Αφηρημένο

Ιστορικό

οισοφάγου ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (ESCC) έχουν κακή πρόγνωση. Ενώ συνδυασμένη τροπικότητα της χημειοθεραπείας και ακτινοθεραπείας αυξάνει την επιβίωση, οι περισσότεροι ασθενείς πεθαίνουν μέσα σε πέντε χρόνια. Ανάπτυξη παραγόντων που προσδίδουν καρκινικό κύτταρο-ειδικό χημείο- και ραδιοευαισθησία μπορεί να βελτιώσει την θεραπεία του ESCC. Εμείς εδώ ανέφεραν την ανακάλυψη της berberine ως ισχυρός παράγοντας ραδιοευαισθητοποίησης στα κύτταρα ESCC

Κύρια Ευρήματα

Βερβερίνη σε χαμηλές συγκεντρώσεις. (& Lt? 15 μΜ) ουσιαστικά radiosensitized κύτταρα ESCC. που προκαλείται DNA διπλό σκέλος διαλείμματα ακτίνων Χ (DSBs) επιμένουν περισσότερο στα κύτταρα ESCC προεπεξεργασία με berberine. Βερβερίνη προεπεξεργασία οδήγησε σε σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51, ένας βασικός παράγοντας σε ομόλογο ανασυνδυασμό επισκευή, σε κύτταρα ESCC, αλλά όχι σε μη κακοήθη ανθρώπινα κύτταρα. Προς τα κάτω ρύθμιση

RAD51

από την RNA παρεμβολής παρόμοια radiosensitized τα καρκινικά κύτταρα, και, αντιστρόφως, η εισαγωγή εξωγενών RAD51 ήταν σε θέση να αντισταθμίσει σημαντικά την ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση της berberine, δημιουργώντας έτσι RAD51 ως καθοριστικό παράγοντα στην ευαισθησία ακτινοβολίας. Παρατηρήσαμε επίσης ότι η RAD51 ήταν κοινώς υπερεκφράζεται σε ανθρώπινους ιστούς ESCC, γεγονός που υποδηλώνει ότι είναι απαραίτητο να ρυθμίζουν προς τα κάτω RAD51 για την επίτευξη υψηλών ράδιο- ή χημειοθεραπευτικό αποτελεσματικότητα του ESCC στην κλινική, επειδή η υπερέκφραση του RAD51 είναι γνωστό ότι προσδίδουν ράδιο- και χημειοαντίσταση.

Συμπεράσματα /Σημασία

Βερβερίνη μπορούν να ρυθμίζουν προς τα κάτω αποτελεσματικά RAD51 στην ανάθεση ακτινοευαισθησία για καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα. κλινική εφαρμογή της ως πρόσθετο σε χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία του οισοφάγου καρκίνων θα πρέπει να διερευνηθούν

Παράθεση:. Liu Q, Jiang Η, Liu Ζ, Wang Υ, Zhao Μ, Hao C, et al. (2011) Βερβερίνη Radiosensitizes Ανθρωπίνων καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα από ρύθμιση προς τα κάτω ομόλογος ανασυνδυασμός Επισκευή Πρωτεΐνη RAD51. PLoS ONE 6 (8): e23427. doi: 10.1371 /journal.pone.0023427

Επιμέλεια: Qian Τάο, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 21 Δεκεμβρίου 2010? Αποδεκτές: 17 Ιούλη, 2011? Δημοσιεύθηκε: 8 Αυγ 2011

Copyright: © 2011 Liu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας? Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας της Κίνας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

οισοφάγου καρκινώματα πλακωδών κυττάρων (ESCC), τα οποία έχουν ιδιαίτερα υψηλή συχνότητα σε χώρες της Ανατολικής Ασίας, έχουν συνήθως κακή πρόγνωση. Μόνο ένα ποσοστό επιβίωσης 5 ετών 4% καταγράφηκε με χειρουργική φροντίδα [1]. Ακτινοθεραπεία είχε μια παρόμοια έκβαση [2]. Το ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με ESCC μπορεί να βελτιωθεί σημαντικά με συνδυασμένη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία [3], [4]. Ωστόσο, η αύξηση της δόσης ακτινοβολίας δεν αποφέρει πιο ικανοποιητικά αποτελέσματα [5]. Εξακολουθεί να υπάρχει η ανάγκη για την ανάπτυξη παραγόντων που παρέχουν χημειοθεραπεία και ακτινοευαισθησία επιλεκτικά σε καρκινικά κύτταρα, ενώ έχουν ελάχιστη τοξικότητα ακτινοβολίας σε φυσιολογικά κύτταρα. Αν και διάφορες ευαισθητοποιητές ακτινοβολίας έχουν δοκιμαστεί, συμπεριλαμβανομένων των παραγόντων που στοχεύουν τους στόχους DNA ή μη DNA, η ιδανική ευαισθητοποιητή ακτινοβολίας μένει να ανακαλυφθεί [6].

Βερβερίνη, το κύριο αλκαλοειδές συστατικό σε Huang Lian και άλλα φαρμακευτικά βότανα , είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη φάρμακο για γαστρεντερική δυσφορία στην Κίνα. Εκτός από την κοινή χρήση της ως καθημερινή ιατρική, ένας αριθμός εργαστηριακές μελέτες έχουν δείξει ότι η berberine έχει αντικαρκινική δράση για μια ευρεία ποικιλία καρκινικών κυττάρων, που περιλαμβάνει το γλοιοβλάστωμα [7], τον καρκίνο του στόματος [8], ηπάτωμα [9], γαστρικό καρκίνο [10 ], ο καρκίνος του προστάτη [11], λευχαιμία [12] και οστεοσαρκώματος [13]. Στις περισσότερες περιπτώσεις, berberine βρέθηκε να αναστέλλει την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου και να επάγει απόπτωση. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι berberine ήταν σε θέση να καταστείλει την συστατική ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ σε μερικά καρκινικά κύτταρα [14], όπου διαπιστώθηκε ότι αναστέλλει άμεσα (ΙΚΚ) ενεργοποίηση ΙκΒ κινάσης, οδηγεί στην καταστολή της φωσφορυλίωσης και πυρηνική μετατόπιση του p65 . Βερβερίνη αναφέρθηκε επίσης να έχουν μια ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση στον καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα με διέγερση autophagy [15]. Επιπλέον, μπορεί να εξασθενίσει berberine ανάπτυξης όγκου μέσω αναστολής της αγγειογένεσης [16].

προηγουμένως έδειξαν ότι berberine μπορεί να αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων μέσω επαγωγής ΟΝΑ δίκλωνα σπασίματα (DSBs). Βερβερίνη, το οποίο εκπέμπει ένα κιτρινωπό φθορισμό, βρέθηκε να συσσωρευτεί πιο εντατικά στους πυρήνες των κυττάρων οστεοσαρκώματος σε σχέση με εκείνους των φυσιολογικών οστεοβλαστών, και αυτή η διαφορά συσσώρευση berberine συσχετίζεται με αύξηση ανασταλτική δράση της, με την επαγωγή της βλάβης του DNA, και στη συνέχεια με την ενεργοποίηση της ρ53 και διακοπή του κυτταρικού κύκλου [13]. Ως εκ τούτου, η οδός μεταγωγής σήματος στηρίζεται η αντικαρκινική δράση του berberine είναι πιθανώς παρόμοιες με εκείνες που ξεκίνησε από άλλους παράγοντες που βλάπτουν το DNA όπως η σισπλατίνη. Μια πρόσφατη έκθεση έδειξε ότι berberine μπορούν να ρυθμίζουν ρ53 διακόπτοντας τις αλληλεπιδράσεις MDM2-Daxx-HAUSP και την προώθηση της MDM2 αυτο-ουμπικουιτίνωση και την υποβάθμιση [17].

Εμείς εδώ αναφέρουμε ότι berberine σε χαμηλές συγκεντρώσεις μπορεί να ραδιοευαισθητοποιεί σημαντικά ESCC κύτταρα. Δείξαμε ότι ο ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση του berberine διαμεσολαβείται από την ρύθμιση προς τα κάτω του

RAD51

, το οποίο κωδικοποιεί μία κρίσιμη πρωτεΐνη σε ομόλογο ανασυνδυασμό επισκευή. Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι

RAD51

ήταν κοινώς υπερεκφράζεται σε ανθρώπινους ιστούς ESCC, υποδεικνύοντας ότι είναι αναγκαίο να ρυθμίζουν προς τα κάτω RAD51 για την επίτευξη υψηλών ράδιο- ή χημειοθεραπευτικό αποτελεσματικότητα του ESCC στην κλινική, επειδή η υπερέκφραση του

RAD51

είναι γνωστό ότι παρέχουν ράδιο- και χημειοαντίσταση.

Αποτελέσματα

Βερβερίνη ευαισθητοποιεί καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα σε ιοντίζουσα ακτινοβολία

Όπως έχει ήδη αναφερθεί για άλλους τύπους των καρκινικών κυττάρων, θεραπεία berberine μόνο είχε μια αύξηση-ανασταλτική επίδραση επί του οισοφάγου καρκινικών κυττάρων σε δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 1Α). Σε σύγκριση με την ανθρώπινη φυσιολογικούς ινοβλάστες (HNF), κύτταρα ESCC είναι πιο ευαίσθητα σε berberine. Σε 72 ώρες, η IC50 για τα κύτταρα ESCC KYSE450 (12,58 μΜ), ήταν περίπου το ένα τέταρτο του ότι για HNF (51.28 μΜ) (Εικ. 1Β). Σε χαμηλές συγκεντρώσεις (& lt? 15 μΜ), berberine είχε μια σχετικά χαμηλή τοξικότητα σε κύτταρα ESCC και επάγεται καμία ανιχνεύσιμη απόπτωση (Σχήμα 1C).. Ωστόσο, τα κύτταρα που ESCC προκατεργάστηκαν με χαμηλές συγκεντρώσεις berberine παρουσίασαν σημαντικά αυξημένη ευαισθησία στην ιονίζουσα ακτινοβολία, όπως αντανακλάται από την αξιοσημείωτη μείωση στην ικανότητά τους να σχηματίζουν αποικίες (Εικ. 2). Βερβερίνη προεπεξεργασίας (15 μΜ, 24 ώρες) μείωσε το SF2 (κλάσμα επιβίωσης στα 2 Gy) του KYSE30 κυττάρων σε 48,1 ± 0,6%, από 77,2 ± 1,2% σε κύτταρα που δεν υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με berberine. Μια δεύτερη γραμμή ESCC KYSE450 έδειξε παρόμοια απόκριση, με το SF2 μειώνεται σε 50,2 ± 2,1% όταν τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με berberine στους 15 μΜ για 48 ώρες, σε σύγκριση με 81,2 ± 2,6% για τα κύτταρα που δεν προεπεξεργασία με berberine. Σε αντίθεση, berberine δεν είχε καμία ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση στην ανθρώπινη φυσιολογική ινοβλαστών (Εικ. 2)

.

(Α), Επίδραση της berberine στην βιωσιμότητα των κυττάρων KYSE30, KYSE450 και HNF. Η βιωσιμότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε με ανάλυση ΜΤΤ. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DMSO ή τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις berberine για 24 ώρες, 48 ώρες και 72 ώρες. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD από τρία ανεξάρτητα πειράματα. (Β), η κυτταροτοξικότητα της berberine κατά KYSE30, KYSE450 και HNF κύτταρα αντιπροσωπεύεται από ανασταλτικές συγκεντρώσεις IC50. (C), Μέτρηση της απόπτωσης με ανάλυση στυπώματος Western της κασπάσης-3. KYSE30 και KYSE450 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με berberine για 24 ώρες και 48 ώρες, αντίστοιχα. Η πακλιταξέλη κατεργασμένα HL-60 και HeLa κύτταρα ως θετικός έλεγχος.

Η

(Α), Radiosensitization με berberine με δοκιμασία κλωνογονικού κυτταρικής επιβίωσης. KYSE30 και KYSE450 κύτταρα εκτέθηκαν σε berberine (15 μΜ) ή ο έλεγχος του οχήματος (DMSO) για 24 και 48 ώρες, αντίστοιχα, πριν ακτινοβολήθηκαν και επιστρώθηκαν. Ανθρώπινα κανονικά κύτταρα ινοβλαστών υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με berberine για 24 ώρες και 48 ώρες πριν εκτέθηκαν σε ακτίνες Χ. Τα σημεία δεδομένων είναι οι μέσοι όροι δύο ανεξάρτητων πειραμάτων κάθε επιστρώθηκαν εις τριπλούν? μπαρ, SE. (Β), οι τιμές SF2 μετά από θεραπεία με berberine. Μείωση στις τιμές SF2 δείχνει τις ραδιοευαισθητοποίησης επιπτώσεις της berberine.

Η

Βερβερίνη προεπεξεργασίας παρατείνει την εμμονή της ακτινοβολίας που προκαλείται από ϋδΒδ

Η ιονίζουσα ακτινοβολία σκοτώνει τα κύτταρα με την επιβολή διαφόρων τύπων βλάβης στο γονιδίωμα . Έχουμε σκεφτεί ότι η ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση της berberine σε καρκινικά κύτταρα μπορεί να προκαλείται από δυσλειτουργία στην επιδιόρθωση του DNA διπλό σκέλος διαλείμματα (DSBs). Ως εκ τούτου, ο προσδιορισμός των επιπέδων των DSBs με χρώση ανοσοφθορισμού της γ-H2AX εστίες σε ESCCs σε διαφορετικά χρονικά σημεία μετά την έκθεση σε ακτίνες Χ. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3Α, σε KYSE30 κύτταρα δεν προκατεργάστηκε με berberine, η πλειοψηφία των γ-H2AX εστίες καθαρίστηκαν σε 12 ώρες μετά την έκθεση σε 0,5 Gy ακτινών Χ, και ο μέσος αριθμός των γ-H2AX εστίες υποχωρήσει κοντά βασικό επίπεδο σε 24 ώρες. Αντίθετα, περισσότερο γ-H2AX εστίες επέμενε σε αυτά τα δύο χρονικά σημεία KYSE30 κύτταρα που προκατεργάστηκαν με berberine (15 μΜ). Ο μέσος αριθμός των γ-H2AX εστίες ανά κύτταρο σε κύτταρα που λαμβάνουν τη συνδυασμένη θεραπεία berberine /ακτινοβολίας ήταν σημαντικά μεγαλύτερη σε σύγκριση με την ακτινοβολία μόνο ομάδα στις 12 και 24 ώρα h σημεία (Εικ. 3Β) (

P

= 0.002 και

P

& lt? 0.001, αντίστοιχα). θεραπεία Βερβερίνη μόνη της δεν παρατηρήθηκε να επάγει εμφανείς βλάβες του DNA από την άποψη της επαγωγής γ-H2AX εστίες πάνω χωρίς θεραπεία ελέγχους (

P

= 0,081).

(Α), χρώση ανοσοφθορισμού των γ-Η2ΑΧ σε KYSE30 κύτταρα. (Β), Περίληψη της γ-H2AX εστίες σε KYSE30 κύτταρα σε διαφορετικά χρονικά σημεία μετά από διάφορες θεραπείες. (C), Περίληψη της γ-H2AX εστίες σε KYSE450 κύτταρα σε διαφορετικά χρονικά σημεία μετά από διάφορες θεραπείες. Στήλες, μέσα από τρία ανεξάρτητα πειράματα. Τα κύτταρα που αναπτύσσονται σε καλυπτρίδες σε πλάκες 6 φρεατίων εκτέθηκαν σε berberine (15 μΜ) για 24, ακτινοβολημένα (0.5 Gy), και καθορίζεται σε καθορισμένες χρονικά σημεία για ανάλυση ανοσοφθορισμού.

Η

KYSE450 κύτταρα έδειξαν επίσης μια καθυστερημένη κάθαρση του εστιών γ-Η2ΑΧ ακτίνων Χ που προκαλείται όταν υποβλήθηκαν σε προθεραπεία με berberine. Ενώ η πλειοψηφία των εστιών γ-Η2ΑΧ εκκαθαρίστηκαν σε κύτταρα ελέγχου σε 24 ώρες μετά από έκθεση σε ακτίνες Χ, περισσότερο από το ήμισυ του γ-H2AX εστίες επέμενε σε κύτταρα που προκατεργάστηκαν με berberine (Σχ. 3C). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι berberine προεπεξεργασία έβλαψε την επισκευή των DSBs ακτίνες Χ που προκαλείται.

Βερβερίνη ρυθμίζει προς τα κάτω RAD51 σε καρκινικά κύτταρα αλλά όχι σε μη κακοήθεις κύτταρα

Οι DSBs επισκευαστεί κυρίως από δύο οδούς, δηλαδή, μη-ομόλογο τέλος ενώνει και ομόλογο ανασυνδυασμό [18], [19], [20]. Κιι70 και Ku86 είναι απαραίτητα για την πρώτη, όπου ως RAD51 είναι ένας κεντρικός παίκτης στην τελευταία. Στην συνέχεια προσδιορίσαμε εάν τα επίπεδα αυτών των τριών πρωτεϊνών άλλαξαν σε καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα προκατεργάστηκαν με berberine. Παρατηρήσαμε ότι ενώ δεν υπήρχαν προφανείς αλλαγές στα επίπεδα των Κιι70 και Ku86, το επίπεδο της RAD51 πρωτεϊνών ήταν αξιόλογα μειωμένη σε ESCCs που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με berberine για 24 ώρες ή 48 ώρες σε 7,5 μΜ ή 15 μΜ (Σχ. 4Α). Το επίπεδο του

RAD51

mRNA έδειξαν σημαντική μείωση σε αμφότερες τις κυτταρικές γραμμές καρκίνου μετά από θεραπεία με berberine (Εικ. 4Β), γεγονός που υποδηλώνει ότι η προς τα κάτω ρύθμιση του RAD51 ήταν πιθανότατα λόγω της μειωμένης μεταγραφής του

RAD51

mRNA.

(Α), τα επίπεδα των πρωτεϊνών επιδιόρθωσης του DNA σε καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα κατεργασμένα με berberine. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με berberine στις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις και για την ενδεικνυόμενη διάρκεια πριν από κύτταρα παρασκευάστηκαν για κυτταρικά εκχυλίσματα. (Β), Μείωση

RAD51

επίπεδα mRNA μετά την έκθεση berberine. Τα κύτταρα εκτέθηκαν σε berberine (15 μΜ) για 24 ώρες για KYSE30 κύτταρα (48 ώρες για KYSE450 κύτταρα), και συλλέγονται για ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR ανάλυση του RAD51 /αναλογίες GAPDH mRNA. (C),

RAD51

δραστικότητα προαγωγού καταστάλθηκε από βερβερίνης σε KYSE30 και KYSE450 κύτταρα. Τα πλασμίδια ανταποκριτές pGL3-RAD51p λουσιφεράσης (πυγολαμπίδα) επιμολύνθηκαν παροδικά σε ανθρώπινα οισοφάγου καρκινικά κύτταρα. Τέσσερις ώρες αργότερα, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με berberine για 24 ώρες, και στη συνέχεια προσδιορίστηκαν για δραστικότητα λουσιφεράσης. Firefly λουσιφεράση τιμές κανονικοποιήθηκαν προς δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla από ένα συν-επιμολυσμένα φορέα αναφοράς pRL-SV40. Κάθε τιμή αντιπροσωπεύει τη μέση SE για τρία ανεξάρτητα πειράματα. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση

t test unpaired Student. *

, P & lt? 0,05 σε σύγκριση με τις τιμές ελέγχου. (D), η έλλειψη RAD51 αρνητική ρύθμιση σε μη κακοήθεις κύτταρα. Τα κύτταρα εκτέθηκαν σε berberine (15 μΜ) για την καθορισμένη χρονική περίοδο και συλλέγονται για ανάλυση ανοσοστυπώματος. (Ε), ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 σε άλλους τύπους των καρκινικών κυττάρων. Τα κύτταρα εκτέθηκαν στην καθορισμένη συγκέντρωση berberine για 48 ώρες και συλλέχθηκαν για ανάλυση ανοσοστυπώματος. Τα ανοσοαποτυπώματα παρουσιάζεται στο Α, D, και Ε είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον δύο ανεξάρτητα πειράματα με GAPDH χρησιμεύει σαν έλεγχος φόρτωσης πρωτεΐνης. C υποδεικνύει καλλιέργειες εκτίθενται στον DMSO έλεγχο οχήματος.

Η

Η έκφραση του RAD51 είναι γνωστό ότι είναι κυτταρικό κύκλο-εξαρτώμενη και είναι υψηλότερη κατά S και G2 /M φάσεις ό, τι σε G0 /G1 φάση [21] , [22]. Για να καθοριστεί αν η μειωμένη έκφραση της RAD51 οφειλόταν σε αλλαγή στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα berberine-θεραπεία, θα υποβληθεί κύτταρα berberine-αντιμετωπίζονται με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Ενώ berberine θεραπεία (15 μΜ για 24 ώρες) μείωσε το ποσοστό των KYSE30 κυττάρων σε S και G2 /M σε 49% από 60% στον έλεγχο (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), μια τέτοια αλλαγή δεν ήταν αρκετό για να εξηγήσει την πολλούς μείωση φορές σε το επίπεδο έκφρασης RAD51. Το πιο σημαντικό, θεραπεία berberine (15 μΜ για 24 ώρες) δεν μετέβαλε σημαντικά την κατανομή της κατανομής του κυτταρικού κύκλου των KYSE450 κυττάρων (44% και 45% για το ποσοστό των κυττάρων σε S-G2 /M φάσεις ελέγχου και ομάδα που υπέστη θεραπεία, αντίστοιχα ), υποδεικνύοντας ότι η μείωση της έκφρασης RAD51 σε απόκριση berberine δεν οφείλεται σε μειωμένο μέγεθος πληθυσμό κυττάρων σε S και G2 /M φάσεις. Έτσι, η ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 σε απόκριση berberine είναι πιθανώς ανεξάρτητη από τις μεταβολές έκφρασης που συνδέονται με την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου.

Η υπερέκφραση του

RAD51

συχνά συνδέεται με μια αύξηση στην δραστηριότητα προαγωγέα του [23]. Εμείς επόμενη κλωνοποιημένα τον προαγωγό και την περιοχή 5 ‘άκρο του

RAD51

(από -1693 να +487 bp) σε ένα πλασμίδιο ανταποκριτή λουσιφεράσης, pGL3-βασικό φορέα, επιμολύνονται τους σε καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα, και δοκιμάστηκαν ο

RAD51

δραστηριότητα υποκινητή σε απόκριση σε θεραπεία berberine. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4C, η δραστικότητα προαγωγέα του

RAD51

μειώθηκε σημαντικά σε κύτταρα τα οποία υποβλήθηκαν σε αγωγή με berberine σε σύγκριση με τον έλεγχο. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι berberine ήταν σε θέση να ρυθμίζουν προς τα κάτω την έκφραση του

RAD5

1 σε καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα στο επίπεδο της μεταγραφής.

Επειδή RAD51 είναι ένας βασικός παράγοντας στην ομόλογο ανασυνδυασμό επισκευή, ρύθμιση προς τα κάτω της θα μπορούσε να συμβάλλουν στην ραδιοευαισθησία των κυττάρων ESCC προεπεξεργασία με berberine. Από berberine δεν είχε καμία επίδραση στην ραδιοευαισθητοποίησης HNF, εμείς εικάζουν ότι το επίπεδο RAD51 δεν θα μπορούσε να επηρεαστεί από berberine θεραπεία σε HNF. Εμείς που ρωτήθηκαν πρώτα τα βασικά επίπεδα της RAD51 σε αρκετές μη κακοήθεις κυτταρικές σειρές που περιλαμβάνουν HNF. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4D, τα επίπεδα του RAD51 ήταν πολύ χαμηλότερα σε HNF, hMSC (ανθρώπινα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα που προέρχονται από ομφάλιο λώρο) και XWXL (ινοβλάστες που προέρχονται από καλοήθη ιναδένωμα) από εκείνα σε κύτταρα ESCC. Είναι ενδιαφέρον ότι, η ανθρώπινη ομφάλιο αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVECs) και τα κύτταρα ΗΕΚ-293 που εκφράζεται επίσης υψηλά επίπεδα RAD51. Ωστόσο, σε αντίθεση με τα κύτταρα ESCC, κανένας από τους τέσσερις τύπους μη-κακοήθη κύτταρα έδειξε μια μειορρύθμιση της έκφρασης RAD51 κατά την κατεργασία berberine (Εικ. 4D).

Για να προσδιοριστεί αν η ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 με berberine ισχύει και για άλλους τύπους των καρκινικών κυττάρων, εκθέσαμε επίσης ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του μαστού MCF7, κύτταρα ανθρώπινου οστεοσαρκώματος U2OS, προστάτη ποντικού κύτταρα καρκίνου RM-1 και τον καρκίνο του πνεύμονα ποντικού κύτταρα LLC σε χαμηλές συγκεντρώσεις berberine για 48 ώρες και μετρήθηκε το επίπεδο της πρωτεΐνης του RAD51. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Ε, RAD51 ήταν μειωτικά σε όλες αυτές τις τέσσερις καρκινικές κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν, υποδηλώνοντας ότι η ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 με berberine δεν είναι μοναδική σε κύτταρα ESCC. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι διαφορετικοί τύποι κυττάρων μπορεί να αντιδρούν διαφορετικά στη θεραπεία berberine από την άποψη της ρύθμισης της έκφρασης RAD51.

Η αναβάθμιση του RAD51 με IR μπορεί να ελαττωθεί με berberine

Παρατηρήσαμε ότι η ιονίζουσα ακτινοβολία προκάλεσε μια ρύθμιση προς τα πάνω του RAD51 σε κύτταρα ESCC (Εικ. 5Α). Στο σύμφωνο με την αύξηση του RAD51 σε επίπεδο πρωτεΐνης, το επίπεδο του

RAD51

mRNA αυξήθηκε σε κύτταρα ESCC που είχαν εκτεθεί σε IR (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτό το εύρημα είναι σε συμφωνία με μία προηγούμενη έκθεση της επαγωγής RAD51 με IR σε κύτταρα γλοιώματος [24]. Επειδή IR μπορεί να ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του

RAD51

, είμαστε δίπλα ελεγχθεί αν berberine προεπεξεργασίας θα μπορούσε να εξουδετερώσει αυτή την επίδραση του IR. Τα κύτταρα ESCC υποβλήθηκαν αρχικά σε επεξεργασία με berberine, στη συνέχεια με IR και μετρήθηκε το επίπεδο της έκφρασης RAD51. Σε αντίθεση με την ανύψωση του RAD51 σε κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με IR και μόνο, berberine προεπεξεργασία εξασθενημένο αποτελεσματικά την αυξητική ρύθμιση του RAD51 επάγεται από IR (Εικ. 5Β), υποδεικνύοντας ότι berberine ήταν σε θέση να ξεπεράσει την προς τα πάνω ρύθμιση του RAD51 που προκαλείται από IR. Όχι μόνο υπήρξε μια μείωση της συνολικής επίπεδο πρωτεΐνης, ο σχηματισμός του RAD51 εστιών σε απόκριση IR αναστέλλεται σε μεγάλο βαθμό από berberine (Εικ. 5C). Η ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 με berberine πάλι αντανακλάται στο επίπεδο της μεταγραφής (Σχ. 5D).

(Α), την ακτινοβολία ενισχύει την έκφραση RAD51 σε καρκινικά κύτταρα. Τα κύτταρα εκτέθηκαν στις υποδεικνυόμενες δόσεις ακτινοβολίας και συλλέχθηκαν 24 ώρες αργότερα για ανάλυση ανοσοστυπώματος. (Β), Αλλαγή των επιπέδων της πρωτεΐνης RAD51 σε απόκριση προς βερβερίνης και ακτινοβολία. Τα κύτταρα προκατεργάστηκαν με berberine (15 μΜ) για 24 ώρες πριν από την ακτινοβολία με 6 Gy ακτινών Χ. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν για ανάλυση ανοσοστυπώματος στις 24 ώρες μετά την ακτινοβόληση. (C), η αναστολή της προκαλούμενης από ακτινοβολία σχηματισμός RAD51 εστιών με berberine. Δεικνύονται ανοσοφθορισμού εικόνες KYSE30 και KYSE450 κύτταρα χρωματίστηκαν με αντι-RAD51 αντίσωμα μετά από 24 ώρες προεπεξεργασίας με βερβερίνης και στις 24 ώρες μετά την ακτινοβολία με 6 Gy ακτινών Χ. DAPI αντιχρωματισμός έδειξε τους πυρήνες. (D),

RAD51

επίπεδα mRNA μετά από προθεραπεία με berberine (15 μΜ) για 24 ώρες (KYSE30) ή 48 ώρες (KYSE450) πριν από την ακτινοβόληση με 6 Gy. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν για ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR ανάλυση του RAD51 αναλογίες GAPDH mRNA σε 24 ώρες μετά την έκθεση σε 6 Gy ακτινών Χ /. Ανοσοκηλιδώσεις και τις αξίες της έκφρασης του mRNA είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον δύο ανεξάρτητα πειράματα.

Η

RAD51 ρύθμιση προς τα κάτω από RNAi radiosensitizes καρκινικά κύτταρα

Επειδή berberine μπορεί να επηρεάσει πολλές κυτταρικές οδούς που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και επιβίωση, δεν μπορεί να αποκλειστεί ότι πορείες εκτός από την ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 ήταν υπεύθυνοι για την ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση του berbeirne. Για να αποδειχθεί ότι είναι η προς τα κάτω ρύθμιση του RAD51 που είναι υπεύθυνο για αυτό το αποτέλεσμα της berberine, έχουμε την επόμενη απεμπλουτισμένο RAD51 σε καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα με RNAi και δοκιμάζονται ραδιοευαισθησία τους. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6Α,

RAD51

έκφραση θα μπορούσε να σιγήσει αποτελεσματικά με siRNA που στοχεύουν ειδικά τα

RAD51

στις δύο κυτταρικές σειρές. Επιπλέον, η αυθόρμητη σχηματισμός RAD51 εστιών μειώθηκε σημαντικά (Εικ. 6Β). Όπως ήταν αναμενόμενο, η εξάντληση των RAD51 οδήγησε σε σημαντική μείωση της κλωνογονική επιβίωση των κυττάρων και για τα δύο οισοφάγου καρκινικές κυτταρικές σειρές (Σχ. 6C). Η SF2 μειώθηκε σε 33,3 ± 0,4% στα κύτταρα RAD51-RNAi KYSE30 από 78,4 ± 1,2% σε έλεγχο. κύτταρα KYSE450 έδειξε μια παρόμοια απάντηση στην εξάντληση RAD51. Έτσι, η επίδραση της ραδιοευαισθητοποίησης berberine επί οισοφάγου κύτταρα κυρίως με τη μεσολάβηση της μειορύθμιση του RAD51.

(Α), ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 με siRNA. επίπεδα πρωτεΐνης RAD51 μετρήθηκαν με κηλίδωση Western. KYSE30 και KYSE450 κύτταρα επιμολύνθηκαν με siRNA δίπολα (200 ηΜ) ειδικά για

RAD51

ή αρνητική ολίγο σε μέσο χωρίς ορό για 4 ώρες, στη συνέχεια αντικαταστάθηκε με πλήρες μέσο για 24 ώρες. εκχυλίσματα ολόκληρων κυττάρων συλλέχθηκαν για ανάλυση στυπώματος western χρησιμοποιώντας αντισώματα RAD51. (ΣΙ). Μειωμένη σχηματισμός προκαλείται από ακτινοβολία RAD51 εστιών σε καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα στα οποία

RAD51

σίγησε με RNAi. Τα κύτταρα εκτέθηκαν σε 6 Gy ακτινών Χ σε 28 ώρες μετά την επιμόλυνση με siRNA διπόλων. (C), Επίδραση της RAD51 knockdown επί ραδιοευαισθησία του οισοφάγου καρκινικών κυττάρων, όπως προσδιορίζεται με δοκιμασία κλωνογόνο επιβίωση. (D), ανάλυση Western blot του RAD51 πρωτεϊνών σε καρκινικά κύτταρα τα οποία μορφομετατράπηκαν με pcDNA3.1 ή pcDNA3.1B-mRAD51. Τα ανοσοαποτυπώματα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων με GAPDH χρησιμεύει σαν έλεγχος φόρτωσης πρωτεΐνης (κυτταρική σειρά KYSE30 /KYSE450 γονέα, KYSE30 /KYSE450 (pcDNA3.1) κύτταρα σταθερώς επιμολυσμένα με pcDNA3.1, κύτταρα KYSE30 /KYSE450 (mRAD51) σταθερά επιμολυσμένα με pcDNA3.1B-mRAD51). (Ε), Επίδραση της RAD51 υπερέκφραση σε ραδιοευαισθησία του οισοφάγου καρκινικών κυττάρων, όπως προσδιορίζεται με δοκιμασία κλωνογόνο επιβίωση. Τα αποτελέσματα για τα κύτταρα που επιμολύνθηκαν με τον φορέα mRAD51 ή pcDNA3.1 αγωγή με berberine συγκρίθηκαν (* Ρ & lt? 0,01).

Η

εισαγωγή εξωγενών RAD51 εξουδετερώνει την επίδραση της ραδιοευαισθητοποίησης berberine

Για να επικυρώσετε περαιτέρω ο ρόλος της RAD51 ως βασικού παράγοντα στη διαμεσολάβηση της ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση της berberine, κάναμε ένα κατασκεύασμα που εκφράζει ποντικού RAD51 κάτω από τον υποκινητή CMV, pcDNA3.1B-mRAD51, και είχε κύτταρα ESCC σταθερά επιμολυσμένων. Η έκφραση του εξωγενούς RAD51 ήταν εμφανής σε κύτταρα επιμολυσμένα με mRAD51, όπως φαίνεται από την Western blot (Εικ. 6D). Είναι σημαντικό ότι η επίδραση της ραδιοευαισθητοποίησης berberine ήταν σημαντικά εξασθενημένος σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές KYSE30 και KYSE450 που επιμολύνθηκαν με mRAD51 (Σχ. 6Ε). Τα αποτελέσματα αυτά, μαζί με εκείνα που λαμβάνονται με RAD51-RNAi, έδειξε ότι RAD51 είναι ένας κρίσιμος καθοριστικός παράγοντας της ραδιοαντοχή στα κύτταρα ESCC.

RAD51 υπερέκφραση είναι κοινή σε οισοφάγου καρκινικούς ιστούς

Η αναβάθμιση του

RAD51

έκφραση είναι κοινή σε κυτταρικές γραμμές όγκου [25] και σε μια σειρά ανθρώπινων κακοηθειών [26], [27], [28]. Εμείς επόμενο αξιολογηθεί η

RAD51

επίπεδο έκφρασης σε ένα πάνελ 86 οισοφάγου ιστών ανθρώπινα πρωτογενή πλακώδες καρκίνωμα με ανοσοϊστοχημική χρώση. Πυρηνική ή /και κυτταροπλασματική χρώση του RAD51 ανιχνεύθηκε σε 81 από 86 δείγματα. Σε δείγματα που εμφανίζουν θετική χρώση του RAD51, υποκυτταρική κατανομή και την ένταση ήταν ποικίλες. Ένταση βαθμολογήθηκε ως 1 στα 29, 2 στην 43, και 3 σε 9. Έξι δείγματα έδειξαν κυρίαρχη πυρηνική χρώση, 30 δείγματα έδειξαν κυρίαρχη κυτταροπλασματική χρώση, και 45 δείγματα έδειξαν τόσο κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώση (Σχ. 7Α-Ε). Σε αντίθεση,

RAD51

έκφραση ήταν χαμηλή ή απούσα στους φυσιολογικούς ιστούς που περιβάλλουν το καρκίνωμα (Fig.7F). Ωστόσο, βρήκαμε καμία συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης RAD51 και τις κλινικοπαθολογικών παραμέτρους ESCCs (Πίνακας 1). Παρ ‘όλα αυτά, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι RAD51 συνήθως υπερεκφράζεται σε δείγματα ESCC. Επειδή η υπερέκφραση του RAD51 συνήθως προσδίδει ανθεκτικότητα σε παράγοντες ότι η βλάβη του DNA [29], [30], [31], τα αποτελέσματά μας απαιτούν τη λήψη μέτρων που ρυθμίζουν προς τα κάτω RAD51 για την επίτευξη υψηλών ραδιενεργών ή χημειοθεραπευτική αποτελεσματικότητα των ESCCs σε κλινικό περιβάλλον. Είναι ενδιαφέρον ότι, η θεραπεία berberine επίσης ρυθμίζεται προς τα κάτω RAD51 σε τρεις επιπλέον καρκίνο του οισοφάγου κυτταρικές γραμμές (KYSE410, EC109, και ΤΕ-1), όπως στην KYSE30 και KYSE450 κύτταρα (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), υποδεικνύοντας ότι ο berberine μπορεί να καταστήσει ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση σε ένα ευρύ σειρά από καρκίνο του οισοφάγου κυττάρων.

οι εικόνες που δείχνει διαφορετικό επίπεδο έκφρασης και κυτταρική κατανομή παρουσιάζεται. (Α), απουσία RAD51-ειδική χρώση (μπλε πυρήνες λόγω Hemalum αντιχρωματισμός Μάγιερ). (Β), τα χαμηλά επίπεδα του RAD51 στο κυτταρόπλασμα, αλλά όχι σε πυρήνες, των μεταστατικών κυττάρων καρκινώματος. (C), ενδιάμεσα επίπεδα του RAD51 τόσο στο κυτταρόπλασμα και πυρήνες των μεταστατικών κυττάρων καρκινώματος. (D), τα υψηλά επίπεδα του RAD51 στο κυτταρόπλασμα, αλλά όχι σε πυρήνες, των μεταστατικών κυττάρων καρκινώματος. (Ε), τα υψηλά επίπεδα των πυρηνικών RAD51 στους πυρήνες των μεταστατικών κυττάρων καρκινώματος. Αριθ χρώση κυτταρόπλασμα είναι προφανής. (F), απουσία χρώσης RAD51 σε φυσιολογικό οισοφαγικό ιστό. Η ανοσοϊστοχημεία έγινε όπως στο Υλικά και Μέθοδοι. Όλες οι πρωτότυπες εικόνες συλλήφθηκαν σε × 400 μεγέθυνση.

Η

Συζήτηση

Δείξαμε για πρώτη φορά ότι berberine μπορούν να ρυθμίζουν προς τα κάτω την αποτελεσματική έκφραση RAD51 σε καρκινικά κύτταρα στην ανάθεση ακτινοευαισθησία. επεξεργασία berberine οδήγησε σε μείωση των

RAD51

μεταγραφή και αναστολή της

RAD51

δραστηριότητα του υποκινητή. Μπορεί επίσης να ξεπεραστεί η προς τα πάνω ρύθμιση του RAD51 που επάγεται από ιοντίζουσα ακτινοβολία (IR). Η επίδραση της ραδιοευαισθητοποίησης berberine εξασθένισε σε καρκινικά κύτταρα που υπερεκφράζουν εξωγενές RAD51. Προς τα κάτω ρύθμιση του RAD51, η οποία είναι απαραίτητη για ομόλογο ανασυνδυασμό επισκευή, εξασθενημένη σε μεγάλο βαθμό την επισκευή των DSBs που προκαλείται από IR και οδήγησε σε κακή επιβίωση του IR-κατεργασμένων κυττάρων. Είναι σημαντικό, παρατηρήσαμε ότι RAD51 ήταν συνήθως ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ανθρώπινους ιστούς ESCC, η οποία μπορεί να καταστήσει αντίσταση σε θεραπείες που στοχεύουν DNA. Επομένως, η χορήγηση του berberine ως ράδιο- και χημειοευαισθητοποιητή μπορεί να χρησιμεύσει ως μια στρατηγική για τη θεραπεία των ασθενών ESCC.

Προς τα πάνω ρύθμιση RAD51 σε καρκινικά κύτταρα αποδείχθηκε ότι συνδέεται με αυξημένη χημειοαντίσταση [29], [30] . Αρκετές προηγούμενες μελέτες έδειξαν επίσης ότι ορισμένα αντικαρκινικά φάρμακα καθιστούν τα καρκινικά κύτταρα ευαίσθητα στην ακτινοβολία και χημειοευαίσθητων με προς τα κάτω ρύθμιση RAD51 και, κατά συνέπεια, αλλοιώνοντας ομόλογο ανασυνδυασμό επισκευή σε καρκινικά κύτταρα. Για παράδειγμα, imatinib (Gleevec), η οποία αναστέλλει c-Abl τυροσίνης κινάσης, μπορεί να μειώσει αποτελεσματικά την έκφραση του RAD51 σε καρκινικά κύτταρα και αποφέρουν ραδιοευαισθησία [24], [32]. Το gefitinib, ένας εκλεκτικός αναστολέας του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα του υποδοχέα της κινάσης της τυροσίνης, βρέθηκε να ρυθμίζουν προς τα κάτω RAD51 σε καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα και να ευαισθητοποιήσει τους να μιτομυκίνη C [33] και gemcitabine [34]. Φαινυλο PCI-24781 υδροξαμικό οξύ, ένας αναστολέας δεακετυλάσης ιστόνης που έχει ραδιοευαισθητοποίησης επίδραση σε καρκινικά κύτταρα, δρα επίσης με ρύθμιση προς τα κάτω RAD51 [35]. Εκτός από την κατοχή μια σειρά από παρενέργειες, αυτά τα φάρμακα τείνουν να είναι πολύ δαπανηρή.

Πολλά φυσικά προϊόντα έχουν αξιοσημείωτη φαρμακευτικά αξίες. Πέραν του ότι είναι πιο προσιτές, φυτικά φάρμακα συνήθως έχουν χαμηλή τοξικότητα. Αρκετές φυσικές ενώσεις έχουν βρεθεί να προσδίδουν ραδιοευαισθησία και χημειοευαισθησία σε καρκινικά κύτταρα. Μια μελέτη έδειξε ότι η κουρκουμίνη, ένα συστατικό στην κουρκούμη (

Curcuma longa

), θα μπορούσε να ραδιοευαισθητοποιεί κυττάρων καρκίνου του προστάτη μέσω της αναστολής της λειτουργίας του ΝΡκΒ, η οποία οδήγησε σε αρνητική ρύθμιση των αντι-αποπτωτικών γονιδίων

Bcl-2

[36]. Θεραπεία του καρκίνου του τραχήλου κυττάρων με κουρκουμίνη οδήγησε σε αυξημένη παραγωγή αντιδραστικών ειδών IR επαγόμενη οξυγόνου (ROS), που προκαλεί παρατεταμένη ενεργοποίηση ERK1 /2-ΜΑΡΚ [37]. Αντίθετα, εμοδίνη, μια ουσία που βρίσκεται σε ορισμένα φυτά, συμπεριλαμβανομένων ραβέντι, αναφέρθηκε ότι αναστέλλουν την ενεργοποίηση του ERK1 /2 στον καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα, τα οποία με τη σειρά της οδηγεί σε μια ρύθμιση προς τα κάτω του RAD51 και προσδίδει χημειοευαισθησία [38], [39].

Ο Huang Lian είναι ένα από τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα φάρμακα βοτάνων στην Κίνα. Είναι ένα από τα 12 συνηθέστερα χρησιμοποιούμενα φαρμακευτικά φυτά στις Ηνωμένες Πολιτείες [40]. Εκτός από την κοινή χρήση της ως φάρμακο για γαστρεντερική δυσφορία, berberine έχει δοκιμαστεί σε κλινικές δοκιμές για σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 [41], [42] και για υπερχοληστερολαιμία [43]. Είναι σημαντικό, οι ασθενείς που λαμβάνουν berberine εμπειρία σχετικά ήπιες παρενέργειες. Ενώ προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι berberine έχει άμεσα αποτελέσματα κατά των όγκων με την επαγωγή της παραγωγής δραστικών ειδών οξυγόνου σε καρκινικά κύτταρα, η οποία θα έδινε πιθανώς ραδιοευαισθητοποίηση [44], [45], [46], [47], η μελέτη μας είναι η πρώτη να δείξει ότι berberine μπορεί να προσδώσει ακτινοευαισθησία με ρύθμιση προς τα κάτω ένα βασικό παράγοντα για την επισκευή του ϋδΒδ. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η ισχύς του berberine σε προς τα κάτω ρύθμιση RAD51 σε κύτταρα ESCC είναι συγκρίσιμη με εκείνη του Gleevec σε κύτταρα γλοιώματος [24]. Σε υψηλότερες συγκεντρώσεις, berberine αναμένεται να διαδραματίσει έναν διπλό ρόλο στην προώθηση της θάνατο των κυττάρων στα οποία συγκρατείται, με την ταυτόχρονη προκαλώντας βλάβη του DNA και αλλοιώνοντας μία διαδρομή η οποία είναι υπεύθυνη για την επισκευή της βλάβης. Είναι σημαντικό ότι, σε συγκεντρώσεις που προσδίδουν ραδιοευαισθησία σε καρκίνο του οισοφάγου κύτταρα, berberine δεν είχε καμία επίδραση ραδιοευαισθητοποίησης επί κανονικών ανθρώπινων ινοβλαστών. Αντίστοιχα, berberine δεν παρατηρήθηκε να ρυθμίζει προς τα κάτω RAD51 σε μη κακοήθεις κύτταρα. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η επίδραση της ραδιοευαισθητοποίησης berberine μπορεί να είναι ειδική για τα καρκινικά κύτταρα.

Συνοπτικά, δείξαμε ότι berberine σε χαμηλές συγκεντρώσεις radiosensitized ουσιαστικά οισοφαγικό πλακώδη κύτταρα καρκινώματος. Δρα ρύθμιση προς τα κάτω RAD51, ένα βασικό παίκτη σε ομόλογο ανασυνδυασμό επισκευής, που οδηγεί σε απομείωση αξίας στην επισκευή του διπλό σκέλος διαλείμματα. Τα ευρήματά μας αποκάλυψε έτσι ένα μέχρι τούδε μη αναγνωρισμένη βιολογική δραστικότητα που χρησιμοποιούνται συνήθως και ανέξοδη φαρμάκου και έδειξαν ότι βερβερίνης, με σχετικά χαμηλή τοξικότητα του, μπορεί να χρησιμοποιηθεί σαν ένα πρόσθετο σε θεραπεία ακτινοβολίας καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Όλες οι διαδικασίες που αφορούν κλινικά δείγματα εγκρίθηκαν από την επιτροπή δεοντολογίας της Shandong University School of Medicine.

τηλέφωνα Γραμμές

Όλα τα κύτταρα αναπτύχθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένο επωαστή που περιέχει 5% CO

2. Το καρκίνωμα του οισοφάγου ανθρώπινη πλακωδών κυττάρων (ESCC) γραμμές KYSE30, KYSE450, KYSE410, EC109 και ΤΕ-1 ελήφθησαν από Cancer Institute & amp? Hospital, Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών (Πεκίνο) και καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, 100 μονάδες /ml πενικιλίνη, και 100 μg /mL στρεπτομυκίνη. KYSE30, KYSE450 και KYSE410 αρχικά παράγεται από τον Dr. Yutaka Shimada, τα φυσιολογικά κύτταρα ανθρώπινων ινοβλαστών (NHF) ελήφθησαν από το Institute of Βασικών Ιατρικών Επιστημών, Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών (Πεκίνο), και διατηρήθηκαν σε DMEM συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, 100 μονάδες /mL πενικιλίνη-στρεπτομυκίνη και 4 μg /mL bFGF. HUVECs ελήφθησαν από την ATCC. Μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα που προέρχονται από ανθρώπινο ομφάλιο λώρο ήταν ένα δώρο από τον Δρ Ντονγκ Λι, Qilu Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Shandong. Ινοβλάστες (XWXL) ιδρύθηκαν από ένα αφαιρεθεί χειρουργικά ιναδένωμα, με εν επιγνώσει συναίνεση του ασθενούς και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Shandong University School of Medicine.