Αφηρημένο

πόνο του καρκίνου των οστών είναι η πιο σοβαρή μεταξύ του πόνου από καρκίνο και είναι συχνά ανθεκτικά στην τρέχουσα αναλγητικά. Έτσι, η ανάπτυξη νέων αναλγητικών αποτελεσματική στη θεραπεία του πόνου από καρκίνο των οστών είναι επιθυμητές. ανταγωνιστές υποδοχέα παράγοντα ενεργοποίησης αιμοπεταλίων (PAF) πρόσφατα αποδείχθηκε ότι έχουν αποτελεσματική ανακούφιση του πόνου αποτελέσματα επί του νευροπαθητικού πόνου σε αρκετά ζωικά μοντέλα. Η παρούσα μελέτη εξέτασε την αναλγητικό αποτέλεσμα των ανταγωνιστών των υποδοχέων PAF επί του πόνου από καρκίνο των οστών με τη χρήση του καρκίνου του μηριαίου οστού (FBC) μοντέλο σε ποντίκια. Τα ζώα εγχύθηκαν με οστεολυτικές κύτταρα NCTC2472 στην κνήμη, και στη συνέχεια αξιολογήθηκαν οι επιδράσεις των ανταγωνιστών του υποδοχέα PAF στις συμπεριφορές πόνου. Χημική δομή διαφορετικό τύπο των ανταγωνιστών, TCV-309, ΒΝ 50739 και WEB 2086 βελτιωθεί η αλλοδυνία και βελτίωσε τις συμπεριφορές πόνου όπως η φύλαξη ανωμαλίες συμπεριφοράς και των άκρων χρήση σε ποντίκια μοντέλο FBC. Η ανακούφιση του πόνου αποτελέσματα αυτών των ανταγωνιστών επιτεύχθηκαν με χαμηλές δόσεις και ήταν μακράς διαρκείας. Ο αποκλεισμός του νωτιαίου υποδοχέων PAF με ενδορραχιαία έγχυση TCV-309 και WEB 2086 ή knockdown της έκφρασης της σπονδυλικής πρωτεΐνης υποδοχέα PAF με ενδορραχιαία μεταφορά του PAF υποδοχέων siRNA παρήγαγε επίσης ένα αναλγητικό αποτέλεσμα. Η ποσότητα ενός επαγώγιμου ενζύμου σύνθεση PAF, λυσοφωσφατιδυλοχολίνη ακυλτρανσφεράσης 2 (LPCAT2) πρωτεΐνη αυξήθηκε σημαντικά στο νωτιαίο μυελό μετά τη μεταμόσχευση του NCTC 2472 καρκινικά κύτταρα σε κνήμη ποντικού. Ο συνδυασμός της μορφίνης με ανταγωνιστές των υποδοχέων PAF αναπτύσσει αξιοσημείωτη ενίσχυση της αναλγητικής δράσης κατά του πόνου από καρκίνο των οστών χωρίς να επηρεάζουν την επαγόμενη από μορφίνη δυσκοιλιότητα. Επαναλαμβανόμενη χορήγηση TCV-309 κατέστειλε την εμφάνιση συμπεριφορών πόνου και παρατεταμένη επιβίωση των ποντικών FBC. Τα παρόντα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι οι ανταγωνιστές του υποδοχέα PAF σε συνδυασμό με, ή χωρίς, τα οπιοειδή μπορεί να αντιπροσωπεύει μια νέα στρατηγική για τη θεραπεία του επίμονου πόνου από καρκίνο των οστών και τη βελτίωση της ποιότητας ζωής των ασθενών

Παράθεση:. Morita Κ, Shiraishi S, Motoyama Ν, Kitayama Τ, Kanematsu Τ, Uezono Υ, et al. (2014) ανακούφιση της Bone Cancer Pain από ανταγωνιστές της ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων Factor υποδοχείς. PLoS ONE 9 (3): e91746. doi: 10.1371 /journal.pone.0091746

Επιμέλεια: Θεόδωρος Ιωάννη Τιμή, Πανεπιστήμιο της Αριζόνα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 16 Οκτωβρίου 2013? Αποδεκτές: 14 Φεβ 2014? Δημοσιεύθηκε: 17 Μάρτη του 2014

Copyright: © 2014 Morita et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει με επιχορηγήσεις-in ενισχύσεις για την Επιστημονική Έρευνα (Β) 22390349, (C) 21592421 και (Γ) 24.592.798 από την ιαπωνική Εταιρεία για την Προώθηση των Επιστημών και το Εθνικό Αντικαρκινικό Κέντρο Έρευνας και Ανάπτυξης του Ταμείου (23-Α-30 ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο πόνος στον καρκίνο παράγεται από πίεση σε, ή χημική διέγερση, εξειδικευμένες πόνου σηματοδότησης νευρικές απολήξεις ονομάζονται αλγοϋποδοχείς (αλγαισθητικός πόνος) ή μπορεί να προκληθεί από βλάβη ή ασθένεια εαυτό τους (νευροπαθητικό πόνο) που επηρεάζουν νευρικές ίνες οι οποίες αποκρίνεται σε ερεθίσματα που είναι κανονικά μη επώδυνη? αλλοδυνία. του πόνου από καρκίνο των οστών είναι μια από τις πιο κοινές και συνήθως σοβαρές καταστάσεις πόνου σε ασθενείς με καρκίνο [1].

Τα οπιοειδή παραμείνει ο στυλοβάτης της διαχείρισης του πόνου του καρκίνου, αλλά εκτός από τις οξείες παρενέργειες οι μακροπρόθεσμες συνέπειες του ανοχή, εξάρτηση, υπεραλγησία και η καταστολή του άξονα υποθαλάμου /υπόφυσης πρέπει να αναγνωριστεί. Επειδή οι τρέχουσες διαθέσιμες θεραπείες είναι σχετικά αναποτελεσματικά κατά του πόνου από καρκίνο των οστών, σχεδόν οι μισοί από τους ασθενείς με καρκίνο έχουν ανεπαρκή έλεγχο του πόνου [2], [3]. Έτσι, η ανάπτυξη νέων αναλγητικών αποτελεσματική στη θεραπεία του πόνου από καρκίνο των οστών είναι υποχρεωτικά.

Έχουμε προηγουμένως προταθεί ότι ο παράγοντας ενεργοποίησης αιμοπεταλίων (PAF) μπορεί να είναι ένας μεσολαβητής του νευροπαθητικού πόνου. ένεση PAF στο νωτιαίο μυελό ποντικού που προκαλείται θερμικής υπεραλγησίας και απτικής αλλοδυνίας, οι οποίες ήταν τουλάχιστον εν μέρει προκαλούνται από δυσλειτουργία του νωτιαίου α3 υποδοχέα γλυκίνης (GlyRα3) και αποκλείστηκαν με ανταγωνιστές των υποδοχέων PAF [4], [5]. Μεταγενέστερες μελέτες έδειξαν PAF υποδοχέα αποκλεισμό μειωθεί συμπεριφορές πόνου που προκλήθηκε σε μοντέλα νευρικής βλάβης. Ένας ανταγωνιστής του υποδοχέα PAF, CV-3988, με ένεση κοντά στο γάγγλιο της ραχιαίας ρίζας (DRG) σε αρουραίους ή ποντίκια που στερούνται PAF υποδοχέων έδειξαν μείωση στη απτική αλλοδυνία μετά από τραυματισμό του νωτιαίου νεύρου [6]. Ενδοθηκική έγχυση του ανταγωνιστή υποδοχέα PAF, WEB 2086, ένα παράγωγο βενζοδιαζεπίνης για 9 ημέρες μετά το χειρουργείο σε αρουραίους κατέστειλε την ανάπτυξη της μηχανικής αλλοδυνίας σε ένα μοντέλο τραυματισμού των νεύρων αρουραίου γλιτώσει [7]. ανταγωνιστές των υποδοχέων του PAF, TCV-309 (PAF συναφή), ΒΝ 50739 (ένωση που σχετίζονται με φυσικό προϊόν), και WEB 2086, που παράγεται βαθιά και μακροχρόνιες επιπτώσεις αντι-αλλοδυνία σε πολλά διαφορετικά μοντέλα νευροπαθητικού πόνου σε ποντίκια, συμπεριλαμβανομένης μιας μερικής τραυματισμό απολίνωση του ισχιακού νεύρου μια μερική υπερκόγχιων μοντέλο νεύρου απολίνωση μια χρόνια στένωση του μοντέλου υπερκόγχιων νεύρο ζημία (CCI μοντέλο) και μιας στρεπτοζοτοκίνης (STZ) μοντέλο,, επαγόμενη μοντέλο διαβήτη [8]. Τα στοιχεία δείχνουν ότι το PAF συμβάλλει στην νευρική βλάβη ιστού και τη συμπεριφορά πόνου μετά από τραυματισμό νεύρου.

Τα ζωικά μοντέλα παραπάνω πόνος ερευνηθεί λόγω καρκίνου των οστών, στην οποία τα καρκινικά κύτταρα εγχέονται τοπικά στο οστό. Η παρούσα μελέτη χρησιμοποιήθηκε ο καρκίνος των οστών (FBC) μοντέλο μηριαίου οστού σε ποντίκια [9]. Τα ζώα εγχύθηκαν με οστεολυτικές NCTC2472 κύτταρα, και ακολούθως αξιολογήθηκαν οι επιδράσεις των ανταγωνιστών του υποδοχέα PAF στις συμπεριφορές πόνου.

Υλικά και Μέθοδοι

Πειραματόζωα

Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση αρσενικά ποντίκια C3H /HeN (CLEA Japan, Inc., Tokyo), που ζυγίζουν 20-25 γρ. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες και το χειρισμό των ζώων πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα τόσο με τις κατευθυντήριες αρχές για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου εγκριθεί από την ιαπωνική Φαρμακολογικές Κοινωνία και τις κατευθυντήριες γραμμές του Πανεπιστημίου Χιροσίμα, Χιροσίμα, Ιαπωνία και τις κατευθυντήριες γραμμές του Εθνικού Αντικαρκινικού Κέντρου Ερευνών Ινστιτούτο, το Τόκιο, Ιαπωνία. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την επιτροπή για τη δεοντολογία των πειραμάτων σε ζώα στο Πανεπιστήμιο της Χιροσίμα (Αριθμός Άδειας: Α-09-17 και Α-11-16), και του Εθνικού Κέντρου Καρκίνου (Αριθμός Άδειας: T11-004-M02) . Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις πραγματοποιήθηκε υπό αναισθησία πεντοβαρβιτάλης νατρίου, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. Τα ζώα χρησιμοποιήθηκαν για μία μόνο μέτρηση σε κάθε πείραμα

Το ποντίκι μηριαίο οστό του Καρκίνου (FBC) Μοντέλο

Για το μοντέλο FBC, NCTC 2472 καρκινικά κύτταρα (American Type Cuiture Collection, ATCC.? Manassas, VA, USA) ενέθηκαν στην μυελική κοιλότητα του άπω μηρού των ποντικών C3H /HeN [9]. Τα κύτταρα NCTC 2472 διατηρήθηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco, συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 100 μονάδες /ml πενικιλίνη, και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη (όλα τα προϊόντα από τη Gibco Laboratories)? και καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2 τότε ανακαλλιεργήθηκαν εβδομαδιαία σύμφωνα με τις οδηγίες ATCC. Για χορήγηση, τα κύτταρα αποκολλήθηκαν με απόξεση και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε στα 900 rpm για 3 λεπτά. Το σφαιρίδιο αιωρήθηκε σε ισορροπημένο διάλυμα άλατος του Hank (HBSS) και στη συνέχεια χρησιμοποιούνται για intratibial ένεση.

Για την εμφύτευση, τα κύτταρα του όγκου εγχύθηκαν εξής το πρωτόκολλο που περιγράφηκε προηγουμένως από τους Honore et al. [9] με ελαφρά τροποποίηση. Εν συντομία, ποντικοί C3H /HeN αναισθητοποιήθηκαν με πεντοβαρβιτάλη νατρίου (60 mg /kg) ε.π. ένεση. Για intratibial εμβολιασμό των κυττάρων, το δεξί γόνατο του κάθε ποντικού ήταν λυγισμένα και στραμμένη τον πειραματιστή και μια ελάχιστη τομή του δέρματος έγινε εκθέτοντας το κνημιαίο πλατώ. Ένας διαμετρήματος 25 οδοντικής φρέζας χρησιμοποιήθηκε για διάτρηση του κνημιαίου πλατώ και, μόλις αφαιρεθούν, μια βελόνα 30 gauge συνδεδεμένη με μια σύριγγα Hamilton γεμάτη με το κυτταρικό εναιώρημα προσεκτικά εισάγεται εντός της μυελικής κοιλότητας της κνήμης. Στη συνέχεια, 10

5 NCTC 2472 κύτταρα αιωρούνται σε 5 μΐ HBSS ενέθηκαν αργά (ζωντανά κύτταρα). Οι ομάδες ελέγχου ενέθηκαν με 5 μΐ HBSS ή HBSS που περιέχει 10

5 NCTC 2472 κύτταρα θανατώνονται με γρήγορα κατάψυξη και απόψυξη τους δύο φορές χωρίς κρυοπροστασία και στη συνέχεια πλύση με φρέσκο ​​HBSS (νεκρώνω κύτταρα). Τέλος, Caviton EX, ένα οδοντικό βαθμού υδραυλικό προσωρινή σφραγιστικό (GC Οδοντιατρική Προϊόντα, Co. Ltd., Tokyo, Japan) εφαρμόστηκε στο κνημιαίο πλατώ τέμνεται περιοχή και η χειρουργική διαδικασία ολοκληρώθηκε με ραφή του δέρματος του γόνατος. Τα σωματικά βάρη καταγράφηκαν για κάθε ποντικό κάθε 3 ημέρες σε όλη τη μελέτη. Τα ζώα θανατώθηκαν μετά από απώλεια βάρους είναι μεγαλύτερη από το 20% του σωματικού βάρους ή μετά από επίδειξη των σχετικών συμπτώματα όπως σοβαρή αταξική κινήσεις ή άλλες νευρολογικές ανωμαλίες οφείλονται σε ηθικές ανησυχίες.

Drug Administration

Η γκαμπαπεντίνη (1 – (αμινομεθυλο) -κυκλοεξανοξικό οξύ) ελήφθη από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ). Η μορφίνη ελήφθη από την Takeda Pharmaceutical Co., (Osaka, Japan). WEB 2086 (3- [4- (2-χλωροφαινυλ) -9- μεθυλ-6

H

θειενο [3,2

f

] [1], [2], [ ,,,0],4] τριαζολο- [4,3

α

] [1], [4] -διαζεπιν-2-υλ] -1- (4-μορφολινυλ) -1-προπανόνη) ελήφθη από Tocris Bioscience ( ELLISVILLE, ΜΟ). TCV-309 (3-βρωμο-5 – [

N

-φαινυλ-

N

– [2 – [[2- (1,2,3,4-τετραϋδρο-2-ισοκινολύλιο – καρβονυλοξυ) αιθυλ] καρβαμοϋλ] αιθυλ] καρβαμοϋλ] νιτρικό -1-propylpyridinium) και ΒΝ 50739 (τετραϋδρο-4,7,8,10methyl- (χλωρο-2phenyl) 6 [διμεθοξυ-3,4-φαινυλοθειο] μεθοξυκαρβονύλιο-9 πυριδο [4 ‘, 3’-4,5] θειενο [3,2

f

] τριαζολο-1,2,4 [4,3

α

] διαζεπινο-1, 4) δωρήθηκαν από την Takeda Pharmaceutical Co., και το Ινστιτούτο Henri Beaufour, αντίστοιχα.

TCV-309 και WEB 2086 διαλύθηκαν το καθένα σε στείρο τεχνητό εγκεφαλονωτιαίο υγρό (ACSF) ή αλατούχο διάλυμα. ΒΝ 50739 διαλύθηκε σε ένα διαλύτη που περιέχει 25% 2-υδροξυπροπυλο-β-κυκλοδεξτρίνη (Sigma /RBI, Natick, ΜΑ) και απεσταγμένο νερό, το ρΗ ρυθμίστηκε σε ~ 6 χρησιμοποιώντας 1 Ν NaOH, και αραιώνεται καταλλήλως με ACSF ή φυσιολογικό ορό. Άλλα αντιδραστήρια διαλύθηκαν σε ACSF ή αλατούχο διάλυμα. Τα διαλύματα φαρμάκου παρασκευάστηκαν φρέσκα σε κάθε πειραματική ημέρα. σύνθεση ACSF (σε mM) ήταν NaCl 142, KCl 5, CaCl

2 2Η

2O 2, MgCl

2 · 6Η

2O 2, ΝαΗ

2 ΡΟ

4 1.25, D -Γλυκόζη 10, HEPES 10, ρΗ 7.4. TCV-309, BN70329, ή WEB 2086 χορηγήθηκε ενδοφλεβίως 30 min-3 hr πριν την αξιολόγηση του πόνου.

Knockdown του PAF Receptor στο νωτιαίο μυελό

Knockdown υποδοχέα PAF διεξήχθη σύμφωνα με ένα προηγούμενη έκθεση [5]. siRNAs ενσωματώθηκαν στον ιό αιμοσυγκολλητικός της Ιαπωνίας (HVJ) -Envelope Vector σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, μετά την ανάμειξη 40 μΐ (1 μονάδα προσδιορισμού, AU) του HVJ-Φάκελος Vector με 4 μΐ του περικλείει παράγοντα, το μίγμα φυγοκεντρήθηκε (10000 χ

g

, 10 λεπτά, 4 ° C), και το σφαιρίδιο εναιωρήθηκε σε 10 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος. Στη συνέχεια, προστέθηκαν 10 μΐ ενός μίγματος 3 διαλύματος siRNAs (# 1, # 2 και # 3, 1 μg /μl το καθένα), και το μίγμα διατηρήθηκε σε πάγο για 5 λεπτά. Στείρα ACSF (10 μΐ) που περιέχει συνθετικά siRNA δίπολα (0,45 pmole /ζώο) εγχύθηκε μέσα στον υπαραχνοειδή χώρο μεταξύ των σπονδυλωτών L5 και L6 της συνειδητής ποντικών. Οι αλληλουχίες του ολιγονουκλεοτιδίου siRNA (έννοια) έχουν ως εξής: PAF υποδοχέων (# 1, 5′-CACCUCAGUGAGAAGUUUUACAGCA-AG-3 ‘? # 2, 5′-ACCCUUCCAAGAAACUAAAUGAGAU-AG-3′? # 3, 5’-CAACUUCCAUCAGGCUAUUAAUGAU- AG-3 ‘? ακολουθίες στόχευσης γύρω από τη θέση 1005-1029, 232-256, 893-917, αντίστοιχα, στο

pafr

, GenBank με καμία D5087).. Επιπλέον, ακατάλληλα siRNA με τρεις ή τέσσερις νουκλεοτιδικές αναντιστοιχίες διατεθειμένο να εξετάσει μη ειδικές επιδράσεις των siRNA διπόλων (siRNA # 4, 5′-ACUCUGCCAAGAGACUACAUGAGAU-AG-3). Αυτές οι επιλεγμένες αλληλουχίες υποβλήθηκαν επίσης σε μια αναζήτηση BLAST (Βιοπληροφορική Κέντρο Ινστιτούτο Χημικών Ερευνών, Πανεπιστήμιο του Κιότο, Ιαπωνία) κατά της αλληλουχίας του γονιδιώματος του ποντικιού για να εξασφαλιστεί ότι μόνο ένα γονίδιο στο γονιδίωμα του ποντικού είχε ως στόχο. siRNAs αγοράστηκαν από iGENE Therapeutics Inc. (Tsukuba, Ιαπωνία).

Behavioral Analysis στην FBC Μοντέλο

Η ανάλυση της συμπεριφοράς προσχηματίστηκε ακολουθώντας το πρωτόκολλο που περιγράφηκε προηγουμένως [5], [10]. Οι σχετίζονται με τον πόνο συμπεριφορών στο μοντέλο FBC αξιολογήθηκαν πριν και μετά τη χορήγηση του φαρμάκου επί 11 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου. Οι πειραματικές και εικονικά εγχειρισμένα ζώα αξιολογήθηκαν για συνεχή πόνο βασίζεται στην φύλαξη συμπεριφορά, για περιπατητική πόνος βασίζεται σε άκρο χρήση ανωμαλία, και για αλλοδυνία συμπεριφορά τύπου με βάση την δοκιμή πυράκτωσης και πινέλο δοκιμή νοη Frey. Φύλαξη συμπεριφορά, τη σωματική ακεραιότητα χρήση ανωμαλία και αλλοδυνία-όπως πόνο αξιολογήθηκαν στα ίδια ζώα. Οι ποντικοί τοποθετήθηκαν σε ένα διαφανές πλαστικό κουτί παρατήρησης και αφήνονται να εγκλιματιστούν για 15 λεπτά. Στη συνέχεια, αυθόρμητη συμπεριφορά προφύλαξη αξιολογήθηκε κατά τη διάρκεια μιας περιόδου παρατήρησης 2 λεπτών. Ο χρόνος ανύψωσης του πίσω ποδιού στην σύστοιχη πλευρά κατά τη διάρκεια βάδιση μετρήθηκε ως φύλαξη συμπεριφορά. Limb χρήση ανωμαλία βαθμολογήθηκε σε μια κλίμακα από το 0 έως 4: 0, η κανονική χρήση του άκρου? 1, ελαφρά limp? 2, σαφείς limp? 3, μερική μη χρήση των άκρων? και 4, πλήρης μη χρήση των άκρων. Αλλοδυνίας συμπεριφορά τύπου αξιολογήθηκε με ελαφρά χαϊδεύοντας το τραυματισμένο πόδι με ένα πινέλο (βαθμολογία αλλοδυνία) ή να αξιολογηθεί με τη μέτρηση του κατωφλίου απόσυρσης του ποδιού σε απόκριση προς διερεύνηση με μία σειρά βαθμονομημένων λεπτά νήματα (όριο αλλοδυνία), όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [5]. Η βαθμολογία αλλοδυνία κατετάγη όπως περιγράφεται από Minami et al. [11]: 0, καμία απάντηση? 1, ήπια τσιρίζοντας με απόπειρες να ξεφύγουμε από τον ανιχνευτή χαϊδεύοντας? 2, έντονη τσιρίζοντας, δαγκώνοντας τον ανιχνευτή χαϊδεύοντας και έντονες προσπάθειες για να ξεφύγουν από τον ανιχνευτή χαϊδεύοντας. Οι τιμές είναι ο μέσος όρος της συνολικής βαθμολογίας αξιολογήθηκε 3 φορές σε κάθε χρονικό σημείο (πιθανή μέγιστη βαθμολογία σε κάθε χρονικό σημείο: 2 /ποντικό). Οι χρόνοι φρουρός ήταν σημαντικά παρατεταμένη στα 5 και 6 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου σε σύγκριση με τις τιμές σε προ-εμφύτευση. Ομοίως, τα ζώα άρχισαν να παρουσιάζουν ανώμαλη άκρων χρήση σε 5 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου, και όπως μη φυσιολογική συμπεριφορά ήταν πιο εμφανείς στις επόμενες ημέρες. Το κατώφλι αλλοδυνία αξιολογήθηκε με μέτρηση του κατωφλίου απόσυρσης του ποδιού σε απόκριση προς ανίχνευση με νοη Frey μονονημάτων, και σημαντικές μειώσεις κατώφλι παρατηρήθηκαν μετά την 3

ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου rd συγκρίθηκαν με τις τιμές σε προκαθορισμένες εμφύτευση, και η μείωση έφθασε μια κορυφή μετά από 5 και 7 ημέρες. Η βαθμολογία αλλοδυνία αξιολογήθηκε με μέτρηση της κατάταξης απάντηση σε ελαφρά χαϊδεύοντας με ένα πινέλο, και σημαντικές αυξήσεις βαθμολογίας παρατηρήθηκαν μετά από 4 ημερών μετά την εμφύτευση του όγκου σε σύγκριση με τις τιμές στα προ-εμφύτευση, και η αύξηση έφθασε στο υψηλότερο σημείο μετά από 6 και 8 ημέρες. Καθ ‘όλη τη πείραμα, συμπεριφορική δοκιμή διεξήχθη υπό τυφλές συνθήκες από ένα ενιαίο πειραματιστή. Οι ενέσεις έγιναν τυφλά από άλλο πρόσωπο. Ενδορραχιαία έγχυση διεξήχθη όπως περιγράφεται προηγουμένως [4].

Προσδιορισμός λυσο-ΡΑΡ-ακετυλοτρανσφεράσης (λυσο-PAF ΑΤ) /Lysophospha- tidylcholine ακυλτρανσφεράσης 2 (LPCAT2), ένα PAF Synthesis Enzyme

η οσφυϊκή περιοχές του νωτιαίου μυελού (L2-L6) ελήφθησαν από εικονικά χειρουργημένα (νεκρώνουν κύτταρα εμφυτεύονται) ή που φέρουν όγκους ποντικούς. Οι ιστοί νωτιαίου μυελού (4.8-5.0 mg) ομογενοποιήθηκαν σε 20 mM Tris-HCl (ρΗ 7.5) που περιέχει 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 10 mM NaF, 10 mM β-γλυκεροφωσφορικό και 1 μg /ml διαφόρων αναστολέων πρωτεάσης ( benzamdine, λευπεπτίνη και αντιπαίνη). Το ομογενοποίημα αντέδρασε με 0,6% ΝΡ-40 επί 5 λεπτά στους 4 ° C, που ακολουθείται από φυγοκέντρηση στις 15.000 rpm για 5 λεπτά στους 4 ° C και λήφθηκε το υπερκείμενο. Το υπερκείμενο αναμίχθηκε σε μια αναλογία όγκου 4:01 σε 10 mM Tris-HCl (ρΗ 6,8) που περιείχε 10% (ν /ν) γλυκερόλη, 2% δωδεκυλθειϊκό νάτριο (SDS), 0,01% μπλε βρωμοφαινόλη και 0,5% β-μερκαπτοαιθανόλη , με επακόλουθη ζέσεως στους 70 ° C για 30 λεπτά.

ανοσοαποτύπωσης Δοκιμασίες

Τα ληφθέντα δείγματα ηλεκτροφορήθηκαν επί 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου σε πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου (3% πήγμα συσσωρεύσεως και διαχωρισμό γέλης 10% ) και, στη συνέχεια, στυπώθηκαν σε μεμβράνες πολυβινυλιδενο φθορίδιο προηγουμένως υποβληθεί σε θεραπεία με 100% μεθανόλη. Οι μεταφερθείσες πρωτεΐνες στις μεμβράνες αποκλείστηκαν με επώαση με διάλυμα αποκλεισμού, ένα 5% αποβουτυρωμένο περιέχουν γάλα ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (20 mM Tris-HCl (ρΗ 7.5), 137 mM NaCl και 0,1% Tween 20), στους 25 ° C για 1 hr. Οι μεμβράνες εκτέθηκαν στο πρωτογενές αντίσωμα ως εξής: κατά LPCAT2 (1:1,000? SIgM)? έναντι β-ακτίνης (1:1,000? Innovations Imgenex της λειτουργικής γονιδιωματικής, SanDiego, CA) αραιωμένα με το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης που περιέχει 1% αποβουτυρωμένο γάλα για όλη τη νύχτα σε 4 ° C, που ακολουθείται από πλύση τρεις φορές με το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης, και στην συνέχεια επώαση με ένα δευτερεύον αντίσωμα ως εξής: για το αντίσωμα LPCAT2 και αντίσωμα β-ακτίνης, ένα αντίσωμα IgG αντι-κουνελιού συζευγμένο με υπεροξειδάση αρμορακίας (1:2,000? DakoCytomation, Glostrup, Denmark) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Οι μεμβράνες πάλι ξεπλένονται τρεις φορές με το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης και αναπτύχθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια σύστημα δυτικό ανίχνευσης (ECL) (αντιδραστήρια ECL, που αγοράστηκε από Thermo Fisher Scientific, και Nacalai Tesque Inc., Kyoto Ιαπωνία? ImageQuant ™ LAS 4000 μίνι σύστημα ανίχνευσης, GE Healthcare Ιαπωνία, Tokyo, Japan). Η πυκνότητα κάθε ζώνης αναλύθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό Image ΝΙΗ, και οι πυκνομετρικές μονάδες διορθώθηκαν χρησιμοποιώντας την τιμή του β-ακτίνης. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SEM.

επαγόμενη από μορφίνη δυσκοιλιότητα

Οι ποντικοί παρέχεται τροφή και νερό κατά βούληση πριν από την περίοδο δοκιμής, και οι δύο (με ή χωρίς TCV-309) ομάδες καταναλώνονται συγκρίσιμες ποσότητες τροφίμων πριν από τη δοκιμή, όπως μετράται σε περίοδο 24 ωρών σε περιβάλλον δοκιμής. Χωρίς τροφή και νερό ήταν διαθέσιμο κατά τη διάρκεια της δοκιμής. Τα ποντίκια σε κλουβιά σε ακρυλικά κουτιά με δάπεδο πλέγματος αναστέλλεται πέρα ​​από διηθητικό χαρτί. Κοπράνων Μπόλη συλλέχθηκαν από κάθε ομάδα ποντικών κάθε ώρα για 1 ώρα μετά την έγχυση του αλατούχου διαλύματος ή διάφορες δόσεις μορφίνης και του βάρους κοπράνων βλωμούς καταγράφηκε ως δείκτης των αποτελεσμάτων δυσκοιλιότητας της μορφίνης.

Δημιουργία Kaplan-Meier επιβίωσης Καμπύλες

Η υγεία των ποντικών εξετάσθηκε καθημερινά. Τα ποντίκια που παρουσιάζονται με τα σημάδια της κακής υγείας σκοτώθηκαν με εξάρθρωση του αυχένα, σύμφωνα με τις συστάσεις της επιτροπής δεοντολογίας μας. Σύμφωνα με την εμπειρία μας, αυτά τα σημάδια προηγούνται του χρόνου του θανάτου από μια-δυο μέρες. Ο χρόνος θανάτου καταγράφηκε για κάθε ποντίκι που βρέθηκε νεκρό ή σκοτώθηκε. καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier δημιουργήθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό Graphpad Prism (έκδοση 4? Graphpad, Inc, San Diego, CA)

Στατιστικές Αναλύσεις

Όλα τα δεδομένα αναφέρονται ως τιμές της μέσης ± SEM. (τυπικό σφάλμα του μέσου όρου). GraphPad Prism λογισμικό version 4 χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση της στατιστικής ανάλυσης. Όσον αφορά την στατιστική ανάλυση των συμπεριφορών πόνου που σχετίζονται με συγκρίσεις των allodynis στείλει κατώφλιο απόσυρσης, φύλαξη συμπεριφορά και άκρων χρήση ανωμαλία των διαφορών μεταξύ των ομάδων αγωγής με φάρμακο και της ομάδας υπό αγωγή με όχημα αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ΑΝΟνΑ που ακολουθήθηκε από τεστ Tukey-Kramer, ή ένα αταίριαστο Φοιτητών

t-test

. Συγκρίσεις της μέσης επιβίωσης έγιναν χρησιμοποιώντας log-rank και δοκιμές Gehan-Breslow-Wilcoxon. Μια τιμή πιθανότητα (P) της & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Επιπτώσεις της συστηματικής χορήγησης Ειδικές PAF Ανταγωνιστές των Υποδοχέων για την αφή αλλοδυνίας και τον πόνο συμπεριφορές στην FBC Μοντέλο ποντίκια

.

Επιπτώσεις της TCV-309 για αλλοδυνία και τον πόνο συμπεριφορές (φύλαξη συμπεριφορά και άκρων χρήση ανωμαλία) εξετάστηκαν σε ποντίκια μοντέλο FBC. TCV-309 με μια σειρά από 10-300 μg /kg με ί.ν. δοσοεξαρτώμενο μείωσε την βαθμολογία αλλοδυνία (Εικόνα 1Α) και αύξησε το κατώφλι απόσυρσης (Σχήμα 1Β) σε 11 έως 15 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου στα ποντίκια. Τα αποτελέσματα του TCV-309 ήταν αρκετά μακράς διαρκείας. Για παράδειγμα, TCV-309 βελτιώνεται σημαντικά μηχανική αλλοδυνία με μια μόνο ένεση 100 μg /kg, ί.ν. με ένα μέγιστο αποτέλεσμα σε 1 έως 2 ημέρες μετά την ένεση μέχρι 6 ημέρες. Φύλαξη συμπεριφορά συνεχώς επιδεινώνεται κατά τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης, ενώ άκρων χρήση ανωμαλία φτάσει σε μέγιστη ανταπόκριση και συνεχίστηκε κατά τη διάρκεια της περιόδου (Εικόνα 1Γ, 1Δ). Φύλαξη συμπεριφορά και άκρων χρήση ανωμαλία ήταν επίσης βελτιωθεί με TCV-309. TCV-309 έως και 1 mg /kg δεν επηρέασε τη γενική συμπεριφορά ή τη λειτουργία του κινητήρα υπολογίζεται από τη δοκιμή περιστρεφόμενης ράβδου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Άλλοι ανταγωνιστές των υποδοχέων PAF, ΒΝ 50739 και WEB 2086, βελτιώνονται επίσης τα αλλοδυνία και πόνο συμπεριφορές στα ποντίκια μοντέλο FBC (Figure1E-1 Η).

TCV-309 0,01-0,3 mg /kg, WEB 2086 0,1 mg /kg, ΒΝ 50739 0.1 mg /kg ή ένα όχημα εγχύθηκαν ενδοφλεβίως 11 ημέρες μετά τη μεταμόσχευση του όγκου. Τα ποντίκια ελέγχου έλαβαν ενέσεις με όχημα: αλατούχου διαλύματος ή 25% 2-υδροξυπροπυλο-β-κυκλοδεξτρίνη. Οι συμπεριφορές του πόνου που σχετίζονται με τα οποία αναπτύχθηκε μετά την εμφύτευση του όγκου σε ποντίκια δεν επηρεάστηκαν από θεραπείες οχήματος. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM. n = 11 ποντίκια ανά ομάδα. † P & lt? 0,05, * Ρ & lt? 0,01 σε σύγκριση με τον αντίστοιχο έλεγχο (όχημα αγωγή) τιμές, όπως προσδιορίζεται με ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από τεστ Tukey-Kramer

Η

επιδράσεις του αποκλεισμού του νωτιαίου PAF υποδοχέων επάνω. αλλοδυνία και τον πόνο συμπεριφορές στην FBC Μοντέλο ποντίκια

Για να επιβεβαιώσετε την τοποθεσία της ανακούφισης του πόνου του καρκίνου με ανταγωνιστές του PAF, οι επιπτώσεις της ενδοραχιαία έγχυση TCV-309 και WEB 2086, καθώς επίσης και παρέμβαση στην έκφραση της σπονδυλικής υποδοχέων του PAF χρησιμοποιώντας εξετάστηκαν siRNA του mRNA του υποδοχέα του PAF. Σπονδυλική χορήγηση 10 pg αυτών των φαρμάκων 13 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου που παράγεται γρήγορη και αισθητή καταστολή της απτικής αλλοδύνης με το μέγιστο αποτέλεσμα εις 1 ημέρα μετά την εμφύτευση και κατέστειλε σημαντικά την αλλοδυνία μέσα σε 4 ημέρες (Εικόνα 2Α). επιδράσεις απελευθέρωση του πόνου αξιολογήθηκε από το όριο απόσυρσης, φύλαξη συμπεριφορά και άκρων χρήση ανωμαλία ενδοραχιαία έγχυση TCV-309 και WEB 2086 σημειώθηκαν επίσης (Σχήμα 2Β-2D)

(Α-Δ).? Καρκινικά κύτταρα εμφυτεύθηκαν στην intramedulla του αριστερού μηριαίου οστού 13 ημέρες πριν από την ένεση ενδοθηκική (i.t.) των ανταγωνιστών του υποδοχέα PAF. TCV-309 (10 pg /ποντικό), WEB 2086 (10 pg /ποντικό) ή το όχημα εγχύθηκε ενδοραχιαίως σε χρόνο «0». Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SEM., η = 8-12 ποντικοί ανά ομάδα. * Ρ & lt? 0,01 σε σύγκριση με την αντίστοιχη ελέγχου (όχημα αγωγή) τιμές, όπως προσδιορίζεται με ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από τεστ Tukey-Kramer. Τα ποντίκια ελέγχου έλαβαν ενέσεις με όχημα: ACSF. Οι συμπεριφορές του πόνου που σχετίζονται με τα οποία αναπτύχθηκε μετά την εμφύτευση του όγκου σε ποντίκια δεν επηρεάστηκαν από τις θεραπείες του οχήματος. (Ε-Η)? siRNA ή ακατάλληλα siRNA του ΡΑΡ-υποδοχέα mRNA διαμολύνθηκαν στο νωτιαίο μυελό 13 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SEM. n = 8-10 ποντικοί ανά ομάδα. † P & lt? 0,05, * P & lt? 0,01 σε σύγκριση με τον αντίστοιχο έλεγχο (αταίριαστο επιμόλυνση siRNA) τιμές, όπως προσδιορίζεται από την ανάλυση των γενναιότητα που ακολουθείται από ένα αταίριαστο Φοιτητών

t-test

. Τα ποντίκια ελέγχου έλαβαν ενέσεις με ακατάλληλα siRNA ή οχήματος: μόνο HVJ-φάκελο. Οι συμπεριφορές του πόνου που σχετίζονται με τα οποία αναπτύχθηκε μετά την εμφύτευση του όγκου σε ποντίκια δεν επηρεάστηκαν από κακοταιριασμένα siRNA ή όχημα θεραπείες.

Η

Knockdown της έκφρασης του νωτιαίου πρωτεΐνης υποδοχέα PAF επιτεύχθηκε με ενδορραχιαία μεταφορά του υποδοχέα PAF siRNA σε ποντίκια. Όπως έχει ήδη αναφερθεί, μια σημαντική μείωση της έκφρασης των υποδοχέων του PAF σε κανονικούς ποντικούς και ποντικούς 15 ημέρες μετά την επέμβαση στο ισχιακό νεύρο, φθάνοντας το 37,5 ± 5,4% και 29,9 ± 4,9% του ελέγχου σε 3 ημέρες μετά από siRNA επιμόλυνση, αντίστοιχα, ενώ η έκφραση δεν μεταβλήθηκε μόνος από τον φορέα HVJ-Ε ή ακατάλληλα siRNA [5]. Με siRNA επιμόλυνση 13 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου, το σκορ αλλοδυνία, όριο απόσυρσης, φύλαξη συμπεριφορά ενός άκρου χρήση ανωμαλία βελτιώθηκαν με το μέγιστο αποτέλεσμα σε 2 έως 3 ημέρες μετά siRNA επιμόλυνση, ενώ η δράση ανακούφισης από τον πόνο σταδιακά εξαφανίστηκε πάνω από 9 ημέρες (Σχήμα 3Ε-3Η). Ένεση κακοταιριασμένων siRNA δεν είχε καμία επίδραση στην ανάπτυξη της αλλοδυνίας και πόνο συμπεριφορές. Η ποσότητα της πρωτεΐνης LPCAT2 αυξήθηκε σημαντικά στο νωτιαίο μυελό σε 8, 15 και 30 ημέρες μετά τη μεταμόσχευση του NCTC 2472 κυττάρων όγκου σε ποντικούς κνήμη (Σχήμα 3). Τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την ιδέα ότι αύξηση PAF στο νωτιαίο μυελό των ποντικών που φέρουν όγκους μπορεί να σχετίζεται με την παραγωγή του πόνου και ότι η θέση του πόνου εκτόνωσης δράση των ανταγωνιστών του υποδοχέα του PAF συνεπάγονται το νωτιαίο μυελό σε ποντικούς FBC.

αλλοίωση του νωτιαίου έκφρασης LPCAT2 3, 8, 15, και 30 ημέρες μετά από τα επίπεδα ανοσοδραστικότητας κανονικοποιήθηκαν με εκείνη της β-ακτίνης και παριστάνεται ως επαγωγή% σε σύγκριση με τις τιμές των εικονικά χειρουργημένα (νεκρώνουν κύτταρα εμφυτεύονται) ποντικούς (μέση ± SEM ., n = 5-7). * P & lt? 0,05, *** P & lt? 0.001 σε σχέση με τις αντίστοιχες τιμές σε ποντίκια ψευδο-λειτουργούν (αταίριαστο Φοιτητών

t-test

)

Η

Ενίσχυση της αναλγητικό αποτέλεσμα από το συνδυασμό. του PAF Ανταγωνιστές των Υποδοχέων με μορφίνη

πόνου από καρκίνο των οστών είναι μια από τις πιο σοβαρές μορφές του πόνου από καρκίνο και είναι συχνά ανθεκτική σε θεραπεία, ακόμη και με οπιοειδή αναλγητικά. Συνδυασμοί οπιοειδή και μη-οπιοειδή αναλγητικά είναι συνήθης πρακτική για να ληφθεί μια καλύτερη αναλγητική επίδραση στην κλινική πρακτική. Συνδυασμένη χορήγηση μορφίνης με TCV-309 εξετάστηκε (Σχήμα 4Α). Η μορφίνη 0,1 και 0,3 mg /kg ένεση 1 ημέρα μετά TCV-309 3 και 10 μg /kg χορήγηση παρήγαγε μία σημαντική μείωση στη βαθμολογία αλλοδυνίας σε 30 λεπτά μετά την ένεση μορφίνης και το αποτέλεσμα επιστρέφεται σε κάθε επίπεδο TCV-309 μόνη σε 3 έως 4 ώρες μετά την χορήγηση. Ο συνδυασμός της μορφίνης 1 mg /kg με γκαμπαπεντίνη 10 mg /kg ί.ν. δεν είχε σημαντική επίδραση αντι-αλλοδυνία (Σχήμα 4Β). Μία μεγάλη δόση γαβαπεντίνης, 30 mg /kg, απαιτήθηκε για να παραχθεί μία παροδική επίδραση αντι-αλλοδυνίας. Η μορφίνη μόνη είχε μικρή αναλγητική δράση σε 0,3 έως 3 mg /kg, s.c. και μια μικρή επίδραση στα 10 mg /kg στο μοντέλο FBC. Μια υψηλότερη δόση των 30 mg /kg μορφίνης ήταν λιγότερο αποτελεσματική (Σχήμα 4C).

TCV-309, 3 και 10 μg /kg εγχύθηκαν ε.φ. στις 10 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου και μορφίνη 0,1 mg /kg και 0,3 mg /kg ενέθηκαν s.c. 1 ημέρα μετά την έγχυση του TCV-309 (Α). Gabapentine 10 και 30 mg /kg ί.ν. εγχύθηκαν 11 ημέρες μετά τη μεταμόσχευση του όγκου και μορφίνη, 1 mg /kg εγχύθηκε στα 30 λεπτά μετά την έγχυση γκαμπαπεντίνης (Β). Μορφίνη 0,3-30 mg /kg εγχύθηκε σε 11 ημέρες μετά τη μεταμόσχευση του όγκου (Γ). Pain-σαν συμπεριφορές αξιολογήθηκαν στα 20 λεπτά μετά την ένεση μορφίνης. Διάφορες δόσεις του TCV-309 εγχύθηκαν ε.φ. 11 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου και μορφίνη 0,3 mg /kg ενέθηκαν s.c. 1 ημέρες μετά την ένεση του TCV-309 (D). Μία ημέρα μετά την ένεση του TCV-309, διάφορες δόσεις μορφίνης εγχύθηκαν (Ε). Τα ποντίκια ελέγχου έλαβαν ενέσεις με όχημα: αλατούχο διάλυμα. Οι συμπεριφορές του πόνου που σχετίζονται με τα οποία αναπτύχθηκε μετά την εμφύτευση του όγκου σε ποντίκια δεν επηρεάστηκαν από θεραπείες οχήματος. Κάθε ομάδα περιείχε 11 ποντικούς.

† P & lt? 0,05, * Ρ & lt? 0,01 σε σύγκριση με τον αντίστοιχο έλεγχο (όχημα αγωγή) τιμές, όπως προσδιορίζεται με ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από τεστ Tukey-Kramer.

§P & lt? 0,01 σε σύγκριση με τον αντίστοιχο έλεγχο (όχημα αντιμετωπίζονται χωρίς μορφίνη) τιμές, όπως προσδιορίζεται από την ανάλυση της διακύμανσης που ακολουθείται από ένα αταίριαστο Φοιτητών

t-test

Η

. Η σχέση δόσης-απόκρισης του TCV-309 και μορφίνη σε συνδυασμό φαίνεται στο Σχήμα 4D και Σχήμα 4Ε. Η μορφίνη 0,3 mg /kg και TCV-309 0.1-1.0 μg /kg σε κάθε δόση μόνο του δεν είχε καμία επίδραση αντι-αλλοδυνίας, αλλά σε συνδυασμό, ο αλλοδυνία σκορ μειώθηκε κατά περισσότερο από 90% ανάλογα με τη δόση του TCV-309 (Σχήμα 4D ). Η μορφίνη, σε συνδυασμό με TCV-309 10 μg /kg στο χαμηλότερο 0,03 mg /kg παρήγαγε μια σημαντική επίδραση αντι-αλλοδυνίας και κατήργησε την απόκριση αλλοδυνία στα 0.3 mg /kg (Σχήμα 4Ε). Οκτώ ημέρες μετά την ένεση του TCV-309, WEB 2086 και ΒΝ 50739, αναλγητικό αποτέλεσμα αυτών των ενώσεων δεν έγινε σημαντική (Σχήμα 5). Ωστόσο, η επιπλέον χορήγηση μορφίνης 0.3 mg /kg ακόμη αισθητά βελτιωθεί αλλοδυνία και συμπεριφορές πόνου (Σχήμα 5). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι ανταγωνιστές του υποδοχέα PAF επιτυγχάνει μακροχρόνια ενίσχυση της επίδρασης αναλγητικού όταν μορφίνη χορηγήθηκε.

TCV-309, WEB 2086 και ΒΝ 50739 χορηγήθηκαν σε 11 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου. Η μορφίνη 0,3 mg /kg υποδορίως εγχύθηκε σε 8 ημέρες μετά την ένεση των ανταγωνιστών των υποδοχέων PAF. Αλλοδυνίας (Α, Β), φύλαξη συμπεριφορά (C) και των άκρων χρήσης ανωμαλία (D) αξιολογήθηκαν στα 20 λεπτά μετά την ένεση της μορφίνης. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM. n = 11 ποντίκια ανά ομάδα. * Ρ & lt? 0,01 σε σύγκριση με τις αντίστοιχες τιμές ελέγχου, όπως προσδιορίζεται με ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από

t-test

Η

Επίδραση του PAF Ανταγωνιστές των Υποδοχέων για την επαγόμενη από μορφίνη μια unpaired Student. Η δυσκοιλιότητα

Η δυσκοιλιότητα είναι μια από τις πιο συχνές παρενέργειες της μορφίνης και εμφανίζεται σε όλους σχεδόν τους ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με μορφίνη. Εάν το αποτέλεσμα εμπόδιο της μορφίνης επί της εντερικής δραστηριότητα δεν ενισχύεται, αυτή η παρενέργεια της μορφίνης θα μπορούσε να μειωθεί με τη μείωση της δόσης της μορφίνης χωρίς να διαταραχθεί η αναλγητική δράση. Μορφίνη μείωσε το ποσό των περιττωμάτων από 1 mg /kg s.c. και καταργήθηκε περισσότερο από 10 mg /kg. Η δοσοεξαρτώμενη δυσκοιλιότητα επίδραση της μορφίνης δεν επηρεάστηκε από TCV-309 10 μg /kg (εικόνα 6).

Κανονικό ποντίκια έλαβαν με διάφορες δόσεις μορφίνης και των συσσωρευμένων περιττωμάτων στο πάτωμα πάνω από 60-309 ήταν με ένεση 1 ημέρα πριν τη χορήγηση μορφίνης. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος. n = 10 ποντίκια ανά ομάδα.

Η

επαναλαμβανόμενη χορήγηση TCV-309 προστατεύονται από την εμφάνιση του πόνου-όπως και τη συμπεριφορά

Καθώς η επίδραση αντι-αλλοδυνία του TCV-309 ήταν μακροχρόνια διαρκείας, εξετάστηκε η επίδραση της επαναλαμβανόμενης χορήγησης. Στα ποντίκια ελέγχου, απτική αλλοδυνία εμφανίστηκε στις 3 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου και έφτασε να κορυφωθεί απόκριση σε 8 ημέρες. Κιγκλιδώματα συμπεριφορά εμφανίστηκε στις 10 ημέρες μετά την εμφύτευση του όγκου και σταδιακά να αυξάνεται πάνω από 30 ημέρες, ενώ άκρων χρήσης ανωμαλία εμφανίστηκε σε 8 ημέρες και έφθασε ένα μέγιστο σε περίπου 16 ημέρες μετά την εμφύτευση (Σχήμα 7Α-7D). Ένεση TCV-309 στα 0.3 mg /kg, ί.ν. ξεκίνησε στις ποντίκια ημέρες εμφυτεύθηκαν με τον όγκο και συνεχίστηκε κάθε 4 ημέρες για 28 ημέρες. συμπεριφορές πόνου αξιολογήθηκε με βαθμολογία αλλοδυνία, όριο απόσυρσης, φύλαξη συμπεριφορά και άκρων χρήση ανωμαλία δεν φάνηκε κατά τη διάρκεια της δοσολογίας (Σχήμα 2). Έτσι, η θεραπεία με TCV-309 πριν από τον πόνο ανέκυπταν προστατεύονται έναντι κρίση του πόνου και της ανοχής σε TCV-309 αναλγησία δεν ανέπτυξαν.

Η χορήγηση TCV-309 0,3 mg /kg ε.φ. ξεκίνησε 6 ώρες πριν από την εμφύτευση του όγκου, χορηγείται μία φορά την ημέρα και συνεχίζεται κάθε 4 ημέρες μέχρι και 28 ημέρες.