Αφηρημένο

Οι περισσότερες δοκιμασίες προ-κλινική αποτελεσματικότητα αναλγητική εξακολουθούν να συνεπάγονται αλγαισθητικά δοκιμή σε τρωκτικά. Αυτό συμβαίνει παρά τις ανησυχίες ως προς τη σημασία αυτών των δοκιμών για την αξιολόγηση του πόνου-προληπτικές ιδιότητες των φαρμάκων. Πιο κατάλληλες μέθοδοι θα στοχεύουν τον πόνο και όχι αλγαισθησία, αλλά αυτά είναι προς το παρόν δεν είναι διαθέσιμα, έτσι ώστε να παραμένει άγνωστο αν ο πόνος των ζώων ισοδυναμεί με την αρνητική συναισθηματική και υποκειμενική /συναισθηματική κατάσταση που προκαλεί στον άνθρωπο. μοντέλα καρκίνου του ποντικιού είναι κοινά παρά την πιθανότητα σημαντικής πόνου. Χρησιμοποιήσαμε συσκευασμένα δοκιμές Τόπος Προτίμησης (CPP), την αξιολόγηση θερμικής υπεραλγησίας και συμπεριφοράς για να καθορίσει την πιθανότητα ότι οι επιπτώσεις ΜΒΤ-2 καρκίνου της ουροδόχου κύστης αρνητικά την καλή διαβίωση του ποντικιού, όπως προκαλώντας πόνο. Δεν υπήρχε CPP να αλατούχο διάλυμα, αλλά μορφίνη προτίμησης σε ποντικούς που φέρουν όγκο υπέρβαση αυτή που παρατηρείται σε ελέγχους άνευ όγκου. Αυτό συνέβη μέχρι 10 ημέρες πριν από τη μελέτη τελικό σημείο μαζί με μειωμένο σωματικό βάρος, ανάπτυξη υπεραλγησίας και αλλαγές συμπεριφοράς. Αυτά τα αποτελέσματα ανέφερε τα ποντίκια παρουσίασαν αρνητικό κράτος πρόνοιας που προκαλείται από

κακουχία

(αν όχι πόνο) πριν από την ευθανασία. Λόγω της πολυπλοκότητας των εκτιμήσεων που απαιτούνται για να αποδειχθεί αυτό, είναι μάλλον απίθανο ότι η προσέγγιση αυτή θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για τη συνήθη αξιολόγηση της καλής μεταχείρισης με βάση την μελέτη-από-μελέτη. Ωστόσο, τα αποτελέσματά μας δείχνουν τα ποντίκια σε επαρκώς παρόμοιες μελέτες είναι πιθανό να επωφεληθούν από πιο εντατική αξιολόγηση σοβαρότητα και την εκ νέου αξιολόγηση των τελικών σημείων με σκοπό την εφαρμογή των κατάλληλων βελτιώσεων. Στη συγκεκριμένη περίπτωση, μια εκλέπτυνση θα ήταν να έχουμε ευθανασία ποντικούς τουλάχιστον 7 ημέρες νωρίτερα, ή ενδεχομένως με την παροχή ανακούφισης από τον πόνο τελικού σταδίου. δοκιμών CPP βρέθηκε να είναι μια χρήσιμη μέθοδος για τη διερεύνηση των αποκρίσεων ποντικών σε αναλγητικά, πιθανώς σε μια υποκειμενική επίπεδο. Τα ευρήματα αυτά και εκείνα άλλων πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι θα μπορούσε να είναι μια πολύτιμη μέθοδος διαλογής υποψηφίων αναλγητικά για την αποτελεσματικότητα εναντίον του πόνου του καρκίνου και ενδεχομένως άλλων πόνο ή ασθένεια μοντέλα

Παράθεση:. Roughan JV, Coulter CA, Flecknell PA, Τόμας HD, Sufka KJ (2014) Η προτίμησης θέσης δοκιμής για την αξιολόγηση Συνέπειες Πρόνοιας και Πιθανές βελτιώσεις σε ένα ποντίκι καρκίνο της ουροδόχου κύστης μοντέλο. PLoS ONE 9 (8): e103362. doi: 10.1371 /journal.pone.0103362

Επιμέλεια: Bradley Taylor, Πανεπιστήμιο του Κεντάκι Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 10, Σεπ του 2013? Αποδεκτές: 30 Ιουν 2014? Δημοσιεύθηκε: 6 Αυγούστου 2014

Copyright: © 2014 Roughan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Κέντρο Ηνωμένου Βασιλείου για τα 3Rs (NC3Rs): https://www.nc3rs.org.uk/, Grant Αριθμός G0900763, PI: JV Roughan. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Μια σειρά επώδυνων εξετάσεις χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό του δυναμικού αποτελεσματικότητας των νέων αναλγητικών, και εργαστηριακών αρουραίων και ποντικών είναι συντριπτικά τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα υποκείμενα δοκιμής. Αυτές οι δοκιμές τυπικά ταξινομούνται σύμφωνα με τη διάρκεια και την ένταση του επιβλαβούς ερεθίσματος και της φύσης της απόκρισης. Οξεία ή φασική αλγαισθητική δοκιμασίες που ισχύουν θερμότητα ή μηχανική διέγερση (π.χ. το ουράς και Hargreaves δοκιμάζει? Von Frey, αντίστοιχα), λόγω της σε μεγάλο βαθμό αντανακλαστικές φύση των απαντήσεων που λαμβάνεται, θεωρούνται λιγότερο κατάλληλα από τονωτικό ή υπο-χρόνια δοκιμών ( π.χ. φορμόλη ή καραγενάνη) που προκαλούν σημαντικές και επίμονες φλεγμονές [1]. Ωστόσο, οι ανεπάρκειες και των δύο είναι καλά γνωστές [2]. Παρά την ανάπτυξη των προσομοιώσεων των ζώων επίμονη σύνδρομα πόνου (π.χ. αρθριτικά ή νευροπαθητικού πόνου), τις ανησυχίες επικρατούν ως προς την κλινική τους σημασία. Αυτά τελικά πηγάζουν από μια συνεχιζόμενη έλλειψη κατανόησης του τρόπου με τον πόνο των ζώων ισοδυναμεί με την ανθρώπινη εμπειρία? είναι ένα πολυδιάστατο φαινόμενο, συμπεριλαμβανομένων τόσο αισθητικές και συναισθηματική συναισθηματική κατάσταση αλλαγές (αλλαγές συλλογικά ονομάζονται «ποιότητα ζωής»). Θεωρητικά τουλάχιστον, τον πόνο των ζώων και αναλγητική δοκιμασίες που ενημερώνουν για τις αλλαγές σε αυτά τα κράτη πρέπει να παρέχουν μεγαλύτερη μεταγραφική ισχύ. Η ανάγκη αυτή έχει οδηγήσει τις πρόσφατες κλήσεις για την ανάπτυξη πιο κλινικά σχετικές

in-vivo

μοντέλα [3], [4], παρέχοντας μια προσέγγιση περισσότερο τα συστήματα που βασίζονται [5]. Αυτή η λογική εξηγεί γιατί συναισθηματική (υποκειμενική) αξιολόγηση κατάσταση όλο και περισσότερο θεωρείται ως μια πιο σχετική προσέγγιση για τον καθορισμό των συνεπειών καλή διαβίωση των μοντέλων όπου τα ζώα θα μπορούσαν να εκτεθούν στον πόνο [6] – [8]. μοντέλα καρκίνου είναι ένας τομέας της έρευνας, όπου σημαντικά περισσότερη γνώση σχετικά με το πώς σε μεγάλο βαθμό τις επιπτώσεις του πόνου για την καλή διαβίωση μπορεί να είναι εδώ και καιρό.

Ένα μεγάλο και συνεχώς αυξανόμενο αριθμό των ζώων (κυρίως ποντίκια) που χρησιμοποιούνται στις δοκιμές του καρκίνου (471.000 στο Ηνωμένο Βασίλειο το 2012? μια αύξηση 16% σε σχέση με το προηγούμενο έτος [9]) με ελάχιστη γνώση σχετικά με δυνητικά αρνητικές επιπτώσεις στην ευημερία. Ωστόσο, οι κατευθυντήριες γραμμές που είναι γραφτό να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία σε αυτές τις μελέτες [10], [11] δεν ενσωματώνει καμία αξιολόγηση των μεταβολών των βασικών υποκειμενική κατάσταση, και την απόκτηση του καρκινικού πόνου σε τρωκτικά βασίστηκε σε μεγάλο βαθμό στην αξιολόγηση των υποκείμενων αλγαισθητική αλλαγές [12 ] – [15], και φαίνεται ότι αυτό συμβαίνει ακόμα και σήμερα [16] – [19]. Η ομάδα μας έχει εκτεταμένα αξιολογηθεί αλλαγές στην νατουραλιστική συμπεριφορές ως μέσο για την αξιολόγηση του μετεγχειρητικού πόνου σε τρωκτικά και άλλα είδη που χρησιμοποιούν και τις δύο οδηγίες [20] – [26], καθώς και αυτοματοποιημένες μεθόδους [27] – [30], ή χρησιμοποιήσατε έναν συνδυασμό και των δύο τύπους ανάλυσης [31]. Ωστόσο, η ανάλυση τέτοια συμπεριφορά έχει σπάνια χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση των επιπτώσεων του καρκίνου, και αυτές οι λίγες μελέτες που αναφέρουν συμπεριφορά του πόνου »σημαίνει στην πραγματικότητα αλγαισθητική ή ενόχλησης συμπεριφορές (π.χ. απόσυρση ή φύλαξη) παρά την αληθινή αυθόρμητη (π.χ. σπίτι-κλουβί) συμπεριφορά ( βλέπε για παράδειγμα [14], [32]). Ανεξάρτητα από τη μέθοδο συλλογής δεδομένων χρησιμοποιείται, τη δημιουργία δεσμών μεταξύ αποτελέσματος και την αιτιώδη συνάφεια σε μελέτες συμπεριφοράς είναι δύσκολη, επειδή πολλοί παράγοντες μπορούν να συμβάλουν στις παρατηρούμενες αλλαγές. Αλλαγές θα μπορούσαν να προκύψουν ως έμμεσο αποτέλεσμα της διαδικαστικής επιρροές (π.χ. αναισθησία, υποθερμία, αφυδάτωση) ή παράγοντες που συνδέονται με αυτά, όπως ο φόβος και το άγχος που συνδέεται. Παρ ‘όλα αυτά, να διαπιστωθεί εάν και πότε ο πόνος προκύπτει από μελέτες του καρκίνου θα έχει σημαντικές συνέπειες. Πρώτον, θα ενθαρρύνει μια πιο αυστηρή προσέγγιση για την ηθική λήψη αποφάσεων, επιτρέποντας στους ερευνητές να εφαρμόσουν πιο αποτελεσματικές αναλύσεις κόστους-οφέλους για τον προσδιορισμό αν τα τελικά σημεία δικαιολογείται. Βελτίωση των κανόνων διαβίωσης με αυτόν τον τρόπο θα μπορούσε επίσης να είναι επωφελής για τις μελέτες, διότι unalleviated πόνος μπορεί επίσης να θέσει σε κίνδυνο το μοντέλο κύρους. Την πρόληψη του πόνου έχει αποδειχθεί ότι είναι ευεργετική για εγκυρότητα σε τουλάχιστον μία μελέτη για τον καρκίνο [33] και, ενδεχομένως, άλλες

in-vivo

ερευνητικές εφαρμογές [34]. καρκινικού πόνου είναι επίσης ένας τομέας όπου απαιτούνται επειγόντως πρόοδος στην ανθρώπινη θεραπείες. Ο πόνος είναι το πιο κοινό και φόβος συνέπεια του καρκίνου και μεταξύ 30-60% των ασθενών ογκολογίας συνεχίζουν να αναφέρουν πόνο πριν, κατά τη διάρκεια και μετά τη θεραπεία [35]. Πράγματι, φαίνεται ότι οι προοπτικές παραμένουν δυσοίωνες παρά τα 40 χρόνια προσπαθειών για την αντιμετώπιση του προβλήματος [36]. Σαφώς, η διαχείριση του πόνου του καρκίνου πρέπει να τελειοποιηθεί, και τα μοντέλα καρκίνου σε ζώα παρέχουν μια ιδανική πλατφόρμα για την παράλληλη πρόοδο στην εξέλιξη της ευημερίας και ανακάλυψη φαρμάκων. Παρά το γεγονός αυτό, τα μοντέλα καρκίνου δεν χρησιμοποιούνται γενικά για τη διαλογή δυνητικών αναλγητικά, με μόνο σπάνιες εξαιρέσεις [13], [37]. Αυτό μπορεί να συμβαίνει επειδή οι περισσότερες μελέτες για τον καρκίνο έχουν εναλλακτικές στόχους, αλλά θα μπορούσε επίσης να οφείλεται σε έλλειψη των κατάλληλων μεθόδων αξιολόγησης? δηλαδή εκείνους που μπορούν να φιλοξενήσουν υποκειμενικές πλευρές.

προτίμησης θέσης (CPP) δοκιμή χρησιμοποιείται ευρέως για την αξιολόγηση των ψυχοδραστικών (συναισθηματικά) ιδιότητες των φαρμάκων σε ζώα [38], αλλά συνήθως για την αναγνώριση της ευθύνης της κατάχρησης από τον άνθρωπο. Τα ζώα κλιματιζόμενα με το να περιορίζεται σε ένα «μέρος» και αντιστοίχιση ότι με την φαρμακευτική αγωγή, ενώ σε άλλο τόπο τους δίνεται μόνο ένα εικονικό φάρμακο. Καθώς οι «θέσεις» έχουν σαφώς διαφορετικά συνθήματα (συνήθως στο χρώμα ή την υφή) ζώα συνδέσει σταδιακά τα ναρκωτικά »να επηρεάσει με τον τόπο όπου βιώσει. Εάν αυτό είναι μια ανταμείβοντας εμπειρία, είτε οφείλεται σε θετικά ή αρνητικά ενίσχυση (αναλγητικό) επιδράσεις των φαρμάκων, τα ζώα συνήθως ξοδεύουν πλέον, ή επισκεφθείτε το φάρμακο σε συνδυασμό χώρα πιο συχνά. Παροχή αναλγησία είναι μια θετική εμπειρία σε επώδυνες ανθρώπους, οπότε αν το ίδιο ισχύει και για τα ζώα κατόπιν μελετών CPP έχουν δυνατότητες για την αξιολόγηση τόσο των αποτρεπτική ιδιότητες του πόνου και τις αναλγητικές επιδράσεις των φαρμάκων. Η προσέγγιση έχει ολοένα και εφαρμόστηκε στην έρευνα για τον πόνο μετά από την πρώτη απόδειξη ότι προκαλεί αρθρίτιδα ενισχυμένη CPP για μορφίνη και τον ανταγωνιστή Ν-μεθυλο-D-ασπαρτικού ΜΚ-801 [39]. Στη συνέχεια έδειξε ότι μια βραδυκινίνη Β ανταγωνιστής

1 υποδοχέα έχει θεραπευτικό δυναμικό κατά της χρόνιας φλεγμονώδους πόνου [40]. Ένα σημαντικό χρόνο αργότερα, ο βασιλιάς et al. έδειξε CPP είναι επίσης μια αποτελεσματική μέθοδος για την αξιολόγηση των αναλγητικών κατά του νευροπαθητικού πόνου [41]. Qu et al. απεικονίζεται τη σημασία της CPP για την αξιολόγηση υποκειμενικές πτυχές του νευροπαθητικού πόνου σε αρουραίους, δείχνοντας ότι η ραμφικών πρόσθιο φλοιό του προσαγωγίου είναι απαραίτητη για τη διαμεσολάβηση πόνο επηρεάσει [42]. Rutten et al. ήταν επίσης σε θέση να χρησιμοποιούν CPP να διαχωριστεί μεταξύ των θετικά και αρνητικά επιβράβευση συνέπειες των αναλγητικών με οπιοειδή, όπως επηρεάζει σε σύγκριση με άλλους μηχανισμούς σε μια φλεγμονώδη (καραγενάνη) μοντέλο αρουραίου [43]. Davoody et al. τότε έδειξαν αυξημένη CPP να κλονιδίνη (ένα α-2 αγωνιστή) σε αρουραίους χρησιμοποιώντας τραυματισμό του νωτιαίου μυελού σαν ένα συγκεντρωτικό μοντέλο πόνου [44]. Okun et al. χρησιμοποίησε μια παρόμοια προσέγγιση για να δείξει CPP σε πολλά διαφορετικά φάρμακα σε ένα μοντέλο οστεοαρθριτικά [45], και πιο πρόσφατα, το Park et al. έδειξε απουσία θετικής ενίσχυσης (ανταμοιβή) να γκαμπαπεντίνη σε φυσιολογικά ποντίκια, αλλά CPP σε polyneuropathic μοντέλο του πόνου που προκαλείται από αντινεοπλασματικά (σισπλατίνη) θεραπεία [46]. Συλλογικά, τα ευρήματα αυτά καταδεικνύουν σαφώς ότι το παράδειγμα CPP είναι σε θέση να προσφέρουν τα ζώα με ένα μέσο για να υποβάλει έκθεση σχετικά με την ευαισθητοποίησή τους από τον πόνο, και έτσι θα μπορούσε να προσφέρει μια πιο κατάλληλη μέθοδο αξιολόγησης της κεντρικής (συναισθηματική /υποκειμενικό), σε αντίθεση με αλγαισθητικό (αποτελεσματική) ιδιότητες.

Η αντίληψη ότι ο πόνος θα μπορούσε να είναι τόσο περίπλοκο σε ζώα (τουλάχιστον στα θηλαστικά), δεδομένου ότι είναι στον άνθρωπο υπογραμμίζεται από το γεγονός ότι κανένα κριτήριο μόνο μέτρηση μπορεί (μέχρι τώρα) να αξιολογήσουν αποτελεσματικά. Bateson et al. Αρχικά εφαρμόζεται ένα πολλαπλά μέτρα προσεγγίσει την επιστημονική επίλυση προβλημάτων (αργότερα ονομάζεται «τριγωνισμός») [47], αναφέροντας ότι αν και «αποδεικτικά στοιχεία που λαμβάνονται με διαφορετικές προσεγγίσεις ήταν διφορούμενη», «όταν θεωρήθηκε το σύνολο των αποδεικτικών στοιχείων, πολύ μεγαλύτερη εμπιστοσύνη θα μπορούσαν να τοποθετηθούν σε ένα ιδιαίτερο νόημα «. Για την αντιμετώπιση του προβλήματος της ταλαιπωρίας των ζώων, και δέχεται ότι «δεν μπορούμε να παρατηρήσουμε άμεσα τα συναισθήματα Μια ζώα», Bateson συνέστησε ότι «θα πρέπει να χρησιμοποιήσουμε μια ποικιλία εργασιών για να κερδίσει την εμπιστοσύνη στα συμπεράσματα» [48]. Ως εκ τούτου, οι μελέτες έχουν πλέον όλο και εφαρμογή πολλών διαφορετικών μέτρων σε μια προσπάθεια να χαρακτηρίζουν τον πόνο πιο αξιόπιστα [49], [50]. Σε αυτή τη μελέτη υιοθέτησε μια ανάλογη προσέγγιση με εκτίμηση μια τυπική παράμετρο κοινωνικής πρόνοιας (σωματικό βάρος), παράλληλα με περιφερική δοκιμή υπερευαισθησία, την παρακολούθηση αυθόρμητη εξερευνητική συμπεριφορά και τη διεξαγωγή δοκιμών CPP. Παρά τις πολλές περιορισμούς, υπεραλγησία (υπερευαισθησία) δοκιμή εξακολουθεί να παρέχει μια πολύτιμη δευτερεύουσα ένδειξη του πόνου των διαφόρων τρόπων συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου [12], [16], [19]. Αλλαγές στη συμπεριφορά είναι επίσης μια κοινή αντίδραση στον πόνο, αλλά η συλλογή και ανάλυση των δεδομένων είναι συχνά χρονοβόρα, ειδικά αν εφαρμοστεί σε μελέτες στις οποίες συνήθως διαρκούν αρκετές εβδομάδες? όπως συμβαίνει συνήθως σε μελέτες του καρκίνου. Η ερμηνεία αυτών των δεδομένων μπορεί επίσης να είναι προβληματική, διότι, όπως έχει ήδη περιγραφεί, υπάρχουν πάντα εναλλακτικές εξηγήσεις για τυχόν αλλαγές στη συμπεριφορά που ανιχνεύονται. Μία αναφέρεται συχνά πιθανότητα είναι ότι τα σημάδια της ανικανότητας σε τρωκτικά θα μπορούσε να κρυφτεί ως προσαρμοστική απάντηση να μειωθεί η πιθανότητα της θήρευσης? αν και με τις γνώσεις μας, αυτό δεν έχει ποτέ αποδειχθεί κατηγορηματικά. Για να ξεπεραστεί τουλάχιστον εν μέρει το χρόνο παραγραφής που χρησιμοποιείται αυτοματοποιημένο λογισμικό εγγραφής συμπεριφορά (HomeCageScan? Clever Systems Inc., VA, USA (HCS)). Αυτό το αναγνωρίζει μια σειρά (& gt? 20) συμπεριφορές ποντίκι με παρεμφερή ακρίβεια στο εγχειρίδιο ανάλυσης από έναν εκπαιδευμένο παρατηρητή [27], [28]. Στη μελέτη αυτή έρχεται σε αντίθεση πορίσματα σχετικά με υπεραλγησία και τη συμπεριφορά αλλαγές με τα αποτελέσματα των δοκιμών CPP για να εκτιμήσει τις συνέπειες καρκίνου της ουροδόχου κύστης για την καλή διαβίωση των ποντικών? εφαρμογή της έννοιας της τριγωνισμού. Μέχρι στιγμής, όπως γνωρίζουμε, καμία προηγούμενη προσπάθεια έχει γίνει για την αξιολόγηση της προσέγγισης CPP, όπως περιγράφεται εδώ κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του όγκου? με διαδοχικούς κύκλους προετοιμασίας και δοκιμών. Επιδιώξαμε επίσης να μετρηθεί (τουλάχιστον υποθετικά) το κατά πόσον αυτό θα μπορούσε να είναι μια χρήσιμη προσέγγιση για την διαλογή υποψηφίων φαρμάκων για τη θεραπεία του πόνου από καρκίνο στον άνθρωπο. Βρήκαμε όγκους ποντίκια πήραν λιγότερο βάρος, που αναπτύχθηκε υπεραλγησία και έδειξε αλλαγές συμπεριφοράς που χρονικά συνδέεται με ενισχυμένη μορφίνη αναζητούν σε ποντικούς που φέρουν όγκο, στις 7 ημέρες που προηγούνται της ευθανασίας. Καταλήξαμε στο συμπέρασμα ότι η πιο πιθανή εξήγηση για αυτές τις αλλαγές ήταν πόνος. Εάν δεν οφείλεται σε πόνο, τουλάχιστον τα αποτελέσματα έδειξαν αρνητικές επιπτώσεις στην καλή διαβίωση, συμπεριλαμβανομένων ενδεχομένως

αδιαθεσία

. Κανονικά ποντίκια θα αφαιρεθούν μόνο από τις μελέτες μετά από αυτό το χρονικό διάστημα, υποδεικνύοντας μια πιθανή ανάγκη για τελικό σημείο τελειοποίηση σε αυτό το μοντέλο ποντικού καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Η μέθοδός μας από την εφαρμογή δοκιμών CPP θα μπορούσε επίσης να είναι μια δυνητικά χρήσιμη μέθοδος ελέγχου της αποτελεσματικότητας των αναλγητικών που προορίζονται για τον καρκίνο και άλλες καταστάσεις, ειδικά

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής εκείνες όπου ο πόνος μπορεί να κλιμακωθεί πάροδο του χρόνου.

Όλες οι εργασίες διεξήχθη σύμφωνα με τα Ζώα (Scientific Procedures) Act του 1986 και υπόκειται σε τοπικό δεοντολογική εξέταση. Τα πειράματα τηρούνται επίσης με τις κατευθυντήριες γραμμές της Επιτροπής για την Έρευνα και Ηθικά Ζητήματα της Διεθνούς Ένωσης για τη Μελέτη του Πόνου (IASP). Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από την Υπηρεσία Εσωτερικών του Ηνωμένου Βασιλείου (Πρόγραμμα Άδεια PPL 60/4431).

Θέματα και Ζωοτεχνία

Όλα τα ποντίκια θηλυκά C3H /HeN, ζυγίζονται 25 έως 30 g κατά την παράδοση (Charles River Laboratories Inc., UK) και είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε μια εμπορική σε σφαιρίδια δίαιτα (R & amp?. Μ αρ.3 SDS LTD, Whitham, Ηνωμένο Βασίλειο) και το νερό της βρύσης σε ομάδες των 10 για μία εβδομάδα εγκλιματισμού. Στη συνέχεια στεγάζονται μεμονωμένα (Macrolon 2 κλουβιά? North Kent Πλαστικά, UK) για άλλη μια εβδομάδα πριν από την εγγραφή. Πριονίδια και ροκανίδια χρησιμοποιήθηκαν ως κλινοσκεπάσματα και τα κλουβιά συμπληρώθηκαν με «τσιτσίρισμα Φωλιά», μια λεύκα μασάτε-μπλοκ και ένα σωλήνα από χαρτόνι (Β & amp? Κ Universal). Η θερμοκρασία δωματίου διατηρήθηκε στους 21 ± 1 ° C με 15-20 αλλαγές αέρα ανά ώρα υπό ένα κύκλο φωτός 12 ωρών (φώτα ανοικτά στις 19:00 h). Όλες οι δοκιμές διεξήχθη μεταξύ 10 π.μ. και 3 μ.μ.

Συλλογή δεδομένων

Τα αποτελέσματα των 3 μελέτες χρησιμοποιώντας ξεχωριστές ομάδες ποντικών περιγράφονται.? (1) Hargreaves (αλγαισθητική δοκιμές) μελέτη, (2) Μελέτη Συμπεριφοράς και (3) προτίμησης θέσης (CPP) δοκιμή αποτελείται από ένα πιλοτικό δόση κυμαινόμενη έρευνα και στη συνέχεια μια κύρια μελέτη. Τα δεδομένα που λαμβάνονται σε μελέτες 1 και 2 ήταν από διερευνητικές μελέτες που αναλαμβάνονται από τους συναδέλφους της Βόρειας Ινστιτούτο Έρευνας για τον Καρκίνο (NiCr) χρησιμοποιώντας συγγενικά κύτταρα ΜΒΤ-2 (Mouse της ουροδόχου κύστης όγκων) που προέρχεται από C3H HeN J ποντίκια //(κύτταρα δωρεά από τον Καθηγητή Michael O’Donnell (Πανεπιστήμιο της Iowa, Iowa City, IA, USA) και ο Δρ William A. Larchian (ΕΜΗ /Cleveland Clinic του προστάτη Κέντρο, Κλίβελαντ, Οχάιο, ΗΠΑ)). Τα δεδομένα CPP ελήφθησαν από ποντικούς που λαμβάνεται ειδικά για τη δοκιμή. στόχοι του συναδέλφου μας ήταν? αρχικά για να χαρακτηρίσει το προφίλ ανάπτυξης του ορθοτοπικά εμφυτευμένων όγκων της ουροδόχου κύστης (μελέτη 1) και, στη συνέχεια, να τελειοποιήσει τη μεθοδολογία εμφυτεύματος (Μελέτη 2). Ωστόσο, οι δύο μελέτες ήταν μια ευκαιρία για να συλλέξει συμπληρωματικά στοιχεία σχετικά με παθολογικές επιδράσεις (ενδεχομένως συμπεριλαμβανομένων πόνου) που θα βοηθήσουν στο σχεδιασμό της κύριας μελέτης (CPP)? μειώνοντας έτσι τη χρήση ζώων στο χαμηλότερο δυνατό επίπεδο.

Hargreaves Μελέτη

Αυτή ήταν μια πιλοτική μελέτη που πραγματοποιήθηκε για τον καθορισμό των χαρακτηριστικών ανάπτυξης των ορθοτοπικά εμφυτευμένων κυττάρων ΜΒΤ-2 που θα ενημερώνουν σχετικά με την ενδεχόμενη σχεδιασμός της μελέτης CPP. μεγέθη του Ομίλου προσδιορίστηκαν από τους συναδέλφους NiCr με βάση τις απαιτήσεις της μελέτης τους. Οι ποντικοί χωρίστηκαν τυχαία σε τρεις ομάδες των 5 που υποβλήθηκε σε λαπαροτομία για ορθοτοπική εμφύτευση 100 μΙ του Dulbecco Αλατόνερο Ρυθμισμένο με Φωσφορικό (ϋΡΒδ), ή τον ίδιο όγκο DPBS που περιείχε 2 χ 10

4 ή 2 × 10

5 ΜΒΤ -2 κύτταρα. Μια τέταρτη ομάδα των 5 ποντικών αναισθησία μόνο μάρτυρες. Οκτώ ποντίκια που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση επελέγησαν τυχαία για να λάβουν 5 mg /kg μελοξικάμης (υποδόρια? S /c) για να ανακουφίσει μετεγχειρητικό πόνο [27], ενώ το υπόλοιπο έλαβαν φυσιολογικό ορό (0.3 mls s /c? Η = 7). Προκλήθηκε αναισθησία με 5% ισοφλουράνιο σε οξυγόνο (5 l /min.) Σε ένα θάλαμο Perspex. Τα ποντίκια στη συνέχεια να θέσει σε ραχιαία κατάκλιση σε ένα θερμαντικό κλινοσκέπασμα για να διατηρήσει τις θερμοκρασίες σώματος μεταξύ 34,5 και 37,5 ° C και η αναισθησία διατηρήθηκε με 1,5-2% ισοφλουράνιο σε οξυγόνο (500 ml /min.). Βάθος παρακολουθήθηκε με την παρατήρηση του αναπνευστικού τιμές και την τακτική αξιολόγηση αντανακλαστικά toe-τσίμπημα. Απλή οφθαλμική αλοιφή (Pliva Pharma Ltd., UK) χρησιμοποιήθηκε για να αποτρέψει την ξήρανση του κερατοειδούς. Χειρουργική ήταν 0,5 cm κεντρική τομή στο δέρμα και τους μυς που υπέρκειται της κύστης. Μόλις εκτεθεί, 0.1 ml φυσιολογικού ορού ή κατάλληλου εναιώρημα κυττάρου όγκου εγχύθηκε ενδομυϊκά στο τοίχωμα της ουροδόχου κύστης με χρήση σύριγγας ινσουλίνης. Οι κοιλιακοί μύες και το δέρμα έκλεισαν ξεχωριστά χρησιμοποιώντας 5/0 polyglactin 910 ( «Vicryl», Ethicon Ltd, Εδιμβούργο, Ηνωμένο Βασίλειο) και κόλλα ιστού ( «Nexaband», εργαστήρια Abbott, Σικάγο). Η αναισθησία διήρκεσε περίπου 10 λεπτά

Θερμική λανθάνουσες απόσυρση ελήφθησαν κατά την έναρξη, και στη 1 ώρα και 1 ημέρα (24 ώρες) μετά από χειρουργική επέμβαση, και στη συνέχεια τις ημέρες.? 3, 7, 10, 14, 17, 21 και 24 χρησιμοποιώντας την δοκιμή πέλματος (Model 37370? Ugo Basile, Ιταλία) σύμφωνα με τη μέθοδο του Hargreaves [51]. Τα ζώα τοποθετήθηκαν σε καθαρή ακρυλική θαλάμους σε ένα γυάλινο πάτωμα και εξοικειώθηκαν επί 10 λεπτά. Μια υπέρυθρη πηγή θερμότητας εναλλάξ εφαρμόζεται στα μέσα πελματιαία επιφάνεια κάθε οπίσθιου ποδιού (70% της μέγιστης ικανότητας θέρμανσης? Ισοδύναμη με 253 ± 7 mW /cm

2? 30 δευτερόλεπτα cut-off). Αυτό παρείχε ένα κατάλληλο εύρος από λανθάνουσες ανταποκρίσεις σε φυσιολογικά ποντίκια (~between 3 και 8 δευτερόλεπτα). Τρεις απαντήσεις ελήφθησαν από κάθε πίσω πόδι με ένα ελάχιστο διάστημα 1 λεπτού μεταξύ ομόπλευρο εγγραφές. Τα δεδομένα ελήφθησαν μόνο από τα ποντίκια ελέγχου αναισθησίας μέχρι την ημέρα 3, όταν είχαν κληθεί αλλού. Τα σωματικά βάρη καταγράφονταν καθημερινά έως την ημέρα 4, και στη συνέχεια στο nociceptive ημέρα δοκιμής. Καθώς οι όγκοι ήταν εσωτερικά, το στάδιο ανάπτυξης εκτιμήθηκε με καθημερινή ψηλάφηση από έναν έμπειρο τεχνικό που βαθμολογούνται όγκους σε μια κλίμακα 3 σημείο? από 1 (μόλις σήμερα) έως 3 (προφανείς χωρίς χειρισμό). Οι επιθεωρήσεις αυτές περιλαμβάνονται επίσης καταγραφή των δραστηριοτήτων που σχετίζονται με κοιλιακό πόνο στα τρωκτικά [21], [31] και άλλα σημάδια της κακής υγείας, όπως αιματουρία, λήθαργος, αφυδάτωση και φτωχών παλτό και την κατάσταση του σώματος.

Συμπεριφορά Μελέτη

Τα δεδομένα συμπεριφοράς συλλέχθηκαν ως μέρος μιας μελέτης παρακολούθησης (και πάλι χωρίς πρόσθετη χρήση ζώων) για να αξιολογηθεί μια δυνητικά πιο εκλεπτυσμένη μέθοδος εμφύτευσης κυττάρων [52] (μη χειρουργική). Οι συνάδελφοί μας ζητείται να διαπιστωθεί αν εμφύτευση του όγκου θα μπορούσε να βελτιωθεί με τη μέθοδο αυτή, ενώ θελήσαμε να αξιολογήσει τα μακροπρόθεσμα αποτελέσματα της αύξησης του καρκίνου στη συμπεριφορά. Όπως και πριν, τα μεγέθη της ομάδας είχαν προσδιοριστεί εκ των προτέρων? 20 ποντίκια που χορηγείται στην ομάδα DPBS και 20 στην ομάδα του όγκου. Προκλήθηκε αναισθησία όπως περιγράφηκε προηγουμένως, αλλά σε παρτίδες των 5 ποντικών χρησιμοποιώντας ένα σύστημα παροχής αερίου ανοικτού μάσκα παραγγελία. Η διαδικασία εμφύτευσης έχει ήδη περιγραφεί, αλλά εν συντομία, εκτιμάται η κύστη εκάστου ποντικού μέσω ενός 27 gauge σωληνίσκου παιδιατρικό τοποθετείται στην ουρήθρα. Ούρα ακυρώθηκαν με ήπια υπερ-ηβική πίεσης και αναρρόφησης, και το βλεννογόνο της κύστης ρυθμισμένο με ένα ήπιο έκπλυση οξύ (50 μΙ 0.1 Μ HCI) για 20 δευτερόλεπτα. Αυτό επίσης αναρροφάται και στη συνέχεια εξουδετερώθηκε με 50 μΙ 0,1 Μ ΚΟΗ, και τρία DPBS πλύσεις. Η κύστη άδειασε πριν την ενστάλαξη 50 μΐ 5 × 10

6 ΜΒΤ-2 κύτταρα ή ο ίδιος όγκος του DPBS μέσω μιας σύριγγας συνδεδεμένη με την ουρά. Η μεγαλύτερη συγκέντρωση των κυττάρων ήταν εν αναμονή μιας άγνωστης κλάσμα των κυττάρων να ακυρωθούν στα ούρα μετά την ανάκτηση. Τα κύτταρα αφέθηκαν

in-situ

για 30 λεπτά, μετά την οποία οι ποντικοί τοποθετήθηκαν σε έναν επωαστήρα στους 37 ° C για 20 λεπτά. Ημερήσια ανάπτυξη όγκου παρακολουθήθηκε όπως και πριν και τα βάρη σώματος καταγράφηκαν επίσης καθημερινά. Τα ποντίκια που γυρίστηκε ξεχωριστά για 10 λεπτά χρησιμοποιώντας μια βιντεοκάμερα (Sony DCR-HC96, Sony, Ιαπωνία) τοποθετείται σε ένα τρίποδο 30 cm από το μπροστινό μέρος του σαφούς »1284’cages (35 × 20 × 14 εκατοστά? Techniplast, UK Ltd) που περιέχει μόνο κρεβάτι (Aspen πριονίδι). Η διαδικασία για τη συλλογή δεδομένων συμπεριφορά ήταν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28] εκτός από το ότι ήταν σε εναλλασσόμενες ημέρες πριν από την ανίχνευση του όγκου, και στη συνέχεια καθημερινά. Τα γυρίσματα ήταν πάντα κατά τη διάρκεια της φάσης φωτός, αλλά η ώρα της ημέρας κάθε ποντίκι γυρίστηκε ήταν τυχαία εντός των ομάδων όγκου και ελέγχου.

κλιματισμός Μελέτες Τόπος Προτίμηση

Το έργο CPP διεξήχθη σε 2 στάδια. Η πρώτη ήταν μια πιλοτική μελέτη για να διερευνήσει την ανάπτυξη της CPP στη μορφίνη κάτω από επαναλαμβανόμενους κύκλους προετοιμασίας και δοκιμών, και να εντοπίσει μια δόση μορφίνης για την κύρια μελέτη CPP. Η επιλεγείσα δόση θα είναι αυτή που υποστηρίζεται μόνο μικρή θέση προτίμησης αλλά διατήρησαν επαρκείς ιδιότητες αναλγητικό για να εκμαιεύσει αρνητική ενίσχυση σε ποντικούς που φέρουν όγκο. Αριθμοί προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας μια αναδρομική ανάλυση τροφοδοσίας προηγούμενα αποτελέσματα μορφίνη CPP σε ένα ευρύ φάσμα ρυθμών δόσεων σε φυσιολογικούς ποντικούς (1 και 5 mg /kg s /c) [53] που θα πρέπει επίσης προκαλούν σημαντικές αναλγητικές δράσεις [54], [55] . Τα μεγέθη των δειγμάτων από 8 ή 10 είχαν εκ των υστέρων διαπιστώθηκε για την επίτευξη 79% ή 91% ισχύ για την ανίχνευση σημαντικής CPP σε ένα φάρμακο (3 ή 5 mg /kg μορφίνη) έναντι του εικονικού φαρμάκου-ζευγαρωμένα διαμέρισμα. Η συσκευή CPP αποτελούνταν από μαύρο (ράβδος χάλυβα δάπεδο) και το λευκό (χάλυβας πλέγμα πάτωμα) διαμερίσματα χωρίζονται από ένα γκρι (στερεό δάπεδο) θάλαμο ξεκινήσει. Χρησιμοποιήσαμε 4 όμοιες μονάδες δοκιμές (Med Associates, St Albans, Βερμόντ, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής? Μοντέλο CPP-3013AT) είναι εξοπλισμένα με αυτόματα ελεγχόμενη πόρτες γκιλοτίνα και τα φώτα. Διαμερίσματα στεγάζονται συστοιχίες υπέρυθρης ακτινοβολίας για να καταγράψει αυτόματα διαμέρισμα χρόνους παραμονής και τις κινήσεις εντός και μεταξύ των 3 διαμερισμάτων. Μια αρχική δοκιμή χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η βασική γραμμή διαμέρισμα προτίμηση του κάθε ζώου. Για το σκοπό αυτό είχαν τοποθετηθεί στο κεντρικό (γκρι) θάλαμο ξεκινήσει για 1 λεπτό πριν από την ενεργοποίηση των φώτων και ανοίγοντας τις πόρτες γκιλοτίνα. δοκιμή προτίμησης ήταν πάντα διεξήχθη μεταξύ 10 π.μ. και 14:00. Ο σχετικός χρόνος εξερεύνησης των μαύρο και άσπρο διαμερίσματα πάνω από ένα επόμενο 15 λεπτά δίκη που υπολογίζεται ως ποσοστό του συνολικού χρόνου της δοκιμής (βλέπε CPP ενότητα ανάλυσης δεδομένων). Τα ποντίκια έχουν ανατεθεί για την S + (φυσιολογικό ορό ή μορφίνη) κλιματισμού στο διαμέρισμα στο οποίο ξόδεψαν αναλογικά το λιγότερο χρονικό διάστημα (δηλαδή μη-προτιμώμενη θάλαμο τους), αλλά όχι τα ποντίκια έδειξε αναλογικές αρχικές προτιμήσεις διαμέρισμα που υπερβαίνει το 0,6 (τα CPP λεπτομέρειες τμήμα ανάλυσης η μέθοδος υπολογισμού προτίμησης). Ο σχεδιασμός ήταν τότε αντισταθμίζεται έτσι ώστε η αρχική προτίμησή σχετική ομάδα προσεγγίζονται όσο το δυνατόν σε 0,5 (δηλαδή ίσο αριθμό ανατέθηκαν ανά ομάδα στο μαύρο (Β) ή λευκό (W) S + επιμελητήρια). Σε αυτή τη βάση οκτώ ποντίκια που είχαν διατεθεί για κάθε μία από 2 ομάδες μορφίνης που καλύπτουν το πιθανό εύρος των πραγματικών συντελεστών αναλγητική δόση (1 ή 5 mg /kg s /c) και μια αντιπροσωπευτική ομάδα από 4 ποντίκια ήταν φυσιολογικού ορού. Μόλις φτάσαμε στο στάδιο των δοκιμών του καρκίνου γνωρίζαμε την παραδοσιακή προσέγγιση CPP των επαναληπτικών δοκιμών κλιματισμού που ακολουθείται από ένα ενιαίο τεστ προτίμησης δεν θα ήταν κατάλληλη. Αυτό ήταν επειδή εάν συμβεί πόνο? θελήσαμε επίσης να συλλάβει εμφάνιση του. Ενημερώνεται από αυτό, όλες οι δοκιμές CPP (συμπεριλαμβανομένου στην πιλοτική μελέτη) αποτελείτο από επαναλαμβανόμενες μπλοκ 3 ημέρες, με κάθε μπλοκ περιλαμβάνει 2 ημέρες προσαρμογής πριν από ένα τεστ προτίμηση χωρίς φάρμακο κάθε επόμενη ημέρα (που φαίνεται στο Σχήμα 1). Για την πιλοτική μελέτη οι 4 μάρτυρες έλαβαν μόνο αλατούχο διάλυμα (0.03 mls s /c) στο πλαίσιο τόσο του S- και S + συνθήκες. Λόγω των πιθανών μορφίνη «μεταφοράς» να απόγευμα S + δοκιμές ήταν απαραίτητο αυτό το όχημα (S-) ενέσεις χορηγούνται πάντοτε το πρωί και S + (μορφίνη ή αλατούχο διάλυμα) το απόγευμα. Η μορφίνη ελήφθη ως διάλυμα θειικής μορφίνης (30 mg /ml? NHS Είδη, UK) και αραιώθηκε κατάλληλα με ύδωρ για ένεση (WFI) που πρόκειται να χορηγηθεί υποδορίως σε έναν όγκο 0,03 mls. Όλες οι ενέσεις δόθηκαν αμέσως πριν από την τοποθέτηση στην κατανέμονται B ή W διαμέρισμα για μια περίοδο 45 λεπτών κλιματισμού με γκιλοτίνα πόρτες κλειστές. Τα ποντίκια επέστρεψε στο σπίτι-κλουβιά τους αμέσως μετά από κάθε συνεδρία κλιματισμού. Τέσσερις διαδοχικές δοκιμές προτίμησης έγιναν για την πιλοτική μελέτη (4 μπλοκ τεστ? Σχήμα 1). Ακριβώς μετά από τη μέθοδο που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της αρχικής προτίμησης διαμέρισμα

Οι διαδοχικές μπλοκ ήταν κάθε δύο ημερών κλιματισμού, όπου τα ποντίκια υποβλήθηκαν το πρωί S- (φυσιολογικό ορό) και, στη συνέχεια, θεραπείες απόγευμα S + (μορφίνη ή φυσιολογικό ορό) και περιορίζονταν για 45 λεπτά στο μαύρο ή λευκό θάλαμο. Η τρίτη ημέρα του κάθε μπλοκ ήταν ένα φάρμακο δωρεάν τεστ προτίμησης, και τον κύκλο τριών ημερών επαναλήφθηκε μέχρι την ευθανασία.

Η

Η κύρια έρευνα CPP ξεκίνησε με μια επανάληψη των αρχικών δοκιμών προτίμησης. Κάθε ποντικός ανατεθεί μια Β ή W διαμέρισμα για επακόλουθη S- /S + κλιματισμού στο προηγουμένως περιγραφέντα τρόπο (εξισορρόπησης αριθμοί αρχικά προτιμώντας το Β ή W διαμέρισμα μεταξύ των ομάδων ελέγχου και όγκου). Όπως και πριν, οι ποντικοί αποδόθηκαν σε αρχικά μη προτιμώμενο διαμέρισμα τους όσο το δυνατόν περισσότερο. ποντίκια όγκου και πάλι εμφυτεύεται μέσω της ουρήθρας με 50 μλ DPBS που περιείχε 5 × 10

6 MBT-2 κύτταρα. Τριάντα ποντικοί ορθοτοπικά εμφυτεύτηκαν καρκινικά κύτταρα και δέκα ήταν αλατούχο μάρτυρες. Οι αριθμοί αυτοί ενημερώθηκαν από τα προηγούμενα ευρήματά μας σχετικά με τον αριθμό των αποτυχιών του μοσχεύματος μετά την εμφύτευση της ουρήθρας. Έχουμε προγραμματιστεί για την εξισορρόπηση του σχεδιασμού (και την περαιτέρω χρήση των ζώων κομπόστα) με την ανάθεση τέτοιου είδους αποτυχίες για τον έλεγχο των ομάδων, αλλά μόνο αν δεν υπήρχαν ψηλαφητή ή άλλα σημεία της ανάπτυξης του όγκου μετά από 21 ημέρες. απουσία όγκου επιβεβαιώθηκε επίσης

μετά τη σφαγή.

Μόλις οι κλινικές επισκοπήσεις επιβεβαίωσαν την ανάπτυξη του όγκου, κάθε ποντίκι άρχισε CPP κλιματισμού και μια θεραπεία ταιριάζουν ελέγχου μη-όγκου εισήλθαν στην μελέτη ταυτόχρονα. Η 3 ημέρες σειρά του κλιματισμού και δοκιμής συνεδρίες, στη συνέχεια, συνεχίστηκε μέχρι υποβλήθηκαν σε ευθανασία ποντίκια (βλέπε παράγραφο σχετικά με τον προσδιορισμό του τελικού σημείου). Ως εκ τούτου, πειραματικές ομάδες σχημάτισε 2 (ναρκωτικά) × 2 (θεραπεία) παραγοντικό σχεδιασμό που συνδυάζεται κλιματισμού με τη μορφίνη ή αλατούχο διάλυμα 0,9% σε όγκο ή μη-καρκινικά ποντίκια. Έχουμε επιλέξει μια ενδιάμεση δόση μορφίνης (2 mg /kg s /c) για την κύρια μελέτη με βάση τα ευρήματα της πιλοτικής μελέτης. Στην υπόθεση της κύριας δοκιμές προτίμησης μελέτη CPP ήταν επίσης 45 αντί για 15 λεπτά, αλλά η μεθοδολογία ήταν διαφορετικά πανομοιότυπη με εκείνη που χρησιμοποιείται στην πιλοτική μελέτη. Λόγω των χρονικών περιορισμών και των δυνατοτήτων συγχυτικός παράγοντας της τοποθέτησης σε άλλα άγνωστα περιβάλλοντα (αποτελεσματικά άλλα «σημεία»), οι εκτιμήσεις της συμπεριφοράς και υπεραλγησία δεν είχε αναληφθεί η μελέτη CPP προχωρήσει. Ωστόσο, η επίδραση της θεραπείας αναλγητικών προχωρημένου σταδίου για τη συμπεριφορά αξιολογήθηκε ως πιθανή επιλογή βελτίωσης. Αυτό σημαίνει ότι για την ευθανασία ημέρες ποντίκια γυρίστηκαν για 20 λεπτά πριν και μετά την ένεση της δόσης κλιματισμού της μορφίνης (2 mg /kg s /c) και ταυτόσημες ηχογραφήσεις έγιναν από ίσο αριθμό των ελέγχων κατά την τελευταία ημέρα της μελέτης.

Τέλος-σημείο αποφασιστικότητα

Κλινικές επιθεωρήσεις πραγματοποιήθηκαν σε όλες τις μελέτες για να καθοριστεί εάν τα ποντίκια που φέρουν όγκους που απαιτούνται για να αποσυρθεί. Αυτά ήταν, σύμφωνα με τις δημοσιευμένες κατευθυντήριες γραμμές [10], [11], καθώς και με τη συμβουλή του εξαιρετικά έμπειρο προσωπικό φροντίδας των ζώων. Ευθανασία ήταν αναπόφευκτη στιγμή που τα ζώα είχαν μια μεγάλη ψηλαφητό όγκο ή περισσότερο από 15% απώλεια σωματικού βάρους, και αν κάποιο από αυτά συνέπεσαν με σημαντικές αιματουρία (υποδεικνύεται από το αίμα βάφονται γούνας και /ή κρεβάτι). Όλα τα ποντίκια, συμπεριλαμβανομένων των ελέγχων υπέστη ψηλάφηση. Είχαν συγκρατείται με τον τρόπο που είναι συνήθης για ενδοπεριτοναϊκή ένεση. Η περιοχή της ουροδόχου κύστης στη συνέχεια ήπια ψηλάφηση μεταξύ του αντίχειρα και του δείκτη, αλλά με αρκετή πίεση για να καθορίσει το συντομότερο χρόνο έναρξης της ανάπτυξης του όγκου όσο το δυνατόν πιο αξιόπιστα.

Δεδομένα

Ανάλυση

μελέτης Hargreaves.

Όπως λανθάνουσες απάντηση ήταν αρχικά παρόμοια μεταξύ του αριστερού και του δεξιού οπισθίου πόδια, όλες οι τιμές ήταν κατά μέσο όρο για τον υπολογισμό της συνολικής μέσης καθυστέρηση απόκρισης σε κάθε χρόνο εγγραφής. Τα στοιχεία που πληρούν τις προϋποθέσεις για παραμετρική ανάλυση τόσο εξετάστηκαν με τη χρήση επαναλαμβανόμενων μετρήσεων ANOVA με «Ώρα» (10 επίπεδα) και «Όμιλος» (4 επίπεδα? 2 × όγκου? 1 × εικονικό φάρμακο και μόνο αναισθησία) και εντός και μεταξύ των υποκειμένων παραγόντων αντίστοιχα .

Η post-hoc

μεμονωμένα επίπεδα χρόνο και συγκρίσεις ομάδα έγιναν και πιθανότητα προσαρμόζεται αναλόγως (

Bonferroni

). Οι αλλαγές του σωματικού βάρους επίσης υπολογίζεται ως μεταβολή από την αρχική και τις ίδιες στατιστικές μέθοδοι που εφαρμόζονται. Για μεγαλύτερη σαφήνεια, οι αλλαγές του βάρους απεικονίζεται ως απόλυτες τιμές σε κάθε χρονικό σημείο. Λόγω της απουσίας αλγαισθητικής δεδομένα στα ποντίκια μάρτυρες μη-χειρουργική επέμβαση μετά από την ημέρα 3 και το σωματικό βάρος των δεδομένων μετά την ημέρα 4 Όλες οι αναλύσεις εξής αυτοί οι χρόνοι περιλαμβάνονται μόνο τις ομάδες χειρουργική επέμβαση. Τέλος, τα αποτελέσματα της προ-χειρουργική μελοξικάμης εξετάστηκαν με σύγκριση λανθάνουσες βασική απάντηση στο 1 σημείο μίας ώρας στο ANOVA? αλλά με «προ-θεραπεία» (μελοξικάμη ή φυσιολογικό ορό) ως ένα μεταξύ παράγοντα υποκειμένου (n = 7 (Saline) έναντι n = 8 (μελοξικάμης)).

μελέτη συμπεριφοράς.

Η συμπεριφορά δεδομένα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας HCS αυτοματοποιημένο λογισμικό ανάλυσης. Τα μέτρα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν συνολική διανυόμενη απόσταση και πέντε συμπεριφορά τάξεις που περιλαμβάνουν διάφορα στοιχεία από τις 20 ατομικές συμπεριφορές αναγνωρίζεται το σύστημα. Αυτά ήταν: 1) εκτροφής (η οποία περιλαμβάνει «Πίσω Up» (τόσο μερικής και πλήρους δίποδα επέκταση) & amp? Η αμοιβαία δραστηριότητα «Ελάτε Down»)? 2) Ενεργός συμπεριφοράς (συμπεριλαμβανομένης περπάτημα, το τρέξιμο, το άλμα και αναρρίχηση)? 3) Κοιλιακή Καλλωπισμός, και 5) Ανάπαυση (ανενεργές περίοδοι). Έχουμε συνόψισε τις εμφανίσεις των συμπεριφορών μέσα σε κάθε κατηγορία, όπως το σχετικό μέγεθος των στοιχείων της κατηγορίας ήταν επαρκώς ομοιόμορφη. π.χ.