Οι

Αφηρημένο

Η σωματοστατίνη υποδοχείς (ssts) εκφράζονται στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα, αλλά βιολογική σημασία τους δεν είναι καλά κατανοητή. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί ssts σε καλά διαφοροποιημένα (WDTC) και κακώς διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς (PDTC) μέσω απεικόνισης και μοριακών εργαλείων και η σχέση της με την αποτελεσματικότητα του αναλόγου σωματοστατίνης θεραπείας. Τριάντα εννέα περιπτώσεις καρκίνου του θυρεοειδούς αξιολογήθηκαν (20 PDTC και 19 WDTC). Depreotide σπινθηρογράφημα και τα επίπεδα mRNA του SST-υποτύπους, συμπεριλαμβανομένου του κόλουρου παραλλαγή sst5TMD4, διεξήχθησαν. Depreotide σαρώσεις ήταν θετικά στην υποτροπιάζοντα όγκο στο λαιμό σε 6 από 11 (54%) PDTC, και σε εκείνους με τις πνευμονικές μεταστάσεις σε 5/11 περιπτώσεις (45,4%)? sst5TMD4 ήταν παρούσα σε 18/20 (90%) της PDTC, είναι η πιο πυκνά εκφράζεται SST-υποτύπου, με 20-πλάσια αύξηση σε σχέση με sst2. Σε WDTC, sst2 ήταν η πιο εκπροσωπείται, ενώ sst5TMD4 δεν βρέθηκε? sst2 ήταν σημαντικά αυξημένη σε PDTC σε σύγκριση με WDTC. Πέντε depreotide θετική PDTC έλαβε οκτρεοτίδη για 3-6 μήνες σε μια πιλοτική μελέτη χωρίς αλλαγές στο μέγεθος των βλαβών σε 3 από αυτά, και μια σημαντική αύξηση στην πνευμονική και τραχηλικών βλαβών στα άλλα 2. Όλοι οι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία PDTC με οκτρεοτίδη έδειξε υψηλή έκφραση sst5TMD4. ανάλυση καμπύλης ROC έδειξε ότι μόνο sst5TMD4 διακρίσεις μεταξύ PDTC και WDTC. Καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι sst5TMD4 υπερεκφράζεται σε PDTC και μπορεί να εμπλέκεται στην έλλειψη ανταπόκρισης σε ανάλογο σωματοστατίνης θεραπεία

Παράθεση:. Puig-Domingo Μ, Luque RM, Reverter JL, López-Sánchez LM, Gahete MD, Culler MD, et al. (2014) η κολοβωμένη ισομορφή σωματοστατίνη Receptor5 (sst5TMD4) συνδέεται με κακώς διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς. PLoS ONE 9 (1): e85527. doi: 10.1371 /journal.pone.0085527

Επιμέλεια: Miguel López, Πανεπιστήμιο του Santiago de Compostela της Ιατρικής Σχολής – CIMUS, Ισπανία

Ελήφθη: 13 Σεπτεμβρίου 2013? Αποδεκτές: 28 Νοεμβρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 21 Ιανουαρίου, 2014

Copyright: © 2014 Puig-Domingo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση: Μ. Puig-Domingo, JP Castaño, RM Luque και Ι Χαλπερίν έχουν λάβει διαλέξεις αμοιβές από τη Novartis και Ipsen. Μ Puig-Domingo έχει λάβει αμοιβές για συμμετοχή σε συμβουλευτικές επιτροπές από την Genzyme. Το έργο αυτό έχει χρηματοδοτηθεί από τις ακόλουθες ενισχύσεις: ΒΙΟ-0139, CTS-5051, PI-036-2012, BFU2010-19300, CIBERobn, (για να Κ.Μ. Luque και J.P. Castaño)? Πρόγραμμα «Sara Borrell» CD11 /00276 (για να M.D. Gahete) και το πρόγραμμα «Juan de la Cierva» JCI-2009 έως 05675 (για Ε.Μ. López-Sánchez). Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από την Novartis Oncology Ισπανία (με την Μ Puig-Domingo και Ι Χαλπερίν). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Μ. Puig-Domingo, J. Ρ Castaño, Κ.Μ. Luque και Ι Χαλπερίν έχουν λάβει διαλέξεις αμοιβές από τη Novartis και Ipsen. Μ Puig-Domingo έχει λάβει αμοιβές για συμμετοχή σε συμβουλευτικές επιτροπές από την Genzyme. Το έργο αυτό έχει χρηματοδοτηθεί από τις ακόλουθες ενισχύσεις: ΒΙΟ-0139, CTS-5051, PI-036-2012, BFU2010-19300, CIBERobn, (για να Κ.Μ. Luque και J.P. Castaño)? Πρόγραμμα «Sara Borrell» CD11 /00276 (για να M.D. Gahete) και το πρόγραμμα «Juan de la Cierva» JCI-2009 έως 05675 (για Ε.Μ. López-Sánchez). Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από την Novartis Oncology Ισπανία (με την Μ Puig-Domingo και Ι Χαλπερίν). Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

καρκίνος του θυρεοειδούς στα θηλώδη και θυλακιώδη καλά διαφοροποιημένες μορφές (WDTC) έχουν εξαιρετική πρόγνωση με πολύ υψηλά ποσοστά ίασης μετά από χειρουργική θεραπεία που ακολουθείται από ραδιενεργό ιώδιο [1], [2]. Ωστόσο, η διαχείριση των ασθενών με ελάχιστα διαφοροποιημένα (PDTC) ραδιενεργού ιωδίου (RAI) -refractory καρκίνο του θυρεοειδούς είναι αμφιλεγόμενο και δύσκολο, χωρίς αποτελεσματική θεραπεία διαθέσιμη μέχρι την πρόσφατη εμφάνιση των αναστολέων της κινάσης της τυροσίνης πολλαπλών στόχων [3]. Είναι συνήθως αποδεκτό ότι συμβαίνει PDTC είτε

de novo

ή την πρόοδο από μια προϋπάρχουσα WDTC μέσω μιας διαδικασίας πολλών σταδίων γενετικών και επιγενετικών αλλαγών. Νέων μοριακών μονοπατιών και οι στόχοι είναι υπό έρευνα για να ανακαλύψουν τη διαδικασία αποδιαφοροποίηση του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων [4].

Η σωματοστατίνη είναι ένα πανταχού παρόν πεπτίδιο από το κεντρικό νευρικό σύστημα, το γαστρεντερικό σωλήνα που ασκεί πολλές βιολογικές λειτουργίες και στις δύο ενδοκρινείς και μη -endocrine ιστούς με δέσμευση σε πέντε υποτύπους υποδοχέα της (sst1-5) [5]. Η έκφραση των υποδοχέων σωματοστατίνης (ssts) σε όγκους που προκύπτουν από διαφορετικούς ιστούς υπήρξε η βάση της χρήσης ανάλογα σωματοστατίνης ως ένα βιο-θεραπευτική επιλογή οδηγώντας έτσι σε σταθεροποίηση της ανάπτυξης του όγκου και αύξηση του χρόνου επιβίωσης των ασθενών σε ορισμένους τύπους καρκίνου [6], [7 ]. Πρόσφατες μελέτες και παλιές υποδεικνύει την παρουσία ssts σε δείγματα διαφορετικών παθολογικών καταστάσεων του θυρεοειδούς αδένα, συμπεριλαμβανομένων των μη μυελοειδούς καρκίνου του θυρεοειδούς [8], [9]

Η οικογένεια υποδοχέων SST έχει χαρακτηριστεί πλήρως, και κλασικά, οι 5 υπότυποι έχουν ταυτοποιηθεί με διαφορετικές βιολογικές επιπτώσεις σε κυτταρικό κύκλο [8]. Οι Sst υπότυποι 2 και 5 που εμπλέκονται στον έλεγχο της έκκρισης ορμονών, καθώς και την ανάπτυξη των κυττάρων, ενώ sst1, 3 και 4 κυρίως εμπλέκονται στην μη-ορμονικό λειτουργίες [10] – [12]. ανάλογο σωματοστατίνης θεραπείες που χρησιμοποιούνται στην κλινική πρακτική περιλαμβάνουν δέσμευση του sst2 και 5 με διαφορετική χημική συγγένεια [13], [14], με sst2 έχει την συγγένεια δέσμευσης με το χρησιμοποιούμενο πλέον σήμερα ενώσεις, οκτρεοτίδη και η λανρεοτίδη [15] μέγιστη, ενώ πασιρεοτίδη είναι ένα νέο ένωση στόχευση sst5 με υψηλότερη συγγένεια [16], [17]. Πρόσφατα, δύο νέες λειτουργικές παραλλαγές ανθρώπινης sst5 έχουν αναγνωριστεί, το λεγόμενο sst5TMD4 και sst5TMD5, δημιουργούνται μέσω μη κανονικά μάτισμα, και εμφανίζοντας μοναδική μοριακή /λειτουργικά χαρακτηριστικά [18], [19]. Είναι ενδιαφέρον, sst5TMD4 έχει ανιχνευθεί σε ασθενείς με GH έκκρισης αδενωμάτων και καρκίνου του μαστού [19] – [21]. έκφραση sst5TMD4 έχει συνδεθεί με την κακή ανταπόκριση στη θεραπεία οκτρεοτίδης σε ακρομεγαλία. Ωστόσο, λειτουργική σημασία του δεν είναι καλά περιγράφεται στο άλλο είδος των όγκων.

Εδώ, πραγματοποιήσαμε μια αναδρομική μελέτη σε μοριακό επίπεδο για να εξερευνήσετε την πιθανή συσχέτιση της SST υποτύπους φαινότυπο, και ιδιαίτερα sst5TMD4, σε WDTC και PDTC ασθενών, πιθανή χρήση του ως ένα βιολογικό δείκτη και θεραπευτικές επιπτώσεις της.

Υλικά και Μέθοδοι

Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις αρχές της Διακήρυξης του Ελσίνκι, (αναθεώρηση του Εδιμβούργου το 2000) και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ερευνών του Ανθρώπου Δεοντολογίας του Hospital Clinic de Barcelona (Comité Ético de Investigación Clínica, CEIC), Βαρκελώνη, Ισπανία. Η φύση της μελέτης εξηγήθηκε στους ασθενείς, και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε σε κάθε περίπτωση.

Ασθενείς

Η ομάδα μελέτης αποτελούνταν σε 39 ασθενείς (29 γυναίκες /10 άνδρες) από δύο πανεπιστημιακά νοσοκομεία. Μεταξύ αυτών των 39 άτομα, 20 ασθενείς είχαν PDTC (πίνακας 1) με μέση ηλικία 57 ± 13 ετών, (12 γυναίκες /8 άνδρες)? από τις 20 PDTC περιπτώσεις, 18 ήταν θηλώδη καρκινώματα και 2 ήταν ωοθυλακίων προέλευσης. Όλα είχαν ενεργό νόσο (στάδιο IV της ταξινόμησης ΤΝΜ), με παρακολούθηση που κυμαίνονται από 6 έως 21 ετών και 9 από αυτούς έχασαν τη ζωή τους κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης. Οι συγκεντρώσεις θυρεοσφαιρίνης σε αυτούς τους ασθενείς κυμαινόταν από 4 έως 29595 ng /ml. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ένα παρόμοιο θεραπευτικό πρωτόκολλο ακόλουθες διεθνείς συστάσεις κατευθυντήρια γραμμή [1], [2]. Εκείνοι οι ασθενείς που φέρουν PDTC απαιτούνται πολλαπλές χειρουργικές επεμβάσεις, όταν ενδείκνυται και περισσότερες από μία δόση της RAI? θεραπείας RAI δεν χρησιμοποιείται πλέον, όταν η πρόσληψη RAI έγινε αρνητική, παρά την εξέλιξη της νόσου. PDTC ασθενείς έλαβαν θεραπεία με θυροξίνη σε κατασταλτική δόσεις, ενώ καλά διαφοροποιημένο περιπτώσεις έλαβε θυροξίνης σε δόση στόχευσης TSH μια κανονική-χαμηλή τιμή (& lt? 2 mIU /ml). All PDTC περιπτώσεις παρουσίασαν αρνητική ικανότητα παγίδευσης της RAI κατά τη διάρκεια της εξέλιξής τους και είχαν όλοι τοποπεριοχική υποτροπή στον αυχένα ή /και extracervical μεταστάσεις, είτε στο κεντρικό νευρικό σύστημα, τα οστά, τους πνεύμονες ή το μεσοθωράκιο ανιχνεύεται από διαφορετικές διαδικασίες απεικόνισης, συμπεριλαμβανομένων υπερηχογράφημα, αξονική τομογραφία, μαγνητική τομογραφία, και

18F-FDG-PET σάρωση. Προκειμένου να συμμετάσχουν σε μια πιλοτική μελέτη στην οποία θα χορηγηθεί ανάλογο σωματοστατίνης οκτρεοτίδιο, σε 11 από αυτούς τους 20 ασθενείς, ένας

99mTc-depreotide σπινθηρογράφημα διεξήχθη για την αξιολόγηση της παρουσίας SST στην υπολειμματική πρωτογενή ιστό του όγκου και των μεταστάσεων. Πέντε από τους 11 ασθενείς στους οποίους η

99mTc-depreotide σπινθηρογράφημα έδειξε μια θετική εικόνα του υπολειμματικού πρωτογενούς όγκου και /ή μεταστατικό ιστό και προοδευτική ασθένεια με κριτήρια RECIST έλαβαν θεραπεία με το μακράς δράσης της σωματοστατίνης αναλογική οκτρεοτίδη σε δόσεις των 30 mg ΔΥ /μήνα για μια περίοδο 3-6 μηνών κατά τη διάρκεια του 2007 και του 2008 (Πίνακας 1)

Η

το υπόλοιπο 19 από τους 39 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη αποτέλεσε την ομάδα ελέγχου.? όλοι είχαν καλά διαφοροποιημένη όγκων, είναι απαλλαγμένες από τη νόσο κατά το χρόνο της μελέτης και προφανώς θεραπεύτηκαν μετά την πρώτη και μοναδική θεραπεία πραγματοποιείται κατά τη στιγμή της διάγνωσης, η οποία συνίσταται στην ολική θυρεοειδεκτομή που ακολουθείται από 100 mCi της RAI δίδεται 3 μήνες μετά την επέμβαση. Η μέση ηλικία αυτής της ομάδας ήταν 48 ± 8 ετών (10 άνδρες και 10 γυναίκες).

τεχνικές απεικόνισης

99mTc-depreotide σπινθηρογραφήματα διεξήχθησαν σε 11 από 20 ασθενείς που φέρουν PDTC ( Τραπέζι 1). Depreotide είναι μια σύνδεση προς SSTR 2, 3, και 5 στις κυτταρικές επιφάνειες, πιο αποτελεσματικά από ό, τι η οκτρεοτίδη ραδιοεπισημασμένες ενώσεις ανάλογο σωματοστατίνης. Όλοι οι ασθενείς ήταν σε ορμονική κατασταλτική θεραπεία με θυροξίνη όταν διεξήχθησαν οι διαδικασίες απεικόνισης.

99mTc-depreotide παρασκευάστηκε από ένα εμπορικά διαθέσιμο kit (NeoSpect®? Amersham Υγείας, Buckinghamshire, Ηνωμένο Βασίλειο). Η IV-ένεση δόση ανά ασθενή ήταν 740 MBq (50 μg πεπτίδιο) του

99mTc-depreotide. Σπινθηρογραφική απεικόνιση αποκτήθηκε με μια φωτογραφική μηχανή γάμα διπλό κεφάλι και κατευθυντήρα υψηλής ανάλυσης.

99mTc-depreotide εικόνες λήφθηκαν σε 1 ώρα και 3 ώρες μετά την ένεση. Διεξήχθησαν επίπεδη εξαγορές του συνόλου του σώματος και μόνο φωτονίου υπολογιστική τομογραφία εκπομπής (SPECT) του κεφαλιού, του λαιμού, του θώρακα και την κοιλιά. Προκειμένου να αξιολογηθεί υπερμεταβολικές δραστηριότητα του όγκου,

18F-FDG-PET σαρώσεις επιπροσθέτως λαμβάνονται σε 1 ώρα μετά την ένεση ίν 370 MBq 18F-FDG χρήση εξειδικευμένου πλήρους δακτυλίου σαρωτής ΡΕΤ, με μια αξονική οπτικό πεδίο του 15,2 cm και μια μέγιστη ανάλυση 3,8 mm που transaxially και 4,0 mm αξονικά.

έκφραση ssts σε ιστό καρκίνου του θυρεοειδούς και της κανονικής θυρεοειδούς αδένα

Προσδιορισμός ssts έκφρασης με ποσοτική πραγματικού χρόνου RT-PCR (qrtRT -PCR) διεξήχθη σε όγκο ενσωματωμένες σε παραφίνη δείγματα όλων WDTC και PDTC ασθενείς. Σε PDTC ασθενείς, ελήφθησαν δείγματα κατά το χρόνο της χειρουργικής reintervention για την προαγωγή κατάσταση ασθένειας από καρκινικό ιστό του τραχήλου της μήτρας υποτροπής σε όλες τις περιπτώσεις. Επιπλέον, δείγματα φυσιολογικού θυρεοειδούς αδένα (n = 7) που λαμβάνεται από τον όγκο Βιοτράπεζα των Γερμανών Trias Νοσοκομείο και από ένα σύνολο δειγμάτων του φυσιολογικού θυρεοειδούς αδένα που λαμβάνεται στο Πανεπιστήμιο της Κόρδοβα συμπεριλήφθηκαν επίσης στην μελέτη. Συγκεκριμένα, τα δείγματα όγκου και κανονικής θυρεοειδούς (4 τμήματα του πάχους 5 μm) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για ανάκτηση του συνολικού RNA χρησιμοποιώντας το RNeasy FFPE Kit, με θεραπεία ϋΝΑάση (Qiagen, Βαρκελώνη, Ισπανία). Λεπτομέρειες του RNA ποσοτικού προσδιορισμού, αντίστροφης μεταγραφής (RT? 1 μg ολικού RNA) και qrtRT-PCR για όλους τους SST-υποτύπων έχουν προηγουμένως αναφερθεί λεπτομερώς 18,22. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι ένα ειδικό πρότυπο καμπύλη για κάθε μεταγράφημα διεξήχθη με κάθε σειρά δειγμάτων για την εκτίμηση του αριθμού αντιγράφων. Σύνολο RNA δείγματα που δεν είχαν αντίστροφη μεταγραφεί έτρεξαν για τον έλεγχο για γονιδιωματική και /ή τεχνικές μόλυνση DNA (φόντο). Για τον έλεγχο για τις διακυμάνσεις στην ποσότητα του RNA που χρησιμοποιείται στην αντίδραση RT και την αποτελεσματικότητα της αντίδρασης RT, το επίπεδο έκφρασης (αριθμός αντιγράφων) 3 γονίδια housekeeping (αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης – GAPDH, β-ακτίνη και 18S) ήταν προσδιορίστηκε για κάθε δείγμα όπως αναφέρθηκε προηγουμένως (19,20). GeNorm® 3.3 οπτική βασική εφαρμογή για το Microsoft Excel® (https://medgen.ugent.be/jvdesomp/genorm) [23] χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της σταθερότητας των γονιδίων καθαριότητας. Οι γεωμετρικοί μέσοι των αριθμών αντιγράφου για GAPDH και β-ακτίνης σε κάθε δείγμα χρησιμοποιήθηκαν ως μια τελική παράγοντας κανονικοποίησης (NF). Τα αποτελέσματα στη συνέχεια αναφέρονται ως αριθμός αντιγράφων SST μείον φόντο διαιρείται με το αντίστοιχο ΝΤ.

Η ανταπόκριση στη θεραπεία οκτρεοτίδη

Μια υποομάδα ασθενών PDTP ανθεκτική στη θεραπεία με ραδιενεργό ιώδιο, προοδευτική ασθένεια από ακτινολογικές κριτήρια και θετική depreotide σαρώσεις έλαβαν θεραπεία οκτρεοτίδη για 3-6 μήνες σε ένα πιλοτικό συμπονετική πρωτόκολλο αποδεκτή από τους ασθενείς και την επιτροπή δεοντολογίας του νοσοκομείου (Πίνακας 1). Η αποτελεσματικότητα αξιολογήθηκε μέσω των κριτηρίων RECIST (https://www.recist.com/index.html) και σύμφωνα με ssts υποτύπους.

Η στατιστική ανάλυση και λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη (ROC) καμπύλη της έκφρασης ssts

κατηγορικά δεδομένα περιγράφονται χρησιμοποιώντας συχνότητες και ποσοστά. Για τις ποσοτικές μεταβλητές, μέτρα κεντρικής τάσης και διασποράς (μέσος όρος και τυπική απόκλιση) παρέχονται.

Διμεταβλητά ανάλυση των κύριων μεταβλητών πραγματοποιήθηκε με τη χρήση 2 × 2 πίνακες συνάφειας με το τεστ χ2 για την αξιολόγηση σημαντικές διαφορές στις συχνότητες για κατηγορικά μεταβλητές. Η παραμετρική t-test χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνει τα ποσοτικά στοιχεία. Σε αυτές τις ποσοτικές μεταβλητές δεν κατανέμονται κανονικά και δοκιμασία U του μη-παραμετρικού Mann Whitney χρησιμοποιήθηκε όταν ενδείκνυται.

Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου για Κοινωνικές Επιστήμες (SPSS) έκδοση 17.0 (SPSS®, Σικάγο, IL, USA). Θεωρήσαμε p & lt? 0,05 για να είναι στατιστικά σημαντική

ROC (Receiver Operating Χαρακτηριστική) πραγματοποιήθηκε για την αξιολόγηση των διαγνωστικών τεστ ευαισθησίας και ειδικότητας.. Χρησιμοποιήθηκε ως εργαλείο για τη μέτρηση πόσο καλά η έκφραση του ssts μπορούσε να διακρίνει μεταξύ των δύο διαγνωστικών ομάδων (ασθενείς με ενεργή νόσο /ασθενείς χωρίς νόσο). Η στατιστική ανάλυση των καμπυλών ROC πραγματοποιήθηκε υπολογίζοντας το εμβαδόν υπό την καμπύλη (AUC) του κάθε υποδοχέα, και συγκρίνοντας τα με την AUC της γραμμής αναφοράς χρησιμοποιώντας φοιτητή-t test.

Αποτελέσματα

Ssts σε φτωχά διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς από

99mTc-depreotide απεικόνισης

στις 11 ασθενείς (5 άνδρες και 6 γυναίκες) από την PDTC ομάδα στην οποία έγινε μια

99mTc-depreotide, 9 έδειξε τραχήλου της μήτρας τοπική-περιοχική υποτροπή και όλα τα παρουσίασε μεταστάσεις του μεγέθους διαφορά στους πνεύμονες ή στα οστά ταυτοποιούνται είτε με αξονική τομογραφία ή /και μαγνητική τομογραφία ή /και σπινθηρογράφημα οστών.

99mTc-depreotide σπινθηρογράφημα ήταν θετική στο λαιμό σε 6 από αυτούς τους 11 ασθενείς (54%), και στον πνεύμονα θετικές εικόνες βρέθηκαν σε 5/11 (45,4%) (Σχήμα 1). Αυτές οι 6 περιπτώσεις με αρνητικές εικόνες του πνεύμονα είχε μικρομεταστάσεων, όπως αποδεικνύεται από την αξονική τομογραφία. Στο μόνο οστικές μεταστάσεις ασθενών που έχουν στην οποία

99mTc-depreotide σπινθηρογράφημα εκτελέστηκε, η εικόνα ήταν αρνητική.

18F-FDG-PET σάρωση ήταν θετική σε 8/11 στον πνεύμονα και στο λαιμό σε 5/11 (πίνακας 1).

Η

ανταπόκριση στη θεραπεία με σωματοστατίνη αναλογική

Πέντε ασθενείς στους οποίους

99mTc-Depreotide σπινθηρογράφημα θετικές εικόνες βρέθηκαν είτε στο λαιμό ή /και τον πνεύμονα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το μακράς δράσης αναλόγου σωματοστατίνης οκτρεοτίδιο σε δόσεις των 30 mg κατά την διάρκεια μιας περιόδου 3-6 μηνών σε ένα πιλοτική μελέτη. Η ανταπόκριση στη θεραπεία εκτιμήθηκε με τη χρήση του πνεύμονα αξονική τομογραφία και του τραχήλου της μήτρας απεικόνισης υπερηχογράφημα σύμφωνα με τα κριτήρια RECIST. Σε 3 ασθενείς, καμία αλλαγή στο μέγεθος των τραυμάτων βρέθηκε. Στις υπόλοιπες 2 ασθενείς, υπήρξε μια σημαντική αύξηση στις πνευμονικές βλάβες σε μία και στην άλλη σημαντική αύξηση στο μέγεθος των αλλοιώσεων του τραχήλου της μήτρας με σημεία εντός του όγκου νέκρωση σε μία από τις αλλοιώσεις. Η θεραπεία ήταν καλά ανεκτή σε όλες τις περιπτώσεις, χωρίς συγκεκριμένη μεταβολική επιπλοκή? αν και, ένας ασθενής παρουσίασε κοιλιακή δυσφορία που εξαφανίστηκε μετά χρονική μείωση της δόσης του οκτρεοτίδης. Όλες οι αγωγές διεκόπησαν ως αποτελέσματα εμφανής τροποποίηση της εξέλιξης της νόσου και σε 2 ασθενείς απόδειξη προόδου φάνηκε εύλογη. Λόγω των αποτελεσμάτων του πρώτου αυτού συνόλου των θεραπειών, καμία νέα PDTC περιπτώσεις συμπεριλήφθηκαν στην πιλοτική μελέτη.

Η έκφραση της ssts σε καλά διαφοροποιημένο, φτωχά διαφοροποιημένα ιστό του καρκίνου του θυρεοειδούς και φυσιολογική θυρεοειδικού ιστού

υπολειμματική δείγματα πρωτογενούς ιστού καρκίνο και μεταστάσεις από το υποσύνολο των ασθενών με απεικονιστικές μελέτες και

99mTc-Depreotide σπινθηρογράφημα συν 9 επιπλέον ασθενείς (σύνολο = 20? Πίνακας 1) που φέρει PDTC ανακτήθηκαν για τις μελέτες ssts έκφρασης. Δείγματα από 19 ασθενείς με WDTC χωρίς νοσηρής κατά την παρακολούθηση συμπεριελήφθησαν επίσης στην μελέτη και επιπλέον δείγματα από 7 φυσιολογικούς θυρεοειδείς αδένες και από μία λίμνη κανονικών thyroids. Μια μεταβλητή ποσότητα του mRNA για κάθε ένα από τα πέντε SST-υποτύπων βρέθηκε χωρίς σημαντικές διαφορές μεταξύ των ηλικιών και των δύο φύλων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται) εντός του WDTC και PDTC ομάδες, καθώς και μεταξύ της κανονικής θυρεοειδούς ιστού. Η μέση περιεκτικότητα του mRNA του SST-υποτύπων σε WDTC και PDTC φαίνεται στο Σχήμα 2. Σε WDTC, sst2 ήταν το κυρίαρχο SST-υποτύπου αντιπροσωπεύεται, που ακολουθείται από sst1 & gt? Sst5 & gt? Sst3 = sst4, ενώ η έκφραση του sst5TMD4 και sst5TMD5 δεν βρέθηκαν σε δείγματα WDTC. Στην ομάδα των PDTC, η πιο εκπροσωπούμενη SST-υπότυπο ήταν μακράν sst5TMD4, το οποίο βρέθηκε να δείξει ένα 23 φορές-αύξηση στην έκφραση σε σχέση με την επόμενη πιο εκφράζεται SST-υποτύπου η οποία ήταν sst2, ακολουθούμενη από sst1 & gt? Sst3 & gt? Sst4 & gt ? sst5. Η έκφραση του sst5TMD5 δεν ανιχνεύθηκε στο PDTC. Σε 2 από τους 20 ασθενείς (10%) με PDTC, sst5TMD4 δεν ανιχνεύθηκε. Κατά τη σύγκριση των επιπέδων mRNA SST-υποτύπου μεταξύ WDTC και PDTC βρήκαμε ότι η έκφραση sst2 ήταν υψηλότερη σε WDTC σε σύγκριση με PDTC (317 ± 80

vs

158 ± 42, αντίστοιχα?. P = 0.08). Επίσης, η έκφραση της sst1 και sst5 έτεινε να αυξηθεί στην ομάδα PDTC σε σύγκριση με τους ασθενείς WDTC (173 ± 98 έναντι 24 ± 4 για sst1 και 202 ± 62 vs. 114 ± 18 για sst5? P = 0.16 και 0.12, αντίστοιχα). Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές ή τάση για διαφορά βρέθηκαν στα επίπεδα έκφρασης της sst3 ή sst4 μεταξύ PDTC και WDTC. Τέλος, όλοι οι 5 ασθενείς στους οποίους έγινε θεραπεία οκτρεοτίδης έδειξε υψηλά επίπεδα έκφρασης του sst5TMD4 (μέση τιμή = 2286 ± 896).

mRNA αντιγράψετε τον αριθμό των κανονικών (sst1-5) και περικομμένο (sst5TMD4) υποδοχείς σωματοστατίνης μετρήθηκε από qrtRT-PCR σε μια μπαταρία του καλά διαφοροποιημένου καρκίνων του θυρεοειδούς (WDTC) και ελάχιστα διαφοροποιημένο καρκίνων του θυρεοειδούς (PDTC). Οι απόλυτες τιμές επίπεδο mRNA ρυθμίστηκαν από έναν παράγοντα κανονικοποίησης (NF) που λαμβάνεται ως ο γεωμετρικός μέσος των αριθμών αντιγράφου για GAPDH και β-ακτίνης. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SEM (n = 19-20 ασθενείς). Οι αστερίσκοι (***, p & lt? 0.001) δείχνουν τιμές που διαφέρουν σημαντικά από WDTC

Η

Όσον αφορά τη μελέτη που πραγματοποιήθηκε σε κανονική θυρεοειδικού ιστού, τα αποτελέσματα δείχνουν σαφώς ότι τα επίπεδα έκφρασης των sst5TMD4 είναι αρκετά χαμηλή σε. αυτά τα φυσιολογικά δείγματα (20 ± 7 αντίγραφα των sst5TMD4 /50 ng ολικού RNA), το οποίο υποστηρίζει προηγούμενα δεδομένα που αναφέρθηκαν από την ομάδα μας [18].

καμπύλες

ROC χρησιμοποιήθηκαν για την εκτίμηση της απόδοσης των διαφόρων επιπέδων ssts έκφρασης να γίνει διάκριση μεταξύ των δύο διαγνωστικών ομάδων (ασθενείς με ενεργή νόσο /ασθενείς χωρίς νόσο? Σχήμα 3). Όσο πιο κοντά την καμπύλη ROC είναι στην άνω αριστερή γωνία της οθόνης (δηλαδή, υψηλότερη ευαισθησία και ειδικότητα), τόσο υψηλότερη είναι η συνολική ακρίβεια του δείκτη που χρησιμοποιείται. Ενώ η έκφραση της κανονικής sst1-sst5 είχαν χαμηλότερο ικανότητα να διακρίνουν μεταξύ των δύο διαγνωστικών ομάδων (ROC καμπύλες παρόμοιες με τη γραμμή αναφοράς), η καμπύλη ROC του κόλουρου επιπέδων έκφρασης sst5TMD4 ήταν σημαντικά διαφορετική από την γραμμή αναφοράς (περιοχή κάτω από την καμπύλη = 0,957? p & lt? 0,0001). Πράγματι, ένα σκορ περικοπή 5 αντίγραφα της sst5TMD4, η οποία περίπου συμπίπτει με τη μέση τιμή της έκφρασης των ασθενών απαλλαγμένες από τη νόσο, απέδωσε μια ευαισθησία 90% και ειδικότητα 84%. Ένα βέλτιστο σκορ μεγαλύτερο από ή ίσο με 8,5 αντίγραφα είχε το 90% ευαισθησία και ειδικότητα. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας δείχνουν σαφώς ότι η έκφραση περικοπεί παραλλαγή sst5TMD4 είναι ο μόνος δείκτης που θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί σε ένα ευαίσθητο και ειδικό τρόπο.

Η

Συζήτηση

RAI-πυρίμαχων PDTC βρίσκεται σε περίπου 5-10% του συνόλου των θυλακιώδη κύτταρα προερχόμενα καρκίνων του θυρεοειδούς [1], [2]. Αυτοί οι ασθενείς έχουν κακή πρόγνωση, καθώς δεν αποτελεσματικές θεραπείες είναι διαθέσιμες προς το παρόν 24,25 και ως εκ τούτου, η αναζήτηση νέων θεραπευτικών στόχων, ως επί το πλείστον για το στάδιο III και IV περιπτώσεις, είναι επί του παρόντος σε εξέλιξη [3], [4].

Η σωματοστατίνη ρυθμίζει πολλές φυσιολογικές λειτουργίες στα περισσότερα από τα όργανα του είδους θηλαστικών και μη θηλαστικών μέσω sst1-5 υποδοχείς του [10]. Επιπροσθέτως, η σωματοστατίνη και τα ανάλογά της παρουσιάζουν αντιπολλαπλασιαστική δράσεις, οι οποίες τις καθιστούν χρήσιμες ως συνπρόσθετο θεραπεία ειδικά για όγκους νευροενδοκρινικών [7], εκτός από τη χρησιμότητά τους σε ακρομεγαλία [26]. Στην ακρομεγαλία, οι μακράς δράσης ανάλογα σωματοστατίνης συνδέεται με μια μείωση της τάξης του 20% στο μέγεθος των αδενωμάτων μετά 6-12 μήνες θεραπείας στο ένα τρίτο των περιπτώσεων [27]. Επιπλέον, ραδιοεπισημασμένο υποδοχέα πεπτιδίου στοχευμένες θεραπείες είναι μια άλλη πιθανή επιλογή για ορισμένους όγκους που φέρουν ssts [28]. Η παρουσία ssts έχει αναφερθεί σε φυσιολογικό θυρεοειδή ιστό και στον καρκίνο του θυρεοειδούς [8]. Επιπλέον, σε κυτταρικές γραμμές καρκινώματος του θυρεοειδούς, η σωματοστατίνη είναι ικανή να αναστείλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, ακόμη και σε αναπλαστικό καρκίνωμα του θυρεοειδούς κυτταρικές σειρές [8]. Ποσοτική αξιολόγηση των ssts έκφραση στον καρκίνο του θυρεοειδούς έχει δείξει κάποια ασυμφωνίες, με ορισμένοι συγγραφείς αναφέρουν την έκφραση του sst1, 3 και 5 και άλλοι αποκλειστικά sst5 χρησιμοποιώντας ανοσοκυτταροχημικές τεχνικές [8], [10]. Ακόμη και με τις διαφορές αυτές, η έκφραση της ssts τόσο των ωοθυλακίων και παραθυλακοκύτταρα ιστό προέλευσης του καρκίνου του θυρεοειδούς έχει επιβεβαιωθεί πρόσφατα από άλλα εργαστήρια [9], [11], [12], [29] – [31].

κατά την τελευταία δεκαετία η παρουσία του ssts στον καρκίνο του θυρεοειδούς έχει επίσης διερευνηθεί από τον θυρεοειδή σπινθηρογράφημα, ως επί το πλείστον με τη χρήση ραδιοσημασμένων οκτρεοτίδη και δεπρεοτίδη, αλλά και με άλλες διαφορετικές ενώσεις [32], [33], διευκολύνοντας τον εντοπισμό του μεταστατικού ιστού που δεν ανιχνεύονται με τη RAI σάρωση. Depreotide έχει μια υψηλή συγγένεια για sst2, 3 και 5, επιτρέποντας έτσι την αποτελεσματική λήψη εικόνων σε ιστούς που εκφράζουν αυτούς τους υποδοχείς. Σε PDTC ασθενείς μας, depreotide σπινθηρογράφημα έδειξε θετικές εικόνες σε περίπου 40-50% από αυτούς στην αυχενική επαναλαμβανόμενες ιστού ή /και των extracervical μεταστάσεις, αυτά τα τελευταία κυρίως στον πνεύμονα. Έτσι, αποφασίσαμε να εκτελέσει μια πιλοτική μελέτη θεραπεία 5 PDTC δεπρεοτίδη θετικούς ασθενείς έχουν μεγάλες μεταστάσεις με το ανάλογο σωματοστατίνης οκτρεοτίδιο, σε μια προσπάθεια να σταθεροποιήσουν ή να μειώσουν την ανάπτυξη του όγκου με αποτέλεσμα είτε δεν υπάρξει βελτίωση ή ακόμα και ένα φαινομενικά ταχεία ανάπτυξη σε δύο από τα περιπτώσεις. Κατά συνέπεια, η θεραπεία με οκτρεοτίδη αποσύρθηκε σε όλους τους ασθενείς και τους νέους ασθενείς δεν συμπεριλήφθηκαν. Στην μόνη προηγούμενη παρόμοια πιλοτική μελέτη που δημοσιεύτηκε μέχρι στιγμής, Kolhfuerst

et al.

[13] που βρέθηκαν παρόμοια αποτελέσματα και κατέληξε στο συμπέρασμα ότι δεν υπήρχε καμία ένδειξη για ανάλογα σωματοστατίνης θεραπεία σε ασθενείς με προχωρημένο PDTC.

αργότερα το 2009 μετά οι ασθενείς αυτοί μελετήθηκαν και θεραπεία, η ομάδα μας [18] εντόπισε δύο νέα λειτουργική ακρωτηριασμένη παραλλαγές sst5 με 5 και 4 διαμεμβρανικές περιοχές. Είναι σημαντικό ότι, χρησιμοποιώντας το μοντέλο ακρομεγαλία, αποδείξαμε ότι η παρουσία αυτών των SST παραλλαγές αιτιολογικώς συνδέεται με την απουσία απάντησης σε αναστολή της αυξητικής ορμόνης καθώς και στα αντιπολλαπλασιαστικά αποτελέσματα του αναλόγου σωματοστατίνης θεραπεία [20]. Με βάση αυτά τα αποτελέσματα, υποθέσαμε ότι οι ασθενείς με PDTC θα μπορούσε δυνητικά να εκφράσουν sst5TMD4 και, ως εκ τούτου, θα μπορούσαν να είναι αδιάφορη για οκτρεοτίδη θεραπεία. Ως εκ τούτου, στη συνέχεια διερευνήθηκε σε μια αναδρομική τρόπο η παρουσία τέτοιων συντετμημένες παραλλαγές του sst5, και όπως αποδείχθηκε για πρώτη φορά την αποκλειστική έκφραση της στην PDTC ιστό καθώς κανένας παρουσία βρέθηκε σε δείγματα WDTC και φυσιολογικό θυρεοειδή ιστό. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει ότι sst5TMD4 μπορεί να φαίνεται στον καρκίνο του θυρεοειδούς, όπως η διαδικασία αποδιαφοροποίηση εξελίσσεται, αν και ο τελικός μηχανισμός ανώμαλη έκφραση του είναι προς το παρόν άγνωστη. Έτσι, η ανίχνευση του sst5TMD4 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ένα επιπλέον δείκτη κακή πρόγνωση. Αυτή η έννοια υποστηρίζεται από τις καμπύλες ROC αναλύσεις δείχνουν ότι sst5TMD4 προσδιορίζει με ακρίβεια PDTC, με ευαισθησία 90% και ειδικότητα 84%. Από αυτή την άποψη, sst5TMD4 έχει επίσης βρεθεί πρόσφατα σε ανεπαρκώς διαφοροποιημένο καρκίνο του μαστού [21], όπου συνδέεται επίσης με κακή πρόγνωση. Επιπλέον, η έκφραση του sst5TMD4 στην MCF-7 κυτταρική σειρά καρκίνου του μαστού αυξάνει χαρακτηριστικά κακοήθειας όπως εισβολή και πολλαπλασιασμός ικανότητες. Αυτό ενισχυμένες κακοήθη βιολογική συμπεριφορά πιστεύεται ότι σχετίζεται με την αύξηση της δραστηριότητας του φωσφορυλιωμένου εξωκυτταρικό κινασών σήματος ρυθμίζονται 1 και 2, ρ-Akt επίπεδα, και η κυκλίνη D3 και ARP2 /3 συμπλόκου έκφραση [34]. Επιπλέον, η έκφραση sst2, η οποία συνδέεται σε μια καλή απάντηση σε ανάλογα σωματοστατίνης, βρέθηκε να είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω σε PDTC σε σύγκριση με WDTC. Είναι ενδιαφέρον, sst5TDM4 έχει δειχθεί ότι αλληλεπιδρά φυσικά με sst2, μεταβάλλοντας τους μηχανισμούς μεταγωγής σήματος και, κατά συνέπεια, το κλείδωμα μεσολάβηση αντιπολλαπλασιαστικές επιδράσεις του. Εξάλειψη της σηματοδότησης sst2 επίσης οδηγεί σε δυσλειτουργία ενός αυτοκρινούς ανασταλτικής βρόχο ανάδρασης, η οποία μπορεί να τροποποιήσει τον κυτταρικό φαινότυπο και να αυξήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [23], [35]. Αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει εν μέρει τη φαινομενική αύξηση του μεγέθους του όγκου σε 2 από τους ασθενείς μας που έλαβαν θεραπεία με οκτρεοτίδη, όπως σύνδεση του με sst5TMD4 θα έχει προωθηθεί περαιτέρω τη λειτουργική καταστολή της δραστηριότητας sst2.

Αν και ο σχεδιασμός της θεραπευτικής μέρος του η παρούσα μελέτη μπορεί να έχει κάποιους περιορισμούς, ως επί το πλείστον την απουσία μιας ομάδας ελέγχου, καθώς ήταν μια πιλοτική μελέτη, τα μοριακά ευρήματα των δειγμάτων PDTC μελετήθηκαν αναδρομικά φαίνεται να εξηγήσει την φαινομενική έλλειψη ανταπόκρισης της θεραπείας οκτρεοτίδης και υποστήριξε την κλινική απόφαση να σταματήσει η συμπερίληψη περισσότερων ασθενών στην πιλοτική μελέτη. Έτσι, όσον αφορά τις θεραπευτικές επιπτώσεις των ευρημάτων μας, πιστεύουμε ότι τα συμπεράσματα της Kolhfuerst

et al

. [13] εξακολουθούν να ισχύουν. Υπάρχουν επαρκή κλινικά και τώρα τις μοριακές πληροφορίες σε κράτος που προωθείται αποδιαφοροποιημένων cancer του θυρεοειδούς έχει βιολογικά χαρακτηριστικά (δηλαδή υψηλή sst5TMD4 και χαμηλής sst2) που θα μπορούσαν να εξηγήσουν την έλλειψη αποτελέσματος ή ακόμα και πιθανές επιβλαβείς επιδράσεις της ανάλογο σωματοστατίνης θεραπείας σε αυτούς τους ασθενείς, ή τουλάχιστον στην εκείνων που εκφράζουν sst5TMD4 σε όγκους τους. Καθώς η μοριακή ετερογένεια των όγκων του θυρεοειδούς είναι όλο και πιο εμφανής, περαιτέρω έρευνα σχετικά με την παραλλαγή sst5TMD4 μπορεί να ανοίξει το δρόμο για την καλύτερη κατανόηση μοριακών λειτουργίες του και πιθανή χρήση ως διαγνωστικό ή ακόμα και θεραπευτικό εργαλείο στον καρκίνο του θυρεοειδούς.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Montserrat Gilabert (Novartis Oncology, Ισπανία), για την υποστήριξή της στο έργο αυτό.