Αφηρημένο

Ιστορικό

FOXM1 έχει αναφερθεί ότι είναι σημαντική στην έναρξη και την εξέλιξη της διαφόρων όγκων. Ωστόσο, αν FOXM1 έχει καμία ένδειξη για την πρόγνωση σε ασθενείς με μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα παραμένει ασαφής.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Σε αυτή τη μελέτη, η έκφραση FOXM1 στα καρκινικά κύτταρα εξετάστηκε για πρώτη φορά από ανοσοϊστοχημεία σε 175 δείγματα NSCLC, το αποτέλεσμα της οποίας έδειξαν ότι FOXM1 υπερέκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με την ιδιότητα θετικό το κάπνισμα (P = 0,001), φτωχότερες διαφοροποίηση ιστού (P = 0.0052), το στάδιο υψηλότερη ΤΝΜ (P & lt? 0,0001), μετάσταση στους λεμφαδένες (P & lt? 0.0001), προχωρημένο στάδιο του όγκου (P & lt? 0,0001), και χειρότερη πρόγνωση (P & lt? 0,0001). Πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση FOXM1 αύξησε τον κίνδυνο θανάτου (αναλογία κινδύνου, 1.899? 95% CI, 1,016 – 3,551). Επιπλέον, από διάφορους

in vitro

και

in vivo πειράματα

, δείξαμε ότι στοχευμένη εξουδετέρωση της έκφρασης FOXM1 μπορούσε να αναστείλει τις μεταναστευτικές και επεμβατική ικανότητες των κυττάρων NSCLC, ενώ εκτελείται η έκφραση της FOXM1 θα μπορούσε να αυξηθεί η εισβολή και τη μετανάστευση των κυττάρων NSCLC. Τέλος, βρήκαμε ότι ένας από τους κυτταρικούς μηχανισμούς με τους οποίους FOXM1 προάγει μετάσταση όγκου είναι μέσω της επαγωγής επιθηλιακά-μεσεγχυματικά πρόγραμμα μετάβασης (ΕΜΤ).

Συμπεράσματα

Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι FOXM1 υπερέκφραση σε ιστούς όγκων συνδέεται σημαντικά με την κακή πρόγνωση των ασθενών με NSCLC, μέσω της προώθησης μετάσταση όγκου

Παράθεση:. Xu Ν, Jia D, Chen W, Wang η, Liu F, Ge H, et al. (2013) FOXM1 σχετίζεται με κακή πρόγνωση των μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα ασθενείς μέσω της προώθησης μετάσταση όγκου. PLoS ONE 8 (3): e59412. doi: 10.1371 /journal.pone.0059412

Συντάκτης: John D. Minna, Πολυτεχνείου της Texas Southwestern Medical Center στο Ντάλας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 Αύγ 2012? Αποδεκτές: 14η, Φεβρουαρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 25 Μαρ 2013

Copyright: © 2013 Xu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη Σαγκάη κορυφαία ακαδημαϊκά Πειθαρχία έργου, αριθμός έργο B115 και έργο China National «985» (φάση ΙΙΙ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα έχει παραμείνει η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με όλο τον κόσμο για πολλά χρόνια. Η κακή πρόγνωση του καρκίνου του πνεύμονα οφείλεται κυρίως στο μικρό συμπτώματα πρώιμο στάδιο και όταν διαγνωστεί, τα καρκινικά κύτταρα έχουν πάντοτε μετάσταση σε άλλα όργανα [1]. Μεταβάσεως επιθηλίου-μεσεγχύματος (ΕΜΤ) είναι σημαντική σε κύτταρο όγκου μετάσταση και η οποία χαρακτηρίζεται από τη διάλυση του διακυτταρικές συνδέσεις μέσω της εσωτερίκευσης και κάτω ρύθμιση διαφόρων πρωτεϊνών που υπάρχουν στο σφικτών συνδέσμων, όπως zonula Οοοίιιάεηδ (ΖΟ) -1, και ενώσεις προσφύσεως όπως Ε-καδερίνης [2], [3].

Forkhead κουτί Μ1 (FOXM1), ένα μέλος της οικογένειας Fox μεταγραφικών παραγόντων, έχει αποδειχθεί ότι είναι απαραίτητη για την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και είναι ένα σημαντικό ρυθμιστή του κυτταρικού κύκλου που ελέγχει τη μετάβαση από την G1 στην S φάση, καθώς και την έναρξη και την ολοκλήρωση της μίτωσης [4],. Έχει αναφερθεί ότι υπερ-εκφράζεται σε μια ποικιλία όγκων, συμπεριλαμβανομένου του πνεύμονα, του ήπατος και του μαστού [8], [9], [10], [11], [12], [13], και έπαιξε σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη σε διάφορες κακοήθειες [11], [14], [15], [16]. Πρόσφατα, FOXM1 αναφέρθηκε στην οδήγηση ηπατική ίνωση και μετάσταση σε HCC [17], και έχει καλά τεκμηριωμένο ότι η οδός της hedgehog σηματοδότησης ενεργοποιήθηκε στην NSCLCs, και πολλά μόρια που εμπλέκονται σε αυτή την οδό, συμπεριλαμβανομένων PTCH1, SMO, GLI1, παρατηρήθηκαν να συσχετίζονται με πολλαπλές προγνωστική παραμέτρους του NSCLCs. Αξίζει να σημειωθεί ότι αυτά τα μόρια παρατηρήθηκαν επίσης να συσχετίζεται με την αυξημένη έκφραση του FOXM1 [18]. Ωστόσο, αν FOXM1 θα μπορούσε να ασκεί άμεση επίδραση στην πρόγνωση των ασθενών NSCLCs μένει να διευκρινιστεί. Yang και συνεργάτες ανέφεραν πρόσφατα ότι FOXM1 υπερέκφραση συσχετίζεται με την κακή επιβίωση των ασθενών που χρησιμοποιούν ανοσοϊστοχημείας αναλύσεις 69 περιπτώσεις δειγμάτων πλακώδες καρκίνωμα [19]. Ωστόσο, ο προγνωστικός ρόλος της έκφρασης FOXM1 σε άλλους τύπους NSCLCs δεν έχει προσδιοριστεί. Liu et al. διαπιστώθηκε ότι η κατάσταση έκφρασης του FOXM1 σε NSCLC είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας και αρνητική συσχέτιση με την πρόγνωση., αλλά η μελέτη τους δεν βρήκε καμία σχέση ανάμεσα στην έκφραση FOXM1 και άλλες κρίσιμες κλινικές παραμέτρους [20]. Εν τω μεταξύ, όλες τις μελέτες παραπάνω δεν αποδεικνύουν τα δυνητικά υποκείμενων μηχανισμών. Σε προηγούμενη μελέτη μας, έχουμε δείξει ότι FOXM1 προωθείται

in vitro

μεταστατική ικανότητα του μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα [21]. Στην παρούσα μελέτη, στόχος μας είναι να καθορίσει τους προγνωστικούς ρόλους των FOXM1 υπερέκφραση σε NSCLCs και την περαιτέρω διερεύνηση του μηχανισμού με τον οποίο FOXM1 θα μπορούσε να συμβάλει στην μετάσταση της NSCLCs.

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά Ασθενών και Σχέσεις μεταξύ FOXM1 Έκφραση και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά

τα κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον πίνακα S1. Οι συνολικές διάρκειες παρακολούθησης κυμαινόταν από 1 έως 84 μήνες (διάμεση τιμή, 42 μήνες). Για να διερευνηθεί αν η αυξημένη έκφραση του FOXM1 συσχετίστηκε με διάφορους προγνωστικούς παράγοντες, οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σε δύο ομάδες από την άποψη της ανοσοϊστοχημική χρώση για FOXM1 (Σχήμα 1Α, α-δ): αρνητικό /ασθενή έκφραση και ισχυρή έκφραση. Όπως φαίνεται στον Πίνακα S2, οι ασθενείς με μετάσταση λεμφαδένα (Εικόνα 1Α, ε) είχαν σημαντικά υψηλότερη έκφραση του FOXM1 σύγκριση με τους ασθενείς χωρίς μετάσταση λεμφαδένα (Εικόνα 1Α, στ) (Ρ & lt? 0,0001). Εν τω μεταξύ, ισχυρότερη έκφραση FOXM1 συσχετίστηκε με την κατάσταση θετικά το κάπνισμα (P = 0,001), φτωχότερες διαφοροποίηση (P = 0.0209), το στάδιο προηγμένη όγκου (P & lt? 0.0001) και τα υψηλότερα στάδια ΤΝΜ (P & lt? 0,0001), ενώ καμία ουσιαστική διαφορά δεν παρατηρήθηκε σε ασθενών ηλικία, το φύλο και ιστολογία κατά τη στιγμή της διάγνωσης μεταξύ των υψηλών και χαμηλών επιπέδων FOXM1

(Α) Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα της χρώσης FOXM1 σε ιστούς όγκων NSCLC αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (α, αρνητικό?. β, αδύναμη? c, μέτρια? d, έντονη, αντίστοιχα). Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα των επιπέδων έκφρασης FOXM1 μεταξύ λεμφαδένα θετικό (ε) και λεμφαδένα αρνητικός (f) (Α-Ρ, αριστερά, μεγέθυνση: Χ 100? Δεξιά, μεγέθυνση: Χ 400). (Β) Η συνολική επιβίωση αναλύσεις για όλους τους ασθενείς (α), οι ασθενείς με σταδίου Ι /ΙΙ (β) και σε ασθενείς με σταδίου III /IV (γ) σύμφωνα με τα αποτελέσματα της ανάλυσης ανοσοϊστοχημεία. Η δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για να δοκιμαστούν οι δύο κατανομές επιβίωσης. P & lt? 0,05 θεωρήθηκε να έχει στατιστική σημασία

Η

Έκφραση FOXM1 συσχετίζεται θετικά με την εξέλιξη του όγκου και κακή επιβίωση των μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα Καρκινοπαθών

Κατ ‘αρχάς, χρησιμοποιήθηκε συνολική ανάλυση επιβίωσης. να εξετάσει τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης FOXM1 και την πρόγνωση. Η πρόγνωση αυτών των ασθενών με μια ισχυρή έκφραση του όγκου FOXM1 ήταν σημαντικά φτωχότερη από εκείνη των ασθενών με αρνητική ή ασθενής έκφραση FOXM1 όγκου (Ρ & lt? 0,0001) (Figure1B, α). Σε περαιτέρω αναλύσεις, η έκφραση FOXM1 συσχετίστηκε με φτωχότερη επιβίωση για τους ασθενείς με σταδίου Ι /καρκίνος II (Ρ = 0,049) (Σχήμα 1Β, β) και για τους ασθενείς με σταδίου III /IV καρκίνο (Ρ = 0,095) (Σχήμα 1Β, γ) , αν και το αποτέλεσμα του σταδίου III /IV δεν έφθασε τη σημασία. Μία μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι το στάδιο του όγκου (P & lt? 0,0001), την κατάσταση των λεμφαδένων (P & lt? 0,0001), το στάδιο TNM (P & lt? 0.0001) και της έκφρασης FOXM1 (P & lt? 0,0001), κάθε προέβλεψε μια σημαντικά χειρότερη πρόγνωση σε ασθενείς με ΜΜΚΠ (Πίνακας 1 ). Η κλινική πρόγνωση ήταν, ωστόσο, δεν σχετίζονται με την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, η ιστολογία και η διαφοροποίηση.

Η

Επιπλέον, Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων εφαρμόστηκε για την εκτίμηση της επίδρασης της έκφρασης FOXM1 στην επιβίωση. Η αναλογία αργού κινδύνου (HR) της FOXM1 ισχυρή έκφραση σε σύγκριση με FOXM1 αρνητικά ή ασθενή έκφραση ήταν 1.899 (95% CI, 1,016 έως 3,551, P & lt? 0.05), η οποία έδειξε ότι η ισχυρή κατάσταση FOXM1 αύξησε τον κίνδυνο καρκίνου του πνεύμονα σχετίζονται με το θάνατο σχεδόν δύο φορές μεγαλύτερη από αρνητικά ή ασθενή κατάσταση FOXM1. Με πολυπαραγοντική ανάλυση, η έκφραση FOXM1, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες και η ηλικία σχετίζονταν σημαντικά με την επιβίωση (Πίνακας 2). Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι FOXM1 φαίνεται να είναι ανεξάρτητο και σημαντικός προγνωστικός δείκτης των φτωχότερων επιβίωσης.

Η

Στοχευμένες Νοκ ντάουν της FOXM1 Έκφραση Σαθεροποιημένο

in vitro

Μεταστατικό των δυνατοτήτων του NSCLC κύτταρα

τα παραπάνω αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι οι υψηλές FOXM1 έκφραση συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση των ασθενών με NSCLC, αλλά οι υποκείμενοι μηχανισμοί παραμένουν ασαφείς. Σε προηγούμενη μελέτη μας, έχουμε δείξει ότι θα μπορούσε να μεσολαβήσει FOXM1 τον πολλαπλασιασμό των κυτταρικών σειρών SCLC, η οποία μπορεί να σχετίζεται με το στάδιο του όγκου προηγμένη [21]. Αλλά οι ρόλοι της έκφρασης FOXM1 στη μετανάστευση NSCLC κυττάρων και εισβολή είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστη. Έτσι, για να μάθετε αν FOXM1 μεσολαβεί πρόγνωση στον καρκίνο του πνεύμονα μέσω της προώθησης της μετάστασης, εφαρμόσαμε μεταγωγή lenti-ιό να χτυπήσει κάτω την έκφραση FOXM1 για το μεταναστευτικό και επεμβατική ικανότητα Η1299 και PC-9 κύτταρα (Εικόνα 2Α και Β). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η διακοπή της έκφρασης FOXM1 μπορούσε να αναστείλει σημαντικά τις μεταναστευτικές και επεμβατικές ικανότητες των κυττάρων NSCLC με δοκιμασία μετανάστευσης trans-φρεατίων (Σχήμα 2C και D). Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ότι σε διαφορετικές δύο κυτταρικές σειρές, knockdown έκφρασης FOXM1 μπορούσε να αναστείλει σημαντικά τον ρυθμό πολλαπλασιασμού στις 48 και 72 ώρες (Σχήμα S1A), και η υπερέκφραση του FOXM1 προωθείται πολλαπλασιασμού του όγκου μετά από 72 ώρες σε γυμνά ποντίκια (Σχήμα S1B), όλα από τα οποία ήταν σύμφωνα με τα προηγούμενα αποτελέσματα μας.

(Α, Β) Η ανίχνευση των φακοϊό μεσολάβηση knockdown του FOXM1 σε PC-9 και Η1299 κυττάρων με WB και Q-PCR, αντίστοιχα. (C, D) Ένα αντιπροσωπευτικό αποτέλεσμα των προσδιορισμών μετανάστευσης trans-καλά για τις επιπτώσεις της FOXM1 στο

in vitro

μεταναστευτικών και επεμβατική ικανότητες του PC-9 και Η1299 κύτταρα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD, *

σ

& lt?. 0.05

Η

Αναγκαστική Εκδήλωσης FOXM1 Αυξημένη η

in vitro

και

στο vivo

μεταστατική ικανότητα των NSCLC κύτταρα

Για να αποδειχθεί περαιτέρω το ρόλο NSCLC μετάσταση, είμαστε σταθερά υπερεκφράζεται έκφραση FOXM1 σε κυτταρικές σειρές Η292 (Σχήμα 3Α και Β) PC-9 και. Πρώτον, με τη χρήση των δοκιμασιών Trans-καλά, δείξαμε ότι η υπερέκφραση του FOXM1 θα μπορούσε να αυξήσει σημαντικά τις μεταναστευτικές και επεμβατικές δυνατότητες των κυττάρων NSCLC (Σχήμα 3C και D). Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω ο ρόλος του FOXM1 στη μετάσταση του μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα, έχουμε αναπτύξει ένα μοντέλο ποντικού με ουρά ένεση φλέβα του PC-9 FOXM1 υπερεκφράζουν (PC-9-FOXM1) και ελέγχου κύτταρα (PC-9-Vector) . Πέντε εβδομάδες μετά τον ενοφθαλμισμό των κυττάρων, οι ποντικοί θανατώθηκαν για να ληφθούν οι πνεύμονες (Σχήμα 4Α), και παρακολουθήθηκε με απεικόνιση φθορισμού, τα αποτελέσματα της οποίας έδειξαν ότι τα κύτταρα PC-9-FOXM1 εμφανίζεται πολύ ισχυρότερα σήματα φθορισμού σε πνεύμονες από εκείνη των κυττάρων ελέγχου ( Σχήμα 4Β). Επιπλέον, η ιστολογική μελέτη έδειξε ότι ο αριθμός των μεταστατικών οζιδίων σε πνεύμονες της ομάδας υπερέκφραση FOXM1 ήταν σημαντικά υψηλότερες από αυτές στην ομάδα ελέγχου (Σχήμα 4C και D). Στο σύνολό τους, τα ευρήματα αυτά υποστηρίζουν την υπόθεση ότι FOXM1 παίζει σημαντικό ρόλο στη μετάσταση των όγκων του NSCLC.

(Α, Β) Η ανίχνευση των φακοϊό μεσολάβηση υπερέκφραση FOXM1 σε PC-9 και Η292 κύτταρα με WB και q-PCR, αντίστοιχα. (C, D) Ένα αντιπροσωπευτικό αποτέλεσμα των προσδιορισμών μετανάστευσης trans-καλά για τις επιπτώσεις της FOXM1 στο

in vitro

μεταναστευτικών και επεμβατική ικανότητες του PC-9 και Η292 κύτταρα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD, *

ρ

& lt?. 0.05

Η

(Α, Β) Οπτική επιθεώρηση και ανάλυση απεικόνιση φθορισμού του πνεύμονα μεταστατικών οζιδίων σε δύο ομάδες ( PC-9-διάνυσμα και PC-9-FOXM1) των μοντέλων ποντικού με ένεση στη φλέβα της ουράς των κυττάρων του όγκου, αντίστοιχα. (Γ) Τα αποτελέσματα του

FOXM1

στο

in vivo

μεταστατική ικανότητα των κυττάρων PC-9 σε μοντέλα ξενομοσχεύματος γυμνών ποντικών (n = 6), όπως προσδιορίζεται με την εξέταση των πνευμόνων ποντικού για μικροσκοπική οζίδια. Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα της ιστολογικής εξέτασης των πνευμόνων ποντικού για μεταστατικών οζιδίων (αριστερά). Ο αριθμός των μεταστατικών noudels πνεύμονα σε δύο ομάδες των μοντέλων ποντικού (δεξιά). Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD, *

σ

& lt?. 0.05

Η

FOXM1 Induced τα επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση των NSCLC κύτταρα και δείγματα όγκων ιστών

Παρατηρήσαμε περαιτέρω κύτταρα με υψηλή έκφραση FOXM1, τα οποία βρέθηκαν να έχουν φαινοτυπικές αλλαγές που θυμίζει EMT. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, παρατηρήθηκαν διακριτές μορφολογικές διαφορές ανάμεσα στην κυτταρική γραμμή Η292-FOXM1 και τη γονική Η292-φορέα κυτταρική γραμμή του σε κυτταρική καλλιέργεια. Λαμβάνοντας υπόψη ότι η Η292 κύτταρα είναι πολυγωνικό και μεγαλώνουν σε ομάδες, τα κύτταρα Η292-FOXM1 είναι επιμήκη και ατρακτοειδή, και να αναπτυχθούν σε ένα σχέδιο σκέδασης σε συρροή. Για να διερευνήσουν περαιτέρω τους μηχανισμούς που σχετίζονται με την αυξημένη δυνατότητα μετάστασης, δοκιμάσαμε κάποιες ουσιώδεις παράγοντες που συνδέονται με την EMT, το οποίο προωθεί μετάσταση σε καρκινώματα. Βρήκαμε ότι τα κύτταρα Η292-FOXM1 εκφράζεται χαμηλότερα επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης Ε-καδερίνης και ΖΟ-1, ενώ λαμβάνεται υψηλότερα επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης των δεικτών μεσεγχυματικών, όπως βιμεντίνη και Ν-καδερίνης (Εικόνα 5Β και C). Slug είναι ένας καταστολέας της μεταγραφής, η οποία είναι ισχυρός επαγωγέας της EMT. Έχουμε παρατηρήσει αυξημένη έκφραση σε κύτταρα Slug FOXM1-υπερέκφραση (Σχήμα 5D). Οι παρατηρήσεις μας δείχνουν ότι FOXM1 προκαλεί μετάσταση μέσω EMT

(Α) Εκπρόσωπος εικόνες αντίθεσης φάσης του Η292-φορέα και τα κύτταρα Η292-FOXM1. (Μεγέθυνση: 200 ×). (Β) ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR ανάλυση της σχετικής έκφρασης δεικτών EMT όπως υποδεικνύεται. GADPH χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος φόρτωσης. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± Τ.Α, *

ρ

& lt?. 0.05. (Γ) Η σχετική έκφραση των δεικτών EMT όπως υποδεικνύεται προσδιορίσθηκε με ανοσοστύπωση (αριστερά), καθώς και τα αποτελέσματα της οποίας ήταν περαιτέρω ποσοτικοποιημένη (δεξιά). β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Δ) Η σχετική έκφραση του Slug όπως υποδεικνύεται προσδιορίσθηκε με ανοσοστύπωση (αριστερά), καθώς και τα αποτελέσματα της οποίας ήταν περαιτέρω ποσοτικοποιημένη (δεξιά). β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Για να καταδειχθεί περαιτέρω η σχέση μεταξύ της έκφρασης και EMT δείκτες FOXM1, χρώση ανοσοϊστοχημείας διεξήχθη για Ε-καδερίνη, βιμεντίνη και Slug σε δείγματα όγκων. Σε δείγματα ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα, αυξημένη βιμεντίνη και έκφραση γυμνοσάλιαγκα και μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης βρέθηκαν στις ομάδες με υψηλή έκφραση FOXM1, ενώ μειώθηκε βιμεντίνη και έκφραση Slug και αυξημένη έκφραση Ε-καδερίνης στις ομάδες με χαμηλή έκφραση FOXM1 (Σχήμα 6Α) . Επιπλέον, έχουμε δημιουργήσει υποδόρια μοντέλα στερεού όγκου. Μετά από 4 εβδομάδες από την ένεση του PC-9-FOXM1 και PC-9-φορέα κύτταρα, συμπαγείς όγκους συλλέχθηκαν, ενσωματωμένα σε paraffarin και χρωματίστηκαν για δείκτες EMT. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6Β, σε σύγκριση με τους όγκους που προέρχονται από κύτταρα PC-9-φορέα, όγκους που προέρχονται από τα κύτταρα PC-9-FOXM1 αποκάλυψε αυξημένη έκφραση του βιμεντίνης και Slug και μειωμένη έκφραση της Ε-καδερίνης (Εικόνα 6Β). Οι παρατηρήσεις μας σε μορφολογικές και μοριακές αλλαγές δείχνουν ότι FOXM1 υπερέκφραση προκαλεί EMT-φαινότυπο μέσω up-ρύθμιση του Slug στα κύτταρα NSCLC.

(Α) Η σχετική έκφραση της E-cadherin, βιμεντίνη και γυμνοσάλιαγκας όπως αναφέρεται ήταν προσδιορίστηκε με ανοσοϊστοχημική χρώση σε δείγματα ανθρώπινου όγκου με υψηλή (πάνω) και χαμηλή (κάτω) έκφραση FOXM1. (Β) Η σχετική έκφραση της Ε-καδερίνης, βιμεντίνη και Slug όπως υποδεικνύεται προσδιορίστηκε με ανοσοϊστοχημική χρώση σε γυμνούς ποντικούς όγκων που προέρχονται από κύτταρα PC-9-φορέα (παραπάνω) και τα κύτταρα PC-9-FOXM1 (παρακάτω).

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήθηκαν τα επίπεδα έκφρασης των FOXM1 χρήση κηλίδωσης σε μία ομάδα από 175 ασθενείς Κινέζοι NSCLC και για πρώτη φορά αποδεικνύεται ότι η αυξημένη έκφραση του FOXM1 συσχετίστηκε με αρκετές κλινικοπαθολογοανατομικές παραγόντων και προέβλεψε μια δυσμενή πρόγνωση σε ασθενείς με ΜΜΚΠ, συμπεριλαμβανομένων των SCC και εναλλασσόμενου ρεύματος. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η απορρύθμιση της έκφρασης FOXM1 συσχετίστηκε σημαντικά με υψηλότερο μεταστατικό ικανότητες μέσω της επαγωγής EMT.

Λαμβάνοντας υπόψη το ρόλο της FOXM1 στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων, μερικές μελέτες έχουν αξιολογήσει τη δυνατότητα έκφρασης FOXM1 ως βιοδείκτη να προβλέψει την κλινική έκβαση των ασθενών με NSCLC. Yang et al βρήκαν ότι FOXM1 σχετίζονται με κλινικούς παράγοντες και παίζει κρίσιμο ρόλο στην πρόγνωση σε 69 ασθενείς με SCC, μη συμπεριλαμβανομένων των AC. και Liu et al αποδείξει ότι FOXM1 θα μπορούσε να αποτελεί ανεξάρτητο παράγοντα για την πρόγνωση σε 68 ασθενείς με ΜΜΚΠ, συμπεριλαμβανομένων 37 AC και 19 SCC, αλλά η σχέση μεταξύ της έκφρασης FOXM1 και άλλα clinicoparameters δοκιμάστηκε χωρίς σχέση. Αυτά τα παράδοξα αποτελέσματα μπορεί να οφείλεται σε διάφορους πληθυσμό της μελέτης τους, το μικρό μέγεθος του δείγματος και ποικίλη ποιότητα των κλινικών δεδομένων. Στη μελέτη μας, βρήκαμε ότι η έκφραση FOXM1 σε δείγμα όγκου συσχετίζεται θετικά με διάφορες κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους, όπως το στάδιο TNM, το στάδιο του όγκου και τη μετάσταση στους λεμφαδένες. Επιπλέον, υψηλότερη έκφραση FOXM1 συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση των ασθενών με NSCLC. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι FOXM1 σχετιζόταν με NSCLC εξέλιξη και πρόγνωση. Ωστόσο, υποκείμενοι μηχανισμοί θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω.

Μετάσταση περιλαμβάνει μια σειρά πολύπλοκων βήματα [22], συμπεριλαμβανομένης μειωμένης πρόσφυσης, αυξημένη κινητικότητα, η προσκόλληση των κυττάρων, τη διάλυση μήτρας, και τη μετανάστευση [23]. Κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου, τα καρκινικά κύτταρα υφίστανται δραματικές αλλαγές στην οργάνωση του κυτταροσκελετού να υιοθετήσουν επεμβατική φαινότυπο και τελικά μεταστάσεις σε άλλα όργανα. EMT είναι μια βασική διαδικασία σε μετάσταση όγκου [24], [25], [26], η οποία σχετίζεται με μειωμένη κυτταρική επιφάνεια έκφραση της Ε-καδερίνης, αυξημένη Ν-cadherin [27], [28] και αλλαγμένη έκφραση διαφόρων cyto α-σκελετική πρωτεΐνες, παίζουν ένα σημαντικό ρόλο προς την μεταναστευτική δραστηριότητα των κυττάρων του όγκου [29].

τα στοιχεία μας αποκάλυψαν ότι η αναστολή της FOXM1 θα μπορούσε να καταστείλει την μεταστατική ικανότητα, ενώ επάνω ρυθμισμένη επίπεδο έκφρασης FOXM1 στον καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα ενίσχυσε τις μεταναστευτικές και επεμβατικές ιδιότητες in vitro και in vivo. Επίπεδα της Ε-καδερίνης, ΖΟ-1 ήταν αυξημένα και βιμεντίνης, Ν-cadherin μειώθηκαν με υψηλότερη έκφραση FOXM1. Επίσης, FOXM1 ρυθμισμένη έκφραση Slug, η οποία είναι ο επαγωγέας του EMT. Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι FOXM1 συσχετίστηκε με πρόγνωση προωθώντας μετάσταση των όγκων κυττάρων μέσω επαγωγής EMT. Hyun JP et al. έδειξαν επίσης ότι το HCC, FOXM1 θα μπορούσαν να ενεργοποιήσουν το μονοπάτι Akt-Snail1 και τη συμμετοχή σε EMT μετάβαση [17]. Επιπλέον, υπάρχουν κάποιες άλλες μελέτες έδειξαν ότι MMPs έχουν αναδειχθεί ως κεντρικός παράγοντες τόσο σε τοπικό όσο και ανάπτυξη μακρινή μετάσταση σε όγκους [30], [31], και θα μπορούσε επίσης να FOXM1 ρυθμίζουν MMPs για την προώθηση OSCLC μετάσταση. Στο σύνολό τους, FOXM1 μπορεί να παίζει αρκετές σημαντικές λειτουργίες σε κύτταρα όγκου. πλήρη ρόλο της στην οδό αφορούν μετάσταση αξίζει περαιτέρω εξέταση.

Εν ολίγοις, τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι FOXM1 πάνω ρύθμιση μπορεί να έχουν επίδραση στην NSCLC πρόγνωση και εξέλιξη. Δείξαμε ότι FOXM1 υπερέκφραση σχετιζόταν με μειωμένη συνολική επιβίωση και την ταχεία εξέλιξη του όγκου σε ασθενείς με NSCLC. Επιπλέον, η υπερέκφραση του FOXM1 θα μπορούσε να αυξήσει τις μεταναστευτικές και επεμβατική ικανότητες των κυττάρων NSCLC. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η έκφραση FOXM1 είναι κρίσιμη για την διεισδυτικότητα των κακοήθων κυττάρων NSCLC, και αυτό το αποτέλεσμα ήταν τουλάχιστον, εν μέρει μέσω epithelial- μετάβαση mechenmychal. Ως εκ τούτου, η παρατήρηση μας κάνει FOXM1 έναν ελκυστικό στόχο της θεραπείας του καρκίνου του πνεύμονα, και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης για την πρόβλεψη της πρόγνωσης.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Ανθρώπινο συμμετέχοντες που συμμετέχουν σε αυτή την έρευνα, υπό την προϋπόθεση γραπτή συγκατάθεση τους, σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Ιατρική Ηθική και Ανθρωπίνων Κλινική Επιτροπής Trial σε Zhongshan Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Fudan έχει εγκρίνει τη μελέτη αυτή, καθώς και τη διαδικασία συναίνεσης (Αριθμός Άδειας: 2011 έως 221). Όλα τα πρωτόκολλα των ζώων εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας για τα πειράματα σε ζώα του Πανεπιστημίου Fudan επιτροπής Animal Care, Σαγκάη, Κίνα (Αριθμός Άδειας: SYXK: 2.008 – 0.039). Όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Ασθενείς και δείγματα όγκων

Ένα σύνολο 232 ιστολογικά επιβεβαιωμένους ασθενείς με NSCLC είχαν διαδοχικά προσληφθεί από τον Ιανουάριο του 2005 και τον Φεβρουάριο του 2008 για τη θεραπεία του μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα καρκίνο (NSCLC) σε Zhongshan Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Fudan. Τέσσερις ασθενείς αποκλείστηκαν εάν λάβει προηγουμένως ακτινοθεραπεία ή /και χημειοθεραπεία. Ακτινογραφία θώρακος και αξονική τομογραφία διεξήχθησαν για όλους τους ασθενείς πριν από τη λειτουργία. Υπάρχουν 142 ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπευτική χειρουργική εκτομή. Χημειοθεραπεία με ένα καθεστώς σισπλατίνη βασίζεται εφαρμόστηκε για τους περισσότερους ασθενείς με υψηλό στάδιο (συμπεριλαμβανομένων IIIB και IV) ή με υψηλό κίνδυνο υποτροπής και μετάσταση σύμφωνα με την κατευθυντήρια γραμμή της θεραπείας για NSCLC στο χειρουργικό χρόνο. Για τη μελέτη αυτή, 53 ασθενείς αποκλείστηκαν από την ανάλυση, συμπεριλαμβανομένων 38 ασθενών με κακή ποιότητα ή /και την ποσότητα των δειγμάτων ιστού, 11 ασθενείς με ατελή κλινικά δεδομένα και 4 ασθενείς πέθαναν από άλλα αίτια αρχικά αποκλείστηκαν από την ανάλυση μας. Τέλος, ένα σύνολο 175 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη (Πίνακας S1). Ένα σύνολο 122 ανδρών και 53 γυναικών συμπεριλήφθηκαν, συμπεριλαμβανομένων 97 καπνιστές και 78 μη καπνιστές, με ηλικίες που κυμαίνονται από 30 έως 77 ετών εκ των οποίων 89 ήταν λιγότερο από 55 χρονών. Υπήρχαν 76 σταδίου Ι, 23 σταδίου ΙΙ, 51 σταδίου ΙΙΙ και 25 σταδίου IV ασθένειες, συμπεριλαμβανομένων των 91 ασθενών χωρίς κομβικά μετάσταση και 84patients με μετάσταση στους λεμφαδένες. Υπήρχαν 36 ασθενείς με όγκους του σταδίου 1, 75 με το στάδιο 2, 25 με το στάδιο 3 και 39 με το στάδιο 4 και 118 ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα (AC), ενώ το 57 με καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων (SCC). Από την άποψη της διαφοροποίησης, υπήρχαν 93 ασθενείς με καλά και μέτρια διαφοροποίηση και 82 με ελάχιστα διαφοροποίηση. Συνολικά 74 ασθενείς ήταν ζωντανοί στο τέλος της παρακολούθησης, 101 ασθενείς πέθαναν από καρκίνο του πνεύμονα, και οι ασθενείς πέθαναν από άλλες αιτίες ή έχασαν την παρακολούθηση αποκλείστηκαν από τη μελέτη.

κλινικοπαθολογοανατομικές πληροφορίες για κάθε ασθενής, συμπεριλαμβανομένου του φύλου, της ηλικίας, το κάπνισμα, το στάδιο του όγκου, κομβική θέση, το στάδιο TNM, ιστολογικές βαθμό και τη συνολική επιβίωση, ελήφθη αναδρομικά από κλινικά αρχεία και παθολογικές εκθέσεις. χρόνος επιβίωσης ορίστηκε ως η διάρκεια από την ημερομηνία της διάγνωσης μέχρι την ημερομηνία του θανάτου ή το τέλος της παρακολούθησης. Η κατάσταση TNM προσδιορίστηκε σύμφωνα με την 7η σύστημα έκδοσης στάσης για NSCLC [32].

Immunohischemistry Δοκιμασία

Ένα αντίσωμα έναντι FOXM1 (Sigma Aldrich Inc., ΜΟ, USA) και ένα πρότυπο ανοσοϊστοχημικές τεχνική χρησιμοποιήθηκαν για ανίχνευση έκφρασης FOXM1 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19], [20]. FOXM1 παρατηρήθηκε σε κυτταροπλασματικό ή κυτταροπλασματική και πυρηνική των κυττάρων. Χρώση αξιολογήθηκε σε πέντε μεγάλης ισχύος πεδίων στα 200 × μεγέθυνση. Το σκορ χρώση κατηγοριοποιούνται σε τέσσερις ομάδες ως αρνητικός = 0, αδύναμη = 1, μέτρια = 2 και έντονη = 3 [20]. Το ποσοστό εμβαδού βάφτηκαν θετικά κατηγοριοποιήθηκε σε τέσσερις ομάδες: λιγότερο από 25% καρκινικά κύτταρα θετικά = 0? 25% έως 50% του όγκου των κυττάρων θετικών = 1? 50% έως 75% του όγκου των κυττάρων θετικών = 2? πάνω από το 75% των κυττάρων του όγκου θετικά = 3. βαθμολογίας Σήμανση προσδιορίστηκε πολλαπλασιάζοντας βαθμολογίας ένταση από το ποσοστό της έκτασης θετική χρώση, η οποία βαθμολογίες ως 0, 1, 2, 3, 4, 6 και χρώση 9.Η σκορ έγινε κατηγοριοποιούνται σε δύο ομάδες ως αδύναμο /αρνητική χρώση (βαθμολογία & lt? 4) και έντονη χρώση (βαθμολογία ≥4). Το όριο αυτό καθορίζεται από οπτικά καθορισμό ενός σαφούς θετικής λεκέ που υποστηρίζονται από τα ιστογράμματα της σειράς των βαθμολογιών [20], [33], [34]. Η υψηλότερη βαθμολογία επισήμανση μεταξύ των τριών τμημάτων ιστού εισήχθη για στατιστικές αναλύσεις. Οι παθολόγους που πραγματοποίησε την ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση της FOXM1 τυφλώθηκαν στους ασθενείς »ιστοπαθολογικές και τα δεδομένα παρακολούθησης.

επιδημιολογικά και κλινικά δεδομένα Συλλογή

ασθενών δημογραφικές παραμέτρους και το κάπνισμα ιστορικό λήφθηκαν μέσω το -person συνέντευξη κατά το χρόνο της αρχικής επίσκεψης, παρακολούθηση στις κλινικές ή ιατρική εξέταση γράφημα. Ένα άτομο που κάπνιζαν περισσότερα από 100 τσιγάρα στην ιστορία ορίστηκε ως ένα ποτέ καπνιστής, διαφορετικά ως ουδέποτε καπνιστής [35]. Παρακολούθηση πληροφορίες σχετικά με τον θάνατο του ασθενούς και την επιβίωση ενημερώθηκε σε διαστήματα 3 μηνών μέσω επιτόπου συνέντευξη, άμεση κλήση, ή ιατρική εξέταση γράφημα. Η τελευταία παρακολούθηση σε αυτή τη μελέτη πραγματοποιήθηκε τον Μάιο του 2012.

Γραμμές κύτταρο, κύτταρο Πολιτισμού και χημειοθεραπευτικά αντιδραστήρια

Το ανθρώπινο πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα κυτταρικής σειράς PC-9 και ανθρώπινο πνεύμονα καρκίνου κυτταρική γραμμή NCI-Η292, ΝΟΙ-Η1299 ελήφθησαν όλα από την Cellular Ινστιτούτο κινεζική Ακαδημία Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα) [36]. Αυτά τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C υπό ατμόσφαιρα CO2 5% σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (DMEM) συμπληρωμένο με (FBS, Hyclone Inc., UT, USA), 100 U /ml πενικιλλίνη 10% εμβρυϊκό βόειο ορό, και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη. Τα κύτταρα τακτικά πιστοποιηθεί ως απαλλαγμένα από μόλυνση Mycoplasma.

shRNA Πειράματα

Ο φορέας shRNA lenti-ιός κατασκευάστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [37]. Εν συντομία, FOXM1 και αρνητικός έλεγχος shRNA υποκλωνοποιήθηκαν στις θέσεις ΜΙυΙ /ΟΙαΙ ενός φορέα pLVTHM (Addgene) με τα ακόλουθα ολιγονουκλεοτίδια αντίστοιχα: 5′-CGCGTCGGCCGGAACATGACCATC AATTCAAGAGATTGATGGTCATGTTCCGGCTTTTTTCCAT-3 ‘και 5′-CGATGGAAAAAAGCCGGAACATGACCATCAATCTCTTGAATTGATGGTCATGTTCCGGCCGA-3’for FOXM1, και 5’ -CGCGTCGGT AGCGACTAAACACATCAATTCAAGAGATTGATGTGTTTAGTCGCTACTTTTTTCCAT-3 ‘και 5’-CGATGGAAAAAAGTAGCGACTAAAC ACATCAATCTCTTGAATTGATGTGTTTAGTCGCTACCGA-3’for ο αρνητικός μάρτυρας. γενεά Lenti-ιού και μόλυνση του Η1299 και PC-9 κύτταρα διεξήχθησαν όπως περιγράφεται παραπάνω.

Μεταγωγή Κυττάρων Όγκου

Το πλασμίδιο (EX-Z5438-LV135) και Lenti-Pac ™ HIV Expression Κιτ συσκευασία αγοράστηκαν από Gene ποιία Inc. (Gene ποιία Inc., Guangzhou, Κίνα) διαμολύνσεις του Η292 και PC-9 κύτταρα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες που παρέχονται από τους κατασκευαστές. Σταθερά επιμολυσμένα επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω με RT-PCR και ανοσοαποτύπωση με βάση την έκφραση FOXM1 τους.

Μετανάστευση Tumor Cell and Invasion Δοκιμασίες

Αναλύσεις για τη μέτρηση της μετανάστευσης των καρκινικών κυττάρων εκτελέστηκαν σε έναν τροποποιημένο θάλαμο Boyden (Transwell, Corning Costar, ΜΑ, USA) που περιέχει ένα φίλτρο μεμβράνης πολυανθρακικού επικαλυμμένες με ζελατίνη (μέγεθος 8 μm πόρου). Bio-Coat Matrigel (BD Biosciences, Bedford, ΜΑ, USA), το οποίο ανασυνθέτει βασική μεμβράνη, χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση των κυττάρων εισβολής. Ο βαθμός της μετανάστευσης των καρκινικών κυττάρων και εισβολή αξιολογήθηκε σύμφωνα με τα προηγούμενα πρωτόκολλα [38]. Μη μετεγκατάσταση κύτταρα απομακρύνθηκαν από την άνω πλευρά της μεμβράνης με τρίψιμο. Η μέτρηση κυττάρων επιτεύχθηκε με κυανή χρώση Coomassie και τα κύτταρα κατέστησαν ορατά κάτω από μικροσκόπιο (Leica Inc., Solms, Γερμανία) στη συνέχεια.

Πειράματα σε ζώα

τέσσερις έως πέντε εβδομάδων αρσενικούς BALB /CA γυμνά ποντίκια (που αγοράζονται από τη Σαγκάη Ινστιτούτο υλικών Ιατρικής, κινεζική Ακαδημία Επιστημών, Σαγκάη, Κίνα) διατηρήθηκαν κάτω από ειδικές άνευ παθογόνου συνθήκες (SPF). Η μέθοδος που χρησιμοποιήθηκε είναι ίδια με εκείνη που περιγράφηκε προηγουμένως για την παραγωγή μοντέλο καρκίνου του μαστού [39]. PC-9-FOXM1 κύτταρα (2 χ 10

6 ανά ποντικό) που εκφράζουν σταθερά FOXM1 ή φορέα ενέθηκαν στην φλέβα ουράς γυμνών ποντικών (n = 6). Πέντε εβδομάδες αργότερα, οι ποντικοί θανατώθηκαν και οι πνεύμονες αφαιρέθηκαν. Μετά από αυτό, αυτά τα πνευμόνια υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για ιστολογική εξέταση και να παρακολουθούνται για πιθανές πνευμονικών μεταστάσεων όγκου με απεικόνιση φθορισμού [40]. Μεταστατικές βλάβες εντοπίστηκαν από σήματα φθορισμού (Night Owl LB 981

In Vivo

Imaging System, Berthold, Γερμανία) και αναλύονται από το λογισμικό WinLight32. Για ιστολογική ανάλυση, οι πνεύμονες συλλέχθηκαν κατά τη νεκροψία και σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη. Τα σταθερά δείγματα στη συνέχεια εγκλείστηκαν σε παραφίνη, και τρεις μη διαδοχικές σειριακά τμήματα ελήφθησαν ανά ζώο. Οι τομές χρωματίστηκαν με Η &? Ε και αναλύθηκαν για την παρουσία της μετάστασης

Στατιστική Ανάλυση

Διάφοροι παράγοντες κλινικοπαθολογοανατομικές αξιολογήθηκαν.. ακριβής δοκιμασία του Fisher χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η συσχέτιση μεταξύ των κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητών και την έκφραση του FOXM1. Ελήφθησαν Οι κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητές και η έκφραση του FOXM1 υπόψη για την ανάλυση της επιβίωσης με βάση τη μέθοδο Kaplan-Meier? Πολυπαραγοντική ανάλυση διεξήχθη με το μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox παλινδρόμησης για να εξετάσει την επίδραση ανεξάρτητο προγνωστικό του FOXM1 στην επιβίωση ρυθμίζοντας για παράγοντες σύγχυσης. Μια τιμή Ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική σε όλες τις αναλύσεις. SPSS 17.0 χρησιμοποιήθηκε για να κάνει τις στατιστικές αναλύσεις σε αυτό το έγγραφο.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Επιδράσεις αλλοιωμένη έκφραση FOXM1 στο ρυθμό πολλαπλασιασμού

in vitro

και

in vivo

. (Α) ρυθμό πολλαπλασιασμού των FOXM1 της SPC-Α-1 sh-FOXM1 (αριστερά) και Η1299 sh-FOXM1 (δεξιά) κύτταρα. έκφραση FOXM1 για πρώτη φορά σταθερά νοκ-κάτω από μόλυνση Lenti-ιού σε SPC-Α-1 και Η1299 κύτταρα. ποσοστά πολλαπλασιασμό των κυττάρων στις ομάδες επιμολυσμένα με Τα siRNAs κατά FOXM1 (sh-FOXM1) (κόκκινη γραμμή) μειώθηκε σημαντικά, σε σύγκριση με το shRNA στόχευση αρνητικού ελέγχου (sh-NC) (μπλε γραμμή). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD. ρυθμό πολλαπλασιασμού (Β) των όγκων που προέρχονται από PC-9-FoxM1cells in vivo. PC-9-φορέα και τα κύτταρα PC-9-FOXM1 εγχύθηκαν υποδορίως σε γυμνούς ποντικούς. Η διάμετρος του όγκου μετρήθηκε στα δεικνυόμενα χρονικά σημεία. ρυθμό πολλαπλασιασμού των όγκων που προέρχονται από PC-9-FOXM1 κύτταρα (μπλε γραμμή) αυξήθηκε σημαντικά, σε σύγκριση με εκείνη από κύτταρα PC-9-φορέα (κόκκινη γραμμή). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD

doi:. 10.1371 /journal.pone.0059412.s001

(JPG)

Πίνακα S1. .

Χαρακτηριστικά των ασθενών με μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα

doi: 10.1371 /journal.pone.0059412.s002

(DOCX)

Πίνακας S2.

κλινική εικόνα και τη συσχέτιση μεταξύ των κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και την έκφραση της FOXM1

doi:. 10.1371 /journal.pone.0059412.s003

(DOCX)

Ευχαριστίες

ευχαριστήσω τον Δρ Qun Wang (Τμήμα thoracology, Zhongshan Νοσοκομείο) για να μας βοηθήσει με την παρακολούθηση των ασθενών και ο Δρ Deming Εκείνος (Τμήμα παθολογίας, Zhongshan Νοσοκομείο) για να βοηθήσει με τη συλλογή των δειγμάτων των μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα.