Αφηρημένο

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η κύρια αιτία θανάτου μεταξύ των γυναικολογικών καρκίνων και είναι η πέμπτη κύρια αιτία όλων των σχετιζόμενων με τον καρκίνο θανάτων μεταξύ των γυναικών. Η ανάπτυξη νέων μοριακών στόχων είναι επομένως σημαντική για πολλούς ασθενείς. Πρόσφατα, η SRY συγγενή παράγοντα μεταγραφής SOX2 έχει αναφερθεί ευρέως ότι εμπλέκεται σε πολλαπλές παθοφυσιολογικές νοσήματα, συμπεριλαμβανομένης της συντήρησης των χαρακτηριστικών των βλαστικών κυττάρων και την καρκινογένεση. Μέχρι τώρα, SOX2 έχει δειχθεί κυρίως να προωθήσει την ανάπτυξη του καρκίνου, αν και ανασταλτικές ρόλους στον καρκίνο έχουν επίσης αναφερθεί. Ωστόσο, ο ρόλος του SOX2 στον καρκίνο των ωοθηκών είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστη. Στην παρούσα μελέτη, ανιχνεύσαμε την έκφραση της SOX2 σε 64 ανθρώπινα ορώδες ωοθηκικό καρκίνωμα (SOC) σε ιστούς και σε συνδυασμό αντίστοιχη μεταστατικό δείγματα χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση του SOX2 σε πρωτογενείς όγκους είναι πολύ μικρότερη από αυτή των αντίστοιχων μεταστατικές αλλοιώσεις. Βρήκαμε επίσης ότι SOX2 υπερέκφραση προωθεί τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή, ενώ αναστέλλει τις ικανότητες προσκόλλησης των κυττάρων SOC. Τέλος, βρήκαμε ότι SOX2 στοχεύει Src κινάση, μια κινάση τυροσίνης μη υποδοχέα που ρυθμίζει τη μετανάστευση των κυττάρων, η εισβολή και η προσκόλληση στα κύτταρα SOC. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η Src κινάση είναι ένα βασικό μόριο στο SOX2 με τη μεσολάβηση της μετανάστευσης και της εισβολής των κυττάρων SOC

Παράθεση:. Wang Χ, Ji Χ, Chen J, Yan D, Zhang Ζ, Wang Q, et al. (2014) SOX2 Ενισχύει την Μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου των ωοθηκών κύτταρα μέσω της Src κινάσης. PLoS ONE 9 (6): e99594. doi: 10.1371 /journal.pone.0099594

Επιμέλεια: Λουκία R. Languino, Πανεπιστήμιο Τόμας Τζέφερσον, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 9 Φεβρουαρίου 2014? Αποδεκτές: 15 Μάη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 17 του Ιουνίου 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC Νο 81272883, Αρ 81020108027 και Νο 81172478). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ωοθηκών επιθηλιακό καρκίνο των λογαριασμών για το 80-90% όλων των καρκίνων των ωοθηκών και είναι η κύρια αιτία θανάτου μεταξύ όλων των γυναικολογικών κακοηθειών [1]. Λόγω της έλλειψης των πρώιμων συμπτωμάτων, καρκίνωμα των ωοθηκών διαγιγνώσκεται συνήθως σε προχωρημένο μεταστατικό στάδιο. Διαδεδομένες μεταστάσεις είναι οι κύριες αιτίες για την κακή πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών. Αν και η επιβίωση έχει αυξηθεί ελαφρώς κατά τη διάρκεια των τελευταίων 25 ετών, τα ποσοστά πενταετούς επιβίωσης παραμένει κάτω από το 50% [1]. Ως εκ τούτου, μελετώντας των μεταστατικών μηχανισμών του καρκίνου των ωοθηκών έχει μια εστίαση σε όλο τον κόσμο.

SOX2, μέλος του SRY που σχετίζονται με υψηλή κινητικότητα οικογενειακό πλαίσιο ομάδας, αρχικά βρέθηκε να διατηρηθεί η πλειοδυναμία εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων [2] . Πιο πρόσφατα, SOX2 δείχθηκε ότι εμπλέκεται σε μια σειρά από κακοηθειών. Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι SOX2 προάγει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση, εισβολή και μετάσταση όγκου σε αρκετούς τύπους όγκων όπως γλοιοβλαστώματα [3], ορθοκολικό καρκίνο [4], ο καρκίνος του προστάτη [5], του καρκίνου του μαστού [6], [7] και οστεοσαρκώματα [8]. Επιπλέον, τα υψηλά επίπεδα έκφρασης του SOX2 συσχετίζονται με την εξέλιξη του όγκου ή κακή πρόγνωση των πολλαπλών καρκίνων. Σε αντίθεση, ο όγκος-κατασταλτικός ρόλος του SOX2 αναφέρθηκε επίσης στο γαστρικό καρκίνο [9], και καρκίνο πλακωδών κυττάρων του πνεύμονα [10].

Πρόσφατα, αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι η έκφραση SOX2 αυξάνεται σημαντικά στον καρκίνο των ωοθηκών ιστούς σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς ωοθηκών χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία [11], [12]. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε επίσης ότι η υπερέκφραση SOX2 είναι κακό προγνωστικό παράγοντα για τον καρκίνο των ωοθηκών [13], [14]. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι SOX2 θα μπορούσε να δράσει ως ένα γονίδιο ογκοπροάγουσες στον καρκίνο των ωοθηκών. Ωστόσο, οι λειτουργικές τους ρόλους και τις ακριβείς μηχανισμοί είναι ακόμα ασαφείς στον καρκίνο των ωοθηκών. Για να διευκρινιστεί ο ρόλος και η υποκείμενη μηχανισμούς SOX2 σε επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών, εξετάσαμε την έκφραση του SOX2 σε ορώδες καρκίνωμα ωοθηκών (SOC) και συμφωνημένα μεταστατικούς ιστούς, καθώς και σε κυτταρικές σειρές SOC. Επιπλέον, αναλύσαμε την επίδραση του γονιδίου SOX2 στον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την προσκόλληση των ικανοτήτων των κυττάρων SOC.

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα Ανθρωπίνων SOC και κλινικές πληροφορίες

SOC πρωτοβάθμιας και συμφωνημένα μεταστατικούς ιστούς (επίπλουν) ελήφθησαν από το Τμήμα Παθολογίας στο Νοσοκομείο οι πρώτοι άνθρωποι της Σαγκάης. Η χρήση των δειγμάτων εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ανθρώπου Διερεύνηση Νοσοκομείο τους πρώτους ανθρώπους της Συνδεδεμένων Shanghai Jiao Tong University. Όλα αυτά τα δείγματα ελήφθησαν με έγγραφη ενημερωμένη συγκατάθεση. Τα συγκεκριμένα δείγματα χρησιμοποιήθηκαν στην παρούσα μελέτη έχουν περιγραφεί σε προηγούμενες δημοσίευση [15]. Συνολικά 64 ορώδες κυσταδενοκαρκινώματος με επίπλουν μετάσταση (στάδιο ΙΙΙ) μελετήθηκαν. Η ηλικία των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών κυμάνθηκε από 34 να 81 έτη (διάμεση τιμή 61.2). Υπάρχουν 55 περιπτώσεις με την εμμηνόπαυση. Οι φορμαλδεΰδη σταθερό και έχει εμπεδωθεί με παραφίνη δείγματα ιστών από 64 περιπτώσεις SOC συλλέχθηκαν από τον Ιανουάριο του 2003 και τον Δεκέμβριο του 2010. Οι ασθενείς με προηγούμενη ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία αποκλείστηκαν. Παθολογικές διαγνώσεις των παραπάνω ωοθηκών βλάβες έγιναν από δύο γυναικολογικές παθολόγους χρησιμοποιώντας την ταξινόμηση του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας.

Η ανοσοϊστοχημική (IHC) χρώση και αξιολόγηση

ανάλυση IHC για την έκφραση της πρωτεΐνης SOX2 διεξήχθη όπως προηγουμένως περιγραφεί. Εν συντομία, η έκφραση SOX2 ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ένα αντι-ανθρώπινο μονοκλωνικό SOX2 κουνελιού (Cell Signal Technology, Danvers, ΜΑ, USA). Οι τομές επωάστηκαν με αντι-SOX2 (1:100 αραίωση) σε θάλαμο υγρασίας για 2 ώρες που ακολουθείται από μια 60-λεπτη επώαση με ένα βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα. Το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων και η ένταση της χρώσης σε αυτές τις διαφάνειες αξιολογήθηκαν με τυφλό τρόπο. Θετικά κύτταρα υποδεικνύεται από την παρουσία του καφέ χρώση τόσο στον πυρήνα και στο κυτταρόπλασμα. αποτελέσματα IHC εκτιμήθηκαν κάτω από ένα οπτικό μικροσκόπιο και βαθμολογήθηκαν ως ακολούθως: 0 & lt? 5% θετικά κύτταρα? Ιανουάριος 5 έως 25% θετικά κύτταρα? 2 26-75% θετικά κύτταρα? και 3 & gt? 76% θετικά κύτταρα. Stain ένταση βαθμολογήθηκε ως εξής: 0, χωρίς χρώση? 1, αχνό κίτρινο? 2, καφέ-κίτρινο? και 3, σκούρο καφέ. Το επίπεδο έκφρασης (συν τις δύο βαθμολογίες) ταξινομήθηκε ως: – (0), + (1-2), ++ (3-4), και +++ (5-6). Παρτιτούρες ≥3 ορίστηκαν ως έκφραση υψηλού επιπέδου και τα αποτελέσματα & lt? 3 ορίστηκαν ως έκφραση χαμηλού επιπέδου. Μεμονωμένα IHC βαθμολογίες για κάθε περίπτωση χρησιμοποιήθηκαν για στατιστική ανάλυση. Όλες οι διαφάνειες IHC εξετάστηκαν ανεξάρτητα από δύο ερευνητές.

Οι κυτταρικές σειρές και κυτταρικής καλλιέργειας

Ο καρκίνος των ωοθηκών κυτταρικές σειρές Hey, HO8910 και HO8910-μ.μ. λήφθηκαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) και καλλιεργήθηκαν με βάση τις κατευθυντήριες γραμμές του αποθετηρίου. Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε μέσο Dulbecco τροποποιημένο Eagle (ϋΜΕΜ) /F12 συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS). Οι κυτταρικές σειρές MCV152 και Moody ευγενικά από τον Dr Wenxin Zheng (πανεπιστήμιο της Αριζόνα, Tucson, AZ, USA). κύτταρα SKOV3 αγοράστηκαν από την Ένωση Ιατρικό Κολέγιο του Πεκίνου (Πεκίνο, Κίνα). Οι τρεις SOC κυτταρικές σειρές και ΗΕΚ-293Τ καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% FBS, 100 U /ml πενικιλλίνη, 100 μg /ml στρεπτομυκίνη, πυροσταφυλικό νάτριο και L-γλουταμίνη στους 37 ° C με 5% CO2.

εκχύλιση RNA και ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Το συνολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad. CA. USA). Δωρεάν DNA (cDNA) συντέθηκε με τον Πρωθυπουργό-Script RT Κιτ αντιδραστηρίων (Takara, Ιαπωνία). Fold επαγωγές υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο 2- (ddCt) χρησιμοποιώντας ΟΑΡϋΗ ως ένα γονίδιο εσωτερικού ελέγχου. Real-time PCR χρησιμοποιώντας SYBR Πρόμιγμα Εχ Taq (Takara, Ιαπωνία). Τα ζεύγη εκκινητών γονιδίου-ειδική ήταν ως εξής: SOX2 (F) 5′-CGG CAA CCA ΟΑΑ ΑΑΑ CAG C-3 ‘, SOX2 (R) 5′-TCT CCG TCT CCG ACA ΑΑΑ GT-3′? GAPDH (F) 5’-GGT GGT CTC CTC TGA CTT CAA CA-3 ‘, GAPDH (R) 5′-ΟΤΤ GCT GTA GCC ΑΑΑ TTC GTT GT-3’.

Η παροδική επιμόλυνση SOX2 μικρά παρεμβαλλόμενα RNA (siRNA) και Src siRNA

Ho8910-μ.μ. και Skov3 κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκες έξι φρεατίων σε πυκνότητα 4 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο. Μετά από 24 ώρες καλλιέργειας, το μέσο αντικαταστάθηκε με Ορίί-ΜΕΜ (Invitrogen) απουσία αντιβιοτικών και καλλιεργούνται. siRNA που αντιστοιχεί στο γονίδιο σχεδιάστηκε και συντέθηκε με Genepharma (Σαγκάη, Κίνα). Συνολικά 100 pmol του siRNA διαμολύνθηκε χρησιμοποιώντας 5 μL λιποφεκταμίνης αντιδραστηρίου RNAiMax (Invitrogen). Μετά από επώαση για άλλες 48 ώρες, τα κατεργασμένα κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνηθεί το αποτέλεσμα της εξάντλησης γονιδίου χρησιμοποιώντας ανάλυση Western blot ή προσδιορισμούς transwell και πρόσφυση. Οι αλληλουχίες siRNA κατά SOX2 περιλαμβάνονται: (1) 5′-CUGCAGUACAACUCCAUGATT-3 ‘? (2) 5’-GGACAUGAUCAGCAUGUAUTT-3 ‘? (3) 5’-CCA UGG Ουυ CGG UGG UCAA ΤΤ-3 ‘. Οι αλληλουχίες siRNA κατά Src περιλαμβάνονται: (1) 5’-CAG GAG GAG GCU UGG υΑυ UTT-3 ‘? (2) 5’-GCC UCA ACG UGA AGC ACU ΑΤΤ-3 ‘? (3) 5’-CUC GGC UCA UUG ΑΑΟ ACA ΑΤΤ-3 ‘

πλασμίδιο κατασκευή

Η ακολουθία SOX2 ORF ενισχύθηκε από το φορέα SOX2, η οποία παράγεται από τη Σαγκάη R & amp?. S βιοτεχνολογία Co Ltd (Σαγκάη, Κίνα). Η ακεραιότητα του cDNA επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση. Η αλληλουχία SOX2 ORF εισήχθη εντός της θέσεως EcoRI-BamHI του πλασμιδίου pWPXL και συνδέθηκε εντός του φορέα (ένα δώρο από τον Dr. Didier Trono). Η αλληλουχία εκκινητή του SOX2 περιλαμβάνονται: SOX2 (F) 5′- CGC GGA TCC ATG TAC AAC ATG ATG GAG ACG GAG C-3 ‘? SOX2 (R) 5’-CCG GAA TTC ΤΤΑ GAT ΤΕΕ CGT CGA CTC ACA TG-3 ‘.

παραγωγή Lentivirus και μεταγωγή των κυττάρων

Η συσκευασία πλασμίδιο psPAX2 και το πλασμίδιο φάκελο pMD2.G ήταν δώρα από τον Dr. Τ Didier Trono. διάνυσμα pWPXL-SOX2 συνεπιμολύνθηκε με psPAX2 και pMD2.G σε κύτταρα ΗΕΚ293Τ χρησιμοποιώντας Lipofectamine2000 (Invitrogen). Οι ιοί συλλέχθηκαν 48 ώρες μετά την επιμόλυνση και προσδιορίστηκαν οι ιικοί τίτλοι. Ho8910 κύτταρα μολύνθηκαν με 1 χ 10

6 ανασυνδυασμένο φακοϊό μονάδες μεταγωγής με την παρουσία 6 μg /mL πολυβρένιο (Sigma, ΜΟ., USA).

κύτταρον εξωκυττάρια μήτρα (ECM) δοκιμασία προσκόλλησης

Η ικανότητα των κυττάρων καρκινώματος των ωοθηκών να προσκολλώνται σε συστατικά ECM ποσοτικοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. πλάκες 96-φρεατίων επικαλύφθηκαν με 1 mg /ml matrigel (BD, ΗΠΑ), ινονεκτίνη 10 μg /ml πλάσματος (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA), 10 μg /ml κολλαγόνου τύπου Ι (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA) , 10 μg /ml λαμινίνης (Millipore, Billerica, μΑ, USA), ή με 100 μg /ml αλβουμίνη βόειου ορού (BSA? Sigma, USA) και επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Στη συνέχεια, μη ειδικές θέσεις σύνδεσης αποκλείστηκαν με 1% BSA σε φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (PBS) για 4 ώρες στους 37 ° C ή όλη τη νύκτα στους 4 ° C, στη συνέχεια οι πλάκες πλύθηκαν με PBS δύο φορές. Τα κύτταρα (4.0 × 10

4cells /100 μΙ) αραιώνεται με ϋΜΕΜ προστέθηκαν στις επικαλυμμένες πλάκες 96-φρεατίων και επωάστηκαν στους 37 ° C για 30~60 minitus σε επωαστήρα CO2. Τα μη προσκολλημένα κύτταρα απομακρύνθηκαν με πλύση με PBS. Επισυνάπτεται κύτταρα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κύτταρο Μετρώντας Kit-8 (CCK-8, Dojindo, Kumamoto, Japan) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, και η οπτική πυκνότητα μετρήθηκε στα 450 nm. Αυτά τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκε δύο φορές.

προσδιορισμούς πολλαπλασιασμού κυττάρων

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε μια πυκνότητα 2000 κύτταρα ανά φρεάτιο σε πλάκες 96-φρεατίων και επωάζονται. Ένα κλάσμα 10 μΐ του CCK-8 προστέθηκαν στα φρεάτια και επωάστηκαν για 2 ώρες. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm για τον υπολογισμό των αριθμών των βιώσιμων κυττάρων σε κάθε φρεάτιο. Κάθε μέτρηση διεξήχθη εις τριπλούν και τα πειράματα επαναλήφθηκαν δύο φορές.

Για δοκιμασίες σχηματισμού αποικίας, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες έξι φρεατίων σε πυκνότητα 200 κύτταρα ανά φρεάτιο και καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C για δύο εβδομάδες. Στο τέλος της επώασης, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 100% μεθανόλη και χρωματίσθηκαν με 0,1% (w /v) κρυσταλλικό ιώδες. Megascopic κυτταρικές αποικίες μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας Image-Pro Plus 5.0 λογισμικό (Media Cybernetics, Bethesda, MD, USA). Κάθε μέτρηση πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν και τα πειράματα που διεξάγονται κάθε τουλάχιστον τρεις φορές

δοκιμασίες

Μετανάστευση και την εισβολή

δοκιμασία μετανάστευσης κυττάρων:. 4 × 10

4 κύτταρα ανεστάλησαν σε 200 μl ελεύθερο ορού μέσο ϋΜΕΜ και σπάρθηκαν σε ανώτερο θάλαμο του κάθε ενθέματος. Στη συνέχεια, 500 μι ϋΜΕΜ που περιέχει 10% FBS προστέθηκε σε πλάκα 24 φρεατίων. Μετά από επώαση στους 37 ° C (Ho8910: 12-14 h? Ho8910-pm: 12-14 h? Skov3: 12-14 h), τα κύτταρα που μετανάστευσαν μονιμοποιήθηκαν και βάφτηκαν για 30 λεπτά σε ένα διάλυμα 0,1% κρυσταλλικό ιώδες σε PBS

κυτταρική ανάλυση εισβολή:. θάλαμοι ήταν ομοιόμορφα επικαλυμμένα με 60 μλ Matrigel αραιώνονται με DMEM σε ένα ορισμένο ποσοστό και επωάστηκαν στους 37 ° C για 2-4 ώρες. Στη συνέχεια, 4 × 10

4 κύτταρα εναιωρήθηκαν σε 200 μL DMEM και εμβολιάστηκαν σε άνω θαλάμους, και 500 μL DMEM που περιείχε 10% FBS προστέθηκε στον κάτω θάλαμο. Μετά από επώαση στους 37 ° C (Ho8910:24-26 h? Ho8910-pm: 24-26 h? Skov3 24-26 h)., Τα κύτταρα καθηλώθηκαν και χρωματίστηκαν

ανάλυση κηλίδος Western

Τα επεξεργασμένα κύτταρα λύθηκαν με δοκιμασία ραδιοανοσοκατακρήμνισης (RIPA) ρυθμιστικό διάλυμα (50 mM Tris-HCl ρΗ 7,4, 150 mM NaCl, 1% ΝΡ-40, 0.5% δεοξυχολικό οξύ, νάτριο, 0,1% SDS). Τα κυτταρολύματα διαχωρίστηκαν με 7.5 έως 12.5% ​​SDS-PAGE, μεταφέρθηκαν σε μια μεμβράνη νιτροκυτταρίνης (Bio-Rad, USA), και αποκλείστηκαν με PBS που περιείχε Tween-20 και το γάλα 5% άπαχο για 1 ώρα. Οι πρωτεΐνες του ενδιαφέροντος επωάστηκαν με αντίστοιχη πρωτοταγή αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Αυτά στη συνέχεια πλύθηκαν τρεις φορές με ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης (0.1% Tween-20 σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris) και επωάστηκαν με το κατάλληλο δευτερογενές αντίσωμα σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Το σύμπλοκο αντισώματος ανιχνεύθηκε με τη χρήση ενισχυμένης χημειοφωταύγειας Kit (Pierce, Rockford, 1 L. USA). Η ακόλουθη πρωτογενή αντισώματα SOX2, FAK, φωσφο-ΡΑΚ (Y397), Src, φωσφο-Src (Y416), p130cas, φωσφο-p130cas, Erk1 /2, φωσφο-Erk1 /2, ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9, αγοράστηκαν από Cell Technology Signal (Danvers, ΜΑ, USA).

Στατιστική Ανάλυση

Όλα τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με την ακριβή δοκιμή του Fisher στον Πίνακα 1. Για την ανάλυση επιβίωσης, καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier κατασκευάστηκαν και οι διαφορές μεταξύ τους ελέγχθηκαν με το τεστ log-rank. Σε αντίθετη περίπτωση, οι διαφορές μεταξύ των ομάδων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας t-test του Student (two-tailed).

σ

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Η

Αποτελέσματα

Η έκφραση της SOX2 σε πρωτοπαθείς όγκους και τις αντίστοιχες μεταστατικές βλάβες σε SOC

ωοθηκών. δείγματα καρκινικού ιστού από 64 ασθενείς χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη, και η έκφραση του SOX2 αναλύθηκε σε αυτούς τους ιστούς χρησιμοποιώντας χρώση ανοσοϊστοχημική (IHC). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, 21 από 64 (32,8%) του πρωτογενούς ιστών βλάβης είχαν σχετικά χαμηλά επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης SOX2, ενώ 15 από τα 64 (23,4%) των μεταστατικών ιστών έδειξαν χαμηλή έκφραση πρωτεΐνης SOX2. Ωστόσο, 43 από 64 (67,2%) του πρωτογενούς ιστών αλλοίωση είχε σχετικά υψηλά επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης SOX2, ενώ 49 από 64 (76,6%) του μεταστατικού ιστών έδειξαν υψηλά επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης SOX2. Αξίζει να σημειωθεί ότι, τα επίπεδα έκφρασης του SOX2 ήταν υψηλότερα σε μεταστατικές αλλοιώσεις από εκείνες στις ζεύγη πρωτογενείς ιστούς όγκου τους (Σχήμα 1Α και το Σχήμα 1 Β).

(Α), (Β) αντιπροσωπεύουν δύο παραδείγματα 64 περιπτώσεις. Μεταξύ Α, η επάνω αριστερή αντιπροσωπεύει πρωτογενούς ιστού καρκίνου? Το κάτω αριστερά απεικονίζει τις αντίστοιχες μεταστάσεις (επίπλουν). Δεξιά, μεγέθυνση των ιστών σε μαύρο πλαίσιο. Η arragement του Β είναι παρόμοια με Α (Γ), (Δ) κατά Kaplan-Meier καμπύλες επιβίωσης ανάλυση δείχνει υποκείμενο με επίπεδο έκφρασης υψηλό SOX2 έχουν μεγαλύτερο κίνδυνο θανάτου. Ωοθηκών καρκινικούς ιστούς με έκφραση SOX2 (score≥3) ταξινομήθηκαν ως SOX2 υψηλό επίπεδο. Μεταξύ C, οι ασθενείς με SOX2 υψηλό επίπεδο (n = 43) είχαν σημαντικά χειρότερη επιβίωση από αυτούς με SOX2 χαμηλό επίπεδο (n = 21) σε SOC πρωτογενούς ιστού (

σ

= 0,0358, δοκιμασία log-rank). Μεταξύ D, ασθενείς με SOX2 υψηλό επίπεδο (n = 49) είχαν σημαντικά χειρότερη επιβίωση από αυτούς με SOX2 χαμηλό επίπεδο (n = 15) σε SOC μεταστατικό ιστό (

σ

= 0,0029, δοκιμασία log-rank).

Οι συσχετισμοί μεταξύ της έκφρασης SOX2 και κλινικών παθολογικών παραγόντων στην ανθρώπινη SOC ερευνήθηκαν περαιτέρω. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι η έκφραση SOX2 συσχετίστηκε σημαντικά με ιστολογική βαθμό. Συγκεκριμένα, η έκφραση SOX2 ήταν σχετικά υψηλή, σε λιγότερο διαφοροποιημένη όγκους (Πίνακας 1). Η θετική χρώση SOX2 αυξήθηκε σταδιακά από G2 σε βαθμό G3, υποδεικνύοντας ότι η πρωτεΐνη SOX2 αυξήθηκε κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του SOC. Διαφορετικά, δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης SOX2 και τα επίπεδα CA125 την ηλικία ή τον ορό.

Η συσχέτιση της έκφρασης SOX2 με το OS (συνολική επιβίωση) διάρκειες και επιτόκια σε διαφορετικές μήνες μελετήθηκε. Οι ασθενείς με έκφραση SOX2 υψηλού επιπέδου είχαν μικρότερη διάρκεια OS από αυτούς με έκφραση SOX2 χαμηλού επιπέδου σε ιστό πρωτοπαθούς όγκου και των μεταστατικών ιστών, αντίστοιχα (Σχήμα 1C και 1D). Μαζί, αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η έκφραση της SOX2 μπορούσε να προβλέψει κακή πρόγνωση σε ανθρώπινο καρκίνωμα των ωοθηκών.

SOX2 αυξάνει τις μεταναστευτικές και μεταστατικό δυναμικό και μειώνει την ικανότητα προσκόλλησης των κυττάρων SOC

Για να επιλέξετε κατάλληλες κυτταρικές σειρές να μελετηθεί η βιολογική λειτουργία του SOX2, αναλύσαμε πρώτα τα επίπεδα πρωτεΐνης της SOX2 σε έξι κυτταρικές γραμμές όγκου ωοθηκών. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα πρωτεΐνης του SOX2 είχαν σημαντικά ποικίλει σε διαφορετικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α και Σχήμα 2Β, η έκφραση του SOX2 ήταν σχετικά αυξημένο σε Skov3 και άκρως μεταστατική κυτταρική γραμμή Ho8910-pm σύγκριση με τη μητρική κυτταρική σειρά καρκίνου των ωοθηκών Ho8910. Η έκφραση της SOX2 ήταν σχετικά χαμηλή στις καλοήθεις ωοθηκών ορώδες κυσταδένωμα eternalized κυτταρική σειρά MCV152 και την αθάνατη ανθρώπινη ωοθηκών επιθηλιακής κυτταρικής σειράς Moody.

Ημι-ποσοτική ανάλυση RT-PCR του SOX2 σε έξι κυτταρικές σειρές όγκων των ωοθηκών. (Β) ανάλυση κηλίδας Western της έκφρασης πρωτείνης SOX2 σε αντίστοιχες κυτταρικές σειρές. GAPDH χρησιμοποιήθηκε για ομαλοποίηση. (C) Ημι-ποσοτική ανάλυση RT-PCR και ανάλυση Western blot των SOX2 σε Ho8910-SOX2, Ho8910-μμ-siSOX2, κύτταρα Skov3-siSOX2. GAPDH χρησιμοποιήθηκε για την κανονικοποίηση.

Η

Για να διερευνηθεί περαιτέρω η λειτουργία της SOX2 στα κύτταρα SOC, το γονίδιο SOX2 ήταν υπερεκφράζεται από λεντοϊού μόλυνση στο Ho8910, η οποία επιβεβαιώθηκε με πραγματικού χρόνου PCR και κηλίδωση Western (Σχήμα 2C). Στη συνέχεια, προσδιορίσαμε την επίδραση της υπερέκφρασης SOX2 επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων SOC. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η υπερέκφραση του γονιδίου SOX2 θα μπορούσε να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων SOC (Εικόνα 3Α και Σχήμα 3Β). Επιπλέον, εξετάσαμε την επίδραση της υπερέκφρασης SOX2 στις μεταναστευτικές, επεμβατικές και κόλλα ικανότητες των κυττάρων SOC χρησιμοποιώντας δοκιμασίες transwell και προσδιορισμούς κυτταρικής προσκόλλησης-ECM. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η υπερέκφραση της πρωτεΐνης SOX2 θα μπορούσε να προωθήσει σημαντικά την μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων SOC (Εικόνα 4Α), ενώ μειώνεται η προσκόλληση των κυττάρων σε SOC Matrigel, ινονεκτίνη, κολλαγόνο τύπου Ι και λαμινίνη (Σχήμα 5Α).

Σταθερή διαμόλυνση του πλασμιδίου SOX2 προάγουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και το σχηματισμό του κλώνου (Α) δοκιμασίες CCK8 σε HO8910. δοκιμασίες (Β) σχηματισμός Clone σε HO8910. Παροδική επιμόλυνση SOX2 siRNA αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και δοκιμασίες CCK8 σχηματισμός κλώνος (C) σε HO8910-pm. δοκιμασίες (D) Κλώνος σχηματισμό σε HO8910-μ.μ.. (Ε) δοκιμασίες CCK8 σε Skov3. δοκιμασίες (F) σχηματισμό Κλώνος στο Skov3.

Η

(Α) Σταθερή επιμόλυνση του πλασμιδίου SOX2 σε HO8910. Top, μεταξύ φρεατίων δοκιμασίες μετανάστευσης? Bottom, φρεατίων δοκιμασίες εισβολή. (Β) Παροδική επιμόλυνση SOX2 siRNA σε HO8910-μ.μ.. Top, μεταξύ φρεατίων δοκιμασίες μετανάστευσης? Bottom, φρεατίων δοκιμασίες εισβολή. (Γ) Παροδική επιμόλυνση SOX2 siRNA σε Skov3. Top, μεταξύ φρεατίων δοκιμασίες μετανάστευσης? Bottom, φρεατίων δοκιμασίες εισβολή.

Η

(Α) Μείωση πρόσφυση μετά από σταθερή επιμόλυνση του πλασμιδίου SOX2 σε HO8910. (Β) Αύξηση πρόσφυση μετά από παροδική επιμόλυνση των SOX2 siRNA σε HO8910-μ.μ.. (Γ) την αύξηση της πρόσφυσης μετά από παροδική επιμόλυνση των SOX2 siRNA σε Skov3.

Η

Στη συνέχεια έριξε κάτω την έκφραση του γονιδίου SOX2 χρησιμοποιώντας παροδική διαμόλυνση siRNAs σε δύο κυτταρικές σειρές με σχετικά υψηλή έκφραση του SOX2, Ho8910 -pm και Skov3. Η αποτελεσματικότητα παρεμβολή επιβεβαιώθηκε με PCR πραγματικού χρόνου και κηλίδωση Western (Σχήμα 2C). Στη συνέχεια, η δράση στην εξουθένωση του SOX2 επί του πολλαπλασιασμού αυτών των κυττάρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας CCK-8 προσδιορισμούς και ποσοτικούς προσδιορισμούς σχηματισμού κλώνου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η διάσπαση της πρωτεΐνης SOX2 μείωσε τον πολλαπλασιασμό αυτών των κυττάρων SOC (Εικόνα 3C-3F). Επιπλέον, βρήκαμε ότι knockdown έκφρασης πρωτεΐνης SOX2 ανέστειλαν τις μεταναστευτικές και επεμβατικές ικανότητες των κυττάρων SOC με επικοινωνούντα δοκιμασίες (Σχήμα 4Β και Σχήμα 4C), με ταυτόχρονη προώθηση της κυτταρικής πρόσφυσης σε Matrigel, ινονεκτίνη, κολλαγόνο τύπου Ι και λαμινίνη (Σχήμα 5Β και Σχήμα 5C). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το γονίδιο SOX2 μπορεί να έχει ένα σημαντικό ρόλο στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, η μετανάστευση, εισβολή και την προσκόλληση των κυττάρων SOC.

Η υπερέκφραση του SOX2 οδηγεί σε αυξημένη φωσφορυλίωση των πολλαπλών προ-matastatic πρωτεΐνες

Θα διερευνηθούν περαιτέρω οι μοριακοί μηχανισμοί που διέπουν SOX2 μεσολάβηση μετανάστευση των κυττάρων και τη μετάσταση των όγκων. Βρήκαμε ότι τα σταθερά υπερέκφραση του SOX2 οδήγησε σε αυξημένη φωσφορυλίωση της Src και FAK και κατάντη μορίων τους (ρ130-CAS) σε κύτταρα Ho8910 (Σχήμα 6). Επιπλέον, στοχευμένη knockdown του γονιδίου SOX2 οδήγησε σε μειωμένη φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών αυτών σε Ho8910-μ.μ. και SKOV3 κυττάρων (Σχήμα 6).

(Α) Αριστερά, Western Blot πρωτεϊνών ανάλυση έκφρασης μετά από σταθερή επιμόλυνση του πλασμιδίου SOX2 σε ho8910. Μέση, Western Blot πρωτεϊνών ανάλυση της έκφρασης μετά από παροδική επιμόλυνση των SOX2 siRNA σε HO8910-μ.μ.. Δεξιά, η δυτική έκφραση κηλίδα πρωτεϊνών ανάλυση μετά από παροδική επιμόλυνση των SOX2 siRNA σε Skov3. (Β) Η arragement του Β είναι παρόμοια με Α

Η

εξόντωση Src προάγει κυτταρική πρόσφυση και μειώνει την κυτταρική μετανάστευση και εισβολή

Τα παραπάνω αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η ενεργοποίηση της κινάσης Src μπορεί να είναι υπεύθυνη για την φωσφορυλίωση της τυροσίνης του ρ130-CAS σε κύτταρα SOC. Για να καθοριστεί εάν η δραστηριότητα κινάσης Src απαιτείται για SOX2-επαγόμενη φωσφορυλίωση της ρ130-CAS, εμείς γκρέμισε το γονίδιο Src από siRNA σε Ho8910-φορέα και τα κύτταρα Ho8910-SOX2. Η αποτελεσματικότητα παρεμβολή επιβεβαιώθηκε με κηλίδωση Western (Σχήμα 7Β). Βρήκαμε ότι knockdown έκφρασης πρωτεΐνης Src ανέστειλαν τις μεταναστευτικές και επεμβατικές ικανότητες των κυττάρων Ho8910-SOX2 σε δοκιμασίες transwell (Σχήμα 7Α), ενώ η προώθηση της κυτταρικής πρόσφυσης σε matrigel, ινονεκτίνη, κολλαγόνο τύπου Ι, αλλά όχι λαμινίνη (Σχήμα 7C). Επιπλέον, βρήκαμε ότι η φωσφορυλίωση του ρ130-CAS θα μπορούσε να εξασθενίσει σε κύτταρο Ho8910-SOX2 από knockdown του γονιδίου Src (Σχήμα 7Β). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η δραστικότητα της κινάσης Src είναι απαραίτητη για SOX2-προσκόλληση και τη μετανάστευση των κυττάρων SOC.

(Α) μετανάστευση Transwell και εισβολή δοκιμασίες. (Β) δοκιμασία πρόσφυσης Western blot έκφρασης πρωτεϊνών ανάλυση (C).

Η

Συζήτηση

SOX2 αποτελεί βασικό ρυθμιστή για τη διατήρηση της pluripotency και αυτο-ανανέωση των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων και συμβάλλει στην ο επαναπρογραμματισμός των διαφοροποιημένων σωματικών κυττάρων πίσω σε ένα πολυδύναμο κατάσταση βλαστικών κυττάρων. Πιο πρόσφατα, η ενισχυμένη έκφραση SOX2 έχει ανιχνευθεί σε αρκετές κακοήθεις όγκους που υποδηλώνει ότι η SOX2 ρυθμίζει επίσης την ογκογένεση [3] – [10]. Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι η υψηλή έκφραση του SOX2 συσχετίζεται με λεμφικού και αγγειακές εισβολή, η κακή διαφοροποίηση, και μειωμένη επιβίωση ελεύθερη νόσου [3] – [8]

Αν και η συσχέτιση της έκφρασης SOX2 με την κακή κλινική. έκβαση του καρκίνου των ωοθηκών έχει αναφερθεί [11], [12], οι λειτουργικές ρόλοι και οι μηχανισμοί σε αυτό τον όγκο ήταν λιγότερο διεξαχθεί προηγουμένως, ειδικά σε μετάσταση όγκου και προσκόλληση. Στη μελέτη μας, SOX2 υπερέκφραση προώθησε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και το σχηματισμό του κλώνου. Ωστόσο, το αποτέλεσμα δεν είναι πλήρως συνεπής με προηγούμενες αναφορές [13], [14]. Αυτό μπορεί να οφείλεται στις διαφορετικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών που χρησιμοποιείται. Πρόσφατα, έχει αναφερθεί ότι οι στόχοι SOX2 ινονηκτίνης για την προώθηση της μετανάστευσης των κυττάρων και εισβολή στον καρκίνο των ωοθηκών [14]. Στην παρούσα μελέτη, βρέθηκε ότι η κινάση Src μπορεί να σχετίζεται με SOX2 μεταβολές που προκλήθηκαν στον καρκίνο των ωοθηκών. Αυξημένη εισβολή μπορεί να σχετίζεται με την αυξημένη φωσφορυλίωση πολλαπλών προ-μεταστατικό πρωτεΐνες που επάγονται από την υπερέκφραση SOX2.

Src κινάση είναι ένας μη-υποδοχέα κινάσης τυροσίνης και είναι γνωστό ότι παίζει ουσιαστικό ρόλο σε διάφορες οδούς σηματοδότησης του πολλαπλασιασμού, μετανάστευσης , προσκόλληση, και την αγγειογένεση κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και της εξέλιξης [17] του όγκου, [18]. Src κινάση υπερεκφράζεται ή ενεργοποιείται σε πολλές συμπαγείς όγκους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού [19], του καρκίνου του προστάτη [20], καρκίνος του παχέος εντέρου [21], γαστρικού καρκίνου [22] και τον καρκίνο του παγκρέατος [23]. Επιπλέον, έχει δειχθεί ότι Src συσχετίστηκε με την έκφραση SOX2 και αυτο-ανανέωση των κυττάρων πλευρικών πληθυσμός βλαστικών-όπως σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [24]. Παρά το γεγονός ότι η μετάσταση είναι μια πολυπαραγοντική διαδικασία, εισβολή είναι ένα κρίσιμο σύνδεσμο για καρκινικά κύτταρα μετάστασης. Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι η σταθερή υπερέκφραση της SOX2 είχε ως αποτέλεσμα προφανώς αυξημένη φωσφορυλίωση της Src και αυξημένη ικανότητα εισβολής, ενώ νοκ ντάουν του γονιδίου SOX2 οδήγησε σε μειωμένο επίπεδο φωσφορυλίωση της Src και την ικανότητα εισβολής του SOC. Στη συνέχεια, η ικανότητα εισβολής ήταν επίσης μειώθηκαν μετά την νοκ ντάουν της SOX2 ή Src.

p130cas μπορεί να φωσφορυλιωθεί από Src ή ΡΑΚ κινάσες της οικογένειας. Δρα ως μόριο σκαλωσιά για τη ρύθμιση σύμπλοκα πρωτεΐνης που ελέγχουν την κυτταρική μετανάστευση και προσκόλληση, απόπτωση, κυτταρικό κύκλο, τη λειτουργία των κυττάρων διαφοροποίησης και ακόμη και προγονικών [25], [26], [27]. Στην παρούσα μελέτη διαπίστωσε επίσης ότι το επίπεδο φωσφορυλίωσης της p130cas διεπόταν από Src κινάση στις γραμμές SOC.

Ο έλεγχος της προσκόλλησης κυττάρου-μήτρας παίζει επίσης σημαντικό ρόλο στον έλεγχο της μετανάστευσης των καρκινικών κυττάρων κατά τη διάρκεια της μετάστασης [28]. Στο αρχικό στάδιο της μετάστασης όγκου, μειωμένη ικανότητα προσκόλλησης των καρκινικών κυττάρων θα προκαλέσει καρκινικών κυττάρων απόπτωση και εισβολή σε άλλες τοποθεσίες. Στη μελέτη μας, η μείωση προσκόλλησης μπορεί να είναι επίσης λόγω της αυξημένης έκφρασης των μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας (ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9) που ακολουθείται από υπερέκφραση του SOX2. Fak προώθησε το σχηματισμό του συμπλόκου Src-p130cas-Crk-Dock180 σηματοδότησης, οδηγώντας στην επιλεκτική ανύψωση του Ras ΟΤΡάσης και JNK, και οδήγησε σε αυξημένη έκφραση ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 [29]. Βρήκαμε ότι knockdown της έκφρασης του γονιδίου Src μπορεί να μειώσει την έκφραση των ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9. ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 είναι τα σημαντικά μεταλλοπρωτεϊνάσες που υποβαθμίζουν την ECM και να μειώσει την ικανότητα προσκόλλησης των κυττάρων. Μια άλλη αιτία της μείωσης της προσκόλλησης μπορεί να οφείλεται στο αυξημένο επίπεδο φωσφορυλίωσης των Src και Erk. Μια μελέτη έδειξε ότι η Src υπερέκφραση μπορεί να αναστείλει το επίπεδο έκφρασης πρωτεΐνης της ιντεγκρίνης υπομονάδας από Erk σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου [30]. Έτσι προκύπτει ότι Src υπερέκφραση μπορεί να αλλάξει την έκφραση ή τη λειτουργία της υπομονάδας ιντεγκρίνης σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Αυτό εξηγεί επίσης γιατί η υψηλή έκφραση των FN που προκαλείται από SOX2 υπερέκφραση στον καρκίνο των ωοθηκών [14], δεν οδήγησε σε βελτίωση πρόσφυσης [31], αλλά σε χαμηλότερη πρόσφυση στη μελέτη μας. Στη μελέτη μας SOX2 διαμορφωμένο προσκόλληση SOC να matrigel, ινονεκτίνη, κολλαγόνο τύπου Ι, μη συμπεριλαμβανομένων λαμινίνη. Ειδικοί μηχανισμοί χρειάζεται να μελετηθεί περαιτέρω.

Στην παρούσα μελέτη, βρήκαμε ότι ένας από τους μηχανισμούς με τους οποίους SOX2 προωθείται μετανάστευση SOC κυττάρων και τη μετάσταση του όγκου είναι μέσω της φωσφορυλίωσης και ενεργοποίησης p130cas και υψηλή έκφραση του ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 . Έχει καλά τεκμηριωμένο ότι οι κινάσες Src οικογένειας είναι οι μεγάλες κινάσες που προωθούν τη φωσφορυλίωση τυροσίνης του p130cas και αυξάνουν την έκφραση των ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 [26], [32], [33]. Μαζί, βρήκαμε ότι φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση SOX2 επαγόμενης εξαρτάται εν μέρει από την ενεργοποίηση των Src κινάσης.

Εν κατακλείδι, τα ευρήματά μας πρότεινε ότι η SOX2 παίζει κεντρικό ρόλο στη μετανάστευση SOC κυττάρων και τη μετάσταση του όγκου, και ο src κινάση καταρράκτη σηματοδότησης μπορεί να είναι ένα βασικό συστατικό της προ-μεταστατικό δίκτυο σηματοδότησης SOX2 στα κύτταρα SOC.

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες στον καθηγητή Didier Trono (Ομοσπονδιακή Πολυτεχνική Σχολή της Λωζάννης, 1015 Λωζάνη, Ελβετία) για την παροχή των πλασμιδίων pWPXL, psPAX2 και pMD2.G. Μπορούμε επίσης να ευχαριστήσω Γιατρός Deshui Jia (Σαγκάη Ινστιτούτο Καρκίνου, Σαγκάη, Κίνα) για τη μεγάλη βοήθειά του στην επεξεργασία της γλώσσας.