Αφηρημένο

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η ογκο-κατασταλτικό ρόλο της πρωτεΐνης σελήνιο δέσμευσης 1 (SBP1), αλλά οι υποκείμενοι μηχανισμοί δεν είναι σαφείς. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι η επαγωγή του SBP1 έδειξε σημαντική αναστολή της ορθοκολικού ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και της μετάστασης σε ποντίκια. Χρησιμοποιήσαμε περαιτέρω ισοβαρή ετικετών για σχετική και η απόλυτη ποσοτικοποίηση (iTRAQ) για την ταυτοποίηση πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην SBP1 μεσολάβηση αντικαρκινικές επιδράσεις σε ιστούς όγκων. Ταυτοποιήσαμε 132 διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών, μεταξύ των οποίων, 53 πρωτεΐνες υπερεκφράζονται και 79 πρωτεΐνες ρυθμίζεται προς τα κάτω. Είναι σημαντικό ότι, πολλά από τα διαφορικά μεταβληθεί πρωτεΐνες συνδέθηκαν με λιπίδια /το μεταβολισμό της γλυκόζης, οι οποίες συνδέονται επίσης με γλυκόλυση, ΜΑΡΚ, Wnt, NF-kB, NOTCH και επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) οδούς σηματοδότησης. Αυτά τα αποτελέσματα έχουν αποκαλύψει ένα νέο μηχανισμό που SBP1 μεσολάβηση αναστολή του καρκίνου μέσω μεταβληθεί οδών των λιπιδίων /της γλυκόζης μεταβολική σηματοδότηση

Παράθεση:. Ying Q, Ansong Ε, Diamond AM, Lu Ζ, Yang W, Bie X (2015 ) Ποσοτική πρωτεομική ανάλυση αποκαλύπτει ότι αντικαρκινικές επιδράσεις του σεληνίου-Binding Protein 1

In Vivo

σχετίζονται με μεταβολικές οδούς. PLoS ONE 10 (5): e0126285. doi: 10.1371 /journal.pone.0126285

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Chih-Hsin Tang, η Κίνα Ιατρικού Πανεπιστημίου, Ταϊβάν

Ελήφθη: 13 του Γενάρη του 2015? Αποδεκτές: 31 του Μάρτη 2015? Δημοσιεύθηκε: May 14, 2015

Copyright: © 2015 Ying et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από τις επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (επιχορήγηση # 91229115 και 81272251), επιχορήγηση για την πρωτοποριακή ομάδα της Επιστήμης και Τεχνολογίας, επαρχία Henan, Κίνα

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η ανθρώπινη πρωτεΐνη σελήνιο δέσμευσης 1 (SBP1, SELENBP1) ανήκει στην κατηγορία των πρωτεϊνών που περιέχουν σελήνιο στο οποίο σελήνιο είναι στενά συνδεδεμένο με το πεπτίδιο αντί ενσωματώνονται συν-μεταφραστικά ως σεληνοκυστεΐνης αμινοξύ (SEC) σε μία άλλη κατηγορία σεληνίου που περιέχουν πρωτεΐνη γλουταθειόνης υπεροξειδάσης 1 (GPx1). Το ανθρώπινο γονίδιο SBP1 κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη 472 αμινοξέων η οποία έχει ένα μοριακό βάρος ίσο με 56 kDa. Εκφράζεται σε μία ποικιλία κυττάρων και ιστών (ήπαρ, καρδιά, πνεύμονας, και νεφρό) και βρίσκεται στον πυρήνα ή /και κυτταρόπλασμα ανάλογα με τον τύπο κυττάρου, τον βαθμό διαφοροποίησης, και των περιβαλλοντικών σηματοδότηση [1-4]. Μειωμένη SBP1 έχει βρεθεί στην πλειονότητα των ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του ήπατος, καρκίνο του προστάτη, καρκίνο του μαστού, καρκίνο του πνεύμονα, και καρκίνο του παχέος εντέρου [5]. Αυτή η μείωση του SBP1 σχετίζεται με κακή κλινική έκβαση. Ωστόσο, βιολογικές λειτουργίες των SBP1 σε ανθρώπινους καρκίνους παραμένουν ασαφείς.

Έχει αναφερθεί ότι SBP1 είναι ένας στόχος της υποξίας-διεγέρσιμο παράγοντα-1 α (HIF1α) για να ανταποκριθεί σε αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) [3] . SBP1 θα μπορούσε επίσης να ρυθμίζουν αρνητικά γλουταθειόνης υπεροξειδάσης 1 (GPx1) δραστηριότητα χωρίς να αλλάζει την έκφραση της πρωτεΐνης του μέσω μιας φυσικής πρωτεΐνης αλληλεπίδραση [6]. von Hippel-Lindau πρωτεΐνη (pVHL) – αλληλεπιδρούν ένζυμο αποουβικιτινίωσης 1 (VDU1) βρέθηκε πρόσφατα ως μια άλλη πρωτεΐνη εταίρος της SBP1, η οποία συμμετείχε στην ubiquitination- και αποουβιτικινίωσης μεσολάβηση οδών πρωτεϊνικής αποδόμησης [7]. Όλη αυτή η εργασία προτείνει ότι SBP1 μπορεί να αλληλεπιδρά με άλλες πρωτεΐνες μέσω διαφορετικών οδών σηματοδότησης.

Για να πάρετε μια πιο ολοκληρωμένη κατανόηση της SBP1 λειτουργίες για τον καρκίνο, χρησιμοποιήσαμε μια πρωτεομική μέθοδο, ισοβαρικών ετικέτες για τη σχετική και απόλυτη ποσοτικοποίηση (iTRAQ) . iTRAQ είναι σήμερα μια από τις πιο ισχυρές τεχνικές που ποσοτικοποιεί πρωτεΐνες με βάση την επισήμανση του πεπτιδίου. Σε αντίθεση με πρωτεομική μέθοδος τζελ με βάση, iTRAQ εκθέματα πολύ καλύτερη ευαισθησία και επιτρέπει τον εντοπισμό και την ακριβή ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών από πολλαπλά δείγματα μέσα ευρύ δυναμικό εύρος των πρωτεϊνών αφθονίας [8].

Για την εξάλειψη πιθανών παρενεργειών επιμόλυνσης, εμείς δημιουργήσει ένα σταθερό SBP1 διεγέρσιμο κυτταρική σειρά χρησιμοποιώντας έναν-on Tet επαγώγιμο σύστημα έκφρασης γονιδίου που κάνει έκφραση SBP1 εξαιρετικά ελεγχόμενο και φθάνει σε ένα επίπεδο πολύ υψηλό επαγωγή σε κύτταρα. Όγκου αναστολή ρόλο της SBP1 παρατηρήθηκε

in vivo

. Τα διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών σε SBP1 επαγόμενη όγκους ξενομοσχεύματος ποντικού προσδιορίστηκαν με iTRAQ και οι μεταβολές κάποιων ταυτοποιημένες πρωτεΐνες επικυρώθηκαν με ανοσοστύπωση. Τα αποτελέσματα μας αποκάλυψαν ένα νέο μηχανισμό αντικαρκινική SBP1

in vivo

, η οποία ήταν συνδεδεμένη με λιπιδική /μεταβολισμό της γλυκόζης και σχετίζεται με ΜΑΡΚ /Wnt, NF-kB, NOTCH και EMT μονοπάτια σηματοδότησης.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την φροντίδα των ζώων και τη χρήση επιτροπής Xinxiang Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις έγινε υπό αναισθησία πεντοβαρβιτάλης και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Κυτταρική καλλιέργεια

Το ανθρώπινο παχύ έντερο κυτταρική γραμμή καρκινώματος HCT116 ελήφθη από την ATCC (American Type Culture Collection, USA) και διατηρήθηκαν σε μέσο McCoy 5Α (Mediatech, Manassas, VA). GP2-293 κυτταρική γραμμή αγοράστηκε από την Clontech (Mountain View, CA) και διατηρήθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ (Life Technologies, Carlsbad, CA). Όλα τα μέσα συμπληρώθηκαν με 10% FBS, 100 U /mL πενικιλλίνη, και 100 μg /mL στρεπτομυκίνη. Όλα τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C με 5% CO

2 σε ένα υγροποιημένο εκκολαπτήριο (Thermo Fisher Scientific).

πλασμίδιο κατασκευή

Για να δημιουργήσετε ρετροϊικό πλασμίδιο έκφρασης pRetroX-Tight-Pur -SBP1, ανθρώπινη SBP1 cDNA ενισχύθηκε και υποκλωνοποιήθηκε στον φορέα pRetroX-Tight-Pur (Clontech, Mountain View, CA) με τη χρήση θέσεων περιορισμού NotI και EcoRI. Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν: 5′-προς τα εμπρός ATAGCGGCCGCTACAGCATGGCTACGAAAT-3 ‘και αντίστροφος 5′-ACGAATTCGCTCAAATCCA GATGTCAGAGC-3’. Δύο πλασμίδια pRetroX-Tet-On για προχωρημένους (Tet στο φορέα ενεργοποιητή) και pVSV-G (φορέας Συσκευασία) αγοράστηκαν από την Clontech (Mountain View, CA).

συσκευασία Ρετροϊών

Τα κύτταρα συσκευασίας GP2-293 αναπτύχθηκαν σε 25 εκατοστά

2 φιάλες και επιμολύνονται χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Life Technologies) με 6 μg pVSV-G και είτε 2 μg pRetroX-Tight-Pur-SBP1 ή 2 μg pRetroX-Tight-On για προχωρημένους. Σαράντα οκτώ ώρες μετά την επιμόλυνση, το υπερκείμενο που περιείχε ιό συλλέχθηκε και καταψύχθηκε στους -20 ° C. Η γραμμή κυττάρων HCT116-TetSBP1 δημιουργήθηκε από μολύνοντας τα κύτταρα HCT116 με τον ιό που περιέχουν τόσο pRetroX-Tight-Pur-SBP1 και pRetroX-Tight-On για προχωρημένους. Ενιαία αποικία επιλέχθηκε μετά από επιλογή με 400 μg /mL G418 (Sigma) και 1 μg /mL πουρομυκίνη (Sigma). Η γραμμή κυττάρων HCT116-Act δημιουργήθηκε από μολύνοντας τα κύτταρα HCT116 με τον ιό που περιέχει pRetroX-Tight-On για προχωρημένους. Ενιαία αποικία επιλέχθηκε μετά από επιλογή με 400 μg /mL του G418 (Sigma).

ανάλυση ανοσοκηλίδωσης

HCT116-TetSBP1 και HCT116-Act κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 μg /mL δοξυκυκλίνη (Sigma) για 72 ώρες πριν την ανάλυση. Τα συλλεγμένα κύτταρα λύθηκαν σε 1χ Ρυθμιστικό Διάλυμα Κυτταρικής Λύσης (κυτταρική σηματοδότηση, Danvers, ΜΑ) που περιέχει 1 mM PMSF (Cell Signaling). Εγκεκριμένο κυτταρολύματος από κάθε κυτταρική γραμμή έβρασε με NuPAGE LDS Sample Buffer (Life Technologies) και 10χ αναγωγικό μέσο (Life Technologies) για 5 λεπτά πριν φορτωθούν σε ένα 4-12% κλίση Bis-Tris μετουσιωτική πηκτή πολυακρυλαμιδίου (Life Technologies). Μετά τον διαχωρισμό του δείγματος με ηλεκτροφόρηση, οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη Immobilon-FL (Millipore) μέσω ηλεκτροστύπωσης. Πρωτογενή αντισώματα και οι αραιώσεις συμπεριλαμβανομένων SBP1 σε 1: 1000 (ποντίκι, MBL International, Woburn, ΜΑ), β-ακτίνης σε 1: 10000 (ποντικού, Sigma), DKK1 σε 1: 1000 (κουνέλι, Proteintech, Chicago, IL), ANXA4 σε 1: 1000 (κουνέλι, Proteintech, Chicago, IL), PPIA σε 1: 1000 (κουνέλι, Proteintech, Chicago, IL), FABP4 σε 1: 1000 (κουνέλι, Proteintech, Chicago, IL), UGDH σε 1: 1000 ( κουνέλι, Proteintech, Chicago, IL), ALDH2 σε 1: 1000 (κουνέλι, Proteintech, Chicago, IL), ρ21 σε 1: 1000 (κουνέλι, Proteintech, Chicago, IL), φωσφο-Akt (Ser473) σε 1: 1000 ( κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), Akt σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), φωσφο-FOXO1 σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), φωσφο-ΙΝΚ σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), JNK σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), Pc-Jun σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ ), φωσφο-Κυκλίνη D1 σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), κυκλίνη D1 σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), φωσφο-ρ53 (Ser15) στο 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), TWIST σε 1: 1000 (κουνέλι, Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), β-κατενίνης σε 1: 500 (κατσίκα, Santa Cruz, Santa Cruz, CA), και GPX1 σε 1: 1000 (ποντίκι, MBL International, Woburn, ΜΑ) επωάστηκαν με μεμβράνη στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Το κατάλληλο δευτερεύον αντίσωμα (Beyotime Ινστιτούτο Βιοτεχνολογίας, Κίνα) εφαρμόστηκε (1: 1000, κουνέλι ή ποντίκι) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Σήμα ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας BeyoECL Plus (Beyotime Ινστιτούτο Βιοτεχνολογίας, Κίνα).

In vivo

άτριχων ποντικών ογκογένεση και τη μετάσταση δοκιμασία

Για το πείραμα ξενομόσχευμα, HCT116-Πράξη και HCT116 -TetSBP1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 μg /mL δοξυκυκλίνη για 72 ώρες και στη συνέχεια 2 χ 10

6 κύτταρα σε 100 μΙ PBS εγχύθηκαν υποδορίως σε 6-8 εβδομάδες ηλικίας BALB /c CD-1 Νυ θηλυκά ποντίκια στις διαφορετικές πλευρές ( HCT116-Act ήταν στην αριστερή πλευρά και HCT116-TetSBP1 ήταν στη δεξιά πλευρά). ανταλλάχθηκε δοξυκυκλίνη (200 μg /mL) διαλύθηκε σε 5% σακχαρόζη παρέχονται ως πόσιμο νερό κάθε 3 ημέρες. Τέσσερις εβδομάδες μετά την ένεση, οι όγκοι απομονώθηκαν και το βάρος (g) και όγκου (mm

3) των όγκων προσδιορίσθηκαν. Οι όγκοι αποθηκεύθηκαν στους -80 ° C μέχρι να χρησιμοποιηθεί για ανοσοκηλίδος και ανάλυση iTRAQ.

Για να παραχθεί πειραματική μετάσταση πνεύμονα, HCT116-Act και HCT116-TetSBP1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 μg /mL δοξυκυκλίνη για 72 ώρες και στη συνέχεια 2 χ 10

6 κύτταρα σε 100 μΙ PBS εγχύθηκαν εντός των πλευρικών φλέβες της ουράς 6-8 εβδομάδων BALB /c ηλικίας CD-1 Nu θηλυκά ποντίκια. ανταλλάχθηκε δοξυκυκλίνη (200 μg /mL) διαλύθηκε σε 5% σακχαρόζη παρέχονται ως πόσιμο νερό κάθε 3 ημέρες. Έξι εβδομάδες αργότερα, τα ποντίκια θυσιάστηκαν κάτω από αναισθησία. Οι πνεύμονες συλλέχθηκαν και σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη. Για την αξιολόγηση της μορφολογίας του ιστού, αιματοξυλίνη και ηωσίνη (ΗΕ) χρώση πραγματοποιήθηκε σε τομές από ενσωματωμένα δείγματα.

εκχύλισης πρωτεΐνης, την πέψη και την επισήμανση iTRAQ

Σύνολο πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από ιστό όγκου του HCT116-Act με ένεση (ACT) και HCT116-TetSBP1 εγχύθηκε ποντικούς (TetSBP1) χρησιμοποιώντας το ακόλουθο πρωτόκολλο. Τρεις βιολογική επαναλήψεις διεξήχθησαν για κάθε δείγμα και αναμίχθηκαν μαζί για την εκχύλιση των πρωτεϊνών. Ιστός όγκου έβρασε σε ρυθμιστικό SDT (4% SDS, 100 mM Tris-HCl, 1 mM DTT, ρΗ 7.6) για 5 λεπτά, ομογενοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας FastPrep-24 (ΜΡ Biomedicals, 6Μ /S, 30s, δύο κύκλοι) και έπειτα σε επεξεργασία με υπερήχους ( 100W, 30 δευτερόλεπτα σε 30 δευτερόλεπτα μακριά, 10 κύκλοι). Το ομογενοποίημα φυγοκεντρήθηκε στα 12.000 για 10 λεπτά στους 4 ° C. Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν σύμφωνα με την μέθοδο Bradford [9]. Μία ίση ποσότητα πρωτεϊνών παρασκευάστηκε για κάθε δείγμα. πέψη Πρωτεΐνη πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τη διαδικασία που περιγράφεται από FASP Wisniewski, Zougman et al. [10] και το προκύπτον πεπτίδιο μείγμα σημάνθηκε χρησιμοποιώντας το 4-plex αντιδραστήριο iTRAQ σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Applied Biosystems). Εν συντομία, 200 μg των πρωτεϊνών για κάθε δείγμα ενσωματώθηκαν 30 μΐ ρυθμιστικού STD (4% SDS, 100 mM DTT, 150 mM Tris-HCl ρΗ 8.0). Το απορρυπαντικό, DTT και άλλων συστατικών χαμηλού μοριακού βάρους απομακρύνθηκαν χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό UA (8 Μ ουρία, 150 mM Tris-HCl ρΗ 8.0) με επαναλαμβανόμενη υπερδιήθηση (μονάδες Microcon, 30 kD). Στη συνέχεια, 100 μΙ 0,05 Μ ιωδοακεταμίδιο σε ρυθμιστικό UA προστέθηκε για να εμποδίσει μειωμένη υπολείμματα κυστεΐνης και τα δείγματα επωάστηκαν για 20 λεπτά στο σκοτάδι. Τα φίλτρα πλύθηκαν με 100 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος UA τρεις φορές και στη συνέχεια 100 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος DS (50 mM triethylammoniumbicarbonate σε ρΗ 8,5) δύο φορές. Τέλος, τα εναιωρήματα πρωτεΐνης σε πέψη με 2 μg θρυψίνη (Promega) σε 40 μl ρυθμιστικό DS όλη τη νύκτα στους 37 ° C, και τα προκύπτοντα πεπτίδια συνελέγησαν ως διήθημα. Η περιεκτικότητα σε πεπτίδιο εκτιμήθηκε με UV φως φασματική πυκνότητα στα 280 nm χρησιμοποιώντας έναν συντελεστή εξαφάνισης του 1,1 του 0,1% (g /l) διάλυμα που υπολογίστηκε με βάση τη συχνότητα της τρυπτοφάνης και τυροσίνης σε σπονδυλωτά πρωτεΐνες. Για την επισήμανση, κάθε αντιδραστήριο iTRAQ διαλύθηκε σε 70 μΐ αιθανόλης και προστίθενται στο αντίστοιχο μίγμα πεπτιδίων. Τα δείγματα σημάνθηκαν ως (TetSBP1) -114, (ACT) -115, και ήταν πολυπλεξίας και ξηραίνεται υπό κενό.

υγρής χρωματογραφίας (LC) -electrospray ιονισμού (ESI) tandem MS ανάλυση (MS /MS) με Q exactive

Το μίγμα πεπτιδίων αφαλατώθηκε σε C18 Φυσίγγια (Sigma), έπειτα συμπυκνώθηκαν με φυγοκέντρηση κενού και ανασυσταθεί σε 40 μΐ 0,1% (ν /ν) τριφθοροξικό οξύ. Πειράματα MS εκτελέστηκαν σε ένα φασματόμετρο μάζας Q Exactive που συζεύχθηκε με Easy NLC (Thermo Fisher Scientific). 10 μΐ του δείγματος εγχύθηκε για ανάλυση nanoLC-MS /MS. Το μίγμα πεπτιδίων (5 μg) φορτώθηκε σε μία στήλη C18-ανάστροφης φάσης (Thermo Scientific Easy Στήλη, μήκους 10 cm, 75 μm εσωτερικής διαμέτρου, 3 μm ρητίνη) σε ρυθμιστικό Α (0,1% μυρμηκικό οξύ) και διαχωρίζεται με μία γραμμική βαθμίδα ρυθμιστικού Β (80% ακετονιτρίλιο και 0.1% μυρμηκικό οξύ) σε ένα ρυθμό ροής 250 nl /min ελέγχεται από την τεχνολογία IntelliFlow πάνω από 240 λεπτά. MS δεδομένα αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας μια μέθοδο top10 δεδομένα που εξαρτώνται δυναμικά την επιλογή των πλέον άφθονα πρόδρομος ιόντα από τη σάρωση έρευνας (300-1800 m /z) για κατακερματισμό HCD. Καθορισμός της τιμής-στόχου βασίζεται στην προγνωστική Αυτόματος Έλεγχος Gain (pagC). Δυναμική διάρκεια του αποκλεισμού ήταν 60 s. σαρώσεις έρευνα αποκτήθηκαν με ανάλυση 70.000 στα m /z 200 και το ψήφισμα για τα φάσματα HCD ορίστηκε σε 17.500 σε m /z 200. κανονικοποιημένη ενέργεια σύγκρουσης ήταν 30 eV και ο λόγος underfill, το οποίο καθορίζει το ελάχιστο ποσοστό της τιμής στόχου πιθανό για να φτάσει σε μέγιστο χρόνο πλήρωσης, ορίστηκε ως 0,1%. Το όργανο λειτουργεί με ενεργοποιημένη τη λειτουργία αναγνώρισης πεπτιδίου

ταυτοποίηση πρωτεϊνών iTRAQ και ποσοτικοποίηση

MS /MS φάσματα αναζήτηση χρησιμοποιώντας τη μηχανή ΜΑΣΚΩΤ (Matrix Science, Λονδίνο, Ηνωμένο Βασίλειο? Έκδοση 2.2). Ενσωματωθεί σε Proteome Discoverer 1.3 (Thermo Electron, San Jose, CA) έναντι UniProt βάση δεδομένων του Ανθρώπου (136.615 ακολουθίες, κατεβάσει στις 7 Μαΐου 2014) και της βάσης δεδομένων δόλωμα. Για την ταυτοποίηση πρωτεϊνών, χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθες επιλογές: Peptide ανοχή μάζα = 20 ppm, ανοχή MS /MS = 0.1 Da, Enzyme = θρυψίνη, Αναπάντητες διάσπαση = 2, Σταθερή τροποποίηση: Carbamidomethyl (C), iTRAQ 4-Plex (K), iTRAQ 4-Plex (Ν-όρος), Μεταβλητή τροποποίηση: Οξείδωση (Μ), FDR≤0.01. Λαμβάνοντας υπόψη ότι οι πολλαπλές MS /MS φάσματα αγώνα σε ένα πεπτίδιο, εξομάλυνση των εντάσεων σήματος του κάθε MS /MS φάσματα διεξήχθη για να βρείτε το πιο πιθανό λόγο έκφρασης για ένα πεπτίδιο. Για ποσοτικές αλλαγές, μια 1.2-φορές αποκοπής ορίστηκε για τον προσδιορισμό up-συσσωρευτεί κάτω-συσσωρευμένων πρωτεϊνών, με τιμή p & lt? 0.05.

Βιοπληροφορική ανάλυση

Λειτουργική ανάλυση πρωτεϊνών προσδιορίζονται διεξήχθη χρησιμοποιώντας Gene Ontology (GO) σχολιασμός (https://www.geneontology.org/) και πρωτεΐνες κατηγοριοποιούνται ανάλογα με τη βιολογική τους διαδικασία, μοριακή λειτουργία και κυτταρικό εντοπισμό [11]. Τα διαφορικά συσσωρευμένες πρωτεΐνες περαιτέρω ανατεθεί στην Εγκυκλοπαίδεια του Κιότο γονιδίων και γονιδιωμάτων βάση δεδομένων (KEGG) (https://www.genome.jp/kegg/pathway.html) [12].

Αποτελέσματα

επαγωγή SBP1 σε άτριχα ποντίκια ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου των ξενομοσχευμάτων

επίπεδα έκφρασης SBP1 σε HCT116-Act και τα κύτταρα HCT116-TetSBP1 προσδιορίστηκαν με ανάλυση ανοσοκηλίδωσης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, HCT116-TetSBP1 κυτταρική γραμμή που εκφράζεται υψηλό επίπεδο SBP1 μετά την επαγωγή δοξυκυκλίνη, σε σύγκριση με τα κύτταρα HCT116-Act. Για να ελεγχθεί αν SBP1 υπερέκφραση είχε λειτουργία καταστολής όγκων

in vivo

όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [13], εκτελέσαμε πειράματα ξενομοσχεύματος σε CD1 Νυ γυμνά ποντίκια (η = 10 σε σύνολο). HCT116-Act και HCT116-TetSBP1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 μg /mL δοξυκυκλίνη για 72 ώρες και στη συνέχεια 2 χ 10

6 κύτταρα σε 100 μΙ PBS εγχύθηκαν υποδορίως σε 6-8 εβδομάδες ηλικίας BALB /c CD-1 Nu θηλυκό ποντίκια στις διαφορετικές πλευρές, αντίστοιχα. HCT116-Act ήταν στην αριστερή πλευρά και HCT116-TetSBP1 ήταν στη δεξιά πλευρά. Για να διατηρηθεί επίμονα επαγωγή SBP1, ανταλλάχθηκε δοξυκυκλίνη (200 μg /mL) διαλύθηκε σε 5% σακχαρόζη παρέχονται ως πόσιμο νερό κάθε 3 ημέρες. Τέσσερις εβδομάδες μετά την ένεση, οι όγκοι απομονώθηκαν, και το βάρος του όγκου (g) και όγκου (mm

3) αναλύθηκαν. Βρήκαμε ότι τα μεγέθη του όγκου που προέρχονται από κύτταρα HCT116-TetSBP1 ήταν πολύ μικρότερες από εκείνες στα κύτταρα HCT116-Act ομάδα ελέγχου (Σχήμα 1 Β και 1 C). Επιπλέον, το βάρος των όγκων που προέρχονται από τα κύτταρα HCT116-TetSBP1 ήταν σημαντικά μειωμένη, σε σύγκριση με HCT116-Act (Σχήμα 1 D). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν έντονα ότι το

in vivo

επαγωγή SBP1 έδειξαν αναστολή όγκου σε ποντίκια.

(Α) SBP1 επάγεται από δοξυκυκλίνη σε κύτταρα HCT116-TetSBP1 επικυρώθηκαν με ανάλυση ανοσοστυπώματος. (Β) Οι φωτογραφίες απεικονίζουν αντιπροσωπευτικές όγκων σε ξενομοσχεύματα με επαγωγή SBP1 (TetSBP1, δεξιά) σε σύγκριση με τους όγκους χωρίς επαγωγή SBP1 (Πράξη, αριστερά). 10 ποντίκια συνολικά. (C-D) επαγωγή SBP1 οδηγεί σε μείωση του όγκου του όγκου και του βάρους. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με t-test του Student και παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD. ** P & lt?. 0.01

Η

SBP1 επαγωγή κατέστειλε μετάσταση όγκου

in vivo

Η

Για να εξετάσει SBP1 αναστολή της μετάστασης των όγκων, η HCT116-Πράξη και HCT116-TetSBP1 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 μg /mL δοξυκυκλίνη για 72 ώρες και στη συνέχεια 2 χ 10

6 κύτταρα σε 100 μΙ PBS εγχύθηκαν εντός των πλευρικών φλέβες της ουράς 6-8 εβδομάδων BALB /c ηλικίας CD-1 Nu θηλυκά ποντίκια (η = 5 για κάθε ομάδα). Για να διατηρηθεί επίμονα επαγωγή SBP1, ανταλλάχθηκε δοξυκυκλίνη (200 μg /mL) διαλύθηκε σε 5% σακχαρόζη παρέχονται ως πόσιμο νερό κάθε 3 ημέρες. Μετά από 6 εβδομάδες οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν και οι πνεύμονες ποντικού συλλέχθηκαν, σταθεροποιήθηκαν και τεμαχίζεται. Βρήκαμε ότι τα ποντίκια μεταμοσχευμένα με κύτταρα HCT116-Act είχε ορατό πνευμονικής μεταστατικών οζιδίων, ενώ καμία ποντίκι στην ομάδα HCT116-TetSBP1 έδειξε ορατή μετάσταση πνεύμονα (σχήμα 2Α). Μετά αιματοξυλίνη και χρώση ηωσίνης (ΗΕ), μετρήθηκαν οι αριθμοί των πνευμονικών μεταστατικών οζιδίων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα ποντίκια με επαγωγή SBP1 (ομάδα HCT116-TetSBP1) οδήγησε σε σημαντική μείωση της πνευμονικής μεταστατικών οζιδίων (Σχήμα 2Β), υποδεικνύοντας μία μεταστατική αναστολή της SBP1

in vivo

.

( Α) Αντιπροσωπευτικές εικόνες των πνευμόνων και αιματοξυλίνη και εοσίνη (ΗΕ) -χρώση των πνευμόνων που απομονώθηκαν από τα ποντίκια που έλαβαν ένεση ουρά φλέβα των κυττάρων HCT116-Act (νόμος) και τα κύτταρα HCT116-TetSBP1 (TetSBP1). Κάθε ομάδα περιέχει 5 ποντικούς. Βέλη απεικονίζει τις ορατές οζίδια και μεταστατικό οζίδια στον πνεύμονα. Κλίμακα bar = 200 μm. (Β) επαγωγή SBP1 αναστέλλει τη μετάσταση των όγκων

in vivo

. Οι αριθμοί των πνευμονικών μεταστατικών οζιδίων μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο και αναλύθηκαν με t-test του Student. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD. ** Ρ & lt?. 0.01

Η

Ποσοτική ταυτοποίηση και βιοπληροφορικής ανάλυση πρωτεϊνών ιστού του όγκου προσδιορίστηκαν με iTRAQ

Για τον προσδιορισμό των μηχανισμών SBP1 μεσολάβηση αναστολή της ανάπτυξης του όγκου και των μεταστάσεων σε ποντικούς, εξάγαμε ολική πρωτεΐνη από τον ιστό του όγκου του HCT116-Act εγχυθεί (ACT) και HCT116-TetSBP1 εγχύθηκε ποντικούς (TetSBP1), και τα προφίλ πρωτεΐνης διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας iTRAQ. Τελικά, εντοπίστηκαν 9147 μοναδικά πεπτίδια, 2015 ομάδες των πρωτεϊνών και 1975 πρωτεϊνών. Η κατανομή των μηκών και αριθμών πεπτιδίων, η μάζα και η κάλυψη αλληλουχία των πρωτεϊνών παρέχονται (S1 πίνακα).

Οι αλλαγές στο προφίλ πρωτεΐνης σε απόκριση σε επαγωγή SBP1 αναλύθηκαν. 132 πρωτεΐνες έδειξαν σημαντική διαφορά (τιμή-ρ & lt? 0,05) με μία FDR μικρότερη του 1%, συμπεριλαμβανομένων 53 ρυθμίζεται προς τα πάνω πρωτεΐνες και 79 ρυθμίζεται προς τα κάτω πρωτεΐνες. Σχετικές λεπτομερείς πληροφορίες παρέχονται (S2 Πίνακας). Αυτά τα διαφορικά συσσωρευμένες πρωτεΐνες εμπλουτισμένο 1364 σχολιασμούς μέσω της ανάλυσης GO, και ταξινομήθηκαν σε τρεις ομάδες: βιολογική διαδικασία, μοριακή λειτουργία και κυτταρικού συστατικού (Σχήμα 3Α). Οι κύριες κατηγορίες της βιολογικής διαδικασίας περιλαμβάνονται κυτταρική διαδικασία, διαδικασία ενός οργανισμού, βιολογική ρύθμιση, μεταβολική διαδικασία και την ανταπόκριση σε ερεθίσματα. Βασισμένο σε διαφορετικές μοριακές λειτουργίες, αυτές οι πρωτεΐνες χωρίστηκαν σε ομάδες των δεσμευτικών, καταλυτική δραστικότητα, δραστικότητα δομικό μόριο, δραστικότητα ρυθμιστής ενζύμου δραστικότητα μεταφορέα και αντιοξειδωτική δράση. Αυτές οι πρωτεΐνες συμμετείχαν επίσης σε διάφορα κυτταρικά συστατικά, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων, οργανιδίων, μακρομοριακές συγκρότημα, μεμβράνη και αυλό μεμβράνη που περικλείεται. Αυτά τα διαφορικά συσσωρευμένες πρωτεΐνες περαιτέρω ταξινομούνται χρησιμοποιώντας τη βάση δεδομένων KEGG. Οι κύριες οδοί που εμπλέκονται στις διαφορικά εκφρασμένες πρωτεΐνες που προκύπτουν από την επαγωγή SBP1, συμπεριλαμβανομένων μεταγραφική απορρύθμιση στον καρκίνο, σφιχτό διασταύρωση, λυσόσωμα, επεξεργασίας πρωτεΐνης σε ενδοπλασματικό δίκτυο, HIF-1 μονοπάτι σηματοδότησης, ΡΙ3Κ-Akt μονοπατιού σηματοδότησης, μονοπάτια στον καρκίνο, πρωτεογλυκάνες στον καρκίνο , microRNAs στον καρκίνο, και γλυκόλυση /γλυκονεογένεση, και άλλα μονοπάτια. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι η λιπιδίου /μεταβολισμού της γλυκόζης είναι ιδιαίτερα σχετίζεται με την καρκινογένεση [14-17]. Ως εκ τούτου, μπορούμε στη συνέχεια ανέλυσε τις ως επί το πλείστον αλλαγή των πρωτεϊνών που συνδέονται με λιπίδια /μεταβολισμού της γλυκόζης από τους όγκους ξενομοσχεύματος ποντικού. Είναι ενδιαφέρον, δεκατρία πρωτεΐνες του μεταβολισμού των λιπιδίων που σχετίζονται και επτά γλυκόζη πρωτεΐνες του μεταβολισμού που σχετίζονται με μεταβλήθηκαν σημαντικά με επαγωγή SBP1 σε όγκους ξενομοσχεύματος ποντικού. Όλα αυτά /πρωτεϊνών του μεταβολισμού της γλυκόζης που σχετίζονται με λιπίδιο που απεικονίζεται στο Σχήμα 3Β βασίζονται σε βιολογικές τους λειτουργίες μέσω Γονιδιακή Οντολογία ανάλυση (GO)

(Α) Όλα τα 132 διαφορετικά συσσωρευμένες πρωτεΐνες κατατάσσονται σε τρεις ομάδες:. Βιολογική διαδικασία, μοριακή λειτουργία, και κυτταρικών συστατικών μέσω της ανάλυσης GO. (Β) Οι αριθμοί των λιπιδίων /της γλυκόζης πρωτεϊνών του μεταβολισμού που σχετίζονται φάνηκε μέσω της ανάλυσης GO.

Η

Αλλαγές της /του μεταβολισμού της γλυκόζης που συνδέονται με τις πρωτεΐνες των λιπιδίων με την απάντηση στην πρόκληση SBP1

Όπως φαίνεται στο Σχ 3Β, επελέγησαν δεκατρία πρωτεΐνες του μεταβολισμού των λιπιδίων που σχετίζονται, μεταξύ των οποίων πέντε απορυθμίζεται πρωτεΐνες και οκτώ μειωτικά πρωτεΐνες (Πίνακας 1). Οι πιο απορυθμίζεται πρωτεΐνες με επαγωγή SBP1 περιλαμβάνονται DKK1 που αναστέλλει WNT μονοπάτι [18], DHCR7 που ελέγχει τη σύνθεση D χοληστερόλη και η βιταμίνη [19], ANXA4 που αναστέλλει NFkB μονοπάτι και IL-8 [20], και AGPAT5 που αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό κυττάρων καρκίνου του μαστού [21]. Όλες αυτές οι πρωτεΐνες έχουν αναφερθεί ότι παρουσιάζουν δυνητική αντικαρκινική δράση. Ότι, άλλες πρωτεΐνες, όπως LPCAT2 που εκφράζεται εξαιρετικά σε φλεγμονώδη κύτταρα [22], BPIFA3 που εκφράζεται έντονα στον καρκίνο του πνεύμονα [23], PPIA που ενεργοποιεί NFkB μονοπάτι [24], και FABP4 που έχει προ-αγγειογενετική ρόλο [25 ], τα μειωτικά στη SBP1 όγκους υπερέκφραση ξενομοσχεύματος. Αντίθετα, επτά γλυκόζης πρωτεϊνών του μεταβολισμού που σχετίζονται με σημαντικά προς τα κάτω σε SBP1 όγκους υπερέκφραση ξενομοσχεύματος, συμπεριλαμβανομένης της GAA, GAPDH, ALDH2, θειορεδοξίνη, ΕΝΟ3, UGDH και Lumican (Πίνακας 2).

Η

Για να επικυρώνει τις διαφορικές μεταβολές των /γλυκόζης πρωτεΐνες του μεταβολισμού των λιπιδίων που σχετίζονται προσδιορίστηκαν από iTRAQ πρωτεομική ανάλυση σε όγκους ξενομοσχεύματος ποντικού, διεξήχθησαν ανοσοαποτύπωση αναλύσεις. Συνεπής με αυτά που παρατηρήθηκαν από το προφίλ iTRAQ, δύο πρωτεΐνες (DKK1 και ANX4) αυξήθηκαν σημαντικά και τέσσερις πρωτεΐνες (PPIA, FABP4, ALDH2 και UGDH) μειώθηκαν σημαντικά σε SBP1 όγκους ξενομοσχεύματος υπερέκφραση (S1 Εικ). Η υψηλή συνοχή έδειξε την υψηλή αξιοπιστία των αποτελεσμάτων iTRAQ. Τα δεδομένα MS /MS αυτών των έξι πρωτεϊνών που παρέχονται (S2 σχήμα).

αναστολή του όγκου των SBP1 συνδέθηκε με πολλαπλές οδούς σηματοδότησης

in vivo

Η

Για τον προσδιορισμό των πρόσθετων μηχανισμών της επαγωγής SBP1 μεσολάβηση αναστολή της ανάπτυξης του όγκου και της μετάστασης, αναλύσαμε την ανάπτυξη του όγκου και της μετάστασης μονοπάτια σηματοδότησης που σχετίζεται με τη χρήση δειγμάτων πρωτεΐνης όγκου ξενομοσχεύματος ποντικού που χρησιμοποιήθηκαν επίσης για iTRAQ πρωτεομική ανάλυση. Πρώτον, GPX1 ήταν μειωτικά σε TetSBP1 όγκους (Σχήμα 4), σύμφωνα με αυτά που παρατηρήθηκαν σε ανθρώπινους ιστούς καρκίνου του προστάτη [26], αλλά ήταν διαφορετικό από τα

in vitro

μελέτες οι οποίες έδειξαν ότι υπερεκφράζουν SBP1 δεν επηρέασε GPX1 τα επίπεδα πρωτεΐνης σε HCT116 κύτταρα αν και δραστηριότητες GPX1 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω [6]. Αυτή η εύρεση πρότεινε εκ νέου αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ SBP1 και GPX1

in vivo

δεν

in vitro

. Δεύτερον, η επαγωγή του SBP1 οδήγησε σε ενεργοποίηση του JNK1 /Wnt μονοπάτι, από την άποψη της αυξημένης φωσφορυλίωσης των ΙΝΚ1 και c-Jun, και μειωμένη έκφραση β-κατενίνης και κατάντη των στόχων της Κυκλίνης D1, ειδικότερα, φωσφορυλιωμένη Κυκλίνη D1 ήταν σημαντικά μειωτικά ( Σχήμα 4). Επιπλέον, οι αναστολείς β-κατενίνης ρ53 (ρ53 φωσφορυλιώνεται, ρ-ρ53) και ρ21, μια άμεση κατάντη στόχος της ρ53, αυξήθηκαν σε απόκριση σε επαγωγή SBP1 σε όγκους TetSBP1 ποντικού (Σχήμα 4). Τρίτον, η επαγωγή της SBP1 οδήγησε σε σημαντική μείωση του TWIST (Σχήμα 4), μία κρίσιμη ρυθμιστική για ΕΜΤ και μετάσταση.

διάφορους τυπικούς δείκτες διαφορετικών οδών σηματοδότησης εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας iTRAQ δείγματα πρωτεΐνης πρωτεομική ανάλυση. Αυτά τα μονοπάτια σηματοδότησης που σχετίζονται με τον καρκίνο ανταποκρίνονται διαφορετικά σε επαγωγή SBP1.

Η

Συζήτηση

Μειωμένη έκφραση του SBP1 έχει παρατηρηθεί σε διάφορους τύπους ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων του παχέος εντέρου, του πνεύμονα, του οισοφάγου, του στομάχου, του καρκίνους του μαστού και του ήπατος, και η μείωση του SBP1 συνδέεται με κακή επιβίωση [5]. Μείωση του SBP1 αυξημένη κυτταρική κινητικότητα, προώθησε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, και κατέστειλε τη διαφοροποίηση των κυττάρων

in vitro

, αν και τα ποντίκια με SBP1 γενετική ανεπάρκεια (δηλ SBP1 knockout ποντίκια) δεν έδειξαν προφανή φαινοτύπους [3,27,28]. Αντίθετα, η αύξηση της έκφρασης SBP1 σε κύτταρα με επιμόλυνση SBP1 εκφράζουν το πλασμίδιο θα μπορούσε να οδηγεί τη γήρανση, η αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων, τη μετανάστευση και την ανάπτυξη του όγκου σε ανοσοκατεσταλμένους ποντικούς [3,13,29,30]. προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι SBP1 μειώθηκε στις περισσότερες ορθοκολικούς όγκους συγκριτικά με μη όγκου ιστούς ενώ έχει μεταβλητά επίπεδα έκφρασης σε διαφορετικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου [6,13,29]. Για παράδειγμα, SBP1 εκφράζεται έντονα σε LS174T, Caco-2, ΗΤ-29 και MCF-7, αλλά μη ανιχνεύσιμη σε HCT116. Έτσι ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρική σειρά HCT116 χρησιμοποιήθηκε για να υπερεκφράζουν SBP1 στη μελέτη μας. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιώντας ένα επαγώγιμο σύστημα και το μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού, έχουμε βρει ότι

in vivo

επαγωγή SBP1 έδειξαν σημαντική αντικαρκινικές επιδράσεις, συμπεριλαμβανομένης της ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση σε γυμνούς ποντικούς. Πλεονεκτήματα της χρήσης αυτό SBP1 Tet-on επαγώγιμο σύστημα έκφρασης γονιδίου παρατίθενται ως εξής: 1) Η παρούσα επαγώγιμο σύστημα έκφρασης γονιδίου καθιστά SBP1 υπερέκφραση ελεγχόμενη, έτσι, τα κύτταρα διατηρούνται χωρίς SBP1 παρεμβολή και η ζημιά διαμόλυνση μπορεί να ελαχιστοποιηθεί όταν απαιτείται υπερέκφραση? 2) Σε αυτή τη μελέτη, η έκφραση SBP1 δεν έχει καμία τροποποίηση ετικέτα και η εκφρασμένη πρωτεΐνη παραμένει στη φυσική του κατάσταση. Όλα αυτά παρατήρηση πρότεινε ότι τόσο ενδογενείς και έκτοπη SBP1 θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως μια πιθανή ογκοκατασταλτικό.

Για τον προσδιορισμό των υποκείμενων μοριακών μηχανισμών, ο προσδιορισμός ετικέτα iTRAQ πρωτεομική τεχνική αυτή χρησιμοποιείται. Μεταξύ των 1.975 ταυτοποιημένες πρωτεΐνες, 132 πρωτεΐνες εκφράζονται διαφορικά σε SBP1 προκαλούμενη ιστό όγκου. Περαιτέρω ανάλυση περιόρισε τα διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών σε μεταβολισμό που σχετίζονται και επτά γλυκόζης πρωτεϊνών του μεταβολισμού που σχετίζονται με δεκατρία λιπιδίων. Μεταξύ των πρωτεϊνών του μεταβολισμού που σχετίζονται με δεκατρία λιπιδίων, οι πέντε ρυθμίζεται προς τα πάνω (DKK1, HSP60, DHCR7, ANXA4 και AGPAT5) και οκτώ ρυθμίστηκαν προς τα κάτω (LPCAT2, GPX5, GAPDH, NMe2, ALDH2, BPIFA3, PPIA και FABP4). Στις απορυθμίζεται πρωτεΐνες με επαγωγή SBP1, DKK1 είναι γνωστή ως αναστολέας του μονοπατιού Wnt /β-κατενίνης [18]. Προς τα πάνω ρύθμιση DKK1 μπορούσε δραστικού Jun Ν-τερματικής κινάσης (JNK) και επάγουν την απόπτωση [31,32], και μπορεί να ρυθμίζει αρνητικά την ΕΜΤ μέσω αναστολής TWIST [33]. Στην πραγματικότητα, προηγούμενες μελέτες μας έδειξαν ότι η ενεργοποιημένη JNK1 μπορεί επίσης να ρυθμίζει αρνητικά την β-κατενίνης μέσω GSK3-βήτα [34]. Επιπλέον, η αυξημένη έκφραση του DKK1 μπορούσε να οδηγήσει σε ρύθμιση προς τα κάτω της Κυκλίνης D1, άμεση προς τα κάτω στόχος του βήτα-κατενίνης. προηγούμενη εργασία μας κατέδειξε επίσης μια ρυθμιστική αλληλεπίδραση μεταξύ των JNK1 και p21 [35]. Στο παρόν βρήκαμε ότι ως απάντηση στην ρύθμιση προς τα άνω των DKK1 και JNK1, p21 και p53 ανοδικά τον στόχο της αυξήθηκαν επίσης (Σχήμα 4). Είναι ενδιαφέρον ότι, στο μονοπάτι του σήματος Wnt /β-κατενίνης, υπάρχει μια αρνητική ρυθμιστική αλληλεπίδραση μεταξύ βήτα-κατενίνης /κυκλίνης D1 και ρ53 /ρ21 [36]. Μεταξύ των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τον μεταβολισμό των λιπιδίων επικυρωμένα, ANXA4 ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω και προς τα κάτω ρυθμισμένη PPIA ήταν. Έχει αναφερθεί ότι ANXA4 μπορούσε καταστέλλει δραστικότητα μεταγραφικής ΝΡ-κΒ από την αλληλεπίδραση με το NF-kB ρ50 υπομονάδα [20] και κυτοκίνες (π.χ. IL-8 [37]). Σε αντίθεση, PPIA μπορούσε ενεργού οδού NF-kB και φλεγμονωδών σηματοδότηση [24]. Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ισχυρά ότι η ενεργοποίηση του NF-kB και χρόνιας φλεγμονής παίζουν σημαντικό ρόλο στο σχηματισμό και την εξέλιξη [38] του καρκίνου. Μια άλλη μειωτικά πρωτεΐνη ήταν FABP4. Έχει αναφερθεί ότι μεσολαβεί FABP4 VEGFA εξαρτώμενη προ-αγγειογενετική δράση, η οποία είναι συνδεδεμένη με σηματοδότηση NOTCH διάρκεια καρκινογένεση και μετάσταση [25].

Και οι επτά γλυκόζη πρωτεΐνες του μεταβολισμού που σχετίζονται με ρυθμίστηκαν προς τα κάτω σε SBP1 ιστού που προκαλείται όγκων , συμπεριλαμβανομένων των GAA, GAPDH, ALDH2, θειορεδοξίνη, ΕΝΟ3, UGDH και Lumican. UGDH (αφυδρογονάση UDP-γλυκόζη) καταλύει την οξείδωση της UDP-γλυκόζης για να αποδώσει UDP-γλυκουρονικό οξύ, έναν πρόδρομο του υαλουρονικού οξέος (ΗΑ) και άλλες γλυκοζαμινογλυκάνες (GAGs) σε εξωκυτταρική μήτρα. Μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η μείωση UGDH αναστέλλει τη συσσωμάτωση των κυττάρων και μετανάστευση [39]. Επιπλέον, αναφέρθηκε ότι ALDH2 απενεργοποίηση θα μπορούσε να αυξήσει την κυτταροτοξικότητα που παράγονται από την υπεροξείδωση των λιπιδίων [40]. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η ρύθμιση προς τα κάτω της UGDH και ALDH2 μπορεί να αποδοθεί στις αντικαρκινικές δράσεις της SBP1.

Εν ολίγοις, με τη χρήση ενός συστήματος που επάγεται SBP1 και

in vivo

μοντέλο ποντικού, οι μελέτες μας έχουν σαφώς εμφανίζονται ρόλοι ότι η αναστολή του όγκου των SBP1 σχετίζεται με αλλοιώσεις του /της γλυκόζης πρωτεϊνών του μεταβολισμού των λιπιδίων που σχετίζονται με τη συμμετοχή πολλαπλών οδών σηματοδότησης, αποκαλύπτοντας ένα νέο μοριακό μηχανισμό αναστολής των όγκων από SBP1.