Αφηρημένο

Ιστορικό

Λυσίνη συγκεκριμένες διμεθυλάση 1 (LSD1) έχει ταυτοποιηθεί και βιοχημικά που χαρακτηρίζεται από επιγενετική, αλλά οι παθολογικές ρόλους της δυσλειτουργίας της στον καρκίνο του πνεύμονα μένει να διευκρινιστεί. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει την προγνωστική σημασία της έκφρασης LSD1 σε ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και να καθορίσει την ακριβή ρόλο της στον καρκίνο του πνεύμονα πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και εισβολή.

Μέθοδοι

Τα επίπεδα της πρωτεΐνης του LSD1 σε χειρουργικά δείγματα από ασθενείς με ΜΜΚΠ ανιχνεύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία ή κηλίδωση Western. Τα επίπεδα mRNA του LSD1 ανιχνεύθηκαν με qRT-PCR. Η συσχέτιση της έκφρασης LSD1 με κλινικά χαρακτηριστικά και την πρόγνωση προσδιορίστηκε με στατιστική ανάλυση. ρυθμός πολλαπλασιασμού των κυττάρων εκτιμήθηκε με MTS δοκιμασία και ανοσοφθορισμού. μετανάστευση των κυττάρων και την εισβολή είχαν εντοπιστεί από τεστ το μηδέν, δοκιμασία matrigel και φρεατίων δοκιμασία εισβολής.

Αποτελέσματα

έκφραση LSD1 ήταν υψηλότερη σε ιστούς του καρκίνου του πνεύμονα περισσότερο από ό, τι στην κανονική πνευμονικό ιστό. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η υπερ-έκφραση της πρωτεΐνης LSD1 συσχετίστηκαν με μικρότερη συνολική επιβίωση των ασθενών με NSCLC. LSD1 εντοπίστηκε κυρίως στον πυρήνα των καρκινικών κυττάρων. Διακοπή της LSD1 χρησιμοποιώντας siRNA ή ένα χημικό αναστολέα, παργυλίνη, κατέστειλε τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή του Α549, Η460 και 293Τ κύτταρα. Εν τω μεταξύ, η υπερ-έκφραση της αύξησης των κυττάρων ενισχυμένη LSD1. Τέλος, LSD1 δείχθηκε να ρυθμίσει επιθηλιακά προς μεσεγχυματικά μετάβαση σε καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα.

Συμπεράσματα

Η υπερέκφραση του LSD1 συσχετίστηκε με κακή πρόγνωση σε NSCLC, και προωθείται πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, μετανάστευση και εισβολή. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι LSD1 είναι ένας παράγοντας προαγωγής όγκων με πολλά υποσχόμενες θεραπευτικές δυνατότητες για NSCLC

Παράθεση:. Lv Τ, Yuan D, Miao Χ, Lv Υ, Zhan P, Shen Χ, et al. (2012) υπερέκφραση του LSD1 προωθεί τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή στο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 7 (4): e35065. doi: 10.1371 /journal.pone.0035065

Επιμέλεια: Pan-Chyr Γιανγκ, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ταϊβάν Νοσοκομείο, Ταϊβάν

Ελήφθη: 22 Νοεμβρίου, 2011? Αποδεκτές: 11 του Μάρτη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 6 του Απρίλη, 2012

Copyright: © 2012 Lv et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι μία από τις κύριες αιτίες του καρκίνου θανάτου παγκοσμίως. Μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) είναι ο πιο κοινός τύπος καρκίνου του πνεύμονα [1]. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για τον καρκίνο του πνεύμονα παραμένει φτωχή. Προκειμένου να αναπτυχθούν περισσότερο αποτελεσματικές θεραπείες, είναι σημαντικό να ληφθεί μια καλύτερη κατανόηση της μοριακής βιολογίας του καρκίνου του πνεύμονα.

Γενετικές αλλοιώσεις είναι το σήμα κατατεθέν του καρκίνου στον άνθρωπο. Τα τελευταία χρόνια, το πεδίο του καρκίνου γονιδιωματική έχει σημειώσει σημαντική πρόοδο στον προσδιορισμό των γενετικών βλαβών στον καρκίνο. Επιπλέον, η σημασία της επιγενετικές μεταβολές που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του καρκίνου του πνεύμονα έχει επίσης αναγνωριστεί [2]. Οι επιγενετικές μεταβολές που συνδέονται τόσο με DNA μεθυλίωση και τροποποιήσεις των ιστονών [3]. τροποποιήσεις ιστόνης, όπως ακετυλίωση, φωσφορυλίωση και μεθυλίωση, είναι οι διακόπτες που μεταβάλλουν τη δομή της χρωματίνης για να επιτρέψει μεταγραφικούς ενεργοποίηση ή καταστολή του κατάντη πρωτεϊνών [4]. Η κατανόηση αυτών των επιγενετικές αλλαγές θα εντοπίσει νέα γονίδια σχετίζονται με τον καρκίνο που μπορεί να αντιπροσωπεύουν ελκυστικούς στόχους για τη θεραπεία του καρκίνου και να παρέχουν νέες γνώσεις για τη βιολογία του καρκίνου του πνεύμονα. Έτσι, μια ενοποιητική προσέγγιση στην έρευνα για τον καρκίνο του πνεύμονα, συνδυάζοντας επιδημιολογικά, γενετικών και επιγενετικών πληροφορίες, έχει αναδειχθεί ως μια σημαντική έννοια για τη θεραπεία του καρκίνου [5].

Η κατάσταση μεθυλίωσης των ιστονών μεθυλτρανσφερασών και demethylases ιστόνης παίζει κεντρικό ρόλο στη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης [6]. Ιστόνης διμεθυλάση λυσίνη συγκεκριμένες διμεθυλάση 1 (LSD1), η πρώτη διμεθυλάση ιστόνης που ανακαλύφθηκε ως μία πυρηνική ομόλογο της οξειδασών αμίνη, αφαιρεί τις ομάδες μεθυλίου από μονο- και διμεθυλιωμένος Λυσίνη (Lys) 4 ιστόνης Η3 (H3K4me1 /2) και Lys9 της ιστόνης Η3 (H3K9me1 /2) [7]. LSD1 είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη των θηλαστικών και εμπλέκεται σε πολλές βιολογικές διεργασίες, όπως η διαφοροποίηση των κυττάρων-τύπου και ενεργοποίηση γονιδίων και καταστολή [8]. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι LSD1 μπορεί να προάγει μετάπτωσης φάσης των κυττάρων (ανεπάρκεια σε LSD1 οδήγησε σε μερική διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε G

2 /Μ) και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, γεγονός που υποδηλώνει ότι η υπερ-έκφραση της μπορεί να προωθήσει ογκογένεση [9]. Η έκφραση του LSD1 έχει συσχετιστεί με υποτροπή του όγκου κατά τη διάρκεια της θεραπείας σε διάφορους καρκίνους, περαιτέρω εμπλέκοντας LSD-1 ως υποκινητή όγκου [10] – [12]. Tissue ανάλυση cDNA μικροσυστοιχιών απεκάλυψε επίσης LSD1 τρανσενεργοποίηση στον πνεύμονα και του παχέος καρκινώματα [11]. Η κατάρριψη του LSD1 με μικρό παρεμβαλλόμενο (SI) RNAs οδήγησε σε καταστολή του πολλαπλασιασμού των διαφόρων κύστης και ο καρκίνος του πνεύμονα κυτταρικές γραμμές [11]. Ωστόσο, αν και οι μελέτες αυτές έδειξαν ότι LSD1 μπορεί να σχετίζεται με την παθογένεση του καρκίνου του πνεύμονα, η έκφραση και η σημασία του LSD1 σε NSCLC είναι ασαφής.

Σε αυτή τη μελέτη, επιχειρήσαμε να διερευνηθεί η έκφραση και η λειτουργία του LSD1 σε NSCLC, η σχέση της με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, και προγνωστική αξία για την επιβίωση των ασθενών με NSCLC. Τέλος, έχουμε ως στόχο να προσδιορίσει τον ακριβή ρόλο της LSD1 στον καρκίνο του πνεύμονα πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα

Χειρουργική δείγματα από 80 NSCLC ασθενείς που λαμβάνονται στο Nanjing στήθος Νοσοκομείο και το Νοσοκομείο Jinling από Ιανουάριος 2001 – Δεκέμβριος 2003 έγιναν αναδρομικά συλλέγονται για μελέτη. Αυτά αποτελούνταν από 38 πλακωδών καρκινωμάτων και 42 αδενοκαρκινώματα, μαζί με τα παρακείμενα δείγματα μη καρκινικό ιστό ταιριαστού ασθενούς. Κανένας από τους ασθενείς είχαν λάβει ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Όλοι οι ασθενείς είχαν παρακολουθήθηκαν για πέντε χρόνια μετά τη λειτουργία, και πλήρη κλινικά δεδομένα έχουν καταγραφεί ηλεκτρονικά. Όλοι οι ιστοί του όγκου ταξινομούνται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές για την ταξινόμηση του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας. Η σταδιοποίηση των όγκων ακολούθησε την 7

ου Διεθνούς Ταξινόμησης Ένωσης σε κριτήρια Καρκίνου ορίζεται το 2009. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Νοσοκομείου Jinling στο Nanjing. Όλα τα δείγματα ανώνυμα, και κανένας από τους ερευνητές διεξαγωγή των πειραμάτων είχε πρόσβαση στα κλινικοπαθολογοανατομικών δεδομένων.

Η ανοσοϊστοχημική (IHC) χρώση

Όλα τα δείγματα σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη, ενσωματωμένο σε παραφίνη, τομή διαδοχικά στα 5 μm, και χρωματίζονται με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Οι τομές επανυδατώθηκαν αποπαραφινοποιήθηκαν και σύμφωνα με συνήθεις πρωτόκολλο. Οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύκτα με τα ειδικά αντισώματα πρωτογενή LSD1 (1:100 αραίωση? Cell Signaling, Danvers, ΜΑ, USA). Οι πλάκες επωάστηκαν για 30 λεπτά με ανοσοσφαιρίνες κατσίκας αντι-κουνελιού (E0432? Cell Signaling) αφού πλύθηκαν με ρυθμισμένο με Tris διάλυμα NaCl. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν για 30 λεπτά με απογυμνωμένο ΑΒ σύμπλοκο /AP (K0391? Dako, του Πεκίνου, Κίνα). Αντιχρωματισμός διεξήχθη με αιματοξυλίνη. Το ποσοστό των θετικών κυττάρων προσδιορίστηκε με μέτρηση 500 κυττάρων σε πέντε τυχαία περιοχές ανά τμήμα. Πυρηνική αποτελέσματα ανοσοχρώση για LSD1 αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας μία ημι-ποσοτική σύστημα βαθμολόγησης Ρέμμελε [13], που υπολογίστηκε από την ένταση χρώσης και το ποσοστό των θετικών κυττάρων. χρώση IHC βαθμολογήθηκε σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: -, κανένα από τα κύτταρα βάφονται? +, 1-40% των κυττάρων χρωματίζονται? ++? 40-70% των κυττάρων βάφονται? +++, 70-100% των κυττάρων χρωματίζονται. βαθμολογία IHC της έκφρασης LSD1 ήταν [0 (αρνητική) ≤ βαθμολογίας & lt? 2+] και [2 + ≤ όρος ≤3 +], που αντιπροσωπεύονται χαμηλή και υψηλή έκφραση, αντίστοιχα.

Western Blotting

Οι ιστοί του όγκου του καρκίνου του πνεύμονα και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου ομογενοποιούνται . Σύνολο πρωτεΐνες (30 μg) από κλινικά δείγματα ή κυτταροκαλλιέργειες διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου με δωδεκυλοθειϊκό νάτριο, που ακολουθείται από ηλεκτρομεταφορά σε μία μεμβράνη νιτροκυτταρίνης με τη χρήση ενός κυττάρου μεταφοράς (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Κηλίδωση Western διεξήχθη με διαδοχική επώαση σε 5% ρυθμιστικό αποκλεισμού άπαχο γάλα σε θερμοκρασία δωματίου για 60 λεπτά, ακολουθούμενη από πρωτογενές αντίσωμα έναντι είτε LSD1 (1:500? Cell Signaling), AcH3K9, Twist1, E-cadherin, Ν- καντερίνης ή β-ακτίνης στους 4 ° C όλη τη νύκτα, και, τέλος, χρένο δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση αντι-κουνελιού (1:5000) σε θερμοκρασία δωματίου για 90 λεπτά. Ανοσοαντιδραστικές ζώνες ανιχνεύθηκαν με αντίδραση με τα αντιδραστήρια ECL σύστημα ανίχνευσης (Amersham, Arlington Heights, IL, USA) και έκθεση σε φιλμ ακτίνων Χ, η οποία στις αναπτυγμένες και φωτογραφήθηκαν.

mRNA Εξαγωγή και ποσοτικοί Αντίστροφη Μεταγραφή ( qRT) -PCR

οι ιστοί ομογενοποιήθηκαν και ολικό κυτταρικό mRNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Το cDNA μεταγράφηκε χρησιμοποιώντας τα M-MLV αντίστροφη μεταγραφάση (Promega, Madison, WI, USA), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. qRT-PCR πραγματοποιήθηκε με χρήση του κιτ FastStart καθολική SYBR Green Master Mix (Roche, San Francisco, CA, USA). Σχετικά επίπεδα mRNA του LSD1 κανονικοποιήθηκαν σε επίπεδα του γονιδίου GAPDH οικοκυρικής και υπολογίζεται με τη μέθοδο 2-ΔΔCt. Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν: GAPDH, προς τα εμπρός: 5′-CCATGTTCGTCATGGGTGTGAACCA-3 ‘και αντίστροφος: 5′-GCCAGTAGAGGCAGGGATGATGTTG-3′? LSD1, προς τα εμπρός: 5’-GAAACTGGAATAGCAGAGAC-3 ‘και να αντιστραφεί: 5′-GGTGGACAAAGCACAGTATCA-3’.

Cell Culture, επιμόλυνση και θεραπεία

Α549, Η460, και τα κύτταρα 293Τ αποκτήθηκαν από η American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) και καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), 2 mM L-γλουταμίνη και 100 μg /mL πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη. Το πλασμίδιο Σημαία-LSD1 (3ug)? ευγενώς από το Δρ Yang Shi, Πανεπιστήμιο της Νότιας Καλιφόρνιας, Λος Άντζελες, CA, USA), η υπερ-έκφραση πλασμιδίου LSD1 (3 μg) και LSD1 siRNA (3 μg) επιμολύνθηκαν σε Α549 και κυτταρικές σειρές Η460 σε πλάκες 6 φρεατίων (1 μg /mL) χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Lipofectamine (Invitrogen), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Παργυλίνη (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA), ένας αναστολέας μονοαμινοξειδάσης, χρησιμοποιήθηκε για να εμποδίσει χημικά LSD1 μεσολάβηση απομεθυλίωσης [14]. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με παργυλίνη επί 48 ώρες, και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε δοκιμασία MTS. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως πτυσσόμενο αλλαγές σε σχετικές μονάδες φωτός /χιλιοστομονάδες παργυλίνη, και αντιπροσωπεύουν το μέσο όρο των τριών ανεξάρτητων πειραμάτων.

κυτταρικού πολλαπλασιασμού, την ανάπτυξη, την MTS Αναλύσεις

Για την ανίχνευση της κυτταρικής ανάπτυξης, 50000 κύτταρα /φρεάτιο σπάρθηκαν εις τριπλούν σε μία πλάκα 24-φρεατίων με πλήρες μέσο ανάπτυξης. Τα κύτταρα μετρήθηκαν πάνω από έξι ημέρες χρησιμοποιώντας αιματοκυτταρόμετρο. Για τη δοκιμασία MTS (Promega), 500 κύτταρα /φρεάτιο σπάρθηκαν εις τριπλούν σε μία πλάκα 96 φρεατίων για κάθε κυτταρική γραμμή. Στις 12, 24, και 48 ώρες, 20 μL του αντιδραστηρίου MTS προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο, επωάστηκαν για 1 ώρα στους 37 ° C, και τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με μία συσκευή ανάγνωσης πλάκας στα 490 nm. Το δείγμα δεδομένων ομαλοποιήθηκε με φόντο αναγνώσεις των μέσων μαζικής ενημέρωσης και μόνο. ​​

Τρισδιάστατο Cell Culture, κολλαγόνο Δοκιμασία εισβολή, και Ξυστό Δοκιμασία

πολιτισμών μεμβράνη Τρισδιάστατο υπόγειο δημιουργήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15 ]. Εν συντομία, 5000 κύτταρα /φρεάτιο αναπτύχθηκαν σε 2% matrigel (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) με επιδερμικό αυξητικό παράγοντα (EGF) σε μια στρώση βάσης matrigel 50%. Η δοκιμασία κολλαγόνου εισβολή πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. Εν συντομία, 5000 κύτταρα /φρεάτιο σπάρθηκαν σε 2% matrigel σε ένα στρώμα από 1:01 κολλαγόνου (BD Bioscience) στο μίγμα Matrigel. ανάπτυξη Culture καταγράφηκε την ημέρα 5. Για τη δοκιμασία μηδέν, τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε πλήρες μέσο ανάπτυξης μέχρις ότου επετεύχθη 90-100% συρροή. Μια πληγή 3 πιπί εισήχθησαν κατά μήκος της διαμέτρου του κάθε πλάκα. Η μετανάστευση των κυττάρων παρατηρήθηκε με μικροσκοπία στις 24 και 48 ώρες αργότερα.

Α, Β) έκφραση LSD1 ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω στον πνευμονικό καρκίνο πλακωδών ιστού. Τα βέλη δείχνουν LSD1-θετικά καρκινικά κύτταρα, τα οποία βρίσκονται στις κυτταρικές πυρήνες. Μεγέθυνση: Α, χ 20? Β × 60. (C, D) έκφραση LSD1 ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω σε ιστό πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα. Μεγέθυνση: C, × 20? D, × 60. (Ε, F) IHC αποκάλυψε ότι η έκφραση LSD1 ήταν αδύναμη σε φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Μεγέθυνση: Ε, × 20? F, × 60. IHC αποτελέσματα της έκφρασης LSD1 ήταν: χαμηλό, [0 (αρνητική) ≤ βαθμολογίας & lt? 2+]? υψηλή, [2 + ≤ βαθμολογίας ≤3 +].

P

& lt?. 0.05 αναφέρεται στατιστικά σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων

Η

(A) Το επίπεδο της πρωτεΐνης των LSD1 στον ιστό του καρκίνου του πνεύμονα ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι στο φυσιολογικό ιστό (

P

& lt? 0,01), όπως ανιχνεύεται με στύπωση Western. β-τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Β) Δείγμα 122, 206 και 207 παρουσιάζονται ως εκπρόσωποι των τριών ομάδων: Ν, φυσιολογικούς ιστούς του πνεύμονα: C, NSCLC ιστούς? P, ιστούς paracarcinoma. (Γ) Το επίπεδο του mRNA της LSD1 ανιχνεύθηκε με qRT-PCR, και η έκφραση του mRNA του LSD1 ήταν σημαντικά υψηλότερο σε ιστό όγκου παρά σε κανονικό ιστό (

P

& lt? 0,05).

Η

Μπλε γραμμές απεικονίζουν υψηλά επίπεδα έκφρασης LSD1, και κόκκινες γραμμές απεικονίζουν χαμηλά επίπεδα έκφρασης LSD1 σε δείγματα NSCLC. (Α) ΜΜΚΠ ασθενείς με χαμηλότερα επίπεδα της πρωτεΐνης LSD1 είχαν καλύτερη πρόγνωση. (Αδιόρθωτη

P

-τιμή = 0,0003? Περιπτώσεις χαμηλής έκφρασης, περιπτώσεις n = 52 και υψηλή έκφραση, n = 28). (Β) Οι ασθενείς με χαμηλότερα επίπεδα mRNA της LSD1 είχαν επίσης μεγαλύτερη επιβίωση (

P

& lt? 0,05).

Η

Στατιστική Ανάλυση

Φοιτητών

t

-test και ANOVA χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνηθούν οι συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης LSD1 και κλινικούς παράγοντες (ηλικία, φύλο, το κάπνισμα, το στάδιο του όγκου, ιστολογία, το μέγεθος του όγκου, κομβική θέση, και τη συνολική επιβίωση). ανάλυση συσχέτισης Pearson χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση του βαθμού γραμμική συσχέτιση μεταξύ των δύο μεταβλητών. ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier διεξήχθη για να προσδιοριστεί η προγνωστική αξία της LSD1, και δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθεί η ισότητα των δύο καμπυλών επιβίωσης. Ένα

P

-τιμή & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική και

P

& lt? 0,01 θεωρήθηκε ιδιαίτερα σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του προγράμματος SPSS v17.0 για τα Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

Έκφραση LSD1 ήταν ρυθμισμένο σε NSCLC ιστούς όγκων

Θα εξεταστεί πρώτα επίπεδα έκφρασης της LSD1 σε 80 καρκινικούς ιστούς NSCLC και 20 φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων με χρώση IHC. Υψηλή έκφραση LSD1 ανιχνεύθηκε στους πυρήνες των κακοήθων κυττάρων, ενώ ασθενής χρώση παρατηρήθηκε σε όλα τα μη νεοπλασματικά ιστούς (Σχ. 1). Συγκεκριμένα, η έκφραση του LSD1 παρατηρήθηκε στο 90,0% των καρκινωμάτων του πνεύμονα (72/80) και 10,0% των καλοήθων δειγμάτων πνεύμονα (2/20). Υψηλά επίπεδα έκφρασης LSD1 (βαθμολογία: ++ – +++). Ανιχνεύθηκαν σε 37 (46,3%) σε ιστούς όγκων από ασθενείς με ΜΜΚΠ

Εξετάσαμε την επόμενη έκφραση LSD1 σε 40 τυχαία επιλεγμένους ιστούς όγκων NSCLC, paracarcinoma πνεύμονα ιστούς, και φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων με κηλίδωση Western. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν μία στατιστικά σημαντική αύξηση της έκφρασης LSD1 σε όγκους, σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων με τη χρήση β-τουβουλίνης ως αναφορά (two-tailed ζεύγη

t-test

, n = 40,

P

& lt? 0,01) (Σχήμα 2Α).. Το επίπεδο πρωτεΐνης του LSD1 σε δείγματα 122, 206, και 207 απεικονίζεται στο Σχήμα 2Β.

Για να αξιολογηθούν περαιτέρω τα παραπάνω αποτελέσματα πρωτεΐνη, εξετάσαμε επίσης τα επίπεδα του mRNA των LSD1 σε αυτούς τους 40 επιλεγμένους ιστούς όγκων NSCLC και φυσιολογικό πνεύμονα ιστούς με qRT-PCR χρησιμοποιώντας ΟΑΡϋΗ ως αναφορά. Βρήκαμε ότι το επίπεδο του mRNA του LSD1 σε ιστούς καρκίνου (Ct = 19,9 ± 1,01) ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε φυσιολογικούς ιστούς πνεύμονα (Ct = 22,1 ± 0,9) (two-tailed ζεύγη

t-test

, n = 40,

P

& lt? 0,05) (Σχήμα 2C)

έκφραση LSD1 σχετίστηκε με συνολική επιβίωση

Για να αξιολογηθεί η κλινική σημασία της LSD1 υπερ-έκφραση σε.. καρκίνο του πνεύμονα, αναλύσαμε εάν τα επίπεδα έκφρασης των LSD1 συσχετίστηκαν με τη συνολική επιβίωση σε NSCLC. Όπως δείχνεται τον πίνακα 1, τα υψηλά επίπεδα πρωτεΐνης LSD1 συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με την επιβίωση (χ

2 = 12,87,

P

= 0.0003), αλλά δεν συσχετίζεται με οποιαδήποτε από τις κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά (συμπεριλαμβανομένης της ηλικίας, τις συνήθειες καπνίσματος , το φύλο, η διάμετρος του όγκου, ιστολογικός τύπος, το σπλαχνικό υπεζωκότα εισβολή, παθολογικές στάδιο, ή το είδος της επιχείρησης? όλα,

P

& gt? 0,05). Κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης 5 ετών, 52 από τους ασθενείς 80 (65%) NSCLC πέθαναν ως αποτέλεσμα της εξέλιξης της νόσου. Καμπύλες Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς με αυξημένη έκφραση LSD1 (28 περιπτώσεις) είχαν σημαντικά μικρότερη συνολική επιβίωση από εκείνους με μειωμένη έκφραση LSD1 (52 περιπτώσεις) (

P

= 0.0003) (Σχ. 3Α).

Η έκφραση LSD1 στα Α549 και Η460 καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων ήταν υψηλότερος από ό, τι στα κύτταρα 293Τ. Το επίπεδο της πρωτεΐνης στην κυτταρική γραμμή Η460 ήταν υψηλότερη από ότι στο Α549 κυτταρική γραμμή. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Η σειρά των καμπυλών αντιπροσωπεύουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε 0 h έως 48 h μετά την έκθεση σε διαφορετικές συγκεντρώσεις της θεραπείας παργυλίνης και διαμόλυνση με τα διαφορετικά πλασμίδια. (Α) Ο αναστολέας LSD1, παργυλίνη (από πάνω προς τα κάτω: 1 mM, 2 mM, 3 mM και 4 mM), και LSD1 siRNA αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των Α549 κυτταρική γραμμή. Ο πολλαπλασιασμός κυττάρων Α549 μειώθηκε σημαντικά στις διάφορες ομάδες, σε σύγκριση με τους ελέγχους (*

P

& lt? 0,05). (Β) Παργυλίνη ανέστειλε Η460 επιβίωση κυτταρική γραμμή. Επιπλέον, ένα ισχυρότερο ανασταλτικό αποτέλεσμα παρατηρήθηκε στην κυτταρική σειρά Η460, αλλά δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των δύο κυτταρικών σειρών. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων Η460 μειώθηκε σημαντικά στις διάφορες ομάδες συγκέντρωσης, σε σύγκριση με τους ελέγχους (*

P

& lt? 0,05). (Γ) Παργυλίνη ανέστειλε την επιβίωση του 293Τ κυτταρική γραμμή. (D) Η καμπύλη πολλαπλασιασμός μετά την επιμόλυνση του Flag-LSD1 πλασμιδίου στο κύτταρο Α549 και διαμόλυνση LSD1 siRNA πλασμιδίου μέσα στο κύτταρο Η460. Σε κύτταρα Α549, ο πολλαπλασιασμός ήταν σημαντικά υψηλότερη μετά από επιμόλυνση του πλασμιδίου Flag-LSD1, σε σύγκριση με την ρΟΜν5-επιμολυσμένα ελέγχου (*

P

& lt? 0,05). Σε κύτταρα Η460, ο πολλαπλασιασμός ήταν σημαντικά χαμηλότερη μετά από επιμόλυνση LSD1 το πλασμίδιο siRNA, σε σύγκριση με τα κύτταρα που μορφομετατρέπονται με πλασμίδιο ελέγχου siRNA (*

P

& lt? 0,05).

Η

οι εικόνες που παρουσιάζονται στο × 20 μεγέθυνση. Πράσινο, κόκκινο και μπλε φθορισμό αντιπροσωπεύουν LSD1, BrdU και Topro-3, αντίστοιχα. Ο πολλαπλασιασμός αυξήθηκε σημαντικά στα κύτταρα Α549 μετά την επιμόλυνση του πλασμιδίου Flag-LSD1. Ωστόσο, ο πολλαπλασιασμός μειώθηκε στα κύτταρα Η460 μετά την επιμόλυνση του πλασμιδίου LSD1 siRNA. θεραπεία Παργυλίνη μειωμένη πολλαπλασιασμό σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές. Topro-3 κηλίδωση δείχνει πυρηνικό εντοπισμό, και χρώση BrdU δεικνύει τα πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα.

Η

Η ταχύτητα μετανάστευσης σταδιακά μειώθηκε από 6 ώρες έως 48 ώρες μετά την επιμόλυνση του πλασμιδίου LSD1 siRNA στα κύτταρα Η460, η οποία σημαντικά διαφορετική από την ταχύτητα στις 24 ώρες και 48 ώρες (*

P

& lt? 0,05). Το ποσοστό μετανάστευσης αυξήθηκε σταδιακά μετά την επιμόλυνση του Flag-LSD1 πλασμιδίου εντός των κυττάρων Α549, τα οποία ήταν σημαντικά διαφορετική από την ταχύτητα στις 24 ώρες και 48 ώρες (*

P

& lt? 0,05). Όλες οι ομάδες επιμόλυνση ήταν σημαντικά διαφορετική από τις ομάδες ελέγχου (*

P

& lt? 0,05).

Η

Σε συμφωνία με αυτό, καθορίζονται επίσης ότι η υψηλότερη έκφραση του mRNA της LSD1 συσχετίστηκε με μειωμένη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με ΜΜΚΠ (

P

& lt? 0,05). (.. Σχήμα 3Β)

LSD1 Προώθησε διάδοση των πυρηνικών όπλων στον καρκίνο του πνεύμονα Γραμμές κυττάρων

Η έκφραση της LSD1 ήταν χαμηλότερα στην Α549 κυττάρου από ότι στην κυτταρική σειρά Η460, όπως φαίνεται στο Σχήμα 4. Συνεπώς, το πλασμίδιο Flag-LSD1 επιμολύνθηκε σε κύτταρα Α549 και το πλασμίδιο LSD1 siRNA διαμολύνθηκε εντός των κυττάρων Η460. Τα 293Τ φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός έλεγχος.

Διαπιστώσαμε την τιμή OD από Α549, Η460 και 293Τ κύτταρα με MTS για να δημιουργηθούν καμπύλες κυτταρικής ανάπτυξης. Σε όλες τις τρεις κυτταρικές γραμμές, ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός μειώθηκε μαζί με παργυλίνη θεραπεία σε εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο. Ήταν σημαντικά χαμηλότερη στην 4 mM αγωγή ομάδα σε σχέση με τις 1 mm- ή 2 ομάδες mM επεξεργασία. Επιπλέον, ήταν επίσης χαμηλότερη στην mM επεξεργασμένο ομάδα 1 σε σχέση με την mM επεξεργασμένο ομάδα 3? Ωστόσο, δεν υπήρχε διαφορά μεταξύ του 1 mm- και 2 ομάδες mM αγωγή ή την 3 mm- και 4 ομάδες mM φάρμακο (

P

& gt? 0,05)., όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α-C

το διασχίζονται ποσό των κυττάρων ήταν σημαντικά υψηλότερο για κύτταρα Α549 επιμολυσμένα με το πλασμίδιο Σημαία-LSD1? Ωστόσο, η επιμόλυνση του πλασμιδίου LSD1 siRNA στα κύτταρα Η460 οδήγησαν σε μειωμένες ποσότητες μεταστατικών κυττάρων. Οι αριθμοί των μεταστατικών κυττάρων από τις δύο ομάδες ήταν σημαντικές διαμόλυνση διαφορετική από την ομάδα ελέγχου (*

P

& lt? 0,05).

Η

Η έκφραση της συνολικής H3K9 δεν άλλαξε σημαντικά. Όταν η δραστηριότητα LSD1 ήταν ρυθμισμένη, έκφραση Twist1 και Ν-καδερίνης αυξηθεί και AcH3K9 και έκφραση Ε-καδερίνης μειώθηκε. Όταν η δραστηριότητα LSD1 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω, Twist1 και έκφραση Ν-καδερίνης μειώθηκε και AcH3K9 και έκφραση Ε-καδερίνης αυξήθηκε. Το πλασμίδιο Flag-LSD1 διαμολύνθηκε στην κυτταρική σειρά Α549, και το πλασμίδιο LSD1 siRNA διαμολύνθηκε στην κυτταρική γραμμή Η460. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης

Η

Ο πολλαπλασιασμός αυξήθηκε σημαντικά στην ομάδα Α549 μετά την επιμόλυνση του πλασμιδίου Flag-LSD1 (

P

& lt? 0,05).? ωστόσο, μειώθηκε σημαντικά στην ομάδα Η460 μετά την επιμόλυνση του πλασμιδίου LSD1 siRNA (

P

& lt? 0,05). Το πλασμίδιο pCMV χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος στην ομάδα Α549 επιμόλυνση, και το πλασμίδιο ελέγχου LSD1 siRNA χρησιμοποιήθηκε στην ομάδα διαμόλυνσης κυττάρων Η460 (Σχ. 5D).

εντοπιστεί περαιτέρω το ρόλο των LSD1 σε Α549 και κυτταρικού πολλαπλασιασμού Η460 με χρώση ανοσοφθορισμού. Η μεταβολή του αριθμού των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων παρατηρήθηκε με χρώση BrdU. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων ήταν σημαντικά αυξημένη μετά την επιμόλυνση της υπερ-εκφράζουν το πλασμίδιο LSD1 στο Α549 κυτταρική γραμμή. Εν τω μεταξύ, ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός μειώθηκε στα κύτταρα Η460 επιμολυσμένα με το πλασμίδιο LSD1 siRNA. Μειώθηκε στις δύο κυτταρικές σειρές μετά από την επεξεργασία παργυλίνη, όπως φαίνεται με χρώση ανοσοφθορισμού (Εικ. 6), η οποία επιβεβαίωσε επίσης ότι LSD1 εμπλέκεται στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων.

LSD1 προωθούνται τη μετανάστευση των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα

η μετανάστευση των κυττάρων ερευνήθηκε από τη δοκιμασία των κυττάρων μηδέν. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ο αριθμός και το ποσοστό των κυττάρων που μετανάστευσαν μειώθηκε σταδιακά μετά από επιμόλυνση με το πλασμίδιο LSD1 siRNA στις κυτταρικές γραμμές Η460. Τα μεταναστευτικά κύτταρα έφθασαν μία κορυφή στις 48 ώρες, όπως φαίνεται στο Σχήμα 7Α. Αντίθετα, ο αριθμός των μετανάστευσαν κυττάρων ήταν σημαντικά αυξημένα στην Α549 κυτταρική γραμμή μετά από επιμόλυνση με Flag-LSD1 πλασμίδιο, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (

P

& lt? 0,05). Η σχετική ταχύτητα της μετανάστευσης φαίνεται στο Σχήμα 7Β.

Ο Ρόλος της LSD1 σε καρκίνο του πνεύμονα Invasion

Η ικανότητα των κυττάρων να διασχίσουν Matrigel έδειξε την ικανότητα εισβολής του Α549 και κυτταρικών σειρών Η460. κύτταρα Η460 επιμολυσμένα με LSD1 siRNA πλασμίδιο ήταν λιγότερο επεμβατική από την ομάδα ελέγχου (

P

& lt? 0,05). Κύτταρα Α549 επιμολυσμένα με Flag-LSD1 πλασμίδιο ήταν πιο επεμβατική από τα κύτταρα ελέγχου και κύτταρα κατεργασμένα με παργυλίνη (αμφότερα,

P

& lt? 0,05). Το ποσό της εισβολής των κυττάρων που διέρχονται μέσω της βασικής μεμβράνης matrigel φαίνεται στο Σχήμα 8.

LSD1 Ρυθμιζόμενη Τα επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά Μετάβασης (EMT) σε κύτταρα του πνεύμονα Καρκίνος

Για να διερευνηθεί αν LSD1 ρυθμίζει το EMT μετάβαση στον καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα, εξετάσαμε την έκφραση του κλειδιού ΕΜΤ μεταγραφικός καταστολέας TWIST1 και τους δείκτες EMT Ε-καδερίνης και Ν-καντερίνης σε κύτταρα Α549 LSD1-υπερεκφράζουν (επιμολυσμένα με το Flag-LSD1 LSD1 υπερεκφράζουν πλασμίδιο) και LSD1 γκρέμισε Η460 κύτταρα (επιμολυσμένα με το πλασμίδιο LSD1 siRNA, ή υποβάλλεται σε επεξεργασία με 4 mM παργυλίνη). Εξετάστηκαν οι επιδράσεις στην H3K9, AcH3K9, Twist1, Ε-καδερίνη και η έκφραση Ν-καντερίνης που προκαλείται από μεταβολή της δραστηριότητας LSD1. Ενώ η έκφραση του συνολικού H3K9 ήταν ανεπηρέαστη, LSD1 υπερέκφραση οδήγησε σε μειώσεις H3K9 ακετυλίωση και Ε-καδερίνη έκφρασης και αυξήσεις στην Twist1 και έκφραση Ν-καδερίνης. Εν τω μεταξύ, τα επίπεδα ακετυλίωσης H3K9 και έκφραση Ε-καδερίνης ήταν αυξημένα σε LSD1 γκρεμίζω κύτταρα, υποδηλώνοντας ότι η έκφραση LSD1 μπορούσε να συσχετιστεί με AcH3K9, Twist1, Ε-καδερίνη και η έκφραση Ν-καδερίνης, όπως φαίνεται στο Σχήμα 9.

Συζήτηση

Τα τελευταία χρόνια, η επιγενετική έχει γίνει ένα καυτό θέμα στην έρευνα για τον καρκίνο. Το υπόλοιπο της μεθυλίωσης και απομεθυλίωσης σε επιγενετικές τροποποίηση αυτή επηρεάζει τη γονιδιακή έκφραση και την κυτταρική δραστηριότητα. Μελέτες έχουν δείξει ότι παρεκκλίνουσα μεθυλίωση των ιστονών λυσίνης στον καρκίνο σχετίζεται όχι μόνο με την καταστολή της χρωματίνης που σχετίζονται με συγκεκριμένα γονίδια, αλλά και με την καταστολή των μεγάλων χρωμοσωμικών περιοχών. Οι επιγενετικές αλλαγές στο LSD1 έχει αποδειχθεί ότι διαδραματίζει βασικό ρόλο στην καρκινογένεση [17]. LSD1 μπορεί να αποτρέψει την συσσώρευση των ομάδων διμεθυλο του p53, p53 καταστολή μεσολάβηση μεταγραφικό πάνω ρύθμιση, αποτρέποντας την απόπτωση, και συμβάλλοντας στην ανθρώπινη καρκινογένεση μέσω ενός μηχανισμού τροποποίησης της χρωματίνης.

Μέχρι σήμερα, μόνο μερικές μελέτες έχουν ενοχοποιηθεί LSD1 σε NSCLC. Hayami

et al.

Απέδειξαν ότι LSD1 ειδική siRNAs χτυπηθεί σημαντικά κάτω έκφραση LSD1 και οδήγησε σε καταστολή του πολλαπλασιασμού των διαφόρων κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα [11]. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ LSD1 και την επιβίωση των ασθενών με NSCLC δεν ήταν καλά καθορισμένη, και ο ρόλος των LSD1 στον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή στον NSCLC ήταν ασαφής. Η μελέτη μας ερεύνησε τις ενώσεις της έκφρασης LSD1 και κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών με NSCLC διαγιγνώσκονται ως σταδίου Ι /ΙΙ. Για να αποδειχθεί ότι οι επιγενετικές μεταβολές που συνδέονται με γενετικές αλλαγές στον καρκίνο του πνεύμονα, ερευνήσαμε πρώτα την έκφραση LSD1 στον NSCLC κλινικά δείγματα.

Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η πρωτεΐνη LSD1 και τα επίπεδα mRNA θα μπορούσε να δράσει ως βιοδείκτες για τους ασθενείς με περισσότερο επιθετικούς όγκους του καρκίνου του μαστού, ο καρκίνος του προστάτη, και νευροβλάστωμα [18] – [20]. Στη μελέτη μας, εντοπίσαμε LSD1 με ανάλυση IHC, κηλίδωση Western, και qRT-PCR. Ένα ισχυρό σημείο αυτής της έρευνας είναι η διαπίστωση ότι η έκφραση της LSD1 συσχετίστηκε σημαντικά με τη συνολική επιβίωση των ασθενών με NSCLC. Τα τρέχοντα ερευνητικά μας ερεύνησε το ρόλο των LSD1 σε NSCLC. Περαιτέρω μελέτες για LSD1 σε άλλους τύπους όγκων μπορεί να αποκαλύψει ότι οι ασθενείς με υψηλότερα επίπεδα LSD1 (ανεξάρτητα από το mRNA ή πρωτεΐνης ή /και ανεξάρτητα από το τύπο του πρωτοπαθούς όγκου) έχουν χειρότερη επιβίωση από τους ασθενείς με χαμηλότερα επίπεδα LSD1.

Αποδείχθηκε περαιτέρω ότι LSD1 ήταν σημαντική για τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και εισβολή. LSD1 επαγόμενη ενεργοποίηση πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων σε ανεστάλη με παργυλίνης. Down-ρύθμιση της έκφρασης LSD1 με siRNA σε κυτταρικές σειρές όγκων οδήγησε σε αυξημένη κυτταρική ανάπτυξη, τη μετανάστευση και εισβολή. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι LSD1 μπορεί να επηρεάσουν την μεταμόρφωση των κυττάρων του όγκου και μπορεί επίσης να προωθήσει EMT στο επιθήλιο πνεύμονα. Περαιτέρω έρευνα πρέπει να διεξαχθεί για να προσδιοριστεί αν η υπερέκφραση του LSD1 είναι μία πρώιμη ή όψιμη εκδήλωση σε πνεύμονα ογκογένεση και τι ο μηχανισμός του υπερ-έκφραση είναι. Έχουμε παρουσιάσει δεδομένα υποδηλώνουν ότι LSD1 είναι πάνω ρυθμισμένα στην οδό προαγωγή όγκων καρκίνου του πνεύμονα και ότι δρα για να αυξήσει την ανάπτυξη των κυττάρων, τη μετανάστευση και την εισβολή, και να αποκαταστήσει ένα μετασχηματισμένα επιθηλιακά φαινότυπο. Φαρμακολογική καταστολή της LSD1 μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για τη θεραπεία NSCLC.

Περαιτέρω λειτουργική ανάλυση για να καθορίζουν το κανονιστικό δίκτυο της LSD1. Μεταγραφική ανάλυση αποκάλυψε ότι τα σύμπλοκα LSD1 /NuRD ρυθμίζουν διάφορες οδούς κυτταρικής σηματοδότησης [21], συμπεριλαμβανομένης της οδού σηματοδότησης TGFβ1 που κριτικά εμπλέκεται στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την επιβίωση, και επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά μετάβασης. Έχουμε αποδείξει ότι LSD1 προώθησε την εισβολή και μεταστατικό δυναμικό των καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα

in vitro

. Βρήκαμε επίσης ότι η LSD1 είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω σε καρκινώματα του πνεύμονα και ότι το επίπεδο της έκφρασης συσχετίζεται αρνητικά με εκείνη του AcH3K9, Twist1 και Ν-καδερίνης, και συσχετίζεται θετικά με εκείνη του Ε-καδερίνης. Τα δεδομένα μας παρέχουν μια μοριακή βάση για την αλληλεπίδραση των απακετυλίωση ιστόνης στη χρωματίνη αναδιαμόρφωση, υποδεικνύοντας ότι LSD1 μπορεί να επηρεάσει την ΕΜΤ και ακετυλίωση H3K9.

Η παρεκκλίνουσα υπερ-έκφραση του LSD1 στον καρκίνο του πνεύμονα μπορεί να είναι ένας καλός υποψήφιος να κάνει ως θεραπευτικός μοριακό στόχο [11]. Αυτό το είδος των πληροφοριών που δείχνει επίσης ότι θα πρέπει να συνεχίσουμε την ανάπτυξη νέων αντικαρκινικών θεραπειών με βάση την επιγενετική κατάσταση. Όπως έχει συνέπειες για την ανακάλυψη των επιγενετικών δεικτών, ένα σημαντικό ζήτημα για την επίλυση είναι το πώς να καθορίσει πιθανούς στόχους για την επιγενετική θεραπεία. φάρμακα πρώτης γενιάς στοχεύουν τα σχετικά ετερόκλητη μεθυλίωσης του DNA και ακετυλίωση ιστονών τροποποιητές είχαν επιτυχία στη θεραπεία αιματολογικών καρκίνων [22]. Εάν η αναστολή LSD1 οδηγεί σε σημαντική de-καταστολή ορισμένων γονιδίων, LSD1 θα μπορούσε να είναι ένας σημαντικός στόχος για εναλλακτική θεραπεία. Επιγενετική έλεγχος της γονιδιακής ρύθμισης είναι μια ταχέως αναπτυσσόμενη πεδίο με σημαντικές δυνατότητες, και ογκολογίας είναι πιθανό να είναι η θεραπευτική εφαρμογή στην οποία γίνεται η ταχύτερα πρόοδο. Μέχρι σήμερα, συνθετικούς αναστολείς της κλασικής αποακετυλασών ιστόνης έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως ως βιολογικά εργαλεία για επιγενετικές μελέτες, και μερικοί έχουν προχωρήσει σε κλινικές μελέτες. Επιπλέον, η ανάπτυξη αναστολέων ιστόνης μεθυλτρανσφεράσης και διμεθυλάση έχει πρόσφατα αναφερθεί [21], [23]. Στον καρκίνο του πνεύμονα, η υπερ-έκφραση του LSD1 πρέπει να συμβάλλει στην γονιδιακή καταστολή για την αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης και κακοήθη εξέλιξη, αλλά όπου υπάρχει πραγματικός σκοπός του LSD1 παραμένει άγνωστη. Σχεδιάζουμε να διερευνήσει αυτό σε μελλοντικές μελέτες.

Εν κατακλείδι, διαπιστώσαμε ότι LSD1 ήταν υπερεκφράζεται σε ασθενείς με NSCLC, μέσω της έγκαιρης σε όψιμα στάδια της καρκινογένεσης. LSD1 είναι παρούσα στον πυρήνα και προάγει τον πολλαπλασιασμό, πιθανόν μέσω ρύθμισης μιας ευρείας ποικιλίας λειτουργιών χρωματίνης. Εν τω μεταξύ, η υπερ-έκφραση του LSD1 προωθείται των καρκινικών κυττάρων τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή. Περαιτέρω επικύρωση με λειτουργικές αναλύσεις αυτής της πρωτεΐνης στο πλαίσιο της ανθρώπινης καρκινογένεσης μπορεί να βοηθήσει στην ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών για τον καρκίνο του πνεύμονα.