Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο συνήθως διαγιγνώσκεται καρκίνος και κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο στον κόσμο. Μια ενιαία νουκλεοτιδίου πολυμορφισμός (SNP), rs402710, που βρίσκεται στο 5p15.33, ήταν αρχικά προσδιοριστεί να συνδέεται με τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα σε μια μελέτη σύνδεσης γονιδίωμα κλίμακα. Ωστόσο, ορισμένοι ακόλουθες μελέτες αναπαραγωγής απέδωσε αντιφατικά αποτελέσματα.

Μεθοδολογία και Ευρήματα

Μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων των 611 περιπτώσεις και 1062 ελέγχους σε ένα κινεζικό πληθυσμό διεξήχθη, και στη συνέχεια μια μετα-ανάλυση την ενσωμάτωση οι τρέχουσες και προηγουμένως δημοσιευμένες μελέτες με συνολικά 31.811 περιπτώσεις και 36.333 έλεγχοι διεξήχθη για να εξερευνήσετε την πραγματική επίδραση της rs402710 στην ευαισθησία του καρκίνου του πνεύμονα. Σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ της rs402710 και του καρκίνου του πνεύμονα κίνδυνο SNP παρατηρήθηκαν τόσο σε μελέτη περίπτωσης-ελέγχου και μετα-ανάλυση, με ΕΑΠ ίση με 0,77 (95% CI = 0,63 – 0,95) και 0,83 (95% CI = 0,81 – 0,86) σε κυρίαρχη μοντέλο, αντίστοιχα. Με στρωματοποιημένη ανάλυση της μελέτης ασθενών-μαρτύρων μας, οι ενώσεις έχουν επίσης παρατηρηθεί σε Ποτέ ομάδα καπνιστής και ομάδα μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) με ΕΑΠ ίση με 0,71 (95% CI = 0,53 – 0,95) και 0,69 (95% CI = 0,55 έως 0,87), το οποίο ήταν αξιοσημείωτο ότι μεγαλύτερη επίδραση του ανηλίκου αλληλόμορφο Τ παρατηρήθηκε και στις δύο ομάδες από ότι στη συνολική καρκίνο του πνεύμονα. Εκτός αυτού, η ευαίσθητη και αθροιστική ανάλυση έδειξε την ισχυρή σταθερότητα των σημερινών αποτελεσμάτων της μετα-ανάλυσης.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματα από τη μελέτη αναπαραγωγής μας και η μετα-ανάλυση που αδιάσειστα στοιχεία που rs402710 Τ αλληλόμορφο σημαντικά συνέβαλαν στην μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα, και η μελέτη ασθενών-μαρτύρων άφησε να εννοηθεί ότι η παραλλαγή μπορεί να δώσει ισχυρότερη επίδραση στην NSCLC και μη καπνιστές. Ωστόσο, ο μηχανισμός που διέπουν τον πολυμορφισμό που προσδίδει ευαισθησία σε καρκίνο του πνεύμονα δικαιολογείται να διευκρινίσει στις μελέτες παρακολούθησης

Παράθεση:. Lu Χ, Ke J, Luo Χ, Zhu Υ, Ζου L, Li H, et al. (2013) Οι rs402710 SNP στο 5p15.33 συνδέεται με τον καρκίνο του πνεύμονα Κινδύνων: Μια μελέτη αναπαραγωγής σε κινεζικά Πληθυσμός και μια μετα-ανάλυση. PLoS ONE 8 (10): e76252. doi: 10.1371 /journal.pone.0076252

Επιμέλεια: Ramon Andrade de Mello, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο του Πόρτο, Πορτογαλία

Ελήφθη: 11, Απριλίου του 2013? Αποδεκτές: 21 του Αυγούστου 2013? Δημοσιεύθηκε: 23 του Οκτώβρη, 2013

Copyright: © 2013 Lu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος και οδηγεί αιτία θνησιμότητας από καρκίνο σε όλο τον κόσμο, με 1.610.000 νέες επιβεβαιωμένες περιπτώσεις και 1.380.000 θανάτου από καρκίνο του πνεύμονα κάθε χρόνο [1] .Υπάρχουν πολλοί παράγοντες που αποδίδουν σε καρκίνο του πνεύμονα, του οποίου η έκθεση στο περιβάλλον, κυρίως με το κάπνισμα, είναι ο κύριος παράγοντας κινδύνου. Ωστόσο, δεν είναι όλοι οι καρκίνοι του πνεύμονα οφείλεται στο κάπνισμα, και αυξανόμενες ενδείξεις για τη συσχέτιση μεταξύ γενετικών παραγόντων και του κινδύνου καρκίνου του πνεύμονα είναι να προσδιορίζονται από εκατοντάδες μελέτες [2], [3]. Η υπάρχουσα στοιχεία έδειχναν ότι οι γενετικοί παράγοντες μπορεί να παίζουν πολύ σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του πνεύμονα.

Γονιδίωμα-ευρύ μελέτες συσχέτισης (GWAS), οι οποίες αποσκοπούν στην κάλυψη των πιο γενετική παραλλαγή από τον προσδιορισμό του γονότυπου έως 1.000.000 μόνο νουκλεοτίδιο πολυμορφισμοί (SNPs) και δεν απαιτούν προηγούμενη γνώση της λειτουργίας των γονιδίων, εφαρμόζονται αποτελεσματικά για τον προσδιορισμό της σύνδεσης μεταξύ των κοινών γενετικών παραλλαγών και πολύπλοκη ασθένεια [4], [5], [6], [7]. Πρόσφατα πολλαπλές μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος σε επίπεδο έχουν εντοπίσει πολλαπλές νέα SNP στο χρωμόσωμα 15q25 [8], [9], [10], 5p15 [11], [12] και 6q21 [11], που σχετίζεται με τον καρκίνο του πνεύμονα. Μεταξύ αυτών των SNPs, rs402710 για 5p15.33, που βρίσκεται στην περιοχή ιντρονίου του χειλεογναθουπερωιοσχιστία διαμεμβρανική 1-όπως (

CLPTM1L

), ήταν αρχικά προσδιορίζονται σε ένα σύνολο GWAS από 3.259 περιπτώσεις και 4.159 μάρτυρες και αντιγραφή σύνολο των 2.899 περιπτώσεις και 5.573 ελέγχους από McKay JD et al [12].

CLPTM1L

, ψευδώνυμο

CRR9

, το οποίο βρέθηκε να εκφράσει σε διάφορες ιστού, συμπεριλαμβανομένων πνευμονικό ιστό και υπερεκφράζουν στην σισπλατίνη ανθεκτικές κυτταρικές σειρές, κωδικοποιεί ένα ένζυμο-χειλεογναθουπερωιοσχιστία trans-μεμβράνης 1 -όπως ότι μπορεί να σχετίζεται με την απόπτωση [13]. Κατά την εξέταση των εγκαταστάσεων, αυτό σχετίζεται rs402710 SNP έχει προσελκύσει την προσοχή πολλών ερευνητών από πολλές χώρες και περιοχές. Αρκετές μελέτες αναπαραγωγής παρακολούθησης έχουν παταγωδώς αναπαραχθεί η σημαντική συσχέτιση του SNP με τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα, σε Καυκάσου [14], [15], [16] και της Ασίας [16], [17], [18], [19] πληθυσμός. Ωστόσο, ορισμένες άλλες μελέτες αναπαραγωγής έδειξαν τα αντιφατικά αποτελέσματα [20], [21], [22]. Δύο κινεζικές μελέτες αναπαραγωγής απέτυχε να προσδιορίσει την παρόμοια επίδραση σε χωριστές κινεζικού πληθυσμού [20], [21], η οποία μπορεί να οφείλεται στο μικρό μέγεθος του δείγματος. Επιπλέον, λόγω των φαινομένων «κατάρα του νικητή» ότι τα μεγέθη επίδρασης της αρχικής θετικής μελέτης είναι συνήθως υπερεκτιμάται, οι ακόλουθες μελέτες αναπαραγωγής είναι πιθανόν να είναι μικρής ισχύος και στη συνέχεια πολύ πιθανό να αποτύχει, εάν πληρούνται οι απαραίτητες διαστάσεις του δείγματος με βάση τα αρχικά υπερεκτιμηθεί μεγέθη επίδρασης [23]. Παρ ‘όλα αυτά, μετα-ανάλυση, μια μέθοδος που συνδυάζει τα στοιχεία μαζί για να κάνουν το μέγεθος του δείγματος εκθετική ανάπτυξη για να πάρει αρκετή δύναμη, μπορεί να διευκρινίσει αντιφατικά αποτελέσματα σε μελέτες γενετικής σύνδεσης [24]. Ως εκ τούτου, πραγματοποιήσαμε μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων για να εξετάσει τη σχέση μεταξύ rs402710 και του κινδύνου καρκίνου του πνεύμονα στην κινεζική πληθυσμού, μετά από αυτό, μια μετα-ανάλυση που συνδυάζει προηγουμένως δημοσιευμένων μελετών και την τρέχουσα μελέτη μας διεξήχθη για να παρέχει μια πιο ακριβή εκτίμηση αυτής της σύνδεσης.

Υλικά και Μέθοδοι

πληθυσμός Μελέτη

Μεταξύ 2009 και 2011, συνολικά 611 νέα επιβεβαιωμένα κρούσματα και 1062 του καρκίνου χωρίς ελέγχους ελήφθησαν από την Tongji Νοσοκομείο του Πανεπιστημίου Huazhong Επιστήμης και Τεχνολογίας (HUST). Όλοι τους ήταν γενετικά άσχετη εθνοτικών Κινέζων Χαν που κατοικούν στην πόλη Wuhan ή γύρω περιοχών σε Hubei επαρχία της κεντρικής Κίνας. Οι 611 περιπτώσεις επιβεβαιώθηκαν ιστοπαθολογικά χωρίς καμία επεξεργασία (όπως ραδιοθεραπεία ή χημειοθεραπεία) πριν από τη συλλογή δειγμάτων αίματος. Όλοι οι έλεγχοι επιλέχθηκαν τυχαία από τα άτομα που συμμετείχαν σε ένα πρόγραμμα check-up για την υγεία στο ίδιο νοσοκομείο κατά τη διάρκεια της ίδιας περιόδου, όπως είχαν προσληφθεί οι περιπτώσεις. Οι έλεγχοι δεν είχαν ιστορικό καρκίνου και ήταν η συχνότητα ταιριάζει με τις περιπτώσεις κατά ηλικία (± 5 έτη), το φύλο, το φύλο και την κατοικημένη περιοχή (αστική ή αγροτική). Μετά λήφθηκε γραπτή συγκατάθεση, ένα 5-ml δείγματος περιφερικού αίματος και ένα ερωτηματολόγιο που συλλέχθηκαν από κάθε θέμα. Καπνιστής ορίστηκε ως ένα άτομο που είχε καπνίσει τουλάχιστον ένα τσιγάρο την ημέρα & gt? 1 χρόνο ή περισσότερο σε οποιαδήποτε στιγμή στη ζωή τους, ενώ ποτέ καπνιστές ορίστηκαν εκείνοι που δεν είχαν. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Tongji Νοσοκομείο Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας.

Γονοτυπικές

Το γονιδιακό DNA εξήχθη από 5-mL δείγματος περιφερικού αίματος με τη χρήση του Relax Gene System αίματος DNA DP319-02 (Tiangen, Πεκίνο, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι γονότυποι των rs402710 SNP εκτελέστηκε από τη Δοκιμασία TaqMan SNP Γονοτυπικές (Applied Biosystems, Foster City, CA) χρησιμοποιώντας το 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, πόλη Foster, CA) χωρίς να γνωρίζουν την περίπτωση ή τον έλεγχο κατάστασης των υποκειμένων. Για την επικύρωση των αποτελεσμάτων, 5% αντιγραφεί δείγματα επιλέχθηκαν τυχαία για να εκτιμηθεί η επαναληψιμότητα, με ένα ποσοστό συμφωνία του 100%.

Η στατιστική ανάλυση

Οι διαφορές στις κατανομές των δημογραφικών χαρακτηριστικών, επιλεγμένες μεταβλητές και γονότυπων μεταξύ ασθενών και μαρτύρων εξετάστηκαν από

χ

2

δοκιμής και

t

τεστ. Η ισορροπία Hardy-Weinberg (HWE) ελέγχθηκε με ένα καλής προσαρμογής

χ

2

δοκιμών στα θέματα ελέγχου. Άνευ όρων λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό αναλογία αργού πιθανοτήτων (OR), ρυθμίζεται Ή ​​και τα διαστήματα τους εμπιστοσύνης 95% (ΚΠ) για την επίδραση των γονότυπων rs402710 στον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα, με προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο και το κάπνισμα κατάσταση, ανάλογα με την περίπτωση. Προκειμένου να αποφευχθεί η υπόθεση των γενετικών μοντέλων, κυρίαρχη (ΤΤ συν CT vs CC), υπολειπόμενο (ΤΤ vs CT συν CC) και τα μοντέλα πρόσθετο αναλύθηκαν επίσης. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS έκδοση 19.0. Το κριτήριο της στατιστικής σημαντικότητας, εκτός για τη δοκιμή της ετερογένειας ήταν

P

& lt? 0,05, και όλα τα στατιστικά τεστ ήταν δύο όψεων

Μετα-ανάλυση των rs402710 σε σχέση με τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα

Ακολούθησε τις μεθόδους που προτείνονται από τις Προϊόντα Προτεινόμενα Πληροφόρησης για συστηματικές ανασκοπήσεις και μετα-αναλύσεις (PRISMA) [25] και μετα-ανάλυση των μελετών παρατήρησης στην Επιδημιολογία (MOOSE) κατευθυντήριες γραμμές [26], που χρησιμοποιούν τους όρους αναζήτησης

rs402710 , 5q15.33

ή

CLPTM1L

, σε συνδυασμό με το

καρκίνο του πνεύμονα, του πνεύμονα νεοπλασία, πνεύμονες αδένωμα

,

καρκίνωμα πνεύμονα

, ή

όγκου πνεύμονα

στο PubMed, Embase και ISI Web of Knowledge βάσεων δεδομένων για δημοσιευμένες μελέτες χωρίς περιορισμό γλώσσας. Παραπομπές που αναφέρονται από τα ανακτημένα αντικείμενα επίσης σαρωθεί για περισσότερες πληροφορίες. Επιλέξιμες μελέτες έπρεπε να πληρούν τα ακόλουθα κριτήρια: (α) μια υπόθεση ελέγχου ή ένθετη μελέτη ασθενών-μαρτύρων αξιολόγηση της συσχέτισης μεταξύ rs402710 και του κινδύνου καρκίνου του πνεύμονα? (Β) που περιέχονται επαρκείς πληροφορίες σχετικά με το γονότυπο ή τη συχνότητα αλληλόμορφου για τις εκτιμήσεις κινδύνων, ή τα αρχικά δεδομένα, μέσω των οποίων μπορούμε να υπολογίσουμε τι χρειαζόμαστε? (Γ) γονότυπους των ελέγχων ήταν σε ισορροπία Hardy-Weinberg (

P

& gt? 0,01)? (Δ) τις μελέτες των ανθρώπων. Αν υπήρχε παράλληλη δημοσίευση, επιλέξαμε τη μελέτη με μεγαλύτερο μέγεθος δείγματος. Αν περισσότερες από μία εθνοτική πληθυσμού συμμετείχαν σε μία έκθεση, κάθε πληθυσμός θεωρήθηκε ξεχωριστά

Τα παρακάτω στοιχεία προέρχονται από επιλέξιμες μελέτη από δύο ανεξάρτητους συγγραφείς (Xuzai Lu & amp? Xia Luo):. Πρώτου συγγραφέα, έτος δημοσίευση, γεωγραφική θέση, την εθνικότητα του πληθυσμού της μελέτης, σχεδιασμού της μελέτης, η μέθοδος προσδιορισμού του γονότυπου, ο αριθμός των περιπτώσεων και ελέγχων, αρσενικό /θηλυκό ρυθμό, μέση ηλικία, το οικογενειακό ιστορικό καρκίνου, η πηγή της ομάδας ελέγχου, οι συχνότητες των γονοτύπων σε περιπτώσεις και τους ελέγχους. ΕΑΠ και το 95% ΚΠ ως τις μετρήσεις του μεγέθους αποτελέσματος εκ νέου υπολογίζεται για το αλληλόμορφο Τ έναντι C, γονότυπους CT έναντι CC και ΤΤ έναντι CC και έτσι ήταν τα κυρίαρχα, υπολειπόμενο και πρόσθετο μοντέλα αντίστοιχα. Η

χ

2

έδρα Cochran του

Q

στατιστικό αποτέλεσμα της δοκιμής χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμή ετερογένειας (πραγματική διακύμανση της μέγεθος της επίδρασης μεταξύ των μελετών), και θεωρήσαμε ότι η ανομοιογένεια ήταν σημαντικό εάν

P

& lt? 0.100 για

Q

στατιστική [27]. Στη συνέχεια, το

2

στατιστικό στοιχείο, το οποίο αποκαλύπτει το ποσοστό της μεταβλητότητας στην εκτίμηση αποτελέσματος, χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση της ετερογένειας μεταξύ των μελετών (

2

= 0-25 %, δεν υπάρχει ετερογένεια?

2

= 25-50%, μέτρια ετερογένεια?

2

= 50-75%, μεγάλη ετερογένεια?

I

2

= 75-100%, ακραία ετερογένεια) [28]. Όταν η ετερογένεια ήταν αμελητέα (

P

& gt? 0,1 για

Q

στατιστική), θα συγκεντρώνονται τα δεδομένα από μελέτες με ένα μοντέλο fix-εφέ χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Mantel-Haenszel, διαφορετικά, θα χρησιμοποιηθεί μια τυχαίων δράσεων μοντέλο χρησιμοποιώντας Dersimonian και η μέθοδος Laird [29]. Για να εξηγήσει τις πηγές των μελετών σταυρό ετερογένειας, στρωματοποιημένη ανάλυση, σύμφωνα με την εθνικότητα (Ασίας και του Καυκάσου), το μέγεθος του δείγματος (≤1000 και & gt? 1000), εκτελέστηκε. Στη συνέχεια, οι σωρευτικές μετα-ανάλυση που πραγματοποιήθηκε για να παρατηρήσει την τάση συσχέτισης μεταξύ rs402710 και τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα σε χρονολογική σειρά των επιλέξιμων λογοτεχνίες [30]. ανάλυση ευαισθησίας χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό των αντίστοιχων επιρροή της κάθε μελέτης για τη συνολική εκτίμηση από παραλειφθεί κάθε μελέτη με τη σειρά τους [31]. προκατάληψη δημοσίευση ανιχνεύθηκε από οικόπεδο χοάνη [32], του οποίου η ασυμμετρία διερευνήθηκε με δοκιμασία Egger και δοκιμασία Begg του [33] και τελειώματα και μέθοδο [34] συμπληρώστε, εάν είναι απαραίτητο (

P

& lt? 0,05 για τη δοκιμή Egger του ή Μπεγκ της δοκιμής), εφαρμόστηκε. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν από Stata Έκδοση 11.0. Όλα

P τιμές

δύο-ουρά με ένα σημαντικό επίπεδο στο 0,05. Αν έχουμε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ του SNP και του κινδύνου καρκίνου του πνεύμονα, βιοπληροφορική αναλύσεις περαιτέρω διενεργείται με την πρόβλεψη της λειτουργίας των rs402710 χρησιμοποιώντας τρία ολοκληρωμένα εργαλεία βιοπληροφορικής «FastSNP» (https://fastsnp.ibms.sinica.edu.tw/pages /input_CandidateGeneSearch.jsp), «SNP Info» (https://manticore.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) και «F-SNP» (https://compbio.cs.queensu.ca/F-SNP/).

Αποτελέσματα

Αποτελέσματα case-control μελέτη

Χαρακτηριστικά του πληθυσμού της μελέτης.

Ένα σύνολο 611 περιπτώσεων καρκίνου του πνεύμονα και 1062 χωρίς καρκίνο έλεγχοι είχαν εγγραφεί στη μελέτη μας. Τα χαρακτηριστικά της όλα τα θέματα που έχουν περιληφθεί στον πίνακα 1. Τα αρσενικά ήταν 68,6% μεταξύ των περιπτώσεων σε σύγκριση με 70,2% στους ελέγχους (

P

= 0,475). Η μέση ηλικία ήταν 60,97 (± 10,76) έτη για τις περιπτώσεις και 61.71 (± 9.36) έτη για τους ελέγχους (

P

= 0,145). Επίσης δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην κατανομή της ηλικίας του (& lt? 50 και ≥50 ετών,

P

= 0,070). Περισσότερα καπνιστές παρατηρήθηκαν σε περιπτώσεις σε σύγκριση με άτομα στην ομάδα ελέγχου (

P

& lt? 0.001), δεδομένου ότι οι περισσότεροι καρκίνοι του πνεύμονα οφείλονται στο κάπνισμα. 421 (68,9%) των περιπτώσεων είχαν ιστοπαθολογικά επιβεβαιώθηκαν ως καρκίνος μη-μικρού κυττάρου του πνεύμονα (NSCLC), συμπεριλαμβανομένων των καρκινώματα πλακωδών κυττάρων, αδενοκαρκινώματα και μεγάλα καρκινώματα του πνεύμονα, εν τω μεταξύ NSCLC αντιπροσωπεύει περίπου το 80% των πρωτογενών καρκίνων του πνεύμονα σε γενικές γραμμές.

ανάλυση σύνδεσης.

Ο ρυθμός κλήσεων γονότυπων ήταν 99,6% για τους rs402710 SNP. Η κατανομή των γονότυπων SNP στις περιπτώσεις και μάρτυρες έδειξαν στον Πίνακα 2. γονότυποι σε μάρτυρες ήταν σύμφωνα με την ισορροπία Hardy-Weinberg (

P

= 0,955). Σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε στην κατανομή των γονοτύπων μεταξύ ασθενών και μαρτύρων (

χ

2

= 4.368,

P

= 0.037).

Η

Με πολυπαραγοντική λογιστική μοντέλο παλινδρόμησης με προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο και την κατάσταση καπνίσματος, η σημαντική συσχέτιση μεταξύ rs402710 και καρκίνο του πνεύμονα παρατηρήθηκε στο μοντέλο ετεροζυγώτες (CT έναντι CC: OR = 0.75, 95% CI = 0,60 – 0,93), η οποία έδειξε ότι τα άτομα με την CT γονότυπο είχαν σημαντικά μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα σε σχέση με τους μεταφορείς CC γονότυπο. Ομοίως, σημαντικές συσχετίσεις βρέθηκαν σε κυρίαρχη και πρόσθετο μοντέλα (κυρίαρχο μοντέλο: OR = 0.77, 95% CI = 0,63 – 0,95, προσθετικό μοντέλο: OR = 0.85, 95% CI = 0,73 – 0,99). Ένα κυρίαρχο μοντέλο ήταν ένας φορέας Τ (ΤΤ συν CT) ομάδα, η οποία συνδυάστηκε τους φορείς ΤΤ με τους φορείς CT για την αύξηση της στατιστικής ισχύος. Η ανά-T-αλληλόμορφο Ή θα μπορούσε να υπολογιστεί σε ένα μοντέλο πρόσθετης ύλης. Λαμβάνοντας υπόψη το κάπνισμα είναι ένας σημαντικός παράγοντας που συμβάλλει στον καρκίνο του πνεύμονα, που στρωματοποιημένη αντίστοιχα τις περιπτώσεις και τους ελέγχους σε δύο ομάδες, καπνιστής και ουδέποτε καπνιστής, για να ανιχνεύσει τη σχέση μεταξύ rs402710 και τον καρκίνο του πνεύμονα. Το ίδιο αποτέλεσμα μεταξύ rs402710 και του καρκίνου του πνεύμονα παρατηρήθηκε επίσης σε ετεροζυγώτες και κυρίαρχο μοντέλα ποτέ καπνιστής ομάδα (μοντέλο ετεροζυγώτες: OR = 0,66, 95% CI = 0,48 – 0,90? Κυρίαρχο μοντέλο: OR = 0,71, 95% CI = 0,53 – 0,95 ). Ωστόσο, δεν ισχύει ενώσεις βρέθηκαν κάτω από οποιεσδήποτε μορφές της ομάδας καπνιστή, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι Τ μεταφορείς που δεν καπνίζουν μπορεί να έχουν μικρότερο κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα από ό, τι εκείνες των καπνιστών.

Για να διερευνήσουν την επίδραση του rs402710 για NSCLC, είμαστε επίσης σε σύγκριση η κατανομή γονότυπο μεταξύ των περιπτώσεων NSCLC και τους ελέγχους. Όπως συνολικό καρκίνων του πνεύμονα, παρόμοια θετική συσχέτιση και ισχυρότερη γενετική επίδραση βρέθηκαν σε τρία μοντέλα της NSCLC (μοντέλο ετεροζυγώτες: OR = 0.67, 95% CI = 0,53 – 0,86? Κυρίαρχο μοντέλο: OR = 0.69, 95% CI = 0,55 – 0,87? προσθετικό μοντέλο: OR = 0.78, 95% CI = 0,66 – 0,93). Είναι αξιοσημείωτο το γεγονός ότι μεγαλύτερη επίδραση του ανηλίκου αλληλόμορφο Τ παρατηρήθηκε σε NSCLC από ότι στη συνολική καρκίνο του πνεύμονα. Αλλά πέρα ​​από αυτό, στο μοντέλο αλληλομόρφων, Τ φορείς αλληλόμορφο έδειξε επίσης σημαντικά προστατευτική δράση σε σύγκριση με εκείνους με το αλληλόμορφο C (OR = 0,79, 95% CI = 0,66 – 0,94). Στη συνέχεια, ο NSCLC και οι έλεγχοι έγιναν για άλλη μια φορά στρωματοποιημένη σε δύο ομάδες: καπνιστής και ουδέποτε καπνιστής Ομοίως, σύμφωνα με τις ίδιες τέσσερα μοντέλα της ποτέ ομάδα καπνιστής, θετική συσχέτιση και ισχυρότερη γενετική επίδραση δεν βρέθηκε. Ωστόσο, σημαντικές ενώσεις εξακολουθούν να μην ανιχνεύονται υπό οποιεσδήποτε μορφές της ομάδας καπνιστή.

Τα αποτελέσματα της μετα-ανάλυσης

Χαρακτηριστικό του περιλαμβάνονται μελέτες.

Όπως φαίνεται στην Εικόνα S1, που Βρήκαμε 16 δυνητικά σχετικές εκθέσεις μετά από ολοκληρωμένη έρευνα, εκ των οποίων, 2 εκθέσεις με ανεπαρκείς πληροφορίες παραλήφθηκαν μετά την επαφή με τους συντάκτες μέσω e-mail [35], [36]. Ωστόσο, τα στοιχεία της έκθεσης επιτυγχάνεται με Xun et al [37] εντελώς προήλθε από μια μελέτη GWA από McKay et al [12], η οποία κατ ‘αρχάς προσδιορίζεται το συσχετισμό μεταξύ rs402710 και τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα. Μια μελέτη που διεξήχθη από Truong et al [16] περιείχε δύο εθνοτήτων του Καυκάσου και της Ασίας. Τέλος, όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, 13 αναφορές συν-μαρτύρων μας μελέτη που περιλαμβάνει 21 μελέτες 31.811 περιπτώσεις και 36.333 μάρτυρες συμπεριλήφθηκαν σε αυτή την μετα-ανάλυση [12], [14], [15], [16], [17 ], [18], [19], [20], [21], [22], [38], [39], [40], με τη συμμετοχή 13 του Καυκάσου μελέτες και 8 ασιατικές μελέτες.

Η

Συγκεντρωτική συχνότητα του αλληλόμορφου κινδύνου.

βάση δεδομένων HapMap εμφανίζεται ότι οι συχνότητες Τ αλληλόμορφο rs402710 σε Καυκάσιους, Κινέζοι και Ιάπωνες ήταν 36,5%, 31,5% και 30,9% αντίστοιχα. Και εμείς παρομοίως βρέθηκαν συγκεντρωμένα συχνότητες αλληλόμορφο Τ ήταν 35,0% (95% CI = 34,5% -35,4%) σε Καυκάσιους ελέγχους και 31,7% (95% CI = 30,6% -32,9%) στις ασιατικές ελέγχους σε μας μετα-ανάλυση, σύμφωνα με σταθερές και τυχαία μοντέλο, αντιστοίχως.

Συνολικά μετα-ανάλυση των rs402710 σε συνδέεται με τον καρκίνο του πνεύμονα.

Όπως φαίνεται στον πίνακα 4, καμία σημαντική απόδειξη της ετερογένειας ανιχνεύθηκε σε όλα τα γενετικά μοντέλα (

P

& gt? 0.10), ως εκ τούτου, ένα μοντέλο αποτύπωση επιπτώσεις χρησιμοποιήθηκε στην πισίνα του ή και για όλα τα μοντέλα. Στο μοντέλο αλληλικές, όπως φαίνεται στο σχήμα 1, το Τ αλλήλιο παρουσίασε μια συγκεντρωτική OR 0,86 (95% CI = 0.84-0.88) σε σύγκριση με το αλληλόμορφο C. Γονοτυπική ΕΑΠ του ΤΤ έναντι CC και CT έναντι CC ήταν 0,73 (95% CI = 0,69 – 0,77) και 0,86 (95% CI = 0,83 – 0,89). Ομοίως, οι κυρίαρχες, υπολειπόμενο και πρόσθετο μοντέλα ήταν σημαντικά σχετίζεται με τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα (κυρίαρχο μοντέλο: OR = 0.83, 95% CI = 0,81 – 0,86? Υπολειπόμενο μοντέλο: OR = 0.79, 95% CI = 0.75-0.83? Προσθετικό μοντέλο : OR = 0.86, 95% CI = 0.84-0.88)

η

αναλύει στρωματοποιημένη

Πραγματοποιήσαμε στρωματοποιημένη αναλύσεις για να διερευνήσει την πιθανή πηγή της ετερογένειας από την εθνικότητα και το δείγμα.. μεγέθους (Πίνακας 5). Μετά από στρωματοποίηση ως προς την εθνικότητα, καμία σημαντική μεταξύ μελετών ετερογένεια ανιχνεύθηκε σε Καυκάσιους (

P

ετερογένεια

& gt? 0.1, όλα τα

2

= 0%), εν τω μεταξύ το ετερογένεια στην ετερόζυγη (

2

= 38,7%) και υπολειπόμενη (

2

= 39,3%) μοντέλο μεταξύ των ασιατικών μελετών αυξήθηκε ελαφρά από κανένα βαθμό ετερογένειας σε μέτριο βαθμό . Θα μπορούσε να οφείλεται ότι η ετερογένεια σε μεγάλο βαθμό προήλθε από τις ασιατικές μελέτες και η ετερογένεια σε Καυκάσιους μελέτες ήταν μικρή. Ακόμη και η ετερογένεια στις ασιατικές μελέτες, οι οποίες θα μπορούσαν να αντιπροσωπεύουν διαφορετικές μεθόδους σχεδιασμού της μελέτης και του γονότυπου έφτασε μέτριο βαθμό, οι τιμές των

P

για ετερογένεια ήταν όλες μεγαλύτερες από 0,10. Με άλλα λόγια, τα αποτελέσματα της μετα-ανάλυσης σε ασιατικές μελέτες ήταν αξιόπιστη και αντιπροσωπευτική. Παρά το γεγονός αυτό, η σημαντική συσχέτιση μεταξύ των rs402710 SNP και τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα ήταν ακόμη εντοπιστεί σε όλες τις γενετικές μοντέλα τόσο του Καυκάσου και της Ασίας ομάδες. Στη συνέχεια, τα δεδομένα των γονότυπων ήταν στρωματοποιημένη με το μέγεθος του δείγματος, η οποία ορίστηκε μεγάλη ομάδα, όταν ήταν πάνω από 1000, αλλιώς ήταν μικρή ομάδα. Στις δύο υποομάδες, όλα τα γενετικά μοντέλα παρουσίασαν σημαντική συσχέτιση με μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα, και δεν έδειξε σημαντική μεταξύ μελετών ετερογένεια.

Η

Για να παρέχει μια πιο ακριβή εκτίμηση της επίδρασης της rs402710 για NSCLC, εμείς σε συνδυασμό τρέχουσα μελέτη μας και προηγουμένως δημοσιευμένες μελέτες που εμφανίζονται λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με NSCLC, συμπεριλαμβανομένων των 5 μελέτες του 6060 περιπτώσεων NSCLC και 8678 ελέγχους. Η ετερογένεια στην ετερόζυγη (

2

= 45,7%) και η κυρίαρχη (

2

= 35,8%) μοντέλο μεταξύ NSCLC μελέτες ήταν μέτρια, η οποία μπορεί να οφείλεται σε διαφορετικό σχεδιασμό της μελέτης και του γονότυπου μεθόδους. Σύμφωνα με σταθερό επιπτώσεις μοντέλο, η σημαντική συσχέτιση με μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα εκτέθηκε σε όλα τα γενετικά μοντέλα.

Οι αναλύσεις ευαισθησίας και Αθροιστική μετα-αναλύσεις.

Για να εκτιμηθεί η επίδραση των μεμονωμένων μελέτης για το συγκεντρώνονται εκτίμηση, πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση ευαισθησίας, παραλείποντας κάθε μελέτη με τη σειρά. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 6, το αποτέλεσμα του μοντέλου αλληλικών ήταν ιδιαίτερα ισχυρή όταν εξαλειφθεί κάθε μελέτη. Δεν υπήρχε σχεδόν καμία αλλαγή των ΕΑΠ και 95% ΠΙ μετά από κάθε διαγραφή (Σχήμα 2). Ανάλογα αποτελέσματα ισχύουν και στα άλλα γενετικά μοντέλα και όχι μόνο μελέτη αλλάξει εμφανώς τα συγκεντρωμένα ΕΑΠ.

Η

Αθροιστική μετα-αναλύσεις διεξήχθησαν επίσης σε όλες τις γενετικές μοντέλα μέσω ποικιλία των μελετών με χρονολογική σειρά. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, στο μοντέλο αλληλόμορφες, 95% ΚΠ για τα κοινά ή έγινε σταδιακά στενότερη με κάθε συσσώρευση περισσότερες μελέτες, οι οποίες έδειξαν ότι η ακρίβεια της εκτίμησης σταδιακά ενισχύθηκε από συνεχή προσθήκη περισσότερων δειγμάτων. Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν και σε άλλες γενετικές μοντέλα.

Η

προκατάληψη Δημοσίευση.

Όπως φαίνεται από το οικόπεδο χοάνη, δοκιμή του Egger και δοκιμή του Begg του, δεν υπήρχε προκατάληψη δημοσίευση υπό όλες γενετικών μοντέλων (

P

Egger

& gt? 0,05,

P

Begg

& gt? 0,05) και οικόπεδο χοάνη ήταν οπτικά συμμετρική

Οι βιοπληροφορικής αναλύσεις. rs402710.

Μόνο ένα από τα τρία εργαλείων βιοπληροφορικής, «F-SNP» προβλέπεται ότι το SNP ήταν πιθανό να συμμετέχουν σε μεταγραφική ρύθμιση με χαμηλό σκορ.

Συζήτηση

στη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας, μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της rs402710 και ο καρκίνος του πνεύμονα κίνδυνο SNP αποκαλύφθηκε κάτω από ετερόζυγη, κυρίαρχο και προσθετικό μοντέλο κινεζικού πληθυσμού. Επιπλέον, το ακόλουθο μετα-ανάλυση ενσωμάτωση τρέχουσα μελέτη μας και 13 προηγούμενες μελέτες με συνολικά 31.811 περιπτώσεις και 36.333 έλεγχοι, απέδειξε να συμπίπτει με τη συσχέτιση μεταξύ rs402710 και καρκίνο των πνευμόνων υπό όλες τις έξι γενετικά μοντέλα. Στη συνέχεια, με κάθε συσσώρευση των περισσότερων χρονολογικά δεδομένα, σωρευτικές μετα-ανάλυσης εμφανίζεται η πιο ακριβής επίπτωση αυτής της παραλλαγής με 95% των πιστωτικών ιδρυμάτων της συγκεντρωμένων ΕΑΠ γίνει προοδευτικά στενότερο. Πριν και μετά τη διαγραφή της κάθε μελέτης, οι εκτιμήσεις όλων των γενετικών μοντέλων ήταν παρόμοια με την ανάλυση ευαισθησίας, εκδηλώνοντας την ισχυρή σταθερότητα της μετα-ανάλυσης. Μικρή προκατάληψη δημοσίευση ανιχνεύθηκε.

Η rs402710 βρίσκεται στο ιντρόνιο 4 του

CLPTM1L

γονίδιο στο χρωμόσωμα 5p15.33, το οποίο περιέχει δύο βιολογικά σχετικές γονίδια για τον καρκίνο του πνεύμονα, το τριτο (τελομεράσης ανάστροφης μεταγραφάσης ) και

CLPTM1L

. Το κέρδος αριθμός αντιγράφων αυτής της περιοχής του χρωμοσώματος 5p είναι η πιο συχνή εκδήλωση κυτταρογενετική στα πρώτα στάδια του NSCLC [41]. Ωστόσο, για ένα μεγάλο χρονικό διάστημα, οι λειτουργίες του

CLPTM1L

γονιδίου ελάχιστα κατανοητή, και παρατηρήθηκε ως παράγοντας σισπλατίνη αντίσταση στον καρκίνο-κυτταρικές γραμμές ωοθηκών η οποία δεν μπορεί να ληφθεί ως συνάρτηση του

CLPTM1L

γονίδιο για την ογκογένεση [42]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, που δημοσιεύθηκε τον Ιούνιο του 2012, ο James MA et al [43] έδειξε ότι

CLPTM1L

, ως υπερεκφρασμένη πρωτεΐνη στα κύτταρα όγκου πνεύμονα, προστατεύεται από γονοτοξικό στρες που προκαλείται απόπτωση μέσω της ρύθμισης της Bcl-XL, που εμπλέκονται ότι η αντι-αποπτωτική

CLPTM1L

συνάρτηση μπορεί να είναι ένας πιθανός μηχανισμός της ευαισθησίας στην πνευμονική ογκογένεση.

το

CLPTM1L

παραλλαγή του γονιδίου rs402710 σχετίζεται με το σχηματισμό προϊόντος προσθήκης υψηλότερη DNA σε όγκο παρακείμενες πνευμονικό ιστό [38]. Τα επίπεδα αυτών των προϊόντων προσθήκης DNA (που σχηματίζεται από τους πολυκυκλικούς αρωματικούς υδρογονάνθρακες και αλδεΰδες που βρίσκονται στον καπνό του τσιγάρου) μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μια λογιστική βιοδείκτη έκθεση σε καρκινογόνο καπνό. Είναι πιθανό ότι η παραλλαγή rs402710 μπορεί να ενισχύσει τον σχηματισμό και την επιμονή της προσαγωγών DNA. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ αυτής της παραλλαγής και το

CLPTM1L

γονίδιο δεν είναι σαφής. Μέσα από την ανάλυση βιοπληροφορικής, διαπιστώσαμε ότι αυτή η παραλλαγή μπορεί να συμμετέχει στη ρύθμιση της μεταγραφής. Αλλά το αποτέλεσμα του SNP στον πνεύμονα ογκογένεση πρέπει να επιβεβαιωθεί με περαιτέρω μελέτες.

Η ευαισθησία rs402710 τόπος ήταν αρχικά προσδιορίζονται σε μια μελέτη GWA του Καυκάσου πληθυσμού από Mckay JD et al [12], ωστόσο, τη συνέχεια -up μελέτες αναπαραγωγής έδειξαν ασύμφωνος αποτελέσματα. Η συσχέτιση μεταξύ rs402710 και του καρκίνου του πνεύμονα έχει επιβεβαιωθεί αντίστοιχα σε κάποια από τα γενετικά μοντέλα σε πληθυσμό Ιαπωνία [18], την Κορέα πληθυσμός [19], [40] και αναμιγνύεται ασιατικού πληθυσμού [17], αλλά δύο μελέτες αντιγραφής σε κινέζικα πληθυσμό απέτυχε να εκτελούν τις παρόμοια αποτελέσματα [20], [21]. Αν και μια μετα-ανάλυση για αυτό το SNP rs402710 από Simone Mocellin et al [44] κατέληξε σε θετικό συμπέρασμα, ότι περιείχε 10 μελέτες πριν από το 2011 και μόνο αποδεικνύεται αλληλομόρφων μοντέλο. Στη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας στο κινεζικού πληθυσμού, η συσχέτιση μεταξύ rs402710 και προστατευτική επίδραση του καρκίνου του πνεύμονα εντοπίστηκε σε ετεροζυγώτες, κυρίαρχο και πρόσθετο μοντέλα, αλλά απέτυχε στην αλληλομόρφων, ομόζυγο και υποτελούς μοντέλα, μπορεί να οφείλεται στο μικρό μέγεθος του δείγματος της μελέτης . Στο NSCLC, είναι αξιοσημείωτο το γεγονός ότι μεγαλύτερη επίδραση της έλασσον αλληλόμορφο Τ ανιχνεύθηκε σε NSCLC από ότι στη συνολική καρκίνων του πνεύμονα. Επιπλέον, οι ακόλουθες μετα-ανάλυση που περιλαμβάνει 31.811 περιπτώσεις και 36.333 έλεγχοι πρότεινε με συνέπεια την σημαντική συσχέτιση της rs402710 με προστατευτική δράση από καρκίνο του πνεύμονα σε όλα τα γενετικά μοντέλα. Μετά από στρωματοποίηση κατά εθνότητες ή το μέγεθος του δείγματος της μελέτης, οι σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ rs402710 SNP και του καρκίνου του πνεύμονα εντοπίστηκαν σε όλες τις γενετικές μοντέλα όλων των υποομάδων. Ωστόσο, η γενετική επίδραση στην Καυκάσου ήταν ισχυρότερη από εκείνη της Ασίας κάτω από κάθε γενετικό μοντέλο, πιθανότατα σχετίζονται με διαφορετικές συχνότητες αλληλόμορφο μεταξύ της Ασίας και του Καυκάσου. Στο NSCLC, οι σημαντικές συσχετίσεις με μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα είχαν διερευνηθεί σε όλες τις γενετικές μοντέλα, η οποία ενισχύεται περαιτέρω τα ευρήματά μας στη μελέτη ασθενών-μαρτύρων

Αν και δεν ετερογένεια ανιχνεύθηκε σε όλες τις γενετικές μοντέλα μεταξύ περιλαμβάνονται μελέτες, στρωματοποιημένη αναλύσεις. εξακολουθούσε να εκτελείται για να διερευνήσει τις διαφορές μεταξύ των εθνοτήτων ή το μέγεθος του δείγματος της μελέτης. Σε Καυκάσιους, δεν υπάρχει σημαντική ετερογένεια ανιχνεύθηκε, ενώ η ετερογένεια στην ετερόζυγη και υποτελούς μοντέλο μεταξύ των ασιατικών μελετών αυξήθηκε από κανένα βαθμό ετερογένειας σε μέτριο βαθμό. Το ίδιο φαινόμενο, ότι η ετερογένεια μεταξύ των μελετών μέγεθος μεγάλο δείγμα απομακρύνεται και η μικρή ομάδα αυξήθηκε, υπήρχαν μετά από στρωματοποιημένη από το μέγεθος του δείγματος της μελέτης, η οποία μπορεί να οφείλεται σε σφάλμα δειγματοληψίας σε μικρές μελέτες. Επιπλέον, η ανάλυση ευαισθησίας και προκατάληψη δημοσίευση εκτίμηση απεικονίζονται τα τρέχοντα αποτελέσματα αυτής της μετα-ανάλυσης ήταν ισχυρή.

Παρά τη σαφή δύναμη της τρέχουσας μελέτης που διαθέτουν αρκετή δύναμη, ορισμένοι περιορισμοί πρέπει να εξεταστεί σοβαρά. Πρώτον, το μέγεθος του δείγματος της μελέτης ασθενών-μαρτύρων μας ήταν σχετικά μικρό. Δεύτερον, απουσιάζει δεδομένα ή ανεπαρκή δεδομένα μας περιορίζονται να εκτελέσει περαιτέρω ανάλυση. Έτσι δεν θα μπορούσαμε ανάλυση η σύνδεση μεταξύ των rs402710 SNP και υποτύπους καρκίνου του πνεύμονα συμπεριλαμβανομένου του αδενοκαρκινώματος, μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα και άλλοι. Τέλος, ο καρκίνος του πνεύμονα είναι μια πολύπλοκη ασθένεια που προκαλείται από γενετικούς και περιβαλλοντικούς παράγοντες, αλλά η αλληλεπίδραση γονιδίων-περιβάλλοντος δεν μπορεί να αξιολογηθεί λόγω της απουσίας των περιβαλλοντικών πληροφοριών.

Εν κατακλείδι, η παρούσα μελέτη ασθενών-μαρτύρων και η παρακολούθηση μετα-ανάλυση βοήθησε στην αποσαφήνιση έντονα τη σημαντική συσχέτιση μεταξύ rs402710 και του καρκίνου του πνεύμονα, και η μελέτη μας άφησε να εννοηθεί ότι η παραλλαγή μπορεί να δώσει ισχυρότερη επίδραση στην NSCLC και μη καπνιστές. Ωστόσο, αυτό είναι αναγκαίο για την εφαρμογή πρόστιμο-χαρτογράφηση των 5p15.33 περιοχής ή της λειτουργίας ανάλυσης για τον προσδιορισμό συνάφειας παραλλαγή.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Ακολουθήστε διάγραμμα της επιλογής σπουδών

doi:. 10.1371 /journal.pone.0076252.s001

(ΔΕΘ)

Λίστα ελέγχου S1.

PRISMA λίστα ελέγχου

doi:. 10.1371 /journal.pone.0076252.s002

(DOC)