Αφηρημένο

πολυπλοειδών γιγαντιαία καρκινικά κύτταρα (PGCCs) είναι ένας μορφολογικά διακριτή υποομάδα των ανθρώπινων όγκων κυττάρων με αυξημένη πυρηνική μέγεθος ή πολλαπλούς πυρήνες, αλλά γενικά θεωρούνται ασήμαντες, επειδή υποτίθεται ότι πρέπει να μη διαιρούμενα και έτσι μη βιώσιμα. Έχουμε δείξει πρόσφατα ότι αυτές οι μεγάλες καρκινικά κύτταρα δεν είναι μόνο βιώσιμη αλλά επίσης μπορεί να διαιρέσει ασύμμετρα και να δώσει τον καρκίνο απογόνων κυττάρων με καρκίνο ιδιότητες των βλαστικών όπως μέσω εκκολαπτόμενος διαίρεση. Για περαιτέρω κατανόηση των μοριακών γεγονότων που εμπλέκονται στη ρύθμιση του PGCCs και την παραγωγή απογόνων καρκινικών κυττάρων τους, μπορούμε συγκριτικά αναλύσαμε τα πρωτεομική προφίλ των PGCCs, PGCCs με εκβλάστηση θυγατρικά κύτταρα, και η τακτική τον έλεγχο του καρκίνου κύτταρα από το ΗΕΥ και SKOV3 ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών γραμμές με και χωρίς CoCl

2. Χρησιμοποιήσαμε μια πρωτεομική μεθοδολογία υψηλής απόδοσης iTRAQ που βασίζεται σε συνδυασμό με φασματοσκοπία μάζας ιονισμού συνδυασμό υγρής χρωματογραφίας-ηλεκτροψεκασμού για τον καθορισμό των διαφοροποιημένων ρυθμίζονται πρωτεΐνες. Πραγματοποιήσαμε κηλίδωση Western και η ανοσοϊστοχημική ανάλυση για την επικύρωση των διαφορών στα πρότυπα έκφραση μιας ποικιλίας πρωτεϊνών μεταξύ PGCCs ή εκκολαπτόμενους PGCCs και τακτική καρκινικών κυττάρων που προσδιορίζονται από την προσέγγιση iTRAQ και επίσης μια επιλεγμένη ομάδα πρωτεϊνών από τη βιβλιογραφία. Τα διαφορικά ρυθμιζόμενες πρωτεΐνες περιλαμβάνονται πρωτεΐνες που εμπλέκονται στην απόκριση σε υποξία, στέλεχος παραγωγή κυττάρων, επαναμοντελοποίηση χρωματίνης, ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου, και εισβολή και μετάσταση. Συγκεκριμένα, βρήκαμε ότι HIF-1 και των γνωστών STC1 στόχο της αυξορυθμίζονται στα PGCCs. Επιπλέον, βρήκαμε ότι ένας πίνακας των βλαστικών παράγοντες κυτταρικής ρυθμίσεως και επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά μετάβαση παράγοντες ρυθμιστικών μεταγραφής αυξορρυθμίζεται εκκολαπτόμενους PGCCs, ενώ η έκφραση της ιστόνης 1 οικογένεια του νουκλεοσώματος πρωτεΐνες συνδέτη ήταν σταθερά χαμηλότερα σε PGCCs παρά σε κύτταρα ελέγχου . Έτσι, πρωτεομική πρότυπα έκφρασης παρέχουν πολύτιμες πληροφορίες για τους υποκείμενους μηχανισμούς σχηματισμού PGCC και τη σχέση μεταξύ PGCCs και καρκινικά βλαστικά κύτταρα σε ασθενείς με καρκίνους των ωοθηκών

Παράθεση:. Zhang S, Mercado-Ουρίμπε Ι, Hanash S, Λιου J (2013) iTRAQ-Based πρωτεομική ανάλυση των πολυπλοειδών Giant καρκινικά κύτταρα και φερέλπιδες απόγονοι κύτταρα αποκαλύπτει πολλά διακριτών οδών για ωοθηκών την ανάπτυξη του καρκίνου. PLoS ONE 8 (11): e80120. doi: 10.1371 /journal.pone.0080120

Επιμέλεια: Nanette Η Μητρόπολη, το Πανεπιστήμιο του Μαϊάμι School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 3 Ιούν 2013? Αποδεκτές: 29, Σεπτεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 14 Νοεμ 2013

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Το έργο υποστηρίζεται από την πρόληψη του καρκίνου και Ερευνητικό Ινστιτούτο του Τέξας (CPRIT) Multi-Investigator Grant? Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας R01CA131183-01A2? IP50CA83639 (MD Anderson εξειδικευμένα προγράμματα της ερευνητικής αριστείας [SPORE] στον καρκίνο των ωοθηκών). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

πολυπλοειδών καρκίνου γιγαντιαία κύτταρα (PGCCs) είναι ένα υποσύνολο των μεγάλων άτυπων καρκινικά κύτταρα βρίσκονται κυρίως σε συμπαγείς όγκους. PGCCs είναι ο κύριος συντελεστής για τα επιθηλιακά ετερογένεια του όγκου και περιλαμβάνουν 0,1% έως 20% των όγκων του όγκου, με τα ποσοστά αυτά αυξάνονται με το στάδιο και κακοήθειας [1,2]. Τα πυρηνικά χαρακτηριστικά αυτών των μεγάλων κυττάρων του όγκου, συμπεριλαμβανομένων των πυρηνικών τους μέγεθος και σχήμα, χρωματίνης πρότυπο, τον αριθμό των πυρηνίσκων, και ο αριθμός των πυρήνων, είναι μεταξύ των πλέον κοινώς περιγραφέντα χαρακτηριστικά ιστοπαθολογική ανθρώπινων όγκων. Ο αριθμός των PGCCs συνήθως αυξάνει με την παθολογική βαθμό και το στάδιο [3-5]. Τα πρόσφατα δεδομένα μας έδειξαν ότι PGCCs συμβάλλουν στην στερεά ετερογένεια του όγκου και παίζουν σημαντικό ρόλο στην έναρξη του όγκου, μετάσταση, και χημειοαντίσταση [6] και το σχηματισμό ερυθροειδών κυττάρων από φυσιολογικούς ινοβλάστες και καρκινικά κύτταρα [7]. Ορισμένα φάρμακα χημειοθεραπείας αντιμιτωτικά μπορεί επίσης να αυξήσει το σχηματισμό των PGCCs σε όγκους, και τα PGCCs συχνά θεωρείται ότι είναι στο στάδιο της μιτωτικής καταστροφής και στα πρόθυρα της απόπτωσης [8]. Πολυπλοειδών γιγαντιαία κύτταρα μπορεί επίσης να παρατηρηθεί σε σκελετικούς μυς κατά τη διάρκεια της κανονικής ανάπτυξης, οστεοκλάστες, κύτταρα μολυσμένα με ιό, καλλιέργειες ιστών, η γήρανση (γήρανση) κύτταρα [9], και τόνισε (π.χ., οξειδωτικό ή μεταβολικό στρες) κύτταρα και μπορούν να παραχθούν μέσω κυτταρικής σύντηξης ή κύκλους άκαρπες κυττάρων [10]. PGCCs μπορεί επίσης να επανέλθει σε κανονικό μέγεθος καρκινικά κύτταρα (διπλοειδή κύτταρα καρκίνου) σε μια διαδικασία διαίρεσης ονομάζεται deploidization [11-14] ή neosis [15]. Όλα αυτά τα χαρακτηριστικά δείχνουν ότι PGCCs μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του όγκου. Ωστόσο, PGCCs δεν έχουν προσελκύσει σημαντικές προσοχή στην έρευνα του καρκίνου κοινότητα λόγω ελάχιστα κατανοητή βιολογία τους σε όγκους.

Είναι γνωστό ότι οι όγκοι αναπτύσσονται σε ένα υποξικό περιβάλλον, και υποξία μπορεί να διευκολύνει το σχηματισμό και την διατήρηση του καρκίνου βλαστικών κυττάρων και έτσι, να τονωθεί η ανάπτυξη του όγκου [16-18]. Πρόσφατα, χρησιμοποιήσαμε χλωριούχο κοβάλτιο (COCI

2), ένα υποξία μιμητικό που χρησιμοποιείται ευρέως για τη θεραπεία της αναιμίας [19,20], για να καθαρίσουν και να επιτύχει σταθερή ανάπτυξη του PGCCs που διαφορετικά θα είχαν διαφοροποιηθεί σε κανονικού μεγέθους καρκινικά κύτταρα και απέδειξαν ότι PGCCs έχουν καρκίνο βλαστικών κυττάρων ιδιότητες-όπως [6]. Για την περαιτέρω κατανόηση των υποκείμενων μηχανισμών που εμπλέκονται στη διαφορική ρύθμιση των τακτικών καρκινικών κυττάρων, PGCCs και PGCCs με τους εκκολαπτόμενους θυγατρικά κύτταρα που χρησιμοποιούνται ισοβαρή tagging για τη σχετική και απόλυτη ποσοτικοποίηση (iTRAQ) για τον εντοπισμό διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών σε PGCCs και εκκολαπτόμενους κύτταρα απογόνους χρησιμοποιώντας το HEY και κυτταρικές σειρές SKOV3 ως συστήματα μοντέλα.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Η φροντίδα και χρήση των ποντικών εγκρίθηκαν από τη Φροντίδα των Ζώων και Χρήση Επιτροπή MD Anderson Θεσμική.

Καρκίνος κυτταρικές γραμμές και καλλιέργεια

Οι ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών ΗΕΥ και SKOV3 αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection. Η κουλτούρα της σανού και κύτταρα SKOV3 περιγράφηκε προηγουμένως από την ομάδα μας [21]. Οι κυτταρικές γραμμές καρκίνου του δύο διατηρήθηκαν σε ελάχιστο βασικό μέσο πλήρης Eagle (ΕΜΕΜ), η οποία είναι ελάχιστο αναγκαίο μέσο συμπληρωμένο με ορό εμβρύου βοός και αντιβιοτικά.

Παραγωγή και καθαρισμός της PGCCs

HEY και SKOV3 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πλήρες ΕΜΕΜ σε φιάλες Τ75 έως ότου έφθασαν το 90% συρροή. Για PGCC γενεά, CoCl

2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA) προστέθηκε στις φιάλες σε μια τελική συγκέντρωση των 300 μΜ και καλλιεργήθηκαν για 48-72 ώρες, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [6]. Αφού ξεπλύθηκαν με 1 χ αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS), τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε κανονικό ΕΜΕΜ. Οι περισσότεροι κανονικού μεγέθους HEY κύτταρα πέθαναν μετά από αυτή τη θεραπεία, και μόνο διάσπαρτα PGCCs επέζησε μετά από θεραπεία με CoCl

2. Δέκα έως 14 ημέρες αργότερα, οι PGCCs ανακτώνται από τη θεραπεία με CoCl

2 και εκβλάστηση θυγατρικά κύτταρα που προέρχονται από PGCCs παρατηρήθηκαν και φωτογραφήθηκαν. Μετά από τρεις φορές από θεραπείες με CoCl

2 (να αποκτήσει αρκετή καθαρίζεται PGCCs), φιάλες καθαρού PGCCs (1 × 10

6) συλλέχθηκαν για κηλίδωση Western και ανάλυση iTRAQ πριν από τις PGCCs δημιουργούνται θυγατρικά κύτταρα. Όταν οι PGCCs καλλιεργήθηκαν σε πλήρες θρεπτικό μέσο και ανακτάται από τρεις ή τέσσερις θεραπείες με CoCl

2, PGCCs (4 × 10

4) με πρόσφατα εκκολαπτόμενους θυγατρικά κύτταρα (1 × 10

5) (περίπου 30% PGCCs και 70% εκβλάστηση θυγατρικά κύτταρα) χρησιμοποιήθηκαν για την εκχύλιση πρωτεϊνών και μετέπειτα ανάλυση.

Παρασκευή εκχυλισμάτων πρωτεΐνης

Φρέσκα σφαιρίδια καθαρισμένων PGCCs, 30% ανάκτηση PGCCs και 70% μικρά θυγατρικά κύτταρα, και κύτταρα ελέγχου επαναιωρήθηκαν σε 1 mL ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης κυττάρου (ProteaPrep Κυττάρου Λύσης Kit ? Protea Biosciences, Morgantown, WV, USA) και στη συνέχεια φυγοκεντρείται στα 12.000 χ

g

για 5 λεπτά στους 4 ° C. Μετά από δύο πλύσεις, τα κυτταρικά σφαιρίδια επαναιωρήθηκαν σε 500 μL ρυθμιστικού ProteaPrep λύσης κυττάρου και επωάστηκαν σε πάγο για 30 λεπτά. Διαλείπουσα υπερήχηση χρησιμοποιήθηκε για να λυθούν πλήρως τα κύτταρα? Το κυτταρόλυμα φυγοκεντρήθηκε στα 12.000 χ

g

για 10 λεπτά στους 4 ° C, και το υπερκείμενο μεταφέρθηκε σε έναν καθαρό σωλήνα 1,5 mL. Πριν από την αποθήκευση του υπερκειμένου στους -70 ° C, ανιονικό επιφανειοδραστικό οξύ ασταθούς II απορρυπαντικού (Protea Biosciences) συσσώρευση στο υπερκείμενο αποικοδομείται χρησιμοποιώντας μυρμηκικό οξύ.

iTRAQ σήμανση των δειγμάτων πρωτεΐνης

iTRAQ με βάση πρωτεομική ανάλυση έγινε από το Protea Βιοεπιστημών (Παρακαλούμε ανατρέξτε στις οδηγίες του κατασκευαστή). Εν συντομία, μετά μετρήθηκαν οι συγκεντρώσεις των πέντε δειγμάτων κάθε πρωτεΐνης αναλύθηκαν, τα δείγματα κατακρημνίστηκαν με ακετόνη σε ένα 6: 1 αναλογία (ακετόνη: δείγμα), και η συνολική πρωτεΐνη απομονώνει από πέντε δείγματα επαναιωρήθηκαν σε λιγότερο από 60 μι διάλυση ρυθμιστικού και 1 μL του μετουσιωτικού από το κιτ iTRAQ. Στη συνέχεια, 2 μΙ αναγωγικού παράγοντα και 1 μl παρεμποδιστικού κυστεΐνης αντιδραστηρίου προστέθηκαν σε κάθε ένα από τα δείγματα. Μετά την πέψη με την προσθήκη 2 μg θρυψίνη, τα δείγματα σημάνθηκαν με αντιδραστήρια iTRAQ (Πίνακας S1) προσθέτοντας το περιεχόμενο του φιαλιδίου iTRAQ στα διαλύματα δείγματος (Protea Biosciences). Τα αντιδραστήρια iTRAQ ανασυστάθηκαν με 50 μL αιθανόλης. Αφού προστέθηκε το φιαλίδιο iTRAQ, τα δείγματα επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 60 λεπτά. 100 μL απιονισμένου νερού προστέθηκαν σε κάθε φιαλίδιο δείγμα, και τα δείγματα επωάστηκαν για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα δείγματα πρέπει να συγκριθούν με κάθε άλλο συνενώθηκαν σε μια ομάδα και λυοφιλοποιήθηκαν και να ανασυσταθεί σε ισχυρά ανταλλαγής κατιόντων (SCX) ρυθμιστικό ανασύσταση.

Υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία κλασματοποίησης

Τα δείγματα πρωτεΐνης κλασματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας SCX ProteaTip SpinTips (Protea Biosciences). Οι συμβουλές πλύθηκαν πρώτα δύο φορές με την προσθήκη 50 μL του SCX διάλυμα ανασύστασης (Protea Biosciences). Τα δείγματα στη συνέχεια φορτώθηκαν σε συμβουλές γύρισμα και φυγοκεντρήθηκε στις 6000 rpm για 3 λεπτά και στη συνέχεια πλένονται με προσθήκη 50 μL του διαλύματος ανασύστασης στην κορυφή του άκρου περιστροφής. Τα δείγματα στις άκρες σπιν στη συνέχεια πλύθηκαν και πάλι με διάλυμα ανασύστασης SCX και εκλούστηκε διαδοχικά με 150 μL του διαλύματος έκλουσης που αποτελείται από 20, 40, 60, 80, 100, 150, 250, ή 500 mM μυρμηκικό αμμώνιο σε 10% ακετονιτρίλιο. Οκτώ κλάσματα που αντιστοιχούν σε κάθε συγκέντρωση άλατος συλλέχθηκαν. Κάθε κλάσμα καθαρίστηκε με επαναλαμβανόμενη λυοφίλιση και κατεργασία με οξύ. Μετά την τελική λυοφιλοποίηση, τα προϊόντα της πέψης ανασυστάθηκαν σε 40 μΙ ακετονιτρίλιο /νερό /μυρμηκικό οξύ (5% /95% /0,1%)

Υγρή χρωματογραφία-ιονισμού ηλεκτροψεκασμού φασματοσκοπία μάζας

φασματομετρίας μάζας ( MS) ανάλυση των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ενός συστήματος QTRAP 5500 (Applied Biosystems, Τορόντο, Καναδάς) για την απόκτηση των κρατών μελών και παράλληλα MS (MS /MS) δεδομένων. Τα πεπτίδια φορτώθηκαν σε Kinetex 100,0 στήλη C18 × 2,1-mm (100 Α, 2.6 μm? Phenomenex, Torrance, CA, USA) και στη συνέχεια υποβάλλεται στην έκλουση κινητής φάσης σε ρυθμιστικό διάλυμα Α και το ρυθμιστικό διάλυμα Β (βλέπε πίνακα S2 για λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά έκλουση). Τα πεπτίδια εκλούστηκαν με ρυθμό ροής 200 μΕ /λεπτό. Η υγρή χρωματογραφία έκλουσμα που κατευθύνεται σε ένα πηγή ιονισμού ηλεκτροψεκασμού για ποσοτική χρόνο-πτήσης MS ανάλυση. Ο ιονισμός ηλεκτροψεκασμού διεξήχθη για απόκτηση πληροφοριών εξαρτώμενη στον τρόπο θετικού ιόντος-με τάση ψεκασμού 5 kV και επιλεγμένων περιοχή μάζας 100-1000

m

/

z

. Το σύστημα QTRAP 5500 λειτουργεί με τρόπο απόκτησης δεδομένων-εξαρτώμενη. Τα τρία πιο άφθονα χρεώνονται πεπτίδια πάνω από ένα όριο 5-καταμέτρηση επιλέχθηκαν για MS /MS.

Τα πεπτίδια προσδιοριστούν και να ποσοτικοποιηθούν χρησιμοποιώντας ΑΒΙ λογισμικού Πρωτεΐνη ProteinPilot 3.0 (Applied Biosystems, CA, USA). Ο αλγόριθμος Paragon στο λογισμικό ProteinPilot χρησιμοποιήθηκε για την ταυτοποίηση πεπτιδίων. Κάθε φάσμα MS /MS ερευνήθηκε κατά το Διεθνές Πρωτεΐνη Δείκτης βάση δεδομένων ανθρώπινη πρωτεΐνη, και οι πρωτεΐνες που προσδιορίζονται με 95% εμπιστοσύνη έγιναν αποδεκτές με βάση τις βαθμολογίες εμπιστοσύνη τους λαμβάνονται με τη χρήση του λογισμικού ProteinPilot. Η επί τοις εκατό κάλυψη υπολογίστηκε ως το ποσοστό των αμινοξέων που ταιριάζουν από προσδιορίζονται πεπτιδίων έχοντας εμπιστοσύνη μεγαλύτερη από 0 διαιρούμενο με το συνολικό αριθμό των αμινοξέων στην αλληλουχία.

Ανοσοϊστοχημική χρώση PGCC προερχόμενων όγκων σε ποντίκια

Ο εμβολιασμός των γυμνών ποντικών με κανονικό ΗΕΥ καρκινικά κύτταρα ή PGCCs και η επακόλουθη ανάπτυξη του όγκου περιγράφηκαν προηγουμένως [6]. Δέκα PGCCs και 1 × 10

6 τακτική ΗΕΥ καρκινικά κύτταρα για κάθε γυμνούς ποντικούς εγχύθηκαν υποδορίως στα πλευρά των ποντικών. Οι ποντικοί θανατώθηκαν και οι όγκοι αφαιρούνται όταν η μέση διάμετρος του όγκου έφθασε 0,5-1,0 cm. Η ανοσοϊστοχημική χρώση του ιστού του όγκου πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της μεθόδου αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [6]. Εγκλεισμένα σε παραφίνη ιστός του όγκου αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν χρησιμοποιώντας διαβαθμισμένη αραιώσεις αλκοόλης σε νερό. Μετά από πλύση με PBS, τα τμήματα του ιστού του όγκου υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου σε 0,01 Μ ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικού νατρίου (ρΗ 6,0) σε ένα αυτόκλειστο για 10 λεπτά. Μετά μπλοκαρίστηκαν ενδογενή δράση υπεροξειδάσης και μη ειδική σύνδεση στα τμήματα πρωτεϊνών, οι τομές επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C σε ένα υγροποιημένο θάλαμο (βλέπε Πίνακα S3 για λεπτομερείς πληροφορίες αντίσωμα). Εμείς στη συνέχεια κατεργάζεται τα δείγματα με IgG αντι-κουνελιού βιοτινυλιωμένο κατσίκα, και το σήμα ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας σημασμένο στρεπταβιδίνης-βιοτίνης σύστημα με την παρουσία του χρωμογόνου 3,3′-διαμινοβενζιδίνη. Οι πυρήνες με αιματοξυλίνη.

Western ανάλυση κηλίδος

Με βάση τα αποτελέσματα πρωτεομική, μια ομάδα δυνητικά σημαντικές πρωτεΐνες που επιλέγονται από την βιβλιογραφία προσδιορίσθηκαν με στύπωση Western. Κυτταρικά εκχυλίσματα καθαρισμένου PGCCs, PGCCs με εκβλάστηση θυγατρικά κύτταρα, και κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε λύση σε ένα παγωμένο ρυθμιστικό διάλυμα. Πρωτεΐνες στα κύτταρα διαχωρίστηκαν σε ένα 10% δωδεκυλοθειϊκού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου και μεταφέρθηκαν σε μια μεμβράνη φθοριούχο πολυβινυλιδίνιο (GE Healthcare, Waukesha, WI, USA). Αφού αποκλείστηκαν με 5% άπαχο γάλα σε Tris-ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα με 0.1% Tween-20 για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, οι μεμβράνες επωάστηκαν με τα κατάλληλα πρωτεύοντα αντισώματα στους 4 ° C όλη τη νύκτα και στη συνέχεια με δευτερογενή αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου για 1 h. Η έκφραση πρωτεΐνης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ECL προαναμεμειγμένα Plus (GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, ΡΑ, USA) και αναπτύχθηκε με τη χρήση ενός επεξεργαστή φιλμ Χ-ΟΜΑΤ 2000 (Eastman Kodak, Rochester, ΝΥ, USA). Πειράματα Όλα Western blot είχαν αναπαραχθεί, και β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος πρωτεΐνη-φόρτωσης.

Αποτελέσματα

CoCl

2 προκαλούμενη σχηματισμό PGCCs

Όπως περιγράφηκε προηγουμένως, ο σχηματισμός του PGCCs μπορεί να επαχθεί με αγωγή με CoCl

2 [6 ]. Υψηλές συγκεντρώσεις CoCl

2 επιλεκτικά σκοτώνουν διπλοειδή κύτταρα, ενώ χαμηλές συγκεντρώσεις μπορεί να προκαλέσει το σχηματισμό PGCC μέσω σύντηξης κυττάρων. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, ο έλεγχος ΗΕΥ κύτταρα ήταν ακανόνιστο σχήμα με μικρές αποφύσεις. Η θεραπεία με CoCl

2 σε μια υψηλή συγκέντρωση (300 μΜ για 72 και 48 ώρες για ΗΕΥ και κύτταρα SKOV3, αντίστοιχα) σκοτώθηκαν περισσότερα από τα διαφοροποιημένα κύτταρα, και PGCCs μπορούσε να απεικονιστεί σαφώς αφού αφαιρεθούν αιωρούμενα νεκρά κύτταρα. Μετά τις καλλιέργειες που ανακτώνται από CoCl

2 θεραπεία, τα επιζώντα PGCCs δημιουργούνται θυγατρικά κύτταρα μέσω εκβλάστηση όταν καλλιεργούνται σε πλήρες μέσο με 10% ορό [6].

(Α) Έλεγχος HEY κύτταρα. (Β) HEY PGCCs μετά τη θεραπεία με CoCl

2. (C) HEY κόρη PGCCs παραγωγής κύτταρα μέσω εκκολαπτόμενος (μαύρα βέλη). (D) Κύτταρα ελέγχου SKOV3. (Ε) Skov3 PGCCs μετά τη θεραπεία με CoCl

2. (F) Skov3 PGCCs παραγωγής θυγατρικά κύτταρα μέσω εκκολαπτόμενος (μαύρα βέλη).

Η

Αναγνώριση των πρωτεϊνών και η σχετική πρωτεΐνη ποσοτικοποίηση σε PGCCs και καρκινικά κύτταρα ελέγχου

Για τον προσδιορισμό της παγκόσμιας πρωτεΐνη υπογραφή που σχετίζονται με ο σχηματισμός των PGCCs, πραγματοποιήσαμε πρωτεομική ανάλυση καθαρισμένης PGCCs και συγκρίθηκε η έκφραση πρωτεΐνης σε αυτά με εκείνα σε κύτταρα ελέγχου και PGCCs υποβάλλονται εκβλάστηση. Εμείς απομονωθεί συνολική πρωτεϊνικά εκχυλίσματα από HEY PGCCs μόνη της, Hey PGCCs με εκκολαπτόμενους θυγατρικά κύτταρα, ελέγχει HEY κύτταρα μόνο, SKOV3 PGCCs, και να ελέγχουν τα κύτταρα SKOV3. Οι πρωτεΐνες υποβλήθηκαν σε πέψη με θρυψίνη, επισημασμένα με αντιδραστήρια iTRAQ (114-117), και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας διαδοχική φασματομετρία μάζας για τον εντοπισμό διαφορών στα επίπεδα πρωτεΐνης μεταξύ αυτών των ομάδων. Για να αυξήσετε την κάλυψη των ταυτοποίηση πρωτεϊνών και /ή την εμπιστοσύνη στα δεδομένα που δημιουργούνται, τα δείγματα ήταν iTRAQ-επισημασμένο εις διπλούν ως εξής: HEY PGCCs, 114? HEY PGCCs με εκκολαπτόμενους, 115? ελέγχουν HEY, 116? SKOV3 PGCCs, 116? και τον έλεγχο SKOV3, 117. Χρησιμοποιώντας iTRAQ, εντοπίσαμε και διαλογή των διαφορετικών πρωτεϊνών σύμφωνα με Αχρησιμοποίητα ProtScore. Η αναλογία των διαφόρων αντιδραστηρίων επισήμανσης iTRAQ έδειξε την σχετική αφθονία των πρωτεϊνών. Συνολικά 1.188 μοναδικές πρωτεΐνες ταυτοποιήθηκαν με 95% εμπιστοσύνη από τον αλγόριθμο αναζήτησης ProteinPilot και να συνδυαστούν με πρωτεΐνες στη διεθνή βάση δεδομένων ανθρώπινη πρωτεΐνη Πρωτεΐνη Index. Σχετική ποσοτικοποίηση πεπτιδίου διεξήχθη με ProteinPilot 3,0 λογισμικού με στατιστική ανάλυση (

P

& lt? 0,05) για την επιλογή των δυνητικά διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών. Σε HEY PGCCs, 64 πρωτεΐνες με διαφορετικό τρόπο εκφράζεται σε σύγκριση με PGCCs με εκκολαπτόμενους θυγατρικά κύτταρα και κύτταρα ελέγχου? 25 πρωτεΐνες επάνω ρυθμισμένη σε PGCCs και 39 ρυθμίστηκαν προς τα κάτω (Πίνακας 1). Σε SKOV3 PGCCs, 62 πρωτεΐνες διαφορετικά εκφράζονται σε σύγκριση με κύτταρα ελέγχου, με 40 επάνω ρυθμισμένη και 22 ρυθμισμένα προς τα κάτω (Πίνακας 2). Τα δεδομένα iTRAQ από τους διάφορους τύπους κυττάρων του HEY θα μπορούσαν να ταξινομηθούν σε εννέα λειτουργικές κατηγορίες χρησιμοποιώντας το σύστημα ταξινόμησης PANTHER (www.pantherdb.org? Σχήμα S1), συμπεριλαμβανομένων πρόσδεσης, καταλυτική δραστικότητα, δραστικότητα ρυθμιστής ένζυμο, δράση διαύλου ιόντων, κινητική δραστηριότητα, δομικά μόριο δραστηριότητα, δραστηριότητα ρυθμιστής μεταγραφής, δραστηριότητα ρυθμιστική της μετάφρασης και της δραστηριότητας μεταφορέα

προσχώρησης

πρωτεΐνη Όνομα

Λειτουργία

πεπτίδια (95%)

% Κάλυψη

Λόγος. (Δείγμα 1: 3) αξία

P (Δείγμα 1: 3

Ratio (Δείγμα 2: 3) τιμή

P (Δείγμα 2: 3)

ρυθμίζεται αυξητικά (25) IPI00909303.2CTSB cDNA FLJ58073, μέτρια παρόμοια με την καθεψίνη Β ( *) Λυσοσωμική κυστεΐνη protease2404.701.75E-024.561.46E-02IPI00011229.1CTSD καθεψίνη DTumor invasiveness132.774.165.22E-031.778.00E-02IPI00183695.9S100A10 πρωτεΐνη S100-A10cell εξέλιξη του κύκλου και differentiation148.453.386.16E-024.294.91E-02IPI00845339. 1HSPA1B? HSPA1A cDNA FLJ54392, πολύ παρόμοια με θερμικού σοκ 70 kDa πρωτεΐνη 1 (*) αναδίπλωση πρωτεϊνών, και βοηθούν στην προστασία των κυττάρων από stress849.453.267.62E-061.443.54E-02IPI00737171.1LOC729317 παρόμοιες με την τάση που εξαρτάται από το κανάλι ανιόντων 2Mitochondria μεσολάβηση apoptosis421.842.718.39E-042.658.23E-02IPI00216308.5VDAC1 Τάση-εξαρτώμενο ανιόντων επιλεκτική πρωτεΐνη κανάλι 1Mitochondria μεσολάβηση apoptosis129.332.538.72E-021.681.73E-02IPI00220827.5TMSB10 θυμοσίνη βήτα-10Cytoskeleton479.552.154.82E-012.611.33E- 02IPI00010402.2SH3BGRL3 θεωρούμενα μη χαρακτηρισμένα proteinpotentially εμπλέκονται στην αντίσταση των κυττάρων στην απόπτωση που προκαλείται από τον TNF-α458.412.141.36E-052.191.52E-03IPI00186711.4PLEC Ισόμορφης 2 του Plectin (*) ένα σύνδεσμο μεταξύ των τριών βασικών συστατικών του cytoskeleton433. 672.042.02E-031.781.81E-02IPI00020984.2CANX cDNA FLJ55574, πολύ παρόμοια με τα μόρια CalnexinChaperone (βοηθώντας αναδίπλωση των πρωτεϊνών και του ελέγχου της ποιότητας) 231.901.981.38E-012.424.26E-02IPI00940656.1LOC723972? ANP32A 28 kDa proteinInhibitor 1 του PP2A443.721.902. 36Ε-031.851.55E-02IPI00872814.1MSN (μοεσίνη) 68 kDa proteinCross συνδετήρες μεταξύ των μεμβρανών του πλάσματος και η ακτίνη που βασίζεται παράγοντα έναρξης cytoskeletons443.061.892.20E-041.794.65E-02IPI00025491.1EIF4A1 ευκαρυωτικά 4A-IProtein synthesis225.371.645.89E-030,969 .17E-01IPI00220362.5HSPE1 10 kDa πρωτεΐνη θερμικού σοκ, μιτοχονδριακό (*) Μοριακή chaperones1081.371.601.84E-020.979.53E-01IPI00019502.3MYH9 Ισόμορφης 1 της μυοσίνης-9 (*) σύσπαση των μυών και των ευκαρυωτικών motility233.521.574.19E-021,274 .70E-01IPI00795408.1RPL23 15 kDa proteinRibosomal protein355.711.521.68E-020.895.64E-01IPI00012442.1G3BP1 Ras ΘΤΡάσης-ενεργοποίηση πρωτεϊνών δέσμευσης πρωτεϊνών 1RNA δέσμευσης proteins333.481.503.45E-021.058.64E-01IPI00018352.1UCHL1 ουμπικουϊτίνη καρβοξυτελικές υδρολάσης ισοενζύμου L1Protein μετα-μεταφραστική modification260.091.434.29E-021.153.60E-02IPI00789551.1SNHG4? MATR3 θεωρούμενα μη χαρακτηρισμένα πρωτεΐνη MATR3Interaction με πρωτεΐνες πυρηνικής μήτρας για να σχηματίσουν το fibrogranular network431.841.267.42E-011.454.94E-02IPI00021405.3LMNA Ισόμορφης Α Prelamin -A /CReassembly του πυρηνικού φακέλου και κυττάρων division1570.481.247.53E-031.057.28E-01IPI00294578.1TGM2 Ισόμορφης 1 πρωτεΐνης-γλουταμίνη γ-γλουταμυλτρανσφεράση 2absorption και secretion321.401.249.07E-031.213.24E-01IPI00021812.2AHNAK νευροβλαστών differentiation- πρωτεΐνη που συνδέεται με AHNAK (*) Η προεξοχή ψευδοποδίου και migration9084.771.204.81E-021.431.18E-02IPI00099550.1UBQLN1 κυττάρων Ισόμορφης 1 του Ubiquilin-1Protein μετα-μεταφραστική modification222.241.189.96E-020.664.57E-02IPI00916861.1MDH1 θεωρούμενα μη χαρακτηρισμένα πρωτεΐνη MDH1An ένζυμο που καταλύει την οξείδωση του μηλικού 134.321.115.28E-010.668.16E-03IPI00927101.1RPSA? RPSAP15? SNORA62? SNORA6 Υποθετικές μη χαρακτηρισμένα πρωτεΐνη RPSANon-ιντεγκρίνης οικογένεια, υποδοχέα λαμινίνης 1.231.821.073.88E-010.401.30E-02Downregulated (39) IPI00217030 .10RPS4X 40S ριβοσωμικής πρωτεΐνης S4, Χ isoformS4E οικογένεια ριβοσωμικού proteins.150.190.988.27E-010.434.20E-02IPI00003362.2HSPA5 HSPA5 proteinMolecular chaperones1454.200.955.95E-010.774.22E-02IPI00554788.5KRT18 κερατίνη, τύπου Ι κυτταροσκελετού 18Α πρωτεΐνη κερατίνη σχετικές με εκκριτική epithelia853.260.883.80E-020.791.58E-01IPI00003865.1HSPA8 Ισόμορφης 1 του θερμικού σοκ συγγενή πρωτεΐνη 71 kDa (*) Μοριακή συνοδούς και ως ΑΤΡ στην αποσυναρμολόγηση των clathrin επικαλυμμένα vesicles1156.660.843.24E-010.448.60E- 04IPI00646304.4PPIB πεπτιδυλο-προλυλο cis-trans ισομεράσης BApoptotic και νεκρωτικό κυτταρικό death255.560.832.00E-010.491.41E-03IPI00396485.3EEF1A1 παράγοντα επιμήκυνσης 1-α-1 (*) Μετάφραση και πυρηνική εξαγωγή proteins1157.360.811.24E-010.405.84E -03IPI00010204.1SRSF3 σερίνης /αργινίνης πλούσια σε παράγοντα ματίσματος 3RNA splicing262.200.813.40E-020.756.19E-01IPI00909232.1HNRNPC cDNA FLJ53542, πολύ παρόμοια με ετερογενείς πυρηνικής ριβονουκλεοπρωτεΐνης CTranscription566.320.798.86E-020.541.71E-02IPI00472119.2- 30 kDa proteinOther450.000.751.33E-020.582.80E-02IPI00025252.1PDIA3 πρωτεΐνη δισουλφίδιο ισομεράση A3Other330.100.753.20E-010.673.85E-02IPI00290460.3EIF3G ευκαρυωτικά έναρξη της μετάφρασης συντελεστής 3 υπομονάδα GProtein synthesis118.440.751.95E-020.442.14E-01IPI00383296.5HNRNPM ισομορφή 2 Ετερογενών πυρηνικών ριβονουκλεοπρωτεϊνικού MProtein synthesis661.220.741.81E-030.674.79E-02IPI00784154.1HSPD1 60 kDa πρωτεΐνη θερμικού σοκ, mitochondrialMolecular chaperones1356.200.723.32E-020.607.56E-02IPI00216691.5PFN1 Profilin-1Cell motility1092.140.721.06E-010,414 .52E-02IPI00465248.5ENO1 Ισόμορφης αλφα-ενολάσης της alpha-enolaseOther2274.420.711.51E-040.418.15E-03IPI00910458.1HNRNPK cDNA FLJ54552, πολύ παρόμοια με ετερογενείς πυρηνικής ριβονουκλεοπρωτεΐνης KProtein synthesis665.830.699.61E-020.461.39E-02IPI00479191.2HNRNPH1 51 kDa proteinOther548.730.691.38E-010.234.10E-02IPI00554648.3KRT8 κερατίνη, τύπου ΙΙ κυτταροσκελετού 8Cell skeletal655.690.647.05E-020.352.24E-03IPI00382470.3HSP90AA1 Ισόμορφης 2 της πρωτεϊνών θερμικού σοκ HSP 90-alphaMolecular chaperones941.220.621.20E-010,582 .89E-02IPI00215780.5RPS19 40S ριβοσωμικής πρωτεΐνης S19Protein synthesis562.070.602.58E-020.274.04E-02IPI00020599.1CALR CalreticulinPromoting μακροφάγα να καταπιεί τα επικίνδυνα καρκινικά πρωτεΐνη cells331.650.584.41E-040.835.25E-01IPI00008524.1PABPC1 Ισόμορφης 1 πολυαδενυλικών δεσμευτική 1Μεταφράσεις initiation533.650.547.06E-040.517.02E-02IPI00010740.1SFPQ Ισόμορφης Long του παράγοντα Συγκόλληση, προλίνη και γλουταμίνη-richProtein synthesis347.810.542.56E-030.481.33E-01IPI00005087.1TMOD3 τροπομοντουλίνης-3127.270.549.94E-031.106.73E-01IPI00012493 .1RPS20 40S ριβοσωμική πρωτεΐνη S20Protein synthesis147.900.534.10E-020.422.01E-01IPI00465365.4HNRNPA1 Ισόμορφης Α1-Α Ετερογενών πυρηνικών ριβονουκλεοπρωτεϊνικού A1Protein synthesis1281.560.516.02E-040.463.10E-01IPI00010779.4TPM4 Ισόμορφης 1 του τροπομυοσίνη άλφα-4 chainCell motility887 .500.471.42E-021.591.75E-01IPI00027834.3HNRNPL ετερογενείς πυρηνικής ριβονουκλεοπρωτεΐνης LProtein synthesis129.710.474.74E-020.572.79E-01IPI00396378.3HNRNPA2B1 Ισόμορφης Β1 Ετερογενών πυρηνικών ριβονουκλεοπρωτείνες Α2 /B1Protein synthesis1271.390.467.20E-030.392.49E-03IPI00419585. 9PPIA πεπτιδυλο-προλυλο cis-trans ισομεράσης AApoptotic και νεκρωτικές death992.730.464.23E-030.372.04E-02IPI00796366.2MYL6 κυττάρων cDNA FLJ56329, πολύ παρόμοια με μυοσίνης φως πολυπεπτίδιο 6 στοιχείων motility255.040.452.54E-021.171.84E-01IPI00749113.2DUT Ισόμορφης 3 δεοξυουριδίνης 5′-τριφωσφορική nucleotidohydrolase, mitochondrialCycle πρωτεΐνης ομάδας DNA repair142.060.451.67E-010.572.32E-02IPI00419258.4HMGB1 υψηλής κινητικότητας B1In ο πυρήνας αλληλεπιδρά με νουκλεοσώματα, παράγοντες μεταγραφής και ιστόνες, οργανώνει το DNA και ρυθμίζει transcription.550.230.446.41 E-021.744.03E-03IPI00410693.4SERBP1 SERPINE1 mRNA πρωτεΐνης σύνδεσης 1, ισομορφή CRA_dInteract με CHD3 οποίο είναι ένα από τα συστατικά ενός Protein synthesis333 δεακετυλάσης ιστόνης complex348.600.442.48E-040.642.95E-01IPI00966060.1SYNCRIP SYNCRIP πρωτεΐνη (θραύσμα). 330.441.52E-020.261.77E-04IPI00479997.4STMN1 StathminMicrotubule αποσυναρμολόγηση και κυττάρων cycle346.310.276.36E-030.513.94E-02IPI00217468.3HIST1H1B ιστόνης H1.5Nucleosome δομή της χρωμοσωμικής fiber980.090.263.88E-021.185.91E-01IPI00217465.5HIST1H1C ιστόνης H1.2Nucleosome δομή της χρωμοσωμικής fiber1182.160.231.27E-021.145.41E-01IPI00217466.3HIST1H1D ιστόνης H1.3Nucleosome δομή της χρωμοσωμικής fiber1077.830.232.02E-020.897.04E-01Table 1. Πρωτεΐνες διαφορικά εκφρασμένων Μεταξύ HEY PGCCs, HEY PGCCs . με φερέλπιδες και ελέγχου HEY

CSV CSV Κατεβάστε προσχώρησης

πρωτεΐνη Όνομα

Λειτουργία

πεπτίδια (95%)

% Κάλυψη

Λόγος (Δείγμα PGCC: έλεγχος)

P αξία

απορυθμίζεται πρωτεΐνες (40) IPI: IPI00923597.2NDRG1 cDNA FLJ39243 ΧΟ, κλώνος OCBBF2008283, πολύ παρόμοια με πρωτεΐνη NDRG1Increase φωσφορυλίωση της NEU /ΕΚΒΒ2 τυροσινικής κινάσης του υποδοχέα και επάγει την ανάπτυξη και διαφοροποίηση των cells528.296.493.94E-03IPI: IPI00845339 .1HSPA1B? HSPA1A cDNA FLJ54392, πολύ παρόμοια με θερμικού σοκ 70 kDa πρωτεΐνη 1Important για αναδίπλωση πρωτεϊνών, και βοηθούν στην προστασία των κυττάρων από stress1245.875.152.95E-04IPI: IPI00169383.3PGK1 φωσφογλυκερικής κινάσης 1 είναι ένα ένζυμο που εμπλέκεται στην glycolysis1172.662.491.36E- 03IPI: IPI00479186.7PKM2 Ισόμορφης Μ2 του πυροσταφυλική κινάση ισοενζύμων M1 /​​M2M2-ΡΚ είναι ένας κυτοσολικό ένζυμο που συμμετέχει στη φωσφορυλίωση ιστόνης 1.1874.392.431.40E-07IPI: IPI00219018.7GAPDH αφυδρογονάση 3-φωσφορικής dehydrogenaseAn ένζυμο που σχετίζονται με την γλυκόλυση 1577.312. 331.51E-04IPI: IPI00015947.5DNAJB1 DnaJ ομόλογο υποοικογένεια μέλος Β 1Interact με STUB1 και HSP (πρωτεΐνη θερμικού σοκ) A4132.622.171.27E-02IPI: IPI00302592.2FLNA Ισόμορφης 2 του Filamin-AParticipates στην σταθεροποίηση των πρωτεϊνών μεμβράνης για την ακτίνη cytoskeleton1945.622.163.50E-02IPI: IPI00018140.3SYNCRIP ισόμορφης 1 Ετερογενών πυρηνικών ριβονουκλεοπρωτεϊνικού QInteract με ACF, APOBEC1, SYT7 και SYT9126.652.114.37E-02IPI: IPI00947127.1LDHA L-γαλακτική αφυδρογονάση Ένα ένζυμο αλυσίδα ισομορφή 3AN που σχετίζονται με glycolysis859.002.071 .65E-05IPI: IPI00022774.3VCP Μεταβατικές ενδοπλασματικό δίκτυο ATPasePutative ΑΤΡ-δεσμευτικές πρωτεΐνες κυστιδίων μεταφοράς και fusion642.062.072.67E-03IPI: IPI00414676.6HSP90AB1 πρωτεϊνών θερμικού σοκ HSP 90-betaMolecular chaperones852.352.064.19E-03IPI: IPI00298994.6TLN1 Talin- 1Assembly των νημάτων ακτίνης και την εξάπλωση και τη μετανάστευση των κυττάρων 330.262.042.55E-03IPI: IPI00396485.3EEF1A1 παράγοντα επιμήκυνσης 1-α-1 (*) Μετάφραση και πυρηνική εξαγωγή proteins1157.362.021.77E-04IPI: IPI00218319.3TPM3 Ισόμορφης 2 του τροπομυοσίνη άλφα -3 συστολή chainMuscle και η κυτταροσκελετού των μη μυϊκών cells765.732.006.43E-04IPI: IPI00900293.1FLNB filamin-Β ισομορφή επικοινωνίας 1Intracellular και σηματοδότηση με εγκάρσια σύνδεση πρωτεΐνης actin1134.181.998.81E-06IPI: IPI00465248.5ENO1 ισόμορφης α- ενολάση της Alpha-enolaseA γλυκολυτικό enzyme2784.561.969.69E-07IPI: IPI00003865.1HSPA8 Ισόμορφης 1 του θερμικού σοκ συγγενή πρωτεΐνη 71 kDa (*) Μοριακή συνοδούς και ως ΑΤΡ στην αποσυναρμολόγηση των clathrin επικαλυμμένα vesicles1455.571.862.00E-04IPI: IPI00019502.3MYH9 Ισόμορφης 1 της μυοσίνης-9 (*) σύσπαση των μυών και των ευκαρυωτικών motility538.981.841.17E-02IPI: IPI00218918.5ANXA1 Annexin A1Inhibits η ενεργοποίηση του NF-κΒ μέσω σύνδεσης με το p65 subunit669.361.775.58E-03IPI: IPI00909232. 1HNRNPC cDNA FLJ53542, πολύ παρόμοια με ετερογενείς πυρηνική ριβονουκλεοπρωτείνες CInfluence προ-mRNA επεξεργασία και άλλες πτυχές του μεταβολισμού mRNA και transport366.671.754.91E-03IPI: IPI00930688.1TUBA1B τουμπουλίνης α-1Β chainForm microtubules1248.121.742.23E-02IPI: IPI00014898.3PLEC Ισόμορφης 1 από PlectinA σχέση μεταξύ των τριών βασικών συστατικών του cytoskeleton332.711.713.68E-02IPI: πρωτεΐνη πρόσδεσης ακτίνης IPI00013808.1ACTN4 Άλφα-actinin-4An και να συμμετέχουν σε μεταστατικό processes321.621.713.42E-02IPI: IPI00549725.6PGAM1 φωσφογλυκερινικού 1Catalyzes η εσωτερική μεταφορά μιας φωσφορικής group235.041.704.29E-02IPI: IPI00007752.1TUBB2C τουμπουλίνης βήτα-2C chainForm microtubules1062.471.661.00E-02IPI: IPI00930226.1ACTG1 cDNA FLJ57283, πολύ παρόμοια με ακτίνη, κυτταροπλασματική 2Συντήρηση του cytoskeleton2070.511.638.74E- 03IPI: IPI00179330.6RPS27A ουμπικουϊτίνη-40S ριβοσωμικής πρωτεΐνης S27aTargeting κυτταρικών πρωτεϊνών για degradation557.051.586.80E-03IPI: IPI00382470.3HSP90AA1 Ισόμορφης 2 της πρωτεϊνών θερμικού σοκ HSP 90-alphaMolecular συνοδοί 1051.051.561.10E-02IPI: IPI00000874.1PRDX1 Peroxiredoxin-1 ( *) Ένα μέλος των αντιοξειδωτικών enzyme1070.851.552.46E-04IPI: IPI00335930.1DAZAP1 Ισόμορφης 2 του DAZ-πρωτεΐνης που συνδέεται με 1Involved στην ανάπτυξη των γεννητικών κυττάρων και gametogenesis217.721.541.22E-02IPI: IPI00010796.1P4HB πρωτεΐνη δισουλφίδιο isomeraseprotein δισουλφιδίου isomerase338.391.524. 68Ε-03IPI: IPI00909303.2CTSB cDNA FLJ58073, μέτρια παρόμοια με την καθεψίνη BLysosomal κυστεΐνη protease339.271.503.55E-03IPI: IPI00027463.1S100A6 πρωτεΐνη S100-A6Cell εξέλιξη του κύκλου και differentiation350.001.451.28E-02IPI: IPI00418471.6VIM VimentinThe σημαντική συνιστώσα του κυτταροσκελετού της μεσεγχυματικά cells3581.761.431.61E-02IPI: IPI00418169.3ANXA2 Ισόμορφης 2 αννεξίνης A2Involved σε κυτταρική κινητικότητα, η σύνδεση των συμπλοκών πρωτεΐνης μεμβράνης σχετιζόμενη με την κυτταροσκελετού της ακτίνης, ενδοκυττάρωση, 1168.351.414.26E-02IPI: IPI00017963.1SNRPD2 μικρά πυρηνικά ριβονουκλεοπρωτεΐνης Sm D2Pre (ΣΙ).