Αφηρημένο

Χρησιμοποιήσαμε γονιδιακής έκφρασης για τον εντοπισμό φλεγμονωδών κυτοκινών που σχετίζεται με την ανάπτυξη καρκίνου της ουροδόχου κύστης. προφίλ γονιδιακής έκφρασης των δειγμάτων ιστού διερευνήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες cDNA που περιείχε 103 μη-μυϊκό διηθητικού καρκίνου της ουροδόχου κύστης (NMIBC), καρκίνοι 62 μυών επεμβατική κύστη (MIBC), 58 δείγματα από ιστολογικά φυσιολογικό εμφάνιση τους περιβάλλοντες ιστούς, και 10 κανονικά, υγιή άτομα ο οποίος υπηρέτησε ως ομάδα ελέγχου για σύγκριση. Εμείς ομαδοποιούνται τα σύνολα δεδομένων σύμφωνα με το βιολογικό χαρακτηρισμούς και επικεντρώθηκε σε γονίδια ανοσολογική απόκριση με τουλάχιστον 2 φορές διαφορική έκφραση στο MIBC εναντίον ελέγχους. Τα πειραματικά δεδομένα-σετ εντοπίστηκαν 36 συνδέονται με το ανοσοποιητικό γονίδια που ήταν σημαντικά μεταβληθεί σε δείγματα MIBC. Επιπλέον, το 10 γονίδια ήταν προς τα πάνω ρυθμισμένα και 26 γονίδια ρυθμισμένα προς τα κάτω σε δείγματα MIBC σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Μεταξύ των 10 επάνω ρυθμισμένη μόρια που εξετάστηκαν, η ικανότητα τόσο για την επούλωση πληγών μετανάστευση και εισβολή ενισχύθηκε σε απόκριση στην IL-5, IL-20 και IL-28Α σε κυτταρικές σειρές καρκίνου της κύστεως (253J και EJ κύτταρα), σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα κύτταρα. Τα επίπεδα έκφρασης της IL-5, IL-20 και IL-28Α ήταν αυξημένη σε ασθενείς με MIBC. Όλα τα 3 κυτοκίνες και τους υποδοχείς τους παρήχθησαν σε κυτταρικές σειρές καρκίνου της ουροδόχου κύστης, όπως προσδιορίζεται με PCR πραγματικού χρόνου, ανάλυση ανοσοστυπώματος και συνεστιακή ανοσοφθορισμού. Up-ρύθμιση των ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 βρέθηκε μετά IL-5, IL-20 και IL-28Α διέγερση στους δύο τύπους κυττάρων. Επιπλέον, μια δοκιμασία EMSA έδειξαν ότι η θεραπεία με IL-5, IL-20 και IL-28Α επαγόμενη ενεργοποίηση των παραγόντων μεταγραφής ΝΡ-κΒ και ΑΡ-1 που ρυθμίζουν τον προαγωγό ΜΜΡ-9. Τέλος, η ενεργοποίηση του ΜΑΡΚ και σηματοδότησης Jak-Stat παρατηρήθηκε μετά την προσθήκη του IL-5, IL-20 και IL-28Α προς καρκινικών κυττάρων κύστης. Αυτή η μελέτη υποδηλώνει την παρουσία ειδικών φλεγμονώδους κυτοκίνης (IL-5, IL-20 και IL-28Α) μεσολάβηση ένωσης στην ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Όλα τα 3 κυτοκίνες μπορεί να είναι σημαντικές νέων μοριακών στόχων για τη ρύθμιση της μετανάστευσης και της εισβολής του καρκίνου της ουροδόχου κύστης

Παράθεση:. Lee S-J, Lee E-J, Kim S-K, Jeong P, Cho Υ-Η, Yun SJ, et al. (2012) Ταυτοποίηση των προφλεγμονωδών κυτοκινών συνδέονται με την μυϊκή διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης? Οι ρόλοι της IL-5, IL-20 και IL-28Α. PLoS ONE 7 (9): e40267. doi: 10.1371 /journal.pone.0040267

Επιμέλεια: Νικόλαος Frangogiannis, Albert Einstein College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 26 Ιανουαρίου, 2012? Αποδεκτές: 4 Ιουνίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 4 Σεπτεμβρίου, 2012

Copyright: © 2012 Lee et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από το Πρόγραμμα βασική επιστημονική έρευνα, μέσω του Εθνικού Ιδρύματος Ερευνών της Κορέας (NRF), που χρηματοδοτείται από το Υπουργείο Παιδείας, Επιστημών και Τεχνολογίας (2010-0001736) και την Κορέα Υγειονομική περίθαλψη τεχνολογίας Ε & amp? D Έργου, Υπουργείο Υγείας & amp? Πρόνοιας, Δημοκρατία της Κορέας (A100651-1011-0000200). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο της ουροδόχου κύστης είναι μια από τις πιο διαδεδομένες κακοήθειες σε οικονομικά προηγμένες χώρες, και σχεδόν όλοι οι κακοήθεις καρκίνοι της ουροδόχου κύστης είναι μεταβατικό καρκίνωμα (TCC), οι οποίες προκύπτουν από το μεταβατικό επιθήλιο [1], [2]. Δύο τύποι TCC έχουν ταξινομηθεί ιστοπαθολογικά: μη μυϊκή διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης (NMIBC) και μυϊκή διηθητικού καρκίνου της ουροδόχου κύστης (MIBC) [3], [4]. Κατά την αρχική παρουσίαση, το 70-80% των ασθενών που έχουν διαγνωστεί με NMIBC που περιορίζεται στον βλεννογόνο. Το υπόλοιπο των περιπτώσεων παρουσιάζει MIBC με εισβολή των μυϊκών στιβάδων της κύστης. Οι ασθενείς με NMIBC μπορεί να αντιμετωπιστεί με επιτυχία, ενώ οι περισσότεροι θάνατοι συμβαίνουν σε ασθενείς με περιστατικό MIBC [4]. Ως εκ τούτου, πολύ προσπάθεια έχει εστιαστεί στην κατανόηση των μηχανισμών της ανάπτυξης MIBC για πιθανές θεραπευτικές εφαρμογές.

Είναι πλέον ευρέως αποδεκτό ότι ενδοκυστική ανοσοθεραπεία με Bacillus Calmette Guerin (BCG) είναι η πιο αποτελεσματικός παράγοντας ανοσοενισχυτικό για τη θεραπεία της NMIBC [5] – [7]. Ωστόσο, η πιο χρήσιμη θεραπευτική μέθοδο για τη θεραπεία των ασθενών με MIBC μένει να προσδιοριστεί. Ως εκ τούτου, πολλές μελέτες έχουν διεξαχθεί, προκειμένου να αποκτήσουν περισσότερη διορατικότητα των μηχανισμών της ανάπτυξης MIBC, η οποία μπορεί να οδηγήσει στην ανακάλυψη των πιθανών θεραπευτική αγωγή. Οι βιοχημικές και βιολογικές μελέτες που σχετίζονται με την επιθετική TCC αναλύθηκαν για να προσδιοριστεί προγνωστικούς δείκτες, ή για την ανάπτυξη παραγόντων για διαγνωστικούς και θεραπευτικούς εφαρμογή. Αρκετές συγκεκριμένες μοριακών δεικτών έχουν ταυτοποιηθεί με τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης, συμπεριλαμβανομένων των ρυθμιστικών του κυτταρικού κύκλου, του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, την απόπτωση και παράγοντες αγγειογένεσης [8]. Η φλεγμονή ενέχεται στην ανάπτυξη πολλών ασθενειών, όπως η αθηροσκλήρωση, ο διαβήτης και οι όγκοι, και συνοδεύεται από την εμφάνιση πολυάριθμων φλεγμονωδών βιοδεικτών [9] – [11]. Ωστόσο, η σχέση φλεγμονώδεις-φαινοτύπου που ρυθμίζει την ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης και μετάσταση είναι ακόμη πλήρως κατανοητό.

Ένα τεράστιο ποσό των δεδομένων έδειξε ότι οι ιντερλευκίνες εξασκούν πολυάριθμες λειτουργίες με ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης, την κυτταρική επιβίωση, διαφοροποίηση, και την απόπτωση σε διάφορες ασθένειες [11]. Οι ιντερλευκίνες μπορεί επίσης να παρουσιάζει διαφορετικά αποτελέσματα για τη ρύθμιση των ανοσολογικών αποκρίσεων και την παθογένεση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [4] – [7]. Η θεραπεία με ιντερλευκίνη-6 (IL-6) συνδέθηκε με αντικαρκινική δράση μέσω της επαγωγής της απόπτωσης σε καρκίνωμα ουροδόχου κύστης ποντικού [12]. απελευθέρωσης γονιδίου IL-15 έδειξαν αντικαρκινική δράση σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου της ουροδόχου κύστης ποντικού [13]. Σε αντίθεση, η IL-6 θεραπεία έχει βρεθεί να συμβάλει στην ανάπτυξη των κυττάρων σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα κύστης

in vitro

[14]. Επιπλέον, η έκφραση της IL-8 και IL-17 έχει εμπλακεί στην ανάπτυξη και μετάσταση όγκου στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης του ανθρώπου [15], [16]. Αν και πολλές μελέτες έχουν αναλύσει τις επιδράσεις της ιντερλευκίνες για την ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [12] – [16]., Ακριβής ρόλος της και μοριακός μηχανισμός στη διαδικασία της μετανάστευσης και εισβολής του TCC που σχετίζονται με την κλινική μελέτη δεν έχει διευκρινιστεί

σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε μια προσέγγιση που βασίζεται σε μικροδιάταξη για τον προσδιορισμό κλινικά όσο και βιολογικά κατατοπιστική πρότυπα έκφρασης που διαφέρουν μεταξύ των ασθενών με NMIBC και MIBC και δείγματα ελέγχου. Τα αποτελέσματά μας επικεντρώθηκε σε διαφορές μεταξύ των δειγμάτων MIBC και ελέγχου στα πρότυπα έκφρασης των γονιδίων που παίζουν σημαντικό ρόλο στις πιο σημαντικές κυτταρικές διαδικασίες που εμπλέκονται στις φλεγμονώδεις αποκρίσεις. Γονίδια με τουλάχιστον 2 φορές διαφορική έκφραση στο MIBC εναντίον εντοπίστηκαν ελέγχους, και τις νέες λειτουργίες και τα μονοπάτια σηματοδότησης σε μια φλεγμονώδη με βάση σειρά κύστης TCC είχαν διευκρινιστεί.

Αποτελέσματα

Διαφορικό πρότυπα έκφρασης γονιδίου μεταξύ των ασθενών Ομάδες

Είμαστε χαρακτηρίζονται τα πρότυπα γονιδιακής έκφρασης των δειγμάτων ασθενών με καρκίνο της ουροδόχου κύστης 233 »? 103 NMIBCs, 62 MIBCs, και 68 φυσιολογικού βλεννογόνου ή του βλεννογόνου που περιβάλλει (πλησίον) καρκίνους (Πίνακας 1). Εφαρμόσαμε πρώτα ιεραρχική ανάλυση ομαδοποίηση των προτύπων γονιδιακής έκφρασης για την αξιολόγηση των μοριακών χαρακτηριστικών των διαφόρων ομάδων ασθενών. Όπως ήταν αναμενόμενο, ιεραρχική ανάλυση συσταδοποίησης δεδομένων γονιδιακής έκφρασης από όλους τους ιστούς απέδωσε 3 μεγάλες συστάδες, 1 αντιπροσωπεύει την κανονική βλεννογόνο κύστης, του 1 αντιπροσωπεύει την ομάδα ασθενών MIBC, και 1 αντιπροσωπεύει την ομάδα ασθενών NMIBC (Σχήμα 1). Έτσι, τα πρότυπα έκφρασης του γονιδίου που αντανακλά τη μοριακή διαμόρφωση ήταν εύκολα διακριτά μεταξύ όγκων της ουροδόχου κύστης και μη καρκινικούς ιστούς.

Η

επιλέχθηκαν Γονίδια με τιμές έκφρασης που είχε μια τυπική απόκλιση τουλάχιστον 0,7 (4.145 γονίδια) . Τα κόκκινα και πράσινα χρώματα αντανακλούν υψηλά και χαμηλά επίπεδα έκφρασης, αντίστοιχα.

Η

Είμαστε δίπλα προσπάθησε να εντοπίσει ομάδες γονιδίων που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ των 3 διαφορετικές ομάδες. Εφαρμόσαμε Venn διάγραμμα σύγκρισης των 2 λιστών γονιδίου να συγκρίνουν τα πρότυπα της γονιδιακής έκφρασης των NMIBCs και MIBCs. Πρώτον, δημιουργείται 2 διαφορετικές λίστες γονίδιο εφαρμόζοντας ένα t-test 2-δείγμα (Σχήμα 2Α,

P

& lt? 0.001). κατάλογος Γονίδιο Α αντιπροσωπεύει τα γονίδια που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ της κανονικής βλεννογόνου και NMIBC, και κατάλογος γονίδιο β αντιπροσωπεύει τα γονίδια που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ της κανονικής βλεννογόνου και MIBC. Κατά τη σύγκριση των 2 λιστών γονίδιο, παρατηρήθηκαν 3 διαφορετικά σχέδια: S Δεν μπορώ (1.452 γονίδια), S και Ι (679 γονίδια), και δεν μπορώ S (381 γονίδια) (Σχήμα 2Β). Γονίδια στο S δεν μπορώ κατηγορία έδειξε NMIBC-ειδικά πρότυπα έκφρασης, ενώ γονιδίων στον δεν μπορώ κατηγορία S εμφανίζεται MIBC-ειδικά πρότυπα γονιδιακής έκφρασης. Γονίδια στην κατηγορία S και Ι επέδειξαν τα δύο πρότυπα έκφρασης NMIBC και MIBC, που σημαίνει ότι 679 γονίδια στην κατηγορία S και εγώ κοινό τόσο NMIBC και MIBC ανάπτυξης.

(Α) διάγραμμα Venn των γονιδίων που επιλέγονται από μια 2 δειγμάτων μήκους t-test. Η Blue Circle (κατάλογος γονίδιο S) αντιπροσωπεύει γονίδια που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ της κανονικής βλεννογόνου και NMIBCs. Ο κόκκινος κύκλος (κατάλογος γονίδιο Ι) αντιπροσωπεύει γονίδια που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ της κανονικής βλεννογόνου και MIBCs. Ένα cut-off

P

-τιμή μικρότερη από 0.001 εφαρμόστηκε για την επιλογή γονιδίων με μια έκφραση που ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο ομάδων. μοτίβα (Β) Έκφραση επιλεγμένων γονιδίων στο διάγραμμα Venn. Τα δεδομένα παρουσιάζονται σε μορφή πίνακα στον οποίο σειρές αντιπροσωπεύουν μεμονωμένα γονίδια και στήλες αντιπροσωπεύουν κάθε ιστό. Τα κόκκινα και πράσινα χρώματα αντανακλούν υψηλά και χαμηλά επίπεδα έκφρασης, αντίστοιχα.

Η

Λειτουργική κατάταξη του Υπογραφή έκφρασης γονιδίων για MIBC Ανάπτυξης

Για να καθοριστεί εάν η υπογραφή της γονιδιακής έκφρασης μας εμπλουτίστηκε με γνωστούς βιολογικές λειτουργίες, βιοπληροφορικής λειτουργική ταξινόμηση αναλύσεις των γονιδίων που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ της κανονικής βλεννογόνου και MIBC διεξήχθησαν. Αυτή η ανάλυση αποκάλυψε μια σειρά από ανάπτυξη MIBC που σχετίζονται με λειτουργικές κατηγορίες. Οι λειτουργικές ταξινομήσεις του γονιδίου συνόλων που απεικονίζεται στο Σχήμα 3. Βρήκαμε ότι τα γονίδια που εμπλέκονται στον κυτταρικό κύκλο, ο καρκίνος, η κυτταρική ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό, κυτταρικό θάνατο, και DNA-αντιγραφή και -Επισκευή σημαντικά εμπλουτίζεται. Βρήκαμε επίσης ότι τα γονίδια που εμπλέκονται στους μηχανισμούς μόλυνση, ανοσολογική ασθένεια, και η φλεγμονώδης νόσος ήταν επίσης παρόντες σε σημαντικούς αριθμούς. Είναι ενδιαφέρον ότι παρατηρήθηκε ένας σημαντικός αριθμός των γονιδίων που εμπλέκονται στη νεφρική και ουρολογικές ασθένειες, κυτταρικό ανάπτυξη, την ανάπτυξη των ιστών, και αναπτυξιακές διαταραχές, η οποία εμπνέεται εμπιστοσύνη στα αποτελέσματα μας. Έχει υπάρξει πολλή πρόοδος στην έρευνα για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης σε γονίδια που συμβάλλουν στην κυτταρικού κύκλου, κυτταρική ανάπτυξη, την κυτταρική ανάπτυξη, ή τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, οι οποίες ήταν πολύ σημαντικές λειτουργίες στο Σχήμα 3. Για να προσδιοριστούν τα επίπεδα έκφρασης γονιδίου σε όγκους της ουροδόχου κύστης, εμείς αναλύονται περαιτέρω τα σύνολα δεδομένων των μικροσυστοιχιών. Μεμονωμένα δείγματα όγκων από ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης έδειξε 664 γονίδια που εκφράζονται διαφορικά σε όλα τα δείγματα ιστού όγκου, όπου απόκλιση γονίδια ήταν είτε ανάντη ή προς τα κάτω ρυθμισμένα (Πίνακας S1, S2, S3, και S4).

εμπλουτισμός κατάταξη προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό Ingenuity Διαδρομή Ανάλυση (έκδοση 8.8). Η σημασία της κάθε λειτουργίας εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας την ακριβή μέθοδο δοκιμής του Fisher. Το κατώτατο όριο της στατιστικής σημαντικότητας ήταν -log (

P

= 0,05).

Η

Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε το προφίλ έκφρασης των γονιδίων που εμπλέκονται στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την απόπτωση, κυτταρικό έλεγχος του κύκλου, την αγγειογένεση, την επούλωση πληγών, DNA-αντιγραφή και -Επισκευή, κυτταροσκελετού και κυτταρικής προσκόλλησης μεταξύ της κανονικής βλεννογόνου και MIBC (Πίνακας S1 και S2). Σε MIBC, τα επίπεδα έκφρασης του mRNA των κυτταρικών γονιδίων πολλαπλασιασμό που σχετίζονται με VAX1, TTK, TPX2, διαχρονικό, ΣΤΥΛ, TBRG4, MCM7, KIF2C, HGS, DHCR7, CENPF, BRCA1, UHRF1, TRAIP, RECQL4, RACGAP1, ΕΡΑ, MKI67, KISS1R, KIF15, ING1, IMPDH1, FGF18, E2F1, DLG7, BUB1B, BUB1, BRCA2 και BLM ήταν μέχρι ρυθμίζονται σύγκριση με το φυσιολογικό βλεννογόνο (Πίνακας S1). Το επόμενο σύμπλεγμα αποτελείται από γονίδια που σχετίζονται με την απόπτωση που ήταν υπερ-εκφράζεται (TOP2A, SCOTIN, MTP18, GSK3B, FANCG, BIRC5, AKT1S1, yars, TRIB3, TRAF2, SCARB1, RAD21, FAF1, ESPL1, E2F2, BCL2L12, ATF5, και AATF) σε MIBC (Πίνακας S1). Τα γονίδια που ανήκε σε μια οικογένεια συσχετίζεται με τον κυτταρικό σκελετό και ήταν σημαντικά υπερ-εκφράζεται σε MIBC: TUBG1, SPTBN2, SPAG5, SCYL1, RCC2, RAE1, PRC1, PPP4C, NUSAP1, MYOHD1, LMNB2, KIFC1, KIF4A, KIF20A, KIF14, KIAA1688 , GTSE1, CCNB1, C9orf48, C18orf24, AZI1, AURKB, TUBA6, STMN1, SNIP, SLC9A3R1, SAC3D1, ODF2, ΝΕΚ2, LMNB1, KNTC1, KIF22, ITGB4BP, FAM33A, CCNB2 και ANLN (Πίνακας S1). Διαπιστώσαμε επίσης το επάνω ρυθμισμένη έκφραση των μορίων προσκόλλησης που σχετίζονται κυττάρων όπως TSTA3, TROAP, ADAM15, TINAG, PVR, PPFIA1, CELSR3, και ADRM1 σε MIBC (Πίνακας S1). μοριακό γονίδια σχετίζονται με την αγγειογένεση, συμπεριλαμβανομένων TOP2A, POLD1, Pfs2, ORC1L, MCM7, NPR1, και FGF18 είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω σε MIBC (Πίνακας S1). Ωστόσο, το επάνω ρυθμισμένη έκφραση του αγγειογόνου παράγοντα VEGF αναπάντεχα παρατηρήθηκε σε NMIBC (Πίνακας S1). αντιγραφή του DNA και τα γονίδια επισκευής που σχετίζονται ήταν επάνω-ρυθμίζονται σε MIBC: TDP1, DNA2L, Tyms, TDG, POLQ, POLE2, POLD2, POLA2, ORC6L, MCM10, PRPF19, MGC32020, GTF2H4, EME1, RUVBL2, RAD51AP1, NUDT1, FANCB, και FANCA (Πίνακας S1). Τέλος, τα παρόντα δεδομένα έδειξαν τα υπερεκφράζεται επίπεδα των ρυθμιζόμενων γονιδίων του κυτταρικού κύκλου, οι οποίες συμβάλλουν στην πρόοδο του όγκου και εισβολή: UBE2C, TREX1, RCC1, PSMD8, PA2G4, LIN9, GSG2, E2F3, Cdt1, CDK5RAP1, CCNF, ZWINT, PKMYT1 , CDC45L, CCNE2, CCNA2, SUV39H1, RAD54L, POLD1, HCAP-G, H2AFX, γιατροί Παθολόγοι1, FLJ22624, FANCD2, CHAF1A, CDCA3, ASPM, XRCC2, SPBC25, SMC4L1, SGOL1, SC65, PTTG1, πόλο, PBK, MCM2, KNTC2 , KIAA1794, EXO1, CIT, CHAF1B, CEP55, CDCA8, CDCA5, CDCA2, CDCA1, C20ort172, ANAPC11, CDC2, CDC20, CDC25C, Cdc7, Cdc27, και cdc25A (Πίνακας S1).

IL-5, IL-20 και IL-28Α διεγείρουν την μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων κύστης καρκίνος

καρκίνος της ουροδόχου κύστης είναι μία ανοσο ή που σχετίζονται με φλεγμονή ασθένεια, και η ανοσοθεραπεία όπως ενδοκυστική ενστάλαξη του Bacillus Calmette-Guérin (BCG) είναι η πιο σημαντικό θεραπευτική επιλογή για NMIBC να αποτρέψει την εξέλιξη της νόσου [5] – [7], [9]. Αθροιστική μελέτες έχουν δείξει ότι μεταβολή στα επίπεδα κυτοκίνης μπορεί να είναι ένα γεγονός κλειδί για τον προσδιορισμό της εξέλιξης της νόσου του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [17] – [19]. Για την επόμενη ανάλυση, ως εκ τούτου, επιλέξαμε ανοσολογική ή φλεγμονώδη λειτουργιών από λειτουργικών αποτελεσμάτων ταξινόμησης μας (Σχήμα 3). Επειδή ο θάνατος σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης συνδέεται στενά με την ανάπτυξη της MIBC [4], αναλύσαμε τα μοτίβα γονιδιακής έκφρασης αντιπροσωπευτικών ανοσο ή γονιδίων που σχετίζεται με φλεγμονή, συγκρίνοντας MIBC και δείγματα ελέγχου (Πίνακας 2 και 3). Δέκα (10) αυτών των γονιδίων (IL-5, IL-26, IL-22RA1, IL-1RAPL1, IL-1F5, IL-17RB, IL-17RE, IL-20, IL-28Α, και TRAF2) έδειξε αυξημένη έκφραση και 26 γονίδια ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω σε δείγματα MIBC, σε σύγκριση με τα δείγματα ελέγχου (Πίνακας 2 και 3). Εμείς διαίρεσε τα 10 up-ρυθμιζόμενα γονίδια σε 3 τύπους: (1) κυτοκίνες (IL-26, IL-5, IL-20 και IL-1F5) (2) υποδοχείς κυτοκίνης (IL-22RA1, IL-17RB, IL- 17RE, IL-1RAPL1, και IL-28AR1), και (3) πρωτεΐνη προσαρμογέα υποδοχέα κυτοκίνης (TRAF-2). Πρώτον, για να εξετάσει την ικανότητα να επάγει μετανάστευση και εισβολή, χρησιμοποιήσαμε κυτοκίνες IL-26, IL-5, IL-20 και IL-1F5. Δεύτερον, χρησιμοποιήσαμε κυτοκίνης IL-22, IL-17E, IL-17C και IL-28Α, επειδή αυτές οι κυτοκίνες διαμεσολαβεί κυτταρικές αποκρίσεις μέσω της αλληλεπίδρασής της με τους υποδοχείς τους (IL-22 /IL-22RA1, IL-17E /IL-17RB, IL-17C /IL-17RE, IL-28Α /IL28AR1) [20] – [23]. Στην περίπτωση της IL-1RAPL1, χρησιμοποιήσαμε υπερέκφραση του γονιδίου IL-1RAPL1 cDNA επειδή ο συνδετήρας της IL-1RAPL1 δεν είχε ακόμη ταυτοποιηθεί [24]. Τέλος, χρησιμοποιήσαμε επίσης το γονίδιο TRAF2 cDNA είχαμε κλωνοποιηθεί. Προηγούμενες εκθέσεις έδειξαν ότι η ανάπτυξη MIBC έντονα συνδέονται με τη μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων [4], [15]. Για να καθοριστεί εάν τα πάνω ρυθμισμένα γονίδια σε MIBC επάγει την μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων κύστης, εκτελέσαμε επούλωση της πληγής προσδιορισμούς και προσδιορισμούς εισβολής σε 253J καρκίνο της ουροδόχου κύστης και κυττάρων EJ χρήση ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών ή γονιδίων cDNA. Μεταξύ των 10 μόρια που εξετάστηκαν, IL-5, IL-20 και IL-28Α ενισχυθεί σημαντικά τόσο την επούλωση πληγών μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων 253J, σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα κύτταρα (Σχήμα 4Α και 5Α). Παρόμοια αποτελέσματα βρέθηκαν σε κύτταρα EJ (Σχήμα 4Β και 5Β). Επιπλέον, ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δεν παρατηρήθηκε σε οποιαδήποτε από τις 3 περιπτώσεις κυτοκίνη αγωγή καρκινικών κυττάρων κύστης (Σχήμα S1A και Β). Ωστόσο, το άλλο 5 κυτοκινών και 2 γονίδια δεν είχε καμία επίδραση στην μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων κύστης (Σχήμα S2, S3, και S4).

Η

(Α, Β) Η συρρέουσα κύστη καρκινικά κύτταρα επωάστηκαν με μέσο χωρίς ορό και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη IL-5, IL-20 και IL-28Α για τους υποδεικνυόμενους χρόνους. Τα πλάτη των γραμμών ζημία γίνεται εις κύτταρα στη συνέχεια εξετάστηκαν στις 0 και 24 ώρες. Επούλωση πληγών μετανάστευση αντιπροσωπεύεται από τα πλάτη των γραμμών τραυματισμού.

Η

(Α, Β) Τα κύτταρα τοποθετήθηκαν στον άνω θάλαμο, και τις δεικνυόμενες συγκεντρώσεις IL-5, IL-20, και IL-28Α τοποθετήθηκαν στο χαμηλό φρεάτιο του θαλάμου χημειοταξίας. Εισβολή οι αριθμοί των κυττάρων μετρήθηκαν μετά από χρόνους που υποδεικνύονται. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως ο αριθμός των εισέβαλαν κυττάρων σε σχέση με ένα μη κατεργασμένο έλεγχο, όπως προσδιορίζεται από 3 ανεξάρτητα πειράματα. **

P

& lt?. 0.01 σε σύγκριση με χωρίς θεραπεία

Η

IL-5, IL-20 και IL-28Α έκφραση πάνω ρυθμισμένα σε Ασθενείς με MIBC

Για να επικυρώσετε το επίπεδο της IL-5, IL-20 και IL-28Α, είμαστε δίπλα μέτρησαν τα επίπεδα του mRNA των 62 MIBCs και 68 φυσιολογικά δείγματα από PCR πραγματικού χρόνου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα έκφρασης της IL-5, IL-20 και IL-28Α mRNA ήταν συνήθως υψηλότερη σε ασθενείς MIBC ό, τι σε υγιή άτομα (Σχήμα 6), γεγονός που υποδηλώνει ότι η έκφραση του IL-5, IL-20, και IL-28Α είναι ισχυρά και σημαντική συσχέτιση με διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης.

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR χρησιμοποιήθηκε για την επικύρωση της γονιδιακής έκφρασης της IL-5, IL-20 και IL-28Α σε ασθενείς και υγιείς MIBC άτομα. Κλινικά δείγματα ελήφθησαν από 62 ασθενείς MIBC και 68 υγιή άτομα. Το mRNA απομονώθηκε και χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση πραγματικού χρόνου PCR για την IL-5, IL-20 και IL-28Α. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως IL-5, IL-20 και IL-28Α έκφραση mRNA σε σχέση με την έκφραση GAPDH mRNA. *

P

& lt?. 0.01 σε σύγκριση με υγιή άτομα

Η

IL-5, IL-20, IL-28Α, και οι υποδοχείς τους Εντοπίστηκε από την Real-time PCR, Ανοσοστύπωμα και Ομοεστιακή Μικροσκοπία ανοσοφθορισμού σε κύτταρα κύστης Καρκίνος

προκειμένου να προσδιοριστεί αν η IL-5, IL-20 και IL-28Α mRNA εκφράστηκαν τόσο σε 253J και EJ κυττάρων, σε πραγματικό χρόνο ανίχνευση PCR πραγματοποιήθηκε. Όπως φαίνεται στο σχήμα 7Α και D, την έκφραση της IL-5, IL-20 και IL-28Α mRNA ήταν ενδογενώς ανιχνεύθηκε στις δύο κυτταρικές σειρές. Θεραπεία της δύο κυτταρικές σειρές με 10% FBS για 24 ώρες έδειξαν σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση της IL-5, IL-20, και η έκφραση της IL-28Α στα επίπεδα mRNA (Σχήμα 7Α και D). Επιπλέον, σε πραγματικό χρόνο PCR ανάλυση έδειξε την έκφραση των υποδοχέων των κυτοκινών 3, IL-5Rα, IL-20R1, και IL-28AR1 τόσο 253J και κυττάρων EJ (Σχήμα 7Β και Ε). πρωτεΐνες IL-5, IL-20 και IL-28Α παρατηρήθηκαν με ανοσοστύπωμα των πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων από αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 7C και F). IL-5, IL-20, και η έκφραση πρωτεΐνης IL-28Α αυξήθηκε με την προσθήκη 10% FBS (Σχήμα 7C και F). Χρησιμοποιώντας μικροσκοπία ανοσοφθορισμού συνεστιακή, εξετάσαμε έπειτα την υπο-κυτταρικό εντοπισμό του IL-5, IL-20, και πρωτεΐνες IL-28Α και στις δύο κυτταρικές σειρές. Όλα τα 3 κυτοκίνες διεσπάρησαν στο κυτταρόπλασμα και στις περιοχές περι-πυρηνικό (Σχήμα 8Α και Β).

(Α, Β, D, και Ε) Τα κύτταρα επωάστηκαν με τις διάφορες συγκεντρώσεις του FBS για 24 ώρες , και τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της IL-5, IL-20, IL-28Α (Α, D) και των υποδοχέων τους (Β, Ε) ποσοτικοποιήθηκαν με πραγματικού χρόνου PCR. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως IL-5, IL-20, IL-28Α και mRNA έκφρασης σε σχέση υποδοχέα τους με την έκφραση GAPDH mRNA. *

P

& lt? 0,01 σε σύγκριση με χωρίς θεραπεία. (C, F) Κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις FBS για 24 ώρες, και τα επίπεδα πρωτεΐνης της IL-5, IL-20 και IL-28Α αναλύθηκαν με ανοσοστύπωμα. έκφραση GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

(Α, Β) 253J και EJ κυττάρων, αντίστοιχα, βάφτηκαν με αντισώματα έναντι QD565-συζευγμένο IL-5, IL-20 και IL-28Α (κόκκινος). Και οι δύο πυρήνες (αντι-DAPI) και κυτόπλασμα (αντι-τουμπουλίνης-Alexa488) αντίθετα με ϋΑΡΙ (μπλε) και τουμπουλίνης-Alexa488 (πράσινο).

Η

IL-5, IL-20 και IL -28A Ενεργοποιεί MMP-9 έκφρασης μέσω της ενεργοποίησης των μεταγραφικών παραγόντων NF-κΒ και ΑΡ-1 σε κύτταρα κύστης Καρκίνος

Προηγούμενες εκθέσεις έδειξαν ότι η ΜΜΡ-9 έκφρασης συνδέθηκε στενά με την εισβολή των όγκων της ουροδόχου κύστης και της μετανάστευσης [4], [15], [25] – [29]. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η IL-5, IL-20 και IL-28Α διέγειρε την μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων κύστης (Σχήμα 4 και 5). Αυτά τα αποτελέσματα μας ώθησε να εξετάσουμε αν το IL-5, IL-20 και IL-28Α επάγει MMP-9 έκφρασης. Θεραπεία των δύο τύπων καρκινικών κυττάρων με IL-5 οδήγησε σε σημαντική αυξητική ρύθμιση ΜΜΡ-9 έκφραση σε ένα συγκέντρωσης- και χρονοεξαρτώμενο τρόπο, ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας ζυμογραφία ζελατίνης και ανάλυση ανοσοκηλίδας (Σχήμα 9Α, 9Β, 10Α και 10Β) . Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν μετά από αγωγή είτε με IL-20 ή IL-28Α, αντίστοιχα (Σχήμα 9Α, 9Β, 10Α και 10Β). Επιπλέον, η έκφραση του ΜΜΡ-2, ένα άλλο μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας, επίσης διεγείρεται σε IL-5-, IL-20-, και IL-28Α-επεξεργασμένα κύτταρα, όπως 253J και κυττάρων EJ (Σχήμα 9Α, 9Β, 10Α, και 10Β). Το 5′-ρυθμιστική περιοχή του ΜΜΡ-9 υποκινητή της ανθρώπινης περιέχει αρκετές συναινετικά μοτίβα για ΝΡ-κΒ, ΑΡ-1, και οι παράγοντες Sp-1 μεταγραφή [30] – [32]. Εμείς αιτιολογημένη ότι η ΜΜΡ-9 έκφραση από την IL-5, IL-20 και IL-28Α θα μπορούσε να συσχετιστεί με αυξημένη δραστικότητα του ΝΡ-κΒ, ΑΡ-1, και Sp-1 στον πυρήνα. Για το σκοπό αυτό, πραγματοποιήσαμε μία δοκιμασία μετατόπισης ηλεκτροφορητικής κινητικότητας (EMSA) με χρήση πυρηνικών εκχυλισμάτων από καρκίνο της ουροδόχου κύστης κυττάρων που επάγεται από την IL-5, IL-20 και IL-28Α. IL-5, IL-20 και IL-28Α που προκαλείται σημαντική αύξηση NF-κΒ και ΑΡ-1 δράση δεσμεύσεως σε κυτταρικές σειρές 253J (Σχήμα 11). Δεν υπάρχουν ειδικά συμπλέγματα πρόσδεσης σε SP-1 παρατηρήθηκαν σε κύτταρα που υπέστησαν αγωγή με οποιαδήποτε από τις ιντερλευκίνες (Σχήμα 11). Ωστόσο, στην περίπτωση των κυττάρων EJ, τόσο IL-5 και IL-28Α διεγείρεται δραστικότητα δέσμευσης του ΝΡ-κΒ (Σχήμα 12). Αυξημένη NF-κΒ και ΑΡ-1 δραστηριότητες πρόσδεσης ανιχνεύτηκαν σε IL-20 κύτταρα κατεργασμένα EJ (Σχήμα 12).

(Α) Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε 70% συρροή σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% FBS και η μέσο αλλάχθηκε σε μέσο χωρίς ορό. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις IL-5, IL-20 και IL-28Α για 24 ώρες. (Β) Χρόνος που εξαρτάται από ΜΜΡ-9 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα της κύστης που προκαλείται από την IL-5-, IL-20-, και IL-28Α. Τα κύτταρα σε μέσο ελεύθερο ορού επωάστηκαν με IL-5-, IL-20-, και IL-28Α (100 ng /ml) για διάφορους χρόνους. Προσαρμοσμένα μέσα από το (Α) και (Β) αναλύθηκαν με ζυμογραφική ΜΜΡ δραστικότητα. Πρωτεΐνη έκφραση του ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9 και GAPDH προσδιορίστηκε με ανάλυση ανοσοστυπώματος.

Η

(Α) Συρρέοντα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% FBS, και το μέσο αλλάχθηκε σε ορό -δωρεάν μέσο. Τα κύτταρα διεγέρθηκαν με δεικνυόμενες συγκεντρώσεις IL-5, IL-20 και IL-28Α για 24 ώρες. (Β) Επαγωγή χρονικά εξαρτώμενη MMP-9 έκφραση σε IL-5-, IL-20-, και IL-28Α-αγωγή καρκινικών κυττάρων κύστης. Τα κύτταρα σε μέσο ελεύθερο ορού διεγέρθηκαν με IL-5-, IL-20-, και IL-28Α (100 ng /ml) για υποδεικνυόμενους χρόνους. δραστηριότητα Ζυμογραφική ΜΜΡ αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ρυθμισμένα μέσα από το (Α) και (Β). Πρωτεΐνη έκφραση του ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9 και GAPDH ήταν υπόκεινται σε ανάλυση ανοσοστυπώματος.

Η

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν με θρεπτικό μέσο χωρίς ορό που περιέχει τις ενδεικνυόμενες συγκεντρώσεις του IL-5, IL-20 και IL -28A. Μετά από 24 ώρες, πυρηνικά εκχυλίσματα από τα κύτταρα αναλύθηκαν με EMSA για ενεργοποιημένα ΝΡ-κΒ, ΑΡ-1, και Sp-1 χρησιμοποιώντας ραδιοσημασμένο ολιγονουκλεοτιδικών ανιχνευτών.

Η

Τα κύτταρα επωάστηκαν με μέσα άνευ ορρού για οι υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις IL-5, IL-20 και IL-28Α για 24 ώρες. Στη συνέχεια, πυρηνικά εκχυλίσματα από τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε EMSA να δοκιμάσει ΝΡ-κΒ, ΑΡ-1, και Sp-1 δραστικότητα σύνδεσης χρησιμοποιώντας ραδιοσημασμένο ολιγονουκλεοτιδικών ανιχνευτών.

Η

Επαγωγή της ΜΑΡΚ και Jak-Stat Σηματοδοσίας Διαδρομή σε καρκινικά κύτταρα κύστης που προκαλείται από IL-5, IL-20 και IL-28Α

Επειδή σηματοδότηση για κυτοκίνες ενεργοποιεί πρωτίστως ο Jak /Stat και οδούς μεταγωγής σήματος ΜΑΡΚ [8], μπορούμε επόμενη διερευνήθηκαν οι καταρράκτες σηματοδότησης που προκαλείται από IL-5, IL-20 και IL-28Α σε καρκινικά κύτταρα κύστης. Πειράματα πορεία Χρόνος διεξήχθησαν σε κύτταρα 253J και EJ. IL-5 θεραπεία που προκαλείται από την ενεργοποίηση των ERK1 /2, JNK, JAK1, JAK2, Stat1, Stat2, και Stat3 στα κύτταρα 253J (Σχήμα 13Α και 14Α). Η διέγερση των κυττάρων EJ με IL-5 είχε σαν αποτέλεσμα την ενεργοποίηση του ERK1 /2, p38MAPK, JAK1, JAK3, Stat1, και Stat3 (Σχήμα 13Β και 14Β). Επιπλέον, η IL-20 αύξησε την ενεργοποίηση του ERK1 /2 και στις δύο 253J και κυττάρων EJ (Σχήμα 13Α και 13Β). Η ενεργοποίηση του JAK2, JAK3, Stat2 και Stat5 ανιχνεύθηκε σε IL-20 κύτταρα κατεργασμένα με 253J (Σχήμα 14Α). Η θεραπεία με IL-20 διέγειρε την ενεργοποίηση της JAK1, JAK2, Stat1, Stat2, και Stat5 σε κύτταρα EJ (Σχήμα 14Β). Στην περίπτωση της IL-28Α, η ενεργοποίηση του ERK1 /2 παρατηρήθηκε σε κύτταρα 253J (Σχήμα 13Α), η ενεργοποίηση p38MAPK αυξορρυθμίστηκε σε κύτταρα EJ (Σχήμα 13Β). Η επεξεργασία των κυττάρων 253J με IL-28Α προκάλεσε την ενεργοποίηση του JAK2, JAK3, Stat3 και Stat5 (Σχήμα 14Α). Επιπλέον, η ενεργοποίηση του JAK2, Stat1 και Stat3 προκλήθηκε με αγωγή με IL-28Α σε κύτταρα EJ (Σχήμα 14Β). Ωστόσο, η ενεργοποίηση ΑΚΤ δεν επηρεάστηκε σε IL-5-, IL-20-, και IL-28Α-αγωγή καρκινικών κυττάρων κύστης (Σχήμα S5A και Β).

(Α, Β) Τα κύτταρα επωάστηκαν σε IL -5, IL-20 και IL-28Α (100 ng /ml) για τους υποδεικνυόμενους χρόνους, και στη συνέχεια συλλέχθηκαν, λύθηκαν και υποβλήθηκαν σε ανάλυση ανοσοκηλίδος για τα επίπεδα ενεργοποίησης ΜΑΡΚ χρησιμοποιώντας ειδικά αντισώματα.

Η

(Α, Β) κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με IL-5, IL-20 και IL-28Α (100 ng /ml) για τους υποδεικνυόμενους χρόνους, και στη συνέχεια συλλέχθηκαν. Τα επίπεδα ενεργοποίησης του Jak-Stat ανιχνεύθηκαν με ανάλυση ανοσοκηλίδος χρησιμοποιώντας ειδικά αντισώματα.

Η

Συζήτηση

Πολλές μελέτες έχουν χρησιμοποιήσει γονιδιακή έκφραση προφίλ του καρκίνου ουροδόχου κύστης χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες. Προηγούμενες μελέτες που περιλαμβάνουν την ανάλυση των προφίλ γονιδιακής έκφρασης έχουν επικεντρωθεί επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου, την αντιγραφή του DNA και την επισκευή, την απόπτωση, μεταγωγή σήματος, παράγοντες μεταγραφής, αγγειογένεση, κυτταρική προσκόλληση, τραύματος θεραπείες, και ο κυτταροσκελετός. Στην παρούσα μελέτη, τα πρότυπα έκφρασης ενός αριθμού όγκων που σχετίζονται με την κλασική γονίδια (π.χ., VEGF, PGF, FGF18, ΑΚΤ, E2F1, ATF5) εντός μικροσυστοιχιών σύνολο δεδομένων μας ανιχνεύθηκαν όπως προβλέπεται. Η ιεραρχική ανάλυση συσταδοποίησης πρότεινε ότι πολλά γονίδια μπορεί να συμμετέχει σε ρυθμιστικά δίκτυα που περιλαμβάνουν τα πολλαπλά βιολογικά συστήματα που απαιτούνται για την ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τις ανοσολογικές ή φλεγμονώδεις κυτοκίνες που σχετίζονται εμπλέκονται στην ανάπτυξη του ανθρώπινου καρκίνο της ουροδόχου κύστεως.

Με βάση τα αποτελέσματα από την παρούσα σύνολο δεδομένων μικροσυστοιχίας, έχουμε καθορίσει τις διαφορές στην ανοσολογική απόκριση πρότυπα έκφρασης γονιδίου μεταξύ της κανονικής και MIBC. Δέκα (10) γονίδια (Πίνακας 2) ήταν πάνω ρυθμισμένα με βάση πρότυπα γονιδιακής έκφρασης τους σε MIBC, σε σύγκριση με δείγματα φυσιολογικού βλεννογόνου, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτά τα πάνω ρυθμισμένα γονίδια συνδέονται στενά με την ανάπτυξη του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Κατά το πρώτο στάδιο της μελέτης, από αυτά τα 10 γονίδια που βρήκαμε 3 μεγάλες κυτοκίνες, IL-5, IL-20 και IL-28Α, οι οποίες συμμετέχουν στη μετανάστευση, εισβολή, και ΜΜΡ έκφραση χωρίς να επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, υποδεικνύοντας ένα συντονισμένο πρόγραμμα σύμπλεγμα να επιτρέψει την πρόοδο της TCC όπως προσδιορίζεται από τη μετανάστευση επούλωση της πληγής, δοκιμασία εισβολή, ζυμογραφία, επίπεδα πρωτεΐνης, και τα επίπεδα δραστηριότητας EMSA. Επιπλέον, διαπιστώθηκε επίσης ότι ΜΑΡΚ και σηματοδότηση Jak /Stat ενεργοποιούνται σε καρκινικά κύτταρα κύστης μετά από θεραπεία με IL-5, IL-20 και IL-28Α.

IL-5 ταυτοποιήθηκε αρχικά ως ένα T των β-κυττάρων που αντικαθιστά παράγοντα (TRF), και στη συνέχεια βρέθηκε να ρυθμίζουν την ενεργοποίηση, πολλαπλασιασμό και επιβίωση των ηωσινοφίλων [33]. IL-5 έχει επίσης αποδειχθεί ότι είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής για τη διαφοροποίηση των κυττάρων Β ποντικού [34]. IL-5 υποδοχέα είναι ετεροδιμερές που αποτελείται από α- και β-υπομονάδες. Η α-υπομονάδα είναι συνδέτης-ειδική (IL-5Rα), ενώ η β-υπομονάδα (βc) είναι κοινή σε IL-3 και IL-5 [33], [34]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η IL-5 ενεργοποιημένο Lyn [35], Jak2 /Stat1 [36], ΜΑΡΚ [35], Syk [37], και ΡΙ3Κ [38] σε ηωσινόφιλα. Η ενεργοποίηση του Jak2, Btk κινασών τυροσίνης, ΡΙ3Κ, Shc, Vav, και HS1was συνδέονται με IL-5-επαγόμενο πολλαπλασιασμό των Β κυττάρων [39]. Ο προαγωγός IL-5 που περιέχονται ουσιώδεις παράγοντες μεταγραφής συμπεριλαμβανομένων Sp1, Ε12 /Ε47, Oct-2, και γ /ΕΒΡβ σε Β κύτταρα και τα ηωσινόφιλα [40]. Η χρήση εμβολίων rBCG για τη θεραπεία της ουροδόχου κύστης καρκινωμάτων δεν παρήγαγε TH-2 κυτοκινών τύπου συμπεριλαμβανομένων των IL-5 επίπεδα [41]. Στην παρούσα μελέτη, τόσο η IL-5 και IL-5Rα ανιχνεύθηκαν με RT-PCR και ανοσοστύπωμα σε καρκινικά κύτταρα κύστης. Έχουμε επίσης εντοπίσει την ενεργοποίηση των ERK1 /2, p38MAPK, JNK, JAK1, JAK2, JAK3, Stat1, Stat2, και Stat3 σε καρκινικά κύτταρα κύστης. Η παρατήρησή μας σε αυτό το πείραμα είναι συνεπές με πρόσφατη αναφορά που δείχνει ότι τα κυκλοφορικά επίπεδα της IL-4, IL-5 και IL-10 ήταν σημαντικά υψηλότερα σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης ορό ασθενούς από ότι στα φυσιολογικά δείγματα [19]. Έτσι, οι αυξήσεις σε IL-5 επίπεδα σε αυτή τη μελέτη μπορεί να ευθύνονται για την επαυξημένη ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων κύστης και την ανικανότητά τους να αναγνωρίζονται από φλεγμονώδη.

IL-20, η πλειοτροπική φλεγμονώδης κυτοκίνη, βρίσκεται σε κερατινοκυττάρων και προσδιορίζονται ως μέλος της οικογένειας κυτοκινών IL-10, η οποία περιλαμβάνει IL-10, IL-29, IL-20, IL-22, IL-24 και IL-26 [42], [43]. IL-20 διεγείρει σημάτων μέσω 2 εναλλακτικών ετεροδιμερών συμπλοκών, τα οποία αποτελούνται από είτε IL-20R1 και IL-20R2 ή IL-22R1 και IL-20R2 [42], [43]. Αποτελέσματα από την παρούσα μελέτη έδειξε έκφραση της IL-20 και IL-20R1 σε καρκινικά κύτταρα κύστης. Όσον αφορά την σηματοδότηση, IL-20 επαγόμενη ενεργοποίηση Stat3 στα κερατινοκύτταρα [42]. Μια προηγούμενη έκθεση έδειξε την ενεργοποίηση του ΜΑΡΚ, όπως ERK1 /2, p38 ΜΑΡΚ, και JNK, σε IL-20-κατεργασμένα κύτταρα HUVEC [44]. IL-20 θεραπεία προκάλεσε επίσης την ενεργοποίηση του Jak2 /Stat3 και ERK1 /2 μονοπάτι σε GBM8901 κύτταρα γλοιοβλαστώματος [45]. Τα αποτελέσματά μας από καρκίνο της ουροδόχου κύστης κύτταρα δείχνουν ότι η IL-20 που προκαλείται από την ενεργοποίηση του ERK1 /2 και Jak1, Jak2, Jak3, Stat1, Stat2, και Stat5. Επιπλέον, η IL-20 συσχετίζεται με πολλαπλούς φλεγμονώδεις νόσους [45], [20], συμπεριλαμβανομένης της ψωρίασης, της ρευματοειδούς αρθρίτιδας, της νεφρικής ανεπάρκειας, βλάβη του εγκεφάλου, και η αθηροσκλήρωση.