Abstract

κυκλοφορούντων αιμοπεταλίων είναι άφθονες πηγές αγγειογένεσης μορίων για αγγειακό σύστημα του όγκου που επηρεάζει την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση. Η σχέση μεταξύ των μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και τα επίπεδα ενδο-αιμοπεταλίων του VEGF, TSP-1 και των καθαρών αιμοπεταλίων αγγειογενετική δραστηριότητα (ΕΠΥΚ) είναι ασαφής. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να κατανοήσουν καλύτερα τον ρόλο αυτών των παραγόντων στην εξέλιξη του καρκίνου NSCLC και να εκτιμηθεί η κλινική σημασία του. Αιμοπεταλίων VEGF και TSP-1 και μέχρι το τέλος Μαρτίου μετρήθηκαν προεγχειρητικά σε 68 ασθενείς με ΜΜΚΠ με ELISA ή δοκιμασία σχηματισμού τριχοειδούς σωλήνα. VEGF, TSP-1 και ΕΠΥΚ κατανομές σε ασθενείς με καρκίνο και υγιείς εθελοντές συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney

U

δοκιμής. Η μέθοδος Kaplan-Meier, μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για να αναλυθεί η σχέση μεταξύ αυτών των παραγόντων και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, τη συνολική επιβίωση και την επιβίωση ελεύθερη νόσου. Σημαίνει ενδο-αιμοπεταλίων επίπεδο TSP-1 ήταν ελαφρώς υψηλότερη σε ασθενείς από ό, τι σε υγιή άτομα (p = 0,092). Ενδο-αιμοπεταλίων TSP-1 επίπεδα ήταν σημαντικά υψηλότερα σε ασθενείς με συμμετοχή μεγαλύτερη από Τ2 ή το στάδιο ΙΙΙ, σε σύγκριση με άλλους ασθενείς. Μέσο επίπεδο ενδο-αιμοπεταλίων VEGF ήταν 40,8 pg /10

6 σε ασθενείς σε σύγκριση με 21,9 ng /10

6 σε υγιή άτομα (p = 0,041). Η διάμεση τιμή του ΕΠΥΚ σε ασθενείς ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε υγιείς μάρτυρες (p Τραπέζι 1). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στις TSP-1 επίπεδα που προέρχεται από αιμοπετάλια μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα και των υγιών μαρτύρων (Ρ = 0,092? Πίνακας 1).

Η

Σχέσεις μεταξύ NPAA, VEGF προερχόμενο από αιμοπετάλια ή TSP- 1 επίπεδα και κλινικές παθολογικές προφίλ

Για να αξιολογηθεί η συσχέτιση της ΕΠΕΚ, VEGF παράγεται από τα αιμοπετάλια ή TSP-1 με τη βιολογία του όγκου, οι συγκρίσεις των κλινικών παθολογικών χαρακτηριστικά με το τέλος Μαρτίου, προερχόμενο από αιμοπετάλια VEGF ή TSP-1 έγιναν . Όπως ήταν αναμενόμενο, οι ασθενείς με υψηλή μέχρι το τέλος Μαρτίου είχαν περισσότερες πιθανότητες να εμφανίζουν επιθετική κλινική παθολογική χαρακτηριστικά: υψηλή NPAA συσχετίστηκε σημαντικά με τη διαφοροποίηση κακή όγκου (P = 0.004), παθολογική στάδιο (P & lt? 0.001), παθολογική T-παράγοντα (Ρ & lt? 0.001) και παθολογική Ν-παράγοντα (Ρ & lt? 0.001), ενώ υψηλή VEGF που προέρχεται από αιμοπετάλια συσχετίστηκε σημαντικά με κακή διαφοροποίηση του όγκου (Ρ & lt? 0.001) και παθολογικές στάδιο (Ρ & lt? 0.001) (Πίνακας 2). Τα επίπεδα του προερχόμενου από αιμοπετάλια TSP ήταν υψηλότερα σε ασθενείς σε παθολογικές σταδίου III + IV και παθολογική Τ-παράγοντας T2-4 συγκριτικά με τους ασθενείς σε παθολογικές στάδιο I + II (Ρ = 0,002) και παθολογική T-παράγοντα T1 (Ρ = 0,008) , αντίστοιχα (Πίνακας 2). Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι οι μέσες τιμές των NPAA και VEGF σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα είναι σημαντικά υψηλότερα από ότι σε υγιείς μάρτυρες. Σε αντίθεση, TSP-1 δεν ήταν αυξημένα σε ασθενείς καρκίνο σε σύγκριση με τα δείγματα ελέγχου. Οι ασθενείς με υψηλό τέλος Μαρτίου, είχαν περισσότερες πιθανότητες να εμφανίζουν επιθετική κλινική παθολογικά χαρακτηριστικά.

Η

καμπύλης Receiver-λειτουργίας (ROC) ανάλυση του VEGF και ΕΠΥΚ στην ανίχνευση του καρκίνου του πνεύμονα

Σχήμα 1 έδειξε ότι η περιοχή κάτω από την καμπύλη του δέκτη-λειτουργίας (AUROC) της ΕΠΕΚ για τη διαφοροποίηση καρκίνο του πνεύμονα από τους υγειονομικούς ελέγχους ήταν 0,892 (95% CI, 0,874 – 0,961), η οποία ήταν υψηλότερη από 0.823 (95% CI, 0,786 – 0,941) του VEGF. (Ρ & lt? 0,0001).

(Α, Β) ROC ανάλυση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα και υγιείς μάρτυρες, και υγιείς μάρτυρες ως αρνητική ομάδα και οι ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα ως θετική ομάδα. NPAA είχε την καλύτερη προγνωστική διαγνωστική ακρίβεια (AUC = 0,893, P & lt? 0,0001).

Η

συσχετίσεις μεταξύ ΕΠΕΚ, VEGF παράγεται από τα αιμοπετάλια ή TSP-1 επίπεδα και ασθενής συνολική επιβίωση ή την ελεύθερη νόσου επιβίωση

ανάλυση παλινδρόμησης περιοχή κάτω από την καμπύλη του δέκτη-λειτουργίας

μονοπαραγοντική Cox: AUROC. έδειξε περιφερειακών λεμφαδένων, παθολογική στάδιο, NPAA, και προερχόμενο από αιμοπετάλια επίπεδα VEGF να είναι σημαντικοί παράγοντες που επηρεάζουν τη συνολική επιβίωση (Πίνακας 3). ανάλυση log-rank έδειξε ότι τα αυξημένα NPAA μεγαλύτερη από τη διάμεση συνδέθηκαν με κακή ασθένεια επιβίωση χωρίς και την κακή συνολική επιβίωση (Ρ = 0,012, p = 0,002?. Σχήμα 2), ενώ VEGF προερχόμενο από αιμοπετάλια και TSP-1 δεν εμφανίζει αυτό σχέση. Στην περίπτωση της πολυμεταβλητής ανάλυσης για ιστολογική διαφοροποίηση, παράγοντας Τ, περιφερειακών λεμφαδένων, παθολογική στάδιο, NPAA, VEGF προερχόμενο από αιμοπετάλια και TSP-1, μόνο περιφερειακό λεμφαδένας, παθολογική στάδιο και μέχρι το τέλος Μαρτίου ήταν ακόμα σχετίζεται με τη συνολική επιβίωση σε κάποιο βαθμό ( Πίνακας 3). Σε αντίθεση, οι περιφερειακές λεμφαδένες, παθολογική στάδιο, μέχρι το τέλος Μαρτίου ήταν σημαντικοί παράγοντες που επηρεάζουν την επιβίωση ελεύθερη νόσου (Πίνακας 4).

ελεύθερη νόσου επιβίωση (Α) και τη συνολική επιβίωση (Β) για χαμηλή μέχρι το τέλος Μαρτίου και το τέλος Μαρτίου ασθενείς υψηλού . Οι τιμές Ρ προσδιορίστηκαν με τη δοκιμασία log-rank.

Η

Η

Σχέση μεταξύ ΕΠΕΚ ή αιμοπετάλια που προέρχονται από VEGF και του όγκου MVD σε ασθενείς

Υπήρξε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ NPAA ή VEGF που προέρχεται από αιμοπετάλια και όγκων MVD στους ασθενείς με καρκίνο (r = 0,78, Ρ & lt? 0.001, r = 0,521? Ρ & gt? 0,01?. Σχήμα 3Α, Β). NPAA έχουν καλύτερη συσχέτιση με MVD του όγκου από τον VEGF παράγεται από τα αιμοπετάλια. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι NPAA ή VEGF που προέρχεται από αιμοπετάλια μπορεί να προάγουν την αγγειογένεση του όγκου. MVD στο NSCLC ιστού και του φυσιολογικού ιστού προσδιορίστηκαν με CD34 ανοσοϊστοχημική χρώση

(Α) Η καλή συσχέτιση μεταξύ της MVD και μέχρι το τέλος Μαρτίου σε 68 ασθενείς με ΜΜΚΠ (r = 0,78? P & lt? 0.001) (Σχήμα 3C, Δ.).. (Β) Η σημαντική συσχέτιση μεταξύ του όγκου και MVD επίπεδα VEGF από αιμοπετάλια (r = 0.521? Ρ & lt? 0,01). (Γ) MVD σε NSCLC ιστού και (D) φυσιολογικός ιστός προσδιορίσθηκαν με ανοσοϊστοχημική χρώση CD34. Βέλος, θετική χρώση του MVD.

Η

Η διέγερση του σχηματισμού των τριχοειδών σωλήνων (CTF) από τις κυτοκίνες που προέρχονται από αιμοπετάλια

Για την εκτίμηση της καθαρής αιμοπεταλίων αγγειογενετική δραστηριότητα (ΕΠΕΚ), ελέγξαμε την in vitro επίδραση των προϊόντων λύσης αιμοπεταλίων από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και υγιείς ελέγχους της CTF του HUVECs. Στο πρόγραμμα αυτό ήταν σημαντικά υψηλότερη στους ασθενείς από τους υγιείς μάρτυρες. (Ρ & lt? 0,001?. Πίνακας 1, Σχήμα 4Α, Β)

Αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες της δοκιμασίας σχηματισμού σωλήνα μετά από 18-επώαση με κυτοκίνες αιμοπετάλια απελευθερώνονται δείχνονται στο πάνελ Α (προστίθενται οι ασθενείς κυτοκίνες αιμοπετάλια κυκλοφορήσει) και (προστέθηκε υγιείς μάρτυρες κυτοκίνες αιμοπεταλίων-κυκλοφόρησε) Β. Προεπώαση προϊόντα λύσης αιμοπεταλίων με έλεγχο IgG (C) και antiTSP-1 αντίσωμα (D). Η στατιστική ανάλυση (Ε). Μπαρ είναι μέσοι όροι ± SD από 4 πειράματα. *

P & lt?.

0.05 έλεγχο έναντι της θεραπείας

Η

Ο ρόλος του VEGF ή TSP-1 σε αιμοπεταλίων προϊόντα της λύσης από τους ασθενείς με ΜΜΚΠ στην ΕΠΕΚ

Η προ-επώαση των υψηλής VEGF προϊόντα λύσης αιμοπεταλίων με αντισώματα έναντι του VEGF οδήγησε σε αξιοσημείωτη μείωση (& gt? 48%) στην CTF του HUVEC, ενώ μόνο μία ελαφρά αναστολή (& lt? 16%) ή καθόλου αναστολή της CTF του HUVEC παρατηρήθηκε όταν διεγερτική αιμοπεταλίων Προϊόντα λύσης με χαμηλά επίπεδα VEGF προεπωάστηκαν με αντισώματα αντι-VEGF. Η προ-επώαση των εν λόγω ανασταλτικών προϊόντων λύσης αιμοπεταλίων από ασθενείς με καρκίνο αποκάλυψε αυξημένα επίπεδα TSP-1 και στις δύο περιπτώσεις με αντισώματα έναντι TSP-l (200 μg /ml) είχε ως αποτέλεσμα την αύξηση του CTF του HUVEC σε σύγκριση με αυτές τις ανασταλτικές προϊόντα λύσης αιμοπεταλίων προεπωάζονται με ελέγχου IgG (5 μg /ml) (

P & lt?

0,05, η = 3) (Σχήμα 4. C, D, E). Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι ενδοαιμοπεταλίων TSP-l συμβάλλει στη συνολική αντι-αγγειογενετική δράση προκαλείται από λύματα των αιμοπεταλίων.

Συζήτηση

μελέτες του όγκου αγγειογένεσης έχουν επίσης δείξει ότι κυκλοφορούντων αιμοπεταλίων είναι άφθονες πηγές των προ-αγγειογενετικών μόρια για αγγειακό σύστημα του όγκου, και ότι τα κύτταρα όγκου επάγει την ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων και της συσσωμάτωσης με την απελευθέρωση των παραγόντων ενεργοποίησης αιμοπεταλίων, με αποτέλεσμα την απελευθέρωση του α-κοκκίων και του περιεχομένου τους, το οποίο με τη σειρά του επηρεάζει άμεσα την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση [18] – [ ,,,0],21]. έχουν αυξημένο αριθμό αιμοπεταλίων έχουν συσχετιστεί με φτωχή πρόγνωση στον καρκίνο του πνεύμονα και σε γαστρικό καρκίνο, γεγονός που υποδηλώνει ότι μια προπηκτική κατάσταση και ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων μπορεί να συμβάλει στην ανάπτυξη πρώιμου καρκίνου [22], [23]. Έχει αναφερθεί ότι ο VEGF σε αιμοπεταλίων είναι αυξημένα και είναι ανεξάρτητες προγνωστικούς παράγοντες ορθοκολικού καρκινώματος [24]. Επειδή η αγγειογένεση ρυθμίζεται από την ισορροπία μεταξύ αναστολείς και ενεργοποιητές, ένας στόχος της μελέτης μας ήταν να αξιολογηθεί η TSP-1 (αναστολέας) /VEGF (ενεργοποιητής) ισορροπία στα αιμοπετάλια. Ωστόσο, πρέπει να υπομνησθεί ότι η καρκινική αγγειογένεση ρυθμίζεται όχι μόνο από VEGF και TSP-1 επίπεδα, αλλά και από μια σειρά εντοπίζονται και αγνώστων ενεργοποιητών και αναστολέων που μπορεί να επηρεάσουν το καθαρό αγγειογενετική ισορροπία [25], έτσι ώστε ένας άλλος σκοπός της μελέτης μας ήταν να αξιολογηθεί μέχρι το τέλος Μαρτίου.

στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε το επίπεδο του VEGF αιμοπεταλίων και ΕΠΥΚ σε λύματα των αιμοπεταλίων των 68 ασθενών με NSCLC. Βρήκαμε ότι οι μέσες τιμές των NPAA και VEGF σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα είναι σημαντικά υψηλότερα από ότι σε υγιείς μάρτυρες. Η μελέτη μας έδειξε περαιτέρω ότι οι ασθενείς με υψηλές NPAA είναι πιο πιθανό να παρουσιάζουν επιθετική κλινική παθολογικά χαρακτηριστικά και ότι ΕΠΥΚ μεγαλύτερο από το διάμεσο σχετίζονται με κακή πρόγνωση. Η αυξημένη NPAA έχουν καλύτερη συσχέτιση με MVD του όγκου από τον VEGF παράγεται από τα αιμοπετάλια. Ενώ έχουν αυξημένο αριθμό αιμοπεταλίων έχουν παρατηρηθεί σε μερικούς καρκίνους, δεν παρατηρήσαμε σημαντικές διαφορές στον αριθμό των αιμοπεταλίων μεταξύ υγιών μαρτύρων και των ασθενών του πληθυσμού μας (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Μετρήσαμε TSP-1 επίπεδα των προϊόντων λύσης αιμοπεταλίων σε NSCLC και βρήκε ένα μη σημαντική αύξηση στα επίπεδα TSP-1. Ωστόσο, τα επίπεδα του προερχόμενου από αιμοπετάλια TSP-1 ήταν υψηλότερη σε ασθενείς σε παθολογικές σταδίου III + IV και παθολογική Τ-παράγοντας T2-4 συγκριτικά με τους ασθενείς σε παθολογικές στάδιο I + II και παθολογική Τ-παράγοντα Τ1. Υπάρχουν δύο πιθανές εξηγήσεις για το εύρημα αυτό. Πρώτον, επιθετικούς όγκους μπορεί να παράγει περισσότερο TSP-1 από τους μη-επιθετικούς όγκους. Δεύτερον, τα επίπεδα TSP-1 μπορεί να συσχετιστεί άμεσα με συνολικό όγκο της νόσου, και οι ασθενείς σε αυτή τη μελέτη με επιθετικούς όγκους γενικά είχε υψηλότερη φορτίο του όγκου. Αξιολογήσαμε τα λύματα των αιμοπεταλίων από ασθενείς με καρκίνο και υγιείς δότες για την ικανότητά τους να αυξήσουν ή να μειώσουν CTF των HUVEC ως ένα απλό και επαναλήψιμη

in vitro

προσέγγιση, κερδίζοντας πληροφορίες σχετικά με την ΕΠΕΚ. Πράγματι, δεν είναι όλα τα δείγματα των αιμοπεταλίων με υψηλά επίπεδα του VEGF που επάγεται CTF, πιθανώς λόγω της παρουσίας του αντιαγγειογόνο μορίων. Αντίθετα, δεν είναι όλα τα διεγερτικά αιμοπεταλίων έδειξαν υψηλά επίπεδα του VEGF, υποδηλώνοντας ότι οι άλλοι παράγοντες εκτός από το VEGF που εμπλέκονται. Εκτιμώντας δοκιμές για τον προσδιορισμό των θετικών και αρνητικών ρυθμιστών της angiogemesis είναι δυσκίνητη, δοκιμασία μας in vitro για τη μέτρηση της ΕΠΕΚ του ασθενή με καρκίνο σε HUVEC CTF παρέχει ένα απλό λεωφόρο των λειτουργικών πληροφοριών σχετικά με το καθαρό υπόλοιπο μεταξύ αγγειογενετικών και αντι-αγγειογενετικών παραγόντων. Τέτοιες πληροφορίες μπορεί να έχει αξία στην πρόγνωση του καρκίνου και για την παρακολούθηση της ανταπόκρισης του όγκου στη θεραπεία του καρκίνου.

Για να αξιολογηθεί περαιτέρω η κλινική αξία της ΕΠΕΚ, προσδιορίσαμε και σύγκριση της διαγνωστικής χρησιμότητας της ΕΠΕΚ και των αιμοπεταλίων που προέρχονται VEGF σε καρκίνο και υγιείς ομάδες ελέγχου. επίπεδα μέχρι το τέλος Μαρτίου διακρίνεται ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα από φυσιολογικά άτομα πολύ αξιόπιστα. NPAA ήταν σημαντικά καλύτερη ικανότητα πρόβλεψης για τον καρκίνο του πνεύμονα από ό, τι προέρχεται από αιμοπετάλια VEGF σε αυτήν την μελέτη πληθυσμού. Η ανάλυση επιβίωσης των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα αξιολογήθηκε σε αυτή τη μελέτη με βάση τα επίπεδα της ΕΠΕΚ. Στη μελέτη μας, το ποσοστό επιβίωσης των ασθενών με υψηλή μέχρι το τέλος Μαρτίου ήταν σημαντικά χαμηλότερες από τις ασθενείς με χαμηλή ΕΠΕΚ. Αξίζει να σημειωθεί ότι, προεγχειρητική επίπεδα που προέρχεται από αιμοπετάλια VEGF σε αυτούς τους ασθενείς δεν συσχετίζονται με κακή έκβαση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται) .Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση σχετικά με ΕΠΕΚ στον NSCLC.

Υπάρχουν πολλοί μηχανισμοί με τους το οποίο οι διάφορες αγγειογένεσης ρυθμιστικών πρωτεϊνών θα μπορούσε να γίνει αυξήθηκε στα αιμοπετάλια των ασθενών με καρκίνο. Κατ ‘αρχάς, τα αιμοπετάλια θα μπορούσε να αποκτήσει άμεσα έναν παράγοντα από τον όγκο μέσω ενδοκυττάρωσης. Δεύτερον, ο όγκος θα μπορούσε να τονώσει την μεγακαρυοκυττάρων να upregulate τη σύνθεση ενός αγγειογένεσης ρυθμιστικής πρωτεΐνης. Τρίτον, επειδή τα αιμοπετάλια περιέχουν mRNAs και μεταφραστικό μηχανισμό, τα αιμοπετάλια θα μπορούσαν επίσης να διεγερθούν για να συνθέσουν μια αγγειογένεσης ρυθμιστική πρωτεΐνη [24].

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έδειξαν ότι ενώ NPAA, αιμοπεταλικό VEGF και TSP- 1 επίπεδα ήταν υψηλότερα σε ασθενείς με NSCLC πριν την επέμβαση από ό, τι στους υγιείς μάρτυρες, μόνο δύο ΕΠΕΚ και των αιμοπεταλίων που προέρχονται επίπεδα VEGF έδειξε μία στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων. Επίσης έδειξε ότι μέχρι το τέλος Μαρτίου μεγαλύτερη από τη μέση συνδέθηκαν φτωχή πρόγνωση. Αν και προερχόμενος από αιμοπετάλια επίπεδο TSP-1 δεν φαίνεται να είναι ένας δείκτης για NSCLC, NPAA μπορεί να είναι περισσότερο από ό, τι αξία που προέρχεται από αιμοπετάλια VEGF στη διαγνωστική και πρόγνωση του μη-μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα.