Αφηρημένο

Κυτταρολογικό προσυμπτωματικό έλεγχο για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας επεμβατική (ΔΠΔ) στερείται ευαισθησίας και ειδικότητας για τη διάκριση μεταξύ τραχηλική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (CIN) μπορεί να επιμένουν ή πρόοδο από τις περιπτώσεις που ενδέχεται να επιλύσει. Οι προσεγγίσεις γονιδίωμα-ευρεία έχουν χρησιμοποιηθεί για να εντοπίσει σημάδια της μεθυλίωσης του DNA που σχετίζονται με CIN επιμονή ή εξέλιξη. Ωστόσο, οι ενώσεις μεταξύ των σημάτων μεθυλίωσης του DNA και CIN ή ICC παραμένουν αδύναμα και αντιφατική. Μεταξύ 2008-2009, πραγματοποιήσαμε ένα νοσοκομείο που βασίζεται, case-control μελέτη μεταξύ 213 Τανζανία γυναικών με CIN 1/2/3 ή ICC. Συλλέξαμε δεδομένα ερωτηματολόγιο, βιοψίες, περιφερικό αίμα, τραχηλικά επιχρίσματα, ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) και τον ιό HIV-1 καθεστώς μόλυνσης. Εκτιμήσαμε

PEG3

κατάσταση μεθυλίωσης με όξινο θειώδες Pyrosequencing. Multinomial λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και τα διαστήματα εμπιστοσύνης (CI 95%) για τις ενώσεις μεταξύ των

PEG3

κατάσταση μεθυλίωσης και CIN ή ICC. Μετά από προσαρμογή για την ηλικία, gravidity, η χρήση ορμονικών αντισυλληπτικών και λοίμωξη από HPV, μια αύξηση 5% στο

PEG3

μεθυλίωσης του DNA συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο για ICC (OR = 1,6? 95% CI 1.2-2.1). HPV λοίμωξη συνδεόταν με υψηλότερο κίνδυνο CIN1-3 (OR = 15,7? 95% CI 5,7 – 48,6) και ICC (OR = 29,5, 95% CI 6,3 – 38,4). Η μόλυνση με υψηλό HPV κίνδυνος συσχετίστηκε με μέση

PEG3

διαφορικά μεθυλιωμένα περιοχές (αιτήσεις συντήρησης δεδομένων) μεθυλίωση (r = 0,34 ρ & lt? 0,0001), ενώ η συσχέτιση με λοίμωξη χαμηλού HPV κίνδυνος ήταν ασθενέστερη (r = 0.16 p = 0,047) . Παρά το γεγονός ότι τα όρια μεγέθους μικρό δείγμα συμπέρασμα, αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν ότι

PEG3

κατάσταση μεθυλίωσης έχει δυνατότητες ως μοριακός στόχος για την ένταξη στο CIN διαλογής για να βελτιώσει την πρόβλεψη της εξέλιξης.

Δήλωση Επιπτώσεων

Σας παρουσιάζουμε την πρώτη απόδειξη ότι η παρεκκλίνουσα μεθυλίωση του

PEG3

DMR είναι ένας σημαντικός συν-παράγοντας για την ανάπτυξη της Επεμβατική τραχηλικού καρκινώματος (ΔΠΔ), ιδίως μεταξύ των γυναικών που έχουν μολυνθεί από τον ιό HPV υψηλού κινδύνου. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι ένα πέντε τοις εκατό αύξηση σε μεθυλίωσης του DNA των

PEG3

σχετίζεται με 1,6 φορές τον κίνδυνο αύξησης του ΔΠΔ. Προτείνοντας

PEG3

κατάσταση μεθυλίωσης μπορεί να είναι χρήσιμη ως μοριακός δείκτης για CIN διαλογής για να βελτιώσει την πρόβλεψη των περιπτώσεων πιθανό να προχωρήσουν

Παράθεση:. Nye MD, Hoyo C, Huang Ζ, Vidal AC, Γουάνγκ F, Overcash F, et al. (2013) Σύλλογοι μεταξύ μεθυλίωση του

πατρικής Εκφράζεται Gene 3

(

PEG3

), τραχηλική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία και διηθητικό καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. PLoS ONE 8 (2): e56325. doi: 10.1371 /journal.pone.0056325

Επιμέλεια: Lorenzo Chiariotti, Università di Napoli Federico II, Ιταλία

Ελήφθη: 5 Σεπ, 2012? Αποδεκτές: 8, Γενάρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 13 Φεβρουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Nye et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις K01104517, Δούκας CFAR Ρ30 ΑΙ 064518, R01CA142983, R01CA142983S1 και R25CA057726. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικές ενδιαφέρον

Εισαγωγή

Περίπου μισό εκατομμύριο γυναίκες σε όλο τον κόσμο διαγιγνώσκονται με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας κάθε χρόνο και λίγο πάνω από το ήμισυ αυτών των γυναικών πεθαίνουν από την ασθένεια? 80% διαγιγνώσκονται στις φτωχές [1]. Κυτταρολογικό προσυμπτωματικό έλεγχο και επιθετική θεραπεία των προ-καρκινικές βλάβες είναι οι πιο διαδεδομένες στρατηγικές για την πρόληψη διηθητικού καρκίνου του τραχήλου (ICC) σε όλο τον κόσμο. Των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV), ο μόνος γνωστός αιτιολογικός παράγοντας για το ΔΠΔ, έχει χρησιμοποιηθεί για τη διαστρωμάτωση άλλες περιπτώσεις CIN από τις γυναίκες με φυσιολογική κυτταρολογία, με υψηλή ευαισθησία [2], αλλά χαμηλή ειδικότητα. Συνολικά, περίπου το 4-10% των γυναικών με φυσιολογική κυτταρολογία είναι HPV DNA θετικά, και, συνεπώς, η ευαισθησία και η ειδικότητα για το HPV τεστ DNA παραμένει κάτω του βέλτιστου, με αποτέλεσμα ένα μη αμελητέο αριθμό των γυναικών με ψευδώς θετικά αποτελέσματα, που απαιτούν παρακολούθηση στο κόστος τόσο για το σύστημα υγειονομικής περίθαλψης και του ασθενούς. Αναντίστοιχο ευαισθησία και ειδικότητα έχει επίσης αποδειχθεί ότι μειώνει την τήρηση συνιστώμενες επισκέψεις παρακολούθησης [3]. Η χρήση των συμπαράγοντες στο παρελθόν σχετίζεται με CIN ή ICC, όπως η ηλικία, ισοτιμία, το κάπνισμα, η μόλυνση trachomatis Chlamydia, και μακροχρόνια χρήση ορμονικής αντισύλληψης δεν έχει αποφέρει επιπλέον γνώσεις για την διάκριση μεταξύ των περιπτώσεων CIN1 πιθανό να διατηρηθεί ή πρόοδο από εκείνους που ενδέχεται να υποχωρούν . Έτσι, τον εντοπισμό συγκεκριμένων μοριακά χαρακτηριστικά που μπορούν να βελτιώσουν την πρόβλεψη του ποιες περιπτώσεις CIN είναι πιθανό να εξελιχθεί σε ΔΠΔ παραμένει προτεραιότητα.

Επιγενετική μηχανισμούς της γονιδιακής ρύθμισης, συμπεριλαμβανομένων μεθυλίωση του DNA, έχουν ένα σημαντικό ρόλο στο συντονισμό των αλλαγών της γονιδιακής έκφρασης σε απάντηση σε ιογενείς λοιμώξεις [4]. Επιγενετικές αλλαγές προτείνονται επίσης ως κινητήρια δύναμη στη διαδικασία της καρκινογένεσης που μπορούν να συμμετέχουν στην πορεία των λοιμώξεων HPV προχωρούν από CIN στο ΔΠΔ [5] [6], [7]. Ωστόσο, η ταυτότητα ενός τέτοιου ειδικού επιγενετικές στόχου (ες) είναι ακόμη άγνωστη.

PEG3

είναι ένα πατρικά εκφράζεται αποτυπώνεται γονίδιο στο χρωμόσωμα 19q13.43 που κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη με λειτουργία κατασταλτική του όγκου που παίζει ρόλο στη διευκόλυνση της p53 /C-

myc

μεσολάβηση απόπτωση.

PEG3

ρυθμίζεται από αλληλόμορφο-ειδική μεθυλίωση του DNA σύμφωνα με την οποία μόνο η μητέρα που προέρχεται αλληλόμορφο κανονικά μεθυλιωμένο. Η υπερμεθυλίωση στο

PEG3

ρυθμιστική διαφορικά μεθυλιωμένα περιοχή (DMR) οδηγεί σε μείωση της

PEG3

μεταγραφής, η οποία με τη σειρά της θεωρείται ότι αναστέλλουν την προ-αποπτωτική λειτουργία του γονιδίου αυτού [8], [9]. Η ανώμαλη μεθυλίωση σε αυτό το DMR έχει συσχετισθεί με χαμηλότερα επίπεδα

PEG3

έκφραση αυτού του καταστολέα όγκων, όπως έχει παρατηρηθεί σε άλλους γυναικολογικούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένων όπως των ωοθηκών και του ενδομητρίου [10] [11] [12]. Επιπλέον,

PEG3

DMR υπερμεθυλίωση και μεταγραφική σίγηση έχει επίσης αποδειχθεί να συμβεί σε γλοιώματα [13] [14]. Αυτά τα αποτελέσματα μαζί υποδηλώνουν ότι η PEG3 πρωτεΐνη δακτύλου ψευδαργύρου μπορεί να λειτουργήσει ως ογκοκατασταλτικό γονίδιο στον καρκίνο, και μπορεί να είναι ιδιαίτερα σχετική με καρκίνους που επηρεάζουν την γυναικείο αναπαραγωγικό σύστημα. Ως εκ τούτου, ζήτησε να καθοριστεί εάν και πώς οι αλλαγές μεθυλίωσης στο κανονιστικό

PEG3

DMR σχετίζονται με λοίμωξη από HPV, CIN και ICC.

Μέθοδοι

συμμετέχοντες στη μελέτη

Μεταξύ Νοεμβρίου 2008 και το Μάρτιο του 2009, είναι επιλέξιμες οι συμμετέχοντες στη μελέτη είχαν προσληφθεί από την Αναπαραγωγική Υγεία κλινική (RHC) σε KCMC, μια τραχήλου της μήτρας κλινική πρόληψη του καρκίνου που χρηματοδοτούνται από την Παγκόσμια Οργάνωση Υγείας. Μέθοδοι για την ταυτοποίηση συμμετέχοντα και εγγραφή έχουν περιγραφεί προηγουμένως [15]. Εν συντομία, τα κριτήρια ένταξης ήταν γυναίκες ηλικίας 18 ετών και άνω που δεν έχουν προηγούμενο ιστορικό ανώμαλη τεστ Παπανικολάου. Μερικοί από τους συμμετέχοντες ήταν ασθενείς με ύποπτες αλλοιώσεις ΔΠΔ αναφέρεται KCMC για μια ανοικτή και colposcopic κατευθυνόμενη βιοψία. Από τις 250 γυναίκες που συμμετείχαν, δύο αρνήθηκαν να συμμετάσχουν με αποτέλεσμα ένα ποσοστό ανταπόκρισης 99%. Από τα υπόλοιπα 248 υπήρχαν 14 όπου ήμασταν σε θέση να προσδιορίσει τις διαγνώσεις καρκίνου και 21 χωρίς αποτελέσματα HPV. Το τελικό πληθυσμό της μελέτης περιελάμβανε 213 γυναίκες με ερωτηματολόγιο, CIN /ICC, HIV-1 κατάσταση, και τα δεδομένα HPV γονότυπο. Έτσι, περιπτώσεις ήταν γυναίκες με οποιοδήποτε βαθμό των CIN1 /2/3 ή ICC, και οι έλεγχοι ήταν γυναίκες χωρίς CIN ή ICC όπως εκτιμήθηκε κατά τη διάρκεια μιας επίσκεψης ελέγχου κυτταρολογίας-based.

Δήλωση Ηθικής

Γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε συμμετέχοντα μελέτη πριν από την εγγραφή. Έρευνα Ηθικής Συμβούλια στο Κιλιμάντζαρο χριστιανική Ιατρικό Κέντρο (KCMC), το Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας στο Chapel Hill και το Πανεπιστήμιο Duke ενέκρινε αυτή τη μελέτη.

Συλλογή δεδομένων

ερωτηματολόγια.

Ένας εκπαιδευμένος νοσοκόμα-ερευνητή που λαμβάνονται εν επιγνώσει συναίνεση και να χορηγηθεί ένα τυποποιημένο ερωτηματολόγιο 40 λεπτά στο πρόσωπο. Κοινωνικο-δημογραφικά χαρακτηριστικά που συλλέγονται περιλαμβάνονται η ηλικία, πολεμικές κατάσταση, το είδος του γάμου (πολυγαμία εναντίον μονογαμία), φυλή, το μορφωτικό επίπεδο, το κάπνισμα, η κατανάλωση αλκοόλ, το αναπαραγωγικό ιστορικό (π.χ. εμμηναρχή, ισοτιμίας και gravidity), η σεξουαλική ιστορία (π.χ. αριθμός διάρκεια ζωής του σεξουαλικών συντρόφων, η ηλικία κατά την πρώτη σεξουαλική επαφή), και φάρμακα και συμπληρώματα χρήση.

Δείγματα.

Δύο τραχηλικών επιχρισμάτων ελήφθησαν από κάθε συμμετέχοντα. Ένα παρασκευάστηκε σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα για την αξιολόγηση κυτταρολογική για CIN και διάγνωση ICC, τα δεδομένα που χρησιμοποιούνται επίσης ως αποτέλεσμα για αυτή τη μελέτη. Το δεύτερο δείγμα συλλέγεται χρησιμοποιώντας μια κυτταρική ψήκτρα και ξεπλένονται σε Preserv-Cyt ™ media (Hologic, Inc Malborough, ΜΑ). Το ένα τρίτο του δείγματος που προορίζεται για ανάλυση HPV και αποθηκεύεται στους 4 ° C, και τα υπόλοιπα δύο τρίτα φυγοκεντρήθηκαν για να σφαιροποιηθούν τα κύτταρα, τα οποία φυλάχθηκαν ως δείγματα στους -80 ° C. DNA εκχυλίζεται από τα κύτταρα αυτά χρησιμοποιήθηκε αργότερα για ανάλυση μεθυλίωσης του DNA. Δείγματα βιοψίας συλλέχθηκαν μόνο όταν ενδείκνυται κλινικά. Ρουτίνας του τραχήλου της μήτρας με οπτική επιθεώρηση με οξικό οξύ (VIA) εκτελέστηκε. Αν υπήρχαν θετικά ευρήματα από VIA ή μέσω της απευθείας εξέτασης, ο ασθενής triaged και να αντιμετωπίζονται ανάλογα. Οι ασθενείς με αρνητικά ευρήματα δόθηκε συνέχεια ραντεβού μέσα σε δύο εβδομάδες για να παρέχουν αποτελέσματα

Διαπίστωση των αποτελεσμάτων της μελέτης:.. CIN και καρκίνωμα

Ο παθολόγος στο KCMC (BS) επεξεργασία και να διαβάσετε το Παπανικολάου επιχρίσματα και δείγματα βιοψίας με τη χρήση τυποποιημένων συμβάσεων, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ASCCP ανάλογα με την περίπτωση (https://www.asccp.org/). Ένας γυναικολόγος (BV) αναθεώρησε επίσης ιατρικά διαγράμματα μηνιαία για τον ιό HIV-1 τεστ και κυτταρο-παθολογικών αποτελεσμάτων για να ταξινομήσει τις περιπτώσεις χρησιμοποιώντας το σύστημα ταξινόμησης Bethesda. Τα αποτελέσματα στη συνέχεια κωδικοποιούνται με βάση την παθολογία και ιατρικό ιστορικό ευρήματα. Είχαν κωδικοποιούνται ως 1) καμία ένδειξη κυτταρολογικές ανωμαλία, 2) ήπια δυσπλασία συμπεριλαμβανομένων LSIL και CIN1, 3) μέτρια δυσπλασία συμπεριλαμβανομένων HSIL και CIN2-3, ή 4) καρκίνου που ήταν καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων πρωτίστως με την εξαίρεση τριών αδενο-πλακώδους καρκινώματα του τραχήλου της μήτρας. Κανένα από τα δείγματα είχαν χαρακτηριστεί ως άτυπα κύτταρα αβέβαιης σημασίας (ASCUS). Τα αποτελέσματα ήταν διαθέσιμα μέσω των αρχείων κλινική του ασθενούς, και ο παθολόγος τους καταχωρούνται στη βάση δεδομένων. Οι εγγραφές στη συνέχεια συντάχθηκε και με ασφάλεια από κοινού με το Πανεπιστήμιο Duke.

HPV γονότυπου.

ThinPrep® δείγματα και ομογενοποιημένα δείγματα βιοψίας απεστάλησαν στο Πανεπιστήμιο της Χαβάης Κέντρο Καρκίνου. DNA εκχυλίστηκε και ενισχύθηκε με PCR στόχευση μιας περιοχής 450 bp εντός του γονιδίου HPV L1 χρησιμοποιώντας τους εκκινητές PGMY09 /PGMY11 [16]. Το ανθρώπινο γονίδιο β-σφαιρίνης χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για την ακρίβεια του δείγματος. Ήμασταν σε θέση να αποκτήσει την ανάλυση DNA του ιού για όλα τα δείγματα ασθενών. HPV-θετικά δείγματα γονότυπος χρησιμοποιώντας τον HPV Γραμμική Array® (Roche Molecular Systems Inc., Branchburg, NJ, USA).

Διαπίστωση του HIV-1 κατάστασης της λοίμωξης.

Plasma και λευκής στιβάδας απομονώθηκαν μέσω φυγοκέντρησης των δειγμάτων περιφερικού αίματος συλλέχθηκαν σε σωλήνες vacutainer που περιέχουν ΕϋΤΑ από τους ασθενείς. Δύο ταχείες δοκιμές HIV-1 χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των δειγμάτων πλάσματος για τον HIV-1 κατάσταση (capillus HIV-1 /HIV-2, Trinity Biotech PLC, Bray, Χώρα Wicklow, Ιρλανδία και καθορίζουν HIV-1/2, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL). Η καθιερωμένη κλινική πρακτική της κηλίδας Western χρησιμοποιήθηκε για δείγματα τα οποία ήταν αντιδραστικά (κιτ Western blot Genetic Systems HIV-1? Bio-Rad, Hercules, CA)..

ανάλυση PEG3 μεθυλίωσης

Γονιδιωματική DNA παρασκευάστηκε από κύτταρα που απομονώνονται από τα τραχηλικά επιχρίσματα ή από δείγματα βιοψίας με τη χρήση αντιδραστηρίων πρωτόκολλο Puregene (Qiagen? Valencia, CA) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με όξινο θειώδες νάτριο χρησιμοποιώντας την Zymo Easy-96 μεθυλίωσης DNA kit (Zymo Research, Irvine, CA). Κατεργασία όξινου θειώδους τροποποιεί το DNA μετατρέποντας μη μεθυλιωμένα κυτοσίνες σε ουρακίλες, και αφήνει μεθυλιωμένα κυτοσίνες αμετάβλητη. Pyrosequencing έγινε χρησιμοποιώντας ένα Qiagen Pyromark Q96 MD Pyrosequencer.

Η DMR ανέλυσε βρίσκεται μέσα στο

PEG3

περιοχή του υποκινητή στο χρωμόσωμα 19q13.43. Η δοκιμασία Pyrosequencing για

PEG3

χρησιμοποιήθηκε όπως περιγράφεται προηγουμένως [12] με την εξαίρεση ότι η θερμοκρασία ανόπτησης 63 ° C χρησιμοποιήθηκε για την αντίδραση PCR. Γονιδιωματικής συντεταγμένες για την περιοχή ενισχύθηκε με PCR είναι CHR19: 57,351,945-57,352,096 (UCSC γονιδίωμα Browser, GRCh37 /hg19). Η απόδοση της δοκιμασίας εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας ορίστηκε μίγματα μη μεθυλιωμένων και μεθυλιωμένων όξινο θειώδες τροποποιημένου γενωμικού DNA (δηλαδή, 0%, 25%, 50%, 75% 100% μεθυλιωμένου? Epitect Bisulfite Έλεγχοι? Qiagen).

Στατιστική αναλύσεις

Οι μέσες κλάσματα μεθυλίωσης DNA στις επιμέρους ΟΟδ αναλύθηκαν και συγκρίθηκαν μεταξύ των ομάδων ελέγχου, οι γυναίκες χωρίς CIN1 /2/3 ή ICC (n = 147) και οι τρεις ομάδες υπόθεση (CIN1 [n = 21], CIN2 /3 [n = 17], και ICC [n = 48]) με τη χρήση F-tests. Κύρια συστατικά αναλύσεις (PCA) εφαρμόστηκαν για να προσδιοριστεί αν ένα μόνο μέσο αντιπροσωπεύει το κλάσμα μεθυλίωση στα δινουκλεοτίδια CG εντός της περιοχής DMR. Η μεθυλίωση του ΟΟδ ήταν επαρκώς συσχετίζεται επιτρέποντας έτσι ένα ενιαίο μέσο που θα χρησιμοποιηθεί. F-tests χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί εάν το DNA μεθυλίωση σε ατομικό ΟΟδ εντός

PEG3

DMR διέφερε σημαντικά από μόλυνση με υψηλού κινδύνου (HR) έναντι (LR) HPV χαμηλού κινδύνου και άλλων HPV γονότυπους. Ταξινόμηση των υψηλού κινδύνου και χαμηλού κινδύνου γονότυπους βασίστηκε σε εγκεκριμένο FDA-μοριακές εξετάσεις HPV (CDC). HR HPV γονότυπων HPV περιλαμβάνονται 16,18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59,59 και LR HPV περιλαμβάνονται HPV 6, 11, 26, 66, 68, 70, 73 και, 82 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15]. Οι γυναίκες που ήταν θετικοί για ένα τουλάχιστον HPV γονότυπο με βάση την ογκογόνο κίνδυνο ταξινομήθηκαν ως HR-HPV, LR-HPV ή άλλων HPV.

Για την εκτίμηση αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (ΠΙ) για τη σχέση μεταξύ CIN /ICC και τις αλλαγές στην DMR μεθυλίωση, χρησιμοποιήσαμε multi-πολυωνυμική μοντέλα λογιστικής παλινδρόμησης. Όλα τα μοντέλα που περιλαμβάνονται μεθυλίωση χρησιμοποιώντας αυξήσεις 5% με προσαρμογές που έγιναν για τον HPV-λοίμωξης, την ιστορία της εγκυμοσύνης, του HIV-1 κατάσταση, και η χρήση ορμονικών αντισυλληπτικών. Παρεκκλίνουσα μεθυλίωση ορίστηκε ως & lt? 25

ου ή & gt? 75

ου τεταρτημόρια, δεδομένου ότι τόσο υπερμεθυλίωση και υπομεθυλίωση αυτού του τόπου μπορεί να οδηγήσει σε απορρύθμιση του

PEG3

έκφρασης και να οδηγήσει σε απώλεια της αποτύπωσης [ ,,,0],11] [12] [17]. Χρησιμοποιήσαμε ανάλυση chi-square για τη δοκιμή για πιθανούς συγχυτικούς παράγοντες με CIN και καρκίνο κατάσταση. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις έγιναν σε SAS 9.1 (SAS Institute, Cary, NC).

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά Πληθυσμός μελέτης

Αποφάσεις και ελέγχων διέφερε σημαντικά από την ηλικία, HPV λοίμωξης και gravidity (Πίνακας 1). Η μέση ηλικία μεταξύ των ελέγχων ήταν 40,3 χρόνια (SD = 9,9). Μεταξύ υπόθεση ομάδες ο μέσος όρος ηλικίας αυξάνεται με τη βαρύτητα της βλάβης (35,7 χρόνια, SD = 12.2 για CIN1? 44,7 χρόνια, SD = 9.8 για CIN2 /3 και 55,2 χρόνια, SD = 12.3 για ΔΠΔ? P & lt? 0.001). Ο επιπολασμός της HPV λοίμωξης αυξήθηκε επίσης με την αύξηση της σοβαρότητας αλλοιώσεις, καθώς το 67% του CIN1, 88% CIN2 /3 και 89% του ICC είχαν ανιχνεύσιμο HPV μόλυνση (τιμή-ρ & lt? 0,0001). Gravidity ήταν υψηλή, με 94% των ελέγχων και 86% των γυναικών με CIN 1 αναφέρουν ότι είχαν ποτέ έγκυος σε σύγκριση με το 100% των γυναικών με CIN2 /3 ή ICC. Η μακροχρόνια χρήση OC ήταν παρόμοια σε CIN1 και ελέγχει 76% και 68%, αντίστοιχα, αλλά ήταν σημαντικά χαμηλότερη στους υψηλότερους βαθμούς της CIN (59%) και ICC (40%).

Η

PEG3

Pyrosequencing δοκιμασίας επικύρωσης

Θα επικυρωθεί πρώτα την απόδοση του προσδιορισμού Pyrosequencing στο quintuplicate χρησιμοποιώντας πλήρως μεθυλιωμένων και μη-μεθυλιωμένων DNA που σε καθορισμένες αναλογίες. Σε κάθε αύξηση της ποσότητας του μεθυλιωμένου DNA εισόδου, υπήρχε επίσης μια αύξηση στην ποσότητα της μεθυλίωσης μετρήθηκε (Pearson rho = 0. 953? P = 0,004). Η μέση τυπική απόκλιση μεταξύ αυτών των επαναλήψεων των μέτρων ήταν 1,59% (εύρος 0,34% έως 3,47%). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι αυτή η δοκιμασία έχει τη δυνατότητα να ανιχνεύει αναπαραγώγιμα διαφορές στις τιμές μεθυλίωση (Σχήμα 1).

Defined μίγματα (χ-άξονας) του μεθυλιωμένου και μη μεθυλιωμένου ϋΝΑ παρασκευάστηκαν και αναλύθηκαν σε quintuplicate με Pyrosequencing (γ- άξονας). Τα αποτελέσματα που δείχνονται αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή? ράβδοι σφάλματος υποδεικνύουν τυπικές αποκλίσεις. Η Pearson Rho είναι 0,953 με p-value 0,004.

Η

Σύνδεσης μεταξύ κατάστασης της λοίμωξης HPV και μεθυλίωσης του DNA σε

PEG3

αιτήσεις συντήρησης δεδομένων

Εξετάσαμε κλάσματα μεθυλίωση της 10 CpG θέσεις εντός του

PEG3

DMR σε σχέση με τον HPV γονότυπο. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, μεταξύ των γυναικών που έχουν μολυνθεί με ένα τουλάχιστον HR-HPV γονότυπο, βρήκαμε μια μέτρια συσχέτιση μεταξύ μεθυλίωσης όλων των CpG θέσεων 10 εντός του

PEG3

DMR και HPV μόλυνσης (r = 0,34, ρ τιμή & lt? 0,0001? εύρος = 0,32 – 0,41). LR-HPV γονότυπους είχε ευμεγεθώς ασθενέστερη συσχέτιση με

PEG3

μεθυλίωσης (r = 0,061, p value = 0,552). Η μόλυνση με άλλα HPV γονότυπους δεν συσχετιζόταν με κλάσματα μεθυλίωση εντός του

PEG3

DMR (μέσος συντελεστής συσχέτισης = 0.0163 p = 0,876).

Η

PEG3

DMR μεθυλίωσης , CIN και ICC

Ο Πίνακας 3 συνοψίζει τις αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και το 95% CI για τη συσχέτιση μεταξύ

PEG3

DMR μεθυλίωση και CIN και ICC κατάσταση, προσαρμοσμένο για την ηλικία, το ορμονικό αντισυλληπτικό χρήση και οποιαδήποτε μόλυνση HIV-1. Βρήκαμε ελάχιστη ή καμία συσχέτιση μεταξύ της μέσης

PEG3

κατάσταση μεθυλίωσης και CIN 1/2/3, (OR = 1,03? 95% CI (0,79 – 1,33)? P-value = 0,80). Ωστόσο, μια αύξηση 5% στα επίπεδα μεθυλίωσης στο

PEG3

DMR συνδέθηκε με μια σχεδόν διπλάσια αύξηση του κινδύνου ICC (OR = 1.6? 95% CI 1.2 έως 2.1? P-value = 0,0003 ). Όπως ήταν αναμενόμενο, η μόλυνση με οποιονδήποτε HPV γονότυπο συσχετίστηκε επίσης με υψηλότερο κίνδυνο CIN1-3 (OR = 15,7 95% CI (5,1 έως 48,6)) και ICC (OR = 29,5, 95% CI (6,3 έως 38,4)).

Συζήτηση

βασικά ευρήματα μας σε αυτή τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων των γυναικών Τανζανίας είναι ότι μετά την προσαρμογή για την HPV λοίμωξη, την ηλικία, τη χρήση OC, και HIV-1 κατάσταση, μια αύξηση κατά 5% στη μεθυλίωση του DNA στο

PEG3

DMR συνδέθηκε με μια τριπλάσια αύξηση 1,6 σε κίνδυνο ICC. Βρήκαμε επίσης ότι

PEG3

DMR υπερμεθυλίωση συσχετίστηκε με HPV λοίμωξη? συσχέτιση, που ήταν ισχυρότερη για υψηλό κίνδυνο σε σύγκριση με λοίμωξη χαμηλή HPV κινδύνου. Όπως θα αναμενόταν, μόλυνση HPV συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο CIN1 /2/3 και ICC. Σας παρουσιάζουμε τα πρώτα στοιχεία για την υποστήριξη της υπόθεσης ότι παρεκκλίνουσα μεθυλίωση του

PEG3

DMR είναι ένας σημαντικός συν-παράγοντας στην ανάπτυξη του ΔΠΔ, ιδίως μεταξύ των γυναικών που έχουν μολυνθεί με HR HPV.

μας στοιχεία δείχνουν ότι η αύξηση της ποιότητας της βλάβης από το CIN με το ΔΠΔ συσχετίζεται με λοίμωξη από τον ιό HPV και

PEG3

DMR υπερμεθυλίωση και είναι συνεπής με μεθυλίωσης του DNA με τη μεσολάβηση καταστολή

PEG3

όπως διαπιστώθηκε σε προηγούμενες μελέτες. Υπερμεθυλίωση των διαφόρων γονιδίων (π.χ.

MGMT

,

FHIT

,

GSTP1

, και

MHL1

) σε sudies έλεγχο περίπτωση ΔΠΔ έχει αναφερθεί [18] [19] [20]. Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει αλλαγές μεθυλίωσης του DNA και την κατάσταση του HPV στο κεφάλι και το λαιμό καρκίνο πλακωδών κυττάρων [21]. Τα ευρήματα αυτά υποστηρίζουν την ιδέα ότι η παρουσία του παρεκκλίνοντα μεθυλιωμένων γονιδίων θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως μία δοκιμασία σχετικά ευαίσθητη και ειδική ελέγχου για την ανίχνευση CIN και ICC. Αυτές οι προηγούμενες μελέτες δεν διερεύνησε

PEG3

. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που έγινε με ένα ανθρώπινο πληθυσμό που διερεύνησε τη σχέση μεταξύ του

PEG3

κατάσταση DMR και λοίμωξη από HPV και πώς αυτό παίζει ρόλο στην CIN και ICC. Αν και αιτία και το αποτέλεσμα δεν μπορεί να καθοριστεί σε αυτή τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων, τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι

PEG3

DMR μεθυλίωση είναι ένας πιθανός μηχανισμός με τον οποίο ευαισθησία σε εξέλιξη σε ΔΠΔ μπορεί να συμβεί, και ως εκ τούτου μπορεί να είναι ένα χρήσιμο δείκτη για τον εντοπισμό CIN περιπτώσεις πιθανό να προχωρήσουν.

Οι μηχανισμοί με τους οποίους

PEG3

μεθυλίωσης του DNA αυξάνει τον κίνδυνο του ΔΠΔ είναι ασαφείς. Ωστόσο, υπάρχουν ενδείξεις ότι η

PEG3

παίζει σημαντικό βιολογικό ρόλο σε ρ53 /c-myc απόπτωση, εμπλέκοντας

PEG3

ως ένα γονίδιο του οποίου η λειτουργία μπορεί να είναι εν μέρει να εμποδίσει την καρκινογένεση [8 ] [9]. Η μεσολάβηση του ρ53 μονοπάτι απόπτωσης έχει δύο πιθανά αποτελέσματα: επαγωγή α) διακοπής της ανάπτυξης ή β) κυτταρικό θάνατο? PEG3 έχει δειχθεί ότι παίζει ένα ρόλο στα κατάντη της ρ53 απόπτωσης ενεργοποίησης μέσω της αλληλεπίδρασής της με Βαχ. PEG3 αλληλεπιδρά με Bax, με αποτέλεσμα την απόπτωση [8]. Αυτές οι προηγούμενες εκθέσεις, μαζί με τα ευρήματά μας, υποστηρίζουν την υπόθεση ότι

PEG3

λειτουργεί ως ένα σημαντικό ογκοκατασταλτικό στην καρκινογένεση.

Ο σύλλογος που βρέθηκαν εδώ είναι συνεπής με τα ευρήματα από το

in vitro

και

in vivo

μελέτες που δείχνουν ότι το

PEG3

προαγωγός υπερμεθυλίωση με συνέπεια την μεταγραφική καταστολή στα ωοθηκών και του ενδομητρίου [12] [11]. Σε τραχήλου, των ωοθηκών, του ενδομητρίου και του καρκίνου κυτταρικές γραμμές

PEG3

σίγηση γεγονός που υποδηλώνει ότι κατά τη διάρκεια της καρκινογένεσης, υπερμεθυλίωση μπορεί να επιλεγούν για προκειμένου να αναστέλλουν την προ-αποπτωτική λειτουργία του PEG3. ελεγχόμενη μελέτη περίπτωσή μας δείχνει μια συσχέτιση μεταξύ υπερμεθυλίωσης του

PEG3

και ICC αλλά όχι CIN, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτές οι αλλαγές μεθυλίωσης λάβει χώρα κατά τη διάρκεια του μετασχηματισμού και όχι σε προ-καρκινικές βλάβες. Εναλλακτικά, η εξασθένηση του κινδύνου μπορεί να οφείλεται σε συνδυασμό χαμηλής ποιότητας CIN αποτελείται σε μεγάλο βαθμό από βλάβες που ενδέχεται να υποχωρούν, με τις περιπτώσεις CIN ανώτερης ποιότητας, η πλειοψηφία των οποίων έχουν τη δυνατότητα να προχωρήσει και να γίνει ΔΠΔ. Περιέργως, η συσχέτιση της λοίμωξης από HPV, ο αιτιολογικός παράγοντας του ΔΠΔ, και

PEG3

υπερμεθυλίωση είναι συνεπής με μια διαδικασία πολλών σταδίων που ξεκινάει με επιγενετικών μηχανισμών και της HPV λοίμωξης.

Ο κύριος περιορισμός της η μελέτη αυτή είναι το μικρό μέγεθος του δείγματος για την εξέταση

PEG3

DMR μεθυλίωσης σε σχέση με το βαθμό συγκεκριμένες CIN, μετά από συνυπολογισμό της επίδρασης της HPV λοίμωξης. Είναι πιθανό ότι η ανικανότητά μας να βρούμε συσχετίσεις μεταξύ

PEG3

μεθυλίωση και CIN οφειλόταν σε συνδυασμό CIN (στους οποίους η πλειοψηφία ή οι γυναίκες είναι πιθανό να υποχωρούν) και CIN2 και CIN3 (στους οποίους ένα μικρότερο ποσοστό επιμένουν ή την πρόοδο ) [22]. Ωστόσο, είχαμε επαρκή στατιστική ισχύ για να αξιολογήσει

PEG3

και τον κίνδυνο ΔΠΔ. Ένας άλλος περιορισμός είναι ο σχεδιασμός περίπτωση ελέγχου, περιορίζοντας την ικανότητά μας να συμπεράνουμε

PEG3

μεθυλίωση ως σημαντικός παράγοντας στην εξέλιξη. Ωστόσο, τα διακριτικά σήματα της μεθυλίωσης συνδέονται με τις διαφορές case-control είναι ένα απαραίτητο βήμα που επιτρέπει την εξέταση του εν λόγω δείκτη σε διαχρονικές μελέτες που βρίσκονται σε εξέλιξη από αρκετές ομάδες [23].

Παρά τους περιορισμούς αυτούς, βρήκαμε υπερμεθυλίωση το

PEG3

DMR αύξησε τον κίνδυνο για ICC μετά την προσαρμογή για γνωστούς συγχυτικούς παράγοντες. Βρήκαμε επίσης μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ του HPV γονότυπου και μεθυλίωσης του DNA στο

PEG3

DMR. Μεθυλίωση κυτοσίνης είναι μια σταθερή τροποποίηση σε δείγματα ανθρώπινου ιστού, και ως εκ τούτου

PEG3

κατάσταση DMR μεθυλίωσης θα μπορούσε ενδεχομένως να χρησιμοποιηθεί ως δείκτης για την αναγνώριση CIN πιθανόν να εξελιχθεί σε ICC. Οι μεγαλύτερες μελέτες σε ένα πιο ποικίλο πληθυσμό της μελέτης που απαιτείται για να αναπαράγουν αυτά τα ευρήματα.