Αφηρημένο

Το μεταφοράς οργανικών ανιόντων πολυπεπτίδιο (OATP) της οικογένειας των μεταφορέων έχει εμπλακεί σε προστάτη εξέλιξη της νόσου του καρκίνου πιθανότατα από τη μεταφορά ορμόνες ή φάρμακα. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε ως στόχο να διευκρινίσει την έκφραση, τη συχνότητα, και τη συνάφεια των OATPs ως βιοδείκτη σε καρκίνους που εξαρτώνται από ορμόνη. Έχουμε ολοκληρώσει μια μελέτη που εξετάζει

SLCO1B3

,

SLCO1B1

και

SLCO2B1

έκφραση mRNA σε 381 πρωτοβάθμια, ανεξάρτητα δείγματα ασθενών που αντιπροσωπεύουν 21 καρκίνους και φυσιολογικούς ιστούς. Από μια ξεχωριστή ομάδα, η έκφραση της πρωτεΐνης του OATP1B3 εξετάστηκε σε προστάτη, του παχέος εντέρου, και του ιστού της ουροδόχου κύστης. Με βάση την συχνότητα έκφρασης,

SLCO2B1

ήταν χαμηλότερη σε καρκίνο του ήπατος (P = 0,04), η οποία κινήθηκαν επίσης χαμηλότερες με τη μείωση της διαφοροποίησης (Ρ = 0,004) και χαμηλότερη μεγέθους σε καρκίνο του παγκρέατος (Ρ = 0,05).

SLCO2B1

είχε επίσης μια υψηλότερη συχνότητα στον καρκίνο του θυρεοειδούς (67%) από το κανονικό (0%) και η έκφραση αυξήθηκε με το στάδιο (Ρ = 0,04).

SLCO1B3

εκφράστηκε στο 52% των καρκινικών δειγμάτων του προστάτη και αυξημένης

SLCO1B3

έκφραση κινήθηκαν με μεγαλύτερο σκορ Gleason (P = 0,03).

SLCO1B3

έκφραση ήταν επίσης υψηλότερα στον καρκίνο των όρχεων (P = 0,02).

SLCO1B1

έκφραση ήταν χαμηλότερη σε καρκίνο του ήπατος (P = 0,04), η οποία κινήθηκαν χαμηλότερα με βαθμό καρκίνο του ήπατος (P = 0.0004) και μεγαλύτερο βαθμό με καρκίνο του παχέος εντέρου (P = 0,05). Πρωτεΐνη έκφραση του OATP1B3 εξετάστηκε σε φυσιολογικό και καρκινικό προστάτη, του παχέος εντέρου, και τα δείγματα ιστού της ουροδόχου κύστης από μια ανεξάρτητη ομάδα. Τα αποτελέσματα ήταν παρόμοια με τα στοιχεία της μεταγραφής, αλλά έδειξε διακριτή εντοπισμού. OATPs συσχετίζονται με διαφοροποίηση σε ορισμένους καρκίνους που εξαρτώνται από ορμόνες, έτσι μπορεί να είναι χρήσιμη ως βιοδείκτες για την εκτίμηση της κλινικής θεραπείας και το στάδιο της νόσου

Παράθεση:. Pressler Η Sissung TM, Venzon Δ, Τιμή DK, Φιγκ WD (2011 ) Έκφραση του ΟΑΤΡ Μέλη της οικογένειας στην ορμονών που σχετίζονται με καρκίνοι: Πιθανοί δείκτες προόδου. PLoS ONE 6 (5): e20372. doi: 10.1371 /journal.pone.0020372

Επιμέλεια: Μιχαήλ Β Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 του Γενάρη 2011? Δεκτές: 1 Μαΐου 2011? Δημοσιεύθηκε: 19, Μαΐου, 2011

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από το εσωτερικό ερευνητικό πρόγραμμα των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας, Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Bethesda, MD www.nih .gov. υποστήριξη μισθό προβλεπόταν κα Pressler από το Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών www.nsf.gov και το Υπουργείο Άμυνας του καρκίνου του προστάτη Βραβείο Έρευνας Εκπαίδευσης # PC094258 www.grants.gov. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Καμία πρόσθετη εξωτερική χρηματοδότηση που έλαβε για την παρούσα μελέτη

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Οργανικά πολυπεπτίδια ανιόντων μεταφοράς (OATPs? Κωδικοποιημένα.. με

τα SLCO

γονίδια) που εμπλέκονται στους μηχανισμούς εισροή ηπατοκυττάρων και υπερεκφράζονται σε ορισμένες μορφές καρκίνου [1], [2], [3]. Γνωστά συνδετήρες της οικογένειας ΟΑΤΡ περιλαμβάνουν μυριάδα ενδογενή υποστρώματα όπως: στεροειδή (δηλαδή, θειικό οιστρογόνα, τεστοστερόνη, και DHT), χολικά οξέα και τα πεπτίδια [4]. τα μέλη της οικογένειας OATP επίσης εισροή μια ποικιλία φαρμακευτικών, συμπεριλαμβανομένων (αλλά όχι περιοριστικά): αντιισταμινικά, φάρμακα μείωσης της γλυκόζης στο αίμα, στατίνες, φάρμακα για την καρδιά, και αντικαρκινικοί παράγοντες [4]. Ως εκ τούτου, οι OATPs αναδύονται ως σημαντικό μεταφορείς για τη θεραπεία του καρκίνου από τις απόψεις των αποτελεσμάτων της διανομής φαρμάκου και ασθένεια, και αναμένεται ότι πολύ περισσότερα ενδογενών και εξωγενών υποστρωμάτων θα προσδιορίζονται από μελλοντικές μελέτες.

Έκφραση και γενετική διακύμανση OATPs έχουν συσχετιστεί με κλινικές εκβάσεις σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Τόσο

SLCO1B3

και

SLCO2B1

έχουν σχέση με ένα μικρότερο χρονικό διάστημα για να ανδρογόνων αποτυχία θεραπεία στέρησης και μειωμένη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με αυξητική ανταπόκριση του καρκίνου του προστάτη, και τον ευνουχισμό καρκίνο του προστάτη ανθεκτικού (CRPC) αντίστοιχα [ ,,,0],1], [5], [6]. Μηχανιστικά, οι ενώσεις αυτές θα μπορούσαν να αποδοθούν σε γενετική παραλλαγή σε ανδρογόνο (ή άλλων στεροειδών ορμονών) μηχανισμοί που αυξάνουν την εισροή ανδρογόνων παγίδευσης κατά την διάρκεια θεραπείας στέρησης ανδρογόνων (ADT) [1]. Αν και οι μηχανισμοί εισροή OATP1B3 είναι ακόμα άγνωστες στον καρκίνο του παχέος εντέρου, υπάρχουν επαρκή στοιχεία που δείχνουν ότι OATP1B3 υπερεκφράζεται σε ένα μεγάλο ποσοστό των όγκων του παχέος εντέρου, και ότι αυτό υπερέκφραση συμβάλλει στην κυτταρική επιβίωση παρουσία oxalaplatin και καμπτοθεκίνη? Το τελευταίο αποτέλεσμα μπορεί να σχετίζεται με την ρ53 έκφραση [2].

OATPs έχουν επίσης αποδειχθεί ότι συμβάλλουν στην συστημική διακύμανση φαρμακευτικές θεραπείες κατά του καρκίνου. Για παράδειγμα, OATP1B3 αρχικά αναγνωρίστηκε ως υψηλής συγγένειας στο ήπαρ μεταφορέας του paclitaxel, και είναι επίσης το πιο αποτελεσματικό μεταφορέας ηπατική πρόσληψη του docetaxel [7], [8]. OATP1B1 και OATP1B3 επίσης εισροή SN-38 [4], και αυτή η μεταφορά μπορεί να έχει επιπτώσεις στη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου [2]. Ωστόσο, οι μηχανισμοί εισροή όγκου πρέπει ακόμη να διερευνηθούν για αυτά τα φάρμακα σε σχετικές ασθένειες, και αυτή η προσπάθεια έχει παρεμποδιστεί από την έλλειψη μελετών που έχουν αξιολογηθεί έκφραση του όγκου των OATPs.

Όπως έχουν OATPs εμπλακεί σε δύο η αιτιολογία και τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη και του καρκίνου του παχέος εντέρου, αναλάβαμε να διερευνήσει κατά πόσον ή όχι αυτές οι OATPs επίσης υπερεκφράζονται σε άλλους τύπους όγκων και αν η έκφραση OATP μπορούσε να χρησιμεύσει ως βιοδείκτη για την ανάπτυξη του όγκου ή την επιθετικότητα του όγκου σε ορισμένες ασθένειες ή όχι.

Υλικά και Μέθοδοι

Κλινικά δείγματα

τα δείγματα ελήφθησαν από ΟηΟεηε (TissueScan Καρκίνος Έρευνα πίνακα ΙΙΙ, Rockville, MD). Εν συντομία, RNA απομονώθηκε από ασθενείς μικτών ηλικία, την κλινική διάγνωση, και με διάφορα στάδια του όγκου. cDNA δημιουργήθηκε, κανονικοποιημένη προς ακτίνη Β, ελέγχονται για μόλυνση και την ευαισθησία (όπως προσδιορίζεται από τον κατασκευαστή). Ο πίνακας περιλαμβάνει 384 δείγματα που περιλαμβάνουν 22 καρκίνους και συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς. Οι αριθμοί των δειγμάτων που αντιστοιχούν σε διαφορετικούς τύπους όγκων και τον αριθμό των δειγμάτων που προέρχονται από διαφορετικές ποιότητες όγκων αναφέρονται στον Πίνακα S1.

Προσδιορισμός της έκφρασης του mRNA

SLCO1B3 (Hs00251986_m1), SLCO2B1 (Hs00200670_m1) , τα επίπεδα έκφρασης και SLCO1B1 (Hs00272374_m1) αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασίες έκφρασης Taqman Gene (Applied Biosystems). Εν συντομία, οι εκκινητές αναμίχθηκαν με Taqman Master Mix (αριθ Amp Erase) και απεσταγμένο νερό, στη συνέχεια προστίθεται στα δείγματα. Οι πλάκες εις διπλούν επί Mx3005P QPCR System (Agilent Technologies) για 10 λεπτά στους 95 ° C, στη συνέχεια το ποδήλατο για 42 κύκλους των 30 δευτερολέπτων για 95 ° C και 1 λεπτό 60 ° C, στη συνέχεια, FAM (αναφορά ROX) ανάγνωση μετά από κάθε κύκλο. Η έκφραση του κάθε γονιδίου SLCO κανονικοποιήθηκε προς ακτίνη δια προσδιορισμού του κατωφλίου κύκλου (Ct) για κάθε γονίδιο με τον ακόλουθο τύπο: 2∧- (Ct

SLCO-Ct

ActinB) * 10

5 (δηλαδή, η ΔCt). Σε περιπτώσεις όπου τα δείγματα mRNA ήταν κάτω από το LLOQ, τα δείγματα παρατηρήθηκε ότι είχαν

SLCO

επίπεδα του mRNA σε μόλις κάτω LLOQ (δηλαδή 42,1 κύκλοι) και κανονικοποιήθηκαν προς ακτίνη, όπως περιγράφεται παραπάνω. Αυτό θεωρείται ότι είναι μια συντηρητική προσαρμογή καθώς υπήρχαν ένας μεγάλος αριθμός δειγμάτων με μη ανιχνεύσιμο

SLCO

επίπεδα mRNA που ήταν πιθανό να είναι σημαντικά χαμηλότερο από το LLOQ.

Προσδιορισμός της έκφρασης της πρωτεΐνης

συστοιχίες τμήμα ιστού για ουροδόχου κύστης, του παχέος εντέρου και του προστάτη ελήφθησαν από Pantomics (Richmond, CA). Η συστοιχία προστάτη καρκινικός ιστός περιλαμβάνει καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη και καρκινικούς ιστούς? οι συνήθεις και ιστών δείγματα δεν ταιριάζουν ανά ασθενή. συστοιχίες της ουροδόχου κύστης και του παχέος εντέρου ελήφθησαν επίσης από την παραπάνω εταιρεία και αυτά περιλαμβάνονται αμέτοχη και καρκινικούς ιστούς. Όλοι οι ιστοί λήφθηκαν από χειρουργική εκτομή και σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη για 24 ώρες. Τα σλάϊντς προετοιμασία με ψήσιμο για 1 ώρα στους 60 ° C πριν από την αφαίρεση της παραφίνης σε ξυλόλιο, τότε prepping για χρώση σε 100% αιθανόλη, 95% αιθανόλη, 70% αιθανόλη, και απεσταγμένο νερό πλύσεις. Ένα slide ανά σετ έγινε χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Οι υπόλοιπες πλάκες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για ανοσοφθορισμού με τοποθέτηση σε 95 ° C 10 mM ρυθμιστικό κιτρικού νατρίου για 5 λεπτά και στη συνέχεια αφέθηκε να κρυώσει για 20 λεπτά. Τα πλακίδια αποκλείστηκαν για 30 λεπτά πριν από πρωτογενές αντίσωμα έναντι OATP8 εφαρμόστηκε 1:100 (Progen) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Τα πλακίδια πλύθηκαν σε Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα Tween πριν την εφαρμογή του δευτερογενούς FITC κατσίκας αντι-ποντικού 1:400 (Abcam) για 2 ώρες. Τα πλακίδια πλύθηκαν και πάλι σε TBST και τοποθετείται με Vectashield (Vector Labs) με DAPI. Εικόνες ελήφθησαν με ένα μικροσκόπιο Olympus BX51 με UPlanFl 40x και 10x φακούς. Διορατικότητα Firewire κάμερα και Spot λογισμικό απεικόνισης έκδοση 4.5 χρησιμοποιήθηκαν για να συλλάβει τις εικόνες. Adobe Photoshop CS3 έκδοση 10 χρησιμοποιήθηκε για τις αλλαγές μετά την σύλληψη όπου όλες οι φωτογραφίες επεξεργάστηκαν το ίδιο.

Στατιστικές εκτιμήσεις

Συγκρίσεις μεταξύ της συχνότητας των

SLCO

ή έκφραση ΟΑΤΡ σε κανονική έναντι ιστών όγκου διεξήχθη χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher. Έγιναν συγκρίσεις μεταξύ του μεγέθους του

SLCO

έκφραση mRNA έναντι του αντίστοιχου κανονικού ιστού χρησιμοποιώντας το τεστ Wilcoxon rank sum? αυτά τα δεδομένα αναφέρονται ως η μέση ΔCt (95% διάστημα εμπιστοσύνης? CI) και αντίστοιχη πολλαπλή μεταβολή από το φυσιολογικό ιστό. Η δοκιμή τάση Cochran-Armitage χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί αν η συχνότητα του

SLCO

ή έκφραση ΟΑΤΡ μεταβάλλεται με διαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων ή το στάδιο, ενώ η δοκιμαστική τάση Jonckheere-Terpstra χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί εάν το μέγεθος του

SLCO

mRNA έκφραση μεταβάλλεται με διαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων ή το στάδιο. Εκτίμηση μεγέθους έκφρασης πρωτεΐνης δεν ήταν δυνατόν, αν και δεν είχαμε σημειώστε αν όγκων αποκωδικοποιούσε ανιχνεύσιμα επίπεδα OATP1B3 ή όχι. Μόνο δύο-ουρά

Τα P

-τιμές αναφέρονται, και με δεδομένη την διερευνητική φύση αυτής της μελέτης,

P

-τιμές αναφέρονται ως σημαντικές, αν P & lt? 0,05? Ωστόσο, θα πρέπει να σημειωθεί ότι η συντηρητική μη παραμετρικές και ακριβείς δοκιμές έγιναν με σκοπό τη μείωση του δυναμικού για false positives.

Αποτελέσματα

Η έκφραση του mRNA σε SLCO φυσιολογικών και καρκινικών ιστών

πρώτα Υποθέσαμε ότι η έκφραση SLCO θα ήταν ένας βιοδείκτης για πολλαπλούς διαφορετικούς τύπους όγκων που εξαρτώνται από ορμόνη. Για το σκοπό αυτό,

SLCO

έκφραση του mRNA προσδιορίστηκε σε δείγματα που προέρχονται από φυσιολογικό ανθρώπινο ιστό και το αντίστοιχο ιστό του όγκου. συχνότητες έκφρασης προσδιορίστηκαν για

SLCO1B3

,

SLCO1B1

, και

SLCO2B1

, και το ποσοστό των φυσιολογικών ή καρκινικών ιστών που εκφράζουν

SLCOs

αναφέρονται (βλέπε Το Σχήμα 1Α-C αντίστοιχα). όγκων του προστάτη εξέφρασε

SLCO1B3

πολύ πιο συχνά από ό, τι φυσιολογικούς ιστούς του προστάτη (62% έναντι 0%,

n

= 21 και

n

= 5 αντίστοιχα?

P

= 0,04) και συχνότερα με την αύξηση σκορ Gleason (

P

= 0,03). Επιπλέον,

SLCO1B3

έκφρασης ήταν λιγότερο συχνή σε όγκους των όρχεων (21% έναντι 67%,

n

= 19 και

n

= 6, αντίστοιχα?

P

= 0,06).

SLCO1B1

είχε εκφράσει συχνά σημαντικά υψηλότερο με τη μείωση της διαφοροποίησης των όγκων του παχέος εντέρου (

P

= 0.04).

SLCO2B1

δεν εκφράστηκε σημαντικά διαφορετική σε καρκίνο συγκριτικά με φυσιολογικό ιστό. Εκτός από τις παραπάνω παρατηρήσεις, θα πρέπει να σημειωθεί ότι υπήρξαν αρκετές περιπτώσεις όπου δεν υπήρχε

SLCO

έκφραση σε φυσιολογικούς ιστούς, αλλά εκφράζονται σε καρκινικά δείγματα. Αν και δεν είναι στατιστικά σημαντική λόγω της χαμηλής ισχύος, ορισμένοι καρκινικοί ιστοί έχουν

SLCO

έκφρασης και θα πρέπει να αξιολογούνται περισσότερο σε μελλοντικές μελέτες. Οι όγκοι αυτοί περιλαμβάνονται (για

SLCO1B3

)? του παχέος εντέρου, του ενδομητρίου, του οισοφάγου, γαστροοισοφαγική, των νεφρών, των ωοθηκών, και του θυρεοειδούς, (για

SLCO1B1

)? τραχήλου, του ενδομητρίου, του οισοφάγου, γαστροοισοφαγική, πνεύμονα, λέμφος, των ωοθηκών, του θυρεοειδούς, της ουροδόχου κύστης και της μήτρας (για

SLCO2B1

)? του παχέος εντέρου, της ουροδόχου κύστης (Βλέπε Πίνακα S1 για την ολοκληρωμένη ανάλυση των δεδομένων).

Δεδομένα πρώτα εκφράζεται ως ποσοστό των ιστών με την έκφραση του mRNA του Α)

SLCO1B3

Β)

SLCO1B1

, και Γ)

SLCO2B1

, και στη συνέχεια, όπως το μέγεθος της κανονικοποιημένης έκφρασης του mRNA των D)

SLCO1B3

, E)

SLCO1B1

, και F)

SLCO2B1

. * – P & lt? 0,05, ** – P & lt?. 0.01 για την ακριβή και Wilcoxon Rank Sum του Fisher Δοκιμές αντίστοιχα

Η

Καθώς ορισμένοι καρκινικοί ιστοί είχαν παρόμοια

SLCO

συχνότητες έκφρασης ως φυσιολογικούς ιστούς, μπορούμε επίσης να εξακριβωθεί αν το μέγεθος του

SLCO

έκφραση ήταν διαφορετική για

SLCO1B1

,

SLCO1B3

, και

SLCO2B1

(βλέπε Εικόνα 1 D-F αντίστοιχα) . Σημαντικές διαφορές στα επίπεδα έκφρασης (δηλαδή σημαίνει ΔΟΙ

κανονικό (95% CI) vs. ΔΟΙ

όγκου (95% CI)) μεταξύ των φυσιολογικών και καρκινικών ιστών παρατηρήθηκαν για

SLCO1B3

στον καρκίνο του προστάτη [ ,,,0],0.23 (0.23 να 0.23) έναντι 104 (44 να 164)? 45,7 φορές αύξηση?

P

= 0.03] και τον καρκίνο των όρχεων [174 (0,3 έως 350) έναντι 14,0 (0,3 έως 26)? 12.8-φορές μείωση?

P

= 0.01]. Σημαντικές αυξήσεις παρατηρήθηκαν για

SLCO1B1

σε καρκίνο του ήπατος [396000 (225000 με 567000) έναντι 161.000 (41.000 έως 280.000)? 2.4 φορές μείωση?

P =

0.04].

SLCO2B1

έκφραση μειώθηκε σημαντικά σε καρκίνο του παγκρέατος [27,5 (9,5 έως 45) έναντι 9,1 (05.05 – 12.08)? 3,0 φορές μείωση?

P

= 0.05] και καρκίνο του ήπατος [47,3 (16,1 έως 78) έναντι 17,0 (4,9 έως 29)? 2.7 φορές μείωση?

P

= 0.04]. Μια πιο ολοκληρωμένη ανάλυση των διαφορών έκφρασης παρέχεται στον Πίνακα S1.

έκφραση ΟΑΤΡ έναντι της διαφοροποίησης του όγκου και το στάδιο

Από προηγούμενες εκθέσεις έδειξαν ότι ορισμένα OATPs συμμετείχαν στην αιτιολογία και εξέλιξη [1] της νόσου, [2], [5], υποθέσαμε ότι

SLCO

έκφραση θα πρέπει να σχετίζεται με την αύξηση της διαφοροποίησης των όγκων ή το στάδιο. Για όγκους του προστάτη, η έκφραση του

SLCO1B3

αυξάνεται μαζί με Gleason σκορ έως 67 φορές [σημαίνουν ΔΟΙ (95% CI) = 0,23 (0,23 έως 0,23), 2.6 (-4 έως 9.2), 8.5 (- 0,7 να 17,7), 15,5 (-13 έως 44), 15,0 (2,4 έως 27), για τον φυσιολογικό ιστό, και Gleason = 6, 7, 8, 9 αντίστοιχα?

P

= 0,03? Σχήμα 2Α].

SLCO1B1

έκφραση που σχετίζονται με τη διαφοροποίηση στον καρκίνο του ήπατος (395000 (225000 με 567000), 175000 (4300-310000), 47000 (11.000 έως 83.000) και 3500 (Ν /Α) για φυσιολογικό ιστό, και καλά , μέτρια, και η κακή ιστού διαφοροποιημένο όγκου αντίστοιχα?

P

= 0,0004, Σχήμα 2Β) μέχρι μια διαφορά -74 φορές.

SLCO1B1

έκφραση επίσης σχετίζονται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου (0.23 (0.23 να 0.23), 0.23 (0.23 να 0.23), 1.3 (-1.0 έως 3.6), και 2,9 (Ν /Α) για τον φυσιολογικό ιστό, και καλά, μέτρια, και αδιαφοροποίητο καρκινικό ιστό, αντίστοιχα?

P

= 0.05, Σχήμα 2C) έως πλάσια διαφορά 12.5.

SLCO2B1

έκφραση επίσης συσχετίζεται αρνητικά σε διαφοροποίηση σε καρκίνο του ήπατος (47 (4.4 έως 82), 13 (-3,2 έως 28), 3,1 (1,4 έως 4.7), και 1,7 (Ν /Α) για τον φυσιολογικό ιστό και καλά, μέτρια, και η κακή ιστού διαφοροποιημένο όγκου αντίστοιχα?

P

= 0.005) έως και 26 φορές την αλλαγή (Εικόνα 2D)

SLCO1B3

έκφραση του mRNA από. διαφοροποίηση στο Α) του προστάτη Ρ = 0.03.

SLCO1B1

έκφραση σε Β) ηπατική P = 0.0004, C) του παχέος εντέρου P = 0,05.

SLCO1B2

έκφραση στο D) του ήπατος P = 0,005. E)

SLCO2B1

έκφραση από το στάδιο του θυρεοειδούς P = 0,04. Όλα βρέθηκαν ως signifcant συσχετίσεις με το τεστ τάσης Jonckheere-Terpstra.

Η

Τα στοιχεία έκφρασης και η συχνότητα αναλύθηκε επίσης σε σχέση με το στάδιο.

SLCO2B1

έκφραση αυξήθηκε με το στάδιο έως και 29 φορές-διαφορά στον καρκίνο του θυρεοειδούς (P = 0.04). Δείτε την Εικόνα 2Ε. Για κανονική και το στάδιο Ι, II, III, IVA η αύξηση ήταν 0,23 (0,23 να 0.23), 1.4 (0,6 να 2.1), 5.6 (-0.8 έως 12), 6,7 (-0,4 έως 14), 1,0 (Ν /Α) . Λόγω των περιορισμένων δειγμάτων αριθμούς για κάθε στάδιο δεν υπάρχουν άλλες σχέσεις ήταν στατιστικά σημαντικές. Ωστόσο, άλλες αξιοσημείωτες τάσεις ήταν

SLCO2B1

μειωμένη έκφραση από το στάδιο του καρκίνου του παγκρέατος,

SLCO1B3

αυξημένη συχνότητα από το στάδιο του καρκίνου του προστάτη, και

SLCO1B1

μειωμένη έκφραση από το στάδιο στο ήπαρ Καρκίνος. Για τα πλήρη στοιχεία που βλέπε πίνακα S2.

πρωτεΐνη ΟΑΤΡ έκφραση έναντι του όγκου διαφοροποίηση

Για να καθοριστεί εάν η μετάφραση ΟΑΤΡ είναι παρόμοιο με το ποσοτικής PCR, πραγματοποιήσαμε ανοσοφθορισμού σε δείγματα ιστού από προστάτη, του παχέος εντέρου, και του καρκίνου της ουροδόχου κύστης για την ανίχνευση OATP1B3. OATP2B1 δεν επελέγη για την επικύρωση πρωτεΐνη επειδή εκφράζεται τόσο σε φυσιολογικούς και καρκινικούς ιστούς. Για όγκων του προστάτη, η έκφραση του OATP1B3 παρατηρήθηκε κυρίως σε όγκους του προστάτη και όχι φυσιολογικούς ιστούς (

Ρ = 0,001

? Σχήμα 3Α-Ε και Πίνακας 1) και υψηλής έκφρασης στο στρώμα. Επιπλέον, η συχνότητα της έκφρασης OATP1B3 μεταβάλλεται σημαντικά με το σκορ Gleason (

P

= 0.001? Πίνακας 1). Έκφραση ήταν επίσης πιο συχνές στον καρκίνο του παχέος εντέρου (

P =

0.06, Σχήμα 3F-Η και Πίνακας 1) και κινήθηκαν προς μια σύνδεση με μια στατιστικά σημαντική υψηλότερη επίπτωση της έκφρασης σε καρκίνο του παχέος εντέρου με τη δοκιμασία Cochran-Armitage (

P =

0,02? Πίνακας 1). έκφραση OATP1B3 παρατηρήθηκε κυρίως στο αγγειακό σύστημα σε καρκίνο του παχέος εντέρου και επεμβατική, τα καρκινικά επιθηλιακά κύτταρα του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Σύμφωνα με τα στοιχεία του mRNA, η έκφραση OATP1B3 δεν σχετίζεται με την αύξηση της ιστολογικής βαθμούς του καρκίνου της ουροδόχου κύστης (

P

= 0,34? Βλέπε Πίνακα 1 και το Σχήμα 3Θ-K), αλλά κινήθηκαν προς μια ένωση με τους βαθμούς καρκίνο της ουροδόχου κύστης, παρά ένα περιορισμένου αριθμού δειγμάτων. (

P

= 0,07? βλέπε πίνακα 1)

Ταυτόχρονη τομές ιστού χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (αριστερό πάνελ) και ανοσοφθορισμό (δεξιά πλευρά) για την OATP1B3. OATP1B3 ανιχνεύεται με FITC, στο πράσινο, και πυρήνες χρωματίστηκαν με DAPI, σε μπλε χρώμα. Οι ιστοί του προστάτη η οποία περιλαμβάνει, ΒΡΗ, και οι όγκοι των ποικίλων βαθμού αναφέρονται ως εξής: Α) καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, Β) Gleason 6, C) Gleason 7, D) Gleason 8, E) Gleason 9. τμήματα της ουροδόχου κύστης ιστού που προέρχεται από F) κανονική κύστη, G) βαθμού II, H) βαθμού ΙΙΙ όγκους της ουροδόχου κύστης. Τέλος, ιστό του παχέος εντέρου από το Ι) φυσιολογικό κόλον, J) βαθμού ΙΙ (10x μεγέθυνση), K) βαθμού III όγκους του παχέος εντέρου αποκαλύπτονται. Όλες οι φωτογραφίες τραβήχτηκαν σε μεγέθυνση 40x, εκτός αν αναφέρεται διαφορετικά.

Η

Συζήτηση

SLCO

(και OATP) υπερέκφραση έχει ήδη αποδειχθεί ότι είναι ένα σημαντικό παράγοντας σε κόλον και του καρκίνου του προστάτη (1,2)? Επιπλέον μεταβολή στη λειτουργία του ΟΑΤΡ [1] φαίνεται να σχετίζεται με την κλινική έκβαση των ενδοκρινική θεραπεία του καρκίνου του προστάτη [5], καθώς και τη συνολική επιβίωση των ανδρών CRPC [1]. Προηγούμενες εκθέσεις έδειξαν επίσης σημαντικές μειώσεις στην έκφραση του

SLCOs

στο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα? Αυτό το φαινόμενο είναι πολύ πιθανό σχετίζεται με τη μείωση της μεταβολικής λειτουργίας λόγω αποδιαφοροποίηση σε όγκους ήπατος που προέρχονται από δείγματα ασθενών [9]. Η παρούσα μελέτη επιβεβαιώνει τις ανωτέρω παρατηρήσεις και δείχνει για πρώτη φορά ότι

SLCO

μεταβλητότητα έκφρασης συνδέεται επίσης με διάφορους άλλους τύπους όγκων, όπως: καρκίνος του παχέος εντέρου, καρκίνο ήπατος, παγκρεατικό καρκίνο, καρκίνο του προστάτη, καρκίνο των όρχεων, και Καρκίνος θυροειδούς. Παρά προηγουμένως δημοσιευμένες εκθέσεις,

SLCO1B3, SLCO2B1

, και

SLCO1B1

δεν εκφράζεται έντονα σε δείγματα καρκίνου του μαστού μας [10], [11].

Δείξαμε επίσης ότι

SLCO1B3

επίπεδα έκφρασης σχετίζονται σημαντικά με το σκορ Gleason στον καρκίνο του προστάτη.

SLCO1B1

επίπεδα έκφρασης ήταν σημαντικά σχετίζονται με το βαθμό διαφοροποίησης στο ήπαρ και του κόλου.

SLCO2B1

έκφραση επίσης σημαντικά που σχετίζονται με το ήπαρ και τον καρκίνο του θυρεοειδούς. Immunoflourescent για OATP1B3 έδειξε διακριτή εντοπισμό σε καρκίνους του παχέος εντέρου, της κύστης και του προστάτη. Το αγγειακό σύστημα χρωματίστηκε για OATP1B3 μόνο σε υψηλής ποιότητας καρκίνο του παχέος εντέρου, τα καρκινικά επιθήλια στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης, και το στρώμα στον καρκίνο του προστάτη. Έτσι OATP1B3 θα μπορούσαν να συμμετέχουν άμεσα ή έμμεσα υποστηρίζουν καρκινογένεση ανάλογα με τον τύπο του καρκίνου. Προηγουμένως αναφέρθηκε μελέτες δείχνουν ότι μεταβολή στην έκφραση του OATPs είναι πιθανόν εμπλέκονται στην υποκείμενη αιτιολογία των ασθενειών μέσω της εισροής των ενδοκρινικών παραγόντων.

OATPs εισροή διάφορες στεροειδείς ορμόνες που (δηλαδή DHEA, τεστοστερόνη, DHT, και οιστρογόνου-θειικό), ότι διέπουν την αιτιολογία πολλών διαφορετικών ασθενειών. Για λόγους σαφήνειας, ένας πίνακας επιλεγμένων υποστρωμάτων ΟΑΤΡ συμπεριλαμβάνεται (Πίνακας 2). Η τεστοστερόνη είναι ένα υπόστρωμα για OATP1B3 και μπορεί να εξηγήσει το ρόλο της στην προστάτη [1], της ουροδόχου κύστης [12], [13], και των όρχεων [14] ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου. OATP1B3 και OATP1B1 επίσης εισροή οιστρόνη-3-θειϊκό και θυροξίνη και οι ορμόνες αυτές διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην [15] και του θυρεοειδούς των ωοθηκών [16] αντίστοιχα. Τα υποστρώματα OATP θα μπορούσαν επίσης να αναστέλλουν την ανάπτυξη του καρκίνου, έτσι να επιλέγονται αρνητικά έναντι καθώς προχωρά ο καρκίνος. Για παράδειγμα, η DHEA-S αναστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος [17], [18], η οποία θα μπορούσε να εξηγήσει την παρατήρηση ότι

SLCO2B1

έκφραση είναι μειωμένη σε καρκίνο του παγκρέατος. Επιπλέον, τα παρόντα δεδομένα μπορεί επίσης να υποδεικνύει μια προηγουμένως άγνωστη ρόλο για τις ΟΑΤΡ-μεταφέρονται ορμονών σε αυτούς τους καρκίνους. Τέλος, OATPs μεταφέρουν ένα ευρύ φάσμα ουσιών, έτσι θα μπορούσε επίσης να υπάρχει αγνώστων στοιχείων ή μη χαρακτηρισμένα υποστρώματα που επηρεάζουν την εξέλιξη της νόσου στις προαναφερόμενες μορφές καρκίνου.

Η

Παρά το γεγονός ότι παραμένει ελάχιστα διερευνηθεί, έκφραση ΟΑΤΡ μπορεί να επηρεάσει τη θεραπεία επιτυχία σε ορισμένους τύπους καρκίνου (Πίνακας 2). OATP1B3 εισροές ντοσεταξέλη, πακλιταξέλη, imatinib, ιρινοτεκάνη, SN-38, και μεθοτρεξάτη ενώ εισροές OATP1B1 κετοκοναζόλη, πακλιταξέλη, και SN-38. OATP2B1 υποστρώματα ναρκωτικών παραμένουν ελάχιστα διερευνηθεί. Είναι ενδιαφέρον ότι, αυτά τα φάρμακα είναι συχνά πολύ αποτελεσματική στη θεραπεία μεταστατικών ασθενειών που αναπτύσσονται ως αποτέλεσμα των πρωτογενών όγκων που αξιολογήθηκαν στο παρόν. Docetaxel έχει εγκριθεί για τη θεραπεία του CRPC και μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και OATP1B3 εκφράζεται υψηλά σε προστάτη και των πνευμόνων όγκους υποδηλώνοντας ότι η αποτελεσματικότητα της αγωγής με docetaxel σε αυτές τις ασθένειες μπορεί να είναι, εν μέρει, λόγω της ευαισθησίας στη docetaxel που προκύπτουν από την υποκείμενη αιτιολογία της νόσου. Χρησιμοποιώντας όγκων του προστάτη ως παράδειγμα, φαίνεται ότι OATP1B3 υπερεκφράζεται κατά την διάρκεια της ανάπτυξης της νόσου στον πρωτογενή όγκο, διευκολύνει την επιβίωση των μεταστατικών αλλοιώσεων του προστάτη κατά τη διάρκεια της θεραπείας στέρησης ανδρογόνων [1], [5], [19], και μπορεί να εμπλέκεται στην ευαισθησία της CRPC όγκων προς docetaxel λόγω της αυξημένης πρόσληψης. Επιπλέον,

SLCO1B1

υπερέκφραση σε όγκους του προστάτη μπορεί επίσης να εξηγήσει την ευαισθησία του καρκίνου του προστάτη με κετοκοναζόλη. Παρόμοιες σχέσεις μπορεί να προταθεί για χρήση του paclitaxel (σε ωοθηκών, του πνεύμονα, του οισοφάγου και όγκους), imatinib (σε γαστροοισοφαγική όγκους), ιρινοτεκάνη και SN38 (στο παχύ έντερο και πνεύμονα όγκους), και μεθοτρεξάτη (σε όγκους του πνεύμονα). Επιπλέον, τα προηγούμενα δεδομένα έχουν δείξει ότι με τη θεραπεία και την ασθένεια που σχετίζονται με

SLCO1B3

έκφραση στο ήπαρ ως αποτέλεσμα διαφορές στην φαρμακοκινητική έκθεση σε φάρμακα [20]. Προτείνουμε, λοιπόν, την υπόθεση που OATPs εμπλέκονται σε πολλαπλά φάρμακα ευαισθησία μέσω μηχανισμών εισροή και φάρμακα που στοχεύουν εισροή ΟΑΤΡ μπορεί να είναι πιο αποτελεσματική σε ορισμένες ασθένειες και πλαίσια θεραπείας με βάση την έκφραση ΟΑΤΡ στον όγκο και στο ήπαρ.

Περιορισμοί στην το έργο αυτό περιλαμβάνουν χαμηλή θετική όγκους για αρκετές παρτίδες δειγμάτων, τόσο πολύπλοκη ανάλυση σχετικά με τη διαφοροποίηση και την έκφραση δεν μπορεί να αξιολογηθεί επαρκώς. Επιπλέον, μικρή για να μην στοιχεία διαφοροποίησης ήταν διαθέσιμη για όρχεων, του θυρεοειδούς, της λέμφου, της μήτρας, και γαστροοισοφαγική δείγματα. Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, υπάρχουν πολλά υποστρώματα OATPs που μπορεί να εξηγήσει το ρόλο του στις εντοπίστηκαν καρκίνους έτσι περαιτέρω παρακολούθηση μελέτες θα πρέπει να περιλαμβάνει κλινική επικύρωσης, καθώς και λειτουργικές μελέτες που σχετίζονται με το υπόστρωμα μεταφοράς. Η κλινική παρακολούθηση έρευνα για μεμονωμένες καρκίνων είναι σαφώς δικαιολογημένη και θα πρέπει να περιλαμβάνει την εξέταση της έκφρασης σε μεγαλύτερες ομάδες και επιβεβαιώνοντας την επίδραση των μεταφερόμενων υποστρωμάτων στην εξέλιξη της νόσου σε θυρεοειδούς, του ενδομητρίου, του πνεύμονα, των ωοθηκών, του παγκρέατος, των όρχεων, και των καρκίνων της ουροδόχου κύστης.

Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που δείχνει ότι

SLCO1B1

,

SLCO1B1

, και

SLCO2B1

σημαντικά εκφράζεται (ή έκφραση μειώνεται) σε μια ποικιλία σε όγκους, συμπεριλαμβανομένων: του παχέος εντέρου καρκίνο, καρκίνο του ήπατος, καρκίνο του παγκρέατος, καρκίνο του προστάτη, καρκίνος των όρχεων, και τον καρκίνο του θυρεοειδούς. Προτείνουμε επίσης ότι η έκφραση ΟΑΤΡ μπορεί να είναι ένας βιολογικός δείκτης στον προστάτη και του κόλου, και τη γνώση της έκφρασης του όγκου των OATPs θα μπορούσε να καθοδηγήσει χημειοθεραπεία. Καταλήγουμε στο συμπέρασμα έκφραση ΟΑΤΡ μπορεί να έχει επιπτώσεις στην αιτιολογία και την αποτελεσματικότητα της θεραπείας της νόσου, και θα πρέπει να μελετηθεί περαιτέρω για την έκφρασή του στον καρκίνο.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

ιστοί με ανιχνεύσιμη έκφραση SLCO1B1, SLCO1B3 και SLCO2B1.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020372.s001

(XLS)

Πίνακας S2.

Έκφραση των SLCO1B1, SLCO1B3 και SLCO2B1 από το στάδιο του καρκίνου.

doi: 10.1371 /journal.pone.0020372.s002

(XLS)

Ευχαριστίες

Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε τον Δρ Μαρία J. Μερίνο για βοήθεια σχετικά με την παθολογία. Θα ήθελα επίσης να ευχαριστήσω τον Michael J. Walsh για να βοηθήσει την οργάνωση και την επεξεργασία των δεδομένων qPCR του.