Αφηρημένο

Σε σποραδικές καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC), η

BRAF

V600E

μετάλλαξη συνδέεται με ανεπαρκή επισκευή ασυμφωνία (MMR) καθεστώς και αντιστρόφως συνδέονται με μεταλλάξεις KRAS. Σε αντίθεση με ανεπάρκεια MMR (dMMR) CRC, τα δεδομένα σχετικά με την παρουσία του

KRAS

ογκογόνων μεταλλάξεων σε καλά MMR (pMMR) CRC και τη σχέση τους με την εξέλιξη του όγκου είναι λιγοστές. Ως εκ τούτου, εξέτασε την κατάσταση MMR σε συνδυασμό με

KRAS

μεταλλάξεις σε 913 Κινέζους ασθενείς και συσχετίστηκαν τα ευρήματα που ελήφθησαν με κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά. Η κατάσταση MMR καθορίστηκε με βάση την ανίχνευση του MLH1, MSH2, MSH6 και έκφραση PMS2.

KRAS

μετάλλαξη και την κατάσταση dMMR ανιχνεύθηκαν στο 36,9% και το 7,5% των περιπτώσεων, αντίστοιχα. Τέσσερις υπότυποι προσδιορίστηκαν με MMR και

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης του:

KRAS

(+) /pMMR (34,0%),

KRAS

(+) /dMMR (2,9%) ,

KRAS

(-) /pMMR (58,5%) και

KRAS

(-) /dMMR (4,6%). Ένα υψηλότερο ποσοστό των pMMR όγκων με

KRAS

μετάλλαξη ήταν πιο πιθανό να είναι γυναίκες (49,0%), εγγύς βρίσκεται (45,5%), το βλεννώδες ιστολογία (38,4%), και να έχουν αυξημένη μετάσταση λεμφαδένων (60,3 %), σε σύγκριση με pMMR όγκους χωρίς να

BRAF

V600E

και

KRAS

μεταλλάξεις (36,0%, 29,3%, 29,4% και 50,7%, αντίστοιχα? όλα

P

& lt? 0,01). Για το αντίθετο, σε σύγκριση με εκείνους με

KRAS

(-) /όγκους dMMR, οι ασθενείς με

KRAS

(+) /dMMR όγκους δεν έδειξαν στατιστικά σημαντικές διαφορές ως προς το φύλο, τη θέση του όγκου, το βάθος pT της εισβολής, λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες, το στάδιο pTNM, και ιστολογική βαθμολογία. Αυτή η μελέτη έδειξε ότι οι συγκεκριμένες επιδημιολογικές και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά που σχετίζονται με το MMR κατάσταση στρωματοποιημένη από

KRAS

μετάλλαξη. Η γνώση της MMR και

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης μπορεί να ενισχύσει την μοριακή παθολογική σταδιοποίηση των ασθενών CRC και τη μεταστατική εξέλιξη στο CRC μπορεί να εκτιμηθεί με βάση το συνδυασμό αυτών των βιοδεικτών

Παράθεση:. Λι W, Zhi W , Ζου S, Qiu Τ, Ling Υ, Shan L, et al. (2015) Διακριτή κλινικοπαθολογοανατομικές Πρότυπα Κατάσταση Επισκευή Ασυμφωνία σε καρκίνο του παχέος εντέρου Στρωματοποιημένη από

KRAS

μεταλλάξεις. PLoS ONE 10 (6): e0128202. doi: 10.1371 /journal.pone.0128202

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: 3 Φεβρουαρίου, 2015? Αποδεκτές: 24 Απριλίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: τέταρτης Ιουνίου 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση από το πρόγραμμα Νέα Γενιά Backbone (σε Jianming Ying) του Αντικαρκινικού Νοσοκομείου, ΚΑΜΕΡΕΣ, το Πεκίνο, η Κίνα, το Φυσικό πρόγραμμα βασικής έρευνας της Κίνας (973 πρόγραμμα 2014CB542002 ), και το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81401984). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι μια ετερογενής νόσος εξελίσσεται από διαφορετικά γενετικά μονοπάτια και μια ακριβή εκτίμηση του καρκίνου με βάση τα χαρακτηριστικά του όγκου θα επιτρέπουν την εξατομικευμένη θεραπεία του καρκίνου [1,2,3]. Επί του παρόντος, ανατομικά και παθολογικά στάσης εξακολουθεί να είναι η πιο ακριβή προγνωστικό δείκτη της έκβασης των ασθενών [4]. Η ανακάλυψη και η επικύρωση των γενετικών δεικτών προσδιορισμό της απόδοσης της μεταστατική εξέλιξη του CRC είναι επομένως ένα σημαντικό τομέα της έρευνας, με την πιθανή αξία του καθορισμού του υποσυνόλου των ασθενών στο υψηλότερο ή χαμηλότερο κίνδυνο υποτροπής. Μία από τις πολλά υποσχόμενες μοριακών δεικτών διερευνηθεί σε CRC είναι η παρουσία του μικροδορυφορικού όγκου αστάθεια (MSI) [5,6,7,8].

CRC γενικά χωρίζεται σε δύο γνωστά μοριακά μονοπάτια, συμπεριλαμβανομένης της χρωμοσωμικής αστάθειας (CIN) οδός και η οδός μικροδορυφορικού αστάθεια (MSI). MSI είναι το αποτέλεσμα της ανεπάρκεια επιδιόρθωσης αναντιστοιχία DNA (dMMR) [9]. Μια μετάλλαξη βλαστικής σειράς σε ένα από τα γονίδια MMR, συμπεριλαμβανομένων

MLH1

,

MSH2

,

MSH6

ή

PMS2

, είναι η αιτία της dMMR σε ασθενείς με σύνδρομο Lynch, η οποία είναι μια κληρονομική διαταραχή που αυξάνει τον κίνδυνο ανάπτυξης CRC [10,11]. Ελλιπή MMR παρατηρείται επίσης σε 10% έως 20% των ασθενών με σποραδική CRC, των οποίων η πλειονότητα των όγκων dMMR οφείλονται σε υπερμεθυλίωση

MLH1

γονίδιο υποκινητή, με

MSH2

και

MSH6

λογιστικής για ένα μικρότερο ποσοστό [5]. Σποραδικές όγκους dMMR, αλλά δεν είναι το σύνδρομο Lynch, συχνά φέρουν την ενεργοποίηση σωματική μετάλλαξη V600E στο εξόνιο 15 του

BRAF

ογκογονίδιο [12,13,14]. Τόσο η σποραδική και Lynch σύνδρομο που σχετίζεται με όγκους με την κατάσταση dMMR έχουν διακριτά κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά, όπως η προνομιακή τοποθεσία στο εγγύς κόλον, εξέχουσα διήθηση λεμφοκυτταρική, βλεννώδες ή σφραγίδα διαφοροποίηση δαχτυλίδι, και σύνδεση με ευνοϊκή πρόγνωση. Στοιχεία από το μονοπάτι PETACC-3 ανέφεραν ότι τα δείγματα όγκου με την κατάσταση dMMR είναι πιο συχνές στο στάδιο της νόσου II σε σχέση με το ΙΙΙ στάδιο της νόσου (22%

vs

12%,

P

& lt? 0.001) και με ποσοστό 3,5% στο στάδιο IV όγκους. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι dMMR όγκοι έχουν μειωμένη πιθανότητα μετάστασης και να προτείνει ένα πιο ευνοϊκό αποτέλεσμα [9,15].

Η /ERK καταρράκτη κινάσης Ras /Raf /MEK εμπλέκεται στον έλεγχο του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, των κυττάρων επιβίωση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων CRC [16].

KRAS

είναι μεταλλαγμένο στο 35% -40% CRC και μετάλλαξη του

KRAS

πρωτο-ογκογονίδιο είναι ένα πρώιμο γεγονός στην ανάπτυξη αυτών των καρκίνων, ασκώντας μια ισχυρή επιρροή στην ανάπτυξη των πολυπόδων του κόλου και στις αρχές του καρκίνους [17,18]. Στιβαρή στοιχεία δείχνουν την προγνωστική αξία του

KRAS

μετάλλαξη στο μεταστατικό CRC θεραπεία με αντι-EGFR στοχευμένη θεραπεία [19,20]. Ωστόσο, η κλινική σημασία του

KRAS

μετάλλαξη ως προγνωστικός δείκτης είναι αμφιλεγόμενη. Ορισμένες μελέτες ανέφεραν καμία συσχέτιση με την επιβίωση, ενώ άλλοι πρότειναν ότι οι ασθενείς με

KRAS

μεταλλαγμένα όγκοι έχουν χειρότερη έκβαση για κάθε υπότυπο μετάλλαξη [21,22,23,24].

Η ένωση του MMR κατάσταση,

KRAS

και

BRAF

μεταλλάξεις στην κλινική έκβαση συχνά τεκμηριωμένες. Ωστόσο, η ανάπτυξη μιας πιο ακριβή πρόβλεψη για την κλινική έκβαση με τη χρήση συνδυασμών βιοδεικτών παραμένει ένας άξιος χώρο της έρευνας. Επιπλέον, σε αντίθεση με dMMR CRC, τα δεδομένα σχετικά με την παρουσία του

KRAS

ογκογόνων μεταλλάξεων σε καλά MMR (pMMR) CRC και τη σχέση τους με την εξέλιξη του όγκου είναι λιγοστές. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν η αξιολόγηση της προγνωστικής ρόλο της κατάστασης MMR σε συνδυασμό με

KRAS

μεταλλάξεις σε 913 Κινέζους ασθενείς και χαρακτηρίζουν τις καθορισμένες υποτύπους σε σχέση με κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά.

Υλικά και Μέθοδοι

πληθυσμός Μελέτη

οι ασθενείς με εκτομή, ιστολογικά αποδεδειγμένη CRC ήταν επιλέξιμες. Οι κλινικοπαθολογοανατομικών αρχεία 913 ασθενών με αντίστοιχο παραφίνη-ενσωματωμένες υλικά που είναι διαθέσιμα για μοριακή ανάλυση έγιναν αναδρομικά συλλέγονται από το Τμήμα Παθολογίας, Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών, Πεκίνο, Κίνα από το 2011 έως το 2013. Μια κεντρική επανεξέταση παθολογία εκτελέστηκε. παράγοντες στρωματοποίησης περιλαμβάνονται: ο αριθμός των μεταστατικών περιφερειακών λεμφαδένων (N1: 1-3

vs

Ν2: ≥4), ιστολογική Βαθμός (G1-2: καλά /μετρίως διαφοροποιημένων

vs

G3: κακώς διαφοροποιημένα /μη διαφοροποιημένα), διάμετρος όγκου, pt ταξινόμηση, η ιστολογική υποτύπου, τη θέση του όγκου, το μέγεθος του όγκου, καθώς και το στάδιο pTNM. Χρησιμοποιήθηκε το σύστημα pTNM στάσης της 7η έκδοση σταδιοποίηση του καρκίνου AJCC. Αξιολόγηση του σταδίου Μ κυρίως σύμφωνα με επιβεβαιωθεί παθολογικά αποτελέσματα ή /και ακτινολογικά δεδομένα. Εγγύς περιοχή του όγκου περιλαμβάνονται τυφλό έντερο, φθίνουσα, ηπατική κάμψη και εγκάρσια παχέος εντέρου? απομακρυσμένη θέση που περιλαμβάνονται σπληνική καμπή, φθίνουσα και σιγμοειδές κόλον. Βλεννώδες διαφοροποίηση στον όγκο ορίστηκε από την παρουσία των δεξαμενών εξωκυτταρικού βλεννίνη που περιέχουν συστάδες των καρκινωματώδη κύτταρα. Όταν & gt? 50% του όγκου που αναλύθηκαν αποδειχθεί βλεννώδες διαφοροποίηση, ο όγκος είχε χαρακτηριστεί ως βλεννώδες καρκίνωμα. Η μελέτη εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Ινστιτούτο αναθεώρηση του Αντικαρκινικού Νοσοκομείου, Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών. Κάθε συμμετέχων υπέγραψε Διοικητικό κριτική Θεσμικών ενέκρινε ενημερωμένη συγκατάθεση σύμφωνα με τις ισχύουσες κατευθυντήριες γραμμές.

KRAS

και

BRAF

V600E

ανάλυση μετάλλαξης

η αξιολόγηση του

KRAS

και

BRAF

κατάσταση V600E μεταλλάξεων πραγματοποιήθηκε στη Μοριακής Παθολογίας Εργαστήριο του Τμήματος Παθολογίας, Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, ΚΑΜΕΡΕΣ, χρησιμοποιώντας διαδικασίες ελέγχου κατάλληλη ποιότητα. κατάσταση μετάλλαξης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας γονιδιωματικό ϋΝΑ που εξάγεται από macrodissected σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένο σε παραφίνη ιστό όγκου. Τόσο

KRAS

(κωδικόνια 12 και 13) και

BRAF

(p.V600E) δοκιμές μετάλλαξης διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας πολλαπλή αλληλόμορφο-ειδική δοκιμασία που βασίζεται στην PCR (ΣΕΤΚ, Πεκίνο, Κίνα), καθώς και με την Stratagene Mx3000P (Agilent Technologies Inc, Santa Clara, CA), το οποίο αξιολογεί επτά διαφορετικές πιθανές μεταλλάξεις στο

KRAS

κωδικόνια 12 και 13 (

Gly12Ala

,

Gly12Asp

,

Gly12Arg

,

Gly12Cys

,

Gly12Ser

,

Gly12Val

, και

Gly13Asp

). Ούτε

KRAS

ούτε

BRAF

V600E

μεταλλαγμένα όγκοι χαρακτηρίζονται ως άγριου τύπου

KRAS

υπότυπο.

DNA πρωτεΐνες έκφραση

MMR πρωτεΐνη (MLH1, PMS2, MSH2 και MSH6) έκφραση επισκευή ασυμφωνία διεξήχθη ως πρακτική ρουτίνας σε παθολογικό τμήμα μας. Όλα τα δείγματα κηλιδώθηκαν σε μια Autostainer (Autostainer Σύνδεσμος 48, Dako, Δανία). Τέσσερις μm τομές πάχους του ιστού αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο, επανυδατώθηκαν σε βαθμιαίες αλκοόλ και πλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό. Έτοιμα προς χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων πρωτογενούς ποντίκι περιλαμβάνονται αντίσωμα MLH1 (ES05, ​​Dako) και το αντίσωμα MSH2 (FE11, Dako). Έτοιμα προς χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων πρωτογενούς κουνελιού περιλαμβάνονται αντίσωμα MSH6 (EP49, Dako) και PMS2 αντίσωμα (EP51, Dako). απώλεια πρωτεΐνης MMR ορίστηκε ως απουσία πυρηνική χρώση σε κύτταρα όγκου αλλά θετική πυρηνική χρώση σε φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα του κόλου και λεμφοκύτταρα. Οι όγκοι που χαρακτηρίζονται ως κατάσταση dMMR εάν απώλεια τουλάχιστον μία πρωτεΐνη MMR ανιχνεύθηκε και pMMR αν όλες οι πρωτεΐνες ήταν άθικτα.

μεθυλίωση προαγωγού MLH1

ανάλυση

Όλα τα δείγματα DNA ήσαν υποβάλλεται σε τροποποίηση όξινου θειώδους χρησιμοποιώντας το EZ μεθυλίωσης του DNA Kit (Zymo Research, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ένα μg γονιδιωματικού DNA από κάθε δείγμα ήταν διθειώδες μετατροπή και εκλούστηκε σε 18 μΐ ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης. Μεθυλίωσης-ειδική PCR (MSP) διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25]. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση αυτή ήταν: 5′-ΑΑΤ ΤΑΑ TAG GAA GAG CGG ΑΤΑ GC-3 ‘και 5′-ΚΔ CCC ΤΑΑ AAC GAC TAC TAC CCG-3’ για μεθυλιωμένο

MLH1

υποκινητή και 5 ‘ -TGA ΑΤΤ ΑΑΤ ΑΓΓ ΑΑΟ AGT GGA TAG Τ-3 ‘και 5′-TCC CTC ΚΔ ΑΑΑ ACA ACT ACT ACC CA-3’ για μη μεθυλιωμένα

MLH1

υποκινητή. ειδικότητα εκκινητή MSP PCR επιβεβαιώθηκε καθώς δεν ενισχύουν μη-όξινο θειώδες επεξεργασμένο γενωμικού DNA εκμαγεία, και τα προϊόντα MSP αρκετών πρωτογενών όγκων επιβεβαιώθηκε με άμεση αλληλούχιση με BigDye v3.1 (Applied Biosystems), υποδεικνύοντας ότι το σύστημα MSP μας είναι συγκεκριμένες.

Η στατιστική ανάλυση

Ο πρωταρχικός στόχος αυτής της μελέτης ήταν να προσδιορίσει διακριτά κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά που συνδέονται με το καθεστώς MMR και

KRAS

μετάλλαξη. Μοντέλα λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση ενώσεων από αυτά τα χαρακτηριστικά με κάθε μία από τις

KRAS

μεταλλάξεων και της κατάστασης MMR. Kruskal-Wallis και χ

δοκιμές χρησιμοποιήθηκαν για να συγκρίνουν συνεχείς και κατηγορικές μεταβλητές, αντίστοιχα 2 (ακριβής Fisher ή). Μονομεταβλητών μοντέλα λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκαν για την περαιτέρω κατηγοριοποίηση και καθορίζουν τις τελικές covariables που χρησιμοποιούνται για την πολυμεταβλητή ανάλυση. Στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και

P

τιμές των 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές. Για πολλαπλές συγκρίσεις, Bonferroni προσαρμοσμένο

P τιμές

αναφέρθηκαν για τις διαφορές μεταξύ των

KRAS

μετάλλαξη και την κατάσταση MMR (α = 0,05 /6). Στατιστικά σημαντική χαρακτηριστικών βασίζεται σε μονοδιάστατες μοντέλα στη συνέχεια περιλαμβάνονται στα μοντέλα πολλαπλών μεταβλητών, χρησιμοποιώντας σταδιακή και προς τα πίσω διαδικασίες επιλογής μοντέλου. λόγοι πιθανοτήτων και τα διαστήματα τους εμπιστοσύνης 95% υπολογίστηκαν. Στατιστικά διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας λογισμικό SPSS (έκδοση 16.0 του SPSS, Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

Ένα σύνολο των 913 περιπτώσεων αξιολογήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (IHC) για την παρουσία ή απουσία MLH1, MSH2, MSH6 και η έκφραση πρωτεΐνης PMS2. Από τις 69 περιπτώσεις (69/913, 7,5%) με dMMR, 49 είχαν μια απουσία της έκφρασης πρωτεΐνης για MLH1 /PMS2, 9 για MSH2 /MSH6, 5 για MSH6 και 6 για μόνος PMS2. Για να διακρίνεται Lynch σύνδρομο που σχετίζονται με CRC από σποραδικούς καρκίνους MSI, πραγματοποιήσαμε το

MLH1

μελέτη της μεθυλίωσης του υποκινητή. Μεταξύ των 49 περιπτώσεων με την απουσία της έκφρασης πρωτεΐνης για MLH1 /PMS2, 32,6% (16/49) περιπτώσεις είχαν

MLH1

μεθυλίωση του υποκινητή. Από αυτούς,

KRAS

μεταλλάξεις στο

MLH1

μεθυλιωμένα σποραδικά καρκινώματα MSI ήταν 25% (4/16) και η συχνότητα μετάλλαξης ήταν πολύ χαμηλότερη από εκείνη των συνολικών μεταλλάξεων, 36,9% (337/913 ) (Εικόνα 1).

Η

ασθενών και του όγκου χαρακτηριστικά σε σχέση με την κατάσταση MMR φαίνονται στον πίνακα 1. Η μέση ηλικία κατά την παρουσίαση για όγκους dMMR ήταν 53,3 ± 12,7 έτη, πράγμα που ήταν νεότεροι από ότι όγκων pMMR (

P

= 0,003). Συνολικά, οι όγκοι με dMMR αναφέρθηκαν πιο συχνά βρίσκεται στην κοντινή πλευρά του κόλου (72,4%

vs

18,9%,

P

& lt? 0,0001) και ήταν πιο πιθανό να διαφοροποιείται ελάχιστα (34,8 %

vs

18,0%,

P

& lt? 0.001), σε σύγκριση με όγκους pMMR. Επιπλέον, οι όγκοι με dMMR ήταν επίσης σημαντικά που συνδέονται με βλεννώδες ιστολογική υποτύπου (63,8%

vs

32,7%,

P

& lt? 0.0001) και μειωμένη μετάσταση στους λεμφαδένες (39,1%

vs

54,6%,

P

= 0,01). Δεν υπήρχαν στατιστικά σημαντικές διαφορές ως προς το φύλο και το στάδιο, σημ.

Η

Οι μεταλλάξεις στο

KRAS

και

BRAF

V600E

ήταν αμοιβαία αποκλειστικός. Υπήρχαν 6 περιπτώσεις με όγκους dMMR που έτρεφε

BRAF

V600E

μεταλλάξεις και οι περιπτώσεις αυτές εξαιρέθηκαν από την ανάλυση.

KRAS

μεταλλάξεις στα κωδικόνια 12 και 13 παρατηρήθηκαν σε 36,9% (337/913) όλων των όγκων. Μια υψηλότερη συχνότητα

KRAS

μεταλλάξεις εντοπίστηκαν σε dMMR όγκους (27/69, 39,1%) σε σύγκριση με pMMR όγκους (310/844, 36,7%), αν και αυτή η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Των 27 dMMR και

KRAS

-mutated όγκων, 16 περιπτώσεις ορίστηκαν με την απώλεια του MLH1 /PMS2, 7 με MSH2 /MSH6 και 4 μόνο με PMS2.

Χαρακτηριστικά

ασθενών και των όγκων σε σχέση με τόσο για το MMR και

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης συνοψίζονται στον πίνακα 2. Από τις 913 περιπτώσεις στις οποίες τόσο η MMR και

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης ορίστηκαν, 27 (2,9%) περιπτώσεις με dMMR ήταν

KRAS

(+) και 42 (4,6%) ήταν

KRAS

(-), ενώ 310 (34,0%) περιπτώσεις με pMMR ήταν

KRAS

(+) και 534 (58,5%) ήταν

KRAS

(-). Μεταξύ αυτών των τεσσάρων ομάδων, παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές ως προς το φύλο {

KRAS

(+) /περιπτώσεις dMMR πιο πιθανό να είναι αρσενικό,

P

& lt? 0.0001}, {ηλικίας

KRAS

(+) /dMMR πιο πιθανό να έχουν μια νεώτερη ηλικία κατά τη διάγνωση της νόσου,

P

= 0.0001}, {βαθμό

KRAS

( -) /dMMR πιο πιθανό να έχουν χαμηλότερα νόσο βαθμό,

P

= 0.002}, θέση του όγκου {

KRAS

(+) και

KRAS

(-) /περιπτώσεις dMMR πιο πιθανό να βρίσκονται στην εγγύς παχέος εντέρου,

P

& lt? 0.0001} και μετάσταση στους λεμφαδένες {

KRAS

(+) /περιπτώσεις pMMR πιο πιθανό να έχουν ανώτερο στάδιο PN,

P

= 0.004}. Ωστόσο, δεν σημειώθηκαν διαφορές στο στάδιο pT μεταξύ αυτών των τεσσάρων ομάδων

Η

Σε σύγκριση με εκείνους με

KRAS

. (-) /PMMR όγκους, οι ασθενείς με

KRAS

(+) /pMMR όγκοι ήταν πιο πιθανό να είναι γυναίκες (49,0%

vs

36,0%? OR = 1,85? 95% CI = 1,39 – 2,46?

P

& lt? 0.0001) , να εγγύς βρίσκεται (45,5%

vs

29,3%? OR = 2,00? 95% CI = 01.30 – 03.08?

P

= 0,002), για να έχουν ένα βλεννώδες ιστολογία (38,4%

vs

29,4%? OR = 1,50? 95% CI = 01.11 – 02.01?

P

= 0,007), και να έχουν αυξηθεί λεμφαδένες μετάσταση στους λεμφαδένες (60,3%

vs

50,7 %? OR = 1,48? 95% CI = 1,11 – 1,96?

P

= 0,007) (Πίνακας 3). Για το αντίθετο, σε σύγκριση με εκείνους με

KRAS

(-) /όγκους dMMR, οι ασθενείς με

KRAS

(+) /dMMR όγκους δεν έδειξαν στατιστικά σημαντικές διαφορές ως προς το φύλο, τη θέση του όγκου, το βάθος pT της εισβολής, λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες, το στάδιο pTNM, και ιστολογική βαθμολογία. Ωστόσο, η μέση ηλικία κατά την παρουσίαση για το

KRAS

(+) /dMMR όγκους ήταν 51.051.051.0 παρουσίασης s, n, από εκείνο του

KRAS

(-) /dMMR όγκους (

P

= 0,001).

η

κατά την ανάλυση με τη χρήση πολλαπλών μεταβλητών μοντέλα λογιστικής παλινδρόμησης, εξετάσαμε κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά στον πίνακα 4. Όπως φαίνεται multivariably, όγκους με

KRAS

(+ ) /pMMR ήταν στατιστικά σχετίζονται με την κεντρική τοποθεσία, βλεννώδες ιστολογία και αυξημένη μετάσταση στους λεμφαδένες.

η

Συζήτηση

Καθορισμός των υποτύπων του όγκου του CRC με βάση την πορεία με γνώμονα μεταβολές έχει τη δυνατότητα να βελτιώσει πρόγνωση και τον οδηγό στοχευμένη θεραπεία. Διακριτά κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά του CRC με διαφορετικές MMR κατάσταση εδώ και πολύ καιρό έχουν εντοπιστεί [6,26,27,28]. Στην παρούσα μελέτη, αποδείξαμε μοριακή και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά pMMR και dMMR όγκων στρωματοποιημένη από

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης σε μια μεγάλη σειρά διαδοχικών κινεζικών ασθενείς CRC. Έμπειρος MMR όγκους που είχαν μη μεταλλαγμένη για

KRAS

και

BRAF

V600E

ήταν η πιο διαδεδομένη υποτύπου και αντιπροσώπευε το 58,5% (534/913) των ασθενών της μελέτης μας . Σε σύγκριση με αυτό τον υπότυπο, οι ασθενείς με

KRAS

(+) /pMMR όγκοι ήταν πιο συχνές στο εγγύς κόλον και να έχουν ένα βλεννώδες ιστολογία. Το πιο σημαντικό, οι ασθενείς με

KRAS

(+) /pMMR όγκων έδειξαν αυξημένη μετάσταση στους λεμφαδένες μεταξύ τεσσάρων υποτύπων και μπορεί να έχουν χειρότερα ποσοστά επιβίωσης.

Σύμφωνα με τα προηγούμενα ευρήματα, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι οι όγκοι με την κατάσταση dMMR συχνά παρουσιάζουν κακή διαφοροποίηση, βλεννώδες κυτταρικό τύπο, εγγύς θέση και μειωμένη μετάσταση λεμφαδένα. Εκτός από το ρόλο της στον εντοπισμό μοναδικά παθολογικά χαρακτηριστικά του CRC, το καθεστώς dMMR έχει επίσης χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός δείκτης και η καθοδήγηση για επικουρική χημειοθεραπεία φθοριοουρακίλη με βάση [8]. Πρόσφατα στοιχεία έδειξαν ότι CRC θα μπορούσαν να ταξινομηθούν περαιτέρω σε πέντε προκαθορισμένες υποτύπους χρησιμοποιώντας ένα συνδυασμό βιοδείκτη του

KRAS

και

BRAF

V600E

μεταλλάξεις, MMR κατάσταση και

MLH1

μεθυλίωση με στατιστικά σημαντικές διαφορές στην κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά και τα ποσοστά των ασθενών επιβίωσης [29]. Έτσι, ένας βιολογικός δείκτης που βασίζεται ταξινομητής παρέχει σημαντικές προγνωστικές πληροφορίες στη CRC με συνέπειες για τη διαχείριση των ασθενών. Τα στοιχεία από άλλες εκθέσεις υποστηρίζει την ιδέα ότι

KRAS

μετάλλαξη και την κατάσταση της MMR είναι γενετικοί δείκτες που προκύπτουν από νωρίς και παραμένουν βιολογικά σχετικές σε όλα τα στάδια της εξέλιξης του όγκου [30,31]. Επιπλέον,

KRAS

μεταλλάξεις βρέθηκαν σε πρωτογενείς όγκους σώζονται σε υποτροπές και μεταστάσεις. Κατά συνέπεια, αξιολογήσαμε τις προκαθορισμένες υποτύπων των όγκων σε σχέση με κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά σε συνδυασμούς βιοδείκτη του

KRAS

μεταλλάξεων και της κατάστασης MMR.

καρκίνους Ελλιπή MMR συνήθως προέρχονται από το εγγύς κόλον [15]. Όπως ήταν αναμενόμενο, η συντριπτική πλειονότητα των όγκων dMMR σε αυτή τη μελέτη (72,4%) ήταν από το εγγύς κόλον και αυτή η διανομή δεν επηρεάστηκε από

KRAS

μεταλλάξεις. Αν και οι περισσότεροι από τους όγκους pMMR δεν ήταν πιθανό να εγγύς βρίσκεται, είναι ενδιαφέρον ότι όταν pMMR όγκοι στρωματοποιημένη από

KRAS

μεταλλάξεις,

KRAS

όγκους μεταλλαγμένου (20,9% εγγύς) είχαν περισσότερες πιθανότητες να να εγγύς σύγκριση με το

KRAS

(-) /pMMR όγκους (14,7% εγγύς). Παραδοσιακά, καρκίνων του παχέος εντέρου που αναπτύχθηκε στο εγγύς έντερο δημιούργησε συχνά ένα περιβάλλον στο οποίο CIMP (CpG νησί Methylator φαινότυπος) είναι πιο πιθανό να προκύψουν, και αυτό συνεργεί με

BRAF

μετάλλαξη για να επιτρέψει την πρόοδο της οδοντωτή πολυπόδων [32]. Ωστόσο, τα τελευταία στοιχεία έδειχναν ότι

KRAS

μεταλλάξεις θα μπορούσαν επίσης να βρεθεί σε CIMP υψηλή και χαμηλή CIMP όγκους που συχνά βρίσκονται στο εγγύς παχέος εντέρου [33]. Αυτό έδειξε ότι υπήρχαν πιο ολοκληρωμένη μηχανισμοί που διέπουν τη θέση του καρκίνου του παχέος εντέρου και των προφίλ μεταλλάξεων. Βλεννώδες καρκίνωμα διαγιγνώσκεται όταν τουλάχιστον το 50% του όγκου περιλαμβάνει εκκριτικό βλεννίνη και συνδέεται συχνά με την κατάσταση dMMR και οδοντωτά αδενοκαρκίνωμα [34]. Αυτό είναι σύμφωνο με το εύρημα μας ότι dMMR όγκοι αποδειχθεί πιο βλεννώδεις διαφοροποίηση από τους όγκους pMMR (63,8%

vs

32,7%). Ωστόσο, όταν στρωματοποιημένη από

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης, παρατηρήσαμε ότι pMMR όγκους με μεταλλαγμένο

KRAS

φαινότυπο παρουσίασαν περισσότερα βλεννώδες διαφοροποίηση από τον άγριο τύπου

KRAS

υποτύπου (38,4%

vs

29,4%). Αυτό είναι σε μεγάλο βαθμό γιατί

KRAS

μετάλλαξη δεν είναι μόνο συνδέεται με τα συμβατικά αδενώματα, αλλά επίσης συνδέεται με οδοντωτή αδενώματα στην ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου [35].

Μια σημαντική συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ της παρουσίας της λεμφαδενικές μεταστάσεις και οι όγκοι pMMR στρωματοποιημένη από

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης. Τα ευρήματά μας αποκάλυψε ότι pMMR όγκους με

KRAS

μετάλλαξη αποδειχθεί πιο θετικούς λεμφαδένες και pTNM ΙΙΙ-IV στάδιο της ασθένειας από τους όγκους με

KRAS

(-) /καθεστώς pMMR. Αυτό είναι σύμφωνο με τα ευρήματα από μια μικρότερη έκθεση, η οποία κατέδειξε ότι η συχνότητα των

KRAS

μεταλλάξεις ήταν υψηλότερη σε pMMR λεμφαδένες θετικούς όγκους σε σύγκριση με pMMR λεμφαδένα αρνητικούς όγκους [36,37]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η πλειοψηφία των pMMR όγκων που απαιτούνται

KRAS

μετάλλαξη να είναι σε θέση να κάνουν μετάσταση και αυτή η ενεργοποίηση ήταν ζωτικής σημασίας για τα νεοπλασματικά κύτταρα να αποκτήσουν επεμβατική δυναμικό. Μεταλλάξεις σε

KRAS

ογκογονίδιο οδηγούν σε μεταβολές στην κωδικοποιημένα αμινοξέα πλησίον του θύλακα σύνδεσης GTP και μειωμένη δραστικότητα ΟΤΡάσης της του

KRAS

πρωτεΐνη μετά το νουκλεοτίδιο γουανίνης πρωτεΐνη ενεργοποίησης (GAP) σύνδεση [38]. Τόσο

in vitro

και

in vivo

πειραματικά μοντέλα, επιμόλυνση του μεταλλαγμένου, συστατικώς δραστικές μορφές του

KRAS

ογκογονιδίου σε προηγουμένως μη καρκινικό κύτταρα μπορεί να οδηγήσει σε επεμβατικές και μεταστατικό φαινοτύπους. Η έκτοπη έκφραση του δραστικού

KRAS

στο ποντικού κυτταρική σειρά ινοβλαστών ΝΙΗ 3Τ3 οδήγησε σε αυξημένη εισβολή και την απόκτηση του μεταστατικές ιδιότητες [39]. Χρησιμοποιώντας ένεση στην ουραία φλέβα των μετασχηματισμένων κυττάρων,

in vivo μοντέλα

παρατηρήθηκαν από το ήπαρ και ο πνεύμονας μετάσταση [40]. Εκτός από τα στοιχεία που λαμβάνονται από τα πειράματα των κυττάρων και των ζώων, κλινικές μελέτες έχουν επίσης εμφανιστεί σημαντική μετάσταση στους λεμφαδένες στο

KRAS

(+) /pMMR όγκους [36,41]. προφίλ γονιδιακής έκφρασης αποκαλύπτει ότι τα γονίδια involoving επιθηλιακά μεσεγχυματικά μετάβαση και αναδιαμόρφωση της μήτρας που μπορούν να διευκολύνουν την εισβολή και μετάσταση όγκου είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω στην μετάλλαξη

KRAS

-pMMR όγκους [42]. Κατά συνέπεια,

KRAS

ογκογόνο ενεργοποίηση φάνηκε να είναι ένας σημαντικός μεσολαβητής των καρκινικών κυττάρων εισβολής και της μετάστασης σε όγκους pMMR.

Η συχνότητα του

KRAS

μεταλλάξεις στην Lynch σύνδρομο που σχετίζεται CRC και σποραδικές CRC είναι σχεδόν η ίδια. Ωστόσο,

KRAS

μεταλλάξεις είναι πολύ πιο συχνή σε Lynch σύνδρομο που σχετίζονται με CRC από εκείνο στο σποραδικές MSI-H CRCs [37,43]. Lynch σύνδρομο που σχετίζονται με CRC τείνουν να είναι πρώιμη έναρξη και εγγύς θέση. Έτσι, αυτό μπορεί να εξηγήσει την νεαρότερη ηλικία και εγγύς θέση που παρατηρήθηκαν σε

KRAS

+ /MSI όγκους. Παρά τα θετικά αυτά τα ευρήματα, η μελέτη μας έχει ορισμένους περιορισμούς. Πρώτον, επειδή πρόκειται για μια εκ των υστέρων μελέτη, είναι δύσκολο να συλλέξει το δείγμα αίματος ή σάλιου από τους ασθενείς για την ανίχνευση μεταλλάξεων βλαστικής σειράς για την περαιτέρω διάκριση του Lynch σύνδρομο σχετίζεται CRC από καρκίνο σποραδικές. Γι ‘αυτό και δεν θα μπορούσε να υπολογίσει την ακριβή συχνότητα

KRAS

μεταλλάξεις στην κληρονομική CRCs, ωστόσο, είναι βέβαιο ότι το σύνδρομο σχετίζεται CRC στη μελέτη μας Lynch έδειξε προτίμηση

KRAS

μεταλλάξεις. Δεύτερον, δεν είχαμε εξετάσει άλλες λιγότερο συχνές μεταλλάξεις στο

KRAS

κωδικόνια 61, 117 και 146, οι οποίες συνέβαλαν επίσης στην ογκογόνο μετασχηματισμό των κυττάρων του όγκου.

Αυτή η μελέτη δείχνει ότι οι συγκεκριμένες επιδημιολογικές και κλινικοπαθολογική τα χαρακτηριστικά που συνδέονται με το MMR κατάσταση στρωματοποιημένη από

KRAS

μετάλλαξη στο CRC. Η γνώση της MMR και

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης μπορεί να ενισχύσει την μοριακή παθολογική σταδιοποίηση των ασθενών CRC και τη μεταστατική εξέλιξη μπορεί επίσης να εκτιμηθεί με βάση το συνδυασμό αυτών των βιοδεικτών. Επικύρωση των πρόσθετων γενετικών βιοδεικτών θα σας βοηθήσουν να βελτιώσετε τις αποφάσεις διαχείρισης για τον κάθε ασθενή με βάση τη βιολογία του όγκου. Είναι σημαντικό, αυτό μπορεί επίσης να βοηθήσει στην ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στόχων για να βοηθήσει τη θεραπεία αυτών των επιθετικών καρκίνων.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε όλους τους συμμετέχοντες στη μελέτη του Τμήματος Παθολογίας για τη συμβολή τους σε αυτό το έργο. Η εργασία αυτή υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση από το Πρόγραμμα Backbone Νεολαίας (να Jianming Ying) του Αντικαρκινικού Νοσοκομείου, ΚΑΜΕΡΕΣ, το Πεκίνο, η Κίνα, το Φυσικό πρόγραμμα βασικής έρευνας της Κίνας (973 πρόγραμμα 2014CB542002) και το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81401984).