Αφηρημένο

Ένας από τους πιο σημαντικούς παράγοντες για την επιλογή μιας στρατηγικής θεραπείας για τον καρκίνο είναι ο χαρακτηρισμός των βιοδεικτών σε καρκινικά κύτταρα. Ιδιαίτερα, οι πρόσφατες εξελίξεις στην μονοκλωνικά αντισώματα (ΜΑΒ) ως φάρμακα πρωτοβάθμιας συγκεκριμένη στόχευση υποδοχέων του όγκου δείχνουν ότι η αποτελεσματικότητα τους εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τον χαρακτηρισμό των βιοδεικτών όγκου. Εκτίμηση της κατάστασης τους σε μεμονωμένους ασθενείς θα διευκολύνει την επιλογή ενός βέλτιστη στρατηγική θεραπείας, και η συνεχής παρακολούθηση αυτών των βιοδεικτών και τη διαδικασία πρόσδεσης τους στην θεραπεία θα παρέχουν ένα μέσο για την έγκαιρη αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπευτικής παρέμβασης. Στην παρούσα μελέτη έχουμε καταδείξει για πρώτη φορά σε ζώντα ζώα τα οποία η διάρκεια ζωής του φθορισμού μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ανιχνεύσει την δέσμευση του στοχευμένη οπτικών ανιχνευτών στις εξωκυτταρικούς υποδοχείς επί κυττάρων όγκου

in vivo

. Το σκεπτικό ήταν ότι διάρκεια ζωής φθορισμού ενός ειδικού ανιχνευτή είναι ευαίσθητο σε τοπικό περιβάλλον και /ή συγγένεια σε άλλα μόρια. Εμείς συνημμένη εγγύς υπέρυθρο (NIR) φθορίζοντες ανιχνευτές για ανθρώπινος επιδερμικός αυξητικός παράγοντας 2 (HER2 /neu) -ειδικές Affibody μόρια και χρησιμοποιήθηκαν χρονικά επιλυθεί μας οπτικό σύστημα να συγκρίνει την διάρκεια ζωής φθορισμού των οπτικών ανιχνευτές που δεσμεύονται και μη δεσμευμένο στα κύτταρα του όγκου σε ζώντα ποντίκια. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι φθορισμού ζωής αλλαγές στο σύστημα μας μοντέλο οριοθετηθούν υποδοχέα HER2 δεσμεύεται από το μη συνδεδεμένο καθετήρα

in vivo

. Έτσι, η μέθοδος αυτή είναι χρήσιμη ως ειδικός δείκτης της διαδικασίας σύνδεσης υποδοχέα, η οποία μπορεί να ανοίξει ένα νέο παράδειγμα στο «εικόνα και τη θεραπεία» έννοια, ειδικά για έγκαιρη αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας

Citation.: Ardeshirpour Υ, Chernomordik V, Zielinski R, Capala J, Griffiths G, Vasalatiy O, et al. (2012)

In Vivo

φθορισμού Οθόνες Lifetime Imaging δέσμευση του ειδικούς ανιχνευτές για τον Καρκίνο Biomarkers. PLoS ONE 7 (2): e31881. doi: 10.1371 /journal.pone.0031881

Επιμέλεια: Irina V. Λεμπέντεβα, Enzo Life Sciences, Inc., Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 16 Ιουνίου 2011? Αποδεκτές: 19 του Ιανουαρίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 23 Φεβρουαρίου 2012

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Η έρευνα αυτή υποστηρίζεται από το εσωτερικό ερευνητικό πρόγραμμα της Eunice Kennedy Shriver Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας του Παιδιού και Ανθρώπινης Ανάπτυξης και από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου , Imaging Κέντρο Probe Ανάπτυξης, Εθνικό Ινστιτούτο Καρδιάς, πνευμόνων και αίματος Ινστιτούτο, Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας. Όπως YA, RF, VC, JC, GG, OV, AS, JK, IL, AG και MH είναι υπάλληλοι των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας? Αυτό χρηματοδότη έπαιξε ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, η συλλογή και ανάλυση δεδομένων, απόφαση για τη δημοσίευση, και την προετοιμασία του χειρογράφου. Οι άλλοι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

εισαγωγή

Ένας από τους πιο σημαντικούς παράγοντες για την επιλογή μιας κατάλληλης στρατηγικής θεραπείας για τον καρκίνο είναι ο χαρακτηρισμός των βιοδεικτών σε καρκινικά κύτταρα, και αυτό μπορεί να είναι μάλλον δύσκολο. Ιδιαίτερα, οι πρόσφατες εξελίξεις σε μονοκλωνικά αντισώματα (ΜΑΒ) ως πρωτογενές-ειδικά φάρμακα, που στοχεύουν υποδοχείς όγκου, δείχνουν ότι η αποτελεσματικότητα τους εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την υπερέκφραση του ειδικούς υποδοχείς.

Επιπλέον, ένας από τους σημαντικότερους παράγοντες που συχνά λείπει από θεραπεία του καρκίνου (κυρίως χρησιμοποιώντας ΜΑΒ) είναι συνεχής παρακολούθηση της ανταπόκρισης των υποδοχέων του όγκου στη θεραπεία, ειδικά στα πρώτα στάδια, για να ποσοτικοποιηθεί η διαδικασία δέσμευσης, η οποία είναι κρίσιμη για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του φαρμάκου.

Current πρότυπο

ex vivo

μεθόδους, π.χ., ανοσοϊστοχημεία (IHC), γονιδιακή ενίσχυση αποδείχθηκε από Fluorescent

Ιη Situ Hybridization

(FISH), και ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA), είναι επεμβατικές και απαιτούν από βιοψίες οι ασθενείς. Εγγενώς, βιοψίες έχουν τον κίνδυνο της λείπει το κακοήθη βλάβη και, κατά τη διάρκεια του θεραπευτικού κύκλου, ο αριθμός των φορών που μπορεί να ληφθεί η βιοψία είναι περιορισμένη [1]. Εναλλακτικές μέθοδοι επί του παρόντος υπό εξέταση με βάση την φαρμακοκινητική του ραδιονουκλιδίου ανιχνευτών σε ΡΕΤ μετά την ένεση στην κυκλοφορία του αίματος [2].

In vivo

φθορισμός απεικόνισης είναι μια εναλλακτική τεχνική μη επεμβατική απεικόνιση, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθούν ξεχωριστά ή σε adjunction με άλλους τρόπους για την έγκαιρη παρακολούθηση της βιοδεικτών κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Αυτή η μέθοδος είναι απλή και φορητές συσκευές.

Οι πρόσφατες εξελίξεις στην φθορισμού ανιχνευτές, στόχευση συγκεκριμένων βιοδεικτών της νόσου, έχουν ανοίξει μια νέα εποχή στο

in vivo

φθορισμού απεικόνισης. Το ένα πολλά υποσχόμενο εργαλείο για την ιατρική διάγνωση κάνει [3] – [8]. Ιδιαιτέρως, η ανάπτυξη του εγγύς υπερύθρου (NIR) φθοριζόντων ανιχνευτών έχει βελτιώσει σημαντικά την ικανότητα της απεικόνισης του

in vivo

φθορισμού, λόγω των χαμηλών φόντο αυτοφθορισμό και βαθιά διείσδυση του φωτός NIR στον ιστό [9].

απεικόνισης φθορισμού μπορεί να πραγματοποιηθεί με τη μορφή μέτρηση των κατανομών έντασης φθορισμού ή /και τη διάρκεια ζωής του φθορισμού [10] – [18]. απεικόνιση της ζωής του φθορισμού βασίζεται στην αξιολόγηση του μέσου χρόνου που ηλεκτρονικά ενθουσιασμένοι φθοροφόρο παραμένει στη διεγερμένη κατάσταση πριν από τη μετάβασή της σε μια θεμελιώδη κατάσταση, που συνοδεύεται από εκπομπή φωτονίων. Ο φθορισμός διάρκεια ζωής μπορεί να μετρηθεί με τεχνικές στο πεδίο του χρόνου ή στο πεδίο των συχνοτήτων [19] – [22]. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε την ακριβέστερη πρώην μέθοδος και μέτρησαν την εκθετική παροδική αποσύνθεση της έντασης φθορισμού με το χρόνο μετά την εξέταση του αποτελέσματος της παλμικής απόκρισης του συστήματος. Έχει δειχθεί ότι διάρκεια ζωής φθορισμού είναι ανεξάρτητη από τη συγκέντρωση των φθοροφόρων και η ένταση του φωτός διέγερσης. Ο φθορισμός διάρκεια ζωής μπορεί να παραμένει σταθερή ακόμη και εντός πενταπλάσια διακύμανση στην ένταση του φωτός διέγερσης [23]. Από την άλλη πλευρά, μπορεί να είναι ευαίσθητη στις τοπικές βιοχημικό περιβάλλον, π.χ., τη θερμοκρασία και το ρΗ ή μοριακές αλληλεπιδράσεις [24], [25]. Αυτή η ιδιότητα καθιστά τη διάρκεια ζωής του φθορισμού απεικόνιση ενός υποσχόμενος υποψήφιος για την ανίχνευση και την παρακολούθηση ειδικούς υποδοχείς του καρκίνου στη διάγνωση και τη θεραπεία ασθενειών. Μια άλλη σημαντική εφαρμογή της τεχνικής αυτής είναι να διερευνηθεί η αποτελεσματικότητα της ανταπόκρισης στη θεραπεία πρώιμης φάσης με παρακολούθηση της δέσμευσης των μορίων του φαρμάκου στα κύτταρα του όγκου.

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε στόχο το ανθρώπινος επιδερμικός αυξητικός παράγοντας 2 (HER2 /neu) υποδοχέα, ο οποίος είναι ένας από τους σημαντικούς βιοδεικτών σε πολλούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του μαστού και των ωοθηκών [26]. Η υπερέκφραση αυτού του υποδοχέα συσχετίζεται με κακή πρόγνωση και την αντίσταση σε συγκεκριμένες χημειοθεραπείες [27]. Για να βελτιστοποιηθεί η διαδικασία της θεραπείας, είναι σημαντικό να εκτιμηθεί η έκφραση του υποδοχέα HER2 στη διαγνωστική διαδικασία και να την

in vivo

παρακολούθηση κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Να αξιολογήσει την κατάσταση αυτού του υποδοχέα, εφαρμόσαμε μια HER2-ειδική Affibody συζευγμένο με εγγύς υπέρυθρο (NIR) φθορίζουσα χρωστική.

Αν και αρκετές πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει βελτιωμένη αναλογία σήματος /θορύβου για

in vivo

φθορισμού απεικόνισης από τον εγκλωβισμό των βαφών φθοροφόρο χρησιμοποιώντας Polymersomes [28], οι νανοσωλήνες [29] ή με τη χρήση νανοσωματιδίων [30] ως εναλλακτική λύση για μια ενιαία φθοροφόρα μόριο, συζευγμένο Affibody-DyLight750, διερευνήθηκε στο χειρόγραφο, φαίνεται να είναι μια καλύτερη ταιριάζει ανιχνευτής για ο στόχος μας, δηλαδή, ο χαρακτηρισμός του HER2 υποδοχέων υπερέκφραση σε όγκους

InVivo

Η

Affibody μόρια [31] – [34]. είναι πολύ σταθερές πρωτεΐνες. Είναι σχετικά μικρό (8,3 kDa), περίπου 20 φορές μικρότερο από τα αντισώματα. Όπως και κάθε άλλα μικρά μόρια, μπορούν να συσσωρεύονται στον όγκο μέσω των leaky αγγειώσεις του όγκου. μείζονα διαγνωστικά πλεονέκτημά τους είναι ότι μπορούν να γίνουν εξαιρετικά ειδικό για συγκεκριμένους υποδοχείς των καρκινικών κυττάρων, για παράδειγμα, HER2. Μετά τη σύνδεση σε αυτούς τους υποδοχείς, οι ασύνδετος ανιχνευτές ξεπλένονται και κυρίως δεσμευμένα προσδέματα φθορισμού συμβάλλουν στο σήμα από την περιοχή του όγκου σε μετέπειτα χρόνους. Αυτό βελτιώνει σημαντικά την αντίθεση του όγκου, σε σύγκριση με το υπόβαθρο.

Σε προηγούμενη μελέτη μας, έχουμε δείξει ότι οι δυναμικές αλλαγές στα επίπεδα έντασης φθορισμού των HER2-ειδικών Affibody πρωτεΐνες, συζευγμένο με μια φθορίζουσα χρωστική, μπορεί να να χρησιμοποιηθούν για την ποσοτικοποίηση της έκφρασης HER2 σε νεοπλασματικά κύτταρα [35] – [37]. Σχετικά γρήγορη φαρμακοκινητική του συζυγούς Affibody-DyLight750 επιταχύνει τη συλλογή δεδομένων και απλοποιεί την ανάλυσή τους. Η μέθοδος, που παρουσιάζεται στην τρέχουσα χειρόγραφο, αν και λιγότερο ποσοτική στο παρόν στάδιο σε σύγκριση με φαρμακοκινητική ανάλυση, επιτρέπει σε κάποιον να αξιολογήσει την κατάσταση του HER2 του όγκου από μία μόνο φορά επιλυθεί μέτρησης. Δεν απαιτεί επαναλαμβανόμενες μετρήσεις του φθορισμού από τον όγκο μετά την ένεση ανιχνευτή που συνεπάγεται πολύ μεγαλύτερους χρόνους παρατήρησης. Προτεινόμενη προσέγγιση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την προκαταρκτική εκτίμηση της έκφρασης HER2 στον όγκο. Είναι δωρεάν για ποσοτικό χαρακτηρισμό των υποδοχέων HER2, με βάση την φαρμακοκινητική.

Από την άλλη πλευρά, έχει αποδειχθεί σε προηγούμενες μελέτες μας [35], ότι η HER2 Affibody προσδένεται σε ένα διαφορετικό επίτοπο του υποδοχέα HER2 από το επιτόπιο, στοχεύουν τα ευρέως χρησιμοποιούμενα μονοκλωνικά αντισώματα ως τραστουζουμάμπη ή περτουζουμάμπη. Αυτό επιτρέπει την παρακολούθηση της έκφρασης HER2 κατά τη διάρκεια της θεραπείας, χωρίς παρεμβολή με την πιθανή επίδραση των φαρμάκων αυτών [35].

Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε σε ζώντα ζώα αν δεσμεύει τον Affibody συζευγμένο με φθορίζοντα ανιχνευτή με τον υποδοχέα HER2 μπορεί επιρροή διάρκεια ζωής του φθορισμού του ανιχνευτή. Για το σκοπό αυτό, η διάρκεια ζωής του φθορισμού μελετήθηκαν σε τρεις διαφορετικές περιπτώσεις: HER2-ειδική Affibody (His6-Ζ

HER2: GS-Cys) φθορίζοντα ανιχνευτή σε μοντέλα ανθρώπινων όγκων με υψηλή έκφραση HER2, HER2-ειδικό Affibody φθορίζοντα ανιχνευτή σε ένα μοντέλο ανθρώπινου όγκου χωρίς έκφραση HER2, και HER2-μη ειδική Affibody (His

6-Ζ

Taq: GS-Cys) φθορίζοντα ανιχνευτή σε μοντέλα ανθρώπινων όγκων με υψηλή έκφραση HER2, όλα στο μοντέλο ποντικού

σε vivo

. Τα αποτελέσματα αποκαλύπτουν σημαντικές διαφορές στα ζωές φθορισμού μεταξύ της περιοχής του όγκου και το ετερόπλευρο θέση, όταν και μόνον όταν, θα μπορούσε να συμβεί η πρόσδεση του οπτικού ανιχνευτή με τους υποδοχείς του όγκου. Αντίθετα, καμία αλλαγή στη διάρκεια της ζωής του φθορισμού παρατηρήθηκε στις περιπτώσεις όπου οι οπτικές ανιχνευτές δεν έχουν καμία συγγένεια με τους υποδοχείς HER2.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντίθεση Agent

αυτά τα πειράματα, δύο διαφορετικά μόρια Affibody® (Affibody, Στοκχόλμη, Σουηδία) χρησιμοποιήθηκαν: HER2-ειδική Affibody (His6-Ζ

HER2: GS-Cys) και HER2-μη ειδική Affibody (His

6-Z

Taq: GS-Cys), και τα δύο συζευγμένα με την Dylight750 φθορίζοντα ανιχνευτή (Thermo-Fisher-Scientific, Waltham, Massachusetts). Dylight750 είναι αρκετά φωτεινά για να χρησιμοποιηθεί για το

in vivo μελέτες

χωρίς καμία τροποποίηση και μπορεί εύκολα να συζευχθούν με τα HER2 ειδικών /μη ειδική Affibodies. Η αναλογία σύζευξη του Dylight750 να affibody πρωτεΐνη είναι 1:01.

Μετρήσαμε τη διάρκεια ζωής του ανιχνευτή Affibody σε χημική ρυθμιστικά (με μια σύνθεση κιτρικού οξέος, βορικό οξύ, και φωσφορικό μονο-νάτριο που κυμαίνεται από ρΗ 4,5 έως 9. Καμία σημαντική αλλαγή στη ζωή του φθορισμού παρατηρήθηκε σε όλο το εύρος του pH (Εικ. 1Α). αποστειρωμένο διάλυμα φυσιολογικού ορού χρησιμοποιήθηκε για 3 φορές αραίωση του Affibody καθετήρα πριν από την ένεση.

η

Μετρήσαμε επίσης τη διάρκεια ζωής του φθορισμού του ανιχνευτή Affibody σε χημική ρυθμιστικό με ρΗ 6,86 με αύξηση της συγκέντρωσης BSA του από 0% έως 5% (Βόεια Αλβουμίνη ορού, Κλάσμα V, Ελάχιστο 96%, Sigma Co.). η διάρκεια ζωής του ανιχνευτή Affibody αποδείχθηκε ότι είναι ευαίσθητο στην παρουσία πρωτεϊνών BSA (Σχ. 1 Β). δεν έχουμε παρατηρήσει μια μείωση της διάρκειας ζωής του φθορισμού σε σχέση με το Affibody ανιχνευτή, που χρησιμοποιείται για την ένεση.

Κυτταροκαλλιέργεια

Για τις μελέτες σε ζώα, τρία μοντέλα ξενομοσχεύματος ανθρώπινου όγκου που εκφράζουν διαφορετικά επίπεδα HER2 χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. ΒΤ-474 και ΝΟΙ-Ν87 είναι ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές όγκου με ένα υψηλό επίπεδο του HER2 (HER2 /neu) έκφραση: 243 ± 24 ng /mg και 395 ± 41 ng /mg πρωτεΐνης, αντίστοιχα, ενώ MDA-MB-468 είναι ένα ανθρώπινη κυτταρική γραμμή όγκου χωρίς έκφραση HER2. Και οι τρεις κυτταρικές γραμμές ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC? Manassas, VA). Για in-vitro μελέτη, χρησιμοποιήσαμε είτε SK-BR-3 κυτταρική γραμμή με υψηλό επίπεδο έκφρασης HER2 ή HER2-αρνητικού ανθρώπινου καρκίνου κυτταρική σειρά MDA-MB-468. SK-BR-3 έχει επιλεγεί ανάμεσα σε HER2 θετικό κυτταρικές σειρές λόγω της καλύτερης προσήλωσή του στην πλάκα. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε RPMI (ΒΤ-474, NCI-Ν87), DMEM-F12 (SK-BR-3, ΜϋΑ-ΜΒ-468) μέσα καλλιέργειας συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) και Pen /Strep (10000 U πενικιλλίνη, στρεπτομυκίνη 10 mg) στους 37 ° C σε 5% CO

2 σε υγροποιημένο επωαστή. Διάλυμα 0,05% θρυψίνη και 0.02% EDTA χρησιμοποιήθηκε για κύτταρα απόσπαση.

In vitro μελέτη

HER2-θετικού SK-BR-3 και HER2 αρνητικό MDA-ΜΒ -468 κύτταρα τοποθετήθηκαν επί 8 θαλάμων συνεστιακή διαφάνειες και επωάζονται όλη τη νύκτα. Μετά από 24 ώρες επώασης, Affibody-DyLight488-συζυγούς προστέθηκε σε κύτταρα των μέσων ενημέρωσης σε 0,5 μg /ml συγκέντρωση. Μετά από άλλα 30 λεπτά επώασης στους 37 ° C, 2 μg /ml του Hoechst 33342 (Invitrogen, Carlsbad, CA) προστέθηκαν στα κύτταρα και επωάστηκαν για άλλη 1 ώρα για χρώση πυρήνες. Στη συνέχεια, τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές και απεικονίστηκαν σε PBS με Zeiss LSM 510 συνεστιακό μικροσκόπιο (περαιτέρω λεπτομέρειες του πειράματος θα παρουσιαστεί αλλού [στο παρασκεύασμα]). Έχουμε χρησιμοποιήσει δείκτη παρόμοια με Affibody-DyLight750-συζυγούς (Affibody-DyLight488), επειδή Zeiss LSM 510 ομοεστιακό μικροσκόπιο δεν λειτουργεί στο εγγύς υπέρυθρο μήκος κύματος.

Επιπλέον, για την επιβεβαίωση της συνέπειας των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται με Affibody- DyLight750-συζυγούς και την αξιολόγηση της διάρκειας ζωής του Affibody καθετήρα

in vitro

, FLIM μικροσκοπία των κυτταρικών καλλιεργειών έγινε από ένα ειδικά προσαρμοσμένο Ολύμπου FV1000 ανεστραμμένη λέιζερ-σάρωση δύο-φωτονίων μικροσκόπιο [38] για απεικόνιση μέσω μη descanned μονοπάτι ανίχνευσης σε κατάσταση ενός φωτονίου. Ακόμη και αν, αυτές οι τροποποιήσεις μείωσε την ανάλυση βάθους μικροσκόπιο σημαντικά σε σύγκριση με συνεστιακή μικροσκοπία, επέτρεψε να αποδειχθεί σαφώς πρόσδεση του HER2-Affibody-DyLight750-συζυγούς στην εξωτερική μεμβράνη του HER2 θετικών κυττάρων SK-BR-3.

Εν συντομία, για την απεικόνιση, η Όλυμπος Fluoview 1000 galvo-καθρέφτη μικροσκόπιο σάρωσης με λέιζερ είναι εξοπλισμένα με ρυθμιζόμενους ευρείας ζώνης «Mai Tai DeepSee» Ti-Sapphire λέιζερ (από Newport Spectra-Physics) χρησιμοποιήθηκε. Το λέιζερ ρυθμίστηκε σε ενός φωτονίου μήκος κύματος διέγερσης 717 nm (για να ελαχιστοποιηθεί η σκέδαση από διχρωϊκό κάτοπτρο). Ουσιαστική εξασθένηση λέιζερ με ένα συνδυασμό ορθογωνικών πολωτή ασβεστίτη και ένα μεταλλικό φίλτρο ουδέτερης πυκνότητας χρησιμοποιήθηκε για να αποφευχθεί ο κορεσμός του ανιχνευτή και φωτολεύκανση δείγμα. Το δείγμα τοποθετείται σε μια ανεστραμμένη φάση σε μία πλάκα 8 φρεατίων και φωτίζεται με ένα μακρύ-pass 740 – 830 nm διχρωματικού κατόπτρου (FF741-DI01 με Semrock) μέσω ενός υδατο-βύθιση 0,8 NA LUMPlanFl Ν 40 × στόχου από την Olympus. Δύο στοιβάζονται Newport Oriel 51350 χρώμα γυαλιού 780 φίλτρα longpass nm χρησιμοποιήθηκαν μπροστά από ένα κόκκινο-ευαίσθητο Peltier-cooled μονάδα PMT ταχείας ανόδου (Becker & amp? Hickl μοντέλο PMC-100-20) για την εξάλειψη σκέδαση, δεύτερης αρμονικής και κυττάρων αυτοφθορισμού . Δεδομένου ότι ο ανιχνευτής ήταν τοποθετημένα σε μη descanned πλευρική θύρα χωρίς ιδιαίτερη φιλτράρισμα, αποτελεσματικά Z-ανάλυση μειώθηκε σημαντικά υπέρ της απόδοσης συλλογής. Μια φωτοδίοδος ταχείας απόκρισης πυριτίου (Becker & amp? Hickl μοντέλο PHD-400-Ν-12) χρησιμοποιήθηκε για το συγχρονισμό με λέιζερ. Φωτόνιο καταμέτρηση εκδηλώσεις διακρίσεις, που έχει καταχωρηθεί και να ανατίθενται σε θέσεις pixel από Becker & amp? Hickl SPC-830 PCI του σκάφους. Η ανάλυση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε με SPCImage ver. 3.2 λογισμικού από Becker & amp? Hickl. φορές τυπική συσσώρευση των φωτονίων κυμαινόταν 60-300 s απασχολούν γρήγορη λειτουργία αμφίδρομη σάρωση για την περαιτέρω μείωση φωτολεύκανση. Μέσος ρυθμός καταμέτρησης κρατήθηκε καλά κάτω των 2 MHz για την αποφυγή παλμούς στοιβαξη.

Η λειτουργία απόκριση του οργάνου, που παράγεται από θρυμματισμένα κρύσταλλα ουρία σε λάδι, ανιχνεύθηκε ως δεύτερης αρμονικής γενιάς (λέιζερ συντονισμένοι έως 820 nm) μέσω ενός κατάλληλου συνόλου φίλτρων διχροϊκό /εκπομπής και μετράται ως FWHM ~190 ps (στην περίπτωσή μας καθορίζεται από το χρόνο διάδοσης PMT διέλευσης).

Προετοιμασία των ζώων

Για τις μελέτες σε ζώα, τα καλλιεργημένα καρκινικά κύτταρα εμφυτεύθηκαν στο δεξί άνω άκρου του ξένου μοσχεύματος θηλυκών άτριχων ποντικών. Πέντε εκατομμύρια κύτταρα ενέθηκαν σε 0.1 mL 50% Matrigel στο δεξί forelimb. Η μελέτη εγκρίθηκε από Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας των Ζώων και Χρήση Επιτροπής (ID Έγκριση: ROB117). Αφού οι όγκοι αναπτύχθηκαν με το μέγεθος των 0,5-1 cm, οι ποντικοί μεταφέρθηκαν σε εγκαταστάσεις απεικόνισης μας. Πριν απεικόνισης, ο ποντικός αναισθητοποιήθηκε με εισπνοή ισοφλουράνης. Το ποντίκι τοποθετήθηκε σε ένα στάδιο με ελεγχόμενη θερμοκρασία και δύο σύνολα εικόνων από την περιοχή του όγκου και αντίπλευρη θέση συλλήφθηκαν πριν από την ένεση. Στη συνέχεια, 10 μg του Affibody συζευγμένο με φθορίζοντα ανιχνευτή εγχύθηκε μέσω της φλέβας της ουράς. Εικόνες συλλήφθηκαν συνεχώς κάθε 30 λεπτά για τις πρώτες 5 ώρες. Ιστός όγκου εκχυλίζεται από τα ζώα 24 ώρες μετά HER2-Affibody-DyLight750 ένεση, σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη φορμαλίνη απαλλάσσονται από γρέζια (NBF) (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ). Οι όγκοι υπέστησαν χρώση για έκφραση HER2 (HercepTest, Δακο) και Affibody σχέδιο κατανομής.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι οι ενώσεις Affibody-DyLight δεν επάγουν τοξικές επιδράσεις στα κύτταρα καρκίνου του μαστού, όπως αποδεικνύεται από

in vitro

πειράματα με κυτταρικές καλλιέργειες (πειραματικές λεπτομέρειες θα παρουσιαστούν και αλλού [στο πλαίσιο της προετοιμασίας]). Για να επικυρώσετε περαιτέρω τη χαμηλή τοξικότητα του καθετήρα

in vivo

, κρατήσαμε αρκετά ποντίκια με ένεση δόσεις τόσο υψηλές όσο 0,5 mg /kg ζωντανός μέχρι 1 μήνα μετά την ένεση της ένωσης Affibody-DyLight750 χωρίς να τηρηθεί καμία τοξικότητα επιπτώσεις στο ποντίκι.

In-vivo

Lifetime σύστημα απεικόνισης

το

in-vivo

σύστημα απεικόνισης ζωής αποτελείτο από ένα συντονίσιμα λέιζερ παλμών με πλάτος παλμού 100 fs και ρυθμό επανάληψης 80 ΜΗζ. Το λέιζερ συντονίζεται σε ένα μήκος κύματος διέγερσης 750 nm. Οι παλμοί φωτός σαρωθεί το στόχο (όγκο ή ετερόπλευρη περιοχή) ενός ζώου σε ένα πρότυπο ράστερ μέσα από μια κεφαλή σάρωσης με ίνες πηγή και ο ανιχνευτής σε απόσταση 2 mm. Το ζώο τοποθετήθηκε μέσα σε ένα σκοτεινό θάλαμο σε ένα στάδιο σάρωσης ελεγχόμενης θερμοκρασίας. Το ανακλώμενο σήμα φθορισμού φιλτράρεται από ένα φίλτρο εκπομπής μακράς-pass 780 nm. Οι ανιχνεύθηκαν φωτόνια συλλήφθηκαν από ένα σωλήνα φωτοπολλαπλασιαστή (ΡΜΤ) και μετρήθηκαν τα φωτόνια από ένα χρονικά συσχετισμένων μετρητής απλού φωτονίου (TCSPC). Προετοιμασία, τη σάρωση και την απόκτηση ελέγχονταν από το λογισμικό Labview. Οι λεπτομέρειες του συστήματος απεικόνισης μπορούν να βρεθούν στο [15]. Η διάρκεια ζωής του φθορισμού υπολογίστηκε από μια καμπύλη προσαρμογής των δεδομένων σε ένα μόνο λειτουργία εκθετική αποσύνθεση, βελτιστοποιείται με επαναληπτική reconvolution του ενιαίου σάπια εκθετική με τη λειτουργία παλμική απόκριση του συστήματος. Εμείς περικοπεί την ουρά των δεδομένων έντασης ανάλυση χρόνου, χάρη στην πιο επιδεκτικότητα του να μεταφοράς φωτονίων παραλλαγές μονοπάτι. Σε προκλινικές μελέτες μας, αφού ο όγκος βρίσκεται στο ποντίκι forelimb υποδόρια, το βάθος του όγκου δεν έχει σημαντική επίδραση επί της διάρκειας ζωής, ωστόσο, για τις εφαρμογές που ασχολούνται με τις βαθιά ριζωμένες όγκους, το αποτέλεσμα της διάχυσης φωτονίων επί της παρατηρούμενης θα πρέπει να ληφθούν υπόψη χρονικά επιλυθεί εντάσεις φθορισμού.

Αποτελέσματα

In vivo

Μελέτη

Για να διερευνηθεί η επίδραση της δέσμευσης της HER2-ειδικά Affibody φθορίζοντα ανιχνευτή με τον υποδοχέα-θετικών όγκων HER2 για τη διάρκεια της ζωής του φθορισμού, εξετάστηκαν τρεις διαφορετικές περιπτώσεις. Στην πρώτη περίπτωση, ο HER2-ειδική Affibody (His6-Ζ

HER2: GS-Cys) οπτικός ανιχνευτής εγχύθηκε σε ποντικούς με υψηλή καρκινώματα ανθρώπινου όγκου HER2-εκφράζουν. Στη δεύτερη περίπτωση, ένας HER2-μη ειδική Affibody (His

6-Ζ

Taq: GS-Cys) φθορίζοντα ανιχνευτή εγχύθηκε σε ποντικούς με τις ίδιες καρκινώματα ανθρώπινου όγκου HER2-εκφράζοντα όπως στην πρώτη περίπτωση, και η τρίτη υπόθεση, ο HER2 ειδική Affibody (His6-Ζ

HER2: GS-Cys). φθορίζοντα ανιχνευτή εγχύθηκε σε ποντικούς χωρίς HER2-εκφράζοντα καρκινικά

στο πρώτο πείραμα, HER2-ειδική Affibody ήταν ένεση σε τέσσερα ποντίκια με ένα υψηλό επίπεδο (3) καρκίνωμα ανθρώπινου όγκου HER2-εκφράζουν, ΒΤ-474. Σύκο. 2 δείχνει τα αποτελέσματα του

in vivo

μετρήσεις της έντασης φθορισμού και διάρκεια ζωής στην περιοχή του όγκου και το ετερόπλευρο περιοχή. Σύκο. 2C δείχνει τη διαφορά μεταξύ της έντασης φθορισμού στον όγκο (Σχ. 2Α) και τα αντίπλευρα θέσεις (Εικ. 2Β) 1 ώρα μετά την ένεση, χαρτογραφούνται στην περιοχή του όγκου. Σύκο. 2D δείχνει τη δυναμική της μέγιστης έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρο περιοχή για 6 ώρες μετά την ένεση. Το εικονοστοιχείο με τη μέγιστη ένταση χρησιμοποιήθηκε για να χαρακτηρίσει τον όγκο. Η χαρτογράφηση φθορισμού στο ετερόπλευρο περιοχή ήταν κατά μέσο όρο πάνω από 16 pixels δεδομένου ότι δεν υπήρχε συγκεκριμένο σημείο ώστε να στοχεύει στο ετερόπλευρο περιοχή. Μέσου όρου πάνω από 16 εικονοστοιχεία έχει χρησιμοποιηθεί για τη μείωση του θορύβου. Για να καταδείξει τις διαφορές της ζωής και η ένταση του φθορισμού σε όλη την περιοχή σάρωσης που παρουσιάζονται χάρτες της έντασης φθορισμού και της ζωής στα ετερόπλευρα και του όγκου των περιφερειών. Τα δεδομένα που δείχνονται στο Σχ. 2D και το Σχ. 2Η είναι οι μέσες τιμές των μετρήσεων πάνω από 4 ποντίκια (Μαρκαδόροι δείχνουν τον μέσο όρο και μπαρ δείχνουν την τυπική απόκλιση). Σύκο. 2G δείχνει τη διαφορά μεταξύ της διάρκειας ζωής φθορισμού στον όγκο (Σχ. 2Ε) και ετερόπλευρο θέσεις (Σχ. 2F) 1 ώρα μετά την ένεση, χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. Η διάρκεια ζωής του φθορισμού στην περιοχή του όγκου και αντίπλευρη θέση για πάνω από 6 ώρες μετά την ένεση φαίνεται στο Σχ. 2Η. Στα Σχ. 2Η, τα δεδομένα, που αντιστοιχούν στο pixel με μέγιστη ένταση χρησιμοποιήθηκαν για τους υπολογισμούς της ζωής, δεδομένου ότι είχε την υψηλότερη αναλογία σήματος προς θόρυβο.

(Α) ένταση φθορισμού χάρτη στην περιοχή του όγκου. ένταση χάρτη (Β) φθορισμού στο ετερόπλευρο θέση (γ) η διαφορά της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και το ετερόπλευρο τοποθεσία, χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (D) Φαρμακοκινητική της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρα θέση μετά την ένεση με το χρόνο. Η ένταση φθορισμού ήταν κατά μέσο όρο πάνω από 16 εικονοστοιχεία στο ετερόπλευρο περιοχή. Τα δεδομένα στο Σχ. (Δ) και (H) είναι ο μέσος όρος των δεδομένων των τεσσάρων ποντικών. Δείκτες δείχνουν το μέσο όρο και μπάρες δείχνουν την τυπική απόκλιση. (Ε) φθορισμού χάρτη της ζωής στην περιοχή του όγκου. χάρτης της ζωής (F) φθορισμού στο ετερόπλευρο περιοχή. (G) Η διαφορά της διάρκειας ζωής φθορισμού σε όγκο και το αντίπλευρο θέση χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (Ε) Φαρμακοκινητική της φθορίζουσας διάρκεια ζωής στην περιοχή του όγκου και αντίπλευρη θέση μετά την ένεση με το χρόνο. Όλοι οι χάρτες διάρκεια ζωής και η ένταση του φθορισμού στα σχήματα 2,4-7 προέρχονται από μετρήσεις σε 1 ώρα μετά την ένεση του ανιχνευτή Affibody. Σε όλες τις μετρήσεις, τα φωτόνια μετρήθηκαν πάνω από δύο δευτερόλεπτα χρόνο ολοκλήρωσης,

t

0

. Για να εξαιρέσετε κορεσμού επίδραση της φωτογραφικής μηχανής 16 bit, με τα φωτεινότερα pixel, όπου επιτεύχθηκε το αντίστοιχο όριο των 65536 μετρήσεις πριν την ώρα

t

0

, έχουμε επανα τα δεδομένα από τον πολλαπλασιασμό μετρήσεις φωτονίων, που μετρήθηκε για χαμηλότερο χρόνο ολοκλήρωσης

t

, με συντελεστή

t

0 /τ.

η

Σε όλα τα πειράματα, τα δεδομένα συλλήφθηκαν από τις περιοχές του όγκου και ετερόπλευρη συγχρόνως εύρος όπως το πρώτο πείραμα. Για τους χάρτες ένταση φθορισμού και διάρκεια ζωής, επιλέξαμε τα δεδομένα των μετρήσεων στη 1 ώρα μετά την ένεση, που αντιστοιχεί σε μια περίπτωση, όταν σημαντική ποσότητα φθορίζουσες χρωστικές ήταν διαθέσιμα σε δύο ετερόπλευρο και όγκου sites.

Για παράδειγμα, η τοποθέτηση καμπύλες που λαμβάνονται από το λογισμικό SPCImage, (ver 3,2, Becker & amp?. Hickl GmbH) δείχνονται στο Σχ. 3 για μετρήσεις τόσο σε όγκο (Σχ. 3Α) και αντίπλευρο (Εικ. 3Β) sites. Αυτά τα δεδομένα είναι οι μετρήσεις, οι οποίες πραγματοποιούνται 1 ώρα μετά την ένεση του HER2-ειδική Affibody, συζευγμένο με DyLight750, σε ποντικό με ξενομοσχεύματος ανθρώπινου καρκινώματος όγκου (ΒΤ-474). Αυτή η κυτταρική γραμμή είναι γνωστό ότι έχει υψηλή έκφραση του HER2. Μπλε και πράσινο γραφικές παραστάσεις δείχνουν τα δεδομένα μέτρησης και τη λειτουργία παλμική απόκριση του συστήματος, αντίστοιχα. Η τοποθέτηση έγινε με βάση την ενιαία εκθετικό μοντέλο αποσύνθεσης. Παράμετρος Α1 δείχνει τη σχετική του πλάτους του σήματος που χρησιμοποιείται στην ενιαία εκθετικό μοντέλο αποσύνθεση και t1 είναι η διάρκεια ζωής (σε picoseconds). Το μικρό γράφημα στο κάτω μέρος είναι η τοποθέτηση σφάλματος και η κόκκινη γραμμή παρουσιάζει την προσαρμοσμένη καμπύλη.

Χ άξονας είναι το πλάτος και y άξονα είναι ο χρόνος μέτρησης (ns). Μπλε και πράσινο γραφικές παραστάσεις δείχνουν τα δεδομένα μέτρησης και λειτουργία κρουστική απόκριση του συστήματος, αντίστοιχα. Η τοποθέτηση έγινε με βάση την ενιαία εκθετικό μοντέλο αποσύνθεσης. Παράμετρος Α1 δείχνει τη σχετική του πλάτους σε ενιαίο εκθετικό μοντέλο φθοράς και t1 είναι η διάρκεια ζωής (σε picoseconds). Το μικρό γράφημα στο κάτω μέρος είναι η τοποθέτηση σφάλματος και η κόκκινη γραμμή δείχνει την προσαρμοσμένη καμπύλη.

Η

Στο δεύτερο πείραμα, έχουμε χρησιμοποιήσει τρία ποντίκια με την ίδια HER2 θετικό καρκίνο (BT-474). Σε αντίθεση με το προηγούμενο πείραμα, ένας HER2-μη ειδική Affibody (

6-Ζ

Taq His: GS-Cys) οπτικός ανιχνευτής χρησιμοποιήθηκε ως παράγοντας αντίθεσης. Τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχ. 4. Λόγω της μη-ειδικότητα του Ζ

Taq affibody σε υποδοχείς HER2, δεν ανιχνευτής πρόσδεσης /συσσώρευση σε HER2 θετικό όγκους παρατηρήθηκε σε αυτό το πείραμα.

(Α) ένταση φθορισμού χάρτη στην περιοχή του όγκου. ένταση χάρτη (Β) φθορισμού στο ετερόπλευρο θέση (γ) η διαφορά της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και το ετερόπλευρο τοποθεσία, χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (D) Φαρμακοκινητική της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρα θέση μετά την ένεση με το χρόνο. Τα δεδομένα στο Σχ. (D) και (Η) είναι οι μέσες δεδομένα από τρεις ποντικούς. Δείκτες δείχνουν το μέσο όρο και μπάρες δείχνουν την τυπική απόκλιση. (Erpar? Χάρτη φθορισμού ζωής στην περιοχή του όγκου (F) χάρτη φθορισμού ζωής στο ετερόπλευρο ιστοσελίδα (G) Η διαφορά του φθορισμού ζωής στην περιοχή του όγκου και το ετερόπλευρο ιστοσελίδα χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου (Ε) Φαρμακοκινητική της… φθορίζουσα διάρκεια ζωής στην περιοχή του όγκου και αντίπλευρη θέση μετά την ένεση με το χρόνο.

η

για το τρίτο πείραμα, τρία ποντίκια με το μοντέλο HER2-αρνητικό (MDA-MB-468) χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη. πάλι ο HER2-ειδική Affibody (His6-Ζ

HER2: GS-Cys) οπτικός ανιχνευτής χρησιμοποιήθηκε ως μέσο σκίασης φθορισμού σε αυτό το συγκεκριμένο μοντέλο ανθρώπινου όγκου, λόγω της έλλειψης των υποδοχέων HER2 στην περιοχή του όγκου, HER2 Affibody. δεν δεσμεύτηκε με τα κύτταρα του όγκου. η ένταση τόσο σε όγκο και αντίπλευρη θέση μειώθηκαν σημαντικά σε 2-3 ώρες μετά την ένεση (Σχ. 5D). η διάρκεια ζωής του φθορισμού παρατηρήθηκε επίσης να είναι η ίδια και στα δύο του όγκου και ετερόπλευρο θέσεις (Σχ. 5Η).

(Α) ένταση φθορισμού χάρτη στην περιοχή του όγκου. (Β) φθορισμού ένταση χάρτη σε ετερόπλευρο περιοχή. (Γ) Η διαφορά της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και το ετερόπλευρο τοποθεσία, χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (D) Φαρμακοκινητική της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρα θέση μετά την ένεση με το χρόνο. Τα δεδομένα στο Σχ. (D) και (Η) είναι οι μέσες δεδομένα από τρεις ποντικούς. Δείκτες δείχνουν το μέσο όρο και μπάρες δείχνουν την τυπική απόκλιση. (Ε) φθορισμού χάρτη της ζωής στην περιοχή του όγκου. χάρτης της ζωής (F) φθορισμού στο ετερόπλευρο περιοχή. (G) Η διαφορά του φθορισμού ζωής στον όγκο και το αντίπλευρο θέση χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (Ε) Φαρμακοκινητική της φθορίζουσας διάρκεια ζωής στην περιοχή του όγκου και αντίπλευρη θέση μετά την ένεση με το χρόνο.

Η

επαναλήφθηκαν οι ίδιες δοκιμές για το μοντέλο όγκου NCI-Ν87. κύτταρα NCI-Ν87 είναι επίσης γνωστό ότι έχουν ένα υψηλό επίπεδο έκφρασης HER2 [26]. Η ένταση του φθορισμού και η διάρκεια ζωής μετρήθηκαν

in vivo

μετά την ένεση του φθορίζοντος ανιχνευτή, βασίζονται είτε σε HER2-ειδική Affibody (His6-Ζ

HER2: GS-Cys) ή HER2-μη ειδικά Affibody (His6-Z

Taq: GS-Cys). Τα αποτελέσματα φαίνονται στο Σχ. 6 και Σχ. 7, αντίστοιχα.

(Α) φθορισμού χάρτη της έντασης στην περιοχή του όγκου. Ένταση χάρτη (Β) φθορισμού στο ετερόπλευρο περιοχή. (Γ) Η διαφορά της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και το ετερόπλευρο τοποθεσία, χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (D) Φαρμακοκινητική της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρα θέση μετά την ένεση με το χρόνο. Τα δεδομένα στο Σχ. (D) και (Η) είναι οι μέσες δεδομένα από τρεις ποντικούς. Δείκτες δείχνουν το μέσο όρο και μπάρες δείχνουν την τυπική απόκλιση. (Ε) φθορισμού χάρτη της ζωής στην περιοχή του όγκου. χάρτης της ζωής (F) φθορισμού στο ετερόπλευρο περιοχή. (G) Η διαφορά του φθορισμού ζωής στον όγκο και το αντίπλευρο θέση χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (Ε) Η φαρμακοκινητική του φθορισμού ζωής στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρη περιοχή μετά την ένεση την πάροδο του χρόνου.

Η

(Α) ένταση φθορισμού χάρτη στην περιοχή του όγκου. ένταση χάρτη (Β) φθορισμού στο ετερόπλευρο θέση (γ) η διαφορά της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και το ετερόπλευρο τοποθεσία, χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (D) Φαρμακοκινητική της έντασης φθορισμού στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρα θέση μετά την ένεση με το χρόνο. Τα δεδομένα στο Σχ. (D) και (Η) είναι οι μέσες δεδομένα από τρεις ποντικούς. Δείκτες δείχνουν το μέσο όρο και μπάρες δείχνουν την τυπική απόκλιση. (Ε) φθορισμού χάρτη της ζωής στην περιοχή του όγκου. χάρτης της ζωής (F) φθορισμού στο ετερόπλευρο περιοχή. (G) Η διαφορά του φθορισμού ζωής στον όγκο και το αντίπλευρο θέση χαρτογραφηθεί στην περιοχή του όγκου. (Ε) Η φαρμακοκινητική του φθορισμού ζωής στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρη περιοχή μετά την ένεση την πάροδο του χρόνου.

Η

Πριν την ένεση, τη διάρκεια ζωής του φθορισμού της Dylight750, συζευγμένο με HER2-συγκεκριμένες Affibody (His6-Ζ

HER2: GS-Cys), μετρήθηκε ως 0,71 ns. Ωστόσο, η διάρκεια ζωής της Dylight750 συζευγμένο με HER2-μη ειδικά Affibody (His6-Ζ

Taq: GS-Cys) μετρήθηκε ως 0,62 ns. Αυτή η διαφορά μεταξύ ζωής HER2-ειδική και μη ειδική ήταν συνέπεια σε in-vivo μετρήσεις μας στο ετερόπλευρο περιοχή.

Για την αξιολόγηση των δυνητικών συμβολή του αυτοφθορισμού στις μετρούμενες εντάσεις φθορισμού, έχουμε μετρούμενο σήμα πριν από την ένεση καθετήρα τόσο σε όγκο και ετερόπλευρο sites. Σχ. 8Α-8Β ένταση εμφάνιση χάρτη των 16 εικονοστοιχείων στην περιοχή του όγκου και ετερόπλευρη περιοχή πριν από την ένεση του Affibody καθετήρα.