Αφηρημένο

SnoN είναι ένας αρνητικός ρυθμιστής της σηματοδότησης TGF-β και επίσης ένας ενεργοποιητής της καταστολής όγκου p53 σε απόκριση σε κυτταρικό στρες. ο ρόλος της στον καρκίνο του ανθρώπου είναι πολύπλοκο και αμφιλεγόμενο και με τα δύο προ-ογκογόνο και αντι-ογκογόνο δραστηριότητες που αναφέρθηκαν. Να αποσαφηνίσει το ρόλο της στον καρκίνο του ανθρώπου και την παροχή κλινικής σημασίας για τις δραστηριότητες σηματοδότησης της, εξετάσαμε την έκφραση SnoN σε φυσιολογικά και καρκινικά ανθρώπινα οισοφάγου, των ωοθηκών, του παγκρέατος και του μαστού ιστούς. Σε φυσιολογικούς ιστούς, SnoN εκφράζεται τόσο στην επιθήλιο και τον περιβάλλοντα στρώμα σε ένα μέτριο επίπεδο και είναι κυρίως κυτταροπλασματική. επίπεδα SnoN σε όλες επιθήλια του όγκου που εξετάστηκαν είναι μικρότερη από ή παρόμοιο με αυτόν του αντιστοιχισμένων φυσιολογικά δείγματα, συνεπή με αντι-ογκογόνο δράση του σε επιθηλιακά κύτταρα. Αντίθετα, η έκφραση SnoN στο στρώμα είναι ιδιαίτερα ρυθμίζεται αυξητικά στα ενδοδιηθητικά φλεγμονώδη κύτταρα σε υψηλής ποιότητας οισοφάγου και δείγματα όγκων των ωοθηκών, προτείνοντας ότι SnoN μπορεί δυνητικά να προωθήσει κακοήθη εξέλιξη μέσω διαμόρφωσης της μικροπεριβάλλον του όγκου σε αυτούς τους τύπους όγκου. Τα συνολικά επίπεδα έκφρασης SnoN σε αυτούς τους καρκινικούς ιστούς δεν συσχετίζονται με την κατάσταση της ρ53. Ωστόσο, σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές με ενίσχυση του

snoN

γονίδιο, ένας ισχυρός συσχετισμός μεταξύ αυξημένο αριθμό αντιγράφων SnoN και αδρανοποίηση του p53 ανιχνεύθηκε, γεγονός που υποδηλώνει ότι ο καταστολέας όγκων μονοπάτι SnoN-p53 πρέπει να αδρανοποιούνται, είτε μέσω προς τα κάτω ρύθμιση SnoN ή απενεργοποίηση της ρ53, προκειμένου να επιτραπεί καρκινικών κυττάρων να πολλαπλασιάζονται και να επιβιώσουν. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν σθεναρά ότι SnoN μπορεί να λειτουργήσει ως καταστολέας των όγκων στα πρώιμα στάδια της ογκογένεσης σε ανθρώπινους καρκινικούς ιστούς

Παράθεση:. Jahchan NS, Ouyang G, Luo K (2013) προφίλ έκφρασης των SnoN σε φυσιολογικού και καρκινικού Ανθρώπου Οι ιστοί Υποστήριξη Ογκοκατασταλτικής του ρόλο στην ανθρώπινη Καρκίνο. PLoS ONE 8 (2): e55794. doi: 10.1371 /journal.pone.0055794

Επιμέλεια: Χριστίνα Lynn Addison, Οτάβα Νοσοκομείο Ίδρυμα Ερευνών, Καναδάς

Ελήφθη: 4 Νοέμβρη 2012? Αποδεκτές: 30 Δεκέμβρη, 2012? Δημοσιεύθηκε: 13 Φεβρουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Jahchan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίζεται από το ΝΙΗ RO1 CA101891 και RO1 DK090347 να K. Luo και DOD BCRP predoctoral υποτροφία στο Ν Jahchan. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

SnoN (Ski-νέα πρωτεΐνη) ήταν γροθιά ανακαλύφθηκε ως ογκοπρωτεΐνη που μπορεί να προκαλέσει μετασχηματισμό της κότας και ορτυκιών εμβρυϊκών ινοβλαστών όταν υπερεκφράζεται [1] – [4]. Στα θηλαστικά, SnoN περιέχει τόσο προ-ογκογόνο και αντι-ογκογόνο δραστηριότητες. Η προ-ογκογόνο δράση του SnoN εξαρτάται από την ικανότητά του να συνδέεται με τις πρωτεΐνες Smad και ανταγωνίζονται τα κυτταροστατικά αποκρίσεις των ΤΟΡ-β [5], [6]. Suppporting pro-ογκογόνο ρόλο της, η έκφραση SnoN είναι αυξημένο στις περισσότερες ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές, και μείωση της έκφρασης SnoN με shRNA σε διηθητικό καρκίνο του μαστού και κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου τόσο

in vitro

και

in vivo

[7]. Το πιο σημαντικό, η υπερέκφραση του SnoN στον αδένα μαστού ποντικού επιταχύνει την ανάπτυξη του καρκίνου του μαστού και της πνευμονικής μετάσταση που προκαλείται από το αντιγόνο πολυώματος μέση T (PyVmT) [8], που παρέχει η πρώτη

in vivo

υποστήριξη για την προ-ογκογόνο δράση της SnoN. Τα τελευταία χρόνια, ωστόσο, όλο και περισσότερα στοιχεία έχουν προκύψει δείχνουν ότι SnoN μπορεί επίσης να λειτουργήσει ως καταστολέας όγκου. Ετερόζυγα ποντίκια που στερούνται ένα αντίγραφο του

snoN

γονίδιο δείχνουν μια αυξημένη ευαισθησία σε καρκινογόνο παράγοντα πρόκλησης ογκογένεσης, γεγονός που υποδηλώνει ότι SnoN μπορεί να προστατεύσει ποντίκια από καρκινογένεση [9]. Δείξαμε πρόσφατα ότι τα υψηλά επίπεδα του SnoN αναστέλλουν ογκογόνο επαγόμενη μετασχηματισμό πρωτογενών ποντίκι εμβρυϊκών ινοβλαστών

in vitro

και μπλοκ ανάπτυξη όγκων

in vivo

σε ένα μοντέλο ποντικού καρκινογένεσης του δέρματος δύο σταδίων [10 ]. Αυτή η αντι-ογκογόνο δράση του SnoN είναι ανεξάρτητη από την ικανότητά της να καταστέλλει σηματοδότηση ΤΟΡ-β και πιθανόν πηγάζει από την ικανότητά της να επάγει τη σταθεροποίηση της ρ53. Σε απάντηση προς κυτταρικό στρες, τα υψηλά επίπεδα SnoN στρατολογείται στους φορείς nulcear PML όπου επάγει σταθεροποίηση της ρ53, οδηγώντας σε αυξημένη κυτταρική γήρανση και την απόπτωση [10]. Έτσι, τα υψηλά επίπεδα SnoN σε κύτταρα μπορεί να ενεργοποιήσει το PML-p53 ογκοκατασταλτικό μονοπάτι για να αναστείλει την ανάπτυξη του όγκου. Τέλος, SnoN μπορεί επίσης να αναστέλλουν τη μετάσταση των όγκων αφού η μείωση της έκφρασης SnoN ενισχύει επιθηλιακά μεσεγχυματικά να μετάβασης (ΕΜΤ) του πνεύμονα και καρκινικών κυττάρων μαστού

in vitro

και μετάσταση όγκου

in vivo

[7].

Λόγω των πολύπλοκων ρόλοι των SnoN στην ογκογένεση, είναι σημαντικό να καθοριστεί πρότυπο έκφρασης του σε κανονικούς ανθρώπινους ιστούς και να παρακολουθήσει πώς αλλάζει κατά τη διάρκεια της κακοήθη πρόοδο. SnoN εκφράζεται παντού σε όλες τις εμβρυϊκά και ενήλικους ιστούς. Η έκφρασή του ρυθμίζεται αυξητικά κατά τη διάρκεια συγκεκριμένων σταδίων της εμβρυογένεσης και μορφογένεσης όργανο [11]. Σε μη μετασχηματισμένα κύτταρα και φυσιολογικούς ιστούς, SnoN μπορεί να ανιχνευθεί τόσο σε κυτόπλασμα και τον πυρήνα, ενώ σε κυτταρικές σειρές καρκίνου, SnoN είναι σε μεγάλο βαθμό η πυρηνική [8], [12], [13]. Επιπλέον, η έκφραση SnoN μπορεί να ρυθμίζεται στο επίπεδο της γονιδιακής ενίσχυσης, μεταγραφική ενεργοποίηση και τη σταθερότητα της πρωτεΐνης. Το ανθρώπινο

snoN

γονίδιο βρίσκεται στο χρωμόσωμα 3q26.2, μια ενεργητική συχνά ενισχύεται σε πολλούς τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων των οισοφάγου, των ωοθηκών και πολλοί άλλοι [5]. Σε συμφωνία με αυτό, η έκφραση SnoN ρυθμίζεται αυξητικά σε πολλούς καρκινικές κυτταρικές γραμμές [6]. Ωστόσο, αν η έκφραση SnoN είναι επίσης αυξημένη σε ανθρώπινους καρκινικούς ιστούς παραμένει αμφιλεγόμενη. Μια σειρά από μελέτες έχουν εξετάσει αυτό το ζήτημα [13] – [18], αλλά καμία συνεπής μοτίβο έχει προκύψει. Ενώ μερικές μελέτες ανέφεραν αύξηση της SnoN RNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης σε ορισμένους καρκινικούς ιστούς και ότι αυτή η υψηλότερη έκφραση SnoN συσχετίζεται με κακή διαφοροποίηση, βαθύτερη εισβολή και την κακή επιβίωση του ασθενούς [13], [14], [16], άλλοι ανιχνεύεται μία μείωση στην έκφραση SnoN σε παρόμοιες καρκίνους, ιδιαίτερα σε δυσπλαστικές και άκρως διηθητικό καρκίνο [15], [17], [18]. Η πιθανή σχέση μεταξύ εντοπισμός των SnoN και κακοήθη κατάσταση του καρκίνου ποικίλλει επίσης από μελέτη σε μελέτη. Αυτά τα αντικρουόμενα στοιχεία δείχνουν μια πιο πολύπλοκη σχέση μεταξύ της έκφρασης SnoN και κακοήθη μετασχηματισμό και να δικαιολογήσει την ανάγκη για μια ευρύτερη εξέταση της έκφρασης SnoN σε φυσιολογικές και καρκίνο ιστούς των διαφόρων κακοήθων στάδια.

Στην έκθεση αυτή, εξετάσαμε την έκφραση SnoN στην τέσσερις τύποι φυσιολογικών ανθρώπινων ιστών και καρκίνο ταίριασμα ιστών διαφόρων κλινικών σταδίων κακοήθειας να εκτιμήσει κατά πόσον μεταβολές της έκφρασης SnoN συσχετίζονται με κακοήθεια του όγκου ή /και την κατάσταση ενεργοποίησης της p53. Αυτοί οι τέσσερις τύποι, του οισοφάγου, των ωοθηκών, του μαστού και του παγκρέατος ιστούς, επελέγησαν επειδή SnoN έχει ενοχοποιηθεί για την ανάπτυξη αυτών των καρκίνων και /ή στις κανονικές λειτουργίες αυτών των ιστών. Του οισοφάγου και των ωοθηκών συχνά περιλαμβάνουν ενίσχυση του 3q26 amplicon, και ο αριθμός αντιγράφων του

SnoN

γονίδιο καθώς και τα επίπεδα μεταγραφής SnoN έχουν βρεθεί να αυξάνουν σε αυτούς τους καρκίνους [14], [16], [19 ], [20]. Ωστόσο, η μορφή έκφρασης του SnoN πρωτεΐνης σε κανονική ωοθήκη και σε αδενοκαρκίνωμα των ωοθηκών δεν έχουν καθοριστεί. Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι στενά συνδεδεμένη με την TGF-β /Smad μονοπάτι, και Smad4 αδρανοποιείται σε σχεδόν 60% του καρκίνου του παγκρέατος [21]. Ως αρνητικός ρυθμιστής Smad4, SnoN μπορεί επίσης να παίζουν ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος. Τέλος, πρόσφατες μελέτες μας χρησιμοποιώντας διάφορα μοντέλα ποντικού κατέδειξαν ότι η έκφραση SnoN δυναμικά ρυθμίζεται κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του μαστικού αδένα [8] και εμπλέκεται στην κακοήθη εξέλιξη του καρκίνου του μαστού [7], [8], [12]. Με την εξέταση του θέση και τα επίπεδα έκφρασης SnoN σε αυτούς τους ιστούς, ελπίζουμε να αποκτήσουν μια καλύτερη κατανόηση των λειτουργιών που παίζουν SnoN κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης τόσο στο επιθήλιο και στρωματικών περιβάλλον και το πώς αυτό μπορεί να συσχετίζονται με την αδρανοποίηση p53.

υλικά και Μέθοδοι

Κανονική και καρκίνος συστοιχίες ιστών

Όλες οι συστοιχίες αγοράστηκαν από Biomax (Cybrdi Inc). Αυτές οι σειρές έρχονται με πληροφορίες σχετικά με κλινικά στάδια, βαθμούς παθολογίας και ΤΝΜ. Η οισοφάγου σειρά περιλαμβάνει ζεύγη δειγμάτων της βιοψίας του όγκου και να συνδυαστούν φυσιολογικά δείγματα από 39 ασθενείς με ιστολογικά και κλινικά διαβαθμισμένων αδενοκαρκίνωμα:. 8 ασθενείς με βαθμού Ι, 19 ασθενείς με βαθμό Β, και 11 ασθενείς με όγκους βαθμού ΙΙΙ

Η σειρά όγκου των ωοθηκών περιέχει δείγματα βιοψίας του όγκου και 10 φυσιολογικά αντίστοιχα δείγματα από 69 γυναίκες ηλικίας 50 +/- 10. Οι όγκοι ταξινομούνται ως ωοθηκών αδενοκαρκινώματα:. 3 ασθενείς με σαφή ωοθηκών καρκίνωμα, 12 ασθενείς με βαθμού Ι, 29 ασθενείς με βαθμό Β, και 25 ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα βαθμού III (όλα με μετάσταση στους λεμφαδένες αλλά όχι μακρινή μετάσταση)

Η σειρά παγκρεατικού όγκου περιέχει δείγματα από 90 ασθενείς και πέντε δείγματα φυσιολογικού ιστού του παγκρέατος. Οι τύποι των όγκων σε αυτή τη σειρά περιλαμβάνουν πορογενές αδενοκαρκίνωμα, βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα, καρκίνωμα νευροενδοκρινείς, αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, καρκινοειδές, και τα στερεά ψευδο-θηλώδες καρκίνωμα. Έχουν ταξινομηθεί σε διαφορετικές κλινικές κατηγορίες με βάση την ιστολογική αξιολόγηση: 21 ασθενείς με βαθμού Ι, 59 ασθενείς με βαθμό II, 8 ασθενείς με βαθμού ΙΙΙ (πολλά από αυτά με μετάσταση στους λεμφαδένες), και 2 ασθενείς με το βαθμό IV όγκου με μακρινή μετάσταση

Η σειρά καρκίνου του μαστού περιλαμβάνει διπλές δείγματα βιοψίας όγκων από 31 ασθενείς, με έξι φυσιολογικά δείγματα από έξι ταιριάζουν ασθενείς, και 9 μεταστατικό δείγματα από τις 9 που ταιριάζουν ασθενείς. Αυτοί οι όγκοι είχαν κλινικά ταξινομηθεί από ιστολογική ανάλυση να διεισδύουν πορογενές καρκίνωμα: 9 ασθενείς με βαθμό ΙΙΑ, 4 ασθενείς με βαθμό ΙΙΒ, 10 ασθενείς με βαθμό IIIA, 5 ασθενείς με βαθμό IIIC, 9 ταιριάζουν ασθενείς με λεμφαδένες μεταστατικό, και 1 ασθενής με μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα στην ωοθήκη. Επειδή καμία διαφορά στην έκφραση SnoN ανιχνεύθηκε μεταξύ βαθμού ΙΙΑ και ΙΙΒ ή μεταξύ βαθμού ΙΙΙΑ και όγκους IIIC, θα ομαδοποιούνται τα δείγματα αυτά μαζί ως όγκοι βαθμού II ή κατηγορίας ΙΙΙ. Επιπλέον, 24 ζεύγη πορογενές καρκίνωμα μαστού in situ (DCIS) δείγματα που ταιριάζουν με φυσιολογικούς ιστούς ελήφθησαν από το κέντρο καρκίνο UCSF.

Το πάχος όλων των συστοιχιών είναι 5 μm. Η σειρά του καρκίνου του μαστού περιλαμβάνει διπλούν δείγματα από κάθε ασθενή και του οισοφάγου, συστοιχίες των ωοθηκών και του παγκρέατος έχουν ένα τμήμα από κάθε ασθενή.

Η ανοσοϊστοχημεία

Για SnoN immuostaining.

παραφίνη-ενσωματωμένες συστοιχίες αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλένια τότε επανυδατωθεί σε μια σειρά από κλίση αιθανόλης. Οι τομές εμβαπτίζονται σε 0,85% NaCl για 5 λεπτά, στη συνέχεια σε PBS για 5 λεπτά και σταθεροποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη (PFA). Διαπερατότητα της slides διεξήχθη με 20 μg /ml πρωτεϊνάσης Κ για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT), ακολουθούμενη από πλύση σε PBS για 5 λεπτά. Τα δείγματα μονιμοποιήθηκαν μια δεύτερη φορά με 4% PFA, και μπλοκάρει την διάρκεια της νύχτας σε 1% BSA /10% ορό νεογνού μόσχου /0.02% Triton Χ-100 σε PBS σε υγροποιημένο θάλαμο στους 4 ° C. Η χρώση διεξήχθη με ένα αντίσωμα αντι-SnoN αναγνώριση μιας Ο-τερματικό πεπτίδιο του SnoN [12] σε συγκέντρωση 1 μg /ml για 2 ώρες μαζί με ένα πεπτίδιο ελέγχου ανταγωνισμού και ένας αρνητικός έλεγχος χωρίς πρωτογενές αντίσωμα. Μετά από 3 πλύσεις με ρυθμιστικό διάλυμα IF (10% ορό νεογνού μόσχου /0.02% Triton Χ-100 σε PBS) για 15 λεπτά το καθένα, φθορίζον συζευγμένο δευτερεύον αντίσωμα (αντίσωμα Alex488 αντι-κουνελιού 1:400 αραίωση) προστέθηκε στα πλακίδια επί 1 ώρα σε RT στο σκοτάδι. Τα πλακίδια πλύθηκαν άπαξ με ρυθμιστικό διάλυμα IF για 15 λεπτά και δύο φορές με PBS για 10 λεπτά το καθένα, ακολουθούμενη από την προσθήκη μιας σταγόνας Vectashield ϋΑΡΙ στερέωσης μέσο (H-1200? Vector Laboratories, Burlingame, CA).

τομές από τους ίδιους τύπους ιστού (φυσιολογικών και καρκινικών) έχουν όλο το χρωματισμένο στο ίδιο πείραμα υπό τις ίδιες συνθήκες, και οι εικόνες ελήφθησαν κάτω από το συνεστιακό μικροσκόπιο σε μία συνεδρία. Επιπλέον, η ίδια παρτίδα αντίσωμα και αραιώσεις χρησιμοποιήθηκαν για όλες τις χρώσεις που περιγράφονται στο παρόν έγγραφο. Σε καμία περίπτωση δεν ήταν τα αντισώματα επαναχρησιμοποιηθεί σε οποιοδήποτε από τα πειράματα.

Για p53 ανοσοϊστοχημεία.

εγκλεισμένα σε παραφίνη τομές αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλένια, επανυδατώθηκαν σε αιθανόλη και επωάστηκαν με 3% Η

2O

2 για 10 λεπτά για την απόσβεση της ενδογενούς ενεργότητας υπεροξειδάσης. Στη συνέχεια, οι τομές μικροκύματα στους 95 ° C για 30 λεπτά σε ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού νατρίου (ρΗ 6) [22] και μπλοκάρει τη χρήση του τυραμιδίου Signal Amplification System Kit Βιοτίνη (Perkin Elmer, Boston, ΜΑ) για 30 λεπτά σε RT. Τα πλακίδια υποβλήθηκαν σε αγωγή για 30 λεπτά με αντι-ρ53 κατά 1:200 αραίωσης (DO-7 κλώνος? Abcam, Cambridge, UK). Μετά την πλύση 3 χ 5 λεπτά σε 0,05% TritonX σε PBS, τα πλακίδια επωάστηκαν σε βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Όλες οι επόμενες βαθμίδες διεξήχθησαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Για την οπτικοποίηση, DAB χρησιμοποιήθηκε ως υπόστρωμα υπεροξειδάσης (SK-4105? Vector Laboratories, Burlingame, CA).

Λήψη εικόνας και Ημι-Ποσοτικά Στοιχεία

Ανάλυση

Για κάθε SnoN-χρωματισμένο δείγμα όγκου , τουλάχιστον τρεις εικόνες συλλήφθηκαν χρησιμοποιώντας το LSM 510 ομοεστιακό μικροσκόπιο κάτω από το 20x στόχο να βεβαιωθείτε ότι οι σημαντικές περιοχές για κάθε δείγμα που περιλαμβάνονται στην ποσοτικοποίηση. ένταση SnoN (ο αριθμός των pixels /εμβαδόν) του καθενός από τους τρεις τομείς υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό εικόνας J, και το μέγεθος της περιοχής διατηρήθηκε σταθερή καθ ‘όλη τη διαδικασία ποσοτικού προσδιορισμού. Οι αριθμοί στη συνέχεια ο μέσος όρος για κάθε δείγμα όγκου. Τα αρνητικά σήματα φόντο ελέγχου και πεπτίδιο ανταγωνισμού αφαιρείται από όλα τα δείγματα κατά τη διάρκεια ποσοτικού προσδιορισμού. Οι εικόνες που λαμβάνονται p53 με το μικροσκόπιο φθορισμού Zeiss AxioImager. Πυρηνική p53 ένταση του σήματος ήταν ποσοτικοποιηθεί σε 0 (αρνητική) έως το 5 (πολύ έντονη χρώση) κλίμακα.

Για την ανάλυση των πιθανών σύνδεση των TP53 μετάλλαξης και ενίσχυση SKIL, πραγματοποιήσαμε εξόρυξη δεδομένων της Novartis κυτταρική σειρά εγκυκλοπαίδεια ( CLE) που περιέχει 947 ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών [23], στο οποίο αντιγραφή αριθμούς και μεταλλάξεις του SnoN (SKIL) και τα γονίδια ρ53 έχουν χαρακτηριστεί χρησιμοποιώντας Affymetrix SNP6 μικροσυστοιχιών ή RNAseq. Αναλύσαμε 914 κυτταρικές γραμμές με τον διαχωρισμό των κυτταρικών σειρών με βάση τη συχνότητα των SnoN ενίσχυσης και την εξέταση της συχνότητας των μεταλλάξεων ΤΡ53 μέσα σε κάθε ομάδα.

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της λειτουργίας t-test του φοιτητή στο πακέτο R βιομεταβιβαστή ως 2-tailed t-tests υποθέτοντας άνισες διακυμάνσεις. συντελεστής συσχέτισης κατά Pearson υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το πακέτο R, και η σημασία της παρατηρούμενης συντελεστή συσχέτισης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα δείγμα t-test εναντίον του πληθυσμού των συντελεστών συσχέτισης-μεταξύ ρ53 και όλων των γονιδίων Entrez στο ανθρώπινο γονιδίωμα. Πιθανοί συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης SnoN και αδρανοποίηση p53 σε ιστούς του καρκίνου αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ Kruskal-Wallis.

Αποτελέσματα

SnoN εκφράζεται σε φυσιολογικό θηλαστικών ιστοί

Για να προσδιορίσετε μια φυσιολογική μοτίβο SnoN σε διάφορους ανθρώπινους ιστούς και να δημιουργήσουν μια βάση για περαιτέρω ανάλυση των ιστών του καρκίνου, εξετάσαμε πρώτη έκφραση SnoN σε 39 δείγματα φυσιολογικού οισοφάγου ιστού, 10 δείγματα φυσιολογικού μαστού, 6 φυσιολογική ωοθηκική και 5 δείγματα φυσιολογικού παγκρέατος με ανοσοϊστοχημεία με αντι-SnoN. Αυτό το αντίσωμα καθαρισμένο με συγγένεια εγέρθηκε έναντι ενός Ο-τερματικού πεπτιδίου της ανθρώπινης SnoN και έχει προηγουμένως χαρακτηριστεί για τις μελέτες ανοσοφθορισμού και ανοσοϊστοχημείας [8], [12]

Ο βλεννογόνος του οισοφάγου περιλαμβάνει τρία στρώματα:. Το μη-κερατινοποιημένο διαστρωματωμένο πλακώδες επιθήλιο, το ίδιο υμένα που αποτελείται από χαλαρό συνδετικό ιστό, και το μυϊκό βλεννογόνο που αποτελείται από λείο μυ. Στην οισοφάγου στρωματοποιημένο πλακώδες επιθήλιο, SnoN εκφράστηκε σε μέτρια έως υψηλά επίπεδα στο κυτταρόπλασμα, με ισχυρότερη χρώση στην άνω επιφάνεια τμήμα του πεπλατυσμένου επιθηλίου σε σχέση με το κατώτερο στρώμα του κυβοειδών κυττάρων (Σχήμα 1Α). Στο ίδιο υμένα, SnoN ήταν κυρίως εντοπισμένη στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων στον συνδετικό ιστό, αλλά μπορεί επίσης να ανιχνευθεί στον πυρήνα ορισμένων ινοβλαστών. Τα αιμοφόρα αγγεία που εκφράζονται SnoN σε υψηλό επίπεδο, και η σκελετικό μυ του βλεννογόνου muscularis είχε την υψηλότερη χρώση SnoN (Σχήμα 1Α). Έτσι, SnoN εκφράζεται και στις δύο επιθηλιακά κύτταρα και στρωματικά του διαμερίσματος, και δεδομένου υψηλά επίπεδα έκφρασης στους μυς, τα αιμοφόρα αγγεία και ινοβλάστες, μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της μικροπεριβάλλον στρωματικών.

SnoN έκφραση σε η κανονική οισοφάγου, συμπεριλαμβανομένων των άνωθεν της βασικής διαφοροποιημένων πλακωδών επιθηλιακών κυττάρων, το ίδιο υμένα (στρώμα και του συνδετικού ιστού), και muscularis βλεννογόνο (λείου μυός). Ε: επιθηλιακά κύτταρα? F: ινοβλάστες? Β.ν.? αιμοφόρο αγγείο. Αρνητικός μάρτυρας: ιστός χρωματίστηκαν με δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο μόνο και χωρίς πρωτογενές αντίσωμα. ελέγχου πεπτίδιο: ιστού βάφονται με τον έλεγχο πεπτίδιο ανταγωνισμό SnoN. Πράσινο: SnoN? μπλε, DAPI. Β, η έκφραση Αντιπρόσωπος SnoN στο φυσιολογικό ιστό ωοθηκών. Ε: ωοθυλακιοτρόπο επιθηλιακά κύτταρα? S: στρώμα. Το αριστερό πάνελ είναι DAPI κηλίδα μόνο (μπλε), το μεσαίο πάνελ είναι SnoN λεκέ μόνο (πράσινο), καθώς και το δικαίωμα του πίνακα είναι SnoN (πράσινο) συν DAPI (μπλε) λεκέδες. Ίδιο ισχύει και για πάνελ ψηφίο C-D. C, η έκφραση Εκπρόσωπος SnoN στην κανονική πάγκρεας. Ε: acinar επιθηλιακά κύτταρα? S: στρωματικά κύτταρα του λοβιακά διαφράγματα συνδετικού ιστού. D, η έκφραση Εκπρόσωπος SnoN στην κανονική του μαστού. Ε: επιθηλιακά κύτταρα των αγωγών και lobuli? S:. Στρώμα

Η

Στο φυσιολογικό ιστό ωοθήκης, SnoN ήταν κυρίως κυτταροπλασματική και εκφράζεται σε μέτρια επίπεδα στα αρχέγονη και της πρωτογενούς επιθηλιακά κύτταρα των ωοθυλακίων και στρωματικά κύτταρα (Εικόνα 1Β). Στις κανονικές πάγκρεας, SnoN ήταν παρούσα στο κυτταρόπλασμα των επιθηλιακών κυττάρων του acini και ενδολόβιες αγωγοί σε μέτρια επίπεδα, και στην λοβιακό διαφράγματα συνδετικού ιστού σε χαμηλότερο επίπεδο (Σχήμα 1 C). Τέλος, σε φυσιολογικούς ιστούς στήθους, SnoN εκφράστηκε στο κυτταρόπλασμα των επιθηλιακών κυττάρων των lobuli και τερματικού αγωγούς (Σχήμα 1D), παρόμοιο με αυτό που έχει αναφερθεί πριν από [8], [12]. Επίσης ανιχνεύθηκε στο στρώμα σε χαμηλότερο επίπεδο. Έτσι, SnoN είναι παρούσα σε όλες τις επιθηλιακών και στρωματικών στρώματα αυτών των τεσσάρων φυσιολογικό τύπους ιστού σε διάφορα επίπεδα. Στα επιθηλιακά κύτταρα όλων των τύπων ιστών, SnoN εντοπίζεται κυρίως στο κυτταρόπλασμα. Αυτό είναι σύμφωνο με προηγούμενα ευρήματα μας [8], [12].

Έκφραση SnoN είναι μειωμένη σε χαμηλότερη ποιότητα αδενοκαρκινώματος του οισοφάγου, αλλά συγκρίσιμη με αυτή WT ιστοί στον όγκο υψηλού βαθμού Stroma

συνέχεια εξετάσαμε τα επίπεδα έκφρασης SnoN και μοτίβα σε 39 δείγματα οισοφαγικού adencarcinoma ιστού με χρώση ανοσοφθορισμού που ακολουθείται με συνεστιακή απεικόνιση τόσο σε 20Χ και 40Χ μεγέθυνση και συγκρίνεται με τους ότι στα φυσιολογικά δείγματα ταιριάζουν. Αυτά οισοφάγου δείγματα αδενοκαρκινώματος έχουν χαρακτηριστεί κλινικά από το βαθμό Ι έως ΙΙΙ. Συγκεκριμένα, η πολυεπίπεδη δομή των ιστών φαίνεται στο φυσιολογικό οισοφαγικό ιστό έχει χαθεί εντελώς σε αυτά τα δείγματα αδενοκαρκινώματος, και τα στρωματικά κύτταρα του όγκου που διανθίζονται με επιθήλιο του όγκου. ημι-ποσοτική ανάλυση μας έδειξαν ότι σε σύγκριση με την κανονική πλακώδες επιθήλιο, η έκφραση SnoN ήταν σημαντικά μειωμένη σε βαθμό Ι (ρ = 0,00016) και σε μικρότερο βαθμό, βαθμού II όγκους (ρ = 0.142) (Σχήμα 2Α και 2Β). Είναι ενδιαφέρον ότι, καθώς οι όγκοι εξελίχθηκαν σε μια πιο κακοήθη στάδιο (βαθμός III), η έκφραση SnoN ανακτηθεί σταδιακά σε επίπεδο συγκρίσιμο ή υψηλότερο από ότι σε φυσιολογικούς ελέγχους (δύο αντιπροσωπευτικά δείγματα, το ένα παρόμοιο με κανονικό και ένα υψηλότερο δείχνονται στο Σχήμα 2Α). SnoN έκφραση στα στρωματικά κύτταρα και το συνδετικό ιστό του βαθμού Ι και II όγκοι μειώθηκαν επίσης σημαντικά από ότι σε φυσιολογικούς ιστούς. Grade III στρώματος του όγκου, ωστόσο, παρουσίασαν σημαντική αυξητική ρύθμιση της έκφρασης SnoN από βαθμού Ι όγκους (ρ = 0,0068), φθάνοντας σε ένα επίπεδο παρόμοιο με και σε 55% των δειγμάτων, υψηλότερο από ότι σε φυσιολογικούς ιστούς (τελευταία πάνελ, Σχήμα 2Α) , ιδιαίτερα σε διηθητικά ινοβλάστες και φλεγμονώδη κύτταρα (λεμφοκύτταρα, λευκοκύτταρα και φαγοκύτταρα) (Σχήμα 2Α και 2C). Ωστόσο, λόγω των μεγάλων διακυμάνσεων μεταξύ των επιμέρους δειγμάτων βαθμού III, η μέση μεταβολή στο στρώμα επίπεδα SnoN έναντι εκείνης στους ιστούς WT δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Αξιοσημείωτα, SnoN παρέμεινε σε μεγάλο βαθμό κυτταροπλασματικής σε αυτά τα δείγματα όγκων. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι η έκφραση SnoN ρυθμίζεται μειωτικά σε ασθενείς με βαθμό αδενοκαρκινώματος του οισοφάγου χαμηλή αλλά η έκφρασή του αποκαθίσταται σε υψηλή όγκους βαθμό, ιδιαίτερα στο στρώμα (για λεπτομερή αριθμών, βλέπε Πίνακα 1). Αυτό υποδηλώνει ότι η έκφραση SnoN μπορεί να διαφέρουν σε διαφορετικά στάδια της κακοήθειας και ότι SnoN μπορεί να παίξει διαφορετικούς ρόλους κατά τα διάφορα στάδια της ογκογένεσης.

Α, χρώση του οισοφάγου καρκίνου των διαφόρων βαθμών σε 20Χ (κορυφή) ή 40Χ Εκπρόσωπος SnoN ( κάτω) μεγεθύνσεις. Δύο βαθμού ΙΙΙ δείγματα που αντιπροσωπεύουν διαφορετικά επίπεδα έκφρασης SnoN παρουσιάστηκαν. Ε: επιθήλιο? S: στρώμα. Πράσινο: SnoN? μπλε, DAPI. Β, SnoN χρώση σε φυσιολογικά και καρκινικά επιθηλιακά κύτταρα προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας το λογισμικό J Image και οι αριθμοί χαράχθηκαν στο οικόπεδο κουτί, το οποίο περιλαμβάνει φυσιολογικά δείγματα (n = 36, μέση ένταση = 1,13) και του οισοφάγου δείγματα όγκων του βαθμού Ι (n = 8, μέσος όρος = 0,07), II (η = 19, μέσος όρος = 0,71), και III (η = 11, μέσος όρος = 1,26). Η στατιστική ανάλυση συγκρίνοντας τους φυσιολογικούς μάρτυρες σε κάθε βαθμό του όγκου έδειξε ότι τα επίπεδα επιθηλιακά SnoN στο οισοφαγικό αδενοκαρκίνωμα είναι σημαντικά ασθενέστερη (βαθμός Ι: p = 0,0002) ή παρόμοιων (Βαθμός II: p = 0,1425 και βαθμού ΙΙΙ: p = 0,3349) με εκείνη του ο έλεγχος φυσιολογικά δείγματα. Η αύξηση των επιθηλιακών έκφραση SnoN βαθμού ΙΙΙ σε σύγκριση με το βαθμό που ήταν στατιστικά σημαντική (p = 0,0013). C, Ποσοτικοποίηση του SnoN χρώσης στρωματικών σε φυσιολογικά δείγματα (η = 27, μέσος όρος = 1,69) και του οισοφάγου όγκου δείγματα βαθμού Ι (n = 5, μέσος όρος = 0,23), II (η = 19, μέσος όρος = 1,09), και III ( n = 11, μέσος όρος = 1,78). Η στατιστική ανάλυση συγκρίνοντας τα κανονικά συγκριτικά σε κάθε οισοφάγου βαθμός όγκου είναι ως εξής: ρ = 0,0023 για βαθμός Ι, ρ = 0.8565 για II, και ρ = 0,1132 για βαθμού III. Η αύξηση στην έκφραση στρωματικά SnoN βαθμού II (p = 0,0287) και του βαθμού III (p = 0,0068) σε σύγκριση με όγκους βαθμού στρώμα Ι του όγκου ήταν στατιστικά σημαντική.

Η

SnoN Η έκφραση Μειωμένη Κάτω Βαθμολογία ωοθηκών αδενοκαρκίνωμα ιστοί αλλά αυξημένα σε υψηλού βαθμού Tumor Stroma

Παρόμοια με ό, τι έχει παρατηρηθεί σε καρκίνο του οισοφάγου, η έκφραση SnoN ήταν προς τα κάτω σε βαθμό Ι και, σε μικρότερο βαθμό, βαθμού ΙΙ δείγματα ωοθηκών αδενοκαρκίνωμα τόσο επιθήλια όγκου και στρώμα (Σχήμα 3 και Πίνακας 1), αλλά ανέκαμψε και πάλι σε τάξη III όγκους. III δείγματα ωοθήκης αδενοκαρκίνωμα βαθμού έδειξαν ετερογένεια στην έκφραση SnoN, με το 60% των δειγμάτων που εμφανίζουν μια υψηλότερη χρώση SnoN (τελευταία πάνελ, Σχήμα 3Α) από τους φυσιολογικούς ιστούς και άλλοι παρουσιάζουν μια ασθενέστερη χρώση SnoN (πίνακας # 4, Σχήμα 3Α). Ως αποτέλεσμα αυτής της ετερογένειας, στατιστική ανάλυση έδειξε ότι δεν υπήρχε συνολική διαφορά στην έκφραση SnoN μεταξύ φυσιολογικού ιστού των ωοθηκών και δείγματα όγκου βαθμού III. Ωστόσο, σε σύγκριση με τις χαμηλότερες δείγματα όγκων βαθμό, το διαμέρισμα στρωματικά των δειγμάτων όγκου βαθμού III έδειξαν μια πολύ ισχυρότερη χρώση SnoN (Σχήμα 3Α και 3C). Αυτά τα στρωματικά κύτταρα ταυτοποιήθηκαν με παθολόγους ως διηθητικά ινοβλάστες και φλεγμονώδη κύτταρα. Και πάλι, SnoN παρέμεινε σε μεγάλο βαθμό κυτταροπλασματικής σε αυτά τα δείγματα όγκων. Έτσι, παρόμοια με αυτή που έχει παρατηρηθεί με καρκίνο του οισοφάγου, η έκφραση SnoN στον καρκίνο των ωοθηκών φάνηκε επίσης να είναι χαμηλότερη σε πρώιμα στάδια της κακοήθη πρόοδο.

Α, έκφραση Αντιπρόσωπος SnoN στον φυσιολογικό ιστό των ωοθηκών και σε αδενοκαρκίνωμα ωοθηκών διάφορες ποιότητες όγκου 20Χ (κορυφή) ή 40Χ (κάτω) μεγεθύνσεις. Δύο βαθμού ΙΙΙ δείγματα που αντιπροσωπεύουν διαφορετικά επίπεδα έκφρασης SnoN παρουσιάστηκαν. Ε: επιθήλιο? S: στρώμα. Πράσινο: SnoN? μπλε, DAPI. Β, χρώση SnoN σε φυσιολογικά και ωοθηκών επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό J Image και οι αριθμοί χαράχθηκαν στο οικόπεδο κουτί, το οποίο περιλαμβάνει κανονικά δείγματα (η = 10, μέσος όρος = 1,28) και τα δείγματα των ωοθηκών των όγκων του βαθμού Ι (n = 11, μέσος όρος = 0,55), το στάδιο ΙΙ (n = 29, μέσος όρος = 1,05), και το στάδιο ΙΙΙ (n = 25, μέσος όρος = 2,04). Στατιστική ανάλυση συγκρίνοντας τα κανονικά συγκριτικά σε κάθε βαθμό του όγκου έδειξε ότι τα επίπεδα επιθηλιακά SnoN σε αδενοκαρκίνωμα των ωοθηκών είναι ίσα ή ασθενέστερες από τα δείγματα ιστού μάρτυρα: ρ = 0,6139 για βαθμός Ι, ρ = 0.7984 για II, και ρ = 0,1461 για III. Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των δειγμάτων του όγκου των ωοθηκών. C, χρώση SnoN σε στρωματικά κύτταρα σε φυσιολογικά δείγματα (η = 10, μέσος όρος = 1,38) και του όγκου των ωοθηκών δείγματα βαθμού Ι (n = 7, μέσος όρος = 0,61), II (η = 23, μέσος όρος = 0,81), και III ( n = 20, μέσος όρος = 2,00). Η στατιστική ανάλυση συγκρίνοντας τα κανονικά συγκριτικά σε κάθε βαθμό του όγκου των ωοθηκών είναι ως εξής: ρ = 0,5997 για βαθμός Ι, ρ = 0.3633 για το βαθμό II, και ρ = 0,1833 για βαθμού III. Η αύξηση στην έκφραση στρωματικά SnoN βαθμού ΙΙΙ σε σύγκριση με το βαθμό ΙΙ (p = 0,0258) ήταν στατιστικά σημαντική.

Η

Έκφραση SnoN μειώνεται στο αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος δείγματα

Το παγκρεατικό καρκίνο συστοιχία ιστού περιέχει πολλαπλούς τύπους αδενοκαρκίνωμα των τριών κλινικών βαθμών (Ι-ΙΙΙ), συμπεριλαμβανομένων των πόρου adenocalarcinoma, βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα, καρκίνωμα νευροενδοκρινικά, αδενοχοληδωτό καρκινώματα, καρκινοειδή, και τα στερεά ψευδο-θηλώδες καρκίνωμα. Σε όλα τα δείγματα του παγκρέατος καρκίνο και στις τρεις τάξεις του όγκου, SnoN ήταν κυτταροπλασματική και εκφράστηκε σε χαμηλότερο επίπεδο από εκείνο των κανονικών δειγμάτων ίδιας ηλικίας (Σχήμα 4Α-4Β και Πίνακας 1). Σε όλες τις κατηγορίες των όγκων, η έκφραση SnoN ήταν η υψηλότερη στην III αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος στάδιο (Σχήμα 4Β). Ωστόσο, αυτή η αύξηση δεν ήταν πάνω από τις κανονικές ελέγχους ιστού. Το διαμέρισμα στρωματικό όγκο δεν είχε ένα υψηλότερο χρώση SnoN από το κανονικό στρώμα (Σχήμα 4Α και 4C). Έτσι, κανένας από τους ιστούς όγκου ήταν SnoN εκφράζεται σε υψηλότερο επίπεδο από εκείνο που σε φυσιολογικούς ιστούς, σε συνέπεια με ένα ρόλο καταστολέα όγκων του SnoN στον καρκίνο του παγκρέατος.

Α, έκφραση Αντιπρόσωπος SnoN στην κανονική πάγκρεας και σε παγκρεατικά αδενοκαρκίνωμα διάφορους βαθμούς σε 20Χ (κορυφή) ή 40Χ (κάτω) μεγεθύνσεις. Ε: επιθήλιο? S: στρώμα. Πράσινο: SnoN? μπλε, DAPI. Β, χρώση SnoN σε κανονικά και παγκρεατικά επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Image J, και οι αριθμοί χαράχθηκαν στο οικόπεδο κουτί, το οποίο περιλαμβάνει κανονικά δείγματα (η = 5, μέσος όρος = 3,08) και τα δείγματα παγκρεατικού όγκου του βαθμού Ι (n = 21, μέσος όρος = 1,89), βαθμού ΙΙ (n = 59, μέσος όρος = 1,59), και του βαθμού ΙΙΙ (n = 8, μέσος όρος = 2,09). έκφραση SnoN σε δείγματα όγκων ήταν ασθενέστερη από ότι σε φυσιολογικά δείγματα του παγκρέατος (p = 0,0855 για βαθμός Ι, ρ = 0.0125 για II, και ρ = 0,0518 για III). Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε σε επιθηλιακά χρώση SnoN μεταξύ των δειγμάτων παγκρεατικού όγκου. C, χρώση SnoN σε κανονικές (η = 2, μέσος όρος = 1,87) και τα δείγματα στρωματικά όγκου του βαθμού Ι (n = 20, μέσος όρος = 2,10), II (η = 55, μέσος όρος = 1,70), και III (η = 8, μέσος όρος = 1,57). Δεν υπάρχει στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των δειγμάτων όγκου και κανονικό στρώμα.

Η

Έκφραση SnoN μειώνεται σημαντικά στην μαστού πορογενές αδενοκαρκίνωμα

Η σειρά καρκίνου του μαστού ιστός περιέχει διπλές βιοψίας δείγματα από ασθενείς με διείσδυση πορογενές καρκίνωμα του μαστού των σταδίων ΙΙ και ΙΙΙ και μεταστατικό καρκίνωμα στους λεμφαδένες. Προς έκπληξή μας, τα επίπεδα SnoN δεν ήταν αυξημένα σε κανένα από τα δείγματα όγκου (Σχήμα 5Α-5Β και Πίνακας 1). Αντίθετα, τα επίπεδα SnoN ήταν σημαντικά χαμηλότερα από τα δείγματα ελέγχου και δεν παρατηρήθηκε συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του και την παρουσία μεταστάσεων λεμφαδένα (Εικόνα 5Β). SnoN εκφράστηκε σε υψηλά επίπεδα σε πολύ λίγα δείγματα και ήταν κυρίως κυτταροπλασματική. Για τα περισσότερα από τα δείγματα όγκων, η έκφραση SnoN στο στρώμα ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στα φυσιολογικά δείγματα ελέγχου (Σχήμα 5Α και 5C).

Α, έκφραση Αντιπροσωπευτικά SnoN στις κανονικές και του πόρου του μαστού δείγματα αδενοκαρκινώματος 20Χ (κορυφή) ή 40Χ (κάτω) μεγεθύνσεις. Ε: επιθήλιο? S: στρώμα. Πράσινο: SnoN? μπλε, DAPI. Β, χρώση SnoN σε κανονικές (η = 6, μέσος όρος = 1,59) και όγκου μαστού επιθηλιακά κύτταρα του βαθμού II (n = 9 για ΙΙΑ και η = 3 για ΙΙΒ, μέσος όρος = 0), βαθμού III (η = 10 για ΙΙΙΑ και n = 5 για IIIC, μέσος όρος = 0), και μεταστατικό δείγματα (η = 10, μέσος όρος = 0). Η μείωση της έκφρασης SnoN σε δείγματα όγκων σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς έχει μια τιμή ρ 0,0966 για βαθμού II, 0,0430 για βαθμού III, και 0.0321 για τα μεταστατικά δείγματα. C, χρώση SnoN σε στρωματικά κύτταρα από φυσιολογικά (n = 6, μέσος όρος = 1,35) και τα δείγματα όγκων του μαστού βαθμού II (n = 9 για ΙΙΑ και η = 3 για ΙΙΒ, μέσος όρος = 0), βαθμού III (η = 10 για ΙΙΙΑ και n = 5 για IIIC, μέσος όρος = 0,38), και μεταστατικό δείγματα (η = 10, μέσος όρος = 0). Οι τιμές ρ για κάθε όγκου /φυσιολογικό σύγκριση ήταν 0,3340 για το βαθμό ΙΙ, 0,1647 για το βαθμό III, και 0,0695 για τις μεταστατικό δείγματα. Α, Αντιπροσωπευτικές SnoN έκφραση από ένα κανονικό τμήμα του στήθους και το τμήμα DCIS που λαμβάνονται από τον ίδιο ασθενή. Πράσινο: SnoN? μπλε, DAPI.

Η

Για να ελεγχθεί η πιθανότητα ότι SnoN μπορεί να είναι αυξημένα κατά τα πρώτα στάδια της ογκογένεσης, αλλά μειωμένη σε προχωρημένο στάδιο της κακοήθους εξέλιξης, συλλέξαμε και βάφονται 24 ανθρώπινα δείγματα DCIS και ταιριάζουν φυσιολογικούς ιστούς τους έκφραση SnoN. Είναι ενδιαφέρον ότι, αν και σε κάθε μεμονωμένο κύτταρο στους ιστούς DCIS, το επίπεδο της έκφρασης SnoN ήταν παρόμοια με ή σε μερικές περιπτώσεις, χαμηλότερη από ότι σε κύτταρα σε φυσιολογικούς ιστούς, οφείλεται σε μια σημαντικά αυξημένη επιθηλιακό περιεχόμενο στα δείγματα DCIS, το συνολικό επίπεδο SnoN σε ολόκληρη ιστό ήταν πολύ υψηλότερη από ότι σε φυσιολογικούς ιστούς (Σχήμα 5D). Έτσι, η συνολική αύξηση του επιπέδου SnoN σε δείγματα DCIS αντανακλά τις σημαντικά αυξημένες επιθηλιακά περιεχόμενα σε αυτούς τους ιστούς αλλά όχι η προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης SnoN σε μεμονωμένα κύτταρα.

Στο σύνολό τους, σε αντίθεση με παλαιότερα προτείνει, η έκφραση SnoN μειώνεται σε χαμηλότερες βαθμός κακοήθεις όγκοι του οισοφάγου, του μαστού, του παγκρέατος και των ωοθηκών (Πίνακας 1). Σε οισοφάγου και του καρκίνου των ωοθηκών, και σε μικρότερο βαθμό στον καρκίνο του παγκρέατος, της έκφρασης SnoN σταδιακά ανακτάται σε όγκους βαθμού III.