Αφηρημένο

Μια σημαντική πρόκληση για τους ογκολόγους και φαρμακολόγοι είναι η ανάπτυξη πιο ισχυρός και λιγότερο τοξικά φάρμακα που θα μειώσει την ανάπτυξη του όγκου και να βελτιώσει την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα. Σαλινομυκίνη είναι ένας πολυαιθέρας αντιβιοτικό που χρησιμοποιείται για τη θανάτωση κατά Gram θετικών βακτηριδίων, συμπεριλαμβανομένων μυκοβακτηρίδια, πρωτόζωα όπως Plasmodium falciparum, και τα παράσιτα υπεύθυνα για την κοκκιδίωση ασθένειας των πουλερικών. Αυτό το παλιό μέσο αποτελεί σήμερα ένα σοβαρό αντικαρκινικό υποψήφιο φάρμακο που αναστέλλει επιλεκτικά την ανάπτυξη των καρκινικών βλαστικών κυττάρων. Διερευνήθηκε η επίδραση της σαλινομυκίνη στην επιβίωση, την ανάπτυξη αποικιών, τη μετανάστευση και την εισβολή των διαφοροποιημένων ανθρώπινου μη μικροκυτταρικού γραμμές καρκίνου του πνεύμονα LNM35 και Α549. Σαλινομυκίνη προκαλείται συγκέντρωσης- και χρονο-εξαρτώμενη μείωση στην βιωσιμότητα του LNM35 και κυττάρων Α549 μέσω μιας κασπάσης 3/7-σχετίζεται μονοπάτι κυτταρικού θανάτου. Ομοίως, σαλινομυκίνη (2.5-5 μΜ για 7 ημέρες) μείωσε σημαντικά την ανάπτυξη του LNM35 και αποικιών Α549 σε μαλακό άγαρ. Η μετάσταση είναι η κύρια αιτία θανάτου που σχετίζονται με τον καρκίνο του πνεύμονα. Σε αυτό το πλαίσιο, η σαλινομυκίνη προκάλεσε τον χρόνο και εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση αναστολή μετανάστευσης κυττάρων και εισβολής. Δείξαμε επίσης για πρώτη φορά ότι η σαλινομυκίνη προκάλεσε αξιοσημείωτη αύξηση στην έκφραση της προ-αποπτωτική πρωτεΐνη NAG-1 οδηγεί στην αναστολή της εισβολής καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα, αλλά όχι κυτταρική επιβίωση. Τα ευρήματα αυτά προσδιορίζουν σαλινομυκίνη ως μια πολλά υποσχόμενη νέα θεραπευτική παράγοντα για τον καρκίνο του πνεύμονα

Παράθεση:. Αραφάτ K, Iratni R, Takahashi Τ, Parekh K, Al Dhaheri Υ, Adrian ΤΕ, et al. (2013) ανασταλτικά αποτελέσματα του σαλινομυκίνη στις κυττάρων επιβίωσης, Colony Ανάπτυξης, Μετανάστευσης και εισβολή των Ανθρωπίνων μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα Α549 και LNM35: Συμμετοχή του ΝΑΟ-1. PLoS ONE 8 (6): e66931. doi: 10.1371 /journal.pone.0066931

Επιμέλεια: Ramon Andrade de Mello, Πανεπιστήμιο του Πόρτο, Πορτογαλία

Ελήφθη: 16 του Δεκ του 2012? Αποδεκτές: 11 του Μάη 2013? Δημοσιεύθηκε: 21, Ιούνη 2013

Copyright: © 2013 Αραφάτ et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τον Terry Fox ταμείο για την Έρευνα του Καρκίνου (ΑΕ και TA) και εν μέρει από το ταμείο UAEU-Εθνικό Ίδρυμα Ερευνών στην ΑΕ. Οι οργανισμοί χρηματοδότησης είχαν κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου με ένα από τα υψηλότερα ποσοστά θνησιμότητας στον κόσμο. Οι χημειοθεραπευτικοί παράγοντες που χρησιμοποιούνται σήμερα για τον καρκίνο του πνεύμονα δεν είναι ικανοποιητικά λόγω σχετίζονται έλλειψης αποτελεσματικότητας, ανθεκτικότητας στα φάρμακα, και συν-πλευρική τοξικότητα. Στοχευμένες θεραπείες για επιλεγμένες υποομάδες ασθενών αποτελούν αξιοσημείωτη πρόοδο στη θεραπεία του καρκίνου του πνεύμονα. Ωστόσο, περισσότερο από το 50% των καρκίνων του πνεύμονα δεν έχουν κανένα συγκεκριμένο γενετικό προφίλ και επομένως δεν καλοί υποψήφιοι για στοχευμένη θεραπεία. Παρά τις εξελίξεις αυτές, οι τρέχουσες θεραπείες του καρκίνου του πνεύμονα μπορεί να παρατείνει τη ζωή από μήνες, αλλά δεν θεραπεύουν την ασθένεια [1]? [2]? [3].

σαλινομυκίνη είναι ένα αντιβιοτικό πολυαιθέρα που χρησιμοποιείται για να σκοτώσει gram-θετικών βακτηριδίων, συμπεριλαμβανομένων μυκοβακτηρίδια, protazoans όπως Plasmodium falciparum, και τα παράσιτα υπεύθυνα για την κοκκιδίωση ασθένειας των πουλερικών. Είναι, επίσης, συνήθως τρέφονται τα ζώα μηρυκαστικών για τη βελτίωση της απορρόφησης των θρεπτικών συστατικών και την αποδοτικότητα των ζωοτροφών [4]? [5]. Αυτό το παλιό παράγοντα είναι τώρα ένα σοβαρό αντι-καρκίνου του υποψήφιου φαρμάκου [6]? [7]. Πρώτον, έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν επιλεκτικά σαλινομυκίνη βλαστικά κύτταρα όγκου μαστού, γεγονός που υποδηλώνει ότι μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ένα αντικαρκινικό φάρμακο [8]. Σαλινομυκίνη αναγνωρίστηκε επίσης ως ένας επιλεκτικός αναστολέας της λευχαιμίας βλαστικών κυττάρων, οστεοσάρκωμα βλαστικά κύτταρα, καθώς και τον καρκίνο του παγκρέατος στέλεχος [9] κύτταρα? [10]? [11].

Έχει αναφερθεί ότι μία ποικιλία από θεραπείες καρκίνου, όπως γάμμα ακτινοβολία, κυτταροτοξικά φάρμακα, NSAIDs, σημαντικά αυξηθεί το επίπεδο έκφρασης του NSAID που ενεργοποιείται γονίδιο NAG-1 [12]. NAG-1, επίσης γνωστή ως ανασταλτική κυτοκίνης μακροφάγων (MIC-1), και ανάπτυξη και διαφοροποίηση παράγοντας-15 (GDF-15), είναι ένα μέλος του αυξητικού παράγοντα μετασχηματισμού βήτα (ΤΟΡ-β) υπερ-οικογένεια, που μπορούν να μεσολαβήσουν ο απόπτωση που προκαλείται από μη-στεροειδή αντι-φλεγμονώδη φάρμακα σε κύτταρα που δεν εκφράζουν την κυκλοοξυγενάση [13]? [14]. Σε γενικές γραμμές, NAG-1 δρα ως καταστολέας όγκου πρωτεΐνη με αναστολή της ανάπτυξης του όγκου και επαγωγή απόπτωσης στα πρώτα στάδια του καρκίνου και αρκετές μελέτες δείχνουν επαγωγή NAG1 να συνδέεται με διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης [15].

Η τρέχουσα μελέτη διερευνήσει τον αντίκτυπο της σαλινομυκίνη στην επιβίωση, την ανάπτυξη των αποικιών, τη μετανάστευση και την εισβολή των διαφοροποιημένων ανθρώπινο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα καρκινικά κύτταρα LNM35 και Α549 και την πιθανή επίπτωση της NAG-1 σε αυτά τα αποτελέσματα.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταρική καλλιέργεια και αντιδραστήρια

Ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα LNM35 [16] και Α549 διατηρήθηκαν σε RPMI 1640 (Invitrogen, Paisley, UK). Όλα τα μέσα συμπληρώθηκαν με αντιβιοτικά (πενικιλλίνη 50 U /ml? Στρεπτομυκίνη 50 μg /ml) (Invitrogen, Cergy Pontoise? Γαλλία) και με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS, Biowest, NOUAILLE? Γαλλία). Σαλινομυκίνη αγοράστηκε από την Sigma-Aldrich (Sigma-Aldrich, Saint-Quentin Fallavier? France).

Κυτταρική βιωσιμότητα

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πυκνότητα 5000 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκες 96 φρεατίων . Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία για άλλες 24 και 48 ώρες με διαφορετικές συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη (0,1-50 μΜ) εις τριπλούν. Οι καλλιέργειες ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,1% DMSO (το όχημα του φαρμάκου). Η επίδραση της σαλινομυκίνη στη βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την δοκιμασία κυττάρων Βιωσιμότητα CellTiter-Glo Luminescent (Promega Corporation, Madison? US), με βάση την ποσοτικοποίηση του ΑΤΡ, το οποίο σηματοδοτεί την παρουσία της μεταβολικά δραστικά κύτταρα. Το σήμα φωταύγειας μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα GLOMAX φωτόμετρο. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως αναλογική βιωσιμότητα (%) με σύγκριση των κυττάρων σαλινομυκίνη-αγωγή με τα DMSO-επεξεργασμένα κύτταρα, η βιωσιμότητα των οποίων υποτίθεται ότι είναι 100%.

Caspase 3/7 δραστηριότητα

τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πυκνότητα 5000 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκα 96 φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με σαλινομυκίνη (10 και 50 μΜ) για 24 ώρες, εις τριπλούν. Τα κύτταρα ελέγχου εκτέθηκαν σε DMSO σε μία συγκέντρωση ισοδύναμη με εκείνη των κυττάρων σαλινομυκίνη φάρμακο (0,1% DMSO). Caspase-3/7 Δράση μετρήθηκε χρησιμοποιώντας φωτοβόλο κασπάση-Glo κιτ 3/7 δοκιμασίας σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Promega Corporation, Madison, USA). αντιδραστήριο Caspase προστέθηκε και η πλάκα αναμίχθηκε και επωάστηκε για 2,5 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Η φωταύγεια μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα GLOMAX λουμινόμετρο.

Soft-άγαρ ανάπτυξη αποικίας δοκιμασία

Ένα στρώμα άγαρ που περιέχει 1 ml 2,4% χαμηλού σημείου τήξεως Noble άγαρ διαλυμένο σε απεσταγμένο νερό χύθηκε σε φρεάτια ενός πιάτου κυτταρικής καλλιέργειας 6 φρεατίων και αφήνεται να έρθει σε 4 ° C για 5 λεπτά και στη συνέχεια επωάστηκαν στους 37 ° C για 30 λεπτά. Ένα δεύτερο στρώμα (2.9 ml) που περιέχει 0,3% του χαμηλού σημείου τήξεως Noble άγαρ διαλύεται σε κύτταρα ανάπτυξης μέσα που περιέχουν (5 × 10

3 κύτταρα /ml) τοποθετήθηκε πάνω από το πρώτο στρώμα και αφέθηκε να πήξει στους 4 ° C για από 5 λεπτά τα μεταφέρει στο υγροποιημένο επωαστήρα στους 37 ° C για 30 λεπτά έως 1 ώρα. Μέσο ανάπτυξης (2 ml) προστέθηκε στο πάνω μέρος του δεύτερου στρώματος και τα κύτταρα επωάστηκαν σε υγροποιημένο επωαστή στους 37 ° C για 14 ημέρες και στη συνέχεια υποβάλλονται σε θεραπεία για άλλες 7 ημέρες με σαλινομυκίνη (2.5 και 5 μΜ). Τα κύτταρα ελέγχου εκτέθηκαν σε 0.1% DMSO. Το μέσο αλλάχθηκε δύο φορές την εβδομάδα. Στο τέλος του πειράματος, οι αποικίες χρωματίστηκαν για 1 ώρα με 2% χρωστική Giemsa, και επωάστηκαν με PBS όλη τη νύκτα για να απομακρυνθεί η περίσσεια λεκέ Giemsa. Οι αποικίες φωτογραφήθηκαν και σκόραρε. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως αναλογική αποικίες (%) με σύγκριση των αποικιών σαλινομυκίνη αγωγή με τις αποικίες DMSO-αγωγή, οι αποικίες των οποίων υποτίθεται ότι είναι 100%.

πληγών επούλωσης κινητικότητα δοκιμασία

LNM35 και Α549 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε δίσκους καλλιέργειας ιστού των έξι φρεατίων μέχρι συρροή. Οι καλλιέργειες επωάστηκαν για 10 λεπτά με ρυθμιστικό Moscona. Μια ξύστε έγινε μέσω της μονοστιβάδας συρροής με ένα πλαστικό ρύγχος πιπέτας διαμέτρου 1 mm. Στη συνέχεια, τα τρυβλία πλύθηκαν δύο φορές και επωάζονται στους 37 ° C σε φρέσκο ​​RPMI που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου σε παρουσία ή απουσία των μη τοξικές συγκεντρώσεις του σαλινομυκίνη (0,1-0,5 μΜ) για Α549 και σαλινομυκίνη (0,05-0,1 μΜ ) για κύτταρα LNM35. Τα κύτταρα ελέγχου εκτέθηκαν σε 0.1% DMSO. Στο κάτω πλευρά του κάθε πιάτου, δύο αυθαίρετες θέσεις σημαδεύτηκαν όπου το πλάτος της πληγής μετρήθηκε με ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο (στόχος χ 4). Κινητικότητα εκφράστηκε ως η μέση τιμή ± SEM της διαφοράς μεταξύ των μετρήσεων σε 0, 6, 24 και 30 ώρες μετά την πληγή.

Matrigel δοκιμασία εισβολής

Η διεισδυτικότητα των καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα LNM35 κατεργασία με σαλινομυκίνη (0,05-0,1 μΜ) και τα κύτταρα Α549 σε επεξεργασία με σαλινομυκίνη (0,1-0,5 μΜ) εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας BD εισβολής σε Matrigel Chambers (8-μm μέγεθος πόρων? BD Biosciences, Le Pont de Claix, Γαλλία) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εν συντομία, τα κύτταρα (1 χ 10

5 κύτταρα σε 0.5 ml μέσου και η ενδεικνυόμενη συγκέντρωση του σαλινομυκίνη) σπάρθηκαν στα ανώτερα τμήματα του συστήματος, ο πυθμένας φρεάτια στο σύστημα γέμισαν με RPMI συμπληρωμένο με εμβρυϊκό βόειο 10% ορού ως χημειο-προσελκυστικό και στη συνέχεια επωάζονται στους 37 ° C για 24 ώρες. Τα κύτταρα ελέγχου εκτέθηκαν σε 0.1% DMSO. Μη διεισδυτική κύτταρα απομακρύνθηκαν από την άνω επιφάνεια του φίλτρου με μια μπατονέτα. Κύτταρα που έχουν μεταναστεύσει μέσω του Matrigel μονιμοποιήθηκαν με 4% φορμαλδεΰδη, χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ και μετρήθηκαν σε 25 τυχαία πεδία κάτω από ένα μικροσκόπιο. Η δοκιμασία διεξήχθη εις διπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές για την ποσοτική ανάλυση. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως αναλογική διεισδυτικότητα (%) με σύγκριση των κυττάρων σαλινομυκίνη-αγωγή με τα DMSO-κατεργασμένων κυττάρων, η εισβολή των οποίων υποτίθεται ότι είναι 100%.

ενίσχυση PCR για NAG-1 mRNA

Απομόνωση ολικού RNA από κύτταρα διεξήχθη χρησιμοποιώντας Maxwell 16 Σύστημα Έρευνας (Promega) με συνολικό κιτ καθαρισμού RNA (Promega) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η συγκέντρωση και η καθαρότητα των δειγμάτων RNA προσδιορίστηκαν με μέτρηση της απορρόφησης στα 260 nm (Α260) και ο λόγος της απορρόφησης στα 260 nm και 280 nm (ND-1000, NanoDrop Technologies Inc, Wilmington, DE, USA).

ανάλυση γονιδιακής έκφρασης διεξήχθη χρησιμοποιώντας δύο στάδια αντίδρασης RT-PCR. Πρώτον Ολικό RNA μετατράπηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας ένα υψηλής χωρητικότητας cDNA Reverse Transcription Kit (Life Technologies, Ολοκληρωμένη Biosystems Κόλπου, Ντουμπάι, ΗΑΕ # 4374966) σε τελική συγκέντρωση 50 ng RNA σε ένα 20 μΙ αντιδράσεως PCR με 10 × RT Ρυθμιστικό 2,0 μl , 25 × dNTP Mix (100 mM) 0,8 μΙ, 10 Χ RT Random Primers 2,0 μΙ, MultiScribe ™ ανάστροφης μεταγραφάσης 1,0 μΙ, RNase αναστολέα 1,0 μΙ, ύδατος άνευ νουκλεάσης 3,2 μΙ. Αντίστροφη μεταγραφή εκτελέστηκε σε θερμοκυκλοποιητή Veriti (Life Technologies), χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες παραμέτρους: 25 ° C για 10 λεπτά, 37 ° C για 120 min, και 85 ° C για 5 λεπτά. Ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR δοκιμασία για το γονίδιο ενδιαφέροντος πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν σε ένα γρήγορο σύστημα ΑΒΙ Prism 7900HT ανίχνευση ακολουθία (Life Technologies) χρησιμοποιώντας ένα προσχεδιασμένο δοκιμασία γονιδιακής έκφρασης Taqman για NAG-1 (GDF15 Life Technologies # Hs00171132_m1) και την ανθρώπινη υποξανθίνη φωσφοροριβοσυλ-τρανσφεράση (Hprt1 rRNA) όπως και η ενδογενής έλεγχος (Life Technologies # 4326321E). Από το αραιωμένο cDNA, 4 μΙ (20 ng) χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο σε μια 10 μΙ singleplex αντίδραση PCR που περιέχει 2Χ TaqMan ® Fast καθολική PCR Master Mix, αριθ AmpErase ® UNG (5 μΙ) (Life Technologies # 4352042), 20 × TaqMan® Gene Expression Assay (0,5 μΙ), RNase ελεύθερο νερό 0,5 μΙ. Οι PCR παράμετροι θερμικού κύκλου διεξήχθησαν σε Fast μέθοδο ως εξής 50 ° C για 2 λεπτά, 95 ° C για 20 s που ακολουθείται από 40 κύκλους των 95 ° C για 1 s και 60 ° C για 20 s. Τα αποτελέσματα αρχικά αναλύθηκαν με το πρόγραμμα v2 ΑΒΙ Prism 7900HT SDS, 4, όλοι οι υπόλοιποι υπολογισμοί και στατιστική ανάλυση διεξήχθησαν από το 1.1,4 λογισμικό SDS RQ Διευθυντής χρησιμοποιώντας τη μέθοδο 2-ΔΔCt με σχετική ποσοτικοποίηση RQmin /RQmax εμπιστοσύνης 95%

η έκφραση της προ-αποπτωτική πρωτεΐνη NAG-1

LNM35 και Α549 κύτταρα σπάρθηκαν σε πιάτα 100 mm στα 3 × 10

6 κύτταρα /δίσκο για 24 ώρες και με αυξανόμενες συγκεντρώσεις του σαλινομυκίνη (1-50 μΜ) για άλλες 24 ώρες. Τα κύτταρα ελέγχου εκτέθηκαν σε 0.1% DMSO. Σύνολο κυτταρικές πρωτεΐνες απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό RIPA (25 mM Τπδ.ΗΟΙ ρΗ 7.6, 1% Nonidet Ρ-40, 1% δεοξυχολικό νάτριο, 0,1% SDS, 0,5% το κοκτέιλ αναστολέων πρωτεάσης, 1% PMSF, 1% αναστολέα φωσφατάσης κοκτέιλ) από ελέγχου και επεξεργασμένα κύτταρα. Το σύνολο κυτταρόλυμα ανακτήθηκε με φυγοκέντρηση στα 14.000 rpm για 20 λεπτά στους 4 ° C για να απομακρυνθεί το αδιάλυτο υλικό και 30 μg των πρωτεϊνών διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE γέλη για NAG-1 έκφρασης (Cellular Signaling Technology, ΜΑ? USA). Μετά την ηλεκτροφόρηση, οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μια μεμβράνη νιτροκυτταρίνης, αποκλείστηκαν με 5% γάλα χωρίς λιπαρά και ανιχνεύθηκαν με αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C NAG-1 (1:200) και β-ακτίνη (1:1000). Η κηλίδα πλύθηκε, εκτίθεται σε δευτερεύοντα αντισώματα και οπτικοποιούνται χρησιμοποιώντας το σύστημα ECL (Pierce).

Δημιουργία σταθερών ΝΑΟ-1 αποσιώπηση στα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα και των επιπτώσεών της στην αναστολή της βιωσιμότητας κυττάρων και εισβολή που προκαλείται από σαλινομυκίνη

Α549 κύτταρα σπάρθηκαν σε πυκνότητα 20.000 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκες 96-φρεατίων, με την παρουσία του ορού και αφέθηκαν να προσκολληθούν για 24 ώρες. Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με τρία διαφορετικά σχέδια του SMARTvector 2.0 σωματιδίων λεντοϊών shRNA στόχευσης NAG-1 ή SMARTvector 2.0 Μη στόχευσης σωματίδια ελέγχου (Dharmacon Thermo Scientific, ΗΠΑ) που περιείχε ένα γονίδιο ανθεκτικότητας σε πουρομυκίνη για την επιλογή και GFP για ταυτοποίηση των θετικών κλώνων και των δεξαμενών κλώνους. Η επιλογή των κυττάρων που εκφράζουν σταθερά NAG-1 shRNA και το shRNA ελέγχου ξεκίνησε 72 ώρες μετά την επιμόλυνση ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή (Dharmacon Thermo Scientific, ΗΠΑ). Εν συντομία, το μέσο ανάπτυξης αναρροφήθηκε από τα κύτταρα και αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​θρεπτικό μέσο επιλογής που περιείχε 10 μg /mL πουρομυκίνης. Πουρομυκίνη περιέχουν μέσο αντικαταστάθηκε κάθε 2-3 ημέρες με πρόσφατα παρασκευασμένο μέσο επιλογής, και την επιλογή των σταθερών κυττάρων που εκφράζουν NAG1-shRNA ή shRNA Ελέγχου ολοκληρώθηκε σε περίπου 4 εβδομάδων από την έναρξη της επιλογής. Πολλαπλές κλώνους και δεξαμενές κλώνοι επεκτάθηκαν, και οι GFP θετικές δεξαμενές κλώνων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας δυτικού στυπώματος να διερευνηθεί η έκφραση του NAG-1 μετά από θεραπεία με σαλινομυκίνη 5 μΜ. Στη συνέχεια, ερευνούμε το εισβολής και της βιωσιμότητας των κυττάρων Α549 που εκφράζουν NAG1-shRNA ή shRNA Ελέγχου σε απάντηση salinomycin.

Στατιστικά

Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± S.E.M. από τον αριθμό των πειραμάτων. Η διαφορά μεταξύ των πειραματικών και ελέγχου τιμές εκτιμήθηκαν με ΑΝΟνΑ που ακολουθήθηκε από post-hoc τεστ πολλαπλής σύγκρισης του Dunnett. P & lt? 0.05 δείχνουν μια σημαντική διαφορά

κύτταρα σε

Αποτελέσματα

σαλινομυκίνη αναστέλλει τον καρκίνο του πνεύμονα βιωσιμότητας

Η έκθεση της LNM35 (Εικόνα 1Α). Και Α549 (Εικόνα 1Β).. Οι συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη (0,1-50 μΜ) για 24 ή 48 ώρες μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων σε συγκέντρωση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Τα IC

50 συγκεντρώσεις στις 24 ώρες ήταν στην περιοχή από 5 έως 10 μΜ σαλινομυκίνη και για τις δύο κυτταρικές σειρές. Μετά από 48 ώρες θεραπείας, το IC

50 συγκεντρώσεις μειώθηκαν στο εύρος από 1,5 έως 2,5 μΜ σαλινομυκίνη με 90% αναστολή της βιωσιμότητας των κυττάρων και στα δύο κύτταρα σε συγκέντρωση 50 μΜ.

Εκθετικά αναπτυσσόμενα LNM35 (Α κύτταρα, C) και Α549 (Β, D) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με έκδοχο (0,1% DMSO) ή τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη. Το αριστερό πλαίσιο αντιπροσωπεύει 24 ώρες έκθεσης, ενώ το δεξί πάνελ αντιπροσωπεύει 48 της έκθεσης h. Τα βιώσιμα κύτταρα προσδιορίστηκαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Επαγωγή της κασπάσης-3/7 Δράση αναλύθηκε σε LNM35 (Ε) και τα κύτταρα Α549 (F) θεραπεία για 24 ώρες με σαλινομυκίνη (10 και 50 μΜ), κανονικοποιημένη προς τον αριθμό των βιώσιμων κυττάρων ανά φρεάτιο και εκφράζονται ως πολλαπλότητα επαγωγής συγκριτικά με η ομάδα ελέγχου. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές. * Σημαντικά διαφορετική σε P & lt? 0,05, ** Σημαντικά διαφορετική σε P & lt? 0,01, *** Σημαντικά διαφορετική σε P & lt?. 0.001

Η

Η ενεργοποίηση της κασπάσης-3.7 είναι απαραίτητη σε αποπτωτικά μονοπάτια κυτταρικού θανάτου και αναλύθηκε σε LNM35 και Α549 κύτταρα σε αγωγή για 24 ώρες με σαλινομυκίνη (10-50 μΜ), και ομαλοποιήθηκε ως προς τον αριθμό των κυττάρων ανά φρεάτιο. Caspase 3/7 δραστηριότητα αυξήθηκε κατά περισσότερο από 17 φορές σε κύτταρα LNM35 (Σχήμα. 1C) και 12-φορές σε κύτταρα Α549 (Εικόνα. 1 D), μετά από έκθεση σε 50 μΜ σαλινομυκίνη. Αυτό δείχνει ότι salinomycin προκαλεί κυτταρικό θάνατο μέσω μιας κασπάσης 3/7 σχετίζεται με μονοπάτι.

σαλινομυκίνη παρεμποδίζει την ανάπτυξη των αποικιών σε μαλακό άγαρ

σαλινομυκίνη έντονα αναστέλλεται LNM35 (Σχήμα. 2Α, 2Γ) και Α549 ( Σχήμα. 2Β, 2D) ανάπτυξη αποικίας σε μαλακό άγαρ σε συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο.

LNM35 (Α) και τα κύτταρα Α549 (Β) αναπτύχθηκαν σε μια πυκνότητα 5000 κύτταρα /φρεάτιο σε μαλακό άγαρ σε μέσο πλάκες 6 φρεατίων. Μετά από 14 ημέρες, που σχηματίζονται αποικίες υποβλήθηκαν σε θεραπεία για 7 ημέρες με διαφορετικές συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη (2.5 και 5 μΜ). Στο τέλος αποικίες βάφτηκαν με Giemsa και σημείωσε. Αντιπροσωπευτικά εικόνες των αποικιών που σχηματίστηκαν σε μαλακό άγαρ από LNM35 (C) και Α549 (D) φωτογραφήθηκαν.

Η

σαλινομυκίνη εξασθενίζει τον καρκίνο του πνεύμονα κυτταρική μετανάστευση και εισβολή

καρκινοπαθείς πνεύμονα διατρέχουν υψηλό κίνδυνο ανάπτυξης μετάστασης, αρχής γενομένης με την κυτταρική μετανάστευση στον πρωτογενή όγκο, οδηγώντας σε τοπική εισβολή ιστού και την έναρξη της λέμφου ή αιμοφόρων αγγείων και τελικά τον αποικισμό του απομακρυσμένα όργανα. Η ικανότητα των σαλινομυκίνη να μειώσει την κυτταρική μετανάστευση μελετήθηκε χρησιμοποιώντας την επούλωση πληγών μοντέλο. Σαλινομυκίνη μειωμένη κυτταρική μετανάστευση του LNM35 (Σχήμα. 3Α) και Α549 κύτταρα (Σχήμα. 3Β) από τη συγκέντρωση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Ομοίως, σαλινομυκίνη έβλαψε την εισβολή του LNM35 (Σχήμα. 3C) και Α549 (Σχήμα. 3D) κυττάρων σε δοκιμασία matrigel εισβολή. Σαλινομυκίνη αναστολή της κυτταρικής μετανάστευσης και matrigel εισβολή συνέβη χωρίς σημαντική μείωση της κυτταρικής βιωσιμότητας (Σχήμα. 1).

Τα τραύματα εισήχθησαν σε LNM35 (Α) και Α549 (Β) συρρέουσες μονο-στιβάδες καλλιεργήθηκαν παρουσία ή απουσία (έλεγχος) του σαλινομυκίνη (0,05-0,5 μΜ). Η μέση απόσταση που διανύθηκε κύτταρα από την άκρη του δαπέδου χώρο για 6, 24, και 30 ώρες στους 37 ° C μετρήθηκε με τυφλό τρόπο, χρησιμοποιώντας ανεστραμμένο μικροσκόπιο. C) κύτταρα LNM35 επωάστηκαν για 24 ώρες με την παρουσία ή απουσία σαλινομυκίνη (0,05-0,1 μΜ). D) κύτταρα Α549 επωάστηκαν για 24 ώρες με την παρουσία ή απουσία σαλινομυκίνη (0,1-0,5 μΜ). Κύτταρα που εισβάλει στον Matrigel βαθμολογήθηκαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι.

Η

σαλινομυκίνη επάγει NAG-1 mRNA και έκφρασης πρωτεΐνης

Πρώτον, τα κύτταρα Α549 εκτέθηκαν σε διαφορετικές συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη ( 0,5-10 μΜ) για 2 ώρες και 24 το συνολικό RNA εκχυλίζεται και αξιολογήθηκαν για έκφραση mRNA NAG-1. Όπως φαίνεται στο σχήμα 4Α, σαλινομυκίνη επάγει μία σήμανση χρόνου και εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση επαγωγή της έκφρασης του mRNA NAG-1 με μία δέκα φορές αύξηση ανήλθε στις 24 ώρες μετά την έκθεση σε 10 μΜ σαλινομυκίνη (Σχήμα. 4Α). Στη συνέχεια, LNM35 και Α549 κύτταρα εκτέθηκαν σε διαφορετικές συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη (1-50 μΜ) για 24 ώρες και συνολικών πρωτεϊνών εκτιμήθηκαν για NAG-1 έκφρασης. Σε αμφότερες κύτταρα LNM35 και Α549, σαλινομυκίνη επάγει μια αξιοσημείωτη εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση επαγωγή NAG-1 έκφραση πρωτεΐνης (Σχήμα. 4Β).

Τα κύτταρα εκτέθηκαν σε διαφορετικές συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη, και το συνολικό RNA εκχυλίστηκε μετά από 2 και 24 ώρες και αναλύθηκαν για έκφραση mRNA NAG-1 σε κύτταρα Α549 (Α) και μετά από 24 ώρες για την έκφραση της πρωτεΐνης και στις δύο Α549 και κύτταρα LNM35 (Β).

η

NAG-1 σίγηση καταργήσει την αντι- επεμβατική επίδραση της σαλινομυκίνη

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, αποσιώπηση του NAG-1 (NAG-1-shRNA1) αντέστρεψε την επαγωγή της έκφρασης πρωτεΐνης NAG-1 μετά από αγωγή με 5 μΜ του σαλινομυκίνη. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με τις άλλες δύο σχέδια του shRNA (NAG-1-shRNA2 και NAG-1-shRNA3) (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η επιλεκτικότητα αυτής της αποσιώπησης επιβεβαιώθηκε από το γεγονός ότι δεν παρατηρήθηκε καμία επίδραση επί της έκφρασης πρωτεΐνης NAG-1 στα κύτταρα επιμολυσμένα με σωματίδια ελέγχου shRNA (έλεγχος-shRNA) σε σύγκριση με τα μη-επιμολυσμένα κύτταρα. Αποσιώπηση της επαγωγής NAG-1 χρησιμοποιώντας τρία διαφορετικά σχέδια του NAG-1-shRNA (1, 2 και 3) απέτυχε να μειώσει την ικανότητα του σαλινομυκίνη να επάγεται Α549 κυτταρικού θανάτου (Σχήμα 5Β), αλλά αντιστράφηκε εντελώς την αντι-επεμβατική επίδραση της σαλινομυκίνη (Σχήμα 5C). Όλα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν έντονα ότι NAG-1 μεσολαβεί στην αντι-επεμβατική, αλλά όχι το αποτέλεσμα του κυτταρικού θανάτου σαλινομυκίνη.

Η σίγαση του NAG-1 κατέστειλε την αυξημένη έκφραση του NAG-1 επάγεται από σαλινομυκίνη (Α ) χωρίς επιπτώσεις στην αναστολή της βιωσιμότητας Α549 κυττάρων που προκαλείται από σαλινομυκίνη (Β) με αποτέλεσμα την πλήρη καταστολή σε αντι-επεμβατική δυναμικό της σαλινομυκίνη (C).

η

Συζήτηση

καρκίνου

πνεύμονα είναι ο πιο κοινός τύπος καρκίνου παγκοσμίως και έχει επίσης το υψηλότερο ποσοστό θνησιμότητας. Υπήρχαν 1,61 εκατομμύρια περιπτώσεις καρκίνου του πνεύμονα (12,7% της συνολικής επιβάρυνσης του καρκίνου) το 2008 με 1.380.000 θανάτους (18,2% του συνόλου των θανάτων από καρκίνο) κατά το ίδιο έτος [17]. Δυστυχώς, παρά τις προόδους στη μοριακή βιολογία του καρκίνου του πνεύμονα, βελτιωμένη διάγνωση και ακόμη και οι βέλτιστες στοχευμένες θεραπείες, οι τρέχουσες πρωτόκολλα για τη θεραπεία του καρκίνου του πνεύμονα εξακολουθούν να είναι ανεπαρκή για να παράγουν καθαρές και παρατεταμένη κλινικά οφέλη και η θεραπεία των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα παραμένει ανεπιτυχής. Οι ασθενείς συχνά αναπτύσσουν αντίσταση στα τρέχοντα φάρμακα στοχευμένη θεραπεία και τα φάρμακα αυτά είναι επίσης πολύ ακριβά και δεν είναι διαθέσιμα για την πλειοψηφία των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα στον κόσμο [18].

Στην παρούσα μελέτη, μελετήθηκε η επίδραση του σαλινομυκίνη σε δύο διαφοροποιημένα ανθρώπινου μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων (LNM35 και Α549) επιβίωση, την ανάπτυξη αποικιών, τη μετανάστευση και την εισβολή και τον δυνητικό ρόλο της NAG-1 στο δυναμικό αντικαρκινικές επιδράσεις του σαλινομυκίνη.

σαλινομυκίνη ( 0,1-50 μΜ) μείωσε τη βιωσιμότητα των LNM35 και Α549 διαφοροποιημένων κυττάρων σε ένα συγκέντρωσης-, εξαρτώμενη από το χρόνο και της κασπάσης-σχετίζεται τρόπο. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σε γραμμή με προηγουμένως δημοσιευμένα αποτελέσματα δείχνουν ότι χαμηλές συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη αναστέλλουν την βιωσιμότητα του καρκίνου του μαστού βλαστικών κυττάρων, λευχαιμία βλαστικά κύτταρα, βλαστικά κύτταρα οστεοσαρκώματος, καθώς και του καρκίνου του παγκρέατος βλαστικά κύτταρα [8]? [9]? [10]? [11]. Κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας αυτής της μελέτης, μια άλλη ομάδα έδειξε τις αντικαρκινικές δραστηριότητες salinomycin

in vitro

κατά της βλαστοκυττάρων υπο-πληθυσμού στα κύτταρα Α549 [19]. Για να επιβεβαιωθεί αυτή η αντικαρκινική δράση της σαλινομυκίνη, μελετήσαμε την επίδρασή της στην ανάπτυξη των καθιερωμένων αποικίες. Δείξαμε ότι επτά ημέρες της αγωγής με χαμηλή συγκέντρωση σαλινομυκίνη παρεμποδίζει ισχυρά LNM35 και αποικία Α549 αύξηση σε μαλακό άγαρ. Τα αποτελέσματα αυτά

in vitro

είναι σύμφωνη με άλλες μελέτες που αποδεικνύουν ότι η σαλινομυκίνη αναστέλλει τον καρκίνο του μαστού, οστεοσάρκωμα, καρκίνο του παγκρέατος, καθώς και την ανάπτυξη ηπατοκυτταρικού καρκινώματος σε ποντικούς [8]? [10]? [11]? [20]. Οι δόσεις του σαλινομυκίνη που χρησιμοποιούνται σε αυτές

in vivo

μελέτες ήταν μεταξύ 4 και 8 mg /kg /IP που είναι χαμηλότερο από το LD

50 δόση σαλινομυκίνη η οποία ήταν 18 mg /kg ενδοπεριτοναϊκώς και 50 mg /kg από το στόμα [4]. Όλοι μαζί δείχνουν ότι salinomycin μπορεί να είναι ένα έγκυρο και ασφαλή αντικαρκινικού παράγοντα και περαιτέρω μελέτες θα καθορίσουν τις επιπτώσεις της χαμηλής δόσης σαλινομυκίνη για LNM35 και την ανάπτυξη Α549 όγκου

in vivo

σε άτριχα ποντίκια.

στην παρούσα μελέτη, μόνο η υψηλότερη συγκέντρωση του σαλινομυκίνη (50 μΜ) ήταν σε θέση να επάγει μια ενεργοποίηση της κασπάσης 3/7 που οδηγεί σε κυτταρικό θάνατο και στις δύο πνευμόνων καρκινικά κύτταρα LNM35 και Α549. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με πρόσφατα δημοσιευμένη εργασία μας δείχνει ότι η υψηλή συγκέντρωση του σαλινομυκίνη (50 μΜ) προκάλεσε μια κασπάσης ενεργοποίησης 3/7 και διάσπαση PARP που οδηγούν σε απόπτωση των καρκινικών κυττάρων του μαστού ΜϋΑ-ΜΒ-231 [21]. Ωστόσο, και οι δύο μελέτες σχετικά με τον καρκίνο του πνεύμονα και κύτταρα τα προηγουμένως δημοσιευμένη μελέτη για τον καρκίνο του μαστού κύτταρα δείχνει ότι χαμηλές συγκεντρώσεις σαλινομυκίνη (≤10 μΜ) είχε ως αποτέλεσμα περισσότερο σε αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και όχι κυτταρικό θάνατο [21]. Ομοίως, έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό σαλινομυκίνη και incudes απόπτωση των ανθρώπινου ηπατοκυτταρικού καρκινώματος [20].

πρόοδο του καρκίνου σχετίζεται με κατάργηση των κανονικών ελέγχων που περιορίζει τη μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή, οδηγώντας τελικά σε μετάσταση. Δεδομένου ότι οι μεταστάσεις είναι η κύρια αιτία θανάτου σε ασθενείς με καρκίνο, η ανάπτυξη νέων θεραπευτικών αγωγών που μειώνουν την προσβολή και μετάσταση είναι εξαιρετικά σημαντικό για τη θεραπεία του καρκίνου. Σε αυτό το πλαίσιο, αποδείξαμε ότι η σαλινομυκίνη προκάλεσε μια πολύ σημαντική και χρονικά εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση αναστολή μετανάστευσης κυττάρων και εισβολής

in vitro

των δύο διαφοροποιημένων κυτταρικών σειρών καρκίνου του πνεύμονα LNM35 και Α549. Τα αποτελέσματα αυτά είναι σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες που δείχνουν ότι η σαλινομυκίνη επιλεκτικά αναστέλλει τον καρκίνο του μαστού βλαστικά κύτταρα των μεταστάσεων

in vivo

[8] και η μετανάστευση των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη

in vitro

[22].

Η αντικαρκινική μοριακός μηχανισμός δράσης της σαλινομυκίνη έχει διερευνηθεί σε αρκετές μελέτες. Σε αυτό το πλαίσιο, έχει αποδειχθεί ότι η σαλινομυκίνη είναι ένα αποτελεσματικό αντικαρκινικό παράγοντα που επάγεται απόπτωση σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα ανεξάρτητος της ενεργοποιήσεως ογκοκατασταλτικών ρ53 πρωτεΐνης και κασπάσες [9]. Τα αποτελέσματα αυτά είναι σε συμφωνία με την πρόσφατη μελέτη μας δείχνει ότι η σαλινομυκίνη μειώθηκε σημαντικά η βιωσιμότητα του άγριου-τύπου ρ53 MCF-7 και T47D καθώς και μεταλλαγμένο p53 καρκινικές κυτταρικές σειρές ανθρώπινου μαστού MDA-MB-231 και T47D σε χρόνο και τη συγκέντρωση εξαρτώμενη ήθη [21]. Αποδείχθηκε επίσης ότι η σαλινομυκίνη προκαλεί απόπτωση των καρκινικών κυττάρων του προστάτη PC3 με αύξηση της ενδοκυτταρικής επίπεδο ROS, με αποτέλεσμα την μετατόπιση της πρωτεΐνης Bax στα μιτοχόνδρια, το κυτόχρωμα c απελευθέρωση, η ενεργοποίηση του κασπάσης-3, και διάσπαση της PARP [23]. Σαλινομυκίνη επάγει επίσης κασπάσης εξαρτώμενου κυτταρικού θανάτου σε RKO, SW480 και SW620 κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου [24]. Έχει επίσης αποδειχθεί ότι η σαλινομυκίνη είναι ένας αποτελεσματικός αναστολέας των αρχέγονων κυττάρων οστεοσαρκώματος καθώς και κύτταρα λεμφοκυτταρικής λευχαιμίας μέρει μέσω προς τα κάτω ρύθμιση του /μ-κατενίνης μονοπάτι αυτο-ανανέωσης Wnt [10]? [20]? [25]. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι ανέστειλε σαλινομυκίνη προστάτη ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων με τη μείωση αφυδρογονάση αλδεΰδης και δραστηριότητες του πυρηνικού παράγοντα-Μb [22]. Ομοίως, έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλει Akt σαλινομυκίνη /NF-κΒ μονοπάτι που οδηγεί σε απόπτωση σε σισπλατίνη ανθεκτικά ωοθηκών καρκινικά κύτταρα [26]. Έχει επίσης αποδειχθεί ότι επάγει σαλινομυκίνη αυτοφαγία στο παχύ έντερο και του μαστού καρκινικά κύτταρα [24]. Αυξημένη φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με βλάβες του DNA (π.χ. pH2AX, p53BP1, pBRCA1, pChk1) πρωτεΐνες υποδεικνύει μεγαλύτερη θραύση του DNA και βλάβη [27]. Σαλινομυκίνη αυξάνει διάσπαση της έλικας του DNA και επάγει φωσφορυλίωση της πρωτεΐνης ζημιών που σχετίζονται με DNA, Η2ΑΧ [28].

Το γονίδιο NSAID-ενεργοποιημένα (NAG-1, GDF-15, και MIC-1) επάγεται από διάφορα επάγει την απόπτωση παράγοντες σε κόλον, του προστάτη και του καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων [15]? [29]. NAG-1 εμπλέκεται στην συνεργιστική επαγωγή της απόπτωσης με συνδυασμένη θεραπεία σαλικυλικού νατρίου και /αναστολέων ΡΙ3Κ ΜΕΚ1 /2 σε Α549 κύτταρα αδενοκαρκινώματος ανθρώπινου πνεύμονα [30]. Τα επίπεδα έκφρασης NAG-1 αυξηθούν σημαντικά σε καρκινικά κύτταρα, ορό, και /ή το εγκεφαλονωτιαίο υγρό κατά τη διάρκεια της εξέλιξης των διαφόρων ανθρωπίνων επιθετικών καρκίνων, όπως ενδοκρανιακή όγκων του εγκεφάλου, μελάνωμα, γαστρεντερικά, του παγκρέατος, του παχέος εντέρου, του προστάτη, του μαστού, και του πνεύμονα επιθηλιακών καρκίνων . Κλινικού ενδιαφέροντος, μια ενισχυμένη έκφραση NAG-1 έχει συσχετίζεται θετικά με κακή πρόγνωση και την επιβίωση των ασθενών [29]? [30]? [31]? [32].

Υποθέσαμε ότι NAG-1 εμπλέκεται στις αντικαρκινικές επιδράσεις της σαλινομυκίνη και αποδείξαμε για πρώτη φορά ότι η σαλινομυκίνη προκάλεσε μια σαφή χρονικά και επαγωγή εξαρτάται από τη συγκέντρωση του NAG-1 έκφραση . Έχουμε επίσης καταδείξει σαφώς ότι το NAG-1 συμβάλλει στην αναστολή της εισβολής καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα, αλλά όχι με την επαγωγή του κυτταρικού θανάτου, που προκαλείται από σαλινομυκίνη. Σε αντίθεση, έχει αναφερθεί ότι NAG-1 έκφραση συσχετίστηκε με μια πιο επεμβατική γαστρικού φαινότυπο κυτταρική σειρά καρκίνου και θα μπορούσε να επάγει αυξημένη γαστρική εισβολή καρκινικών κυττάρων

in vitro

[33].

έχει αποδειχθεί ότι η σαλινομυκίνη βελτιώσει την αποτελεσματικότητα της gemcitabine για την εξάλειψη του καρκίνου του παγκρέατος [11]. Σαλινομυκίνη ευαισθητοποιεί επίσης κύτταρα καρκίνου του μαστού στις επιδράσεις της δοξορουβικίνης και της θεραπείας ετοποσίδη αυξάνοντας βλάβη του DNA [28]. Στο ίδιο πλαίσιο, η θεραπεία συνδυασμού της οκτρεοτίδης τροποποιημένων paclitaxel ενεργό μικκύλια στόχευσης και σαλινομυκίνη παθητική στόχευση μικκύλια βελτιώνουν την θεραπεία των καρκίνων του μαστού μέσω της εξάλειψης του καρκίνου του μαστού κύτταρα μαζί με τον καρκίνο του μαστού βλαστικά κύτταρα [34]. Ομοίως, η θεραπεία συνδυασμού trastuzumab και σαλινομυκίνη ήταν ανώτερη μονή αγωγή με κάθε φάρμακο στη θεραπεία του HER2-θετικό καρκίνο του μαστού κύτταρα καθώς και τα βλαστικά κύτταρα του καρκίνου του μαστού [35]. Έχουμε αναφερθεί πρόσφατα

in vitro

, ότι σαλινομυκίνη ήταν επίσης σε θέση να ενισχύουν τις αντικαρκινικές επιδράσεις του 4-υδροξυταμοξιφένη και το frondoside Α επί κύτταρα καρκίνου του μαστού MCF-7 και MDA-MB-231, αντίστοιχα [21]. Με βάση αυτά τα πιο πάνω αποτελέσματα, και γνωρίζοντας από κλινικές δοκιμές ότι απλές θεραπείες παράγων σπανίως οδηγούν σε κλινικά οφέλη για τους ασθενείς με καρκίνο, και ότι οι θεραπείες συνδυασμού βρίσκονται σε συνήθεις απαραίτητες για την αποτελεσματική θεραπεία των όγκων, ερευνήσαμε το θεραπευτικό πλεονέκτημα του συνδυασμού σισπλατίνη, (α θεραπευτική πρώτης γραμμής για τον καρκίνο του πνεύμονα), με σαλινομυκίνη τόσο LNM35 και τα κύτταρα Α549. Δυστυχώς, βρήκαμε ότι η σισπλατίνη δεν ήταν σε θέση να ενισχύσει την αναστολή της βιωσιμότητας του πνεύμονα των κυττάρων του όγκου που προκαλείται από σαλινομυκίνη (Attoub κ.ά., Μη δημοσιευθέντα δεδομένα).

Η τρέχουσα εύρημα προσδιορίζει σαλινομυκίνη ως μια πολλά υποσχόμενη νέα θεραπευτική παράγοντα όχι μόνο για την η εξάντληση των καρκινικών βλαστικών κυττάρων, αλλά και για τις διαφοροποιημένες όγκων του πνεύμονα

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Δρ Καταρίνα Hostanska από το Ινστιτούτο για συμπληρωματικής Ιατρικής.? Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Ζυρίχης, στην Ελβετία για την παροχή των κυττάρων Α549.