PLoS One: Fluorescence In Situ υβριδοποίηση και ανοσοϊστοχημεία όπως διαγνωστικές μέθοδοι για ALK Θετική μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα Patients


Αφηρημένο

Ιστορικό

κινάσης αναπλαστικού λεμφώματος (ALK) θετικότητας αντιπροσωπεύει μια νέα μοριακή στόχου σε ένα υποσύνολο των μη μικρών κυττάρων καρκίνοι του πνεύμονα (NSCLC). Ερευνούμε φθορισμού

in situ

υβριδισμός (FISH) και ανοσοϊστοχημεία (IHC) όπως διαγνωστικές μέθοδοι για ALK θετικούς ασθενείς και να περιγράψουν τον επιπολασμό και των αποτελεσμάτων της σε έναν πληθυσμό ασθενών με NSCLC.

Μέθοδοι

ασθενών με NSCLC προηγουμένως ελέγχονται για υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) στο ίδρυμά μας. ALK θετικούς ασθενείς ταυτοποιήθηκαν με FISH και την αξία των IHC (D5F3) εξερευνήθηκε.

Αποτελέσματα

ενενήντα εννέα ασθενείς εντοπίστηκαν. Η διάμεση ηλικία ήταν 61,5 χρόνια (εύρος 35-83), όλα ήταν Καυκάσιους, ογδόντα τοις εκατό ήταν αδενοκαρκινώματα, πενήντα ένα τοις εκατό ήταν άνδρες και τριάντα οκτώ τοις εκατό ήταν καπνιστές. Επτά (7,1%) ασθενείς ήταν ALK θετικά με FISH, δεκατρείς (13,1%) ήταν EGFR μεταλλαγμένα, και 65 (65,6%) ήταν αρνητικά /άγριου τύπου (WT) και για τις δύο ALK και EGFR. ALK θετικότητα και EGFR μεταλλάξεις ήταν αλληλοαναιρούνται. ALK θετικούς ασθενείς τείνουν να είναι νεότεροι από ασθενείς EGFR μεταλλαχθεί ή κβ. ALK θετικούς ασθενείς ήταν κυρίως μη καπνιστές (71,4%) και το αδενοκαρκίνωμα (71,4%). ALK θετική και EGFR μεταλλαγμένο ασθενείς έχουν καλύτερα αποτελέσματα από ό, τι αρνητικό /WT. Όλοι οι ασθενείς με όγκους αρνητικούς ALK FISH ήταν αρνητικά για ALK IHC. Από 6 ασθενείς θετικοί για ALK FISH με περισσότερο διαθέσιμο ιστού, 5 ήταν θετικοί για ALK IHC και 1 αρνητική.

Συμπεράσματα

ALK θετικούς ασθενείς αντιπροσωπεύουν το 7,1% του πληθυσμού των επιλεγμένων NSCLC. ALK θετικούς ασθενείς έχουν διαφορετικά κλινικά χαρακτηριστικά και ένα καλύτερο αποτέλεσμα από ό, τι του EGFR WT και ALK αρνητικούς ασθενείς. IHC είναι μια πολλά υποσχόμενη μέθοδος για την ανίχνευση ALK θετικό NSCLC ασθενείς

Παράθεση:. Martinez P, Hernández-Losa J, M

ένα Ángeles Montero, Cedres S, Castellví J, Martinez-Marti A, et al. (2013) φθορισμού

In Situ

υβριδοποίηση και ανοσοϊστοχημεία όπως διαγνωστικές μέθοδοι για ALK Θετική μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα ασθενείς. PLoS ONE 8 (1): e52261. doi: 10.1371 /journal.pone.0052261

Επιμέλεια: Mohammad O. Hoque, Johns Hopkins University, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25 Ιουνίου 2012? Αποδεκτές: 31 του Οκτωβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 24η του Ιανουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Martinez et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία χρηματοδότηση ή υποστήριξη στην έκθεση

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνου

του πνεύμονα είναι η πιο συχνή αιτία καρκινογόνες. σχετίζονται με το θάνατο σε όλο τον κόσμο, αντιπροσωπεύοντας πάνω από 1 εκατομμύριο θανάτους ετησίως. [1] Αν και κυτταροτοξική χημειοθεραπεία παραμένει ο στυλοβάτης της θεραπείας για την πλειοψηφία των ασθενών με προχωρημένο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), [2], η ταυτοποίηση των ειδικών γενετικών αλλοιώσεων που οδηγούν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων έχει οδηγήσει στην ανάπτυξη νέων θεραπείες στόχου σε ένα υποσύνολο των ασθενών με NSCLC [3], [4]. Τα τελευταία χρόνια, κινάσης αναπλαστικού λεμφώματος (ALK) αναδιάταξη, κυρίως με την εχινοδερμάτων μικροσωληνίσκους πρωτεΐνη που συνδέεται όπως το γονίδιο 4 (EML4), έχει αναγνωριστεί ως ένα ογκογόνο συμβάν σε μια υποομάδα ασθενών με NSCLC [4]. ALK μετατόπιση έχει ως αποτέλεσμα την συστατική έκφραση του πεδίου κινάσης τυροσίνης ΑΙΚ πρωτεΐνης, η οποία έχει ως αποτέλεσμα την ανάπτυξη των όγκων και της ανάπτυξης. Το ογκογόνο εξάρτηση αυτού του γεγονότος αποδεικνύεται με βάση ότι η δραστηριότητα ALK απομάκρυνση κινάσης αντιστρέφει την κακοήθη μορφή και την ανάπτυξη [5]. Πρόσφατα, τα αποτελέσματα της φάσης 1 μελέτη αξιολόγησης έναν αναστολέα ALK, Crizotinib, σε ασθενείς με ALK θετικό NSCLC δείξει ενθαρρυντικά αποτελέσματα [6]. Κλινικές δοκιμές με Crizotinib και άλλους αναστολείς ALK σε αυτήν την υποομάδα του πληθυσμού της ΑΛΚ θετικό NSCLC ασθενείς βρίσκονται σε εξέλιξη.

Οι αρχικές μελέτες έχουν δείξει ότι η ΑΛΚ θετικό NSCLC ασθενείς τείνουν να είναι νεότεροι, κατά κύριο λόγο μη /φως καπνιστές με αδενοκαρκίνωμα ιστολογίας από ο συνολικός πληθυσμός NSCLC ασθενείς [7]. Αυτά κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά είναι επίσης συχνή σε ασθενείς με μεταλλάξεις του EGFR, αλλά και οι δύο γενετικές γεγονότα φαίνεται να είναι αμοιβαία αποκλειόμενα [8]. Σε ασθενείς με μη επιλεγμένο NSCLC ο επιπολασμός της ALK εύρος θετικότητας από 1% έως 7% [9], αλλά περισσότερο από 30% σε ασθενείς που έχουν επιλεγεί για EGFR φυσικού τύπου (WT), αδενοκαρκίνωμα και όχι το ιστορικό καπνίσματος [7]. επιπολασμός της σε έναν επιλεγμένο πληθυσμό των ασθενών με NSCLC δεν είναι ακόμη γνωστές Ευρώπης.

Ωστόσο, ALK θετικό NSCLC ασθενείς και ιδιαίτερα characterictics τους έχουν διευκρινιστεί, αλλά ένας σαφής ορισμός της ALK θετικότητας παραμένει ένα δύσκολο θέμα. Οι πρώτες αναφορές για τον επιπολασμό της EML4-ALK αναδιατάξεις που χρησιμοποιείται RT-PCR για την ανίχνευση των ασθενών, συνήθως ως μια αναδρομική ανάλυση εκτομή δειγμάτων από ασθενείς με ΜΜΚΠ [4], [9]. Ωστόσο, η μέθοδος αυτή δεν είναι σε θέση να ανιχνεύσει άγνωστο παραλλαγές EML4-ALK ή αναδιατάξεις με άλλους εταίρους διαφορετικές από EML4. Οι νέες πλατφόρμες έχουν αναπτυχθεί για να παρέχουν τις εν λόγω ανεπάρκεια [10]. Για την επιλογή των ασθενών στις δοκιμές Crizotinib, FISH με ένα διάλειμμα εκτός καθετήρα στο ALK είναι η διαγνωστική μέθοδος. δοκιμή FISH επιτρέπει την ανίχνευση της ALK μεταθέσεις, δεν έχει σημασία το σύντροφο ή την παραλλαγή, αλλά ορισμός ALK θετικότητα με FISH και περιορισμένη χρήση της για την εκτομή ή βιοψία δείγματα είναι περιορισμούς [11]. Inmunoshistochemistry (IHC) έχει επίσης διερευνηθεί. αναλύσεις IHC χρησιμοποιώντας αντισώματα έναντι ALK πρωτεΐνη που χρησιμοποιείται σε malignances αιματολογικές έδειξαν μικρή ευαισθησία σε ασθενείς με NSCLC, πιθανώς λόγω των επιπέδων πρωτεΐνης χαμηλότερα ALK εκφρασμένη σε σύγκριση με αιματολογική malignances με αναδιατάξεις ALK. Η νέα D5F3 μονοκλωνικό αντίσωμα υψηλή ευαισθησία φαίνεται να έχει αρκετή ακρίβεια στον εντοπισμό των ασθενών που πρόκειται να αναπαραχθεί σε όλο τον κόσμο τρόπο [12], όπως όλοι οι ασθενείς στους οποίους υπήρχαν αρκετά στη φάση 1 Crizotinib δίκη που επελέγη προηγουμένως με FISH θετικότητα ιστού ήταν επίσης θετικά από την IHC , ενώ μόνο δύο από τρία μέρη των ασθενών αυτών ήταν θετικά με RT-PCR. FISH αρνητικά δείγματα και φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων δεν εκφράζουν ALK πρωτεΐνη από την IHC [6]. Πρόσφατα, άλλες διαγνωστικές μέθοδοι έχουν επίσης διερευνηθεί [13], [14].

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης είναι η διερεύνηση του επιπολασμού της ALK θετικότητα σε μια ευρωπαϊκή ομάδα επιλεγμένων ασθενών με NSCLC από FISH, για τον καλύτερο προσδιορισμό κλινικά χαρακτηριστικά και τα αποτελέσματά της και, για να εξερευνήσετε IHC ως διαγνωστικό έλεγχο μέθοδος για ALK σε ασθενείς με NSCLC.

ασθενείς και Μέθοδοι

ασθενείς

Όλα συμπεριλαμβάνονται οι ασθενείς είχαν λάβει θεραπεία ή διαβούλευση από την Ιατρική Ογκολογία Υπηρεσία του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Vall d’Hebron. επιλέχθηκαν όλοι οι ασθενείς με NSCLC έχουν υποστεί έλεγχο για την κατάσταση της μετάλλαξης του EGFR μεταξύ Μαΐου 2006 και Ιανουαρίου 2010. EGFR αναλύσεις μεταλλάξεων είχε πραγματοποιηθεί με βάση την ιατρική υπόθεση σύμφωνα με την ένδειξη περίπτωση, λαμβάνοντας υπόψη το φύλο, ιστολογία και το ιστορικό καπνίσματος, αλλά χωρίς σταθερό παραμέτρους. Ιατρικά αρχεία αναθεωρήθηκαν και τα βασικά χαρακτηριστικά κλινικοπαθολογοανατομικές, θεραπείες και τα αποτελέσματα καταγράφονται. Αν ιστός ήταν διαθέσιμος για τις αναλύσεις ALK, οι ασθενείς ελέγχθηκαν πρώτα με FISH και στη συνέχεια από την IHC. Η Επιτροπή Δεοντολογίας Θεσμικών ελεγχθεί και εγκριθεί αυτή τη μελέτη.

δείγματα όγκων

Μη προετοιμασμένο διαφάνειες από, παραφίνη-ενσωματωμένες (FFPE) δείγματα φορμόλη-σταθερό όγκο από βιοψίες ή μπλοκ των κυττάρων ανακατασκευάστηκε από την κυτταρολογική εξέταση ή, στην η απουσία αυτού, οι διαφάνειες από την κυτταρολογική εξέταση αναλύθηκαν στη συνέχεια.

EGFR αναλύσεις μεταλλάξεων

DNA Extraction.

τα δείγματα που λαμβάνονται με FNA και FFPE υποβλήθηκαν σε πέψη για 48 ώρες με πρωτεϊνάση Κ και 180 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος πέψης G2 σε 37

μ.Χ., τότε το DNA εκχυλίζεται με Kit Tissue EZ1 DNA με ένα σταθμό εργασίας BioRobot EZ1 έκλουση των δειγμάτων σε 50 μΙ σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Συγκέντρωση και καθαρότητα του εκχυλισμένου DNA προσδιορίστηκαν με φασματοφωτομετρία και στη συνέχεια το DNA αποθηκεύτηκε σε -20 ° C.

PCR Ενίσχυση και άμεση αλληλούχιση.

PCR διεξήχθη σε 30 μΐ όγκους χρησιμοποιώντας 50 ng εκμαγείου DNA, 0,75 υ AmpliTaq Gold ϋΝΑ πολυμεράση (Perkin-Elmer? Roche Molecular Systems? Branchburg, NJ), 3 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος PCR (Perkin-Elmer), 0,8 μmol /L τριφωσφορικό δεοξυνουκλεοτίδιο (Promega), 0,5 μmol /L του κάθε εκκινητή, και οι συγκεντρώσεις των MgCl2, εξώνια 19 και 21 ενισχύθηκαν με PCR. Primer αλληλουχίες ελήφθησαν όπως περιγράφεται στο συμπληρωματικών στοιχείων. Πρόγραμμα PCR διεξήχθη με 35 κύκλους μετουσίωσης στους 94 ° C για 45 s, ανασύνδεση εκκινητή στους 58 ° C για 30 s, και επιμήκυνση στους 72 ° C για 30 s. Μια τελική επέκταση προχώρησε στους 72 ° C για 10 λεπτά. Οι ζώνες προϊόντων PCR έγιναν ορατά με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα με Bret. Κάθε δείγμα αλληλουχήθηκε εις διπλούν, τόσο προς τα εμπρός και να αντιστρέψει τις κατευθύνσεις χρησιμοποιώντας το κιτ BigDye Terminator 3.1 (Applied Biosystems? Foster City, CA) και ένα ΑΒΙ PRISM 310 (Applied Biosystems) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι ακολουθίες στη συνέχεια σε σύγκριση με το GenBank-αρχειοθετούνται ανθρώπινη ακολουθία για

EGFR

(αριθμός ένταξης AY588246) από χρωματισμών Pro λογισμικού.

προσδιορισμός του EGFR σε πραγματικό χρόνο PCR.

Όλα περιπτώσεις αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το TheraScreen EGFR PCR Kit (Qiagen. Manchester Ltd) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή για την ανίχνευση μεταλλάξεων σε πραγματικό χρόνο PCR αντιδράσεις. Real-time PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα ABI7500Fast (Applied Biosystems? Foster City, CA) υπό τις ακόλουθες προϋποθέσεις:. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση 7500 λογισμικό (Έκδοση 2) ​​

φθορισμού

in situ υβριδισμός

(FISH)

Είμαστε προετοιμασμένοι 4 μm παραφίνη-ενσωματωμένες ιστολογικές τομές για ανάλυση FISH. Η εμπορική Vysis LSI

ALK

Διπλή χρώμα, Break Εκτός Αναδιάταξη Probe (Abbott Molecular Inc., Des Plaines, IL) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν σε ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Nikon 501) με τη χρήση του λογισμικού του συστήματος απεικόνισης Isis φθορισμού. Ένα ελάχιστο των 100 πυρήνων σκόραρε. Ένα ψάρι θετικό κρούσμα ορίστηκε ως έχουν τα καρκινικά κύτταρα περισσότερο από το 15% που δείχνει χωρίζονται πράσινα και κόκκινα σήματα ή ενιαίο κόκκινο σήματα εντοπίζονται κύτταρα με αναδιαταχθέντα

ALK

. FISH διεξήχθη και αναλύθηκαν με δύο διαφορετικούς παθολόγους.

Immnunohistochemistry

Εν συντομία 3 μm πάχους τομές κόπηκαν από τα δείγματα ιστών και τοποθετήθηκαν σε γυάλινες πλάκες με πολυ-L-λυσίνη. Όλα τα πλακίδια βάφτηκαν με αντίσωμα ALK (κλώνος D5F3 κυττάρων σηματοδότηση Technology) αραιωμένο 1:50 χρησιμοποιώντας ένα κιτ ανίχνευσης Ventana Ultraview DAB σε Ventana επεξεργαστή BenchMark XT (Ventana Medical Systems, Inc, Tucson, AZ). Αντιγόνο ανάκτησης ήταν μια τυπική διαδικασία αυτοματοποιημένη για το σημείο αναφοράς XT Ventana στους 37 ° C για 16 λεπτά. Όλες οι διαφάνειες αναλύθηκαν από δύο διαφορετικούς παθολόγους και ταξινομούνται. Τα δείγματα θεωρούνται IHC-θετικό εάν ένας όγκος-ειδική χρώση οποιουδήποτε ένταση ≥10% των καρκινικών κυττάρων ήταν παρόντες.

Στατιστικές αναλύσεις

Εκτός εάν ορίζεται διαφορετικά, για τις αναλύσεις των κλινικών και μοριακών δεικτών στα δείγματα ασθενών, ακριβές τεστ του Fisher χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση συσχέτιση μεταξύ κατηγορικών μεταβλητών, και t δοκιμή Student χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί σύνδεση μεταξύ των κατανομών του αποτελέσματος της θεραπείας. Όλες οι αναφερόμενες τιμές ρ είναι δύο όψεων, εκτός αν ορίζεται διαφορετικά, και θεωρήσαμε μια δοκιμή ως στατιστικά σημαντική, αν p ≤ 0,05. Για να συγκριθεί η συσχέτιση μεταξύ FISH και ανοσοϊστοχημείας για τον εντοπισμό ALK θετικούς ασθενείς που χρησιμοποίησαν μια μέθοδο κάπα.

Αποτελέσματα

Μεταξύ Μαΐου 2006 και τον Ιανουάριο 2010 συνολικά 99 ασθενείς που είχαν προηγουμένως ελέγχονται για μεταλλάξεις του EGFR με τον ιστό διαθέσιμες για ALK αναλύσεις εντοπίστηκαν FISH. Η διαθεσιμότητα των ιστών για τα ψάρια και αναλύσεις IHC εκτιμήθηκε ως θετική από την ύπαρξη ενός μπλοκ FFPE ή διαφάνειες από κυτταρολογική εξέταση στα αρχεία του φορέα μας. Μετά από διαδικασίες μελέτης, δεν υπήρχε αρκετό ιστό για να εκτελέσετε μια έγκυρη δοκιμή FISH σε 14 ασθενείς. Για την ανάλυση IHC αυτός ο αριθμός ήταν μεγαλύτερος, σε 19 ασθενείς.

Basal χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον πίνακα 1 (πίνακας 1). Οι ασθενείς ήταν κυρίως αδενοκαρκινώματα (80%) και ποτέ δεν του /της πρώην καπνιστές (62%) με ίση κατανομή ως προς το φύλο.

Η

Από τα δείγματα 99 όγκων εξετάστηκαν, 13 ασθενείς (13,1%) έτρεφε μια ενεργοποίηση μετάλλαξης του EGFR , 7 ασθενείς (7,1%) ήταν ALK θετικά και 65 ασθενείς (65,7%) ήταν EGFR WT και ALK αρνητική, και σε 14 ασθενείς (14,1%) δεν υπήρχε αρκετός ιστός για να εκτελέσει μια έγκυρη δοκιμασία FISH για ALK (πίνακας 2). μετάλλαξης του EGFR και ALK θετικότητα ήταν αλληλοαναιρούνται.

Η

ALK θετικούς ασθενείς τείνουν να είναι νεότεροι (56 έτη) από το μεταλλαγμένο EGFR (63 έτη) ή EFGR WT /ALK αρνητική (62 ετών) ασθενείς, αλλά αυτές οι διαφορές δεν ήταν στατιστικά διαφορετικό. Δεν υπήρχε καμία σαφής επικράτηση των φύλων για ALK θετικούς ασθενείς (4 γυναίκες και 3 άνδρες). Πέντε από αυτά ήταν ποτέ καπνιστές (71%) και 2 ήταν καπνιστές κατά τη στιγμή της διάγνωσης. Όλα τα θετικά ασθενείς ALK είχε μια μη πλακώδη ιστολογία, 5 από 7 ασθενείς ήταν αδενοκαρκίνωμα και οι άλλοι 2 ασθενείς είχαν μια μη προσδιοριζόμενη αλλιώς (NOS) NSCLC. Τέσσερις από τους 5 ασθενείς ΑΙΚ θετική αδενοκαρκινώματος έδειξε μια σταθερή και ανάπτυξη κυψελοειδή μοτίβο και, επιπλέον, τέσσερα από τα πέντε έδειξε ένα μοτίβο με υπογεγραμμένη κύτταρα δαχτυλίδι ήταν παρούσα. (Σχήμα 1)

ανάλυση FISH χρησιμοποιώντας ένα διάλειμμα εκτός καθετήρα. Θετικά κύτταρα δείχνουν μία σύντηξη από τα κόκκινα και πράσινα σήματα που αντιστοιχεί στην άθικτη χρωμόσωμα, και τα σήματα διάσπαση ενδεικτικά της ALK αναδιάταξης (βέλη). Ανοσοϊστοχημεία για ALK σε NSCLC χρησιμοποιώντας D5F3 αντισώματος. Καρκινικών κυττάρων δείχνουν κυτταροπλασματική έκφραση της πρωτεΐνης, ενώ το υπόλοιπο των κυττάρων είναι εντελώς αρνητικά (20 ×).

Η

EGFR μεταλλαγμένο ασθενείς είχαν επίσης κατά κύριο λόγο αδενοκαρκίνωμα ιστολογίας (100%) και ήταν κατά κύριο λόγο μη καπνιστές (71 %), αλλά με σαφή προδιάθεση των δύο φύλων για τις γυναίκες (77%).

ο EGFR κβ /ALK αρνητική ομάδα και το EGFR κβ /ALK άγνωστη ομάδα δεν διαφέρουν ως προς τα βασικά χαρακτηριστικά τους και ήταν συγκρίσιμα με τα χαρακτηριστικά του ολόκληρη η ομάδα των 99 ασθενών.

Εμείς διερευνηθεί επίσης την καλύτερη κλινική ανταπόκριση με ΤΚΙ EGFR ή πλατίνα βασίζεται σχήμα χημειοθεραπείας σε μεταστατικό ή υποτροπιάζοντα ασθενείς σύμφωνα με EGFR και ALK κατάσταση. Όπως ήταν αναμενόμενο, ALK θετική ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με erlotinib δεν είχαν στόχο τις απαντήσεις? ωστόσο, έχουν μόνο δύο θετικούς ασθενείς ALK υποβληθεί σε θεραπεία με EGFR ΤΚΙ του. Δεν απαντήσεις για EGFR κβ /αρνητικούς ασθενείς ALK παρατηρήθηκαν υποβλήθηκαν σε θεραπεία με έναν EGFR ΤΚΙ. Αντίθετα, το 75% των απαντήσεων παρατηρήθηκαν μεταξύ της ομάδας των μεταλλαγμένων ασθενών EGFR. Οι απαντήσεις στην πρώτη γραμμή χημειοθεραπεία βασισμένη στο λευκόχρυσο ήταν 29% για το ALK θετικούς ασθενείς, το 60% για μεταλλαγμένο ασθενείς EGFR και 40% για EGFR WT /ALK αρνητική. (Πίνακας 3)

Η

Κατά το χρόνο της ανάλυσης, η διάμεση παρακολούθηση 65 ασθενείς με προχωρημένο /υποτροπιάζον NSCLC ήταν 9,5 μηνών μεταξύ των ασθενών ακόμα ζωντανός? εκείνη τη στιγμή, 57 ασθενείς είχαν πεθάνει. Αναλύσαμε συνολική επιβίωση (OS) των ασθενών σύμφωνα με ALK και EGFR γονότυπο. Η διάμεση OS για τους αρνητικούς ασθενείς EGFR κβ /ALK ήταν 4,5 μηνών, για την μεταλλαγμένη ασθενείς EGFR ήταν 15,7 μήνες (p = 0,018) και δεν είχε επιτευχθεί για θετικούς ασθενείς ALK (p = 0,103). Στην ομάδα θετικού ALK υπήρχαν τέσσερις ασθενείς (από συνολικά επτά) που είχαν λάβει crizotinib ως μέρος της θεραπείας τους κάποια στιγμή κατά τη διάρκεια της νόσου τους. (Σχήμα 2)

Η

Τέλος, πραγματοποιήσαμε μια ALK IHC με το αντίσωμα D5F8 στους 80 ασθενείς στους οποίους δεν υπήρχε υλικό παραμένουν διαθέσιμες μετά EGFR και αναλύσεις FISH (Σχήμα 3). Όλα τα 73 ασθενείς αρνητικοί για ALK με FISH ήταν επίσης αρνητικά για IHC. Έξι ALK FISH θετικό ασθενείς ελέγχονται για IHC, 5 ήταν θετικό και ένα αρνητικό. Αυτό το αποτέλεσμα σε μια θετική προγνωστική αξία για IHC με D5F8 αντίσωμα 100% και μια παγκόσμια καλή συμφωνία (Kappa 0,783, εύρος 0,642 – 0,924) (Πίνακας 4).

Η

Συζήτηση

ενεργοποίηση ALK έχει αναγνωριστεί ως οδηγός ογκογόνο αλλοίωση σε ένα υποσύνολο των ασθενών με NSCLC. Επαναδιευθετήσεις περιλαμβάνουν γονίδιο ALK είναι ένα παράδειγμα των ογκογόνων εξάρτησης. ALK θετικούς ασθενείς παρουσιάζουν κατά κύριο λόγο μια ιστολογία αδενοκαρκινώματος, ποτέ /φως ιστορικό καπνίσματος και νεαρότερη ηλικία κατά τη διάγνωση. Ανάπτυξη νέων φαρμάκων που στοχεύουν αυτή την αλλαγή οδήγησε σε εντυπωσιακή αποκρίσεις όγκου σε αυτήν την υποομάδα ασθενών. Πρόσφατα, crizotinib, ένα μικρό μόριο το οποίο αναστέλλει τη δράση της κινάσης τυροσίνης του ALK, έχει εγκριθεί για τη θεραπεία ασθενών με προχωρημένο ALK θετικό NSCLC μετά την εντυπωσιακή αποτελέσματα πρώτες δοκιμές [6]. Την ίδια στιγμή, ένα διαγνωστικό τεστ μοριακό FISH έχει εγκριθεί από Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων για την ανίχνευση ΑΙΚ θετικούς ασθενείς. Στο σύνολό τους, αυτά τα δύο γεγονότα, δείχνουν πόσο σημαντική είναι στην εποχή των θεραπειών στόχο τον εντοπισμό και την επικύρωση βιοδείκτη για την επιλογή αυτών των ασθενών πιο κατάλληλο για την επίτευξη οφέλους, ακόμη και από την πρώιμη ανάπτυξη.

Στην έκθεσή μας, επιλέγουμε ένα υποσύνολο των ασθενών με βάση τα οποία προηγουμένως καθορισμό του καθεστώτος του EGFR ας να προσδιορίσει έναν πληθυσμό ασθενών πιο κατάλληλο για να φιλοξενήσει μια αλλαγή ALK. Αυτό το κριτήριο, χρησιμοποιώντας ένα βιοδείκτη, θα αφήσουμε να μας προσδιορίσει ένα εμπλουτισμένο πληθυσμό των ασθενών με NSCLC στην οποία μοριακά χαρακτηριστικά θεωρήθηκαν κλινικά σημαντικές. Σε αυτή την ομάδα, η επικράτηση των μεταλλάξεων του EGFR ήταν 13,1%, το οποίο είναι κοντά στη συχνότητα που έχουν αναφερθεί από την Ομάδα ισπανική καρκίνο του πνεύμονα με παρόμοιο πληθυσμό [15], η οποία εμμέσως προκύπτει ότι επιλεγμένο πληθυσμό μας αντιπροσωπεύει το συνολικό ποσό των ασθενών τι επιλέγετε για τον έλεγχο EGFR στην καθημερινή πράξη. ALK θετικούς ασθενείς με FISH αντιπροσωπεύει στη μελέτη μας το 7,1% του συνόλου, η οποία είναι σύμφωνη με τις δημοσιεύσεις των άλλων ερευνητών σε αυτόν τον πληθυσμό ασθενών [7] – [9], [16] και είναι η πρώτη έκθεση επικράτηση ALK σε μία ομάδα Ευρωπαϊκό ασθενείς κυρίως μεταστατικό NSCLC.

Όπως έχει ήδη αναφερθεί, ALK θετικούς ασθενείς ήταν κυρίως αδενοκαρκινώματα, με χαμηλό προηγούμενο ιστορικό καπνίσματος και τείνουν να είναι νεότεροι από το ποσό των ασθενών με NSCLC. Ως εκ τούτου, ALK θετικούς ασθενείς δεν έδειξε απαντήσεις σε EGFR ΤΚΙ, αλλά ένα παρόμοιο όφελος από τη χημειοθεραπεία από αρνητικούς ασθενείς ALK. Παρά το γεγονός ότι προηγούμενες εκθέσεις έχουν δείχνουν ότι η πεμετρεξίδη θα μπορούσε να είναι ο προτιμώμενος χημειοθεραπευτικός παράγοντας για ΑΙΚ θετικούς ασθενείς [17], [18], λόγω του μικρού μεγέθους της ΑΙΚ μας πληθυσμό θετικό δεν ήμασταν σε θέση να εκτελέσει αυτό αναλύσεων. Είναι ενδιαφέρον ότι, δύο από τους ALK θετικούς ασθενείς στη Serie μας ήταν ενεργοί καπνιστές κατά τη στιγμή της διάγνωσης.

Πρόσφατα στοιχεία φαίνεται να δείχνουν ότι η απουσία παραγόντων ALK στοχευμένες ALK θετικότητα είναι επιζήμια προγνωστικός παράγοντας για τους ασθενείς με ΜΜΚΠ [19 ]. Ωστόσο, σε ασθενείς με προχωρημένο, ALK-θετικό NSCLC, crizotinib θεραπεία σχετίζεται με βελτιωμένη επιβίωση σε σύγκριση με εκείνη του crizotinib-naive ελέγχους [20]. Στη μελέτη μας, analized επιβίωσης σύμφωνα με το μοριακό κατάσταση, ανεξάρτητα από τη θεραπεία με crizotinib ή άλλο αναστολέα ALK και να βρείτε ότι εκείνοι ALK θετικό NSCLC ασθενείς τείνουν να ζουν περισσότερο από τους αρνητικούς ασθενείς EGFR κβ /ALK. Εμείς δεν εκτελέσει μια ανάλυση της επιβίωσης για ΑΛΚ θετικούς ασθενείς προσαρμογή για τη θεραπεία crizotinib λόγω του μικρού μεγέθους της ομάδας. Παρ ‘όλα αυτά, τέσσερις από τους θετικούς ασθενείς ALK είχαν υποβληθεί σε θεραπεία με crizotinib κατά τη στιγμή της ανάλυσης επιβίωσης. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι στην εποχή των θεραπειών στόχου ALK, ALK ασθενείς θετικό NSCLC έχουν μια καλύτερη έκβαση από ό, τι αρνητικό ασθενείς EGFR WT /ALK. Ωστόσο, τα αποτελέσματα αυτά θα πρέπει να analized με προσοχή, ένα από τα μεροληψία επιλογής σε αυτή τη μελέτη είναι ότι οι ασθενείς με χειρότερη κατάσταση απόδοσης από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα συνολική είχαν συμπεριληφθεί. Ο κύριος λόγος για αυτή την προκατάληψη είναι ότι οι ασθενείς με την καλύτερη απόδοση είχε προσληφθεί σε κλινικές δοκιμές και EGFR δεν έχει δοκιμαστεί σε τοπικό εργαστήριο μας. Μια άλλη πιθανή προκατάληψη είναι ότι σε ασθενείς με κακή απόδοση o μεγαλύτερος συνοδά νοσήματα η κατάστασης μεταλλάξεων του EGFR αναλύθηκε ως αυτούς τους ασθενείς δεν ήταν κατάλληλοι να λάβουν άλλο είδος θεραπείας από EGFR ΤΚΙ, αν είχε αποδειχθεί μια μετάλλαξη του EGFR. Και οι δύο προκαταλήψεις μπορεί να εμπλουτιστεί ομάδα μας με ασθενείς με φτωχότερα αποτελέσματα και, ως εκ τούτου, μόνο 15 από τους ασθενείς EGFR κβ /αρνητικούς ασθενείς ALK υποβλήθηκαν σε θεραπεία με χημειοθεραπεία με βάση την platinun.

Ένα σημαντικό ζήτημα για τους κλινικούς γιατρούς είναι να εντοπισθούν οι ασθενείς κατάλληλοι για θεραπεία με crizotinib. ανάλυση FISH είναι η τυποποιημένη μέθοδος. Ωστόσο, IHC έχει διερευνηθεί από διάφορες ομάδες σε μία προσπάθεια του προσδιορισμού περισσότερο σε όλο τον κόσμο κατάλληλη μέθοδο για τη διαλογή και τη διάγνωση του ΑΙΚ θετικούς ασθενείς. Πρώτον αντισώματα, που χρησιμοποιήθηκαν προηγουμένως για τη διάγνωση του haemathological malignances, έδειξαν να έχουν όχι αρκετά ευαισθησία που πρέπει να εφαρμόζονται σε ALK θετικούς ασθενείς [12]. Από αυτούς, οι δύο στρατηγικές υψηλής ευαισθησίας έχουν διερευνηθεί. Ένας από αυτούς είναι να βελτιωθεί η ευαισθησία της δοκιμασίας και να αναπτύξει μια βαθμολογία IHC για την επιλογή των ασθενών για την ανάλυση FISH [21], [22]. Μια άλλη προσέγγιση, είναι να αναπτυχθεί υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα ALK αντισώματα που οδήγησε τον εντοπισμό ALK θετικούς ασθενείς από μόνη της [23], [24]. Στη μελέτη μας, χρησιμοποιήσαμε ένα νέο υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα μονοκλωνικού αντισώματος D5F3 σε μία ομάδα επιλεγμένων ασθενών με NSCLC παράλληλα με τα ψάρια για τον εντοπισμό ALK θετικούς ασθενείς. Βρήκαμε ότι όλοι οι ασθενείς θετικούς ALK με IHC ήταν επίσης θετικά με FISH. Ωστόσο, ένα θετικό FISH ασθενής είχε ως αποτέλεσμα αρνητική από την IHC. Ότι ψευδώς αρνητικά ασθενής είχε στη διάθεσή του δεν είναι περισσότερο ιστό για να επαναλάβετε την ανάλυση, αλλά είχε προηγουμένως προσληφθεί σε δίκη crizotinib με άλλο FISH θετικό ανάλυση στο κεντρικό εργαστήριο της μελέτης. Στο σύνολό τους, θα μπορούσαμε να συμπεράνουμε ότι μια θετική ανάλυση IHC με το μονοκλωνικό αντίσωμα D5F3 θα πρέπει να είναι αρκετό για να επιλέξετε έναν ασθενή για να λαμβάνουν θεραπεία με έναν αναστολέα ALK όπως διαπιστώθηκε καμία θετική για IHC ασθενή να είναι αρνητική με FISH. Όταν ένας κλινικός γιατρός πρέπει να εξετάσει για να εκτελέσει μια ανάλυση FISH σε έναν ασθενή με αρνητικό αποτέλεσμα με IHC, ή αντίστροφα, είναι ένα ερώτημα που θα πρέπει να αντιμετωπιστούν στο μέλλον. Ακόμη περισσότερο, ποιο είναι το νόημα μιας δοκιμής FISH θετικότητα σε λιγότερο από 15% των κυττάρων ή τι πρέπει να γίνει με εκείνους τους ασθενείς που δεν συμφωνούν αποτελέσματα με IHC και FISH είναι μερικά από τα θέματα που πρέπει να τυποποιηθεί στο μέλλον.

Για να ολοκληρώσω, στη μελέτη μας έδειξε ότι ο επιπολασμός της ALK θετικούς ασθενείς είναι 7,1% σε καυκάσιος επιλεγμένο πληθυσμό NSCLC με FISH. Στην εποχή του ALK στοχευμένες θεραπείες ALK θετικούς ασθενείς έχουν διαφορετικά κλινικά χαρακτηριστικά και καλύτερη προγνωστική από EGFR WT και ALK αρνητικούς ασθενείς. IHC με μονοκλωνικό αντίσωμα D5F3 εναντίον ALK είναι μια ακριβής μέθοδος για την ανίχνευση ALK θετική ασθενείς με ΜΜΚΠ.

You must be logged into post a comment.