Abstract

Διείσδυση μυελοειδή κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του όγκου συχνά συνδέεται με αυξημένη αγγειογένεση και την εξέλιξη του όγκου, με αποτέλεσμα την κακή πρόγνωση σε πολλούς τύπους καρκίνου. Το πολυπεπτίδιοχημοκίνης ΡΚ2 (Bv8, pRok2) έχει δειχθεί να ρυθμίζει κινητοποίηση μυελοειδών κυττάρων από τον μυελό των οστών, με αποτέλεσμα την ενεργοποίηση της διεργασίας αγγειογένεσης, καθώς και συσσώρευση μακροφάγων και ουδετερόφιλων στο σημείο του όγκου. Εξουδετερωτικά αντισώματα εναντίον ΡΚ2 δείχθηκε να εμφανίζει ισχυρές αποτελεσματικότητα κατά του όγκου, που απεικονίζουν τις δυνατότητες της ΡΚ2-ανταγωνιστών ως θεραπευτικοί παράγοντες για τη θεραπεία του καρκίνου. Σε αυτή τη μελέτη καταδεικνύουν την αντικαρκινική δραστικότητα ενός μικρού μορίου ανταγωνιστή ΡΚ2, PKRA7, στο πλαίσιο του γλοιοβλαστώματος και του παγκρέατος μοντέλα όγκων ξενομοσχεύματος καρκίνου. Για το εξαιρετικά αγγειοποιημένου γλοιοβλάστωμα, PKRA7 συσχετίστηκε με μειωμένη πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων και αυξημένη νεκρωτικές περιοχές στη μάζα του όγκου. Συνεπής με την αντι-αγγειογενετική δραστικότητα των PKRA7

in vivo

, η ένωση αυτή μείωσε αποτελεσματικά ΡΚ2 επαγόμενη μικροαγγειακή ενδοθηλιακή κυτταρική διακλάδωση

in vitro

. Για την κακώς αγγειοποιημένου καρκίνου του παγκρέατος, το πρωτογενές αποτέλεσμα κατά του όγκου του PKRA7 φαίνεται να διαμεσολαβείται από την απόφραξη του μυελοειδούς κυττάρου μετανάστευση /διήθηση. Στο μοριακό επίπεδο, PKRA7 αναστέλλει ΡΚ2-επαγόμενη έκφραση ορισμένων προμεταναστευτικές χημειοκίνες και υποδοχείς χημειοκίνης στα μακροφάγα. Συνδυάζοντας θεραπεία PKRA7 με πρότυπο χημειοθεραπευτικούς παράγοντες οδήγησαν σε ενισχυμένη δράση σε μοντέλα ξενομοσχεύματος για τους δύο τύπους όγκων. Λαμβανόμενα μαζί, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η αντικαρκινική δραστικότητα του PKRA7 μπορεί να διαμεσολαβείται από δύο διακριτούς μηχανισμούς που είναι σχετικές με τα παθολογικά χαρακτηριστικά του συγκεκριμένου τύπου καρκίνου. Αυτό το μικρό μόριο ΡΚ2 ανταγωνιστή υπόσχεται να αναπτυχθεί περαιτέρω ως ένα αποτελεσματικό μέσο για την συνδυαστική θεραπεία του καρκίνου

Παράθεση:. Curtis VF, Wang Η, Yang P, McLendon RE, Λι Χ, Zhou Q-Y, et al. (2013) Μια ΡΚ2 /Bv8 /pRok2 Ανταγωνιστή Καταστέλλει Ογκογονικά Διεργασίες με αναστολή της αγγειογένεσης σε γλοίωμα και Μπλόκο Μυελογενής κυτταρική διήθηση σε καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (1): e54916. doi: 10.1371 /journal.pone.0054916

Επιμέλεια: Masaru Katoh, Εθνικό Κέντρο Καρκίνου, Ιαπωνία

Ελήφθη: 25 του Ιουνίου του 2011? Αποδεκτές: 17 Δεκ 2012? Δημοσιεύθηκε: 23 Ιαν 2013

Copyright: © 2013 Curtis et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό ήταν υποστηρίζεται από CA151541 να XFW από το National Cancer Institute (www.cancer.gov) και από MH67753 με τάσεις Qyz από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (www.nimh.nih.gov). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Το συγκρότημα μικροπεριβάλλον του όγκου αποτελεί σημαντική συμβολή στην ογκογένεση. Τα τελευταία χρόνια, η αυξημένη έμφαση έχει δοθεί στην στόχευση των στρωματικών κυττάρων στο μικροπεριβάλλον του όγκου που είναι υπεύθυνα για διάφορες πτυχές της ογκογόνο διαδικασία. Προέρχονται από μυελό οστών μυελοειδή κύτταρα, τα οποία είναι πρόδρομοι μακροφάγα, ουδετερόφιλα και μυελοειδή προερχόμενα κατασταλτικά κύτταρα, αντιπροσωπεύουν έναν υποπληθυσμό στρωματικά κύτταρα που παίζουν σημαντικό ρόλο κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου [1]. Σε ανταπόκριση προς τις κυτταροκίνες /χημειοκίνες που εκκρίνονται από τα καρκινικά κύτταρα, μυελοειδή κύτταρα μπορούν να κινητοποιηθούν από τον μυελό των οστών και διεισδύσουν στο καρκινικές θέσεις όπου μπορούν να προωθήσουν την ανάπτυξη, την εισβολή και την αγγειογένεση για να υποστηρίξει την επέκταση και μετάσταση όγκου [2]. Για παράδειγμα, 3ο ΚΠΣ (παράγοντα διέγερσης αποικίας 3), επίσης γνωστό ως G-CSF, που παράγεται από τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να οδηγήσει σε διαφοροποίηση του CD11b

+ Gr1

+ μυελοειδή κύτταρα σε ουδετερόφιλα, μακροφάγα, και δενδριτικά κύτταρα, δηλαδή έχουν δειχθεί να υπερπαράγεται σε ασθενείς με καρκίνο και ποντικούς που φέρουν όγκο [1], [3] – [4]. Στη θέση του όγκου, αυτά CD11b

+ Gr1

+ μυελοειδή κύτταρα εκκρίνουν μια ποικιλία παραγόντων που μπορούν να συμβάλλουν άμεσα στην αγγειογένεση και την ανάπτυξη του όγκου [5] – [6].

Μεταξύ των παραγόντων που παράγονται από το CD11b

+ Gr1

+ μυελοειδή κύτταρα prokineticin 2 (pRok2), που αναφέρεται ως ΡΚ2 σε αυτό το έγγραφο, επίσης γνωστό ως Bv8. Ως ένα από τα δύο μέλη της prokineticin οικογένεια, ΡΚ2 δεσμεύεται με δύο ιδιαίτερα σχετική G-πρωτεΐνη υποδοχέων συζευγμένων (GPCRs), PROKR1, που αναφέρεται ως PKR1 και PROKR2, που αναφέρεται ως PKR2, και επηρεάζει πολλαπλές βιολογικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της αίσθησης του πόνου, του κιρκαδιανού ρυθμού , γαστρεντερικής κινητικότητας, νευρογένεση, την αιμοποίηση και την αγγειογένεση [7]. παραγωγή ΡΚ2 με CD11b

+ Gr1

+ μυελοειδή κύτταρα μπορεί να οδηγήσει στο σχηματισμό ενός θετικού βρόχου ανάδρασης, με ενισχυμένη διαφοροποίηση αυτών των μυελοειδών προδρόμων κυττάρων σε μακροφάγα, καθώς και η αυξημένη κινητοποίηση των εν λόγω κυττάρων από το μυελό των οστών σε η ροή του αίματος [8]. Αυτά τα διαφοροποιημένα μακροφάγα μπορεί στη συνέχεια να διεισδύσει το μικροπεριβάλλον του όγκου και να συνεχίσει να εκκρίνουν περισσότερο ΡΚ2, οδηγώντας σε αυξημένο πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση των ενδοθηλιακών κυττάρων που εκφράζουν PKR1 και PKR2, συμβάλλοντας έτσι στην ενίσχυση της αγγειογένεσης [8]. Εκτός από τη διέγερση των ενδοθηλιακών κυττάρων, ΡΚ2 δείχθηκε να επηρεάζει την παραγωγή κυτοκινών σε λεμφοκύτταρα ποντικού, η αύξηση της προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες IL-1B και IL-12 και μειώνοντας αντι-φλεγμονώδεις κυτοκίνες IL-4 και IL-10 [9] – [10] . υποδοχείς ΡΚ2 εκφράζονται επίσης σε μακροφάγα ποντικού και ενδοθηλιακά κύτταρα? κατά συνέπεια ΡΚ2 μπορεί να επάγει μετανάστευση αυτών των μακροφάγων και να επηρεάσουν το σχηματισμό των τριχοειδών δομών τύπου των ενδοθηλιακών κυττάρων [10] – [13]

Λόγω των σημαντικών ρόλων της ΡΚ2 στη δημιουργία ενός μικροπεριβάλλον του όγκου που ευνοεί όγκου. την ανάπτυξη και την εξέλιξη, ΡΚ2 έχει γίνει στόχος για την ανάπτυξη νέων θεραπειών για τον καρκίνο. Ένας αριθμός μελετών έχουν δείξει ότι πειστικά εξουδετερωτικά αντισώματα εναντίον ΡΚ2 μπορούσε εμφανίζουν μια ισχυρή αντικαρκινική επίδραση επί πολλούς τύπους ανθρώπινων καρκίνων σε μοντέλα ποντικού [1], [6], [8]. Τα εν λόγω θετικά αποτελέσματα από τον τύπο των πειραμάτων απόδειξη της αρχής έθεσαν τις βάσεις για την περαιτέρω ανάπτυξη των αντι-ΡΚ2 σε θεραπευτικά μέσα. Σε αυτή τη μελέτη, αναφέρουμε τα ευρήματά μας σχετικά με την αντικαρκινική δραστικότητα ενός συνθετικού μικρού μορίου ανταγωνιστή ΡΚ2, PKRA7 οποία μπορούν να ανταγωνιστούν για την σύνδεση του ΡΚ2 με τους υποδοχείς του PKR1 και PKR2, συνεπώς αναστέλλοντας την ικανότητα του ΡΚ2 να ενεργοποιεί καθοδικά μονοπάτια [ ,,,0],Zhou, χειρόγραφο σε προετοιμασία]. Επιλέξαμε να δοκιμάσει PKRA7 σε δύο τύπους όγκων, γλοιοβλάστωμα και του παγκρέατος, που έχουν επίμονα παρουσίασαν τις χειρότερες προγνώσεις μεταξύ όλων των καρκίνων, λόγω της έλλειψης αποτελεσματικής θεραπείας. Οι δύο τύποι οθόνης καρκίνο δραστικά διαφορετικές παθολογικά χαρακτηριστικά. Γλοιοβλάστωμα είναι ιδιαίτερα vascularized και έχει δείξει κάποια ευαισθησία σε αντι-αγγειογενετική θεραπεία, ενώ ο καρκίνος του παγκρέατος είναι συχνά ανεπαρκώς αγγειοποιημένου αλλά εξαιρετικά ινωτικών με ένα μεγάλο μέρος της μάζας του όγκου που αποτελείται από τα συστατικά στρωματικών συμπεριλαμβανομένων διεισδύσει μακροφάγα [14] – [16]. Ωστόσο, ένα κοινό χαρακτηριστικό και των δύο γλοιοβλαστώματος και καρκίνο του παγκρέατος είναι η εμπλοκή των μυελοειδών κυττάρων [17] – [20]. Ελπίζαμε να διαπιστωθεί αν PKRA7 μπορούσαν να έχουν αντίκτυπο στην αύξηση του όγκου μέσω ανασταλτική δράση της σε μυελοειδή κύτταρα. Σύμφωνα με αυτή την postulation, τα αποτελέσματά μας αποδεικνύουν σαφώς ότι PKRA7 διαθέτει μια ισχυρή αντικαρκινική δραστικότητα για αμφότερους τους τύπους καρκίνων, αν και μέσω διαφορετικών μηχανισμών. Επιπλέον, η μελέτη μας δείχνει ότι PKRA7 έχει τη δυνατότητα να γίνει ένα συστατικό του συνδυασμού θεραπειών με τη συνήθη φροντίδα που χρησιμοποιούνται σήμερα στην κλινική και αυτή η ένωση κρατά την υπόσχεση για την περαιτέρω ανάπτυξη για τη θεραπεία αυτών των καρκίνων που σήμερα έχουν πολύ κακή πρόγνωση.

Αποτελέσματα

PKRA7 καταστέλλει την ανάπτυξη όγκου σε γυμνούς (ηυ /ηυ) Mouse μοντέλο ξενομοσχεύματος γλοιοβλαστώματος μέσω αναστολής της αγγειογένεσης

Αν και ένα εξουδετερωτικό αντίσωμα αντι-ΡΚ2 βρέθηκε με προηγούμενες μελέτες για να εμφανιστεί αντι- δραστηριότητα του όγκου, διερευνήσαμε την πιθανότητα ότι τα μικρά μόρια μπορούν να αναπτυχθούν για να επιτευχθεί η ίδια αποτελεσματικότητα κατά του όγκου με χαμηλότερο κόστος και ευκολότερη παράδοσης. Μετά βιοχημικά τον καθορισμό της μοριακής φύσεως των αλληλεπιδράσεων μεταξύ ΡΚ2 και των υποδοχέων του [21], έχουμε προσδιορίσει την αλληλουχία εξαπεπτιδίου αμινοξέων AVTIGA στο Ν-άκρο της ΡΚ2 εντελώς συζήτησε μεταξύ των ειδών θηλαστικών και μη θηλαστικών και είναι κρίσιμης σημασίας για την ενεργοποίηση PKR1 και PKR2 [22]. Μεταλλάξεις σε αυτή την περιοχή συμπεριλαμβανομένου ενός υποκατάσταση ή προσθήκη μεθειονίνης στο Ν-τελικό άκρο A1M (αλανίνη σε μεθειονίνη) εμφανίζεται ισχυρή δράση ανταγωνιστή παρουσία τόσο PKR1 και PKR2 εκφράζεται σταθερά σε κύτταρα ωοθήκης κινέζικου χάμστερ (CHO) [22]. Μετά από αυτή την αρχική ανακάλυψη, συνθέσαμε πάνω από 200 μικρομοριακών ενώσεων που μιμούνται δομικά τα περιοχή ΡΚ2 Ν-τερματικό μεταλλαγμένα πεπτίδια και ελέγχθηκαν ικανότητά τους να αναστέλλουν ανταγωνιστικά την ενεργοποίηση των υποδοχέων ΡΚ2. Από αυτή την αρχική οθόνη, βρήκαμε πάνω από 60 υδατοδιαλυτές ενώσεις που εμφανίζουν ανασταλτική δράση επί της αλληλεπίδρασης ΡΚ2-υποδοχέα με σταθερά πρόσδεσης κάτω από 20 ηΜ (Zhou, χειρόγραφο υπό προετοιμασία). Έχουμε επιλέξει ένωση PKRA7 για τα πειράματά μας, διότι θα μπορούσε αναστέλλουν ισχυρά ΡΚ2 υποδοχείς, με τιμές IC50 5,0 και 8,2 ηΜ για PKR1 και PKR2, αντίστοιχα (Σχήμα S1), και, το πιο σημαντικό, θα μπορούσε να διαπεράσει το φράγμα αίματος-εγκεφάλου, μια χαρακτηριστικό που θα μπορούσε να είναι κρίσιμη για την θεραπεία του γλοιοβλαστώματος.

για να μελετηθεί η

in vivo επίδραση της

PKRA7 στην ανάπτυξη γλοιοβλάστωμα όγκου, δημιουργήσαμε πρώτα υποδόρια ξενομοσχεύματα ανθρώπινου γλοιοβλαστώματος όγκου σε γυμνούς ποντικούς. 5 × 10

4 D456MG κύτταρα γλοιώματος εμφυτεύθηκαν σε γυμνά ποντίκια δέκα υποδορίως και οι ποντικοί χωρίστηκαν σε δύο ομάδες θεραπείας 14 ημέρες μετά την εμφύτευση. Οι ποντικοί στην πρώτη ομάδα έλαβε μία ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) θεραπεία ελέγχου του PEG400 (πολυαιθυλενογλυκόλη) αραιωμένο 1:10 σε PBS, ενώ η δεύτερη ομάδα ποντικών έλαβε ενέσεις ΙΡ PKRA7 στο ίδιο διάλυμα σε μία δόση των 20 mg /kg /ημέρα. Τα μεγέθη των όγκων παρακολουθούνται κάθε τρεις ημέρες και καμπύλες ανάπτυξης παράχθηκαν (Σχήμα 1Α). 30 ημέρες μετά την εμφύτευση, οι όγκοι απομονώθηκαν μετά τα ποντίκια θυσιάστηκαν και ζυγίστηκαν (Σχήμα 1Β). Τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με PKRA7 έδειξαν σαφή μείωση τόσο ρυθμός ανάπτυξης του όγκου D456MG και το βάρος του όγκου. Για τον προσδιορισμό της μηχανισμό με τον οποίο PKRA7 ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος, μετρήσαμε τις πιθανές αλλαγές στην πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων και του βαθμού νέκρωσης σε όγκους D456MG επεξεργασμένο ή με αυτή την ένωση. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1C-F, μια αξιοσημείωτη μείωση στην σχετική πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων και μία σημαντική αύξηση σε περιοχές νεκρωτικές περιοχές των όγκων PKRA7 αγωγή παρατηρήθηκαν σε σύγκριση με τους μάρτυρες, υποδηλώνοντας ότι PKRA7 μπορεί να καταστείλει το σχηματισμό όγκων κυρίως μέσω της αναστολής της αγγειογένεσης μέσω PKR1 και PKR2 εκφράζεται στα ενδοθηλιακά κύτταρα με παρόμοιο τρόπο όπως τα αντισώματα ΡΚ2-neutrolizing [8], [12] – [13].

(Α) κύτταρα D456MG ήταν SC ένεση σε γυμνά ποντίκια, και ελέγχου ( n = 5) ή PKRA7 (n = 5) η θεραπεία ξεκίνησε όταν οι όγκοι έγιναν οπτικά ανιχνεύσιμη (14 ημέρες). Οι μετρήσεις ελήφθησαν κάθε 2-3 ημέρες. (Β) Μέσο βάρος όγκου ελέγχου και PKRA7 αγωγή όγκους ποντικών μετά την αφαίρεση. χρώση (C) IHC χρησιμοποιώντας δείκτη CD34 ενδοθηλιακών κυττάρων σε όγκους D456MG SC από ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με έλεγχο ή PKRA7. (D) Αθροιστική πιθανότητα του σκάφους σχετική πυκνότητα όπως μετράται με χρώση CD34. Αγγειακή πυκνότητα των όγκων μειώθηκε με τη θεραπεία PKRA7. (Ε) Αντιπροσωπευτική εικόνες του Η &? Ε χρώση τομών από τον έλεγχο και PKRA7 αγωγή όγκων SC (F) Ποσοτικοποίηση των νεκρωτικές περιοχές από 5 διαφάνειες κάθε όγκου ανά ομάδα αγωγής, τα ποσοστά των νεκρωτικές περιοχές μετρήθηκαν με ImageJ (* p ≤ 0,05 ). (G) 1 × 10

κύτταρα 4 D456MG ήταν IC ένεση σε γυμνά ποντίκια και θεραπεία ξεκίνησε 7 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου. Οι ποντικοί του ελέγχου (n = 8) ή θεραπεία PKRA7 (n = 9) ομάδα θυσιάστηκαν όταν ανέπτυξαν σοβαρή νευρολογική φαινότυπο ενδεικτική της ανάπτυξης του όγκου ενδοκρανιακά.

Η

Με βάση αυτά τα ενθαρρυντικά αποτελέσματα με την καταστολή της υποδόριας σχηματισμό όγκου από PKRA7, χρησιμοποιήσαμε ενδοκρανιακό εμβολιασμό των κυττάρων γλοιώματος να εκτιμηθεί η ικανότητα του PKRA7 να αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου σε παθολογικά σχετική ρύθμιση. Αυτή τη φορά, η θεραπεία ξεκίνησε 7 ημέρες μετά από 1 × 10

4 D456MG εμβολιασμό κυττάρων γλοιώματος με καθημερινές ενέσεις IP του PKRA7 ή ελέγχου του οχήματος. Τα ποντίκια θυσιάστηκαν όταν νευρολογικά σημάδια αυξανόμενο βάρος του όγκου έγινε εμφανές και οι ημερομηνίες καταγράφηκαν για να δημιουργηθεί μια καμπύλη Kaplan-Meier (Σχήμα 1G). Σε αυτή τη δοκιμασία, η θεραπεία με PKRA7 παρέτεινε σημαντικά την εμφάνιση των νευρολογικών σημείων του φορτίου του όγκου (μέση επιβίωση 38,4 ημέρες έναντι 34,1 ημέρες για τις PKRA7 και ελέγχου, αντίστοιχα, p ≤ 0,05), υποδεικνύοντας ότι PKRA7 ήταν αποτελεσματική στην αναστολή της ανάπτυξης όγκου στο ενδοκρανιακή περιβάλλον. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με μια άλλη κυτταρική σειρά γλοιώματος όπως για τα κύτταρα D456G (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

PKRA7 καταστέλλει την ανάπτυξη όγκου σε γυμνούς (ηυ /ηυ) Mouse μοντέλο ξενομοσχεύματος παγκρεατικού καρκίνου μέσω αναστολής του διήθηση μακροφάγων

στη συνέχεια εξετάσαμε εάν PKRA7 θα μπορούσαν να έχουν επιπτώσεις στην ανάπτυξη ξενομοσχεύματος ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου κύτταρα λόγω της καθιερωμένης ρόλος των μυελοειδών κυττάρων στο σχηματισμό του καρκίνου του παγκρέατος. 5 × 10

5 κύτταρα ASPC-1 εμβολιάσθηκαν σε γυμνά ποντίκια υποδορίως και η θεραπεία ξεκίνησε 7 ημέρες μετά την εμφύτευση ακολουθώντας την ίδια διαδικασία όπως με τα κύτταρα D456MG γλοιώματος. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α, το ρυθμό ανάπτυξης των κυττάρων ASPC-1 καταστάλθηκε από PKRA7, με αποτέλεσμα τη σημαντική μείωση του μέσου βάρους των όγκων (Σχήμα 2Β). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν όταν ένα διαφορετικό ανθρώπινο παγκρεατικό καρκίνο κυτταρική γραμμή, CFPAC-1, χρησιμοποιήθηκε στη θέση του ASPC-1 κύτταρα (Σχήμα S2).

(Α) κύτταρα ASPC-1 ήταν SC ένεση σε γυμνά ποντίκια και ελέγχου (n = 4) ή PKRA7 (n = 5) η θεραπεία ξεκίνησε όταν οι όγκοι έγιναν οπτικά ανιχνεύσιμη (9 ημέρες). Οι μετρήσεις ελήφθησαν κάθε 2-3 ημέρες. (Β) Μέσο βάρος όγκου ελέγχου και PKRA7 αγωγή όγκους ποντικών μετά την αφαίρεση (* p ≤ 0,05). (C) Εκπρόσωπος H & amp? Ε διαφάνειες από τον έλεγχο και οι όγκοι αντιμετωπίζονται PKRA7. (Δ) Ποσοτικοποίηση των νεκρωτικές περιοχές από 5 διαφάνειες κάθε όγκου ανά ομάδα αγωγής, τα ποσοστά των νεκρωτικές περιοχές μετρήθηκαν με ImageJ (p = 0,205719). χρώση (Ε) IHC χρησιμοποιώντας δείκτη μακροφάγων /80 ποντίκι F4 του ASPC-1 όγκων SC αντιμετωπίζεται με έλεγχο ή PKRA7. (F) Ποσοτικοποίηση της μέσης διήθηση μακροφάγων του ASPC-1 όγκων σε επεξεργασία με τον έλεγχο (η = 4) ή PKRA7 (n = 5), 5 διαφάνειες κάθε όγκου ανά ομάδα θεραπείας (* p ≤ 0,05).

Η

για τον προσδιορισμό του δυναμικού μηχανισμού βασίζεται η σημαντική μείωση στην ανάπτυξη του όγκου λόγω της θεραπείας PKRA7, εξετάσαμε τα τμήματα του όγκου για τα σημάδια των αλλαγών στην αγγειογένεση και νέκρωση. Δεν υπήρχε διαφορά στην πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων και αν υπήρχαν λιγότερα σκάφη ανά οπτικό πεδίο παρατηρήθηκε σε σύγκριση με τα τμήματα γλοιοβλάστωμα (τα δεδομένα δεν φαίνονται) και παρατηρήθηκαν παρόμοια επίπεδα νέκρωσης των όγκων που προέρχονται από τα επεξεργασμένα και τα ποντίκια ελέγχου (Εικόνα 2C, ΡΕ). Αντίθετα, υπήρξε μια σημαντική μείωση του αριθμού των μακροφάγων διεισδύσει εντός των όγκων που απομονώθηκαν από ποντίκια PKRA7 αγωγή όπως μετρήθηκε με χρώση ένταση του δείκτη μακροφάγων ποντικού F4 /80 (Σχήμα 2Ε, F). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν έντονα ότι PKRA7 θα μπορούσε να αναστείλει την ανάπτυξη του όγκου του παγκρέατος μέσω ενός διαφορετικού μηχανισμού από το κλείδωμα PKR1- και PKR2 εκφράζουν μακροφάγα από διηθητικά μέσα στο μικροπεριβάλλον του όγκου και όχι την καταστολή της αγγειογένεσης, μια παρατήρηση συμφωνεί με τα φαινοτυπικά χαρακτηριστικά του ανθρώπινου καρκίνου του παγκρέατος ως ανεπαρκώς αγγειοποιημένου αλλά παρουσιάζουν άφθονη δεσμοπλαστικού ίνωση και περιέχει μεγάλο αριθμό διεισδύσει μυελοειδή κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων μακροφάγων [10], [15].

PKRA7 Αναστέλλει ενδοθηλιακών κυττάρων τριχοειδών Διακλάδωση και μυελογενής κυττάρων μετανάστευση

Τα αποτελέσματα από το

in vivo μελέτες

ξενομοσχεύματος ανθρώπινου γλοιώματος και παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα υποστήριξε σθεναρά την ιδέα ότι η αντικαρκινική δραστικότητα του PKRA7 μπορούσε να διαμεσολαβείται μέσω δύο πολύ διαφορετικών μηχανισμών. Για να διερευνήσουν περαιτέρω αυτό σε κυτταρικό επίπεδο, πραγματοποιήσαμε

in vitro

δοκιμασίες για να αξιολογηθεί η επίδραση του PKRA7 στην αγγειογενετική δραστηριότητα των ενδοθηλιακών κυττάρων, καθώς επίσης και η μεταναστευτική ικανότητα μυελοειδή κύτταρα. Για να καθοριστεί εάν PKRA7 επηρεάζει την ικανότητα των ενδοθηλιακών κυττάρων να σχηματίσουν τριχοειδή δίκτυο σωλήνας που μοιάζει ως ένας σημαντικός δείκτης της αγγειογένεσης [23], μπορούμε απασχολουμένων αθανατοποιημένα ανθρώπινα μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα (IHMVECs). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 200 ng /ml ανασυνδυασμένης μόνος ΡΚ2 ή ΡΚ2 συν 1 μg /ml PKRA7 και επιστρώθηκαν επάνω σε ένα λεπτό στρώμα Matrigel. Αυτή η συγκέντρωση PKRA7 χρησιμοποιήθηκε στο

in vitro

πειράματά μας, επειδή είναι κοντά στη συγκέντρωση του PKRA7 στην κυκλοφορία ποντικών από μας

in vivo πειράματα

ενώ παραμένει μη τοξικό για τα κύτταρα σε καλλιέργειας ιστού (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Α, PKRA7 ανέστειλε αποτελεσματικά ΡΚ2 επαγόμενη τριχοειδή διακλάδωση όπως μετράται με τον αριθμό των συνδέσεων μεταξύ των κυττάρων, αλλά δεν είχε καμία επίδραση επί VEGFA επαγόμενη διακλάδωσης τριχοειδών (ποσοτικοποίηση παρουσιάζονται στην Εικόνα 3Β). Ταυτόσημα αποτελέσματα ελήφθησαν με τη χρήση δύο επιπλέον ενδοθηλιακών κυτταρικών σειρών: ποντίκι εμβρυϊκών ενδοθηλιακά κύτταρα και πρωτογενή ανθρώπινα μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η ειδικότητα του αντι-ΡΚ2 σε αυτή τη δοκιμασία επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με την επίδειξη ενός παρόμοιου αποτελέσματος από τον πολυκλωνικό αντιορό αντι-ΡΚ2 (Σχήμα S3 και τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι PKRA7 μπορούν να αναστείλουν ειδικά την αγγειογενετική δράση του ΡΚ2 σε ενδοθηλιακά κύτταρα.

(Α) IHMVECs απλώνονται επί Matrigel σε υποδεικνυόμενες ομάδες θεραπείας. Αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες πάρθηκαν στις 8 ώρες μετά την επίστρωση. (Β) Μέσος αριθμός των συνδέσεων μεταξύ των κυττάρων μετρήθηκε και αναλύθηκε. Τα αποτελέσματα είναι κανονικοποιημένα δεδομένα από 3 ανεξάρτητα πειράματα. Προσθήκη PKRA7 σημαντικά μπλοκ ΡΚ2 που προκαλείται από τριχοειδή διακλάδωσης (* p ≤ 0,05). (C) 1 × 10

5 ΤΗΡ-1 κύτταρα στο πάνω μέρος του θαλάμου του transwells αφέθηκαν να μεταναστεύσουν για 4 ώρες. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν, χρωματίστηκαν και ο αριθμός των κυττάρων ανά οπτικό πεδίο μετρήθηκαν. Τα αποτελέσματα είναι το κανονικοποιημένο μέσο όρο 3 ανεξάρτητων πειραμάτων. Η προσθήκη PKRA7 μπλοκαριστεί σημαντικά ΡΚ2 επαγόμενη μετανάστευση μονοκυττάρων (* p ≤ 0,05). (Δ) 7,5 × 10

4 RAW264.7 κύτταρα στην κορυφή του θαλάμου του transwells αφέθηκαν να μεταναστεύσουν για 18 ώρες. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν, χρωματίστηκαν και ο αριθμός των κυττάρων ανά οπτικό πεδίο μετρήθηκαν. Τα αποτελέσματα είναι το κανονικοποιημένο μέσο όρο 3 ανεξάρτητων πειραμάτων. Η προσθήκη PKRA7 μπλοκαριστεί σημαντικά ΡΚ2 επαγόμενη μετανάστευση μακροφάγων (* p ≤ 0,05). (Ε) Μέση μετρούμενη φωταύγεια θέση του όγκου μετά την έγχυση ΙΡ RAW κύτταρα λουσιφεράσης-επισημασμένου σε ελέγχου (n = 4) ή PKRA7 (n = 4) αγωγή ποντικούς με SC ASPC-1 όγκων 30 ημέρες μετά την εμφύτευση. Μέσος συνολικές μετρήσεις λουσιφεράσης ήταν χαμηλότερα σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με PKRA7 σύγκριση με τον έλεγχο (* p ≤ 0,05). δοκιμασίας (F) qPCR να μετρηθεί η επίδραση του PKRA7 στην έκφραση των χημειοκινών και υποδοχέων χημειοκίνης που εντοπίστηκαν να επάγεται από θεραπεία ΡΚ2. Στοιχεία σχετικά με τις μεταβολές της στάθμης του mRNA εμφανίζονται ως log2 των αλλαγών τιμής Ct. PKRA7 αναστέλλει προς τα πάνω ρύθμιση CCL27, CCR10, CCR4, CCR5 και CCR6 (* p ≤ 0,05).

Η

Για να προσδιοριστεί η επίδραση της PKRA7 στην ΡΚ2-επαγόμενη μετανάστευση μυελοειδή κύτταρα, χρησιμοποιήσαμε την ανθρώπινη μονοκυττάρων κυτταρική γραμμή, ΤΗΡ-1 χρησιμοποιώντας δοκιμασία μετανάστευσης transwell. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3C, 1 μg /ml PKRA7 απομείωση αποτελεσματικά το ΡΚ2-επαγόμενη μετανάστευση των κυττάρων ΤΗΡ-1, αλλά όχι το μετανάστευση αυτών των κυττάρων προς CCL2 ή μονοκύτταρο χημειοτακτικών πρωτεΐνη 1 (MCP-1), ένα γνωστό χημειοελκτικό του ΤΗΡ -1 [24] – [25]. Σχεδόν ίδια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν με την κυτταρική γραμμή μακροφάγων ποντικού, RAW264.7 με PKRA7 ειδικά αποκλεισμού ΡΚ2 επαγόμενη μετανάστευση αλλά όχι μετανάστευση που προκαλείται από CXCL12, εδώ αναφέρεται ως SDF-1α (Σχήμα 3D). Ως εκ τούτου, PKRA7 αναστέλλει ειδικά ΡΚ2 που προκαλείται από τη μετανάστευση των μυελοειδή κύτταρα από ανθρώπινο και ποντικού προέλευση.

Για να αξιολογήσει τον αντίκτυπο της PKRA7 για τη μετανάστευση /διήθηση των μακροφάγων ποντικού μέσα στο μικροπεριβάλλον των όγκων ξενομοσχεύματος που σχηματίζεται από ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος , μετρήσαμε συσσώρευση στους όγκους του λουσιφεράσης-επισημασμένου RAW264.7 μακροφάγα κύτταρα 24 ώρες μετά την έγχυση ΙΡ τους στην γυμνούς ποντικούς 30 ημέρες μετά την υποδόρια εμφύτευση ASPC-1 καρκινικά κύτταρα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Ε, μια σημαντική μείωση στην φωταύγειας του σήματος που εκπέμπεται από τα μακροφάγα κύτταρα ποντικού παρατηρήθηκε σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με PKRA7 σε σύγκριση με εκείνη των ποντικών ελέγχου. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι PKRA7 είναι σε θέση να εμποδίσει τη μετανάστευση των μακροφάγων /διείσδυση εντός της θέσης του όγκου σε ένα

in vivo

ρύθμιση, αναστέλλοντας έτσι την ικανότητα των μακροφάγων να συμβάλλει θετικά στην ανάπτυξη όγκων ξενομοσχεύματος.

για να εξεταστεί περαιτέρω ο μηχανισμός με τον οποίο μπλοκ PKRA7 ΡΚ2-επαγόμενη μετανάστευση των μακροφάγων, πραγματοποιήσαμε μια συστοιχία κυτοκίνης χρησιμοποιώντας ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR επί ΤΗΡ-1 κύτταρα που επάχθηκαν για να διαφοροποιηθούν σε κύτταρα μακροφάγων. Μεταξύ μια σειρά από 95 ανθρώπινα συνδετών χημειοκίνης /κυτοκίνης και των υποδοχέων τους, πέντε παρουσίασαν σημαντική επαγωγή στην έκφραση τους μετά από θεραπεία με ΡΚ2 συμπεριλαμβανομένων CCL27, CCR10, CCR4, CCR5, και CCR6 (Σχήμα S4). Είναι σημαντικό ότι, τουλάχιστον τέσσερα από αυτά που επάγεται μορίων είναι γνωστό ότι εμπλέκονται στην ενίσχυση της μετανάστευσης των μυελοειδών κυττάρων και όλων των επαγωγή τους με ΡΚ2 αμβλύνθηκε με PKRA7 (Σχήμα 3F), υποδηλώνοντας έντονα ότι η καταστολή της ΡΚ2-επαγόμενη παραγωγή αυτών των χημειοκινών και υποδοχείς κάτω από την κύρια μηχανισμός της δραστικότητας κατά του όγκου του PKRA7 στο πλαίσιο του καρκίνου του παγκρέατος.

PKRA7 Ενισχύει την αποτελεσματικότητα του Προτύπου θεραπειών για το γλοιοβλάστωμα και το καρκίνο του παγκρέατος σε Μοντέλα ξενομοσχεύματος

Αν και PKRA7 εμφανίζονται ισχυρές δραστηριότητες κατά του όγκου στα πλαίσια της τόσο γλοιοβλάστωμα και του παγκρέατος, είναι απίθανο να αναπτυχθεί σε ένα θεραπευτικό παράγοντα που χρησιμοποιείται μόνος. Για να ελεγχθεί αν PKRA7 θα μπορούσε να αυξήσει την αποτελεσματικότητα των τυποποιημένων χημειοθεραπευτική αγωγή για γλοιοβλαστώματος, εξετάσαμε την επίδραση αυτής της ένωσης σε συνδυασμό με την τεμοζολομίδη που χρησιμοποιείται σήμερα στην κλινική για την ασθένεια αυτή [26] – [27]. Μετά καθιερωμένη πειραματική διαδικασία για την αξιολόγηση της επίδρασης των συνδυαστικών θεραπείας σε μοντέλα ποντικού ξενομοσχεύματος [28] – [29], 1 × 10

4 κύτταρα D456MG εμφυτεύθηκαν ενδοκρανιακά και ακολουθείται από κατεργασία με 10 mg /kg τεμοζολομίδης για πέντε ημέρες, και στη συνέχεια με ή χωρίς χορήγηση PKRA7 κατά τη διάρκεια των υπολοίπων ημερών των πειραμάτων. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, η θεραπεία τόσο με τεμοζολομίδη και PKRA7 παρέτεινε την εμφάνιση των νευρολογικών σημείων του φορτίου του όγκου σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν τον έλεγχο, τεμοζολομίδη ή PKRA7 μόνο, υποδεικνύοντας μια ενισχυμένη επίδραση της συνδυαστικής θεραπείας με τους παράγοντες στην αναστολή της ενδοκρανιακής ανάπτυξη γλοιώματος σε γυμνά ποντίκια (μέση επιβίωση 49,8 ημερών για PKRA7 συν τεμοζολομίδη έναντι 44,6 ημερών είτε τεμοζολομίδη ή PKRA7 μόνη vs 38,6 ημέρες για τον έλεγχο).

(Α) καμπύλη Kaplan-Meier άτριχων ποντικών μετά τεμοζολομίδη και θεραπεία PKRA7 μετά την έγχυση IC 1 × 10

κύτταρα 4 D456MG. Η θεραπεία με 10 mg /kg ή τεμοζολομίδης ελέγχου ξεκίνησε 3 ημέρες μετά την ένεση IC για ένα σύνολο 5 διαδοχικές καθημερινές θεραπείες. Η θεραπεία με PKRA7 ή ελέγχου ξεκίνησε 7 ημέρες μετά την ένεση IC και συνεχίστηκε για όλη τη διάρκεια του πειράματος. 5 ποντίκια ανά συνθήκη. (Β) ASPC-1 κύτταρα ήταν SC ένεση σε γυμνά ποντίκια, και ελέγχου (n = 10) ή PKRA7 (n = 10) η αγωγή άρχισε όταν οι όγκοι ήταν ορατά (7 ημέρες). Η θεραπεία με 100 /kg γεμκιταβίνη mg (n = 10) ή ελέγχου (n = 10) άρχισε 7 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου και χορηγήθηκε κάθε 4 ημέρες για δύο εβδομάδες για ένα σύνολο 4 θεραπείες (#). Οι μετρήσεις ελήφθησαν κάθε 3 ημέρες. 5 ποντίκια ανά συνθήκη. (Γ) Μέσο βάρος του όγκου ελέγχου, γεμσιταμπίνη, PKRA7 και gemcitabine συν PKRA7 αγωγή όγκους ποντικών μετά την απομάκρυνσή τους (* p ≤ 0,05).

Η

Για τον καρκίνο του παγκρέατος, γεμσιταμπίνη είναι ένα από τα κύρια χημειοθεραπευτικών φάρμακα που χρησιμοποιούνται σήμερα στην κλινική και ελέγχθηκε προηγουμένως σε μελέτες θεραπείας συνδυασμού που περιλαμβάνει κύτταρα ASPC-1 [30]. Στα πειράματά μας, 5 × 10

5 κύτταρα ASPC-1 εμφυτεύθηκαν υποδορίως σε γυμνούς ποντικούς που υποβλήθηκαν σε αγωγή με PKRA7 και γεμσιταβίνη (100 mg /kg) 7 ημέρες αργότερα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Β, είναι σαφές ότι οι όγκοι από τα ποντίκια έλαβαν τόσο γεμσιταμπίνη και PKRA7 ήταν σημαντικά μικρότερες από εκείνες από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με μόνο γεμκιταβίνη ή PKRA7. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι συνδυαστική θεραπεία με γεμσιταβίνη και PKRA7 θα μπορούσαν να έχουν μια ισχυρότερη αντικαρκινική δράση από την τυπική θεραπεία για τη μείωση της ανάπτυξης του όγκου του παγκρέατος καρκίνο του ξενομοσχεύματος στο μοντέλο μας.

Συζήτηση

ογκογένεση ένα συγκρότημα διαδικασία η οποία περιλαμβάνει πολύ περισσότερα από πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα του όγκου. Τα καρκινικά κύτταρα με τη βοήθεια και υποστηρίζονται από την περιβάλλουσα στρωματικών όγκων μικροπεριβάλλον που είναι πλούσια με ένα ετερογενές μίγμα κυττάρων όπως οι ινοβλάστες, τα ενδοθηλιακά κύτταρα και τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος [31]. Αυτά τα κύτταρα ανταποκρίνονται σε σήματα από την επέκταση του όγκου με την έκκριση παραγόντων του δικού τους, που μπορεί να διαιωνίσει το σήμα ανάπτυξη, αναδιαμορφώσει την εξωκυτταρική μήτρα, να συμβάλει στην αγγειογένεση και τον αναπροσανατολισμό του ρόλου των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος. Η αγγειογένεση έχει από καιρό κατανοητό ότι είναι ένα σημαντικό μέρος της ογκογένεσης και πολλές μελέτες έχουν γίνει για να εμποδίσει αυτή τη διαδικασία [32]. Ενώ έχουν γίνει σημαντικά αγγειογόνους παράγοντες έχουν ταυτοποιηθεί όπως VEGF, θεραπευτικά έναντι του μονοπατιού σηματοδότησης VEGF δεν έχει αποδειχθεί να είναι καθολικά επιτυχής. Πράγματι, πολλοί καρκίνοι είναι ανθεκτικά σε αντι-VEGF θεραπεία ή να γίνουν ανθεκτικές στην χορήγηση αυτών των θεραπειών, με αποτέλεσμα επανάληψη η οποία είναι μερικές φορές πιο επιθετικό από τον πρωτογενή όγκο [14], [16], [33] – [38].

υπάρχει ανάγκη για τον εντοπισμό και στόχευση επιπλέον οδών σηματοδότησης που μπορεί να συμβάλει στην αγγειογένεση ή άλλες διεργασίες που έχουν αποδειχθεί ότι είναι σημαντικά για την εξέλιξη του όγκου, όπως διήθηση μακροφάγων. ΡΚ2 και των υποδοχέων του είναι μέρος ενός μονοπατιού σηματοδότησης που εμπλέκονται σε μυελοειδή κυτταρική κινητοποίηση [8]. Πολλαπλές μελέτες έχουν δείξει ότι η CD11b

+ Gr1

+ μυελοειδή πρόδρομα κύτταρα μπορούν να συμβάλουν στην αγγειογένεση και ογκογένεση σε μια ποικιλία τύπων καρκίνου [8], [37], [39]. Τα μακροφάγα που προέρχονται από αυτά τα πρόδρομα κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του όγκου μπορεί επίσης να εκκρίνουν κυτοκίνες οι οποίες επηρεάζουν άμεσα την ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου. Σε πρόσφατες μελέτες, η αποτελεσματικότητα κατά του όγκου ενός αντισώματος αντι-ΡΚ2 έχει συγκριθεί με θεραπεία με ένα αντίσωμα αντι-νΕΟΡ και βρέθηκε να είναι σχεδόν τόσο αποτελεσματική στην πρόληψη της εξέλιξης της νόσου του διαγονιδιακού μοντέλου ποντικού παγκρεατικών ογκογένεσης β-κυττάρων, ενώ ο συνδυασμός των δύο αντισωμάτων έδειξε μια ακόμα πιο έντονη επίδραση στην αναστολή της υποδόριας ανάπτυξη των διαφόρων καρκινικών κυτταρικών γραμμών ανθρώπου (καρκίνος του παχέος εντέρου, ραβδομυοσάρκωμα) και καρκινικά κύτταρα ποντικού (μαστοκύτωμα, λέμφωμα) [8], [39]. αγωγή με αντίσωμα αντι-ΡΚ2 μείωσε επίσης τον αριθμό των κυκλοφορούντων και διηθούν όγκο CD11b

+ Gr1

+ μυελοειδή κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων μακροφάγων που προέρχονται από μυελό των οστών, τα οποία έχουν αποδειχθεί ότι μεσολαβούν ανθεκτικότητα σε αντι-VEGF σε πολλές θεραπείες ποντικού μοντέλα ξενομοσχεύματος όγκου [8], [37]. Αυτές οι μελέτες έχουν δείξει ΡΚ2 ως νόμιμο στόχο για θεραπεία του καρκίνου.

θεραπείες που βασίζονται σε αντισώματα αντιπροσωπεύουν ένα σημαντικό μέρος των επιλογών θεραπείας του καρκίνου στη σημερινή κλινικές. Ωστόσο, οι μελέτες με ασθενείς και μοντέλα ποντικών του γλοιοβλαστώματος και του καρκίνου του παγκρέατος έχουν δείξει ότι αυτοί οι τύποι του καρκίνου μπορεί να είναι ανθεκτικά ή ανθεκτική σε αντι-VEGF θεραπείες σηματοδότηση [14], [16], [33], [35] – [37] . Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι η ανθεκτική αυτή η απόκριση μπορεί να είναι κοινή για επιπλέον τύπους καρκίνου όπως του μαστού και του παχέος εντέρου [34], [40] – [41]. Οι ασθενείς μπορεί να επωφεληθεί από επιπρόσθετες θεραπείες που στοχεύουν εναλλακτικές οδούς σε συνδυασμό με θεραπείες σηματοδότησης αντι-VEGF για την πρόληψη πυρίμαχα αποκρίσεις. Ετσι, αναστολείς μικρού μορίου προσφέρει μια εναλλακτική θεραπευτική προσέγγιση, επειδή μπορεί ακόμα να είναι ειδικές για τους στόχους τους, ενώ είναι πιο αποδοτικές στην κατασκευή. Επίσης, ορισμένες θεραπείες φαρμάκου που απαιτείται για να διασχίσει φράγμα αίματος-εγκεφάλου για να θεραπεύουν ασθένειες όπως αναστολείς γλοιοβλάστωμα και μικρού μορίου είναι καλοί υποψήφιοι για το σκοπό αυτό. Από αυτή την άποψη, η επίδειξη μας που PKRA7 είναι ικανή να διαπερνά το φραγμό αίματος-εγκεφάλου στον ποντικό και δρα για την αναστολή του σχηματισμού ενδοκρανιακή ξενομοσχεύματος όγκου από κύτταρα γλοιώματος παρουσιάζει μια εναλλακτική στρατηγική για την αναστολή της αγγειογένεσης του όγκου μέσω ενός μηχανισμού διαφορετικού από εκείνον των αντι-VEGF αφού ΡΚ2 ενισχύει την αγγειογένεση μέσω συνδυασμό μονοπατιών ενεργοποιημένο υποδοχέα G-πρωτεΐνες [7].

δεσμοπλαστικού στρώματος είναι ένα καθοριστικό χαρακτηριστικό του καρκίνου του παγκρέατος και μπορεί να περιέχουν υψηλά επίπεδα των μακροφάγων που σχετίζονται με όγκο (ΤΑΜ), ειδικά στο μεταναστευτικό μέτωπο του καρκίνου του παγκρέατος [15], [18]. Αυτή η διείσδυση μακροφάγων πιστεύεται ότι συμβάλλει στην εξέλιξη της νόσου και σχετίζεται με κακή πρόγνωση [18]. Πρόσφατες μελέτες αναφέρουν ότι ανοσοκατασταλτικά κυττάρων συμπεριλαμβανομένων ΤΑΜ, μυελοειδή προερχόμενα κατασταλτικών κυττάρων (MDSCs) και ρυθμιστικά Τ κύτταρα (Τ

reg) βρέθηκαν σε υψηλά επίπεδα στις αρχές να όψιμα στάδια της προόδου του καρκίνου σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό σε ένα μοντέλο ποντικού προ-επεμβατική και επεμβατική αδενοκαρκινώματος παγκρεατικού πόρου [42]. ΡΚ2 μπορεί να παίζει ένα κρίσιμο ρόλο στην πολύπλοκη και δυναμική σχέση μεταξύ παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα και αυτά τα στρωματικά κύτταρα μέσω της ρύθμισης της πρόσληψης και δραστικότητας μυελοειδή κύτταρα. Πράγματι, έχουμε βρει ότι ΡΚ2 επάγει την παραγωγή χημειοκινών και υποδοχέων που εμπλέκονται στη μετανάστευση των μυελοειδών κυττάρων και PKRA7 θα μπορούσαν να εμποδίσουν αυτή την επαγωγή (Σχήμα 3F). Οι υποδοχείς χημειοκινών, CCR10 και CCR4, είναι γνωστό ότι ανταποκρίνεται σε χημειο-προσελκυστικά CCL27, MCP-1, και CCL22, έχουν δειχθεί ότι είναι κρίσιμη για την επαγωγή κινητοποίησης και παλιννόστησης των μυελοειδών κυττάρων και των λευκοκυττάρων στη θέση του όγκου [43]. Οι Ο υποδοχέας χημειοκίνης CCR6 και CCL20 συνδετήρα αυτής έχουν εμπλακεί σε δενδριτικά κυτταρική μετανάστευση και φαίνεται να είναι σημαντική για τη διατήρηση κανονικού επιπέδου του πληθυσμού μακροφάγων αφού CCR6

– /- ποντίκια παρουσίασαν μειωμένη αριθμοί κυττάρων μακροφάγων [44]. Οι μελέτες μας έδειξαν ότι οι όγκοι του παγκρέατος είναι ελάχιστα αγγειωμένοι και περιέχουν σχετικά λίγα τα ενδοθηλιακά κύτταρα στα μη επεξεργασμένα ποντίκια και επιβεβαίωσαν ότι τυχόν αλλαγές στην αγγειακή πυκνότητα λόγω της αναστολής της PKR από PKRA7 στα ποντίκια που έλαβαν θα ήταν πιθανόν να είναι πολύ μικρό και δύσκολο να ανιχνευθεί.