Αφηρημένο

Έχουμε πραγματοποίησε την πρώτη μελέτη για να καθοριστεί το διαγνωστικό δυναμικό των CD14 ++ CD16 + ενδιάμεσο μονοκύτταρα σε σύγκριση στο προ-αγγειογενετική υποσύνολο των CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + ΤΙΕ2 εκφράζουν μονοκύτταρα (ματα) στον καρκίνο. Αυτοί οι πληθυσμοί μονοκυττάρων διερευνήθηκαν με κυτταρομετρία ροής σε υγιείς εθελοντές (Ν = 32) και σε ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνωμα με εντοπισμένο (Ν = 24) ή μεταστατικό (Ν = 37) της νόσου. Έχουμε ακόμη καθοριστεί επίπεδα στο αίμα των κυτοκινών που σχετίζονται με τη ρύθμιση των μονοκυττάρων. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν το ενδιάμεσο μονοκυττάρων υποσύνολο να είναι σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου και να παρουσιάζουν την υψηλότερη συχνότητα σε εντοπισμένη ασθένεια. πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης προσδιορίζονται ενδιάμεσο μονοκύτταρα ως μια σημαντική ανεξάρτητη μεταβλητή στην πρόβλεψη του καρκίνου. Με μια τιμή αποκοπής σε 0,37% (ενδιάμεσο μονοκύτταρα των συνολικών λευκοκυττάρων) η διαγνωστική ευαισθησία και ειδικότητα κυμάνθηκε στο 69% και 81%, αντίστοιχα. Σε αντίθεση, τα επίπεδα ΤΕΜ ήταν αυξημένα σε εντοπισμένες καρκίνο, αλλά δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των ομάδων και καμία από τις κυτοκίνες συσχετίζονται με υποπληθυσμών μονοκυττάρων. Ενδιαφέροντος,

in vitro

αναλύσεις υποστήριξαν την παρατήρηση ότι η ενδιάμεση μονοκύτταρα πιο ισχυρά προκαλείται από την πρωτοβάθμια, σε αντίθεση με μεταστατικό καρκίνο κύτταρα τα οποία μπορεί να σχετίζονται με την ανοσοκατασταλτική περιβάλλον εγκατεστημένος στο προχωρημένο στάδιο της μεταστατικής νόσου. Εν κατακλείδι, το ενδιάμεσο μονοκύτταρα σε σύγκριση με ΤΙΕ2 εκφράζουν μονοκύτταρα είναι ένας πιο ευαίσθητος διαγνωστικός δείκτης καρκίνου του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Schauer D, Starlinger P, Reiter C, Jahn Ν, Zajc P, Buchberger E, et al . (2012) Ενδιάμεσο μονοκύτταρα, αλλά όχι ΤΙΕ2-Εκφράζοντας μονοκύτταρα είναι ένας ευαίσθητος διαγνωστικός δείκτης για τον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 7 (9): e44450. doi: 10.1371 /journal.pone.0044450

Επιμέλεια: Ισαάκ Yang, UCLA, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25 Φεβρουαρίου, 2012? Δεκτές: 7 Αυγ, 2012? Δημοσιεύθηκε: 4 Σεπτεμβρίου, 2012

Copyright: © Schauer et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από την Ιατρική επιστημονική Ταμείο του Δημάρχου της πόλης της Βιέννης (https://www.wien.gv.at/gesundheit/einrichtungen/med-wiss-fonds/) από καμία επιχορήγηση. 8064 εκδίδεται σε Τ Gruenberger. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Καμία πρόσθετη εξωτερική χρηματοδότηση ελήφθη για τη μελέτη αυτή

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Τα μονοκύτταρα θεωρούνται βασικοί παράγοντες στην έμφυτη ανοσία ? αυτοί αντιπροσωπεύουν περίπου το 8-10% των ανθρώπινων λευκοκυττάρων και χαρακτηρίζονται από την έκφραση του CD14 συν-υποδοχέα για τον υποδοχέα ΤοΙΙ 4 (TLR4) [1]. Ένα μικρό υποσύνολο των ανθρώπινων μονοκυττάρων περιφερικού αίματος που συνεκφράζει CD16 (Ρογ υποδοχέα III) έχει ταυτοποιηθεί το 1988 [2] και βρέθηκε να αντιπροσωπεύουν περίπου το 10% των συνολικών μονοκυττάρων αίματος [3]. Ετερογένεια μέσα σε αυτό το CD16 + πληθυσμό στη συνέχεια αναγνώρισε [4]. Η ύπαρξη 3 υποπληθυσμών των μονοκυττάρων με βάση την διαφορική έκφραση του CD14 και CD16 έχει πρόσφατα εφαρμοστεί στο νέο ονοματολογία των μονοκυττάρων που διακρίνει μεταξύ του CD14 ++ CD16- «κλασική», το CD14 ++ CD16 + «ενδιάμεσων» και το CD14 + CD16 ++ «μη-κλασική» μονοκυττάρων υποσύνολο [5]

Πρόσφατες μελέτες σχετικά με τη γονιδιακή έκφραση προφίλ υποδηλώνουν μια αναπτυξιακή σχέση μεταξύ των τριών υποομάδων με σταδιακές αλλαγές σε δείκτες επιφάνεια κατά τη διάρκεια της ωρίμανσης [6] – [7].. Σε σύγκριση,

in vitro

καλλιέργεια και ωρίμανση των μονοκυττάρων του αίματος οδηγεί σε μια σταδιακή αύξηση στην έκφραση CD16 [8] – [9], η οποία ενεργοποιείται από κυτοκίνες όπως MCP-1 (μονοκυττάρου πρωτεΐνη χημειοελκτική 1), ΤΟΡ -β (αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού βήτα), ή Μ-CSF (παράγοντας διέγερσης αποικιών μακροφάγων) [10] – [12]. Επιπλέον, οι τρεις υποπληθυσμούς εμφανίζουν διακριτές λειτουργικές διαφορές, με την κλασική μονοκύτταρα που δείχνει το υψηλότερο δυναμικό φαγοκυττάρωση [6]. Αντίθετα, οι μη-κλασική μονοκύτταρα έχουν χαμηλή ικανότητα για φαγοκυττάρωση, δείχνουν μια συμπεριφορά περιπολίες κατά μήκος των τοιχωμάτων των αιμοφόρων και αντιδρούν έντονα κατά τα νουκλεϊκά οξέα και οι ιοί [13]. Το προφίλ γονιδιακής έκφρασης του ενδιαμέσου μονοκυττάρων τους έχει συνδεθεί με αντιγόνο επεξεργασία και παρουσίαση, με φλεγμονώδεις αποκρίσεις σε παθογόνα βακτήρια και λιποπολυσακχαρίτη (LPS) [6], [14]. Ενδιαφέρον, προ-αγγειογενετική δείκτες όπως ενδογλίνη, υποδοχέας του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα 2 (VEGFR-2) και τον υποδοχέα ΤΙΕ2 αγγειοποιητίνη επιλεκτικά υπερεκφράζονται στο ενδιάμεσο μονοκυττάρων υποσύνολο [6], [15].

ματα (ΤΙΕ2-εκφράζουν μονοκύτταρα) είχε λάβει αρχικά περιγραφεί σε ποντίκια για να περιλαμβάνει ένα προ-αγγειογόνο πληθυσμός μονοκυττάρων που μπορεί να ενισχύσει την ανάπτυξη του όγκου με παρακρινείς έκκριση αγγειογόνων παραγόντων όπως VEGF και βασικός ινοβλαστικός αυξητικός παράγοντας [16]. Τα κυκλοφορούντα ματα ανιχνεύονται στο περιφερικό αίμα υγιών ανθρώπων και ασθενείς με καρκίνο, και βρίσκονται κυρίως στο ενδιάμεσο μονοκυττάρων υποσύνολο [15], [17]. Ανταποκρίνονται σε αγγειοποιητίνη-2 (Ang-2), μία πρωτεΐνη εκφράζεται έντονα σε όγκους, μέσω του υποδοχέα ΤΙΕ2 επιφάνεια και συν-υποδοχέα του ΤΙΕ1 που μπορούν να προωθήσουν σηματοδότησης χύνοντας ένα διαλυτό θραύσμα ΤΙΕ1 [18] – [19]. Έτσι, κατά προτίμηση ματα συσσωρεύονται σε καρκινικές θέσεις συμπεριλαμβανομένου ορθοκολικού καρκινώματος, αλλά φαίνεται να απουσιάζει από το φυσιολογικό ιστό [17].

έχουν υποσύνολα μονοκυττάρων ελεγχθεί στο ανθρώπινο αίμα, στο πλαίσιο των ασθενειών. Ωστόσο, η πλειοψηφία των μελετών δεν κάνουν διακρίσεις μεταξύ των μη-κλασική και ενδιάμεσων μονοκύτταρα, αλλά επικεντρώθηκε στη διάκριση μεταξύ των CD16 θετικών και αρνητικών υποπληθυσμών. Αυξημένα επίπεδα κυκλοφορούντος CD16 + μονοκύτταρα έχουν αναφερθεί για παθολογικές καταστάσεις όπως η σήψη [20], η χρόνια ηπατίτιδα Β [21], στεφανιαία νόσο [22], και του καρκίνου [23]. Ως εκ τούτου, CD16 + μονοκύτταρα έχουν δείξει διαγνωστικές και προγνωστικές δυναμικό σε φλεγμονώδεις και κακοήθη ασθένεια. Πιο πρόσφατες έρευνες δείχνουν ότι η περαιτέρω διάκριση μεταξύ μη-κλασική και ενδιάμεσων μονοκύτταρα μπορεί να προσφέρει βελτιωμένες πληροφορίες. Ειδικότερα, το ενδιάμεσο μονοκύτταρα σε αντίθεση με μη κλασικά μονοκύτταρα φαίνεται να είναι αυξημένα επιλεκτικά σε σοβαρές ασθματικούς ασθενείς [24] και για την πρόβλεψη δυσμενούς έκβασης σε ασθενείς με υψηλό καρδιαγγειακό κίνδυνο [25]. Τα συγκρίσιμα αναλύσεις σε ασθενείς με καρκίνο που λείπουν μέχρι σήμερα.

Με δεδομένη την νέα εικόνα για τις ξεχωριστές ιδιότητες του ενδιάμεσου μονοκύτταρα και του φαινοτύπου προ-αγγειογενετική (pro-όγκου) των συστημάτων διαχείρισης και ελέγχου υποθέσαμε ότι αυτοί οι πληθυσμοί μονοκυττάρων μπορεί να έχει διαγνωστικό δυναμικό σε ορθοκολικό καρκίνο (CRC). Αναμέναμε ματα και ενδιάμεσα μονοκύτταρα να είναι σημαντικά αυξημένα στο περιφερικό αίμα ασθενών με CRC και να αυξηθεί περαιτέρω σε προχωρημένο στάδιο της νόσου. Για να αντιμετωπιστεί αυτό το θέμα πραγματοποιήσαμε μια διερευνητική μελέτη σε 93 συμμετέχοντες, συμπεριλαμβανομένων υγιείς εθελοντές, ασθενείς CRC σταδίου Ι-ΙΙΙ (εντοπισμένο καρκίνο του παχέος εντέρου) και CRC σταδίου IV ασθενείς (μεταστάσεις καρκίνου του παχέος εντέρου, mCRC). Εμείς χαρακτηριζόμενη των υποπληθυσμών των ενδιάμεσων μονοκυττάρων και μάτων σε περιφερικό αίμα σε σχέση με τις κλινικές παραμέτρους όσο και σε κυτταροκίνες μονοκύτταρα συνδέονται συμπεριλαμβανομένων MCP-1, Ang-2, διαλυτό ΤΙΕ1 (sTIE1), και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα Α (VEGF-A ). Το ενδιάμεσο μονοκυττάρων υποσύνολο, σε αντίθεση με ματα βρέθηκε να επάγεται κατά προτίμηση σε αρχικά στάδια της νόσου και να αποτελέσει ένα νέο, ευαίσθητος δείκτης για καρκίνο του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Αυτή η μη επεμβατική, κλινική έρευνα διεξήχθη σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Η ανάλυση των δειγμάτων αίματος εγκρίθηκε από τη θεσμική «επιτροπή δεοντολογίας του Ιατρικού Πανεπιστημίου της Βιέννης» (# 331/2010 και # 791/2010)? Όλοι οι ασθενείς και υγιείς εθελοντές έδωσαν γραπτή συγκατάθεση

Patient Collective

Δείγματα αίματος συλλέχθηκαν από τρεις ομάδες θέμα:. υγιείς εθελοντές (Ν = 32), οι ασθενείς με εντοπισμένο καρκίνο του παχέως εντέρου (Ν = 24 ) και ασθενείς με μεταστάσεις καρκίνου του παχέος εντέρου (Ν = 37). Η πλειονότητα των ασθενών είχαν mCRC πρωτογενούς όγκου τους εκτομή και παρουσιάζονται με ηπατικές μεταστάσεις δευτερογενώς προς καρκίνο του παχέος εντέρου. Αίμα τραβήχτηκε πριν από τη θεραπεία των ασθενών, δηλαδή γενικά μια ημέρα πριν τη χειρουργική επέμβαση ή αμέσως πριν από την εισαγωγική χημειοθεραπεία. Το στάδιο της νόσου, σύμφωνα με την Ένωση για τη Διεθνή Έλεγχο του Καρκίνου (UICC) προσδιορίστηκε για όλους τους ασθενείς CRC παρακάτω υπολογιστική τομογραφία και εκτομή του όγκου. Υγιείς εθελοντές ήταν προφανώς χωρίς χρόνιων και φλεγμονωδών ασθενειών.

Ανάλυση μονοκυττάρων Πληθυσμών

αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA) κατεργάστηκε ολικού αίματος υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε θερμοκρασία δωματίου. Επιφανειακή έκφραση των CD14, CD16 και ΤΙΕ2 αξιολογήθηκε εφαρμόζοντας άμεση χρώση ανοσοφθορισμός ακολουθείται από μια διαδικασία λύουν-no-πλύση. Εν συντομία, 100 μΐ πλήρους αίματος επωάστηκαν με τα ακόλουθα αντισώματα σε συγκεντρώσεις κορεσμού για 20 λεπτά: CD14-FITC (Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA), CD16-PC5 (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA) και ΤΙΕ2-ΡΕ (R &? D Systems, Inc., Minneapolis, ΜΝ, USA). Για την εξάλειψη των ερυθροκυττάρων, λύση Versa Lyse (Beckman Coulter) προστέθηκε για 20 λεπτά. Η κυτταρομετρία ροής αμέσως πραγματοποιούμενης με ένα FC500 κυτταρόμετρο και λογισμικό CXP (Beckman Coulter). παράμετροι φθορισμού περίφραξη καθορίστηκαν χρησιμοποιώντας αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου, και τις αξίες πάνω από το όριο αρνητική χρώση 99% θεωρήθηκαν θετικά. Ένα σύνολο 300.000 λευκοκύτταρα αναλύθηκαν. Ενδιάμεσο μονοκύτταρα (CD14 ++ CD16 +) αναγνωρίστηκαν με έκφραση υψηλού επιπέδου του CD14 και διακρίθηκαν περαιτέρω από την κλασική μονοκύτταρα (CD14 ++ CD16-) με συν-έκφραση του CD16. Ματα εντοπίστηκαν στο πλαίσιο της ενδιάμεσης υποσύνολο από την ταυτόχρονη έκφραση ΤΙΕ2 (CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + κύτταρα). Οι στρατηγικές περίφραξη τεκμηριώνονται στο σχήμα S1. Τα δεδομένα δίδονται σε% συχνότητα των λευκοκυττάρων του αίματος και η μέση ένταση φθορισμού (MFI). Μετατροπή σε απόλυτες μετρήσεις κυττάρων ανά ml αίματος με βάση τις συγκεντρώσεις των λευκοκυττάρων εγκατεστημένος με ένα αυτοματοποιημένο μετρητή κυττάρων αίματος (Sysmex Corp., Kobe, Japan).

Ανάλυση του Διαλυτού αιματολογικών παραμέτρων

Για την παρασκευή πλάσματος , ελήφθη αίμα σε προ-ψύξη σωλήνες που περιέχουν κιτρικό άλας, θεοφυλλίνη, αδενοσίνη και διπυριδαμόλη, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία επί πάγου εντός 30 λεπτών όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26]. Δείγματα ορού διατηρήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες για να επιτρέψει την αποτελεσματική πήξη του αίματος, ακολουθούμενη από φυγοκέντρηση. Τα δείγματα πλάσματος και ορού φυλάχθηκαν σε δείγματα στους -80 ° C για μετέπειτα ανάλυση. Για τη μέτρηση της Ang-2, sTIE1, MCP-1 (R &? D Sytems, Inc., Minneapolis, ΜΝ, USA) και VEGF-A (Invitrogen Corp., Camarillo, CA, USA) εμπορικώς διαθέσιμα κιτ ELISA εφαρμόστηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν με έναν αναγνώστη μικροπλάκας Varioskan (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, ΜΑ, USA).

Tumor Cell Culture

όγκου κυτταρικές γραμμές SW480, SW620 και ΗΤ-29 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (LGC Προτύπων, Bury, Ηνωμένο Βασίλειο). Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πυκνότητα 4×10

5 ανά cm

2 σε μέσο ανάπτυξης με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FCS). Μετά από 24 ώρες, το μέσο αλλάχθηκε σε ενδοθηλιακά βασικό μέσο 2 (Lonza, Walkersville, MD) με 0.1% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA), και τα υπερκείμενα των κυττάρων του όγκου συλλέχθηκαν μετά άλλες 24 ώρες σε καλλιέργεια. Τα υπερκείμενα φυγοκεντρήθηκαν για να απομακρυνθούν τα κυτταρικά υπολείμματα και αποθηκεύεται σε κλάσματα στους -20 ° C.

In vitro

Διέγερση PBMCs

Αίμα από υγιείς εθελοντές συντάχθηκε σε σωλήνες EDTA και μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) απομονώθηκαν με Ficoll Paque (GE Healthcare, Uppsala, Σουηδία). PBMCs πλύθηκαν εκτεταμένα για να επιτρέψει για ένα ελάχιστο αιμοπεταλίων μόλυνσης. 2×10

6 PBMCs σπάρθηκαν σε κάθε φρεάτιο μιας 12-φρεατίων (Corning Inc., Corning, ΝΥ, USA) και τα κύτταρα εκτέθηκαν σε υπερκείμενο καλλιέργειας του όγκου. Δεδομένου ότι οι παράγοντες ορού προερχόμενου πυροδοτούν την επαγωγή έκφρασης CD16 στα μονοκύτταρα σε καλλιέργεια, η προσθήκη FCS κρατήθηκε σε ένα ελάχιστο 1% υποστηρίζουν την επιβίωση των μονοκυττάρων. Μετά από 24 ώρες επώασης, το κλάσμα μη-προσκόλλησης κυττάρων απομακρύνθηκε και το προσκολλημένο κύτταρα συλλέχθηκαν με απόξεση. Τα κύτταρα χρωματίστηκαν για CD14 και CD16 και σταθερά σε φορμαλδεΰδη για ανάλυση με κυτταρομετρία ροής.

Στατιστική Ανάλυση

Στατιστικοί υπολογισμοί βασίστηκαν σε μη παραμετρικά τεστ χρησιμοποιώντας SPSS έκδοση λογισμικού 17 (SPSS Inc., Chicago , IL, USA). Οι διαφορές μεταξύ των τριών ομάδων μελέτη αξιολογήθηκαν με εφαρμογή του τεστ Wilcoxon-Mann-Whitney-U. Οι συσχετίσεις μεταξύ των παραμέτρων που εξετάστηκαν προσδιορίστηκαν από Spearmańs συντελεστή βαθμό συσχέτισης. πρόβλεψη του καρκίνου από ανεξάρτητες μεταβλητές εκτιμήθηκε σε μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση με δυαδική λογιστική παλινδρόμηση. Ένα χαρακτηριστικό λειτουργίας λήπτη (ROC) καμπύλη χρησίμευσε για να καθορίσει την τιμή αποκοπής για CRC διάγνωση. Οι αναφερόμενες τιμές ρ είναι τα αποτελέσματα των δύο όψεων δοκιμές. Ρ-τιμές ≤ 0,5 θεωρούνται στατιστικά σημαντικές. Οι Boxplots απεικονίζονται χωρίς ακραίες τιμές για την βελτίωση της ανάλυσης.

Αποτελέσματα

Ενδιάμεση μονοκύτταρα είναι σημαντικά αυξημένη σε ασθενείς CRC

Εφαρμόσαμε κυτταρομετρίας ροής για τη διερεύνηση της συχνότητας των υποπληθυσμών των μονοκυττάρων σε υγιείς άτομα και ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο. Οι τρεις συλλογικότητες των υγιών ατόμων (Ν = 32), οι ασθενείς με εντοπισμένη νόσο των σταδίων Ι έως ΙΙΙ (Ν = 24) και σε ασθενείς με μεταστατική νόσο σε στάδιο IV (Ν = 37) έδειξε συγκρίσιμη κατανομή φύλου, αλλά οι διαφορές στο εύρος ηλικίας τους ( Πίνακας 1).

η

το κυρίαρχο πληθυσμό της κλασικής (CD14 ++ CD16-) μονοκύτταρα και η συνολική (CD14 καταμέτρηση θετικό) μονοκυττάρων δεν διέφερε μεταξύ των ομάδων (Εικ. 1). Σε αντίθεση, το ενδιάμεσο (CD14 ++ CD16 +) μονοκύτταρα ήταν 2,6-φορές αυξημένη σε ασθενείς με εντοπισμένη CRC σε σύγκριση με υγιείς εθελοντές (ρ & lt? 0.001) που κυμαίνεται σε διάμεσο επίπεδο του 0,66% έναντι 0,25% των συνολικών λευκοκυττάρων του αίματος, αντίστοιχα. Στην προχωρημένη νόσο, το ενδιάμεσο μονοκύτταρα μειώθηκε πάλι με αποτέλεσμα μια διάμεση συχνότητα των 0,40% στο μεταστατικό CRC ασθενείς, αλλά τα επίπεδα παρέμειναν σημαντικά υψηλότερα από ό, τι στους υγιείς μάρτυρες (ρ = 0,003). Κατά την αξιολόγηση ενδιάμεσο μονοκύτταρα σε κυτταρικές απαριθμήσεις ανά ml περιφερικού αίματος ή σε ποσοστό επί του συνόλου των μονοκυττάρων, ελήφθησαν συγκρίσιμα αποτελέσματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

υποπληθυσμών μονοκυττάρων προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρία ροής και δίνονται σε% των συνολικών μετρήσεων λευκοκυττάρων σε υγιή άτομα, ασθενείς με εντοπισμένη CRC και σε ασθενείς με mCRC. Η συχνότητα του συνόλου (CD14 θετικό) μονοκύτταρα (Α) συγκρίθηκε με την κλασική μονοκύτταρα CD14 ++ CD16- (Β), το ενδιάμεσο CD14 ++ CD16 + μονοκύτταρα (C), και CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + ματα (D).

Ομοίως, η (CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 +) ΤΕΜ υποσύνολο των μονοκυττάρων έδειξε μια μη σημαντική τάση να αυξάνεται στην τοπική ασθένεια (p = 0.055) με μέση συχνότητα του 0,05%, 0,07%, και 0,05% στο σύνολο των λευκοκυττάρων του αίματος για την υγιεινή, την τοπική CRC και mCRC συλλογικότητες, αντίστοιχα. Αξιολόγηση των στημάτων βασίζεται στην συν-έκφραση των CD14 + ΤΙΕ2 +, σε αντίθεση με τριπλή πύλης για CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + δεν μετέβαλε τα αποτελέσματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

επίπεδα στο αίμα του Ενδιάμεσου μονοκύτταρα είναι ένας δείκτης Διαγνωστικό της CRC

Αξιολογήσαμε περαιτέρω την απόδοση του ενδιάμεσου μονοκυττάρων στο CRC διάγνωση ανεξάρτητα από το στάδιο της νόσου. ROC ανάλυση εφαρμόστηκε για τον προσδιορισμό της διάγνωσης εξουσίας από την περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC = 0.785, p & lt? 0.001) και να θεσπίσει ένα κατώτατο όριο για την ανίχνευση του καρκίνου (Εικ. 2). Με μια τιμή αποκοπής σε 0,37% ενδιάμεσα μονοκύτταρα των συνολικών λευκοκυττάρων η διαγνωστική ευαισθησία και ειδικότητα κυμάνθηκε στο 69% και 81%, αντίστοιχα.

Το υπόλοιπο διαγνωστική ευαισθησία και ειδικότητα των ενδιάμεσων επιπέδων μονοκυττάρων αξιολογήθηκε με ROC γράφημα και η περιοχή κάτω από την καμπύλη.

η

μονοκύτταρα του CRC ασθενείς παρουσιάζουν μεταβολή των επιπέδων έκφρασης των CD14 και CD16

η μέση ένταση φθορισμού (MFI) των μετρήσεων κυτταρομετρίας ροής αντανακλά το μέσο έκφρασης επίπεδο των μορίων διερευνώνται επιφανείας επί κυττάρων και συνδέεται με την λειτουργία των μονοκυττάρων. Ενώ η έκφραση CD14 συσχετίζεται με μονοκυττάρων την ανταπόκριση και την έκκριση κυτταροκινών [27], τα επίπεδα CD16 τους που συνδέονται με την ικανότητά τους για την κυτταρική κυτταροτοξικότητα εξαρτώμενη από αντίσωμα [28].

Βρήκαμε ότι η συνολική μονοκύτταρα παρουσίασαν σημαντική απώλεια της CD14 στην το προχωρημένο στάδιο του μεταστατικού CRC (Εικ. 3). Η μείωση CD14 παρατηρήθηκε επίσης όταν αξιολογούνται χωριστά για την κλασική και την ενδιάμεση μονοκύτταρα. Εντός του υποπληθυσμού στημάτων υψηλότερα επίπεδα έκφρασης CD14 καταγράφηκαν στην τοπική ασθένεια. Ενδιάμεσο μονοκύτταρα και ματα επιπλέον αποκάλυψε σημαντικά αυξημένα επίπεδα έκφρασης του CD16 σε ασθενείς με καρκίνο σε σύγκριση με υγιείς εθελοντές (Εικ. 4), ενώ τα επίπεδα έκφρασης ΤΙΕ2 των συστημάτων διαχείρισης και ελέγχου δεν μεταβλήθηκαν στη νόσο.

επίπεδα έκφρασης CD14 σε υγιή άτομα, σε ασθενείς με εντοπισμένη CRC ή mCRC αξιολογήθηκαν με μέση ένταση φθορισμού (MFI) της χρώσης CD14-FITC επί του συνόλου των (CD14 θετικό) μονοκύτταρα (Α) ή επί των υποσυνόλων των κλασικών μονοκυττάρων CD14 ++ CD16- (Β), το ενδιάμεσο CD14 + + CD16 + μονοκύτταρα (C), και CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + ματα (D).

Η

Το επίπεδο έκφρασης των CD16 και ΤΙΕ2 σε υποσύνολα μονοκυττάρων καθορίστηκε για υγιή άτομα και σε ασθενείς με εντοπισμένο ή μεταστατικό ορθοκολικό Καρκίνος. Η μέση ένταση φθορισμού (MFI) της χρώσης CD16-PC5 αξιολογήθηκε για το ενδιάμεσο CD14 ++ CD16 + μονοκύτταρα (Α), και CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + ματα (Β). Τα επίπεδα έκφρασης ΤΙΕ2 αντανακλάται από τα ΝΧΙ των αντισωμάτων ΤΙΕ2-ΡΕ συνδέεται με ματα (C).

Η

Ενδιάμεση μονοκύτταρα είναι ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης του καρκίνου του παχέος εντέρου

Για να αξιολογηθεί κατά πόσον οι αλλαγές σχετίζονται με τον καρκίνο σε υποπληθυσμούς μονοκυττάρων μπορεί να σχετίζεται με παράγοντες που είναι γνωστό ότι ρυθμίζει την πρόσληψη και την ενεργοποίηση των μονοκυττάρων και ενδιάμεσων ματα, ερευνήσαμε τα επίπεδα στο αίμα της MCP-1, Ang-2, sTIE1 και VEGF-A σε υγιείς εθελοντές και ασθενείς CRC. Η ανάλυση του διαλυτού παραμέτρων στο πλάσμα έδειξε μια έντονη αύξηση των VEGF-A (ρ & lt? 0.001) και Ang-2 (ρ = 0.004) σε ασθενείς με μεταστατική ασθένεια (Εικ. 5) ενώ επίπεδα διαλυτού ΤΙΕ1 δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των ομάδων ( τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Οι συγκεντρώσεις MCP-1 προσδιορίστηκαν σε πλάσμα (Εικ. 5) και σε ένα υποσύνολο των δειγμάτων ορού (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), αλλά δεν κατάφερε να αποδώσει οποιεσδήποτε σημαντικές διαφορές μεταξύ των τριών κολλεκτίβες διερευνηθεί. Για λόγους σύγκρισης, η CEA δείκτης όγκου (όπως καθορίζεται από την ανάλυση ρουτίνας νοσοκομείο) αξιολογήθηκε σε ασθενείς και αποκάλυψε μια σημαντική αύξηση των επιπέδων στο αίμα CEA στην mCRC σε σύγκριση με εντοπισμένο καρκίνο του τεκμηριώνοντας έτσι το προχωρημένο στάδιο της νόσου. Αξίζει να σημειωθεί ότι καμία από τις παραμέτρους διερευνήθηκαν πλάσματος έδειξε σημαντική συσχέτιση με υποπληθυσμών των μονοκυττάρων.

Διαλυτό παραμέτρους συμπεριλαμβανομένων VEGF-A (Α), MCP-1 (Β) και Ang-2 (C) μετρήθηκαν στο πλάσμα δείγματα υγιών ατόμων, οι ασθενείς με εντοπισμένο CRC ή mCRC. συγκεντρώσεις στο αίμα της CEA δείκτη όγκου (D) ήταν διαθέσιμα από αναλύσεις ρουτίνας στο νοσοκομείο των ασθενών με καρκίνο, αλλά δεν προσδιορίστηκαν (ΝΔ) για την υγιή συλλογική ελέγχου.

Η

λογιστική ανάλυση παλινδρόμησης περαιτέρω για την εκτίμηση της σημασία των διαθέσιμων παραμέτρων σε πρόβλεψη του καρκίνου. Πίνακας 2 διευκρινίζει τα αντίστοιχα επίπεδα σημαντικότητας και αναλογίες πιθανοτήτων με διαστήματα εμπιστοσύνης 95%. Μονοπαραγοντική ανάλυση αποκάλυψε την ηλικία, το πλάσμα, ο VEGF-Α και τα επίπεδα στο αίμα του CD14 ++ CD16 + ενδιάμεσο μονοκύτταρα (p = 0.004, αναλογία πιθανοτήτων = 22) ως προγνωστικούς παράγοντες για καρκίνο του παχέος εντέρου. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, η ηλικία του ασθενούς και των ενδιάμεσων μονοκύτταρα (p = 0,024, λόγος πιθανοτήτων = 83), επικράτησε ως σημαντικές ανεξάρτητες μεταβλητές στην πρόβλεψη του καρκίνου.

Η

CD16 έκφραση σε μονοκύτταρα προκαλείται από τον καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα

in vitro

η

Δεδομένου ότι καμία από τις παραμέτρους που διερευνήθηκαν στο πλάσμα συσχετίζονται με την επαγωγή της ενδιάμεσης μονοκυττάρων σε ασθενείς με καρκίνο, έχουμε ως στόχο να εξετάσει από

in vitro

πειραμάτων αν τα ερεθίσματα που προέρχονται από όγκους μπορεί πράγματι ενεργοποιούν την έκφραση CD16 στα μονοκύτταρα του αίματος και να αυξήσει τη συχνότητα του ενδιάμεσου υποσύνολο. PBMCs απομονώθηκαν από υγιείς εθελοντές και αναλύθηκαν για CD14 και CD16 έκφραση έπειτα από 24 ώρες επώασης με υπερκείμενα κύτταρο όγκου. Συγκρίναμε διέγερση με υπερκείμενα που προέρχονται από πρωτογενή (SW480 και ΗΤ-29) και μεταστατικό (SW620) σειρές καρκίνου του παχέος εντέρου. Κατά την έναρξη, το ενδιάμεσο μονοκύτταρα αποτελούσαν το 22% των κυττάρων CD14 ++ (Εικ. 6). Μετά από 24 ώρες

in vitro

επώαση με υπερκείμενο από κύτταρα πρωτογενούς προερχόμενα (SW480 και ΗΤ-29) CRC, η συχνότητα του ενδιάμεσου CD14 ++ CD16 + μονοκύτταρα αυξήθηκε σημαντικά σε 71-87%. Είναι ενδιαφέρον, PBMC επώαση με το υπερκείμενο του μεταστατικού καρκίνου του παχέος εντέρου γραμμή SW620 είχε ως αποτέλεσμα μέτρια αύξηση σε 37% ενδιάμεσο μονοκύτταρα μεταξύ CD14 ++ κυττάρων μετά από 24 ώρες.

PBMCs απομονώθηκαν από υγιείς εθελοντές και επωάστηκαν για 24 ώρες με υπερκείμενο του όγκου κυτταρικές καλλιέργειες που προέρχονται από CRC γραμμές ΗΤ-29, SW480 και SW620. Τα προσκολλημένα κύτταρα συλλέχθηκαν και χρωματίστηκαν με CD14-FITC και CD16-PC5 αντισώματα? mIgG

1-PC5 χρησιμοποιείται για τον έλεγχο του ισοτόπου. Τα δεδομένα κυτταρομετρίας ροής ενός αντιπροσωπευτικού πειράματος απεικονίζεται για ισοτύπου αναφοράς (Α) έναντι χρώση CD16-PC5 του SW480 (Β), και SW620 (C) διεγερμένα PBMC καλλιέργειες. Η μέση και τυπική απόκλιση τριών ανεξάρτητων πειραμάτων με διαφορετικούς δότες αίματος δίνονται σε ένα διάγραμμα bar (D) που απεικονίζει το ποσοστό των CD16 + (ενδιάμεσο) έναντι (κλασική) κύτταρα CD16- εντός πληθυσμός μονοκυττάρων του CD14 ++.

Η

Συζήτηση

η παρακολούθηση των υποπληθυσμών των μονοκυττάρων στο περιφερικό αίμα έχει αρχικά με βάση την απλή ανίχνευση των δεικτών επιφανείας CD14 και CD16 [10], [23], [29]. Αυτό οδήγησε στο συμπέρασμα ότι CD16 + μονοκύτταρα αποτελούν το 10% περίπου του συνόλου των μονοκυττάρων του αίματος και το ποσό σε 50 κύτταρα ανά μικρολίτρο πλήρους αίματος [30]. Μια διπλάσια αύξηση σε αυτήν την φλεγμονώδη μονοκυττάρων υποσύνολο παρατηρείται κατά συστηματικές λοιμώξεις, συσχετίζεται με τη βαρύτητα της νόσου και αποκαθίσταται κατά την κατεργασία των ασθενών και ανάκτησης [31] – [33].

Ένα προηγμένο πρωτόκολλο για την αξιολόγηση των μονοκυττάρων υποσύνολα κυκλοφόρησε το 2010 [34] βασίζεται στην ταυτόχρονη ανίχνευση του HLA-DR, CD14, CD16 και να αποφεύγονται παρεμβολές από κοκκιοκυττάρων και των φυσικών φονικών κυττάρων πληθυσμών. Στη μελέτη μας, επιλέξαμε να εστιάσουμε στο ενδιάμεσο CD14 ++ CD16 + και τις ΤΙΕ2 εκφράζουν πληθυσμούς μονοκυττάρων με το συνδυασμό δείκτη CD14, CD16, και ΤΙΕ2. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι αυτή η προσέγγιση ανίχνευσης δεν επιτρέπει την αδιαμφισβήτητη ανίχνευση του μη κλασική μονοκύτταρα το οποίο μπορεί να «μολυνθεί» από φυσικά κύτταρα φονείς και τα οποία έχουν επομένως παραλειφθεί από την ανάλυση αυτή. Μια συγκρίσιμη στρατηγική χρώση έχει προηγουμένως αναφερθεί για την επιτυχή ανίχνευση ΤΕΜ εντός του ενδιάμεσου μονοκυττάρων υποσύνολο [35]. Εκτιμήσαμε τη συγκέντρωση αυτών των πληθυσμών των μονοκυττάρων στο αίμα υγιών εθελοντών και ανιχνεύεται ένα μέσο επίπεδο των 16 (διατεταρτημοριακό εύρος 11-30) ενδιάμεσο CD14 ++ CD16 + μονοκύτταρα και 3 (διατεταρτημοριακό εύρος 2-6) ματα ανά μικρολίτρο του περιφερικού αίματος. Όταν υπολογίζονται σε ποσοστό, οι ενδιάμεσες και TEM υποσύνολα ανήλθε σε 0,25% και 0,05% του συνόλου των λευκοκυττάρων του αίματος και σε 3,39% και 0,63% των μονοκυττάρων, αντίστοιχα.

Ο σκοπός της μελέτης μας ήταν να καθοριστεί εάν αυτά τα μονοκύτταρα οι υποπληθυσμοί αυξημένα σε ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνωμα και να έχουν ένα διαγνωστικό δυναμικό δείκτη. Βρήκαμε το υποσύνολο των ενδιάμεσων μονοκυττάρων να είναι 2,2 φορές αυξημένα σε ασθένεια σε ένα διάμεσο επίπεδο του 0,55% των λευκοκυττάρων του αίματος σε ασθενείς CRC (0,66% σε εντοπισμένη ασθένεια και 0,40% σε μεταστατική νόσο). ανάλυση ROC οδήγησε στην επιλογή ενός σημείου αποκοπής στο 0,37%, το οποίο είχε ως αποτέλεσμα μια διαγνωστική ευαισθησία 69% και ειδικότητα 81%. Η προγνωστική αξία αυτής της μονοκυττάρων υποσύνολο επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης, συμπεριλαμβανομένων όλων των διαθέσιμων παραμέτρων. Εκτός από την ηλικία του ασθενούς, το ενδιάμεσο μονοκύτταρα ήταν η μόνη σημαντική ανεξάρτητη μεταβλητή για την πρόβλεψη του καρκίνου. Στο πλαίσιο αυτό θα πρέπει να σημειωθεί, ότι οι προσληφθεί συλλογικότητες των υγιών ατόμων και ασθενών με καρκίνο διέφεραν σε μέση ηλικία (56 και 68 ετών αντίστοιχα) – μια προκατάληψη που λογιστικοποιείται με πολυπαραγοντική ανάλυση

Ο περιορισμός της. πληθυσμοί μονοκυττάρων σε διάγνωση του καρκίνου δίδεται από το γεγονός ότι οι διακυμάνσεις των μετρήσεων των μονοκυττάρων στο αίμα παρατηρούνται επίσης για άλλες καταστάσεις, ιδίως φλεγμονώδεις νόσους [20], [22]. Το προφίλ του αίματος του υποσύνολα μονοκυττάρων μπορεί συνεπώς να αντικατοπτρίζει ένα επιφαινόμενο άσχετα με τον όγκο. Για την αντιμετώπιση αυτού του θέματος, έχουμε συγκριτικά αριθμός των λευκοκυττάρων μεταξύ των ομάδων της μελέτης μας, δεδομένου ότι η αύξηση της συγκέντρωσης των λευκοκυττάρων συνήθως συνδέεται με λοιμώδεις και φλεγμονώδεις καταστάσεις. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των υγιών ατόμων και ασθενών με καρκίνο του παχέος ερευνηθεί σε μελέτη μας (Εικ. S2). Επιπλέον, τα επίπεδα στο αίμα της C-αντιδρώσας πρωτεΐνης δείκτη φλεγμονής (CRP) ήταν διαθέσιμα από ανάλυση ρουτίνας νοσοκομείο των ασθενών με καρκίνο. Ενώ τα επίπεδα της CRP συσχετίστηκαν σημαντικά με αριθμό λευκοκυττάρων (P & lt? 0.001? K = 0,474), δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων της CRP ή συγκεντρώσεις λευκοκυττάρων με ενδιάμεσες μετρήσεις των μονοκυττάρων. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν την ιδέα ότι το αυξημένο επίπεδο του ενδιάμεσου μονοκυττάρων σε ασθενείς με καρκίνο δεν προκλήθηκε με άγνωστη φλεγμονωδών καταστάσεων στη μελέτη μας.

Προηγουμένως δημοσιευμένες αναλύσεις των ασθενών με καρκίνο επικεντρώθηκαν στην απλή διάκριση μεταξύ CD16 θετικών ή αρνητικών μονοκύτταρα , δηλαδή, ήταν το συνδυασμό των μη-κλασική και ενδιάμεσων κυτταρικών πληθυσμών στη στρατηγική ανίχνευσή τους. Το CD16 + μονοκύτταρα υποσύνολο αναφέρθηκε ότι είναι σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με κακοήθη νόσο [36]. Ειδικότερα, μια πρόσφατη μελέτη για τον καρκίνο του μαστού έδειξε ότι CD16 + μονοκύτταρα ήταν 1,7 φορές αυξημένη σε ασθενείς σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες. Οι συγγραφείς σημειώνουν ότι τα επίπεδα ήταν υψηλότερα στο στάδιο Ι από το στάδιο ΙΙ-IV της νόσου [10]. Συγκριτικά, βρήκαμε το ενδιάμεσο CD14 ++ CD16 + μονοκυττάρων υποσύνολο να είναι σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, αλλά και να δείξει υψηλότερους αριθμούς σε τοπικά από μεταστατική νόσο. Εκτός από τη συχνότητα του ενδιάμεσου μονοκύτταρα, τους μέση έκφραση του CD16 αυξήθηκε, πιθανώς ενισχύοντας την ικανότητά τους για κυτταρική κυτταροτοξικότητα εξαρτώμενη από αντίσωμα [28].

Η έκφραση του CD16 στα μονοκύτταρα μπορεί να προκληθεί με κυτοκίνες όπως MCP -1 [10], ο ΤΟΡ-β [37], ή Μ-CSF [11]. Αντιστρόφως, αυτό το αποτέλεσμα μπορεί να μπλοκαριστεί από κυτοκίνες τύπου Th2 όπως IL-4 [12] και από τον GM-CSF [37]. Έτσι, είναι κατανοητό ότι η αύξηση της ενδιαμέσου (CD14 ++ CD16 +) μονοκύτταρα ενεργοποιείται περισσότερο ενεργά από τον πρωτογενή όγκο, ενώ εξέλιξης του όγκου σε μεταστατική αποτελέσματα ασθένειας σε ένα περιβάλλον κυτοκίνης τύπου Th2 με εξουδετερώνοντας αποτελέσματα. Κατά τον έλεγχο συλλογικότητες μας ασθενή για MCP-1 επίπεδα στο αίμα μας δεν εντόπισε οποιαδήποτε αύξηση ή συσχέτιση με τη συχνότητα των ενδιάμεσων μονοκύτταρα. Ωστόσο, άλλοι παράγοντες που προέρχονται από όγκους μπορεί να ευθύνεται για την αύξηση του αριθμού των ενδιάμεσων (CD14 ++ CD16 +) μονοκύτταρα παρατηρηθεί σε ασθενείς με καρκίνο. Σύμφωνα, μας

in vitro

αναλύσεις έδειξαν ότι η επώαση των PBMCs με υπερκείμενα κύτταρο όγκου καλλιέργειας οδηγεί στην ταχεία επαγωγή του CD14 ++ CD16 + μονοκύτταρα. Είναι αξιοσημείωτο ότι αυτή η αύξηση ήταν λιγότερο έντονη σε απόκριση σε υπερκείμενο καλλιέργειας από την μεταστατική κυτταρική γραμμή SW620 που προέρχεται από τον ίδιο ασθενή ως η κύρια κυτταρική γραμμή καρκινώματος SW480 ή μη συνδεδεμένου κύρια γραμμή CRC ΗΤ-29. Ενώ αυτά

in vitro

πειράματα δεν προσδιορίζουν την προέλευση της επαγωγής CD16 + μονοκυττάρων CD14 ++

in vivo

, υποστηρίζουν την ιδέα ότι η ενδιάμεση μονοκύτταρα μπορεί να προκληθεί πιο αποτελεσματικά στα πρώιμα στάδια της νόσου.

CD16 + μονοκύτταρα είναι σύμφωνα με πληροφορίες ο κύριος πληθυσμός μονοκυττάρων στην απόκριση αντι-καρκίνου και εκκρίνουν υψηλά επίπεδα ΤΝΡ-α και IL-12 κατά την αλληλεπίδραση των καρκινικών κυττάρων [38]. Ωστόσο, η λειτουργική διάκριση μεταξύ μη κλασσικής και ενδιάμεσο μονοκύτταρα λείπει σε αυτό το πλαίσιο. Το γεγονός ότι η ενδιάμεση μονοκύτταρα μπορεί να εκφράσει προ-αγγειογενετική (και επομένως δυνητικά προ-καρκινικά) παράγοντες, όπως ΤΙΕ2, ενδογλίνη ή VEGFR-2 μας ώθησε να ερευνήσει ένα συγκεκριμένο υποσύνολο των ενδιάμεσων μονοκύτταρα, το CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + ματα. Ενώ ισχυρά αποτελέσματα προαγωγής όγκων δειχθεί για ματα σε πειράματα ποντικού [16], [39], οι κλινικές μελέτες σχετικά με το δυναμικό προσωπικό τους σε ασθενείς με καρκίνο είναι σε μεγάλο βαθμό λείπει [17]. Σύμφωνα με μία πολύ πρόσφατη έκθεση για τις συχνότητες ΤΕΜ σε καρκίνωμα παχέος [40], βρήκαμε ότι ματα δεν είχαν σημαντικά αυξημένα στο αίμα ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου και δεν έδειξε συσχέτιση με το κυκλοφορούν αγγειογένεση παράγοντες Ang-2, sTIE1 και VEGF-A είναι γνωστό ότι ρυθμίζει την πρόσληψη ή τη δραστηριότητα [18] TEM. Αν και δεν ανίχνευσε σημαντική διαφορά στο ΤΕΜ μετράει μεταξύ υγιών ατόμων και ασθενών με καρκίνο, παρατηρήσαμε μια τάση για υψηλότερα επίπεδα ΤΕΜ σε εντοπισμένη ασθένεια. Το συμπέρασμα που κυκλοφορούν ματα αποτελούν ένα φτωχό διαγνωστικό δείκτη για καρκίνο του παχέος εντέρου μπορεί επομένως να οφείλεται σε μικρότερη αύξηση των επιπέδων ΤΕΜ σε σύγκριση με το ενδιάμεσο μετράει μονοκυττάρων στη νόσο. Μια μεγαλύτερη συλλογική των συμμετεχόντων στην μελέτη, θα πρέπει να διαπιστωθεί αν αυτή η διαφορά είναι στατιστικά σημαντική.

Εν ολίγοις, κατά τη σύγκριση των ενδιάμεσων CD14 ++ CD16 + μονοκύτταρα και CD14 ++ CD16 + ΤΙΕ2 + ματα στο αίμα 32 υγιών υποκείμενα και 61 ασθενείς CRC, βρήκαμε ότι το ενδιάμεσο μονοκύτταρα, σε αντίθεση με ματα ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθένεια. Η υψηλότερη συχνότητα μετρήσεων CD14 ++ CD16 + κυττάρων ήταν, κατά περίεργο τρόπο, που καταγράφεται για εντοπισμένη σε αντίθεση με μεταστατική νόσο που μπορεί να αντανακλά την προτιμησιακή επαγωγή του ενδιάμεσου μονοκυττάρων στα πρώιμα στάδια του καρκίνου – μια έννοια η οποία υποστηρίχθηκε από

in vitro

μελέτες. Η συχνότητα των ενδιάμεσων μονοκυττάρων βρέθηκε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης του καρκίνου του παχέος εντέρου. Ενώ λαμβάνοντας υπόψη ότι η ενδιάμεση μονοκύτταρα μπορεί επίσης να είναι αυξημένα σε άλλες φλεγμονώδεις καταστάσεις, αυτή η παράμετρος μπορεί να αποδειχθεί μια πολύτιμη Επιπλέον των καθιερωμένων δεικτών διάγνωση CRC αντανακλώντας την πρώιμη ανοσολογική απόκριση εναντίον του όγκου. Αντιπροσωπεύει μια λιγότερο επεμβατική επιλογή προσυμπτωματικού ελέγχου που θα πρέπει περαιτέρω να αξιολογηθεί σε ένα μεγαλύτερο συλλογικό ασθενή για τη στήριξη της κολονοσκόπησης και άλλες διαγνωστικές δοκιμασίες, ιδιαίτερα για την ανίχνευση τα πρώιμα στάδια της νόσου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.