληλων δείγμα όγκου για ανάλυση μεταλλάξεων είναι ένα σημαντικό ζήτημα για τη λήψη αποφάσεων θεραπεία σε NSCLC. Σε προηγούμενες τυχαιοποιημένες μελέτες σύγκρισης θεραπεία EGFR ΤΚΙ σε τακτική χημειοθεραπεία, η αναλογία των ασθενών με επαρκή ιστό του όγκου για ανάλυση κυμαινόταν από 10 έως 38% [1], [2], [3], [4], [5], [6 ]. Οι περισσότερες τυχαιοποιημένες μελέτες χρησιμοποίησαν διαφορετικές δοκιμές μετάλλαξης του EGFR που εξετάζονται μόνο ένα πολύ περιορισμένο αριθμό μεταλλάξεων hotspot, όπως L858R και εξόνιο 19 διαγραφές [2], [7], [8], [9], [10]. Τι συνέβη με λιγότερο συχνές μεταλλάξεις δεν είναι πάντα προφανής. Όπως μεταλλάξεις του EGFR είναι παρόντα μόνο σε μη-πλακώδες NSCLC [11], ακριβής ιστολογική φαινοτυπική είναι υποχρεωτική προκειμένου να λαμβάνουν αποφάσεις σχετικά με το είδος της χημειοθεραπείας και για την πρόβλεψη της a priori παρουσία μεταλλάξεων. Η κατευθυντήρια γραμμή IASLC /ATS /ERS συστήνει μεταλλάξεων δοκιμές σε μη-πλακώδες NSCLC [12].

Σε Καυκάσιοι ασθενείς με μη-πλακώδες καρκίνωμα του πνεύμονα, η μετάλλαξη KRAS είναι πιο συχνή (20-30% των περιπτώσεων) [13], [14], ακολουθούμενη σε συχνότητα από μεταλλάξεις στο γονίδιο EGFR (10-20% των περιπτώσεων) [13], [15]. Εντός ιστολογική φαινότυποι, ορισμένα χαρακτηριστικά φαίνεται να συνδέονται με συγκεκριμένες μεταλλάξεις, για παράδειγμα, την μικροθηλωματώδης πτυχή της αδενοκαρκινώματος με μεταλλάξεις BRAF V600 [16]. Αν και είναι πλεονεκτικό για τους ασθενείς με ενεργοποίηση μεταλλάξεων EGFR για να λάβετε EGFR ΤΚΙ [2], [3], [8], [17], [18], [19], σε ασθενείς με άλλους τύπους γενετικών ανωμαλιών αυτή η θεραπεία δεν είναι αποτελεσματικός. Για παράδειγμα, σε μια μελέτη σε ασθενείς με EML4-ALK μετατοπίσεων έλλειψη ανταπόκρισης του όγκου σε EGFR ΤΚΙ αναφέρθηκε [20]. Ωστόσο, για NSCLC ασθενείς με μεταλλάξεις KRAS τα στοιχεία είναι ασαφή. Αρκετές μελέτες έδειξαν μια πλήρη έλλειψη ανταπόκρισης στη θεραπεία με EGFR ΤΚΙ [17], [21], [22], μια μελέτη έδειξε ότι οι ασθενείς με NSCLC με όγκους που φιλοξενούν KRAS μεταλλάξεις είχε ένα παρόμοιο αποτέλεσμα είτε να ΤΚΙ EGFR ή χημειοθεραπεία [3] . έχουν όγκους με μεταλλάξεις KRAS έχει αποδειχθεί ότι έχουν χειρότερη έκβαση σε σύγκριση με τους ασθενείς με άγριου τύπου KRAS (WT), τόσο όταν αντιμετωπίζεται με χειρουργική επέμβαση [23] ή με χημειοθεραπεία [24].

Ο στόχος είναι να μελετηθεί η κατανομή των κοινές και σπάνιες EGFR και μεταλλάξεις KRAS που αποστέλλονται από 8 περιφερειακά νοσοκομεία στο πανεπιστημιακό τμήμα παθολογίας. Η ποιότητα των βιοψιών όγκου σταλεί για ανάλυση μεταλλάξεων αξιολογήθηκε και η κατάσταση μετάλλαξη σχετίζεται με τη θεραπεία με EGFR ΤΚΙ αποτέλεσμα.

Μέθοδοι

Ασθενείς

Αυτή η μελέτη αφορά το σύνολο των NSCLC δείγματα όγκων από οκτώ περιφερειακά νοσοκομεία της Ολλανδίας κατά την περίοδο Νοεμβρίου του 2008 έως τον Απρίλιο του 2011, η οποία ελέγχθηκαν για κατάστασης μεταλλάξεων από ένα κεντρικό τμήμα παθολογίας. Τα στοιχεία σχετικά με το φύλο, το κάπνισμα, η ηλικία κατά τη διάγνωση, το στάδιο κατά τη διάγνωση, εντοπισμό των μεταστάσεων, ημερομηνία έναρξης και (διαφορετικές) γραμμές θεραπείας έλαβαν συλλέχθηκαν. δείγματα όγκου λήφθηκαν από οποιοδήποτε βρογχοσκόπηση, διαθωρακική βιοψίες πνεύμονα και /ή από πνευμονική εκτομές και εστάλησαν στο αντίστοιχο τμήμα παθολογίας για ιστολογική εξέταση. Ιστολογία ήταν σύμφωνα με το 2004 τα κριτήρια του ΠΟΥ [25]. Η ανταπόκριση στη θεραπεία πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τα κριτήρια RECIST [26].

διαδικασία συλλογής δειγμάτων και DNA

εξόρυξη

Από κάθε φορμόλη-σταθερές και ενσωματωμένα σε παραφίνη (FFPE) μπλοκ καρκινικός ιστός που στάλθηκε στην τμήμα παθολογίας 4 μm τομές κόπηκαν. Μετά αιματοξυλίνη και χρώση ηωσίνης, πλακίδια αξιολογήθηκαν από έναν έμπειρο παθολόγο πνεύμονα για την παρουσία επαρκούς ιστού του όγκου και αξιολόγηση του ποσοστού των κυττάρων όγκου. Δείγματα με σαφώς λιγότερο από 50 καρκινικά κύτταρα% ορίστηκαν ως ανεπαρκείς για τη δοκιμή μετάλλαξης του EGFR /KRAS. Περιοχές με & gt? Καρκινικών κυττάρων 50% χαρακτηρίστηκε από τον παθολόγο στη διαφάνεια. Αυτή η περιοχή ξύστηκε από το κλείστρο χρησιμοποιώντας ένα νυστέρι και διαλύθηκε σε ΤΕ-4 και 20 mg /ml πρωτεϊνάση Κ (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ, USA). DNA εκχυλίστηκε με επώαση όλη τη νύκτα στους 55 ° C, που ακολουθείται από θέρμανση στους 100 ° C για 5 λεπτά για την απενεργοποίηση πρωτεϊνάσης Κ και φυγοκεντρήθηκε σε θερμοκρασία δωματίου σε 13,000 rpm. Το υδατικό διάλυμα χρησιμοποιήθηκε απευθείας για ανάλυση PCR ή αποθηκεύονται στους -20 ° C. συγκέντρωση του DNA μετρήθηκε σε ένα φασματοφωτόμετρο ND1000 (Nanodrop, Wilmington, DE, USA). Όλες οι απομονώσεις DNA ρυθμίστηκαν σε 10 ng /μl σε ΤΕ-4 πριν από τη χρήση. Για τον έλεγχο της ποιότητας, γονιδιωματικό DNA ενισχύθηκε σε μια πολλαπλή PCR που περιέχει ένα σετ εκκινητών γονίδιο ελέγχου με αποτέλεσμα τα προϊόντα 100, 200, 300, 400 και 600 bp, ανάλογα με το πρωτόκολλο BIOMED-2 [27]. Μόνο τα δείγματα DNA με PCR προϊόντα από 300 bp και μεγαλύτερα χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση μετάλλαξης. Όλα τα δείγματα ελέγχθηκαν επί ϋΝΑ που εξάγεται από δύο ανεξάρτητες πλάκες (εις διπλούν). ελήφθησαν όλα τα καθιερωμένα προληπτικά μέτρα για την αποφυγή μόλυνσης των προϊόντων ενίσχυσης χρησιμοποιώντας ξεχωριστά εργαστήρια για την προ και χειρισμό μετα-PCR. Για να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση, ένα νέο λεπίδα του μικροτ χρησιμοποιήθηκε κάθε φορά που ένα νέο δείγμα χωρισμένο.

Είτε άμεση αλληλούχιση ή υψηλής ανάλυσης τήξης (HRM) με επιβεβαιωτική άμεση αλληλούχιση διεξήχθη σύμφωνα με το πρωτόκολλο. Πανομοιότυπες μεταλλάξεις στο εμπρός και αντίστροφης αλληλουχίας απαιτείτο πριν από ένα θετικό αποτέλεσμα αναφερθεί. Το πρωτόκολλο περιγράφεται λεπτομερώς στο Παράρτημα S1. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για άμεση αλληλούχιση ή HRM περιγράφεται στο συμπληρωματικό πίνακα 1.

Η

επιγνώσει συναίνεσης και Δεοντολογίας

Όταν οι ασθενείς επισκέπτονται για πρώτη φορά την υπηρεσία εξωτερικών ασθενών, γραπτή συγκατάθεση του αίματος και του όγκου των ιστών ελήφθη για ανάλυση μεταλλάξεων. EGFR και KRAS δοκιμές διεξήχθησαν ως μέρος της ρουτίνας διαγνωστική προσέγγιση και τα αποτελέσματα αυτών των δοκιμών ήταν τεκμηριώνεται στο αρχείο του ασθενούς και επικοινωνούσε με τους ασθενείς. Επειδή αυτή είναι μια αναδρομική μελέτη για τη συλλογή και την ανάλυση των κλινικών δεδομένων των ασθενών, σύμφωνα με τον ολλανδικό νόμο για την ανθρώπινη ιατρική έρευνα (WMO), δεν επιτρέπεται η εισαγωγή ήταν απαραίτητη από την επιτροπή ιατρικής δεοντολογίας. Τα δεδομένα κωδικοποιήθηκαν και να μην μπορεί να εντοπιστεί στο συγκεκριμένο ασθενή.

Στατιστικά

Η περιγραφική στατιστική πραγματοποιήθηκαν για τα χαρακτηριστικά των ασθενών και των όγκων. Συχνότητες των κοινών και σπάνιων μεταλλάξεων πίνακα. Η συχνότητα των EGFR και KRAS μεταλλάξεις σε σύγκριση με τα διαθέσιμα στοιχεία σχετικά με τον πνευμονικό ιστό από τον Κατάλογο σωματικών μεταλλάξεων Στη βάση δεδομένων του καρκίνου, (Cosmic DB? https://www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/). Η σχέση μεταξύ της παρουσίας ή απουσίας μεταλλάξεων και την εμφάνιση των πιο κοινών μεταστάσεων όγκων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την δύο όψεων ακριβή δοκιμή Fisher. Για τη συγκεκριμένη ανάλυση, οι ασθενείς είτε με EGFR ή μετάλλαξη KRAS συγκρίθηκαν με ασθενείς οι οποίοι βαθμολογήθηκαν ως δύο EGFR και KRAS WT. Η συνολική επιβίωση (OS) ήταν υπολογίζεται από την ημερομηνία της διάγνωσης στάδιο IV της νόσου μέχρι λογοκρισία ή θάνατο. Μόνο οι ασθενείς με κλινικά στοιχεία που είχαν προχωρήσει στο στάδιο IV της νόσου και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε αγωγή συμπεριλήφθηκαν για ανάλυση επιβίωσης. Όλοι οι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με έναν EGFR ΤΚΙ ανεξάρτητα από μεταλλάξεων καθεστώς τους αξιολογήθηκαν για τη συνολική επιβίωση.

μονοπαραγοντική Cox ανάλυση παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκε με την ηλικία συμπαράγοντες, το φύλο, ιστολογία (παρουσία του αδενοκαρκινώματος, πλακώδους κυττάρου και καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου) , KRAS και την κατάσταση του EGFR μετάλλαξης, μεταστατικό ιστοσελίδα (του εγκεφάλου, των οστών, του πνεύμονα) αναλύθηκαν επίσης. Μεταβλητές με

σ

-τιμή μικρότερη από 0,20 χρησιμοποιήθηκαν για την πολυπαραγοντική ανάλυση.

Όλα στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του SPSS έκδοση 18.0. Ονομαστική

P

-τιμές μικρότερες από 0.05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

Αποτελέσματα

EGFR και KRAS μεταλλάξεις

Από το Νοέμβριο του 2008 έως τον Απρίλιο του 2011 474 δείγματα από 442 ασθενείς εστάλησαν στο κεντρικό τμήμα παθολογίας για ανάλυση μετάλλαξης. Η πιο κοινή ιστολογική ταξινόμηση ήταν αδενοκαρκίνωμα (80%), 8% των δειγμάτων προήλθε από ιστολογική υποτύπους που δεν συνδέονται με μεταλλάξεις του EGFR (Πίνακας 1).

Διακόσια είκοσι ένας ασθενείς (60,1% όλων των ασθενών εξετάστηκαν , το 50% όλων των ασθενών) ήταν EGFR και KRAS WT. Τριάντα οκτώ ασθενείς (10,9% όλων των ασθενών που εξετάστηκαν, 8,6% όλων των ασθενών) είχαν μετάλλαξη EGFR (Πίνακας 2). Σε 5 ασθενείς, 2 διαφορετικές μεταλλάξεις του EGFR συνέπεσε με τον ίδιο ιστό του όγκου με αποτέλεσμα ένα σύνολο 43 μεταλλάξεων. Τριάντα από 38 ασθενείς με μεταλλάξεις του EGFR (79%) ήταν ενεργοποιούμενες μεταλλάξεις του EGFR. Μόνο ένας ασθενής είχε μια μετάλλαξη Τ790Μ στον πρωτογενή όγκο. TTF-1 θετικά αδενοκαρκινώματα παρουσίασαν μετάλλαξη του EGFR πιο συχνά από ό, τι εκείνοι που ήταν TTF-1 αρνητική (26/150 vs 1/50, ακριβής δοκιμασία 2 όψεων του Fisher,

σ

= 0,01).

ένα σύνολο 110 ασθενών (30% όλων των ασθενών που εξετάστηκαν, το 24% όλων των ασθενών) είχαν μια μετάλλαξη KRAS με G12C (41%) και G12V (18%) να είναι οι πιο συχνές μεταλλάξεις και δείχνει ένα παρόμοιο διανομής όπως στην κοσμική βάση δεδομένων (Πίνακας 3). Βρήκαμε επίσης 1 (1%) μετάλλαξη σπάνια KRAS στο κωδικόνιο 13, (p.G13Y). Επιπλέον, 2 ασθενείς είχαν μεταλλάξεις KRAS έξω από το hotspot (p.V14L και p.L19F), αυτά είναι μη λειτουργικά. Αυτό σημαίνει ότι σε ένα σύνολο 108 ασθενών μία λειτουργική μετάλλαξη KRAS ανιχνεύθηκε σε ομάδα μας. Η σύγκριση των μεταλλάξεων καταλήγει σε διαφορετικούς υποτύπους του NSCLC στον πληθυσμό μας παρουσιάζεται στον πίνακα 4.

Η

Ποιότητα δείγματα όγκων για ανάλυση μετάλλαξης

Εβδομήντα πέντε δείγματα όγκου ( (16%) δεν ήταν επαρκής για την ανάλυση μετάλλαξης. σε 59 δείγματα ιστού περιείχαν κύτταρα του όγκου λιγότερο από 50% (κυρίως λόγω της εκτεταμένης ανάμειξης φλεγμονής) και σε 16 η ποιότητα του DNA εμφανίστηκε ακατάλληλα για δοκιμή μετάλλαξης. σε 4 από αυτούς τους ασθενείς ένα επαρκές δείγμα ιστού που έχουν παραχθεί από την εκ νέου βιοψίας. Σε 3 όγκους διεξήχθη καμία περαιτέρω ανάλυση μετάλλαξης (SCC /καρκινοειδές). Αυτό σημαίνει ότι από 74 (75 + 3-4) (17%) ασθενείς δεν έχει αποτελέσματα ελήφθησαν από ανάλυση μεταλλάξεων. Σε συνολικά 345 ασθενείς τα δείγματα όγκων ήταν επαρκείς για δύο EGFR και ανάλυση KRAS. μια ενιαία ανάλυση KRAS ή μετάλλαξη EGFR έγινε στα δείγματα των όγκων των 18 και 5 ασθενείς, αντίστοιχα (Σχήμα 1).

* 2 μεταλλάξεις KRAS είναι έξω από το hotspot, αυτά είναι πιθανόν να μη λειτουργική.

η

EGFR και KRAS μεταλλάξεις και μεταστάσεις

διανομή

Χρησιμοποιώντας τα κλινικά δεδομένα από 303 ασθενείς, ήμασταν σε θέση να αναλύσει το προτίμηση για τις γνωστές κοινές μεταστατικό περιοχές για τους ασθενείς με NSCLC με KRAS και EGFR κατάστασης μεταλλάξεων. Πνευμονικά οζίδια

(p

= 0,01), της σπονδυλικής στήλης (

σ

= 0,03) και άλλες οστικές μεταστάσεις (

σ

= 0.04) εντοπίστηκαν να σχετίζεται σημαντικά με μεταλλάξεις του EGFR . Δεν βρέθηκε κάποια σχέση μεταξύ μεταλλάξεις του EGFR και του υπεζωκότα (

σ

= 0,15), εγκεφαλικό (

σ

= 1,0), ηπατική (

σ

= 0,46) ή των επινεφριδίων (

σ

= 0,37) μεταστατικό εντοπίσεις. Καμία από αυτές τις περιοχές συνδέθηκαν με μεταλλάξεις KRAS.

Επιβίωση ανάλυση

Στην μονοπαραγοντική ανάλυση από τα κλινικά δεδομένα, τα μεγάλα ιστολογικό τύπο (HR 1,8, 95% CI., 01.02 – 02.08,

σ

& lt?. 0.01) και το νωτιαίο μετάσταση στα οστά (HR 1,5, 95% CI, 1,0-2,2,

σ

= 0,05) συσχετίστηκαν με χειρότερη επιβίωση, ενώ η μετάλλαξη του EGFR (HR 0,4, 95 .% CI, 0,2-0,7,

σ

& lt? 0.01) σχετιζόταν με καλύτερη επιβίωση. Σε ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο, ιστολογία (μεγάλο καρκίνωμα, HR 2,2, 95% CI, 01.04 – 03.04,

σ

& lt?. 0.01)., Το νωτιαίο μετάσταση στα οστά (HR 1,7, 95% CI, 1.2-2.6 ,

σ

& lt?. 0,01), και κατάστασης μεταλλάξεων (μετάλλαξη του EGFR, HR 0,3, 95% CI, 0,1-0,6

σ

& lt? 0,01) ήταν σημαντικά σχετίζονται με την επιβίωση. (Πίνακας 5).

Η

Κατά την επιλογή των ασθενών που έλαβαν θεραπεία ΤΚΙ EGFR στην πρώτη ή τη δεύτερη γραμμή, η διάμεση συνολική επιβίωση μετά την έναρξη της θεραπείας αυτής δεν επιτεύχθηκε σε ασθενείς με μετάλλαξη του EGFR (n = 14 ), 20 μήνες (95% CI., 0-46, n = 14) για τους ασθενείς με μετάλλαξη KRAS, και 9 μήνες (95% CI., 0-28, n = 31) για ασθενείς με EGFR /KRAS WT. (Εικόνα 2Α και 2Β).

Η

Σπάνια EGFR και KRAS μεταλλάξεις και την ανταπόκριση στη θεραπεία

είναι

Οι μεταλλάξεις που δεν είχαν προηγουμένως περιγραφεί στην COSMIC DB περιγράφονται στον πίνακα 6. Η θεραπεία με EGFR ΤΚΙ σε ασθενείς με αυτές τις σπάνιες μεταλλάξεις του EGFR δεν οδήγησε σε κλινικά οφέλη, εκτός από έναν ασθενή ο οποίος είχε επίσης ένα επιπλέον μετάλλαξη ενεργοποίησης EGFR.

η

Συζήτηση

EGFR είναι μια κυτταρική επιφάνεια πρωτεΐνη που οδηγεί στην ενεργοποίηση του πολλαπλασιασμού και της εισβολής μέσω διαφορετικών οδών μεταγωγής σήματος [28]. KRAS είναι μεταγενέστερος στόχος του EGFR. Ενεργοποίηση ή ερεθιστική μεταλλάξεις προκαλούν μια συστατική ενεργοποίηση της περιοχής κινάσης τυροσίνης της πρωτεΐνης EGFR, με αποσταθεροποίηση της autoinhibiting διάπλαση [29]. EGFR ΤΚΙ όπως gefitinib έχουν αυξηθεί δεσμευτικές ικανότητες για αυτές τις μεταλλαγμένες πρωτεΐνες. Οι λόγοι αυτής της αυξημένης ικανότητας σύνδεσης είναι μέχρι 100 φορές σε σύγκριση με την πρωτεΐνη EGFR άγριου-τύπου [29].

Οι δύο πιο κοινές μεταλλάξεις ευαισθητοποίηση EGFR σε EGFR ΤΚΙ, σε διαγραφές πλαίσιο της εξόνιο 19 και την μετάλλαξη L858R , [19], [30], [31], [32], [33] αντιπροσώπευαν πάνω από το ήμισυ του συνόλου των ασθενών μετάλλαξης του EGFR. Άλλες ερεθιστική εκτροπές βρέθηκαν σε τρεις ασθενείς έχει μια μετάλλαξη G719X και σε έναν άλλο ασθενή μία μετάλλαξη L861R [33], [34], [35]. Παρατηρήσαμε 5 σπάνια ή άνευ προηγούμενης περιγραφής μεταλλάξεις (Πίνακας 2) και έχουν χαρακτηρίσει την απόκρισή τους στη θεραπεία ΤΚΙ (Πίνακας 6). Από ειδική σημείωση είναι η μετάλλαξη p.D770GY, το οποίο βρέθηκε σε δύο ασθενείς, με διαφορετική απάντηση. Η πρώτη από αυτούς τους ασθενείς είχαν ένα συνδυασμό p.D770GY και μια μετάλλαξη p.G719C ενώ το δεύτερο είχε μόνο μία μετάλλαξη p.D770GY. Ο πρώτος ασθενής ανταποκρίθηκε στο EGFR ΤΚΙ και παραμένει ελεύθερος μετά από 15 μήνες της νόσου, ενώ ο ασθενής χωρίς δευτερογενή μετάλλαξη είχαν προοδευτική ασθένεια διαγνωστεί σε 4 εβδομάδες. Προηγουμένως 2 περιπτώσεις αυτής της μετάλλαξης έχουν περιγραφεί χωρίς πληροφορίες σχετικά με την απάντηση του όγκου [36], [37]. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η μετάλλαξη p.G770GY δεν παρέχουν όφελος για τη θεραπεία EGFR ΤΚΙ. Επιπλέον, δείξαμε ότι και οι ασθενείς με μία από τις άλλες 4 σπάνιες μεταλλάξεις του EGFR (p.K708N, p.G709_T710 & gt? Μ, p.L833F και p.A840T) δεν είχε κανένα όφελος από EGFR-ΤΚΙ

Small. δείγματα όγκων κυρίως από βρογχοσκόπηση ή διαθωρακική βιοψίες μπορεί να είναι ένα πρόβλημα για την επαρκή δοκιμή μετάλλαξης. Εντοπίσαμε αιτίες γιατί ανάλυση μεταλλάξεων στο εργαστήριο μας δεν ήταν δυνατή σε 17% των ασθενών. Αυτό ήταν είτε λόγω ανεπαρκούς αριθμού των καρκινικών κυττάρων (12%) ή λόγω ανεπαρκούς ποιότητας DNA (4%) τονίζοντας την ανάγκη για επαρκή επιλογή του ιστού του όγκου για ανάλυση μεταλλάξεων. Αναδρομικές μελέτες στις οποίες μακροχρόνια αρχειοθετηθεί ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστός χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό κατάσταση EGFR έδειξε μια χαμηλή αναλογία ιστού επαρκούς όγκου διαθέσιμα [1], [2], [3], [4], [5], [6]. Ένας τρόπος για να αποκτήσουν περισσότερα κύτταρα του όγκου είναι από επαναλαμβανόμενες βιοψίες ή cryobiopsies [38]. Οι νέες τεχνολογικές εξελίξεις είναι πολύ πιο ευαίσθητα από προηγουμένως, επιτρέποντας λιγότερα καρκινικά κύτταρα τόσο ποιοτικά (%) και ποσοτικά (απόλυτος αριθμός) που απαιτείται για την ανίχνευση μεταλλάξεων. Ωστόσο, όσον αφορά την ετερογένεια των όγκων, αυτή η αυξημένη ευαισθησία εγκυμονεί αυξημένο κίνδυνο σφαλμάτων δειγματοληψίας και ανίχνευσης των ανήλικων κλώνων που μπορεί να είναι λιγότερο σχετική για θεραπεία. Μια μελέτη έδειξε ότι περίπου τα δύο τρίτα του συνόλου των σωματικών μεταλλάξεων δεν φαινόταν να είναι ανιχνεύσιμη σε όλη την κάθε περιοχή του όγκου [39].

μεταλλάξεις του EGFR παρουσιάστηκε πιο συχνά σε TTF-1 θετική αδενοκαρκίνωμα. Δύο πρόσφατες μελέτες έδειξαν αυτή τη συσχέτιση των κυττάρων καταγωγή [40], [41]. Λειτουργικά, TTF-1 που προκαλείται ROR-1 είναι απαραίτητη για τη διατήρηση της EGFR μονοπάτι σε κυτταρικές σειρές αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα [42] σηματοδότησης.

Εντοπίσαμε την προτίμηση των μεταλλαγμένων όγκων EGFR να εξαπλωθεί σε ενδοπνευμονική και τόσο η σπονδύλου και άλλες εντοπίσεις των οστών. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με μια μελέτη από Doebele κ.ά., ο οποίος παρατήρησε μόνο μια προτίμηση για ηπατική μεταστατική εξάπλωση σε EGFR μεταλλαγμένο όγκους [43] .Σε αντίθεση, παρατηρήσαμε το τυπικό μοτίβο κεχροειδής όγκων με EGFR εξόνιο 19 διαγραφή όπως περιγράφηκε προηγουμένως [44]. Τα αποτελέσματά μας για όγκους μεταλλαγμένου KRAS (71 ασθενείς) ήταν όπως περιγράφηκε προηγουμένως από Doebele et al (49 ασθενείς) [43].

Σε πληθυσμού μας, η έκβαση των ασθενών με μετάλλαξη KRAS ανταποκρίθηκαν παρόμοια με KRAS WT τόσο με σχέση με τη χημειοθεραπεία και να EGFR ΤΚΙ. Προηγουμένως αποδείχθηκε ότι οι ασθενείς με KRAS άγριου τύπου έχουν μια καλύτερη έκβαση από ό, τι οι ασθενείς με μεταλλάξεις KRAS, όταν αντιμετωπίζονται με EGFR ΤΚΙ [22]. Άλλες μελέτες έδειξαν την παρουσία μεταλλάξεων KRAS στον καρκίνο του πνεύμονα να είναι ενδεικτική της χειρότερη έκβαση ανεξάρτητα από τη θεραπεία που έλαβαν [45], [46]. Στη μελέτη TITAN, υπήρχε κάποια ένδειξη για αυξημένο κίνδυνο θανάτου σε ασθενείς με μεταλλαγμένο KRAS στους όγκους που έλαβαν θεραπεία με erlotinib σε σύγκριση με τη χημειοθεραπεία, αλλά δεν υπήρχε αυξημένο κίνδυνο εξέλιξης του όγκου [4]. Στη μελέτη μας, εμείς δεν συγκεντρώνουν τις μετάλλαξης του EGFR θετική ασθενείς με EGFR /KRAS WT κατά τη σύγκριση αυτών των ασθενών με μεταλλαγμένο KRAS ασθενείς. Καθώς οι ασθενείς με μεταλλάξεις του EGFR τείνουν να έχουν καλύτερα αποτελέσματα στη συνέχεια, οι ασθενείς EGFR WT, αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει τα αποτελέσματα μας.

Εν κατακλείδι, βρήκαμε το 10,9% και το 30% του συνόλου των εξετασθέντων ασθενών έναν EGFR ή μετάλλαξη KRAS, αντίστοιχα . Εντοπίσαμε επίσης 5 νέα ή σπάνια EGFR μεταλλάξεις και 2 νέες μεταλλάξεις KRAS στον πληθυσμό μας. Δεκαεπτά τοις εκατό των ασθενών είχαν ανεπαρκή ιστό του όγκου για να εκτελέσει την ανάλυση μετάλλαξης, κυρίως λόγω της ανεπαρκούς όγκου του όγκου ή /και το ποσοστό. Δεν υπήρξε καμία διαφορά στην συνολική επιβίωση μετά την έναρξη του EGFR ΤΚΙ σε ασθενείς με KRAS μετάλλαξη και EGFR /KRAS WT.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Παράρτημα S1.

doi: 10.1371 /journal.pone.0070346.s001

(DOC)

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες στον Klaas Kooistra, Erik Nijhuis, Anke van de Berg για τη συμβολή τους την ανάλυση μετάλλαξης του EGFR και να Roel Soesbeek για να βοηθήσει με τη συλλογή των δεδομένων.