Αφηρημένο

Κινητά ετερογένεια αποτελεί αναπόσπαστο μέρος της ανάπτυξης και της εξέλιξης του καρκίνου. Πρόοδος μπορεί να συσχετιστεί με την εμφάνιση των κυττάρων που παρουσιάζουν υψηλή φαινοτυπική πλαστικότητα (συμπεριλαμβανομένων των «de-διαφοροποίηση» στις πρωτόγονες αναπτυξιακό κράτη), και επιθετικό ιδιότητες συμπεριφοράς (συμπεριλαμβανομένης της υψηλής ογκογόνο δυναμικό). Παρατηρήσαμε ότι πολλές βιοδείκτες που χρησιμοποιούνται για τον εντοπισμό του καρκίνου βλαστικά κύτταρα (CSC) να ονομάσετε υποσύνολα κυττάρων σε προχωρημένο κλινικό στάδιο του καρκίνου του πνεύμονα (κακοήθη πλευριτική συλλογή ή MPE). Έτσι, CSC-βιοδείκτες μπορεί να είναι χρήσιμη για τη διαλογή ζωντανών λειτουργικώς διακριτά υποσύνολα κυττάρων από μεμονωμένους όγκους, η οποία μπορεί να επιτρέψει στους ερευνητές να ακονίσετε σε σχετικά με την μοριακή βάση για λειτουργική ετερογένεια. Έχουμε αποδείξει ότι το CD44

hi (CD44-υψηλή) υποσύνολα των καρκινικών κυττάρων εμφανίζουν υψηλότερα κλωνική, σχηματισμού αποικιών δυναμικό από CD44

κύτταρα lo (n = 3) και είναι επίσης ογκογόνο (n = 2/2), όταν μεταμοσχεύονται σε μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού. Τα CD44

hi υποσύνολα εκφράζουν διαφορετικά επίπεδα του εμβρύου (de-διαφοροποίηση) δείκτες ή ρυθμιστές της χρωματίνης. Σε αρχειοθετημένα ιστούς καρκίνου του πνεύμονα, δείκτες ALDH συν-εντοπίζονται περισσότερο με CD44 σε πλακώδες καρκίνωμα (n = 5/7) από Αδενοκαρκίνωμα (n = 1/12). MPE καρκινικά κύτταρα και καρκινικό κύτταρο πνεύμονα γραμμή (NCI-Η-2122) εμφανίζουν χρωμοσωμικές ανωμαλίες και 1ρ36 διαγραφή (n = 3/3). Από miR-34a χαρτογραφείται στην θέση 1ρ36 διαγραφή, χαμηλά επίπεδα έκφρασης miR-34a ανιχνεύθηκαν σε αυτά τα κύτταρα. Η αποτελεσματικότητα του CD44

hi κύτταρα, χαρακτηριστική ιδιότητα του CSC σχηματισμού αποικίας, μπορεί να ανασταλεί μέσω αντικατάστασης Mir-34α σε αυτά τα δείγματα. Επιπλέον, η πολύ ογκογόνο CD44

Τα hi κύτταρα εμπλουτισμένα για τα κύτταρα στη φάση G2 του κυτταρικού κύκλου

Παράθεση:. Basak SK, Veena MS, Ω S, Lai C, Vangala S, Elashoff D, et al. (2013) Η CD44

υψηλή Ογκογονικά υποομάδες σε καρκίνο του πνεύμονα Biospecimens εμπλουτίζονται για χαμηλή έκφραση του miR-34a. PLoS ONE 8 (9): e73195. doi: 10.1371 /journal.pone.0073195

Επιμέλεια: Mauricio Rojas, Πανεπιστήμιο του Pittsburgh, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 2 Μαΐου, 2013? Αποδεκτές: 16 του Ιούλη, 2013? Δημοσιεύθηκε: 3η Σεπτεμβρίου του 2013

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από επιχορηγήσεις από το Τμήμα Ιατρικής, UCLA και το The Robert W. Green, Κεφαλής και Τραχήλου Χειρουργικής Πρόγραμμα Ογκολογίας στο UCLA. Τα κεφάλαια επιχορηγήσεις χρησιμοποιήθηκαν για αντιδραστήρια και υποστήριξη των μισθών των ερευνητών που συμμετείχαν στη μελέτη. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, η συλλογή και ανάλυση δεδομένων

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

όγκου ετερογένεια μπορεί να είναι. που χαρακτηρίζεται από διαφορική έκφραση δεικτών κυτταρικής επιφάνειας, γενετικές και επιγενετικές διαφορές, και /ή τις διαφορές σε βασικές ή μόρια σηματοδότησης τελεστές της λειτουργίας των κυττάρων. Cellular ετερογένεια μπορεί να χαρακτηρίζονται από διαφορές στις λειτουργικές (συμπεριφοράς) ιδιότητες των κυττάρων (κλωνογονικότητας, ικανότητα σχηματισμού αποικίας σε μαλακό άγαρ, ογκογένεση κ.λπ.). Ενώ πολλές έρευνες έχουν επιλέξει να συνδέσει δείκτες κυτταρικής επιφάνειας στα καρκινικά κύτταρα που βρίσκονται στην πρωτογενή θέση όγκου με CSC-συμπεριφορικές ιδιότητες, παρατηρήσαμε ότι κλινικά προχωρημένα στάδια είναι ιδιαίτερα εμπλουτισμένα για κυτταρική υποσύνολα φέρουν CSC-βιοδεικτών. Έτσι, η υπόθεση ότι προχωρημένο στάδιο της νόσου δεν απαγορεύει (και μπορεί να είναι συμφέρουσα) για τη σύνδεση συγκεκριμένων βιοδεικτών με λειτουργικό φαινότυπο. Κατά συνέπεια, η προσέγγισή μας σε βιολογικούς ανακάλυψη τονίζει το σχεδιασμό κατάλληλων λειτουργικών βιοαναλύσεις για τον χαρακτηρισμό τόσο των κυτταρικών φαινοτύπων και της μοριακής βιολογίας για την έναρξη υποκείμενο όγκο, καθώς και την εξέλιξη του όγκου.

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο στους άνδρες και στις οι γυναίκες? με μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) αντιπροσωπεύει το 80-85% των περιπτώσεων [1]. Για την κατανόηση της βιολογίας βασίζεται η υψηλή θνησιμότητα, έχουμε επιλέξει ένα προηγμένο μοντέλο στάδιο της νόσου (MPE). Πνεύμονα ασθενείς με καρκίνο που παρουσιάζουν με MPE έχουν σημαντικά υψηλότερη θνησιμότητα από εκείνους που δεν MPE, ή εκείνων που έχουν αρνητική κυτταρολογική εξέταση συλλογές [2] – [4]. Έτσι, το βάρος MPE-όγκου είναι διαποτισμένη με βιολογικές ιδιότητες που μειώνουν την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο. Σημαντικά, ο πληθυσμός του όγκου MPE χύδην αποτελείται από ετερογενή υποπληθυσμών [5]. Εν μέρει, αυτή η ετερογένεια μπορεί να χαρακτηρίζεται από βιοδείκτες που συνήθως συνδέονται με τα χαρακτηριστικά της CSC (CD44, ΑΙ_ϋΗ, cMet, CD166, MDR-1, uPAR, PTEN, ΟΚΤ-4, ΔΜΣ-1, hTERT, SUZ12, ΕΖΗ2).

Ένας στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να καθοριστεί αν θα μπορούσαμε να προσδιορίσει ένα καρκινικό κύτταρο υποσύνολο που εμφανίζεται αυξημένη αρμοδιότητα για τη διάδοση και τη συντήρηση του όγκου, και να αρχίσουν να χαρακτηρίζουν τις μοριακές βάσεις για αυτές τις ιδιότητες. Μελετήσαμε πρώτα CD44 ως δείκτης επιλογής για κύτταρα προβλέπεται να έχει υψηλή ογκογόνο δυναμικό επειδή έχει προηγουμένως ταυτοποιηθεί CSC σε διάφορους επιθηλιακούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του μαστού [6], το κεφάλι και το λαιμό, [7], [8], παγκρεατικό [9], [10], και του προστάτη κακοήθειες [11] – [15]. CD44 εκφράζεται εντόνως σε διαφορετικούς υποτύπους καρκίνου του πνεύμονα, [16], και η έκφρασή της σχετίζεται με φτωχή πρόγνωση σε ασθενείς [17]. Πρόσφατες μελέτες σε κυτταρικές σειρές NSCLC χαρακτηρίζουν επίσης CD44

hi κύτταρα όπως CSC [16].

MPE-πρωτογενείς καλλιέργειες περιέχουν έναν υποπληθυσμό κυττάρων που ιδιαίτερα εκφράζει CD44 (CD44

hi). Όταν αυτά τα κύτταρα ταξινομούνται από τις MPE-πρωτογενείς καλλιέργειες, αυτές εμφανίζουν υψηλή ογκογόνο δυναμικό, συμπεριλαμβανομένου εμφύτευση των όγκων σε NOD /SCID IL2γR

null ποντίκια σε περιοριστικές αραιώσεις των μεταμοσχεύσεων κυττάρων. Οι ιδιότητες αυτές είναι χαρακτηριστικές της CSC. Κλάσματα του CD44

Τα hi κύτταρα που συνδέονται με μια αυξημένη έκφραση του άλλου CSC-δείκτη που σχετίζεται με ξενοβιοτικών μεταβολισμό, ALDH. Το CD44

hi /ΑΙ_ϋΗ

hi φαινότυπο είναι εμφανής τόσο πλακωδών κυττάρων (SCC) και το αδενοκαρκίνωμα (AC) του πνεύμονα, γεγονός που υποδηλώνει ότι παρόμοια προφίλ δείκτη μπορεί ετικέτα συμπεριφορικά επιθετικό (ιδιαίτερα ογκογόνο) κλάσματα κυττάρων στα διάφορα » καταγωγές «(ιστοπαθολογικές υποτύπων) των καρκίνων του πνεύμονα [18].

MPE όγκοι εμφανίζουν συνήθως hyperploidy και χρωμοσωμικές ανωμαλίες. FISH ανάλυση εντόπισε μια κοινή συγκεκριμένη ανωμαλία στην 1ρ36 περιοχής, γεγονός που υποδηλώνει ότι η περιοχή αυτή μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο συμβάλλοντας στην επιθετική ιδιότητες συμπεριφοράς. Η περιοχή 1ρ36 έχει προηγουμένως προσδιοριστεί για περιέχει τη θέση που κωδικοποιεί ογκοκατασταλτικό microRNA (MIR-34α). Η απώλεια της έκφρασης miR-34a εμπλέκεται στον καρκίνο εξέλιξης [15], [19]? Αυτή η μελέτη προσθέτει στην εν λόγω αποδεικτικά στοιχεία. Εξαιρετικά ογκογόνο CD44

hi κύτταρα εκφράζουν χαμηλά miR-34a, και την αντικατάσταση του miR-34a αναστέλλει τον σχηματισμό αποικιών των CD44

hi κυττάρων σε μαλακό άγαρ. Η ανάλυση του κυτταρικού κύκλου των CD44

hi κύτταρα έδειξαν ότι αυτές οι εξαιρετικά ογκογόνων κυττάρων βρίσκονται στη φάση G2 του κυτταρικού κύκλου.

Υλικά και Μέθοδοι

κακοήθη πλευριτική συλλογή (MPE) Συλλογή, Επεξεργασία και Cell Culture

Όλοι οι συμμετέχοντες στη μελέτη υποβλήθηκαν σε γραπτή συγκατάθεση από μια διαδικασία που έχει εγκριθεί από το διοικητικό συμβούλιο θεσμική αναθεώρηση (IRB) στα Υποθέσεων Βετεράνων-Μείζονος Λος Άντζελες Healthcare System (VAGLAHS) και η μελέτη εγκρίθηκε από IRB -VAGLAHS. MPE δείγματα (Μ-1, Μ-2 και Μ-3) συλλέχθηκαν από ασθενείς με Υποθέσεων Βετεράνων-Μεγαλύτερη Σύστημα Λος Άντζελες Υγείας (VAGLAHS). Τα κύτταρα καλλιεργούνται σε παρουσία 20-30% ΜΡΕ (μέσο πρωτογενή καλλιέργεια ή PCM) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [5]. (Στήριξη Πληροφορίες S1 και S2).

Έλεγχος Ιδρύθηκε Γραμμές κυττάρων

Δύο καθιερωμένες κυτταρικές σειρές GM 05399 (κανονική ινοβλαστών) και H2122 (καρκίνος του πνεύμονα) χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη. Η κυτταρική γραμμή ινοβλάστης GM 05399 ελήφθη από την Coriell Institute for Medical Research (Camden, NJ). Η κυτταρική γραμμή προέρχεται από ένα 1-ετών καυκάσιος αρσενικό. Η κυτταρική γραμμή διατηρείται στο εργαστήριο μας σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (ϋΜΕΜ) σε παρουσία 10% ορού εμβρύου βοός (FBS) [20]. Η κυτταρική γραμμή αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα H2122 δημιουργήθηκε από Adi Gazdar από έναν κακοήθη υπεζωκοτική συλλογή, και απέκτησε από Ilona Εϊηηοϊΐα και Herb Oie από το NCI. Στη συνέχεια κατατίθεται σε ATCC (NCI-H2122 [H2122] ATCC® CRL-5985 ™) [21]. Η κυτταρική γραμμή διατηρείται στο εργαστήριο μας σε RPMI-1640 μέσο σε παρουσία 10% FBS [22], [23]. Τόσο οι κυτταρικές σειρές είναι διαθέσιμες στο κοινό

Αντισώματα

Τα ακόλουθα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν για κυτταρομετρία ροής FACS /Τακτοποίηση:. Ποντικού κατά ανθρώπινης CD44 IgG2b-FITC, (BD Biosciences # 555478)? FITC ποντικιού IgG2b ελέγχου κ ομοιοτυπικά, BD Biosciences # 555742)? ΡΕ-επισημασμένο αντι-ανθρώπινο CD44, (BD Pharmingen # 555479)? PE Ποντίκι IgG2b ελέγχου κ ομοιοτυπικά, BD Biosciences 555743. Anti-CD166-FITC (μονοκλωνικό Mouse? IgG1 Setrotech # MCA 1926F, πρωτοβάθμια μη επισημασμένη αντι-cMet (IgG2a ποντικού, Abcam # 49210), αντι-uPAR (IgG ποντικού, Σάντα Κρουζ Biotech # 13522), Δευτεροβάθμιας αντίσωμα που χρησιμοποιείται για τη μελέτη χρησιμοποιήθηκαν ήταν: Goat (Fab ‘) 2 αντι-Ποντικού IgG (H + L) ΡΕ-Cy.5.5 (Caltag εργαστήρια # M35018)

ανοσοϊστοχημεία (. ξενομοσχεύματος όγκοι AC) ή ιστού ελέγχου των πνευμόνων του ανθρώπου (ανθρώπινη φυσιολογική κυψελιδική και βρογχιολιδικού ιστοί) ελήφθησαν από τον πυρήνα εγκατάσταση UCLA Τμήμα Παθολογίας: IHC)

πρωτογενούς ιστού ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα (πλακώδες καρκίνωμα: SCC και αδενοκαρκίνωμα. που προέρχεται από CD44

hi κύτταρα εγχέονται σε NOD /SCID (IL2rγ

null) ποντίκια αφαιρεθεί χειρουργικά, κομμένο σε κομμάτια 0,3-0,5 mm και σταθερό σε αιθανόλη (Fisher Scientific) ή Ζ-fix (Anatech, ΜΙ). για IHC, τομές 3-5 μ τομές κόπηκαν και αποπαραφινοποιήθηκαν και υποβάλλονται σε επεξεργασία για ανάκτηση αντιγόνου [5] και χρωματίστηκαν για έκφραση δείκτη. Αρχικά τομές ιστών χρωματίστηκαν με χρώση αντισώματος μονής δείκτη (CD44 ή ALDH). Μόλις οι συνθήκες βελτιστοποιήθηκαν για απλή χρώση αντιγόνο, τότε η χρώση διπλής αντιγόνο (CD44 και ALDH) τομών ιστού επιτεύχθηκε. τομές ιστού εγκλεισμένες σε παραφίνη αποπαραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν. Μετά ανάκτηση αντιγόνου (10 mM ρυθμιστικό κιτρικού νατρίου, ρΗ 6,0 με ατμό 25 λεπτά) και το κλείδωμα, ενδογενείς υπεροξειδάσες σβήστηκαν (3% Η

2O

2 σε 1% αζίδιο του νατρίου με PBS, 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου) . Τα πλακίδια επωάστηκαν με πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού πρωτογενές να ALDH1A1 (ABCom Inc. Cat # ab51028), όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Τα πλακίδια πλύθηκαν με PBS και επωάστηκαν με EnVision + System-HRP Labelled Polymer Anti-Rabbit (Dako Cat # K4003) για 30 λεπτά. Οι πλάκες επωάστηκαν σε DAB (Vector υποστρώματος υπεροξειδάσης Kit # SK-4100 με νικέλιο Sol) για 10-20 λεπτά και στη συνέχεια τα πλακίδια πλύθηκαν 5 λεπτά 3 φορές με PBS. Για διπλή χρώση με CD44 (R Το CD44

hi και CD44

lo κυττάρων υποσύνολα από πληθυσμούς μεμονωμένων καρκινικών κυττάρων εμφανίζει σταθερά διαφορές στην προσκολλημένη holoclone και το σχηματισμό μαλακό άγαρ αποικία. Ένα βασικό πειραματικό μέτρο της «CSC», ωστόσο, είναι η επίδειξη της υψηλότερης ογκογόνο δυναμικό σε μοντέλα ποντικού. Έχει αποδειχθεί ότι NOD /SCID (IL2rγ

null ποντίκια είναι ευαίσθητο μοντέλο για την αξιολόγηση για άκρως ογκογονική CSC- φαινοτύπους συμπεριφοράς [16], [28]. Για να επιβεβαιωθούν παρατηρηθείσες διαφορές στη σχηματισμού αποικιών και σφαιροειδή σχηματίζουν ικανότητες των CD44

hi vs CD44

lo κύτταρα με

in vivo

ογκογένεση, ερευνήσαμε την ικανότητά τους να σχηματίζουν όγκους σε NOD /SCID (IL2rγ

null) ποντίκια.

Ο περιορισμός αραιώσεις (30.000 ? 3000? 300) των ταξινομημένο CD44

hi και CD44

lo κύτταρα από Μ-1 και Μ-2 του μέγιστου επιτρεπόμενου σφάλματος ενέθηκαν σε δεξιά και αριστερά πλευρά αντίστοιχα των NOD /ποντίκια SCID (IL2rγ

null). CD44

hi καρκινικά κύτταρα του δείγματος Μ-1 που σχηματίζεται όγκων σε ποντικούς 3/3 τόσο σε 30.000 και 3.000 εγχύθηκαν δόσεις των κυττάρων, και σε ένα από τα 3 ποντίκια που ενέθηκαν με 300 κύτταρα όγκου (Σχήμα 3 Α, Β, C). Η λανθάνουσα περίοδος των όγκων ήταν 50-90 ημέρες, 90-150 ημέρες και 150 ημέρες, για 30.000? 3000 και 300 CD44

hi κύτταρα αντιστοίχως (Σχήμα 3Ε) Έτσι, η κινητική του σχηματισμού όγκου από την άκρως ογκογονική CD44

hi κύτταρα ήταν δοσοεξαρτώμενη. Το CD44

hi τα καρκινικά κύτταρα από το δείγμα Μ 2-δημιουργούνται όγκοι σε 2 από 3 ποντίκια σε 30.000 καρκινικά κύτταρα με λανθάνουσα περίοδο 90-100 ημερών, υψηλότερη λανθάνουσα περίοδο από ό, τι παρατηρείται σε CD44

hi κύτταρα του δείγματος Μ -1 (Σχήμα 3Ε). Έτσι, αν και CD44

hi κύτταρα εμφανίζουν σταθερά υψηλότερες ογκογόνο δυναμικό από CD44

lo κύτταρα του ίδιου δείγματος, μεμονωμένα δείγματα όγκων μπορεί να εμφανιστεί διαφορετική κινητική ανάπτυξη στην αξιολόγηση των ιδιοτήτων CSC σε βιολογικές δοκιμασίες συμπεριφοράς.

(Α) και ογκογονικότητα λανθάνουσα περίοδο του CD44

hi κύτταρα (Μ-1) εγχύθηκε με μία 30000? 3000 και 300 κύτταρα. Τα ποντίκια με ένεση CD44

hi (δεξιά πλευρά) που σχηματίζονται όγκοι και CD44

lo κύτταρα δεν αποτελούν όγκου (αριστερό πλευρό). Οι αριθμοί (1/3, 2/3 ή 3/3) αντιπροσωπεύουν τον αριθμό των ζώων με όγκους /ομάδα σε συγκεκριμένο χρονικό σημείο της μέτρησης. Χρονική περίοδος των ημερών μετά την εμφύτευση του όγκου εκφράζεται κατά μήκος του άξονα Χ και ο όγκος αύξησης του όγκου εκφράζεται ως mm

3 κατά μήκος του άξονα Υ. Αξεδιάλεχτα γονική πρωτογενών όγκων εμφυτεύθηκαν με 500.000 κύτταρα /ποντικοί δεν έδειξαν καμία ανάπτυξη του όγκου ακόμη και μετά από 3 μήνες εμφύτευσης των καρκινικών κυττάρων (τα δεδομένα δεν δείχνονται) (Β) Ποντικοί που φέρουν όγκους στη δεξιά πλευρά εγχύθηκε με CD44

hi κύτταρα και χωρίς καρκινικά ανιχνεύθηκε στην αριστερή πλευρά ένεση με CD44

lo κύτταρα (C) όγκοι που σχηματίζονται από CD44

hi κύτταρα σε ποντίκια. (D) FACS ανάλυση των μεμονωμένων κυττάρων που προέρχονται από όγκους ποντικών που προέρχονται από CD44

hi κύτταρα του Μ-1 MPE δείγμα. Τα καρκινικά κύτταρα εμφανίζουν έκφραση του CD44, cMet, uPAR και CD166 δείκτες. (Ε) Ογκογονικότητα και λανθάνουσα περίοδο του CD44

hi και CD44

lo κύτταρα των δειγμάτων M-1 και M-2 σε NOD /SCID (IL2rγ

null) ποντίκια.

Η

Αξίζει να σημειωθεί ότι, ο CD44

lo κύτταρα είτε από πρωτογενείς πολιτισμού έκανε

δεν

όγκους μορφή στα αριστερά πλευρά των ποντικών κατά τη διάρκεια ολόκληρου του διαστήματος παρακολούθησης (Σχ. 3 Β και Ε). Επιπλέον, κάναμε επίσης

δεν παρατηρούμε το σχηματισμό όγκων με την έγχυση 5 × 10

5

αδιαχώριστα

κύτταρα, ακόμη και αν αυτός ο πληθυσμός περιείχε πιθανώς ~5-10% (ή 25,000- 50.000) CD44

hi κύτταρα. Αυτή η ενδιαφέρουσα παρατήρηση υποδηλώνει ότι το CD44

hi κύτταρα μπορεί να εκτίθενται σε ανασταλτική επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου από τα κύτταρα που έχουν χαμηλότερη έκφραση CD44 επιφάνειας ένταση στον ίδιο πληθυσμό όγκου.

Για να ελέγξετε αν εμφυτευτεί CD44

γεια κύτταρα συνέβαλαν στην ετερογενή όγκους (που υποδηλώνουν πολυδύναμα διαφοροποίησης), εμφυτευμένων όγκων που παράγονται από CD44

hi από κύτταρα Μ-1 εξαιρέθηκαν, πέψη, και αναλύσεις δείκτη επιφανείας κυττάρου διεξήχθη με FACS επί εναιωρήματα μονών κυττάρων. Τα κύτταρα όγκου παρέμειναν πολύ θετικά για το δείκτη CD44, με 98,2% των κυττάρων χρωματίζονται θετικά, αν και η CD44-MFI ήταν ακόμη υψηλότερες από τις αρχικά εμφυτευμένα κύτταρα. Ετερογένεια μεταξύ των κυττάρων αποδεικνύεται από την μεταβλητή έκφραση των άλλων συνήθως συνδέονται βιοδείκτες CSC (Εικόνα 3D), [cMet (40,4%), uPAR (47,6%) και CD166 (27,4%)]. Κύτταρα που φέρουν αυτούς τους δείκτες είχαν επίσης εντοπιστεί παλαιότερα στον πρωτογενή δείγματα MPE biospecimen, σε διάφορα κλάσματα [5].