Αφηρημένο

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι μια από τις σημαντικότερες αιτίες θανάτου από καρκίνο σχετίζονται και αξιόπιστα με βάση το αίμα προγνωστικούς βιοδείκτες χρειάζονται επειγόντως. Η απαρίθμηση και μοριακό χαρακτηρισμό των κυκλοφορούντων κυττάρων όγκου (ΚΜΑ) έχει κερδίσει αυξανόμενο ενδιαφέρον στην κλινική πρακτική. ανίχνευση CTC από CellSearch

® έχει ήδη συσχετιστεί με δυσμενή έκβαση σε μεταστατικό CRC. Ωστόσο, το ποσοστό ανίχνευσης CTC στη νόσο του mCRC είναι χαμηλή σε σύγκριση με άλλες οντότητες του όγκου. Έτσι, η χρήση εναλλακτικών (ή συμπληρωματικά) δοκιμασίες μπορεί να βοηθήσει να αναφέρεται χωριστά το προγνωστική χρήση της ΚΜΑ ως βιοδείκτες με βάση το αίμα. Σε αυτή τη μελέτη, τα δείγματα αίματος από 47 ασθενείς με mCRC ελέγχθηκαν για ΚΜΑ χρησιμοποιώντας το εγκεκριμένο από τον FDA CellSearch

® τεχνολογία και /ή η AdnaTest

®. 38 δείγματα μπορούν να υποβάλλονται σε επεξεργασία σε παράλληλη. Έχουμε αποδείξει ότι μια συνδυασμένη ανάλυση των CellSearch

® και το AdnaTest

® οδηγεί σε βελτιωμένη ανίχνευση των CTCs σε mCRC ομάδα των ασθενών μας (ποσοστό θετικότητας CellSearch

® 33%, AdnaTest

® 30%, συνδυασμένη 50%). Ενώ ΚΜΑ ανιχνεύονται με το σύστημα CellSearch

® σχετίζονταν σημαντικά με ελεύθερη προόδου επιβίωση (p = 0,046), μια σημαντική συσχέτιση όσον αφορά τη συνολική επιβίωση θα μπορούσε να δει μόνο όταν συνδυάστηκαν οι δύο δοκιμασίες (p = 0,013). Τα ευρήματα αυτά θα μπορούσαν να συμβάλουν στη δημιουργία βελτιωμένων εργαλείων για την ανίχνευση ΚΜΑ και για τη θεραπεία βιοδεικτών για την κλινική ρουτίνα σε μελλοντικές μελέτες

Παράθεση:. Φαράγγια TM, Stein Α, Quidde J, Hauch S, ROCK K, Riethdorf S, et al. (2016) Βελτιωμένη ανίχνευση των κυκλοφορούντων κυττάρων όγκου στο μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου από το συνδυασμό των CellSearch

® Σύστημα και το AdnaTest

®. PLoS ONE 11 (5): e0155126. doi: 10.1371 /journal.pone.0155126

Επιμέλεια: Min-Hsien Wu, Chang Gung Πανεπιστήμιο, Ταϊβάν

Ελήφθη: 3 του Νοέμβρη του 2015? Αποδεκτές: 25 Απριλίου 2016? Δημοσιεύθηκε: 16 Μαΐου 2016

Copyright: © 2016 Φαράγγια et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση: TMG, SR, και KP υποστηρίχθηκαν από την πόλη του Αμβούργου, Landesexzellenzinitiative Αμβούργο (LEXI 2012? στόχευση του όγκου μέσω μορίων κυτταρικής επιφάνειας ουσιαστική εξέλιξη του καρκίνου και τη διάδοση).. Αυτοί οι συγγραφείς επίσης υποστηρίζεται από το ERC Σύνθετη Investigator Grant τεμαχίσει, Transcan ERA-Δίκτυο: Επιχορήγηση CTC-SCAN. TMG και KP επίσης υποστηρίζεται από τα καινοτόμα φάρμακα κοινής επιχείρησης της πρωτοβουλίας στο πλαίσιο της συμφωνίας επιχορήγησης n ° 115749, οι πόροι των οποίων αποτελούνται από χρηματοδοτική συνεισφορά από το Έβδομο Πρόγραμμα ΠΛΑΙΣΙΟ της Ευρωπαϊκής Ένωσης EFPIA εταιρείες (FP7 /2007-2013) και «σε είδος εισφορά. Οι χρηματοδότες παρέχεται στήριξη με τη μορφή των μισθών για τον συγγραφέα TMG, αλλά δεν είχε καμία πρόσθετη ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Οι συγκεκριμένοι ρόλοι αυτών των συγγραφέων αρθρωτά στο τμήμα «συγγραφέας εισφορών». SH είναι μια πλήρης απασχόλησης υπάλληλος της AdnaGen GmbH, Langenhagen, Γερμανία. Η AdnaGen GmbH παρέχεται υποστήριξη με τη μορφή του μισθού για συγγραφέα SH, αλλά δεν είχε καμία πρόσθετη ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Ο ειδικός ρόλος του συγγραφέα αρθρώνεται στο τμήμα «συγγραφέας εισφορές»

Αντικρουόμενα συμφέροντα: SH είναι η Ιστοσελίδα Διευθυντής Έρευνας & amp?. Ανάπτυξη του AdnaGen GmbH (Qiagen). Όλοι οι άλλοι συντάκτες έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ο καρκίνος σχετίζονται με το θάνατο συνήθως προκαλείται από την έκφυση των επιθετικών καρκινικών κυττάρων σε νέες τοποθεσίες στην του σώματος (σχηματισμός μετάστασης) που έχουν διαδοθεί από τις πρωτογενείς όγκους. Ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο συχνά διαγιγνώσκεται κακοήθειες και μία από τις κύριες αιτίες θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο [1]. Περίπου το ένα τέταρτο των ασθενών με CRC εμφανίζουν μεταστάσεις (mCRC) κατά το χρόνο της διάγνωσης (σύγχρονη ασθένεια) και περαιτέρω οι ασθενείς θα αναπτύξουν μεταστάσεις κατά τη διάρκεια της νόσου τους, με αποτέλεσμα το σχετικά υψηλό ποσοστό θνησιμότητας που σχετίζεται με CRC [2].

Διαφορετικές προγνωστικοί δείκτες μπορεί σήμερα να χρησιμοποιηθούν σε mCRC, π.χ., αναλύσεις των λευκών αιμοσφαιρίων, γαλακτικό ποσό αφυδρογονάση, την κατάσταση απόδοσης, ο εντοπισμός του πρωτογενούς όγκου και των μεταστάσεων, μοριακών δεικτών (π.χ., μεταλλάξεις στο γονίδιο BRAF), ή προχωρημένο ολοκληρωμένη clustering) [3-7]. Εκτός αυτού, έχουν τη δυναμική ανάπτυξη του όγκου έχει αποδειχθεί για να προσφέρουν on-επεξεργασία πληροφοριών σχετικά με τη μελλοντική πρόγνωση [8, 9].

Αρίθμηση και μοριακό χαρακτηρισμό των καρκινικών κυττάρων συλλαμβάνεται από μια ελάχιστα επεμβατική εξέταση αίματος (κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων, CTCs) χρησιμοποιείται όλο και περισσότερο στην κλινική πρακτική για την παρακολούθηση της νόσου και την ανακάλυψη προγνωστική σημασία [10]. ΚΜΑ είναι εύκολο να επιτευχθεί με λιγότερο επεμβατική δειγματοληψία του περιφερικού αίματος που επιτρέπει τη συνεχή της εξέλιξης του όγκου «παρακολούθησης σε πραγματικό χρόνο». Μέχρι στιγμής, η CellSearch

® σύστημα είναι η μόνη προσέγγιση που έχει εγκριθεί από την αμερικανική FDA των ΗΠΑ (Food and Drug Administration) για την ανίχνευση CTC στο μεταστατικό καρκίνο του μαστού, του παχέος εντέρου και του καρκίνου του προστάτη [11-13]. Ανίχνευση της ΚΜΑ χρησιμοποιώντας CellSearch

® έχει πρόσφατα συσχετιστεί με δυσμενή έκβαση σε mCRC [14]. Ωστόσο, μελέτες που πραγματοποιήθηκαν σε ασθενείς με mCRC χρησιμοποιώντας CellSearch

® αποδειχθεί μια πολύ χαμηλότερη απόδοση της ΚΜΑ σε αυτόν τον τύπο του όγκου σε σύγκριση με καρκίνο του μαστού ή του προστάτη [11-13]. Αναμένεται ότι «μόνο» το 30-40% των ασθενών με το λιμάνι mCRC 3 ή περισσότερα CTC ανά 7,5 ml αίματος [15]. Ως εκ τούτου, η χρήση άλλων (ή συμπληρωματικά) δοκιμασίες μπορεί να βελτιώσει την κατανόηση των μηχανισμών της βιολογίας του καρκίνου και αναφέρεται χωριστά τη χρήση των ΚΜΑ ως βιοδείκτες του καρκίνου σε mCRC. Για παράδειγμα, σημαντική ασυμφωνία μεταξύ CellSearch

® και το AdnaTest

® στην ανίχνευση των CTCs από ασθενείς mCRC έχει ήδη παρατηρηθεί [16]. Το σύστημα CellSearch

® χρησιμοποιεί ανοσοχρώση και ορίζει ΚΜΑ ως κύτταρα που εκφράζουν τόσο EpCAM και pankeratins και δεν εκφράζουν CD45, καθώς επίσης και έχοντας έναν πυρήνα βάφονται με ϋΑΡΙ (4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη). Σε αντίθεση, η AdnaTest

® χρησιμοποιεί μια πλατφόρμα RT-PCR που στοχεύουν τρεις διαφορετικές μεταγραφές (

EpCAM

,

EGFR

,

CEA

) για τον εντοπισμό των καρκινικών κυττάρων μέσα το κύτταρο κλάσμα EpCAM εμπλουτισμένο.

Μια συνδυασμένη ανάλυση των δύο δοκιμασιών θα μπορούσε επομένως να βελτιώσει την ευαισθησία της ανίχνευσης CTC με την εφαρμογή δύο μεθοδολογικές προσεγγίσεις (ανοσοκυτταροχημεία και RT-PCR) και την αύξηση του φάσματος των δεικτών CTC. Αυτό είναι ένα σημαντικό πλεονέκτημα εν όψει της πολύ γνωστή φαινοτυπική ετερογένεια των ΚΜΑ [10]. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν η ανάλυση της κλινικής σημασίας των CTCs συγκρίνοντας και συνδυάζοντας δύο διαφορετικές δοκιμασίες για την ανίχνευση CTC σε μια μικρή ομάδα ασθενών mCRC (n = 47). Για το σκοπό αυτό, η AdnaTest

® και το CellSearch

® σύστημα χρησιμοποιήθηκαν παράλληλα. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η συνδυασμένη ανάλυση των δύο προσδιορισμών οδηγεί σε υψηλότερα ποσοστά ανίχνευσης των CTCs με επιπλέον προγνωστικές πληροφορίες. Τα ευρήματα αυτά θα μπορούσαν να βοηθήσουν για τη δημιουργία νέων διαγνωστικών εργαλείων με τη χρήση του ΚΜΑ και για τη θεραπεία βιοδεικτών για την κλινική ρουτίνα σε μελλοντικές μελέτες.

Υλικό και Μέθοδοι

σειρά των ασθενών

Διαδοχική ασθενείς προγραμματιστεί για παρηγορητική χημειοθεραπεία για CRC από την εξωνοσοκομειακή κλινική από το Τμήμα Ογκολογίας και Αιματολογίας στο Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Αμβούργου-Eppendorf προσλήφθηκαν. Τα χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Η πλειοψηφία των ασθενών είχαν ήδη εκτενώς προεπεξεργασία, που λαμβάνει τη θεραπεία γραμμή 3

ου (διάμεσος) (εύρος: 1-8). Συνολικά, πάνω από το 80% των ασθενών που έλαβαν φθοριοπυριμιδινών, οξαλιπλατίνη, ιρινοτεκάνη και bevacizumab και περίπου το 40% των αντισωμάτων ασθενών EGFR. Τα δημογραφικά στοιχεία και τα σχέδια της μετάστασης ήταν, όπως αναμενόταν, αν και ο συνολικός πληθυσμός ήταν λίγο νεότερος από ό, τι το μέσο μεταστατικό CRC πληθυσμού, πιθανόν σχετίζονται με το φόντο πανεπιστημιακό νοσοκομείο. Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με την Παγκόσμια Διακήρυξη Ιατρικού Συλλόγου του Ελσίνκι και τις κατευθυντήριες γραμμές για τον πειραματισμό με τον άνθρωπο από τα Επιμελητήρια των Ιατρών του κράτους του Αμβούργου ( «Hamburger Ärztekammer»). Το πειραματικό πρωτόκολλο εγκρίθηκε (Έγκριση Αρ PVN-3779) από την Επιτροπή Δεοντολογίας των ιατρικών επιμελητηρίων του κράτους του Αμβούργου ( «Hamburger Ärztekammer»). Όλοι οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή συγκατάθεση πριν από την έναρξη της μελέτης. Συνολικά, τα δείγματα αίματος (5 ml και 7,5 ml) από 47 ασθενείς συλλέχθηκαν σε AdnaCollect

® σωλήνες συλλογής αίματος (AdnaGen

®) ή CellSave

® σωλήνες διατήρησης (Janssen Diagnostics), και υποβάλλονται σε επεξεργασία εντός 24 h (AdnaTest

®) ή 96 ώρες (CellSearch

®) σύμφωνα με τις οδηγίες των προμηθευτών.

η

AdnaTest

®

Για τον εμπλουτισμό και ανάλυση των κυκλοφορούντων κυττάρων όγκου (CTC) η AdnaTest ColonCancerSelect και ο AdnaTest ColonCancerDetect, (AdnaGen GmbH, Langenhagen) χρησιμοποιήθηκαν για την παρασκευή mRNA, ακολουθούμενη από μια RT-PCR για μεταγενέστερη πολλαπλή PCR σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή [16]. Όλες οι απαιτούμενες πληροφορίες σχετικά με την επεξεργασία του δείγματος μπορεί να βρεθεί στην ιστοσελίδα https://www.adnagen.com. Εν συντομία, 5 ml αίματος ελήφθη για εμπλουτισμό CTC χρησιμοποιώντας μαγνητικά σωματίδια επικαλυμμένα με αντίσωμα που αποτελείται από ένα μίγμα αντισωμάτων εναντίον διαφορετικών EpCAM επιτόπων Τα εμπλουτισμένα κύτταρα στη συνέχεια λύθηκαν και mRNA καθαρίστηκε με τη βοήθεια σφαιριδίων ολιγο-άΤ που περιέχονται στην κιτ ακολούθησε αντίστροφη μεταγραφή (Sensiscript, Qiagen, Hilden). Το προκύπτον cDNA υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε ένα multiplex PCR για μεταγραφές σχετίζονται με τον όγκο (

υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα

(

EGFR

),

καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο

(

CEA

) και

EpCAM

) καθώς και

ακτίνη

όπως τον έλεγχο καθαριότητας. Η PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του HotStarTaq Master Mix (QIAGEN GmbH, Hilden, Germany). Οπτικοποίηση των θραυσμάτων PCR διεξήχθη με 2100 Bioanalyzer χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία DNA1000 (Agilent Technologies, Waldbronn, Γερμανία). ΚΜΑ θετικά εντοπιστεί εάν τουλάχιστον ένα από τα multiplex PCR δείκτες ανιχνεύθηκε.

CellSearch

®

Για την απομόνωση της ΚΜΑ χρησιμοποιώντας CellSearch

®, ανίχνευση CTC πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται αλλού [17]. Τα κριτήρια για ένα συμβάν το οποίο ορίζεται ως CTC ήταν: ένας γύρος για οβάλ μορφολογία, μια ορατή πυρήνα (ϋΑΡΙ-θετικά), και ένα θετικό πρότυπο χρώσης για ένα επιθηλιακό κύτταρο ειδικό (κερατίνη-θετικά και CD45-αρνητικό). Για τον προσδιορισμό του EGFR στην ΚΜΑ, η CellSearch

® όγκου Φαινοτυπική αντιδραστηρίου EGFR εφαρμόστηκε κατά το τέταρτο κανάλι του συστήματος [18].

Η στατιστική ανάλυση

Για να συγκρίνετε τα αποτελέσματα της το ® σύστημα CellSearch

και οι AdnaTest

® πειράματα, CTC μετράει από CellSearch

® δεδομένα μετατράπηκαν σε θετικό (≥3 ΚΜΑ) ή αρνητική (& lt? 3 CTCs) από το ≥3 ΚΜΑ /7,5 ml αίμα έχουν συσχετιστεί σε κακή κλινική έκβαση [13]. CTC κατάστασης (θετικό /αρνητικό) και συσχέτιση με την τοποθεσία μετάσταση ελέγχθηκε με την ακριβή δοκιμασία του Fisher 2×2 [19] και διορθώνεται για πολλαπλές δοκιμές. δοκιμή McNemar με διόρθωση Yate για τη συνέχεια διεξήχθη για να βρείτε τη συμφωνία μεταξύ των δύο μεθόδων. Χωρίς εξέλιξη και τη συνολική επιβίωση (PFS και OS) εκτιμά και για τις δύο μεθόδους υπολογίστηκαν από τις καμπύλες Kaplan-Meyer και συγκρίθηκαν με δοκιμασία log-rank [20].

Αποτελέσματα

ανάλυση κλινικό δείγμα με τη χρήση η AdnaTest

® και CellSearch

®

Χρησιμοποιώντας το AdnaTest

®, 13 από τους 43 (30%) που αναλύθηκαν ασθενείς ήταν θετικοί για ΚΜΑ. ΚΜΑ θετικά εντοπιστεί εάν τουλάχιστον ένα από τα multiplex PCR δείκτες ανιχνεύθηκε. ΚΜΑ από 8 ασθενείς παρουσίασαν θετικά σήματα για

EpCAM

. Τέσσερις από αυτούς τους ασθενείς έδειξαν επιπρόσθετα σήματα για

CEA

, ενώ ένας ασθενής ήταν θετικός για

EpCAM

,

CEA

, και

EGFR

. Πέντε ασθενείς παρουσίασαν αποκλειστικά σήματα για

CEA

χωρίς σήματα έκφρασης για οποιοδήποτε άλλο δείκτη (Σχήμα 1Α). Για CellSearch

® αναλύσεις, μόνο ασθενείς με ≥3 ΚΜΑ ταξινομήθηκαν ως «CTC-θετική» επειδή αυτό το cut-off συσχετίστηκε με μια δυσμενή έκβαση σε mCRC [13, 21]. Δεκατέσσερα από τα 42 (33%) ανέλυσαν τα δείγματα ήταν θετικά για ΚΜΑ (εύρος: 3-44 κύτταρα). EGFR-θετικά κύτταρα (μέτρια έως ισχυρή έκφραση) βρέθηκαν σε έξι από αυτές τις 14 ασθενείς (εύρος από 1-4 EGFR-θετικών κυττάρων εντός της CTC-θετικών κοόρτη) (Σχήμα 1Β). Σε αυτή τη μελέτη, 38 κλινικά δείγματα αίματος θα μπορούσε να αναλυθούν παράλληλα. Συνδυάζοντας την AdnaTest

® και CellSearch

® 19 από τα 38 (50%) ανέλυσαν δείγματα έγινε θετικά για ΚΜΑ (Σχήμα 1C). Μέσα σε αυτή την ομάδα,

σήματα EGFR

/EGFR δεν συσχετίζονται δεδομένου ότι μόνο ένας ασθενής ήταν

EGFR

-θετικό με την AdnaTest

®, αλλά είχε EGFR-αρνητικούς ΚΜΑ με CellSearch

® (ασθενής 42). Μια λεπτομερής σύνοψη της CTC αναλύσεις καταγράφεται στον Πίνακα 2. Δεκαπέντε δείγματα ήταν CTC-αρνητικά και στα δύο δοκιμασίες CTC και 5 ασθενείς ήταν CTC-θετικοί σε αμφότερους τους προσδιορισμούς. Επτά δείγματα ήταν θετικά σε CellSearch

® και αρνητικό για το AdnaTest

®, ενώ επτά περιπτώσεις ήταν αποκλειστικά θετικό για AdnaTest

®. Τα αποτελέσματα και των δύο δοκιμασιών δεν συσχετίζονται σημαντικά (kappa του Cohen = 0,1066, p = 0,51) (Σχήμα 1D).

(Α) Συνοπτικά δείκτη αναλύσεις της ΚΜΑ ανιχνεύεται με την AdnaTest

®. ΚΜΑ θετικά εντοπιστεί εάν τουλάχιστον ένα από τα multiplex PCR δείκτες (

EpCAM

,

CEA

, ή

EGFR

) ανιχνεύθηκε. (Β) CTC απαρίθμηση από CellSearch

® συμπεριλαμβανομένου του καθορισμού του EGFR. (C) CTC ποσοστό θετικότητας του AdnaTest

®, CellSearch

®, ή και τα δύο δοκιμασία σε συνδυασμό. (Δ) Η σύγκριση μεταξύ της AdnaTest

® και το CellSearch

® σύστημα.

Η

Συσχέτιση της CTC ευρήματα σε μεταστατική εντόπιση και τη θεραπεία

Χρησιμοποιώντας το AdnaTest

®, δεν βρέθηκε συσχέτιση όσον αφορά CTC-θετικότητα και τη θέση των μεταστάσεων (p & gt? 0,05). Παρόμοια ευρήματα παρατηρήθηκαν κατά τη χρήση CellSearch

® (p & gt? 0,05). Συνδυάζοντας τις δύο δοκιμασίες επίσης δεν είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ των τοποθεσιών μετάσταση και την κατάσταση CTC (ρ & gt? 0,05). κατάσταση CTC δεν συσχετιζόταν με που έχουν μία ή πολλαπλές μεταστάσεις (ρ & gt? 0,05) σε οποιαδήποτε από τις μεθόδους ανίχνευσης CTC. Είναι ενδιαφέρον, CTC ποσοστό θετικότητας σχετίστηκε με υψηλότερη γραμμή της θεραπείας, διάμεσο 2

ου γραμμή στην περίπτωση της CTC αρνητικότητα σε σύγκριση με διάμεση 4

ου γραμμή στην περίπτωση της CTC θετικότητα.

Συσχέτιση της CTC ευρήματα στην κλινική έκβαση

Kaplan-Meyer καμπύλες και log-rank στατιστική για CTC-αρνητικά και CTC-θετικών περιπτώσεων δεν αποκάλυψε καμία σημαντική συσχέτιση όσον αφορά την επιβίωση χωρίς εξέλιξη της νόσου (PFS) κατά τη χρήση του AdnaTest

® (p = 0,43) (Σχ 2Α). Για CellSearch

® παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της PFS και το καθεστώς CTC (p = 0,0467) (σχήμα 2Β). Ένας συνδυασμός και των δύο δοκιμασιών και πάλι δεν έδειξε σημαντική συσχέτιση με PFS, αλλά αποκάλυψε μια τάση (p = 0,084) (Σχήμα 2C).

Η

Επίσης, ελέγχονται αν η παρουσία της ΚΜΑ από την AdnaTest

®, CellSearch

® ή τα συνδυασμένα αποτελέσματα συσχετίστηκαν με μειωμένη συνολική επιβίωση (OS) σε mCRC ομάδα των ασθενών μας. Χρησιμοποιώντας την ανάλυση Kaplan-Meier μια σημαντική συσχέτιση θα μπορούσε να δει μόνο όταν και οι δύο δοκιμασίες συνδυάστηκαν (p = 0,013), ενώ οι επιμέρους δοκιμασίες που προβλέπονται μόνη σημαντική προγνωστικές πληροφορίες (AdnaTest

®: p = 0.31, CellSearch

®: p = 0,080) (Σχήμα 3Α-3C).

η

Συζήτηση

καρκίνος του παχέος εντέρου είναι μία από τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο σχετίζονται και αξιόπιστη βιοδείκτες με βάση το αίμα που χρειάζεται επειγόντως να βελτίωση της εκ των προτέρων επιλογή της θεραπείας και τροποποιήσεις κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Μέχρι σήμερα, το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο δείκτη με βάση το αίμα στο CRC είναι CEA για να πάρει προγνωστικές πληροφορίες κατά την έναρξη και πρόβλεψης πληροφορίες κατά τη διάρκεια της θεραπείας [22-24]. Παρά την ευρεία χρήση του CEA ως βιοδείκτη στο αίμα δεν είναι ούτε συγκεκριμένες νόσους, επηρεάζεται και από άλλους παράγοντες, και όχι τόσο αξιόπιστη όσο άλλες πιο πρόσφατες βιοδεικτών στο αίμα βάση (π.χ. ΚΜΑ) [25].

OS είναι το πιο αξιόπιστη τελικό σημείο σε κλινικές μελέτες και η ανίχνευση της ΚΜΑ έχει ήδη αποδειχθεί ότι έχουν προγνωστική αντίκτυπο σε πολλούς φορείς του όγκου, συμπεριλαμβανομένων mCRC [11, 12, 21, 26-28]. Στην ομάδα μας, θα μπορούσαμε να παρατηρήσουμε τα υψηλότερα ποσοστά ανίχνευσης CTC και καλύτερες προγνωστικές πληροφορίες σχετικά με OS, όταν χτενίζει τα δύο διαφορετικά συστήματα, η ανίχνευση CTC FDA, CellSearch

® τεχνολογία και η AdnaTest

®. Η πρόγνωση της PFS συσχετίζεται σημαντικά με την ανίχνευση CTC όταν χρησιμοποιούν CellSearch

® μόνη (p-value 0,046 έναντι 0,43 κατά τη χρήση του AdnaTest

® και 0.084 για τις συνδυασμένες αναλύσεις των δύο προσδιορισμών). Ωστόσο, PFS, εξ ορισμού, αναφέρεται στην ημερομηνία κατά την οποία ανιχνεύεται εξέλιξη και επιπλέον εξαρτάται από την ακτινολογική αξιολόγηση από έναν κλινικό ιατρό, καθιστώντας PFS πιο αναξιόπιστη τελικό σημείο.

Οι σημαντικές ασυμφωνίες μεταξύ CellSearch

® και το AdnaTest

® στην ανίχνευση των CTCs έχουν ήδη δημοσιευθεί [16, 29, 30]. Ωστόσο, καμία από αυτές τις μελέτες συσχετίστηκαν της συχνότητας εμφάνισης της ΚΜΑ για την κλινική έκβαση. Στην παρούσα μελέτη, ο συνδυασμός της CellSearch

σύστημα ® και το AdnaTest

® αύξησε το ποσοστό ανίχνευσης από 30% έως 50% (30% κατά τη χρήση του AdnaTest

®? 33% κατά τη χρήση CellSearch

® (≥3 ΚΜΑ)? 50% εάν και οι δύο δοκιμασίες συνδυάστηκαν). CTC ποσοστό θετικότητας φαίνεται να συνδέεται με την προηγμένη γραμμή της θεραπείας (Πίνακας 2), η οποία συνηγορεί υπέρ της υπόθεσης ότι οι υψηλότερες μετρήσεις CTC επιτρέπουν στους ασθενείς να αποκτήσουν αντίσταση σε συστηματικές θεραπείες. Εν όψει της σημαντική ετερογένεια της ΚΜΑ σε CRC [31], η παρουσία περισσότερων ΚΜΑ θα πρέπει να αυξήσει την πιθανότητα να φιλοξενούν ανθεκτικών κλώνων.

Αν και θα μπορούσαμε να αποδεικνύουν σαφώς ότι οι δύο μέθοδοι σε συνδυασμό βελτιωθεί το ποσοστό θετικότητας για ΚΜΑ , το 50% των ασθενών ήταν ακόμη και αρνητική, παρά την παρουσία έκδηλης μεταστάσεις. Εκτός από τεχνικούς περιορισμούς των δοκιμασιών (βλέπε επόμενη παράγραφο) θα μπορούσε να υπάρχει μια ενδιαφέρουσα βιολογίας πίσω από την παρατήρηση ότι τα επίπεδα CTC στο CRC είναι χαμηλότερα από ό, τι στον καρκίνο του μαστού. Θα μπορούσε κανείς να υποστηρίξει ότι η διάδοση των καρκινικών κυττάρων στο CRC είναι λιγότερο έντονη, πράγμα που θα μπορούσε να εξηγήσει επίσης γιατί CRC ασθενείς με μεταστάσεις στο ήπαρ μπορεί να θεραπευτεί με χειρουργική επέμβαση σε περίπου 20%, ενώ τέτοια θεραπεία είναι σπάνια επιτυγχάνεται με την ίδια μεταχείριση στον καρκίνο του μαστού.

και οι δύο δοκιμασίες που χρησιμοποιήθηκαν στις μελέτες μας βασίζονται στην έκφραση των επιθηλιακών δεικτών κυτταρικής επιφάνειας και είναι, ως εκ τούτου, ενδέχεται να χάσει πληθυσμούς CTC τα οποία έχουν υποστεί πλήρη επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) [32-34]. Ωστόσο, πρόσφατες εργασίες έχουν δείξει ότι τα καρκινικά κύτταρα με ένα ενδιάμεσο φαινότυπο είναι ίσως το πιο επιθετικό αυτά μπορούν να διαδοθούν και να ξεπεράσει σε απομακρυσμένες περιοχές, λόγω της υψηλής πλαστικότητας τους [35, 36]. Η ® σύστημα CellSearch

και η AdnaTest

® είναι και οι δύο σε θέση να ανιχνεύσει EMT-συνδέονται ΚΜΑ [37, 38]. Έτσι, οι δοκιμασίες CTC χρησιμοποιούνται στην παρούσα επιθηλιακά στόχο έρευνα και ενδιάμεσων ΚΜΑ, ενώ καθαρή μεσεγχυματικά ΚΜΑ (στερούμενη έκφραση των επιθηλιακών δεικτών) είναι πιθανώς χάνονται. Η ανίχνευση της καθαρής μεσεγχυματικών CTCs είναι ούτως ή άλλως πολύ δύσκολη, επειδή ακόμη και αν ετικέτας χωρίς (δηλαδή, EpCAM-ανεξάρτητο) είναι τα συστήματα δέσμευσης χρησιμοποιούνται (π.χ. φίλτρα) επιθηλιακά δείκτες όπως κεράτινες εφαρμόζονται συνήθως για την ανίχνευση των CTCs λόγω της έλλειψης δείκτες μεσεγχυματικού που δεν εκφράζονται σε περιβάλλοντα κύτταρα του αίματος. Σε αυτό το πλαίσιο, plastin-3, μία πρωτεΐνη ακτίνη ομαδοποίηση δεν ρυθμίζεται προς τα κάτω κατά τη διάρκεια της ΕΜΤ για CRC και κύτταρα καρκίνου του μαστού-και δεν εκφράζεται επί λευκοκυττάρων-μπορεί να είναι μια σημαντική πρόοδος [33, 34].

ελεύθερα κυττάρων νουκλεϊκών οξέων (π.χ., ελεύθερο κυττάρων DNA όγκου ή miRNAs) είναι επίσης επί του παρόντος συζητούνται να είναι κατάλληλο ως νέων βιολογικών δεικτών με βάση το αίμα [39]. Αλλαγές στη συγκέντρωση τους, καθώς και μεταβολές του DNA είχαν ήδη αποδειχθεί να χρησιμοποιηθούν για διαγνωστικούς, την παρακολούθηση της θεραπείας, η έξυπνη, ή προγνωστικούς σκοπούς [40-43]. Ωστόσο, η πλειοψηφία των ctDNA προέρχεται από αποπτωτικά κύτταρα όγκου, ενώ ανάλυση CTC έχει το πλεονέκτημα να μελετήσει βιώσιμα κύτταρα όγκου, η οποία μπορεί επίσης να βελτιώσει την τρέχουσα κατανόηση της διάδοσης των καρκινικών κυττάρων σε ασθενείς με καρκίνο. Επιπλέον, μέχρι τώρα καμία τυποποιημένη δοκιμασία /πρωτοκόλλου για την ανίχνευση του ελεύθερου κυττάρων νουκλεϊνικών οξέων ή miRNAs θα μπορούσε να δημιουργηθεί στην νόσο mCRC και διαφορετικές προσεγγίσεις για την ανακάλυψη αυτών των βιοδεικτών χρησιμοποιούνται στα εργαστήρια σε όλο τον κόσμο. Μόλις πρόσφατα, μια τυποποιημένη στρατηγική ροή εργασίας προτάθηκε για την εξομάλυνση των δεδομένων έκφρασης των miRNAs ως νέο σημείο εκκίνησης για τυποποιημένες διαδικασίες με σκοπό τη σύγκριση των δεδομένων μεταξύ διαφορετικών εργαστηρίων [44]. Η ανάπτυξη τυποποιημένων assys που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη διάγνωση σύντροφος είναι το επίκεντρο της νεοσύστατης κοινοπραξίας ΕΕ-IMI ονομάζεται ΚΑΡΚΙΝΟΣ-ID (www.Cancer-id.eu).

Πολλά συζήτηση είναι σε εξέλιξη είτε ΚΜΑ μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως υγρό βιοψίες κατευθυντήρια εξατομικευμένη θεραπεία αποφάσεις [10]. Χρησιμοποιώντας το AdnaTest

® και CellSearch

® ήμασταν σε θέση να ανιχνεύσει τις σχετικές θεραπευτικούς στόχους, όπως

EGFR

/EGFR. Σήματα για

EGFR

/EGFR στην ΚΜΑ δεν συσχετίστηκε στη μελέτη μας, μεταξύ του AdnaTest

® και CellSearch

® (Πίνακας 2), η οποία είναι πιθανόν να οφείλεται σε διάφορους πληθυσμούς CTC κατέλαβε με αναλύσεις μας . Αυτό δείχνει και πάλι η συμπληρωματικότητα των δύο προσδιορισμών.

Συνοψίζοντας, θα μπορούσαμε να δείξουμε ότι ένας συνδυασμός διαφορετικών δοκιμασιών CTC αυξάνει την εμφάνιση της ΚΜΑ σε μια μη επιλεγμένη ομάδα ασθενών mCRC. Μια σημαντική συσχέτιση με λειτουργικό σύστημα θα μπορούσε να δει μόνο όταν συνδυάστηκαν οι δύο δοκιμασίες (p = 0,013). Τα ευρήματα αυτά θα μπορούσαν να συμβάλουν στη δημιουργία ΚΜΑ και για τη θεραπεία βιοδεικτών για την κλινική ρουτίνα σε μελλοντικές μελέτες.