Αφηρημένο

Ιστορικό και Σκοπός

Το ασβέστιο έχει προταθεί ως μεσολαβητής της χημειοπροφύλαξη του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC), αλλά η πλήρης μηχανισμός στηρίζεται αυτό το προληπτικό αποτέλεσμα δεν είναι ακόμη σαφές. Ως εκ τούτου, διενεργήσαμε αυτή τη μελέτη για την αξιολόγηση των πιθανών ρόλων και των μηχανισμών του ασβεστίου με τη μεσολάβηση πρόληψη της CRC που προκαλείται από 1,2-διμεθυλυδραζίνη (ΩΜΗ) σε ποντίκια.

Μέθοδοι

Για την ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης , 6 μη-όγκου του παχέος ιστούς των ποντικιών από την ομάδα ΩΜΗ + ασβέστιο και 3 δείγματα καθένα από τις ομάδες ΩΜΗ και ελέγχου υποβλήθηκαν σε υβριδισμό σε ένα 4 × 44 K Agilent ολόκληρο το γονιδίωμα ολιγο μικροσυστοιχιών, και επιλεγμένα γονίδια επικυρωθεί από αλυσίδας πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο αντίδραση (PCR). Λειτουργική ανάλυση των δεδομένων των μικροσυστοιχιών εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας KEGG και Gene Ontology (GO) αναλύσεις. γονίδια Hub προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Pathway Studio.

Αποτελέσματα

Τα ποσοστά εμφάνισης όγκων στον ΩΜΗ και ΩΜΗ + ομάδες ασβεστίου ήταν 90% και 40%, αντίστοιχα. Ανάλυση γονιδιακής έκφρασης μικροσυστοιχιών έδειξαν ότι

S100A9

,

Defa20

,

Mmp10

,

ΜΜΡ7

,

Ptgs2

, και

Ang2

ήταν μεταξύ των πιο μειωτικά γονίδια, ενώ

PER3

,

Tef

,

Rnf152

, και

Prdx6

σημαντικά προς τα πάνω ρυθμισμένη στο ΩΜΗ + ομάδα ασβέστιο συγκριτικά με την ομάδα DMH. Λειτουργική ανάλυση έδειξε ότι οι Wnt, του κυτταρικού κύκλου, και τις οδούς αραχιδονικού οξέος ήταν σημαντικά μειωτικά στην ομάδα + Ασβέστιο DMH, και ότι οι όροι GO που σχετίζονται με τη διαφοροποίηση των κυττάρων, του κυτταρικού κύκλου, του πολλαπλασιασμού, κυτταρικό θάνατο, προσκόλληση και τη μετανάστευση των κυττάρων επηρεάστηκαν σημαντικά .

Forkhead κουτί M1

(

FOXM1

) και

πυρηνικού παράγοντα κάπα Β

(

NF-κΒ

) θεωρήθηκαν ως ισχυρά γονίδια κόμβο.

Συμπέρασμα

στο ΩΜΗ που προκαλείται μοντέλο ποντικού CRC, ολοκληρωμένη μηχανισμοί που εμπλέκονται με πολύπλοκες μεταβολές της γονιδιακής έκφρασης που περιλαμβάνει πολλές μεταβληθεί μονοπάτια και GO όρους. Ωστόσο, το πώς το ασβέστιο ρυθμίζει αυτά τα γεγονότα πρέπει να μελετηθεί

Παράθεση:. Wang J-L, Λιν Υ-Δ, Τσεν H-Μ, Χ Κονγκ, Xiong Η, Shen Ν, et al. (2011) Ασβέστιο Αποτρέπει Ογκογένεση σε ένα μοντέλο ποντικού του καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 6 (8): e22566. doi: 10.1371 /journal.pone.0022566

Επιμέλεια: Irina V. Λεμπέντεβα, Enzo Life Sciences, Inc., Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 13, Νοέμβρη 2010? Αποδεκτές: 29 του Ιουνίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 17 του Αυγ 2011

Copyright: © 2011 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το Υπουργείο Δημόσιας Υγείας, Κίνα (Νο 200802094), επιχορήγηση από το Εθνικό Επιστημονικό Βρέθηκε της Κίνας (30830055) για να Jing-Yuan Fang? και μια επιχορήγηση από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (αριθ: 30900757) για να Hua Xiong. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η τρέχουσα συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) είναι υψηλή, και η πρόγνωση παραμένει φτωχή [1]? ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να αναπτύξει στρατηγικές για την πρόληψη της ανάπτυξης του CRC. Πολλοί παράγοντες που χρησιμοποιούνται για την πρόληψη της CRC [2]? Ωστόσο, δεν υπάρχει συνοχή στα αποτελέσματα απέναντι παραγόντων [3], [4], [5], και μερικοί παράγοντες μπορεί να οδηγήσουν σε σοβαρές παρενέργειες [6], [7]. Έτσι, μια εναλλακτική προσέγγιση είναι απαραίτητη για την πρόληψη του CRC.

Μια πρόσφατη συστηματική ανασκόπηση αποκάλυψε ότι το ασβέστιο μπορεί να είναι πιο ελκυστικός στην πρόληψη των CRC σε σύγκριση με την ασπιρίνη και διαλογής [8]. Ωστόσο, η αποτελεσματικότητα του ασβεστίου είναι ακόμη αβέβαιη. Τα συγκεντρωτικά τα ευρήματα 10 μελετών κοόρτης αποκάλυψε μια αντίστροφη σχέση μεταξύ της πρόσληψης ασβεστίου και CRC κίνδυνο [9], αλλά η σχέση αυτή δεν επιβεβαιώθηκε από μια τυχαιοποιημένη ελεγχόμενη κλινική μελέτη [10]. Ωστόσο, λόγω των περιορισμών του τυχαιοποιημένη δοκιμή ελέγχου (RCT), π.χ., χαμηλή δόση ασβεστίου, μικρού μήκους της παρακολούθησης, και την επιρροή της πρόσληψης των οιστρογόνων [11], το συμπέρασμα από την RCT δεν ήταν πειστική. Παρ ‘όλα αυτά, η αποτελεσματικότητα του ασβεστίου για την πρόληψη του CRC παραμένει αμφιλεγόμενη [12].

Επίσης, ο μηχανισμός του ασβεστίου με μεσολάβηση πρόληψη του CRC, δεν είναι ακόμη σαφής. Σε προηγούμενες μελέτες, το ασβέστιο θεωρήθηκε για να μειωθεί ο κίνδυνος CRC με σύνδεση προς τοξικά δευτερογενή χολικά οξέα και σχηματίζουν αδιάλυτων σαπώνων στον αυλό του παχέος εντέρου [13], ή με μείωση του πολλαπλασιασμού, διέγερση της διαφοροποίησης, και επαγωγή απόπτωσης σε βλεννογόνο του κόλου [ ,,,0],14], [15]. Μια πρόσφατη μελέτη προτείνει ότι το ασβέστιο μπορεί να καταργήσει την υπερπλασία στο άπω παχύ έντερο αναστέλλοντας έναν υποδοχέα των διαύλων ασβεστίου, δηλαδή, παροδική υποδοχέα δυναμικό κανάλι, υποοικογένεια V, μέλος 6 (TRPV6) [16]. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι το ασβέστιο θα μπορούσε να μειώσει τον κίνδυνο της CRC μέσω μιας ποικιλίας μηχανισμών, αλλά η συγκεκριμένη και ολοκληρωμένη μηχανισμός δεν είναι ακόμη σαφής. Ως εκ τούτου, διενεργήσαμε αυτή τη μελέτη για την αξιολόγηση των πιθανών ρόλων και των μηχανισμών του ασβεστίου με τη μεσολάβηση πρόληψη της CRC που προκαλείται από 1,2-διμεθυλυδραζίνη (ΩΜΗ) σε ποντίκια. Πιστεύουμε ότι τα ευρήματά μας θα συμβάλει στην έρευνα για την κλινική εφαρμογή του ασβεστίου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Η μελέτη μας εγκρίθηκε από την φροντίδα των ζώων και τη χρήση Επιτροπή της Σαγκάης Jiao Tong-Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Renji Νοσοκομείο, Σαγκάη της Κίνας. Όλες οι διαδικασίες ζώων πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές που αναπτύχθηκαν από το Συμβούλιο την Κίνα για Φροντίδα των ζώων και το πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την Σαγκάη Jiao Tong-Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου, Renji Νοσοκομείο, Σαγκάη της Κίνας.

Χημικά

ϋΜΗ λήφθηκε από την Sigma Chemical Co. (St. Louis, ΜΟ, USA). Κανονική και υψηλή ζωοτροφών ασβεστίου για ποντίκια ελήφθησαν από τη Σαγκάη SLAC Εργαστήριο Εταιρείας Ζώων (Σαγκάη, Κίνα). Τα κύρια συστατικά της κανονικής και της υψηλής τροφοδοσίας ασβεστίου ήταν τα ίδια: πρωτεΐνη, 22,1%? λίπους, 5,28%? τέφρα, 5,2%? ινών, 4,12%? ελεύθερου αζώτου εκχυλίσματος, 52%? φωσφόρο, 0,92%? και βιταμίνη D3 6818.4 IU /kg. Η συγκέντρωση του ασβεστίου (με τη μορφή του ανθρακικού ασβεστίου) στην κανονική και υψηλή ζωοτροφών ασβέστιο ήταν 1,24% και 3,0%, αντίστοιχα. Η υψηλή τροφή ασβεστίου ρυθμίστηκε με την προσθήκη ανθρακικού ασβεστίου για να ληφθεί ένα τελικό περιεχόμενο ασβεστίου 3%. Επειδή πιστεύουμε ότι η αμφιλεγόμενη αποτελεσματικότητα των δίαιτα υψηλή σε ασβέστιο για την πρόληψη του CRC μπορεί να είναι εν μέρει οφείλεται στην μικρή δόση ασβεστίου σε προηγούμενες μελέτες, έτσι αποφασίσαμε να χρησιμοποιήσουμε υψηλότερη περιεκτικότητα σε ασβέστιο για να ελέγξετε την ακριβή προληπτική δράση του CRC και την ανοχή των ποντικών .

πειραματόζωα

Συνολικά, 80 θηλυκά Slac: ποντίκια ICR [βάρος, 18-20 g? ποιότητας, απαλλαγμένα από ειδικά παθογόνα (SPF)] αγοράστηκαν από την Κινεζική Ακαδημία Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα). Αυτά διατηρήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου (22 ° C), με σχετική υγρασία 60% και 12 ωρών φωτός σκότους /? είχαν προμηθεύσει ένα πρότυπο εργαστηριακή δίαιτα και το πόσιμο νερό. Οι ποντικοί χωρίστηκαν τυχαία σε 4 ομάδες (20 ποντίκια σε κάθε ομάδα): ομάδα ελέγχου, η ομάδα DMH, ομάδα + Ασβέστιο DMH, και την ομάδα του ασβεστίου. Οι ποντικοί της ομάδας ελέγχου δόθηκαν κανονική τροφή και έλαβαν υποδόριες ενέσεις φυσιολογικού ορού? εκείνα της ομάδας ΩΜΗ δόθηκαν κανονική τροφή και έλαβε υποδόρια ένεση ϋΜΗ σε δόση 20 mg /kg μία φορά την εβδομάδα 20 εβδομάδων? εκείνα της ομάδας + Ασβέστιο DMH παρέχονταν τροφή υψηλής ασβέστιο και έλαβαν υποδόρια ένεση ϋΜΗ σε δόση 20 mg /kg μία φορά την εβδομάδα 20 εβδομάδων? εκείνα της ομάδας ασβεστίου παρασχέθηκαν τροφή υψηλής ασβέστιο και έλαβαν υποδόριες ενέσεις φυσιολογικού ορού. Οι ποντικοί θανατώθηκαν στο τέλος των 24 εβδομάδων, και η συχνότητα εμφάνισης του CRC σε κάθε ομάδα εξετάσθηκε. Αυτή η μέθοδος έχει περιγραφεί με λεπτομέρεια στο προηγούμενη μελέτη μας [17]. Εν συντομία, διαμήκεις τομές έγιναν παχέος ιστούς για να παρατηρήσει τον αριθμό των ακαθάριστων όγκων. Μετά τότε, οι ακαθάριστες όγκοι αφαιρέθηκαν χωριστά και τα πλήρους πάχους ορθοκολικού ιστοί κοπεί στο μισό από τον διαμήκη άξονα. Μερικά από τα πρόσφατα ληφθέντα δείγματα όγκου μαζί με μισό αντίστοιχο μη-όγκου του παχέος ιστοί καταψύχθηκαν αμέσως σε υγρό άζωτο. Τα υπόλοιπα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε διάλυμα φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη μπλοκ για παθολογικές ανάλυση και ανοσοϊστοχημεία.

Η ιστολογική ανάλυση

Για ιστολογική ανάλυση, 4-μm πάχους τομές του μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη, παραφινώδη ενσωματωμένα όγκων του παχέος εντέρου παρασκευάσθηκαν. Μετά αιματοξυλίνη και χρώση ηωσίνης, τα τμήματα του κάθε όγκου εξετάσθηκαν υπό μικροσκόπιο φωτός (Olympus, Japan). Τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν από τον παθολογοανατόμο Chen XY.

εκχύλιση RNA, σήμανση, υβριδισμός, και η ανάλυση

Σύνολο RNAs από 12 μη καρκινικών ιστών του παχέος εντέρου [3 από την ομάδα ελέγχου, 3 από το ομάδα DMH, 6 από την ομάδα ασβέστιο DMH + (μεταξύ των 6 από την ομάδα + ασβέστιο DMH, 3 ήταν από ποντίκια με όγκους και 3 ήταν από ποντικούς χωρίς όγκους)] συλλέχθηκαν χρησιμοποιώντας ΤΚΙζοΙ (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η περιεκτικότητα σε RNA μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο Nanodrop ND-1000, και μετουσιωτική ηλεκτροφόρηση γέλης διεξήχθη. Στη συνέχεια, τα δείγματα ενισχύθηκαν, σημασμένο χρησιμοποιώντας το κιτ επισήμανσης Agilent Quick Amp, και υβριδοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την Agilent ολόκληρο το γονιδίωμα των μικροσυστοιχιών ολίγο (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) με τη χρήση θαλάμων υβριδισμό Agilent SureHyb. Μετά την υβριδοποίηση και πλύση, τα επεξεργασμένα πλακίδια σαρώθηκαν με σαρωτή μικροσυστοιχιών Agilent DNA χρησιμοποιώντας τις συνιστώμενες από την Agilent Technologies ρυθμίσεις.

Τα προκύπτοντα αρχεία κειμένου που προέρχονται από το λογισμικό Feature Extraction Agilent (έκδοση 10.5.1.1) εισήχθησαν το λογισμικό Agilent GeneSpring GX (έκδοση 11.0) για περαιτέρω ανάλυση. Ένταση φόντο έχει αποκοπεί πριν από την κανονικοποίηση. Τα σύνολα δεδομένων μικροσυστοιχιών ομαλοποιήθηκαν σε GeneSpring GX χρησιμοποιώντας το σενάριο ένα χρώμα Agilent FE (κυρίως μεσαία κανονικοποίηση). Διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων ταυτοποιήθηκαν με προσδιορισμό της πολλαπλής μεταβολής (FC) και ρ τιμές του

t-test

. Γονίδια με ένα FC ≥1.5 και τιμή ρ ≤0.05 μεταξύ 2 ομάδων ταυτοποιήθηκαν ως διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια. Λειτουργική ανάλυση των διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Gene Ontology (GO) (https://www.geneontology.gov/) [18] και τη βάση δεδομένων PATHWAY KEGG (https://www.genome.jp/kegg/pathway. html). γονίδια Hub ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας Pathway Studio (Αριάδνη Genomics) [19].

Σε πραγματικό χρόνο

αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης

Αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ολιγο (dT) εκκινητών και εκθέτη II ανάστροφης μεταγραφάσης (Takara ). Ποσοτικοποίηση της έκφρασης των γονιδίων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα πραγματικό χρόνο αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) kit (Takara). Το επίπεδο έκφρασης του 18 s rRNA χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Η έκφραση των ακόλουθων γονιδίων αναλύθηκε:

S100A9

,

Defa20

,

Mmp10

,

Ptgs2

,

PER3

,

Tef

,

Rnf152

, και

Prdx6

. Οι εκκινητές παρατίθενται στον Πίνακα 1.

Η

Ανοσοϊστοχημεία

Four-μικρόμετρο-τομές πάχους του μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη, εγκλεισμένους σε παραφίνη ιστούς κόλου μη-όγκου αποπαραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν. Η μέθοδος επισκευής μικροκυμάτων χρησιμοποιήθηκε για ανάκτηση αντιγόνου. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με επώαση των τομών με υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3% για 10 λεπτά. Μη ειδικό αντιγόνο αποκλείστηκε με επώαση των τομών με ορό προβάτου για 30 λεπτά. Τα πλακίδια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C σε υγροποιημένο θάλαμο με μονοκλωνικά αντι-β-κατενίνης (Cell Signaling Technology, # 9562) σε αραίωση 1:200. Αντι-κουνελιού IgG χρησιμοποιήθηκε σαν δευτερογενές αντίσωμα (30 λεπτά επώασης). Διαμινοβενζιδίνη χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο και οι τομές με αιματοξυλίνη. Δείγματα επωάστηκαν με PBS αντί του πρωτογενούς αντισώματος χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί έλεγχοι.

Στατιστική ανάλυση

Τα αποτελέσματα των πειραμάτων σε ζώα και σε πραγματικό χρόνο PCR αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας SAS 9.2 λογισμικό (SAS Institute Inc. ΗΠΑ). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD. Μαθητή

t-test

χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των τιμών μεταξύ 2 ανεξάρτητες ομάδες.

Αποτελέσματα

Τα πειράματα σε ζώα

Τα κύρια αποτελέσματα των πειραμάτων σε ζώα έχουν δείξει στο Σχήμα 1. Μπορούμε επάγεται με επιτυχία CRC σε ποντίκια χρησιμοποιώντας DMH (Σχήμα 1Α). Οι περισσότεροι από τους καρκίνους ταυτοποιήθηκαν ως αδενοκαρκινώματα με ιστολογική ανάλυση (Εικόνα 1Β, 1C). Στα + ομάδες Ασβέστιο DMH και DMH, η συχνότητα εμφάνισης όγκου ήταν 90% και 40% (Σχήμα 1 D), ο μέσος αριθμός των όγκων ανά ποντικό ήταν 5,39 ± 1,97 και 3,0 ± 1,31 (Εικόνα 1 Ε), και η μέση μέγιστη διάμετρος των όγκων ήταν 6,44 ± 1,72 και 2,63 ± 1,19 (Εικόνα 1F), αντίστοιχα. Κανένας όγκος δεν βρέθηκε στις ομάδες ελέγχου και ασβέστιο. Η ανάπτυξη και η ανάπτυξη των ποντικών στην ομάδα του ασβεστίου δεν επηρεάστηκαν σημαντικά, και η παθολογική εξέταση του τους νεφρούς, την καρδιά, τους πνεύμονες, το συκώτι, και οι σπλήνες δεν αποκάλυψαν προφανείς ανωμαλίες (δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Α

Παρατήρηση των όγκων στο παχύ έντερο των ποντικών μετά τη θυσία στις 24 εβδομάδες.

Β

(× 200) και

C

(× 400). Οι περισσότεροι από τους όγκους επιβεβαιώθηκαν ως αδενοκαρκινώματα από παθολογική εξέταση.

D

. Tumor επίπτωση μεταξύ των 4 ομάδων.

E

. αριθμός όγκου /ποντίκια μεταξύ των 4 ομάδων.

F

. Μέγιστη διάμετρος όγκου μεταξύ των 4 ομάδων (Έλεγχος: ομάδα ελέγχου, έλαβαν κανονική τροφή και την έγχυση της κανονικής νατρίου για 20 εβδομάδες? ΩΜΗ: ομάδα ΩΜΗ, έλαβε κανονική τροφή και την έγχυση του ΩΜΗ για 20 εβδομάδες? ΩΜΗ + ομάδα Ασβέστιο: έλαβε υψηλού ασβεστίου ζωοτροφές και ένεση ΩΜΗ για 20 εβδομάδες? ομάδας ασβέστιο: λάβει τροφή υψηλής περιεκτικότητας σε ασβέστιο και την έγχυση της κανονικής νατρίου για 20 εβδομάδες). *

P

αξία & lt?. 0.05 μεταξύ ΩΜΗ + ομάδα ασβέστιο και η ομάδα ΩΜΗ

Η προφίλ

Η γονιδιακή έκφραση με μικροσυστοιχίες ανάλυση

Όλα τα 12 παχέος ιστούς άνοιξε το βήμα ελέγχου της ποιότητας και αναλύθηκαν όπως περιγράφεται στο τμήμα των Μεθόδων. Η ανάλυση μικροσυστοιχιών διεξήχθη μεταξύ της ομάδας ελέγχου (3 δείγματα), η ομάδα ΩΜΗ (3 δείγματα), και ΟΜΗ + ομάδα Ασβέστιο (6 δείγματα). Μπορούμε επίσης σύγκριση των επιπέδων έκφρασης γονιδίου μεταξύ των δειγμάτων με ή χωρίς όγκους μεταξύ της ομάδας + Ασβέστιο DMH.

Ιεραρχική συσταδοποίηση ανάλυση των στοιχείων έκφρασης συστοιχία 12 έδειξε ένα ομοιογενές προφίλ έκφρασης μεταξύ των δειγμάτων κάθε ομάδας (Σχήμα S1 ). Με τον καθορισμό του φίλτρου για την FC σε ± 1,5 και η τιμή ρ στο ≤0.05, βρήκαμε ότι η έκφραση του 12395 γονιδίων μεταβλήθηκε σημαντικά στην ομάδα ϋΜΗ σε σύγκριση με εκείνες στην ομάδα ελέγχου (βλέπε πίνακα S1), και αυτή του 1508 γονίδια ήταν σημαντικά μεταβληθεί στην ομάδα του ασβεστίου DMH + σε σύγκριση με εκείνες στην ομάδα ϋΜΗ (βλέπε πίνακα S2). Σε σύγκριση με τον Πίνακα S1 και S2 Πίνακα, βρήκαμε ότι η έκφραση των γονιδίων των οποίων 549 αλλαγών λόγω θεραπεία DMH μπορούσε να αναστραφεί με διαιτητικό ασβέστιο (βλέπε Πίνακα S3). Στον Πίνακα 2, οι 30 πιο διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια που φαίνεται, οι περισσότερες εκ των οποίων σχετίζονται στενά με ογκογένεση, όπως

S100A9

(S100 ασβέστιο πρωτεΐνη δέσμευσης Α9 [calgranulin Β]),

Defa20

(αμυντοσίνη α 20),

Mmp10

(μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας 10),

Ang2

(αγγειογενίνη, ριβονουκλεάση Α οικογένεια, μέλος 2),

PER3

(περίοδος ομόλογο 3) ,

Tef

(thyrotroph εμβρυϊκά παράγοντας), και

Ptgs2

(προσταγλανδίνη-ενδοϋπεροξειδίου συνθάσης 2). Για τις 8 επιλεγμένα γονίδια, δηλαδή,

S100A9

,

Defa20

,

Mmp10

,

Ptgs2

,

PER3

,

Tef

,

Rnf152

, και

Prdx6

, τα αποτελέσματα που προκύπτουν από την ανάλυση μικροσυστοιχιών επιβεβαιώθηκε με PCR πραγματικού χρόνου (Σχήμα 2). Έχουμε επιλέξει αυτά τα γονίδια για την PCR επιβεβαίωση επειδή συνδέονται στενά με ογκογένεση και αξίζει περαιτέρω έρευνα.

Χρησιμοποιήσαμε 18 s rRNA ως εσωτερικού ελέγχου. Σχετική έκφραση mRNA υπολογίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο -ΔΔT 2

. Τα δεδομένα είναι ο μέσος όρος των 10 δειγμάτων ± SD. Έλεγχος, το επίπεδο της γονιδιακής έκφρασης σε φυσιολογικό ιστό κόλου των ποντικών στην ομάδα ελέγχου? DMH, το επίπεδο γονιδιακής έκφρασης στην μη-όγκου ιστού του κόλου των ποντικών στην ομάδα ΩΜΗ? DMH + Ασβέστιο, επίπεδο γονιδιακής έκφρασης στην μη-όγκου ιστού του κόλου των ποντικών στην ομάδα + Ασβέστιο DMH? Ασβέστιο, η γονιδιακή έκφραση σε μη-όγκου ιστού του κόλου των ποντικών στην ομάδα του ασβεστίου. *

P

αξία & lt? 0,05 μεταξύ ΩΜΗ + ομάδα του ασβεστίου και της ομάδας ΩΜΗ? §

P

αξία & lt?. 0.05 μεταξύ της ομάδας του ασβεστίου και της ομάδας ελέγχου

Η

Για να προσδιορίσετε αν συγκεκριμένα βιολογικά μονοπάτια ή λειτουργικές ομάδες γονιδίων επηρεάστηκαν διαφορετικά από τη διατροφή υψηλή ασβέστιο, εμείς αναλύθηκαν σύνολο δεδομένων μικροσυστοιχίας μας (με βάση τα αποτελέσματα που φαίνονται στον πίνακα S3) χρησιμοποιώντας το λογισμικό GO και KEGG. Τα λεπτομερή αποτελέσματα παρουσιάζονται στον Πίνακα S4 και S5 Πίνακα. Ρυθμίζοντας την τιμή ρ στο ≤0.05 βρήκαμε σημαντικές προς τα κάτω ρύθμιση των 39 μονοπατιών σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένων ορισμένων οδών όγκων που σχετίζονται, όπως το μονοπάτι κυτταρικού κύκλου, Wnt σηματοδοτικό μονοπάτι, αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) μονοπατιού σηματοδότησης, και αυξητικό παράγοντα μετασχηματισμού ( ΤΟΡ-β) οδού σηματοδότησης. Οι πιο εμπλουτισμένα οδοί παρουσιάζονται στον Πίνακα 3. Χρησιμοποιήσαμε ανοσοϊστοχημεία για να ανιχνεύσει την έκφραση και τη διανομή των β-κατενίνης, του πυρήνα μόριο στο μονοπάτι Wnt πρωτεΐνη, και βρήκαν ότι η έκφραση της ήταν σημαντικά υψηλότερη στην μη-όγκου κολονικό βλεννογόνο από το ομάδα DMH από το ότι από την ομάδα ελέγχου, ωστόσο, η έκφραση του στην ομάδα + ασβέστιο DMH ήταν σημαντικά μειωμένη σε σύγκριση με την ομάδα ϋΜΗ (Σχήμα 3). Συνολικά, 703 όροι GO, συμπεριλαμβανομένων των όγκων που σχετίζονται με τους όρους GO, όπως η διαφοροποίηση των κυττάρων, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την απόπτωση, αγγειογένεση, κυτταρική προσκόλληση, του κυτταρικού κύκλου, και την κυτταρική διαίρεση, ήταν σημαντικά αλλάξει

Έλεγχος, ομάδα ελέγχου.? ΩΜΗ, ομάδα ΩΜΗ? + Ασβέστιο, ΩΜΗ + Ασβέστιο ομάδα ΩΜΗ? Ασβέστιο, η ομάδα του ασβεστίου.

Η

Θα χρησιμοποιηθεί επίσης λογισμικό Pathway Studio για να φιλτράρετε τα γονίδια κόμβο που μπορεί να παίζουν σημαντικό ρόλο στο ασβέστιο μεσολάβηση πρόληψη του CRC (Πίνακας 4). Από αυτούς, επιλέχθηκαν 2 γονίδια για την κατασκευή δικτύων γονίδιο (Σχήμα 4). Βάσει των δικτύων, θα μπορούσαμε να καθορίσουμε σαφώς τις βασικές ρόλους των γονιδίων πλήμνης

Τα διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια που ρυθμίζονται από τις 2 γονίδια πλήμνη (Α,

FOXM1

?. Β,

ΝΡ-κΒ

) εμφανίζονται σε μορφή διαγράμματος δικτύου. Πράσινο ή κόκκινο χρωματισμό, αλληλουχίες που ρυθμίζεται προς τα κάτω ή προς τα πάνω ρυθμισμένη στην ομάδα του ασβεστίου ΩΜΗ + σε σύγκριση με την ομάδα DMH, αντίστοιχα. Η ένταση του χρώματος είναι ανάλογη με την έκταση της αλλαγής.

Η

Επιπλέον, περαιτέρω σύγκριση των επιπέδων γονιδιακής έκφρασης μεταξύ των ποντικών από την ομάδα + Ασβέστιο ΩΜΗ με /χωρίς όγκους και βρήκε ότι τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης των περισσοτέρων από τα παραπάνω επιλεγμένων γονιδίων σε ποντίκια από την ομάδα ΩΜΗ + ασβέστιο με όγκους ήταν μεταξύ εκείνων που προέρχονται από την ομάδα ΩΜΗ + ασβέστιο χωρίς όγκους και εκείνα από την ομάδα ϋΜΗ (βλέπε πίνακα S6 και το σχήμα S1). Βρήκαμε επίσης ότι η έκφραση ορισμένων μεταφορέων ασβεστίου ήταν διαφορετική μεταξύ των ποντικών από την ομάδα + Ασβέστιο ΩΜΗ με /χωρίς όγκους. Για παράδειγμα, η έκφραση του Trpv6 και Trpv3 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ποντίκια από την ομάδα Ασβέστιο ΩΜΗ + με όγκους σε σύγκριση με εκείνους χωρίς όγκους? Ωστόσο, η έκφραση της plasmalemmal Ca

2 + -ΑΤΡάση (PMCA) ήταν σημαντικά ρυθμίζεται προς τα κάτω.

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε την ΩΜΗ που προκαλείται μοντέλο ποντικού CRC που δείχνει φαινοτυπική και γονοτυπικές χαρακτηριστικά παρόμοια με εκείνα που παρατηρήθηκαν σε ανθρώπινα σποραδικές CRCs και, ως εκ τούτου, μπορεί να εφαρμοστεί για να μελετήσει την πρόληψη του CRC [20]. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι η συχνότητα εμφάνισης της CRC μειώθηκε σημαντικά σε ποντίκια που τρέφονται με δίαιτα υψηλή ασβέστιο, υποδεικνύοντας σαφή ρόλο του ασβεστίου στην πρόληψη του CRC. Τα αποτελέσματά μας είναι συνεπή με πολλές άλλες μελέτες. Pence [21] βρήκαν ότι οι αρουραίοι σε δίαιτα υψηλής ασβεστίου έχουν μειωμένη συχνότητα εμφάνισης CRC σε σύγκριση με την δίαιτα χαμηλού ασβεστίου (86% έναντι 53%), Salas [22] παρατηρήθηκε επίσης μια σημαντική μείωση του αριθμού των όγκων και μείωση στη συχνότητα CRC στην ομάδα που έλαβε τροφή δίαιτα υψηλή σε ασβέστιο (97% έναντι 64%). Ωστόσο, ορισμένες μελέτες έχουν παρατηρηθεί διαφορετικά αποτελέσματα. Sitrin [23] διαπίστωσε ότι ούτε τα συμπληρώματα ασβεστίου μόνο, ούτε συμπληρωματικό συνδυασμό ασβεστίου με ανεπάρκεια βιταμίνης D μεταβάλλεται η συχνότητα εμφάνισης της CRC που προκαλείται από ΩΜΗ, Mølck [24] ακόμη βρεθεί μια αυξημένη συχνότητα στους αρουραίους τρέφονται δίαιτα υψηλή σε ασβέστιο. Πιστεύουμε ότι οι διαφορές στο στέλεχος των ζώων, την ηλικία των ζώων, την εκτροφή περιβάλλον, τη διατροφή βάση, δόσεις ΩΜΗ και η διάρκεια της έγχυσης, η συγκέντρωση του ασβεστίου, του χρόνου παρέμβασης ασβέστιο μπορεί να εξηγηθεί για τις διαφορές στην έκβαση των διαφόρων μελετών που χρησιμοποιούν υψηλά επίπεδα ασβεστίου. Το επιβεβαίωσε προληπτική αποτελεσματικότητα του ΣΔΠ με δίαιτα υψηλή σε ασβέστιο δεν μπορούσε ακόμη να περιέχονται από αυτές τις μελέτες. Πιστεύουμε ότι είναι δυνατόν να οφείλεται στις μικρές δόσεις ασβεστίου σε αυτές τις μελέτες. Έτσι χρησιμοποιήσαμε υψηλότερη περιεκτικότητα σε ασβέστιο (3%) στην τροφοδοσία να δοκιμαστεί η προληπτική επίδραση της CRC και την ανοχή των ποντικών. Στην πραγματικότητα, αυτή η υψηλή τροφή ασβέστιο έδειξε καλή προληπτική επίδραση της CRC στο πείραμα μας και υπάρχουν προφανείς δυσμενείς επιπτώσεις βρέθηκε σε ποντίκια. Επιπλέον, δεν όγκος βρέθηκε στις ομάδες ασβεστίου. Η ανάπτυξη και η ανάπτυξη των ποντικών στην ομάδα του ασβεστίου δεν επηρεάστηκαν σημαντικά, και η παθολογική εξέταση του τους νεφρούς, την καρδιά, τους πνεύμονες, το συκώτι, και οι σπλήνες δεν αποκάλυψαν προφανείς ανωμαλίες, την έκφραση των περισσοτέρων από τα επιλεγμένα γονίδια επιβεβαιώθηκε με PCR πραγματικού χρόνου στην ομάδα του ασβεστίου ήταν ίση με εκείνη της ομάδας ελέγχου. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι αυτή η δίαιτα υψηλής ασβέστιο είναι ασφαλές για τα ποντίκια.

Στη συνέχεια, χρησιμοποιήσαμε γονίδιο ανάλυση προφίλ έκφρασης μικροσυστοιχιών για τον προσδιορισμό του μηχανισμού του ασβεστίου με τη μεσολάβηση της πρόληψης της CRC. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη έρευνα για να χρησιμοποιήσουν την τεχνολογία των μικροσυστοιχιών για τη μελέτη του ρόλου της υψηλής ασβέστιο διατροφή στην πρόληψη της CRC.

Όταν η FC ορίστηκε σε ≥1.5, οι αλλαγές σε 549 γονίδια ότι ήταν το αποτέλεσμα της θεραπείας ΩΜΗ θα μπορούσε να αναστραφεί με διαιτητικού ασβεστίου.

S100A9

είναι το πιο μειωτικά γονίδιο? το προϊόν της είναι μια κυτταροπλασματική Ca

2 + που δεσμεύουν πρωτεΐνη. Αν και εξωκυτταρικό S100A9 θα μπορούσε να επάγει απόπτωση με δέσμευση σε μία ακόμη άγνωστη υποδοχέα και προκαλούν διμερισμό του Βαχ και Bak και μετατόπιση τους στα μιτοχόνδρια οδηγώντας σε μιτοχονδριακή βλάβη [25], η έκφραση του σε επιθηλιακά κύτταρα θα μπορούσαν πράγματι να επάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων με την ενεργοποίηση του φωσφοϊνοσιτιδίου 3- κινάσης επιβίωση (ΡΙ3Κ) -Akt-ΝΡ-κΒ, η οποία συνδέεται με την ογκογένεση [26]. Επιπλέον, S100A9 είναι ένα σημαντικό προφλεγμονώδης κυτοκίνη που εμπλέκονται στην έμφυτη ανοσία, και η έκφραση του βρέθηκε να είναι αυξημένα σε πολλές παθολογικές καταστάσεις που σχετίζονται με φλεγμονή [27]. Πολλές άλλες φλεγμονώδεις κυτοκίνες, όπως η ΔΕΦΑ, επίσης μειωτικά σημαντικά [τα μέλη της οικογένειας αμυντοσίνης ρυθμίστηκαν προς τα κάτω σε διάφορα επίπεδα:

ΔΕΦΑ-RS2

(FC = -9,88),

Defa20

(FC = -8,16)]. Ο παράγοντας νέκρωσης όγκου (

TNF

) και των υποδοχέων της επίσης ρυθμίζεται προς τα κάτω σε διάφορα επίπεδα:

TNF

(FC = -1,87),

Tnfrsf11b

(FC = -5,98),

Tnfrsf19

(FC = -2,27). Αρκετές άλλες μελέτες πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το DMH ή αζοξυμεθάνιο (ΑΟΜ) επαγόμενη μοντέλο CRC βρέθηκαν επίσης υψηλά επίπεδα έκφρασης του S100A9 και ΔΕΦΑ σε ιστούς όγκων [28], [29]. Φλεγμονώδεις κυτοκίνες παίζουν σημαντικούς ρόλους στην έμφυτη και προσαρμοστική ανοσία? Ωστόσο, αυτά τα αυξημένα κυτοκίνες συμμετέχουν επίσης στην έναρξη του όγκου, την προώθηση, και εισβολή [30], [31], [32], [33], και ως εκ τούτου, να παίξουν ένα σημαντικό ρόλο στη φλεγμονή που σχετίζεται με την καρκινογένεση [34].

MMPs είναι μια οικογένεια μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας που μπορεί να παίξει σημαντικό ρόλο στο μικροπεριβάλλον του όγκου [35]. Πολλά μέλη της οικογένειας ΜΜΡ σημαντικά μειωτικά στο + ομάδα Ασβέστιο ΩΜΗ [

MMP10

(FC = -9,47),

ΜΜΡ13

(FC = -9,1),

ΜΜΡ7

(FC = -7,07), και

ΜΜΡ 11

(FC = -1,56)]. Άλλων μεταλλοπρωτεϊνασών επίσης ρυθμίζεται προς τα κάτω, όπως

Adam8

και

Adam10

, τα οποία ρυθμίζεται προς τα κάτω από 2,08 και 1,6 φορές, αντίστοιχα. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι πολλά μέλη της οικογένειας των ΜΜΡ και ADAM θα ​​μπορούσε να παίξει διάφορους ρόλους στην ογκογένεση. Για παράδειγμα,

ΜΜΡ7

μπορούσε να διασπάσει συνδέτη Fas, μειώνοντας έτσι την επίδραση της χημειοθεραπείας στον όγκο με την κατάργηση απόπτωση [36].

Adam10

μπορεί να πυροδοτήσει την απελευθέρωση του διαλυτού του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF), μεσολαβούν στην αποβολή Ε-καδερίνης, μετατόπισης β-κατενίνης στον πυρήνα, και ως εκ τούτου, την οδήγηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων [37]. Ωστόσο, το πιο σημαντικό ρόλο των μελών της οικογένειας των ΜΜΡ και ADAM προωθεί εισβολή όγκου και των μεταστάσεων, υποβαθμίζοντας εξωκυττάριας μήτρας [38], [39]. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι ένα υψηλό δίαιτα ασβεστίου μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην αναστολή της εισβολής και μεταστάσεις του CRC. Επειδή

in vitro

μελέτες έδειξαν ότι, σε CRC κύτταρα, η έκφραση Ε-καδερίνης μπορεί να προκαλείται από την αύξηση της εξωκυτταρικής Ca

2+ συγκέντρωση [40], το ασβέστιο μπορεί να θεωρηθεί για να καταστείλουν την επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (EMT) να αναστέλλει CRC μεταστάσεις.

PER3

ήταν η πιο απορυθμίζεται γονίδιο στη μελέτη μας, που ανήκουν στα γονίδια περίοδο. Τα εν λόγω γονίδια είναι βασικά στοιχεία των μεταγραφικά /μεταφραστικά βρόχους ανάδρασης που παράγει την ενδογενή κιρκαδικό ρυθμό, και

PER3

συμμετέχει στην χρονομέτρησης στην υπόφυση και τον πνεύμονα [41]. Πρόσφατες μελέτες έχουν προτείνει ότι οι κιρκαδικοί γονίδια συμμετέχουν στην ανάπτυξη και εξέλιξη των διαφόρων μορφών καρκίνου, και τα γονίδια περιόδου έχουν πλέον συνδεθεί με οδούς απόκριση βλάβης DNA, αναστολή της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων, και αύξηση στον αποπτωτικό ποσοστό [42]. μελέτη Oshima έδειξε ότι η έκφραση του

PER3

σε ιστούς CRC ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στο γειτονικό φυσιολογικό βλεννογόνο, γεγονός που υποδηλώνει ότι

PER3

μπορεί να λειτουργήσει ως καταστολέας όγκου γονίδιο [43].

Tef

ήταν η δεύτερη πιο απορυθμίζεται γονιδίων στη μελέτη μας. Ανήκει στο PAR-τομέα βασικής φερμουάρ λευκίνης (PAR bZIP) παράγοντες μεταγραφής και συμμετέχει στην αποτοξίνωση και το μεταβολισμό του φαρμάκου [44] και στη διατήρηση του σχήματος των κυττάρων σε ινοβλάστες [45]. Χρησιμεύει επίσης ως προ-αποπτωτικών γονιδίων με την προώθηση της έκφρασης bcl-GS ή BIK [46], [47]. Πολλά άλλα γονίδια επίσης ρυθμίζεται προς τα πάνω, π.χ.,

Rnf152

και

Prdx6

.

Rnf152

είναι μια πρωτεΐνη δακτύλου μυθιστόρημα RING και έχει αποδειχθεί ότι έχει προ-αποπτωτική δραστηριότητα [48].

Prdx6

είναι ένα μέλος της οικογένειας των PRDX, που σχετίζονται με λειτουργίες όπως τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη διαφοροποίηση και την απόπτωση, εκτελώντας έτσι αντικαρκινική δράση [49].

Με τη χρήση ανάλυσης μονοπατιού, εμείς βρέθηκε ότι η οδός Wnt επηρεάστηκε σημαντικά. Αν και η έκφραση της Wnt ανασταλτικού παράγοντα

wif1

ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω, ώστε πολλών γονιδίων που σχετίζονται με την οδό σηματοδότησης Wnt και γονίδια στόχους τους ήταν μειωτικά [δηλ,

Tcf7

,

Myc

,

κυκλίνης D1

(

CCND1

), και

ΜΜΡ7

στην FC της -1.53, -1.61, -1.62, -7.07 και, αντίστοιχα]. Η έκφραση της πρωτεΐνης του β-κατενίνης ήταν σημαντικά μειωμένη στην ομάδα + Ασβέστιο DMH, γεγονός που υποδηλώνει ότι η οδός Wnt ήταν προς τα κάτω σε αυτήν την ομάδα. Αυτό είναι συνεπές με προηγούμενα ευρήματα [28], [50]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η οδός του κυτταρικού κύκλου επίσης ανέστειλε σημαντικά στην ομάδα ϋΜΗ + Ασβέστιο, με πολλά γονίδια σε αυτό το μονοπάτι που ρυθμίζεται προς τα κάτω με συνέπεια, δηλαδή, τα κυκλίνες

Ccnb1

και

CCND1

ρυθμίστηκαν προς τα κάτω με 1,79 και 1.62 φορές, αντίστοιχα, και η έκφραση του κυκλίνη εξαρτώμενη κινάση

Cdk1

μειώθηκε κατά 1,66 φορές.

Μεταξύ των μεταβολικών οδών, οι οδοί αραχιδονικό οξύ ήταν σημαντικά αναστέλλεται ΩΜΗ + ομάδα ασβεστίου. Πολλά ένζυμα σε αυτό το μονοπάτι, επέδειξαν μειωμένη έκφραση, π.χ., Ptgs2, επίσης γνωστή ως κυκλοοξυγενάση-2 (COX-2), μειώθηκε κατά 3 φορές. Η οδός αραχιδονικό οξύ ενεργοποιείται κατά τη διάρκεια της φλεγμονής, που οδηγούν στη σύνθεση της προσταγλανδίνης και της θρομβοξάνης, τα οποία διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην φλεγμονώδη απόκριση [51]. Επιπλέον, το ένζυμο κλειδί σε αυτό το μονοπάτι, Ptgs2 (COX-2), παίζει σημαντικό ρόλο στην έναρξη της CRC. COX-2 υπερέκφραση δείχθηκε να συσχετίζεται με την καρκινογένεση σε περισσότερο από το 80% του ΚΕΣ [52]. Σε ζωικά μοντέλα, η έκφραση COX-2 βρέθηκε να είναι επαρκής για να προκαλέσει ογκογένεση [53]. Ο μηχανισμός μπορεί να σχετίζεται με την ενεργοποίηση της διεγέρσιμης συνθάσης νιτρικού οξειδίου (iNOS) και VEGF σηματοδότησης να προαχθεί ο σχηματισμός νέων αιμοφόρων αγγείων [54]. Με βάση τη διαπίστωση ότι η έκφραση των φλεγμονωδών κυτοκινών S100A9, ΔΕΦΑ, TNF, και των υποδοχέων του TNF επίσης μειωτικά σημαντικά στην ομάδα ϋΜΗ + Ασβέστιο, εμείς εικάζουν ότι το ασβέστιο μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στη μείωση της φλεγμονής που σχετίζονται με ογκογένεση.

Μεταξύ των Pathway Studio που προέρχονται από γονίδια hub, το οποίο μπορεί να παίζουν σημαντικό ρόλο στο ασβέστιο μεσολάβηση πρόληψη της CRC,

FOXM1

,

NF-κΒ

, κλπ, ήταν συμμετέχει επίσης. FOXM1 ανήκει σε μια οικογένεια εξελικτικά συντηρημένη μετεγγραφικών ρυθμιστών που χαρακτηρίζονται από την παρουσία ενός τομέα δέσμευσης DNA γνωστή ως περιοχή κιβώτιο forkhead. Υψηλότερη έκφραση του FOXM1 σημειώθηκε σε πολλούς τύπους ανθρώπινων καρκίνων [55]. FOXM1 μπορεί να παίζει σημαντικό ρόλο στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την απόπτωση [56]. Ο μοριακός μηχανισμός στηρίζεται FOXM1 σηματοδότηση μεσολαβούμενη επαγωγή της ανάπτυξης του όγκου δεν έχει πλήρως διευκρινιστεί. Ωστόσο, οι πολλαπλές ογκογόνο οδούς όπως ΡΙ3Κ /Akt, ΝΡ-κΒ, εξωκυτταρικό σήμα ρυθμιζόμενη κινάση (ERK), που ενεργοποιείται από μιτογόνο κινάσης πρωτεΐνης (ΜΑΡΚ), VEGF, αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS), c-myc, και υποξία επαγόμενου παράγοντα (HIF) -1 έχει αναφερθεί ότι αλληλεπιδρά με σηματοδότηση FOXM1? Αυτό υποδηλώνει ότι η αλληλεπίδραση μεταξύ FOXM1 σηματοδότησης και άλλα μονοπάτια σηματοδότησης μπορεί να παίζουν σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση [57]. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η έκφραση πολλών γονιδίων που ρυθμίζονται από ΝΡ-κΒ έδειξε αλλαγμένη έκφραση στην ομάδα + Ασβέστιο DMH, π.χ.,

TNF

,

PTGS2

,

MYC

,

CCND1

,

ETS που σχετίζονται με το γονίδιο 1

(

ERG1

),

S100A9

, και

παράγοντα λεμφικών ενισχυτή 1

(

LEF1

), υποδηλώνοντας ότι το ΝΡ-κΒ μπορεί επίσης να χρησιμεύσει ως γονίδιο κόμβο στο ασβέστιο-μεσολαβούμενη παρεμπόδιση του CRC. Αν και η έκφραση του ΝΡ-κΒ δεν μεταβλήθηκε σημαντικά στο μεταγραφικό επίπεδο, μπορεί να έχουν αλλάξει στο μεταφραστικό ή μετα-μεταφραστική επίπεδο. Πρέπει να διευκρινιστεί περαιτέρω το πρότυπο έκφρασης του NF-κΒ στην ομάδα ϋΜΗ + Ασβέστιο και ειδικού μηχανισμού της.

Βρήκαμε επίσης ότι τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης των περισσοτέρων από τα παραπάνω επιλεγμένων γονιδίων σε ποντίκια από το DMH + ομάδα ασβεστίου με όγκους ήταν μεταξύ εκείνων που προέρχονται από την ίδια ομάδα, χωρίς όγκους και εκείνων που προέρχονται από την ομάδα ΩΜΗ, επιβεβαίωσε έτσι τη σημασία αυτών των γονιδίων στην πρόληψη του ασβεστίου της CRC.