Αφηρημένο

Υπάρχει ένα μεγάλο σώμα των επιστημονικών στοιχείων που υποδηλώνει ότι 3,3′-Diindolylmethane (DIM), μια ένωση που προέρχεται από την πέψη του ινδόλη-3-καρβινόλη, η οποία είναι πλούσια σε σταυρανθή λαχανικά, φιλοξενεί δράση κατά των όγκων

in vitro

και

in vivo

. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι AMP-ενεργοποιημένη πρωτεϊνική κινάση (ΑΜΡΚ) παίζει σημαντικό ρόλο στην ομοιόσταση της κυτταρικής ενέργειας και την ανάπτυξη των όγκων και ότι η στόχευση ΑΜΡΚ μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική επιλογή για τη θεραπεία του καρκίνου στην κλινική. Αναφέραμε προηγουμένως ότι ένα διαμορφωθούν DIM (BR-DIM? Εφεξής ως Β-DIM) με υψηλότερη βιοδιαθεσιμότητα ήταν σε θέση να επάγουν απόπτωση και αναστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων, την αγγειογένεση, και εισβολή των καρκινικών κυττάρων του προστάτη. Ωστόσο, ο ακριβής μοριακός μηχανισμός (ες) για τα αντικαρκινικά αποτελέσματα της Β-DIM δεν έχουν πλήρως καθορισθεί. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήσαμε αν AMP-ενεργοποιημένη πρωτεϊνική κινάση (ΑΜΡΚ) είναι ένας μοριακός στόχος του Β-DIM σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν για πρώτη φορά, ότι το Β-DIM θα μπορούσε να ενεργοποιήσει την οδό σηματοδότησης ΑΜΡΚ, που σχετίζεται με καταστολή του στόχου της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR), ρύθμιση προς τα κάτω του υποδοχέα ανδρογόνου (AR) έκφραση και επαγωγή απόπτωσης σε τόσο ανδρογόνο ευαίσθητα LNCaP και ανδρογόνο-αναίσθητη C4-2B κύτταρα καρκίνου προστάτη. B-DIM ενεργοποιεί επίσης ΑΜΡΚ και ρυθμίζει προς τα κάτω AR σε ξενομοσχεύματα όγκου C4-2B προστάτη ανεξάρτητο από ανδρογόνο σε ποντίκια SCID. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το Β-DIM θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως πιθανός παράγοντας κατά του καρκίνου στην κλινική για την πρόληψη ή /και θεραπεία του καρκίνου του προστάτη ανεξάρτητα από ανδρογόνα ανταπόκρισης, αν και μπορεί να απαιτείται λειτουργική AR

Παράθεση:. Chen D, Banerjee S, Cui, QC, Κονγκ D, Sarkar FH, Dou QP (2012) η ενεργοποίηση της AMP-Activated Protein Kinase από 3,3′-Diindolylmethane (DIM) σχετίζεται με τα ανθρώπινα προστάτη Cancer Cell Death

In Vitro

και

In Vivo

. PLoS ONE 7 (10): e47186. doi: 10.1371 /journal.pone.0047186

Επιμέλεια: Libing Song, η Sun Yat-sen University Κέντρο Καρκίνου, η Κίνα

Ελήφθη: 5, Μαρτίου, 2012? Αποδεκτές: 13, Σεπτεμβρίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 9 Οκτωβρίου, 2012

Copyright: © Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει με επιχορηγήσεις από Karmanos Ινστιτούτο Καρκίνου (σε QPD) του National Cancer Institute (1R01CA120009, 3R01CA120009-04S1 και 5R01CA127258-05, να QPD). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

AMP-ενεργοποιημένη πρωτεϊνική κινάση (ΑΜΡΚ) εκφράζεται σε όλα τα ευκαρυωτικά κύτταρα και είναι ένα κρίσιμο ένζυμο που παίζει σημαντικό ρόλο στην ομοιόσταση της κυτταρικής ενέργειας, καθώς και τον έλεγχο των διαδικασιών που σχετίζονται με την ανάπτυξη των όγκων, συμπεριλαμβανομένων εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, κυτταρική πολλαπλασιασμός, την πρωτεϊνική σύνθεση, και την επιβίωση. Ως εκ τούτου, ως ένα στόχο κατά του καρκίνου, ΑΜΡΚ έχει λάβει εντατική προσοχή τα τελευταία χρόνια. Θηλαστικών ΑΜΡΚ είναι ένα τριμερές πρωτεϊνική κινάση σερίνης /θρεονίνης που αποτελείται από μία καταλυτική υπομονάδα α και δύο ρυθμιστικές υπομονάδες, β και γ. ΑΜΡΚ ενεργοποιείται μέσω φωσφορυλίωσης της Thr-172 για την α υπομονάδα με στρες ενέργειας καταστρέφουν, όπως αυξημένη αναλογίες ΑΜΡ /ΑΤΡ [1] και ADP /ΑΤΡ [2], ή διεγείρεται από κυτταρικές κινάσες συμπεριλαμβανομένων του ήπατος κινάση Β1 (LKB1 ) [3] – [4] και εξαρτημένη από καλμοδουλίνη κινάση πρωτεΐνης κινάσης (CaMKK) [5]. Μόλις ενεργοποιηθεί, ΑΜΡΚ παίζει δύο σημαντικές λειτουργίες, μεταβολικές και μη μεταβολικές. Στον κανονισμό της μεταβολικής διαδικασίας, ΑΜΡΚ φωσφορυλιώνει ομάδες σερίνης σε πολλές πρωτεΐνες-στόχους και τα αποτελέσματα σε ενεργοποίηση του καταβολικές οδούς για την ενεργοποίηση παραγωγής ΑΤΡ διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της πρόσληψης και την οξείδωση της γλυκόζης και των λιπαρών οξέων, και την απενεργοποίηση των αναβολικών οδών συμπεριλαμβανομένων των πρωτεϊνών, λιπαρών οξύ και χοληστερόλη συνθέσεις, οι οποίες καταναλώνουν ΑΤΡ [6]. Όσον αφορά τις μη μεταβολικές λειτουργίες του ΑΜΡΚ, ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ μπορεί να διεγείρει διακοπή κύκλου κυττάρου και να αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και τη σύνθεση πρωτεϊνών σε κακοήθη κύτταρα μέσω πολλαπλών μηχανισμών, όπως η συσσώρευση του παράγοντα ογκοκατασταλτικών ρ53 και οι αναστολείς κινάσης εξαρτώμενης από κυκλίνη ρ21 και ρ27 [7 ], καθώς επίσης και ρύθμιση προς τα κάτω της οδού mTOR [8] – [9]. Εκτεταμένη έρευνα υποστηρίζει το ρόλο της ΑΜΡΚ στην πρόληψη και θεραπευτικών του καρκίνου, γεγονός που υποδηλώνει ότι η στόχευση ΑΜΡΚ μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη επιλογή για τη θεραπεία του καρκίνου.

Για το σκοπό αυτό, η μετφορμίνη, ένα αντι-διαβητικό φάρμακο, έχει αποδειχθεί ότι ενεργοποιούν ΑΜΡΚ , αυξάνοντας μια υπόθεση ότι η μετφορμίνη μπορεί να μειώσει τον κίνδυνο καρκίνου σε ασθενείς με διαβήτη τύπου 2 μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού ΑΜΡΚ [10]. Πράγματι, αναφορές από κλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι οι διαβητικοί ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με μετφορμίνη είχαν σημαντικά χαμηλότερο ποσοστό περιπτώσεων καρκίνου και θνησιμότητα σχετιζόμενη με τον καρκίνο σε σύγκριση με ασθενείς που εκτέθηκαν σε άλλα αντιδιαβητικά φάρμακα [10] – [12]. Προ-κλινικές μελέτες έχουν επίσης δείξει ότι η μετφορμίνη αναστέλλει την ανάπτυξη των καλλιεργημένων καρκινικών κυττάρων όχι μόνο [13] – [14]. Και όγκων σε ποντικούς [15], αλλά στοχεύει επίσης επιλεκτικά τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα [16]

Εκτός μετφορμίνη, μερικές φυσικές ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων quercetin, genistein [17], η καψαϊκίνη, EGCG [18], και η κουρκουμίνη [19], έχει αποδειχθεί ότι έχει αντικαρκινικές επιδράσεις που συνδέονται με την ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ οδού σηματοδότησης. Στην πραγματικότητα, τα φυσικά προϊόντα έχουν το πιο παραγωγικό πηγή οδηγεί για την ανάπτυξη αντικαρκινικών φαρμάκων. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, περίπου 73% των αντικαρκινικών φαρμάκων ανακαλύφθηκαν από φυσικές προέλευση ή να προέρχεται από φυσικές ενώσεις τον τελευταίο μισό αιώνα [20]. Η φυσική ένωση ινδόλη-3-καρβινόλη (I3C), το οποίο βρίσκεται σε σχετικά υψηλά επίπεδα σε σταυρανθή λαχανικά όπως το μπρόκολο και το λάχανο, και διμερές του 3,3′-Diindolylmethane (DIM) έδειξαν δραστικότητα κατά του όγκου

σε vitro

και

in vivo

[21] – [22]. Πρόσφατα, ανέφερε ότι ένα διατύπωσε DIM (BR-DIM, που λαμβάνεται από Βιοαντίδραση θρεπτικά συστατικά, LLC., Boulder, Κολοράντο, στο εξής χάριν συντομίας Β-DIM), έδειξε περίπου 50% υψηλότερη βιοδιαθεσιμότητα

in vivo

[23] σε σύγκριση με ΔΗΜ. B-DIM επαγόμενη απόπτωση και ανέστειλε την κυτταρική ανάπτυξη, αγγειογένεση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων του προστάτη, η οποία συνδέεται με ρύθμιση της Akt, ΝΡ-κΒ, VEGF και AR μονοπάτια σηματοδότησης [24] – [25]. Επιπλέον, πρόσφατα αποτελέσματα έδειξαν ότι η Β-DIM θεραπεία του καρκίνου του προστάτη κύτταρα

in vitro

ή Β-DIM παρέμβαση σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη οδήγησε στην πυρηνική αποκλεισμό των AR σχετίζεται με την ενεργοποίηση του miR-34a [24 ]. Ωστόσο, ο ακριβής μοριακός μηχανισμός (ες) με την οποία B-DIM παίζει κατά του καρκίνου και του καρκίνου προληπτική ρόλοι της δεν έχουν πλήρως καθορισθεί? Πιο συγκεκριμένα, δεν έχει αναφερθεί κατά πόσο η βιολογική δραστικότητα του Β-DIM σχετίζεται με επαγωγή σηματοδότησης ΑΜΡΚ.

Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε την επίδραση του Β-DIM στο ΑΜΡΚ σηματοδότησης και του συνδέονται κατάντη στόχοι τόσο ευαίσθητο σε ανδρογόνο LNCaP και του καρκίνου του προστάτη C4-2B κύτταρα ανδρογόνο-insensitive περιέχει λειτουργικές AR. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν για πρώτη φορά, ότι το Β-DIM θα μπορούσε να λειτουργήσει ως ενεργοποιητής ΑΜΡΚ. Η ενεργοποίηση της ΑΜΡΚ από Β-DIM είχε ως αποτέλεσμα την προς τα κάτω ρύθμιση των AR και του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) έκφραση, και προκάλεσε επαγωγή κυτταρικής απόπτωσης, καταστολή του μονοπατιού mTOR, και η αναστολή της prostasphere σχηματισμού σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου προστάτη

in vitro

και

in vivo

. Τα ευρήματά μας έδειξαν επίσης ότι η οδός ΑΜΡΚ είναι μία από τις νέες μοριακών στόχων της Β-DIM για αντικαρκινικές δράσεις της έναντι του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη.

Μέθοδοι

Cell Culture, Protein Extraction, και Western Blot Δοκιμασία

Ανθρώπινο C4-2B καρκίνο του προστάτη (που λαμβάνεται από τον καθηγητή Leland Chung, Πανεπιστήμιο Emory, Ιατρική Σχολή, Atlanta, GA? και σήμερα στο Cedars-Sinai στο Λος Άντζελες, CA) και LNCaP (American Type Culture Collection Manassas, VA, USA) κύτταρα αναπτύχθηκαν σε RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FCS), 100 μg /ml στρεπτομυκίνη, 100 μονάδες /ml πενικιλλίνη, και 2 mM γλουταμίνη, σε υγροποιημένο επωαστή με 5% CO

2 και 95% αέρα στους 37 ° C. Μια ολόκληρη κυτταρικό εκχύλισμα παρασκευάστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26]. Για ανάλυση στυπώματος Western, μία ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε εκχύλισμα κυττάρων υποβλήθηκε σε ηλεκτροφόρηση σε μετουσιωτικό πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης. Μεμονωμένα μεμβράνες ανιχνεύθηκαν με υποδεικνυόμενα αντισώματα. Ανοσοαντιδραστικές ζώνες αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας υπεροξειδάση horseradish συζευγμένη δευτερογενή αντισώματα και SuperSignal WestPico χημειοφωταυγές υπόστρωμα (Pierce) και εμφανίσθηκε με τη χρήση φιλμ ακτινών Χ.

Prostasphere Δοκιμασία Σχηματισμού

δοκιμασία σχηματισμού Prostasphere διεξήχθη για να αξιολογηθεί η ικανότητα του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων αυτο-ανανέωση ακόλουθες δημοσιευμένες διαδικασία μας [27]. Εν συντομία, εναιωρήματα απλού κυττάρου των κυττάρων C4-2B ενδελεχώς ανασταλεί και απλώθηκαν σε εξαιρετικά χαμηλές προσκολλητικά-πηγάδια πλακών 6-φρεατίων (Corning, Lowell, ΜΑ) σε 1000 κύτταρα /φρεάτιο σε 1.5 ml μέσου σχηματισμού σφαίρας (1:01 DMEM /F12 θρεπτικό μέσο συμπληρωμένο με 50 μονάδες /ml πενικιλίνη, 50 mg /ml στρεπτομυκίνη, Β-27, και Ν-2). Ένα χιλιοστόλιτρο μέσου σχηματισμού σφαίρας προστέθηκε κάθε 3 ημέρες. Μετά από 6 ημέρες επώασης με διαφορετικές συγκεντρώσεις Β-DIM ή μετφορμίνη (ως μάρτυρας), τα σχηματισμένα σφαιρίδια συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση στα 300 χ g για 5 λεπτά και prostasphere αριθμοί μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο ανεστραμμένης αντίθεσης φάσης. Η αναλογία των κυττάρων σφαίρας ροών υπολογίστηκε διαιρώντας τον αριθμό των κυττάρων σπάρθηκε με τον αριθμό των prostaspheres.

Πειραματόζωα

Αρσενικά ομόζυγο CB-17 SCID ποντίκια (ηλικίας 4-5 εβδομάδων) αγοράστηκαν από την Taconic Farms (Germantown, ΝΥ). Τα ποντίκια στεγάστηκαν και διατηρήθηκαν κάτω από άσηπτες συνθήκες σε εγκαταστάσεις διαπιστευμένο από την Αμερικανική Ένωση για την Διαπίστευση του Εργαστηρίου Φροντίδα Ζώων και σύμφωνα με τους ισχύοντες κανονισμούς και τα πρότυπα του Υπουργείου Γεωργίας των Η.Π.Α., Αμερικάνικο Υπουργείο Υγείας και Ανθρωπίνων Υπηρεσιών, και ΝΙΗ. Τα ποντίκια που χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με την φροντίδα των ζώων και τις οδηγίες χρήσης του Πολιτειακού Πανεπιστημίου Γουέιν κάτω από ένα πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την επιτροπή του Πανεπιστημίου Animal Care and Use Wayne State. Ποντίκια έλαβαν Lab δίαιτα 5021 (Purina Mills, Inc., Richmond, ΙΝ).

ανθρώπινα οστά και εμφύτευση των κυττάρων όγκου

Ανθρώπινο αρσενικού εμβρύου ιστού των οστών ελήφθη από έναν μη κερδοσκοπικό οργανισμό τρίτους ( Σύνθετη Bioscience Resources, Alameda, CA), και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από την οικογένεια του δότη, σύμφωνα με τους κανονισμούς που εκδίδονται από κάθε κράτος συμμετέχει και η ομοσπονδιακή κυβέρνηση. Μετά από μία εβδομάδα εγκλιματισμού, τα ποντίκια εμφυτεύθηκαν με ένα μοναδικό ανθρώπινο θραύσμα εμβρυϊκού οστού όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28] – [29]. C4-2B κύτταρα συλλέχθηκαν από καλλιέργειες ταπήτιο μετά από μια σύντομη έκθεση σε 0,25% θρυψίνη και 0,2% EDTA. Η επεξεργασία με θρυψίνη σταμάτησε με την προσθήκη ενός μέσου που περιέχει 10% FBS. Τα κύτταρα πλύθηκαν μία φορά σε μέσο ελεύθερο ορού και επαναιωρήθηκαν. Μόνο εναιωρήματα που αποτελούνται από ένα μόνο κύτταρο με & gt? 90% βιωσιμότητα χρησιμοποιήθηκαν για τις ενέσεις. Κύτταρα (1 χ 10

6) σε 20-μΙ μέσου RPMI χωρίς ορό εγχύθηκαν intraosseously με εισαγωγή μιας βελόνας 27-gauge και σύριγγα Hamilton μέσω του δέρματος ποντικού κατευθείαν μέσα στην επιφάνεια του μυελού του προηγουμένως εμφυτευθεί οστού. Στην προηγούμενη εμπειρία μας με αυτό το μοντέλο, βρήκαμε ένα ρυθμό πρόσληψης όγκου & gt? 95% σε σύγκριση με ξενομοσχεύματος δέρματος, όπου η ταχύτητα πρόσληψης του όγκου ήταν συγκριτικά λιγότερο με παρατεταμένη περίοδο λανθάνουσας κατάστασης. Μόλις η πλειοψηφία των εμφυτευμάτων οστού άρχισε για μεγέθυνση (τώρα ονομάζεται «όγκος οστών»), όπως προσδιορίζεται με μετρήσεις δαγκάνα (30η ημέρα μετά την ένεση των καρκινικών κυττάρων), οι ποντικοί τυχαιοποιήθηκαν στις ακόλουθες ομάδες θεραπείας (η = 7): ( α) μη επεξεργασμένο έλεγχο? (Β) μόνο Β-DIM, 5 mg /ποντίκια τρέφονται καθημερινά από το στόμα με καθετηριασμό για 4 εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας. Ο όγκος του όγκου των οστών σε κάθε ομάδα προσδιορίστηκε με δύο φορές την εβδομάδα μετρήσεις καλίμπρας. Το σωματικό βάρος των ποντικών σε κάθε ομάδα μετρήθηκε επίσης. Όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία μία ημέρα μετά την τελευταία δόση του Β-DIM θεραπεία (5 εβδομάδων) επειδή μεγάλους όγκους σχηματίστηκαν στα ποντίκια ελέγχου, τα οποία απαιτούνται τερματισμού και τελικό σωματικό βάρος και ο όγκος του όγκου τους καταγράφηκαν. Στις αυτοψία, ο όγκος τακτοποιημένα αποκόπτεται, απελευθέρωσε τυχόν ξένων προσκόλλησης ιστού, και μέρος του ιστού μονιμοποιήθηκε σε φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη για ανοσοχρώση και Η &? Χρώση Ε για την επιβεβαίωση της παρουσίας του όγκου

Αποτελέσματα.

Β-ΔΗΜ Ενεργοποιεί AMPK σηματοδοσίας στα ανθρώπινα κύτταρα του προστάτη Καρκίνος

Είμαστε αξιολόγησε κατά πόσο η οδός σηματοδότησης ΑΜΡΚ θα μπορούσε να είναι ένας από τους μοριακούς στόχους της Β-ΔΗΜ τόσο ανδρογόνα-ευαίσθητο C4-2B ( Σχ. 1Α) και ανδρογόνα ευαίσθητος LNCaP (Εικ. 1Β) κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Αμφότερες οι κυτταρικές γραμμές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις Β-DIM για 3 ώρες, και κυτταρολύματα των κατεργασμένων κυττάρων αναλύθηκαν με κηλίδα Western για τη μέτρηση των επιπέδων του φωσφόρου AMPKα (T172), μια δραστική μορφή της ΑΜΡΚ πρωτεΐνης, καθώς επίσης και μερικές κατάντη πρωτεϊνών στόχων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το επίπεδο φωσφόρου AMPKα σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη σε κατεργασία με Β-DIM αυξήθηκαν με έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 1Α, Β). Ως έλεγχος, τα συνολικά επίπεδα πρωτεΐνης ΑΜΡΚ παρέμεινε σχετικά αμετάβλητη (Εικ. 1Α, Β). Και οι δύο ρυθμιστικές σχετιζόμενη πρωτεΐνη mTOR (Raptor) και ακετυλο-CoA καρβοξυλάσης (ACC) είναι άμεσες κατάντη υποστρώματα του ΑΜΡΚ, όπως ενεργοποιούνται AMPK είναι σε θέση να φωσφορυλιώνει Raptor πρωτεΐνη σε κατάλοιπο σερίνης 792 [8] και την πρωτεΐνη ACC στο κατάλοιπο σερίνης 79 [30 ] – [31]. Η θεραπεία με β-ΔΗΜ οδήγησε σε αυξημένα επίπεδα φωσφόρου-Raptor (S792) και φωσφόρου-ACC (S79) στα επεξεργασμένα κύτταρα (Εικ. 1Α, Β), υποστηρίζοντας περαιτέρω ότι η Β-DIM είναι ένας ενεργοποιητής ΑΜΡΚ. mTOR είναι μεταγενέστερος μονοπατιού σηματοδότησης της ΑΜΡΚ, και η ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ μπορούν να αναστείλουν την οδό σηματοδότησης mTOR [32]. Τα δεδομένα μας αποκάλυψε επίσης ότι η ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ από Β-DIM θα μπορούσε να καταστείλει την οδό mTOR, όπως μετράται με μειωμένο επίπεδο πρωτεΐνης του φωσφόρου mTOR (Εικ. 1Α, Β), αποδεικνύοντας για πρώτη φορά, η λειτουργικότητα του Β-DIM ως ένας ενεργοποιητής ΑΜΡΚ σε αμφότερες τις AR-ευαίσθητο και AR-αναίσθητη κυτταρικές σειρές προστάτη. Η απενεργοποίηση του mTOR από Β-DIM είναι συνεπής με προγενέστερα δημοσιευθείσες έκθεση μας [33].

Ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη C4-2B (Α) ή LNCaP κύτταρα (Β) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με δεικνυόμενες συγκεντρώσεις του B-DIM για 3 ώρες για να μετρηθούν τα επίπεδα πρωτεΐνης του φωσφόρου AMPKα, AMPKα, φωσφόρου Raptor, φωσφόρου ACC, φωσφόρου mTOR, ή για 24 ώρες για να μετρηθούν τα επίπεδα πρωτεΐνης του AR, PSA ή διάσπαση PARP με ανάλυση στυπώματος Western. Μέτρηση της β-ακτίνης χρησίμευσαν ως μάρτυρες φόρτωσης. Οι αριθμοί κάτω από τα Δυτικά αποτελέσματα του φωσφόρου-AMPKα δείχνουν ποσοτικά κανονικοποιημένη φωσφόρου-AMPKα και β-ακτίνη αναλογίες.

Η

Ενεργοποίηση της AMPK από Β-ΔΗΜ σε πρώτες πρωινές ώρες συνδέεται με Μεταγενέστερες κάτω ρύθμιση των AR και PSA πρωτεΐνης Έκφραση και επαγωγή απόπτωσης σε ανθρώπινα κύτταρα του προστάτη Καρκίνος

Τα αποτελέσματα που εμφανίζονται παραπάνω δείχνουν ότι η Β-ΔΗΜ φιλοξενεί ιδιοκτησίας ΑΜΡΚ-ενεργοποίηση. Στη συνέχεια ερευνήθηκε κατά πόσον η ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ από Β-DIM θα μπορούσε να οδηγήσει σε αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο και αναστέλλουν την έκφραση πρωτεϊνών υπογραφή του καρκίνου του προστάτη, όπως AR και PSA. Δείξαμε προηγουμένως ότι η ενεργοποίηση της σηματοδότησης ΑΜΡΚ από Β-DIM είναι ένα πρώιμο γεγονός που συμβαίνει μετά από τρεις ωρών θεραπείας (την άνω πλευρά του σχ. 1Α, Β). Βρήκαμε ότι η περαιτέρω επεξεργασία των κυττάρων C4-2B και LNCaP με Β-DIM για μέχρι και 24 ώρες μειώθηκαν σημαντικά τα επίπεδα έκφρασης του AR και PSA σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο, και επίσης ως αποτέλεσμα αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο, όπως μετράται με διάσπαση PARP ( το κάτω φάτνωμα του Σχ. 1Α, Β). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η ενεργοποίηση του μονοπατιού σηματοδότησης ΑΜΡΚ είναι ένας από τους κύριους στόχους της Β-DIM οδηγούν στην επαγωγή αποπτωτικού κυτταρικού θανάτου των κυττάρων καρκίνου του προστάτη.

Ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ από Β-DIM μπορεί να μπλοκαριστεί από ένα

ΑΜΡΚ Inhibitor

η ένωση Γ αναπτύχθηκε ως εκλεκτικός αναστολέας της ΑΜΡΚ [34]. Υποθέσαμε ότι, εάν ΑΜΡΚ αποτελεί βασικό μοριακό στόχο του Β-DIM, συν-θεραπεία με την ένωση C θα πρέπει να εξασθενούν ή μπλοκάρουν τις επιδράσεις της Β-DIM επί καρκινικών κυττάρων του προστάτη. Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, C4-2B καρκίνου του προστάτη και τα κύτταρα LNCaP προ-αγωγή είτε με 20 μΜ της Ενωσης C ή DMSO για 6 ώρες και στη συνέχεια συν-κατεργασία με Β-DIM σε δύο συγκεντρώσεις για επιπλέον 3 ώρες. Τα αποτελέσματα ανοσοκηλιδώσεως έδειξε ότι σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη που έλαβαν μόνο Β-DIM, ΑΜΡΚ σηματοδότηση ενεργοποιήθηκε όπως μετράται με εξαρτώμενο από τη δόση αύξηση στη φωσφορυλίωση της AMPKα (T172) και φωσφορυλίωση της Ser79-ACC (Σχ. 2) , μια άμεση υπόστρωμα του ΑΜΡΚ που χρησιμοποιείται ευρέως ως ανιχνευτής της ενεργοποίησης ΑΜΡΚ [35] – [37]. Ωστόσο, τα επίπεδα πρωτεΐνης του φωσφόρου AMPKα και φωσφόρου ACC μειώθηκαν δραματικά σε κύτταρα προ-θεραπεία και συν-θεραπεία με την Ένωση C (Σχ. 2), γεγονός που υποδηλώνει ότι Β-DIM-ενεργοποιημένα ΑΜΡΚ μπορεί να μπλοκαριστεί από ένα αναστολέα ΑΜΡΚ.

C4-2B καρκίνου του προστάτη και τα κύτταρα LNCaP προ-επεξεργασία με 20 μΜ του αναστολέα ΑΜΡΚ ένωση C (CC) για 6 ώρες, που ακολουθείται από συν-θεραπεία με υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις Β-DIM για 3 ώρες. εκχυλίσματα των κυττάρων των κατεργασμένων κυττάρων ανοσοστυπώθηκαν για αντι-φωσφόρου-AMPKα, φώσφορο-ACC ή β-ακτίνη αντισώματα.

Η

Β-ΔΗΜ Βελτιώνει AR Παρεμπόδιση αποτέλεσμα των αντι-AR ναρκωτικών Casodex

Ένα από τα τρέχοντα στρατηγικές θεραπείας για προχωρημένο καρκίνο του προστάτη είναι να καταστείλει την λειτουργία AR από τον ευνουχισμό και αντι-ανδρογόνα. Casodex είναι ένα αντι-ανδρογόνο φάρμακο χρησιμοποιείται κλινικά για ασθενείς με μεταστατικό /προχωρημένο καρκίνο του προστάτη σταδίου, και λειτουργεί με πρόσδεση και αποτρέποντας την ενεργοποίηση του AR. προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι Β-DIM είναι σε θέση να αναστείλουν την έκφραση AR σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη [24]. Έχουμε περαιτέρω Υποθέσαμε ότι ο συνδυασμός του Β-DIM με Casodex μπορεί να έχει μια συνεργική επίδραση στην αναστολή της έκφρασης AR και διέγερση απόπτωσης σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, η οποία μπορεί να σχετίζεται με την ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ. Για να εξεταστεί αυτή η υπόθεση έχουμε συν-κατεργασία και τα δύο κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη με 100 μΜ Casodex και 40 μΜ β-DIM για 24 ώρες, και η θεραπεία με κάθε παράγοντα μόνο του χρησίμευσαν ως μάρτυρες. Τα δεδομένα δείχνουν ότι η συν-θεραπεία του C4-2B και LNCaP κυττάρων με Casodex και Β-DIM μειώθηκε σημαντικά το επίπεδο έκφρασης του AR και αυξημένη διάσπαση PARP απόπτωση σχετίζεται σε σύγκριση με κάθε μόνη θεραπεία, και η συνεργική ή προσθετική δράση συνοδεύτηκε από αυξημένη ενεργοποίηση ΑΜΡΚ (Εικ. 3).

C4-2B Ο καρκίνος του προστάτη και τα κύτταρα LNCaP υπέστησαν αγωγή με 100 μΜ Casodex, 40 μΜ β-DIM μόνη ή ένας συνδυασμός των Casodex και Β-DIM για 24 ώρες, ακολουθούμενη από ανάλυση στυπώματος Western χρησιμοποιώντας αντι-φωσφόρου AMPKα, AR, PARP ή β-ακτίνης αντισώματα.

η

Τόσο Β-DIM και μετφορμίνη αναστέλλει σημαντικά Prostasphere Σχηματισμός

Tumor βλαστικά κύτταρα έχουν τα χαρακτηριστικά του tumorspheres σχηματισμού. Έχει αποδειχθεί ότι η μετφορμίνη θα μπορούσε να αναστείλει την ανάπτυξη των καρκινικών βλαστικών κυττάρων, που συνδέεται με την ενεργοποίηση ΑΜΡΚ [16]. Για να δοκιμαστεί εάν Β-DIM, το οποίο λειτουργεί ως ενεργοποιητής ΑΜΡΚ (Εικ. 1, 2, 3) θα μπορούσε να στοχεύσει καρκινικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν και αναστέλλουν prostasphere σχηματισμό, τα κύτταρα C4-2B υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις Β-DIM για 6 ημέρες σε εξαιρετικά χαμηλές φρεάτια προσκολλημένα πλακών 6 φρεατίων. Η θεραπεία με μετφορμίνη χρησίμευσε ως έλεγχος. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το Β-DIM ανέστειλε prostasphere σχηματισμός κατά 29% και 90% σε συγκεντρώσεις επεξεργασίας 10 μΜ και 25 μΜ, αντίστοιχα (Σχ. 4), η οποία είναι συνεπής με τα προηγούμενα ευρήματα μας [27]. Τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι το Β-DIM μπορεί να κατέχει την ικανότητα να καταστέλλει όγκο βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν στον καρκίνο του προστάτη μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού ΑΜΡΚ.

C4-2B κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με υποδεικνυόμενες δόσεις των Β-DIM (Α, Β) για 6 ημέρες. Η θεραπεία με διαφορετικές συγκεντρώσεις της μετφορμίνης χρησίμευσαν ως μάρτυρες (C, D). Μετά από 6 ημέρες, οι αριθμοί prostasphere μετρήθηκαν κάτω από το μικροσκόπιο και η αναλογία των κυττάρων σφαίρας ροών υπολογίστηκε διαιρώντας τον αριθμό των κυττάρων σπάρθηκε με τον αριθμό των prostaspheres (A, C). Prostaspheres από κύτταρα C4-2B αγωγή με Β-DIM (Β) ή μετφορμίνη (D) φωτογραφήθηκαν και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το 10 και 25 μΜ β-DIM σημαντικά μειωμένο μέγεθος και τον αριθμό των prostaspheres. n = 6, * P & lt? 0.05, ** P & lt?. 0.01

Η

Β-ΔΗΜ Ενεργοποιεί ΑΜΡΚ και ρυθμίζει προς τα κάτω AR στα ανδρογόνα Ανεξάρτητη C4-2B προστάτη καρκινικών ξενομοσχευμάτων σε SCID ποντίκια

τα παραπάνω αποτελέσματα από μας

in vitro μελέτες έδειξαν

σαφώς ότι το μονοπάτι σηματοδότησης ΑΜΡΚ είναι μία από τις νέες μοριακών στόχων της Β-DIM σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Για να επιβεβαιωθεί αυτό το εύρημα

in vivo

, σχεδιάσαμε και χρησιμοποίησε την πειραματική μετάσταση οστού ζωικό μοντέλο (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι) ότι μιμείται οστών μετάσταση του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη. Βρήκαμε ότι η Β-DIM θεραπεία

in vivo

ανέστειλε την αύξηση του όγκου C4-2B εντός μικροπεριβάλλον των οστών σε κάποιο βαθμό (20%? Τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Οι καρκινικοί ιστοί απομακρύνθηκαν και αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας αντι-φωσφόρου AMPKα, φώσφορο-ACC και αντισώματα AR. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ρ-AMPK- και κυτταρικών πληθυσμών ρ-ACC-θετικά αυξήθηκε σημαντικά, ενώ AR-θετικών κυττάρων μειώθηκε σημαντικά στους όγκους που έλαβαν θεραπεία με Β-DIM σύγκριση με τον έλεγχο (Εικ. 5). Αυτά τα ευρήματα επιβεβαιώνουν ότι το Β-DIM είναι ικανό να ενεργοποιεί το μονοπάτι ΑΜΡΚ

in vivo

, που συνδέονται με την αντικαρκινική δράση της.

ποντικοί ICR SCID εμφυτεύθηκαν με κύτταρα C4-2B και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 5 mg /ποντίκι της Β-DIM από του στόματος gavages ημερησίως για 4 εβδομάδες. ιστούς όγκων αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας αντι-φωσφόρου-AMPKα (T172), φωσφόρου-ACC (S79) ή αντισώματα AR. Οι χρωματισμένες τομές έγιναν ορατά κάτω από το (ενίσχυση × 400) μικροσκόπιο. Σε αντίθεση με τον έλεγχο διαλύτη-θεραπεία, τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με Β-ΔΗΜ παρουσιάζονται με την ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ και σημαντική απώλεια του AR σε τομές όγκων.

Η

Συζήτηση

Η αναζήτηση για νέα αντικαρκινικά φάρμακα από φυσικές πηγές είναι μια από τις πλέον υποσχόμενες προσεγγίσεις για την πρόληψη και θεραπεία του καρκίνου. Έχουμε μελετήσει διατυπωθεί 3,3′-Diindolylmethane (Β-DIM) και έδειξαν ότι η Β-DIM μπορεί να διεγείρει απόπτωση και αναστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων, την αγγειογένεση, και εισβολή των καρκινικών κυττάρων του προστάτη με τη ρύθμιση ΝΡ-κΒ, Akt και AR μονοπάτια σηματοδότησης [ ,,,0],24] – [25]. Ωστόσο, ο ακριβής μοριακός μηχανισμός (ες) με την οποία B-DIM προκαλούν αντικαρκινικά αποτελέσματα της επί ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη δεν έχουν πλήρως καθορισθεί. Σε αυτή τη μελέτη, ανακαλύψαμε ότι η ΑΜΡΚ είναι μία από τις άμεσες μοριακούς στόχους της Β-ΔΗΜ σε κύτταρα καρκίνου προστάτη

in vitro

και

in vivo

.

Η σηματοδότηση ΑΜΡΚ μονοπάτι έχει γίνει πρόσφατα μια σημαντική εστίαση του ενδιαφέροντος στην πρόληψη και θεραπεία του καρκίνου. Bowker

et al

. διερευνήθηκε η συχνότητα εμφάνισης καρκίνου σε 10.309 διαβητικούς ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με ινσουλίνη, η μετφορμίνη ή σουλφονυλουρίες για μια περίοδο 5 ετών. Ανέφεραν ότι ασθενείς υπό αγωγή με μετφορμίνη είχαν σημαντικά χαμηλότερο ποσοστό θνησιμότητας σχετίζονται με τον καρκίνο σε σύγκριση με ασθενείς που εκτέθηκαν σε άλλα αντιδιαβητικά φάρμακα [12]. Ο κυριότερος μηχανισμός αντικαρκινική της μετφορμίνης συσχετίστηκε με ενεργοποίηση του ΑΜΡΚ σηματοδότησης [34]. Η ενεργοποίηση της ΑΜΡΚ αναστέλλει οδών κατανάλωση ενέργειας, την πρωτεϊνική σύνθεση και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, μέσω καταστολή της οδού mTOR

μέσω

οζώδη σκλήρυνση πρωτεΐνη 2 (TSC-2) [38]. Hirsch Η

et al

. ανέφεραν ότι η μετφορμίνη στοχεύει επιλεκτικά τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα και αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου σε μοντέλα ποντικών προκαλείται από την ενεργοποίηση της οδού της ΑΜΡΚ [16]. Έχει αναφερθεί ότι ορισμένες φυσικές ενώσεις συμπεριλαμβανομένων genistein (πλούσιο σε σόγια), EGCG (άφθονα στο πράσινο τσάι), και καψαϊκίνη (από καυτερή πιπεριά) είναι σε θέση να ενεργοποιήσει το ΑΜΡΚ μονοπάτι [17]. Ανακάλυψη περισσότερων ενεργοποιητών ΑΜΡΚ από φυσικές πηγές γίνεται μια ελκυστική προσέγγιση για την πρόληψη και θεραπεία του καρκίνου.

τρέχοντα ευρήματα μας δείχνουν ότι η Β-DIM μπορεί να ενεργοποιήσει ΑΜΡΚ σηματοδότησης μετά από τρεις ώρες σε δύο ανδρογόνα-ευαίσθητο LNCaP και ανδρογόνων -insensitive C4-2B κύτταρα καρκίνου προστάτη, που μετράται με: (i) τα αυξημένα επίπεδα της πρωτεΐνης του φωσφόρου AMPKα (T172), (ii) αυξημένα επίπεδα φωσφορυλιωμένου ACC σε κατάλοιπο σερίνης 79 [30] – [31], (iii) αυξημένη επίπεδα πρωτεΐνης του φωσφόρου Raptor (S792), το οποίο είναι ένας άμεσος στόχος του ΑΜΡΚ και ενός mTOR εταίρος δέσμευσης και αναστολέα [8], και (iv) μειωμένα επίπεδα φωσφόρου mTOR (Εικ. 1). Συνέπειες της ενεργοποίησης ΑΜΡΚ από Β-DIM φαίνεται να μεσολαβείται μέσω της αναστολής της AR και PSA έκφραση, που οδηγεί στην επαγωγή της απόπτωσης κατά την περαιτέρω κατεργασία για επιπλέον 21 ώρες (Σχ. 1, 6). ενεργοποίηση ΑΜΡΚ από Β-DIM θα μπορούσε να αποκλειστεί από προ-θεραπεία με την ένωση C, ένας αναστολέας ΑΜΡΚ, στα κύτταρα καρκίνου του προστάτη (Εικ. 2).

Η

Ο υποδοχέας ανδρογόνων (AR) είναι μια κρίσιμη παράγοντας για την ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. Ο καρκίνος του προστάτη εξαρτάται από ανδρογόνα διέγερση που προκαλείται από AR, και AR παίζει ακόμη ένα σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου και της ανθεκτικότητας στα φάρμακα σε μη εξαρτώμενου από ανδρογόνα καρκίνου του προστάτη. Οι εναλλακτικοί μηχανισμοί ενεργοποίησης AR σε ανδρογόνα ανεξάρτητο καρκίνο του προστάτη που προτείνει μέσω άλλων οδών σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένου ERKs, Akt, β-κατενίνης και caveolin [39] – [41]. Ως εκ τούτου, η καταστολή της AR είναι μία από τις θεραπευτικές στρατηγικές για ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Casodex είναι ένα αντι-ανδρογόνο φάρμακο χρησιμοποιείται κλινικά για ασθενείς σε μεταστατικό /προχωρημένο στάδιο. Οποιεσδήποτε φυσικές ενώσεις που θα μπορούσαν να ενισχύσουν την αποτελεσματικότητα των Casodex έχουν πιθανό θεραπευτικό ευεργέτημα στην κλινική. Δείξαμε στην παρούσα μελέτη ότι συν-κατεργασία των κυττάρων με Casodex και Β-DIM οδήγησε σε σημαντική αύξηση του φωσφόρου AMPKα και κατέστειλε την έκφραση AR σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη (Σχ. 3), γεγονός που αποδεικνύει ένα νέο μηχανισμό για τη συνέργεια των αντι- θεραπείας AR.

Ο καρκίνος του προστάτη ιστός περιέχει ένα σπάνιο πληθυσμό των πολλαπλών ισχυρών καρκινικά βλαστικά κύτταρα με την ικανότητα να αυτο-ανανέωση. Αυτές καρκίνου του προστάτη βλαστικά κύτταρα θα μπορούσαν να εμπλουτισθούν και να μετρηθεί με μία δοκιμασία σχηματισμού αποικίας σε τρισδιάστατο καλλιέργειες, που αναφέρονται ως prostasphere σχηματισμού. Ο καρκίνος του προστάτη κύτταρα με χαρακτηριστικά βλαστικών κυττάρων έχουν την ικανότητα να σχηματίζουν prostaspheres από μονά κύτταρα ως προϋπόθεση για την αυτο-ανανέωση στις συνθήκες καλλιέργειας μη προσκολλημένα [42]. Για να καθοριστεί εάν Β-ΔΗΜ μπορούσαν να στοχεύουν βλαστικά προστάτη /κυττάρων που μοιάζουν με βλαστικά, θα δοκιμαστεί σε δοκιμασίες σχηματισμού prostasphere. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι μετά από έξι ημέρες επώασης των κυττάρων C4-2B με διαφορετικές δόσεις του Β-DIM, όχι μόνο ήταν αριθμοί των σχηματισμένων prostaspheres μειώθηκαν σημαντικά, αλλά το μέγεθος των prostaspheres μειώθηκε επίσης (Εικ. 4). Τα ευρήματα από το

in vitro

μελέτες επιβεβαιώνεται περαιτέρω από τα ανοσοϊστοχημική αποτελέσματα από τους ιστούς του όγκου των ξενομοσχευμάτων καρκίνου του προστάτη αντιμετωπίζεται με B-ΔΗΜ (Εικ. 5). Θετική κυτταρικών πληθυσμών βάφονται με φώσφορο-ΑΜΡΚ ή ​​φωσφόρου ACC ήταν σημαντικά αυξημένα, ενώ AR-θετικά κύτταρα μειώθηκαν στην Β-DIM αγωγή ιστό του όγκου (Εικ. 5).

Εν περιλήψει, η παρούσα μελέτη παρέχει η πρώτη απόδειξη ότι η οδός σηματοδότησης ΑΜΡΚ είναι ένας από τους μοριακούς στόχους της Β-DIM για αντικαρκινική δράση της. Η ενεργοποίηση της ΑΜΡΚ από Β-DIM αποτελέσματα στην καταστολή της προς τα κάτω στόχος του mTOR, προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης AR και διέγερση απόπτωσης σε τόσο ευαίσθητο σε ανδρογόνο LNCaP και ανδρογόνα μη ευαίσθητου καρκίνου του προστάτη C4-2B κύτταρα (Εικ. 6). Η ενεργοποίηση της ΑΜΡΚ από Β-DIM παρατηρήθηκε επίσης σε θεραπεία όγκους του προστάτη. Τα ευρήματά μας αποδεικνύουν ότι το Β-DIM θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως πιθανός παράγοντας στην κλινική για την πρόληψη ή /και θεραπεία του καρκίνου του προστάτη ανεξάρτητα από ανδρογόνα ανταπόκρισης των κυττάρων.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε η κα Sara Schmitt για την κριτική ανάγνωση του χειρογράφου.