Αφηρημένο

Η έκθεση του ανθρώπου σε δισφαινόλη Α (BPA) είναι πανταχού παρούσα. Οι μελέτες σε ζώα βρέθηκε ότι η BPA συμβάλλει στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη, αλλά τα ανθρώπινα δεδομένα είναι ελάχιστα. Η μελέτη μας εξέτασε τη σχέση μεταξύ του ουροποιητικού επίπεδα BPA και του καρκίνου του προστάτη και αξιολόγησε τις επιπτώσεις της BPA στην επαγωγή των κεντροσωμάτων ανωμαλίες ως υποκείμενο μηχανισμό προώθηση της καρκινογένεσης του προστάτη. Η μελέτη, που περιλαμβάνει 60 ασθενείς ουρολογία, βρέθηκε υψηλότερα επίπεδα ουρικής ΒΡΑ (κρεατινίνη προσαρμοσμένο) σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη (5,74 μg /g [95% CI? 2,63, 12,51]) από ότι σε ασθενείς με καρκίνο μη-προστάτη (1,43 μg /g [95% CI? 0,70, 2,88]) (

σ

= 0.012). Η διαφορά ήταν ακόμη πιο σημαντική σε ασθενείς & lt? 65 ετών. Μια τάση προς μια αρνητική συσχέτιση μεταξύ των ουροφόρων ΒΡΑ και ορού PSA παρατηρήθηκε σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη αλλά όχι σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη μη.

In vitro μελέτες εξέτασαν

centrosomal ανωμαλίες, μικροσωληνίσκων πυρήνων, και ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη τέσσερα (LNCaP, C4-2, 22Rv1, PC-3) και δύο αθανατοποιημένα φυσιολογικά επιθηλιακά προστάτη κυτταρικές γραμμές (NPrEC και RWPE-1). Η έκθεση σε χαμηλές δόσεις (0,01-100 ηΜ) ΒΡΑ αύξησε το ποσοστό των κυττάρων με κεντροσωμάτων δύο ενίσχυση σε οκτώ φορές. Δόση απαντήσεις είτε κορυφώθηκε ή φθάσει στο οροπέδια με 0,1 έκθεσης nM BPA. Αυτή η χαμηλή δόση προωθείται επίσης μικροσωληνίσκων πυρήνων και η αναγέννηση σε κεντροσωμάτια στην RWPE-1 και ενισχυμένη αγκύρωση-ανεξάρτητη ανάπτυξη στην C4-2. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η ουρική επίπεδο BPA είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για τον καρκίνο του προστάτη και ότι η έκθεση BPA μπορεί να μειώσει τα επίπεδα του PSA στον ορό σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Επιπλέον, η διατάραξη του κεντροσώματος κύκλου επικάλυψη με χαμηλή δόση BPA μπορεί να συμβάλλει στην νεοπλασματικό μετασχηματισμό του προστάτη

Παράθεση:. Tarapore P, Ying J, Ouyang Β, Burke Β, Bracken Β, Ho SM (2014) Η έκθεση σε δισφαινόλη Α συσχετίζεται με πρώιμη έναρξη του καρκίνου του προστάτη και προάγει πολλαπλασιασμό κεντροσωμάτων και Anchorage-ανεξάρτητη ανάπτυξη

In Vitro

. PLoS ONE 9 (3): e90332. doi: 10.1371 /journal.pone.0090332

Επιμέλεια: Νατάσα Κυπριανού, Πανεπιστήμιο του Κεντάκι College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25 του Νοεμβρίου 2013? Αποδεκτές: 30, Ιανουαρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 3 Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Tarapore et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει με επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (P30-ES006096, U01-ES019480, U01-ES020988), ένα βραβείο Merit Veterans Administration (I01-BX000675), μια εσωτερική πηγή χρηματοδότησης από το Πανεπιστήμιο του Σινσινάτι να SMH και PT , και ένα Congressionally Σκηνοθεσία Ιατρικό Τμήμα Έρευνας Πρόγραμμα Βραβείο άμυνας (PC094619) για να PT. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η δεύτερη πιο συχνή κακοήθεια μεταξύ των ανδρών στη Βόρεια Αμερική. Η γήρανση είναι ένα καλά τεκμηριωμένο παράγοντα κινδύνου για την PCA [1]. Ένας στους έξι άνδρες θα αναπτύξει προστάτη κατά τη διάρκεια της ζωής τους? Ωστόσο, ο καρκίνος είναι σπάνια διαγιγνώσκεται στους άνδρες & lt? 40 ετών, με σχεδόν τα δύο τρίτα περιπτώσεις που αναφέρθηκαν [2], [3] στους άνδρες στην ηλικία των 65. Από το 2006 έως το 2010, η μέση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 66 ετών, σύμφωνα με τα στατιστικά στοιχεία από την επιτήρηση Επιδημιολογίας Εθνικού Ινστιτούτου Καρκίνου και τα τελικά αποτελέσματα Σπουδών (2013) [4]. Σημαντικοί παράγοντες που συμβάλλουν, εκτός από την ηλικία είναι φυλή και το οικογενειακό ιστορικό [1], ενώ λίγα είναι γνωστά σχετικά με τις επιπτώσεις των ενδοκρινικών διαταρακτών στην ΣΕΣΣ.

Η δισφαινόλη Α (BPA) είναι μια οργανική ένωση με χημικό τύπο (CH

3)

2C (C

6Η

4OH)

2. ΒΡΑ χρησιμοποιείται για να κάνει πολυανθρακικό πλαστικό και εποξικές ρητίνες, οι οποίες υπάρχουν σε χιλιάδες καταναλωτικά προϊόντα [5], [6]. Στις Ηνωμένες Πολιτείες, η έκθεση σε BPA είναι ευρέως διαδεδομένη, που υπερβαίνει το 90% του γενικού πληθυσμού [7]. απορρόφηση από το δέρμα, εισπνοή, κατάποση και από μολυσμένα τρόφιμα και το νερό είναι οι σημαντικότερες οδούς έκθεσης [8]. Ως ενδοκρινική διαταραχή που μιμείται τα οιστρογόνα και την ορμόνη του θυρεοειδούς, η BPA ενεργεί επίσης ως μια μεταβολική και ανοσολογική διαταραχή. Έτσι, οι δυσμενείς επιπτώσεις στην υγεία του BPA είναι εκτεταμένες [9], [10], και τα υψηλότερα επίπεδα έκθεσης BPA συσχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο καρδιαγγειακής νόσου, η παχυσαρκία, ο διαβήτης, διαταραχές του ανοσοποιητικού, και μια σειρά αναπαραγωγικών δυσλειτουργιών [11], [ ,,,0],12], [13]. Επιπλέον,

in vitro

και οι μελέτες σε πειραματόζωα έδειξαν ότι η έκθεση BPA μπορεί να αυξήσει τον κίνδυνο μαστικού αδένα, του εγκεφάλου, και καρκίνων του προστάτη [9]. Ωστόσο, μελέτες σε ανθρώπους που συνδέουν την έκθεση BPA με αυξημένο κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου είναι λιγοστές. Μια τέτοια μελέτη στην Κίνα έδειξε ότι η συχνότητα εμφάνισης της μηνιγγίωμα ήταν 1,6 φορές υψηλότερος σε ενήλικες με υψηλότερες συγκεντρώσεις ΒΡΑ στα ούρα σε σχέση με εκείνους με χαμηλότερες συγκεντρώσεις [14]. Παρόμοιες μελέτες για την PCA δεν ήταν διαθέσιμες μέχρι σήμερα.

Ένα κεντρόσωμα αποτελείται από ένα ζεύγος κυλινδρικών δομών που ονομάζεται

κεντριόλα

περιβάλλεται από pericentriolar υλικό. Οι κεντροσωμάτια εμπλέκονται στην οργάνωση του κυτταροσκελετού ενδιάμεσης μικροσωληνίσκων, μιτωτικών ατράκτων και βλεφαρίδες. Κεντροσώματος δυσλειτουργία (αριθμός και ακεραιότητα), ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα πολλών μορφών καρκίνου, πιστεύεται ότι εκκινεί νεοπλασματικό μετασχηματισμό και την προώθηση της προόδου της νόσου [15], [16]. Μια ανώμαλη αριθμός των κεντροσωμάτων μπορεί να οδηγήσει σε μονο- ή πολυπολικό μίτωσης, οδηγώντας σε αυξημένη ανευπλοειδία [15], [16]. Ένα άλλο χαρακτηριστικό της centrosomal διαταραχή είναι ανωμαλίες στο μικροσωληνίσκων (MT) φύτρων και αγκύρωσης. Τέτοιες διαταραχές αναφέρθηκαν πιο συχνά παρατηρείται σε καρκινικά κύτταρα του μαστού σε σχέση με το φυσιολογικό μαστό επιθηλιακά κύτταρα [15], [16]. Επίσης, ένας σημαντικός αριθμός γονιδίων που σχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο προστάτη είναι σε οδούς που οδηγούν σε δυσλειτουργία του κεντροσωμάτων [17], [18]. Αυτές οι παρατηρήσεις μας ώθησαν να εξετάσει, σε μοντέλα που βασίζονται σε κύτταρα, οι αρνητικές επιπτώσεις της BPA στο κεντρόσωμα κύκλο ως μηχανισμός που συμβάλλει στην καρκινογένεση του προστάτη.

Χρησιμοποιήσαμε μια συγχρονική κλινική μελέτη για να εξετάσει τη σχέση μεταξύ έκθεσης BPA και του προστάτη. Υποθέσαμε ότι BPA παίζει ρόλο στην καρκινογένεση προστάτη. Βρήκαμε ότι οι ασθενείς με προστάτη έχουν περισσότερες πιθανότητες από εκείνους που δεν PCA, ώστε να έχουν υψηλότερα επίπεδα της BPA στα ούρα τους. Παρατηρήσαμε μια τάση προς μια αρνητική συσχέτιση μεταξύ του ουροποιητικού BPA και τα επίπεδα του PSA στον ορό σε ασθενείς ΣΕΣΣ. Πραγματοποιήσαμε

in vitro

μελέτες για να αξιολογήσουν τις επιπτώσεις της BPA σε αριθμό κεντροσωμάτων, το σχηματισμό των ΜΤ αστέρες, και τον εποικισμό σε μαλακό άγαρ σε δύο απαθανάτισε φυσιολογικές κυτταρικές σειρές του επιθηλίου του προστάτη (RWPE-1 και NPrEC) και τέσσερις προστάτη κυτταρικές γραμμές (LNCaP, C4-2, 22Rv1, PC-3). Βρήκαμε ότι το ποσοστό των κυττάρων με πολλαπλασιασμό κεντροσωμάτων (CA) αυξήθηκε σε απόκριση σε έκθεση ΒΡΑ χαμηλή δόση και ότι η σχέση ήταν αμονότονα για τις περισσότερες κυτταρικές γραμμές. Επιπλέον, η έκθεση σε χαμηλή δόση ΒΡΑ προωθείται MT οργάνωση Aster στο μη καρκινικές RWPE-1 και αύξησε ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη στην ανδρογόνο ανεξάρτητη κυτταρική γραμμή C4-2 PCa. Συνολικά, αυτά τα ευρήματα αποκαλύπτουν μια προηγουμένως άγνωστη σχέση μεταξύ της έκθεσης BPA και του προστάτη και να προτείνει ένα μηχανισμό που διέπουν το ρόλο της BPA σε νεοπλασματικό μετασχηματισμό και την εξέλιξη της νόσου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και τη συλλογή δειγμάτων ούρων

οι ασθενείς είχαν προσληφθεί από την ουρολογική κλινική του Πανεπιστημίου του Cincinnati Ιατρικό Κέντρο κάτω από ένα πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από το Πανεπιστήμιο του Cincinnati Διοικητικού κριτική Θεσμική. Ο Πίνακας 1 παραθέτει τα χαρακτηριστικά των ασθενών και των διαγνωστικών πληροφοριών. Μετά την υπογραφή έντυπο συγκατάθεσης, οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε δακτυλική εξέταση και τους ζητήθηκε να παράσχουν ένα 20 έως 50 ml δείγματος ούρων πριν από την προγραμματισμένη υπερήχους καθοδηγούμενη βιοψία του προστάτη τους. Όλες οι διαδικασίες σε αυτή τη μελέτη είχαν εγκριθεί από το Πανεπιστήμιο του Cincinnati Διοικητικού κριτική Θεσμική. Τα δείγματα ούρων εφυγοκεντρήθησαν, τα ιζήματα συλλέχθηκαν για μελέτη βιοδείκτη προστάτη [19], και τα υπερκείμενα αποθηκεύτηκαν σε υποπολλαπλάσια στους -80 ° C για ανάλυση ΒΡΑ. Μεταξύ των 60 δειγμάτων που χρησιμοποιούνται για αυτή τη μελέτη, 27 ήταν από ασθενείς με προστάτη (PCA) και 33 ήταν από ασθενείς χωρίς προστάτη (μη-PCA).

Η

Μέτρηση της BPA στα δείγματα ούρων

επίπεδα BPA στα δείγματα προσδιορίστηκαν στο Εργαστήριο Οργανικής Αναλυτικής Χημείας του Wadsworth Κέντρο, Νέα Υόρκη μέλος τμήματος της Υγείας, (Albany, NY). υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) σε συνδυασμό με ηλεκτροψεκασμού τριπλό τετράπολο φασματομετρία μάζας (ESI-MS /MS) χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση ΒΡΑ, μία τεχνική παρόμοια με αυτή που περιγράφηκε προηγουμένως, με ορισμένες τροποποιήσεις [20], [21]. Εν συντομία, 500 μΐ κάθε δείγματος ούρων αναμίχθηκε με 1 ml γλυκουρονιδάση (2 μl /ml) για την πέψη και την εξόρυξη. Για τον έλεγχο της ποιότητας, 5 ng από

13C

12-ΒΡΑ προστέθηκε σε κάθε μίγμα. Τα εκχυλίσματα εφαρμόζεται σε ένα Agilent 1100 series HPLC διασυνδέεται με ένα Applied Biosystems ΑΡΙ 2000 ηλεκτροψεκασμός MS /MS (Applied Biosystems, Foster City, CA) για την ποσοτική ΒΡΑ. Τα δεδομένα αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας την παρακολούθηση πολλαπλών αντίδραση για τις μεταβάσεις των 227 & gt? 212 για το BPA, και 239 & gt? 224 για

13C

12-BPA. Το όριο ανίχνευσης ελάχιστης (MDL) του ΒΡΑ σε αυτό το πρωτόκολλο ήταν 0,05 ng /ml. Για συγκεντρώσεις κάτω από το MDL, μια τιμή ίση με την MDL διαιρούμενο με την τετραγωνική ρίζα του 2 χρησιμοποιήθηκε σε στατιστικές αναλύσεις [22]. Αναφέρθηκαν συγκεντρώσεις διορθώθηκαν για τις ανακτήσεις της παρένθετης πρότυπο (μέθοδος ισοτοπική αραίωση). Το πρότυπο ΒΡΑ εμπλουτίστηκαν σε επιλεγμένα μήτρες δείγματος και διέρχεται μέσω του συνόλου της αναλυτικής διαδικασίας απέδωσε ένα ανάκτηση 88% ± 8% (μέση τιμή ± SD). Μια καμπύλη εξωτερική διακρίβωση παρασκευάστηκε με ένεση 10 μΐ 0,05, 0,1, 0,2, 0,5, 1, 2, 5, 10, 50, και 100 ng /ml πρότυπα, και ο συντελεστής παλινδρόμησης ήταν 0,99.

Κανονικοποίηση ούρων BPA

Ακράτεια επίπεδα κρεατινίνης χρησιμοποιήθηκαν για την προσαρμογή για μεταβλητότητα στην αραίωση και να καθορίσει την εγκυρότητα ενός τόπου δείγματος ούρων για την αξιολόγηση της έκθεσης σε χημικές ουσίες [23]. Ένα κιτ κρεατινίνης (ουροδόχου) δοκιμασία από την Cayman Chemical Company (Αηη Arbor, ΜΙ) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή για τη μέτρηση της ουρικής επίπεδα κρεατινίνης. Τα επίπεδα κρεατινίνης χρησιμοποιήθηκαν για να ρυθμίσετε τις ουροποιητικού συγκεντρώσεις BPA μετρήθηκαν με την HPLC-ESI-MS /MS για τη λήψη των «κρεατινίνης-προσαρμοστεί» επίπεδα BPA (επίπεδα BPA) σε μg /g.

Cells

ΣΕΣΣ κυτταρικές σειρές PC-3, LNCaP, C4-2, και 22Rv1 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA) και καλλιεργήθηκαν κάτω από πρότυπες, συνιστάται, συνθήκες. Μια περιγραφή της προέλευσης του αθανατοποιημένων φυσιολογικό επιθηλιακό προστάτη κυτταρική γραμμή NPrEC έχει δημοσιευθεί [24]? η άλλη αθανατοποιημένη φυσιολογική κυτταρική σειρά επιθηλιακών προστάτη, RWPE-1, αγοράστηκε από την ATCC (Manassas, VA) και αναπτύχθηκε σε καθορισμένο μέσο κερατινοκυττάρου-SFM (Invitrogen, Carlsbad, CA) με συμπλήρωμα αυξητικών. Οι κυτταρικές καλλιέργειες διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένο επωαστή με 5% CO

2 ατμόσφαιρα.

θεραπείες ΒΡΑ

Τα κύτταρα από κάθε κυτταρική σειρά ενοφθαλμίστηκαν σε έξι φρεάτων με γυάλινο κάλυμμα γλιστρά στα 25.000 κύτταρα /φρεάτιο. Μετά από 24 ώρες, το μέσο αλλάχθηκε σε ελεύθερο ερυθρού φαινόλης μέσο με 10% ορό απογυμνωμένο με ενεργό άνθρακα για άλλες 24 ώρες, στον οποίο χρόνο ΒΡΑ προστέθηκε για να επιτευχθεί μια τελική συγκέντρωση των 0, 0.01 ηΜ, 0.1 ηΜ, 1 ηΜ, 10 ηΜ, ή 100 ηΜ. Το πείραμα επαναλήφθηκε πέντε φορές για να δημιουργηθεί ένα σύνολο πέντε δείγματα ανά κυτταρική σειρά ανά συγκέντρωση ΒΡΑ.

έμμεσος ανοσοφθορισμός

Για ανοσοχρώση κεντροσωμάτια, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με μεθανόλη για 5 λεπτά στους -20 ° C και στη συνέχεια σε επεξεργασία για γ-τουμπουλίνης (αντίσωμα GTU88 κλώνος, Sigma Immunochemicals), α-τουμπουλίνης (κλώνος DM1A, Sigma Immunochemicals), και Κεντράρισμα (sc-50452, Santacruz Biotechnology) χρώση όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25]. Εν συντομία, τα κύτταρα εκχυλίσθηκαν εντός 1% ΝΡ-40 σε PBS για 10 λεπτά. Τα κύτταρα ανιχνεύθηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα, και τα σύμπλοκα αντισώματος-αντιγόνου ανιχνεύθηκαν με Alexa φθόριο 488- ή 594-συζευγμένα αντισώματα (Molecular Probes). Τα κύτταρα επίσης χρωματίστηκαν για ϋΝΑ με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλιο (ϋΑΡΙ, Invitrogen). Ανοσοχρωματίστηκε κύτταρα εξετάστηκαν με μικροσκοπία φθορισμού.

μικροσωληνίσκων (ΜΤ) σχηματισμός Aster δοκιμασία

Η επίδραση της BPA στη δυναμική των μικροσωληνίσκων προσδιορίστηκε με μία δοκιμασία σχηματισμού Aster MT περιγράφηκε προηγουμένως [25]. Εν συντομία, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με νοκοδαζόλη (1.5 μg /ml) για 40 λεπτά επί πάγου για να αποπολυμερισμό μεσόφαση ΜΤ, πλύθηκαν με PBS για να απομακρυνθεί το νοκοδαζόλη, και επωάστηκαν σε φρέσκο ​​θερμό μέσο για 10 λεπτά στους 37 ° C για να επιτρέψει για MT regrowth .

Μετρήσεις

Ο αριθμός των κεντροσωμάτια ανά κύτταρο βαθμολογήθηκε με μικροσκόπιο φθορισμού. Τουλάχιστον 150 κύτταρα εξετάστηκαν ανά θεραπεία, και το ποσοστό των κυττάρων με μια ανώμαλη αριθμό κεντροσωμάτων υπολογίζεται από το συνολικό αριθμό των κυττάρων που εξετάστηκαν χρησιμοποιήθηκε ως μέτρο της έκβασης για την ανάλυση. Μια σημαντική ανωμαλία σε CA ορίστηκε ως ένα κύτταρο με περισσότερες από δύο κεντροσωμάτια.

Anchorage-ανεξάρτητη δοκιμασία ανάπτυξης

Τα κύτταρα αναλύθηκαν για αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη από τη μέτρηση της αποτελεσματικότητας του σχηματισμού αποικιών σε ημιστερεό μέσο όπως περιγράφεται [26]. Εν συντομία, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν υπό συνθήκες που περιγράφονται ανωτέρω, παρουσία ή απουσία 0.1 ηΜ ΒΡΑ, για ~ 10 περάσματα. Εμείς επιλέξαμε 0,1 nM, επειδή η συγκέντρωση αυτή που προκαλείται από το υψηλότερο ποσοστό των κυττάρων με CA για τις περισσότερες κυτταρικές γραμμές (βλέπε αποτελέσματα). Περίπου 2.500 κύτταρα /35 mm καλά εγκλείστηκαν σε μαλακό άγαρ. Τα κύτταρα τρέφονται δυο φορές την εβδομάδα με νωπό μέσο με και χωρίς ΒΡΑ. Μετά από 2-3 εβδομάδες, οι αποικίες μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο. Τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκε δύο φορές. Σχηματισμού αποικίας αποδοτικότητα είναι ο αριθμός των αποικιών που λαμβάνονται διαιρούμενο με το συνολικό αριθμό των κυττάρων απλώνονται, πολλαπλασιαζόμενο επί 100.

Στατιστική ανάλυση

Το κύριο μέτρο της κλινικής ανάλυσης ήταν μια συνεχής μεταβλητή της ακράτειας επίπεδο BPA μετά την εξομάλυνση ή προσαρμογή για το επίπεδο των ούρων κρεατινίνης. Αρχική επιθεώρηση της κατανομής έδειξε ότι αυτή η μεταβλητή ήταν ιδιαίτερα λοξή προς τα δεξιά. Ως εκ τούτου, log-μετασχηματισμένα μεταβλητή της (LnBPA) χρησιμοποιήθηκε ως η εξαρτημένη μεταβλητή στο στατιστικά μοντέλα. Το κύριο στατιστικό μοντέλο ήταν ένα μοντέλο σταθερού αποτελέσματος για την αξιολόγηση της σύνδεσης μεταξύ της LnBPA και την κατάσταση του προστάτη (1 = ναι? 0 = όχι). Εφαρμόσαμε τόσο αδιόρθωτη και προσαρμόζονται μεθόδους για το μοντέλο σταθερής αποτέλεσμα μας. Στη μη προσαρμοσμένη μέθοδο, η κατάσταση του προστάτη ήταν η μόνη ανεξάρτητη μεταβλητή. Στην προσαρμοσμένη μέθοδο, συμπεριλάβαμε ηλικία (στρωματοποιημένη η ηλικία ≥65 εναντίον & lt? 65 ετών) και τα επίπεδα του PSA στον ορό ως έλεγχο συμπαράγοντες. Πραγματοποιήσαμε

post hoc

συγκρίσεις των μέσων μεταξύ του προστάτη και ασθενείς μη-ΠΑΠ και σε παρόμοιες συγκρίσεις σε υποομάδες ασθενών στρωματοποιημένη ανά ηλικία. τεστ αθροίσματος Wilcoxon rank χρησιμοποιήθηκαν για την επικύρωση των αποτελεσμάτων από τα μοντέλα σταθερής αποτέλεσμα να εξασφαλιστεί ότι όλα τα ευρήματα τους ήταν ισχυρή (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για την ακράτεια BPA και άλλες αριθμητικές ανεξάρτητες μεταβλητές, όπως τα επίπεδα του PSA στον ορό, οι σχέσεις αξιολογήθηκαν με γραμμικά μοντέλα παλινδρόμησης ή /και συντελεστές συσχέτισης.

Στο

in vitro

αναλύσεις για κάθε κυτταρική σειρά, χρησιμοποιήσαμε το μοντέλο σταθερό αποτέλεσμα για την αξιολόγηση της σύνδεσης του ποσοστού των κυττάρων με CA στη συγκέντρωση BPA χρησιμοποιείται για τη θεραπεία των κυττάρων και

post hoc αναλύσεις

ρυθμίστηκε για πολλαπλές συγκρίσεις χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία Bonferroni για. Τα δεδομένα δοκιμασία ανάπτυξης αγκύρωση ανεξάρτητη αναλύθηκαν με δύο δειγμάτων

t

-ΜΕΛΕΤΕΣ. Όλες οι στατιστικές δοκιμές πραγματοποιήθηκαν με τη SAS 9,3 λογισμικό (SAS, Cary, NC) πακέτο.

P

-τιμές & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

επίπεδο του ουροποιητικού BPA σχετίζεται με προστάτη και μπορεί να έχουν προγνωστική αξία

Μελετήσαμε 60 ασθενείς ουρολογία, 27 με προστάτη και 33 χωρίς ΣΕΣ. Η μέση ηλικία (± σταθερή απόκλιση [SD]) των ασθενών προστάτη ήταν 69,7 ± 10,3 yr (min, 56 yr?. Max 87 yr)? ήταν ηλικίας άνω των ασθενών μη-προστάτη, οι οποίοι ήταν 62,8 ± 7,15 yr (min 46 yr?.. max 77 yr?

σ

= 0,003). Ορό τα επίπεδα PSA του προστάτη και ασθενείς μη-προστάτη δεν ήταν διαφορετική. Το σκορ Gleason του 71% των ασθενών προστάτη ήταν 6, και 7 στους άλλους. Τα αρχικά χαρακτηριστικά τους συνοψίζονται στον Πίνακα 1.

Σε όλα τα μαθήματα (PCA και μη-PCA), τα επίπεδα της ουρικής BPA δεν συσχετίστηκαν με την ηλικία και το PSA ορού και δεν συσχετίζονται με το σκορ Gleason του καρκίνου και του καρκίνου -σχετικών χαρακτηριστικών σε άτομα PCa (Πίνακας 2). Ωστόσο, οι ασθενείς με προστάτη είχαν υψηλότερα επίπεδα ουρικής ΒΡΑ (κρεατίνη ρυθμίζεται), με ένα γεωμετρικό μέσο όρο του 5,74 [95% CI? 2,63, 12,51] μg /g (μέση ± SD της LnBPA 1,75 ± 1,97), ενώ τα επίπεδα ουρικής ΒΡΑ των ασθενών μη-προστάτη είχαν ένα γεωμετρικό μέσο όρο του 1,43 [95% CI? 0.70, 2.88] μg /g (μέση ± SD της LnBPA 0,35 ± 2,14?

σ

= 0,012, σχ 1Α & amp?. 1D). Στρωματοποιημένη αναλύσεις έδειξαν ότι η θετική συσχέτιση ήταν σημαντική μόνο μεταξύ των 30 ουρολογικές ασθενείς ηλικίας κάτω των 65 ετών (μέση και διάμεση ηλικία = 58 yr, ελάχιστη ηλικία = 46 έτη). Στους νεότερους ασθενείς (& lt? 65 έτη), η γεωμετρική μέση του ουροποιητικού επίπεδα BPA μεταξύ των ασθενών προστάτη ήταν 8,08 [95% CI? 2,40, 27,15] μg /g (μέση ± SD της LnBPA του 2.09 ± 1.71) έναντι ενός γεωμετρικού μέσου των 0.90 [95% CI? 0.36, 2.25] μg /g (μέση ± SD της LnBPA του -0,11 ± 2,09) μεταξύ των ασθενών μη-προστάτη (

σ

= 0.006? Εικ. 1Β & amp? 1D). Επιπλέον, αναλύσεις γραμμικής παλινδρόμησης των συγκεκριμένη ομάδα νεότερων αποκάλυψε μια τάση προς μια αρνητική συσχέτιση μεταξύ του ουροποιητικού επίπεδα BPA και οι συγκεντρώσεις PSA στον ορό στους ασθενείς του προστάτη (n = 10, r = -0,52,

σ

= 0.10), αλλά όχι Η τάση αυτή, σε ασθενείς με μη-προστάτη (Εικ. 1Γ). Ο συσχετισμός δεν έφθασε σημαντικότητα σε επίπεδο 5%, λόγω του μικρού μεγέθους του δείγματος.

Τα επίπεδα ούρων BPA που σχετίζονται με προστάτη. Η ΒΡΑ λογαριθμικά μετασχηματισμένων αναφέρεται ως LnBPA. Οι τιμές στη γραφική παράσταση είναι μέσες ± SD του LnBPA. (Α) τα επίπεδα ούρων BPA είναι υψηλότερα σε ασθενείς με προστάτη συγκριτικά με τους ασθενείς που δεν ΣΕΣΣ. Μέσα LnBPA = 1,75 ± 1,97 σε προστάτη (μπλε, n = 27) έναντι 0,35 ± 2,14 σε μη-προστάτη (κόκκινο, n = 33),

σ

= 0.012. (Β) LnBPA στον προστάτη έναντι LnBPA σε μη-προστάτη, στρωματοποιημένη ανά ηλικία = επίπεδα BPA 65. ούρων είναι σημαντικά υψηλότερη σε νεαρούς ασθενείς του προστάτη σε σχέση με τους αντίστοιχους ασθενείς μη-προστάτη μόνο στην ηλικιακή ομάδα & lt? 65 ετών?

σ

= 0.006. (C) αναλύσεις γραμμικής παλινδρόμησης των PSA ορού έναντι LnBPA σε ασθενείς & lt? 65 ετών μόνο (n = 30). Μπλε στερεά τετράγωνα αντιπροσωπεύουν τους ασθενείς του προστάτη? κόκκινο αντιστρόφου κύκλοι αντιπροσωπεύουν τους ασθενείς μη-προστάτη. Μπλε και κόκκινο στερεό γραμμές αντιπροσωπεύουν τις γραμμές παλινδρόμησης τους, αντίστοιχα. (D) Σύγκριση του γεωμετρικού μέσου της BPA στα προστάτη και ομάδες μη-προστάτη. Η γεωμετρική μέση (GEO) ορίζεται ως η εκθετική της μέσης του LnBPA. Οι τιμές είναι γεωμετρικά μέσα (95% CI) της BPA σε μονάδα μg /g κρεατινίνης.

Η

Χαμηλή δόσεις BPA προωθούνται κεντροσωμάτων ενίσχυση (CA)

CA είναι συνήθως παρατηρούνται σε ανθρώπινους όγκους και είναι ένας σημαντικός παράγοντας που συμβάλλει στο χρωμόσωμα αστάθεια [15], [27]. Ανάλογα με το αν το κύτταρο είναι στην G1 ή S /G2 /M φάση του κυτταρικού κύκλου, τα φυσιολογικά κύτταρα παρουσιάζουν ένα ή δύο κεντροσωμάτια, αντίστοιχα. Προσδιορίσαμε αν αγωγή κυττάρων με ΒΡΑ μεταβάλει τον αριθμό των κεντροσωμάτων, με κατεργασία καλλιέργειες κυττάρων με αυξανόμενες συγκεντρώσεις ΒΡΑ (0,01-100 ηΜ) (Σχ. 2 και 3). Τα μη επεξεργασμένα κύτταρα που χρησίμευσαν ως μάρτυρες παρουσίασαν την αναμενόμενη φυσιολογική κεντροσωμάτων προφίλ, στο οποίο τα περισσότερα κύτταρα (& gt? 90%) περιείχαν είτε μία είτε δύο κεντροσωμάτια (Σχήμα 3-I, πίνακες Α, C, Ε, G, Ι, Κ. ). Το μη επεξεργασμένο NPrEC είχε τα λιγότερα κύτταρα με centrosomal εκτροπές (1,7%), ακολουθούμενη από C4-2 (2,9%), LNCaP (3,5%), 22Rv1 (4,9%), RWPE-1 (7,3%), και PC-3 ( 10,4%) (Εικόνα 2). Αντίθετα, όλες οι κυτταρικές σειρές που έλαβαν θεραπεία με ΒΡΑ έδειξαν αύξηση (δίκυκλα έως οκτώ φορές, Πίνακας 3) στον αριθμό των κυττάρων με τρεις ή περισσότερες κεντροσωμάτια (Εικ. 2, πάνελ Σχ. 3-Ι Β, D, F, H, J, L). Οι καμπύλες δόσης-απόκρισης των δύο μη-καρκινικές κυτταρικές σειρές, NPrEC και RWPE-1, και δύο κυτταρικές σειρές PCa, LNCaP και 22Rv1, αποκαλύπτουν μια μη-μονοτονική (διφασική) σχέση απόκρισης, με τη μέγιστη απόκριση με 0.1 ηΜ BPA ( Σχ. 2). Από την άλλη πλευρά, οι δύο άλλες γραμμές PCa, C4-2 και PC-3, εμφανίζεται ένα αυξανόμενο καμπύλη δόσης-απόκρισης που υψίπεδα στην ίδια χαμηλή συγκέντρωση ΒΡΑ (0,1 ηΜ) (Σχ. 2). Η αθανατοποιημένη μη-καρκινικές προστάτη επιθηλιακή κυτταρική σειρά NPrEC-1, έδειξε την υψηλότερη μεταβολή φορές (μέσος όρος ± SD, 8,1 ± 2,4) σε κεντροσώματος προφίλ (Πίνακας 3), υποδεικνύοντας ότι κεντροσωμάτων κύκλος αλληλεπικάλυψη του μπορεί να είναι πιο ευαίσθητες στις επιδράσεις της χαμηλής -dose BPA για την προώθηση της CA.

Οι κυτταρικές σειρές NPrEC, RWPE1, LNCaP, C4-2, 22Rv1 και PC3 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μέσο που περιέχει 10% CSS συν 0, 0,01 nM, 0.1 ηΜ, 1 ηΜ, 10 ηΜ και 100 ηΜ ΒΡΑ για 72 ώρες. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 100% ψυχρή μεθανόλη και ανοσοχρώση για κεντροσωμάτια και πυρήνες. Ο αριθμός των κεντροσωμάτων ανά κύτταρο βαθμολογήθηκε με μικροσκοπία φθορισμού. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσος όρος προσδιορίζεται από πέντε ξεχωριστά πειράματα. Το διάγραμμα διασποράς δημιουργήθηκε από το ποσοστό των κυττάρων με μια ανώμαλη αριθμό κεντροσωμάτων σε απόκριση σε BPA. Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο σταθερής αποτέλεσμα για κάθε κυτταρική γραμμή.

Post hoc

συγκρίσεις των μέσων προσαρμόστηκαν χρησιμοποιώντας τεστ Bonferroni του. Η πτυχή της αλλαγής είναι το ποσοστό των κυττάρων με μη φυσιολογική κεντροσωμάτια σε 0,1 nM BPA /το ποσοστό των κυττάρων με μη φυσιολογική κεντροσωμάτια σε 0 nM BPA.

Η

(Ι) Η αύξηση της κεντροσωμάτων αριθμούς. Οι κυτταρικές γραμμές NPrEC, RWPE1, LNCaP, C4-2, 22Rv1 και PC3 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με μέσο που περιέχει 10% CSS συν 0 ή 0,1 ηΜ ΒΡΑ για 72 ώρες. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 100% ψυχρή μεθανόλη και ανοσοχρώση για κεντροσωμάτια (αντι-γ-τουμπουλίνης, κόκκινο) και πυρήνα (ϋΑΡΙ, μπλε). Τα κύτταρα εξετάστηκαν με μικροσκοπία φθορισμού. Τα βέλη δείχνουν τις θέσεις των κεντροσωμάτια, και τα πάνελ στα δεξιά δείχνουν μεγεθύνεται τις εικόνες των αναφερόμενων περιοχών. μπαρ κλίμακα, 10 μm. (II) πολλαπλασιασμό κεντροσωμάτων παρουσία ΒΡΑ δεν οφείλεται σε κεντριόλιο διαχωρισμού. κύτταρα RWPE-1 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 0,1 ηΜ ΒΡΑ για 3 ημέρες. Τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν και ανοσοχρώστηκαν για κεντροσωμάτια (αντι-γ-τουμπουλίνης, κόκκινο), κεντριόλια (αντι-Κεντράρισμα, πράσινο), και πυρήνας (ϋΑΡΙ, μπλε). Τα βέλη δείχνουν προς τις θέσεις των κεντροσωμάτια. Πάνελ στα δεξιά δείχνουν μεγεθύνεται τις εικόνες των αναφερόμενων περιοχών. μπαρ κλίμακα, 10 μm.

Η

Χαμηλή δόση BPA δεν επηρέασε κεντριόλιο διάσπαση

Δομικά, το κεντρόσωμα αποτελείται από ένα ζεύγος κυλινδρικών δομών που ονομάζεται κεντριόλα που δρουν ως η αναπαραγωγή μονάδες. Για να επαληθεύσετε την ακεραιότητα των κεντροσωμάτια, εμείς ανοσοβαφή κυττάρων για Κεντράρισμα, ένα σημαντικό συστατικό της κεντριόλιο κυλίνδρου, επιτρέποντας την απεικόνιση της κεντριόλιο ζευγάρι μέσα στο κεντρόσωμα. Σύκο. 3 δείχνει αντιπροσωπευτικές εικόνες για τα κύτταρα RWPE-1. Κάθε dot ανιχνεύεται με αντίσωμα σε γ-τουμπουλίνης (Σχήμα 3-Β?. Πίνακες Α και D) αναλύθηκε σε ένα ζεύγος των κουκκίδων (που αντιπροσωπεύουν το κεντριόλιο ζεύγος) αποκαλύπτεται από αντίσωμα σε Κεντράρισμα σε υψηλότερη μεγέθυνση (Σχ 3-II.? πάνελ Β και Ε, τμήματα α, ένα «? d ‘, d»). έτσι Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι οι κεντροσωμάτια είναι ανέπαφες, που περιέχει ένα ζεύγος κεντριόλια. Οι κεντροσωμάτων προφίλ προσδιορίζεται με μέτρηση του σήματος Κεντράρισμα ήταν παρόμοιες με αυτές που ορίζονται από την καταμέτρηση του σήματος γ-τουμπουλίνης (Εικ. 2). Αποτελέσματα για LNCaP, C4-2, 22Rv1, και τα κύτταρα NPrEC ήταν παρόμοια. Ως εκ τούτου, η BPA δεν είχε επιπτώσεις στην κεντροσώματος χωρισμό ή κεντριόλιο διάσπαση.

Χαμηλή δόση BPA ενισχυμένο σχηματισμό αστέρα MT

Η σταθεροποίηση των ΜΣ και η επακόλουθη επιμήκυνση τους για να σχηματίσουν ακτινική συστοιχίες ΜΤ (αστέρες) είναι κρίσιμα γεγονότα κατά τη μεσόφαση και επίσης να οδηγήσει στο σχηματισμό της μιτωτικής ατράκτου που συνδέεται με την κανονική λειτουργία κεντροσωμάτων [28]. κύτταρα RWPE-1 του προστάτη αναλύθηκαν για σχηματισμό Aster ΜΤ (Εικ. 4). Τα κύτταρα πρώτα σε επεξεργασία με νοκοδαζόλη επί πάγου για εντελώς αποπολυμερισμό μεσόφαση ΜΤ? νοκοδαζόλη στη συνέχεια απομακρύνθηκε, και τα κύτταρα επωάστηκαν σε φρέσκο ​​θερμό μέσο για MT regrowth. Η ικανότητα των κεντροσωμάτια να nucleate, άγκυρα, και επιμήκης ΜΣ προσδιορίστηκε με συν-ανοσοχρώση για κεντροσωμάτια (αντι-γ-τουμπουλίνης) και ΜΤ (αντι-α-τουμπουλίνης). Η Aster MT δραστηριότητα κεντροσωμάτια σχηματίζουν αξιολογήθηκε σύμφωνα με την προηγουμένως καθιερωμένο πρωτόκολλο [25]. Τα ανεπεξέργαστα κύτταρα RWPE-1 έδειξε σχηματισμό αμελητέα αστέρα. Μετά την οξεία θεραπεία 2 ωρών με 0,1 nM BPA, μικρή αστέρες παρατηρήθηκαν 56% των κυττάρων. Τρεις ημέρες μετά την αγωγή με ΒΡΑ (χρόνια έκθεση), ~37% κύτταρα έδειξαν asters (Σχ. 4Α, 4Β πάνελ g-i). Τα δεδομένα μας δείχνουν έτσι ότι BPA ενισχύει τον σχηματισμό MT αστέρα.

Η δοκιμασία σχηματισμού Aster μικροσωληνίσκων διεξήχθη 2-ανοσοχρώση για κεντροσωμάτια (αντι-γ-τουμπουλίνης, κόκκινο) και ΜΤ (αντι-α-τουμπουλίνης, πράσινο). Η centrosomal σχηματισμό αστέρα εκτιμήθηκε ως θετική εάν κεντροσωμάτια είχε Aster MT με περισσότερα από 15 ΜΤ. Τα αποτελέσματα φαίνονται στο (Α) είναι ο μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα (SE) από τρία πειράματα. Για κάθε πείραμα, & gt? Εξετάστηκαν 200 κύτταρα. Η σημαντικότητα υπολογίστηκε με χρήση t-test vs. 0 ρΜ Student. *

σ

≤0.00002.

Η

Η χρόνια έκθεση BPA προωθεί αγκύρωση-ανεξάρτητη ανάπτυξη σε κύτταρα C4-2

Η ικανότητα της χρόνιας έκθεσης BPA να μετατρέψει ή να προωθήσουν τα κακοήθη ανάπτυξη του NPrEC, RWPE-1, LNCaP, και τα κύτταρα C4-2 προσδιορίστηκε με μία δοκιμασία μαλακού άγαρ αποικίας-σχηματισμού. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε μέσο με ή χωρίς 0,1 ηΜ BPA για 10-14 περάσματα πριν σπάρθηκαν σε μαλακό άγαρ. σχηματισμός αποικιών για NPrEC, RWPE-1, και LNCaP ήταν & lt? 2%, και η έκθεση σε 0,1 ηΜ ΒΡΑ δεν άλλαξε την αποτελεσματικότητα σχηματισμού αποικίας. Ωστόσο, ΒΡΑ-εκτεθειμένων κυττάρων C4-2 παράγονται αισθητά περισσότερο, μεγαλύτερες, πιο γρήγορα αναπτυσσόμενη μαλακό άγαρ αποικίες (Πίνακας 4, Εικ. 5). Το ποσοστό απόδοσης του σχηματισμού αποικιών (μέση τιμή ± SD) αυξήθηκε σε 19,25 ± 7,05% με τη θεραπεία ΒΡΑ σε σύγκριση με 2,03 ± 0,40% σε μη εκτεθειμένες ελέγχους (

σ

& lt? 0.001). Η διάμετρος της αποικίας ήταν 50-400 μm σε ελέγχους έναντι 100-1,200 μπι σε ΒΡΑ-επεξεργασμένα κύτταρα C4-2.

Αντιπροσωπευτικά εικόνες των αποικιών μετά από 2 εβδομάδες επώασης σε άγαρ. κύτταρα C4-2 παρουσία 0.1 ηΜ ΒΡΑ σχηματίζονται μεγαλύτερες αποικίες (Β, Β ‘, διάμετρος 100-1200 μm) σε σύγκριση με εκείνα που αναπτύχθηκαν απουσία του BPA (Α, Α’, διάμετρος 50-400 μm).

η

Συζήτηση

για να αποδειχθεί ότι η έκθεση BPA συμβάλλει προστάτη προήλθε από μελέτες σε ζώα [29], [30], [31], [32] ή με βάση κύτταρα [33 ], [34], [35], [36] μοντέλα. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που παρέχει προκαταρκτικά στοιχεία της ένωσης της έκθεσης BPA με PCA σε κλινικό περιβάλλον. Τα ευρήματά μας σε 60 ουρολογικές ασθενείς δείχνουν ότι η ουρική επίπεδο BPA είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός βιοδείκτη του προστάτη, όπως ανιχνεύτηκαν υψηλότερα ουροποιητικού επίπεδα BPA στα 27 ασθενείς προστάτη (γεωμετρικός μέσος όρος, 5,74 [95% CI? 2,63, 12,51] μg /g κρεατινίνης) σε σύγκριση με εκείνους στους 33 ασθενείς μη-προστάτη (γεωμετρικός μέσος όρος, 1,43 [95% CI? 0,70, 2,88] μg /g κρεατινίνης) (

σ

= 0.012). Το όριο ανίχνευσης για αυτή τη μελέτη ήταν 0,05 ng /ml. Αρκετές μελέτες έχουν πληθυσμός πλέον καθιερωθεί ΒΡΑ ως πανταχού παρούσα περιβαλλοντική πρόσμειξη ανιχνεύεται στα ούρα του περισσότερα άτομα σε πληθυσμούς των ΗΠΑ. Στην πρώτη μεγάλης κλίμακας μελέτη διατομής στις ΗΠΑ περιλαμβάνουν 2.517 συμμετέχοντες από την Εθνική Έρευνα 2003-2004 Υγεία και Διατροφή Εξέταση (NHANES) [7], η BPA ανιχνεύθηκε στο 93% του πληθυσμού σε μια γεωμετρική μέση και 95

εκατοστημόριο συγκέντρωση 2,6 μg /g και 11,2 μg /g, αντίστοιχα? Το όριο ανίχνευσης ήταν 0,4 ng /ml έναντι 0,05 ng /ml στη μελέτη μας. Μια μεταγενέστερη μελέτη 2.747 ενηλίκων συμμετεχόντων στο 2003-2006 NHANES [37] ανέφεραν μια γεωμετρική μέση τιμή 2,05 μg /g κρεατινίνης (25

ο εκατοστημόριο: 1:18, 75

ο εκατοστημόριο: 3,33)? το κατώτερο όριο ανίχνευσης ήταν 0,36 ng /ml. Έτσι, η γεωμετρική μέση του ουροποιητικού επίπεδα ΒΡΑ στους ασθενείς PCa στην παρούσα μελέτη ήταν ~2-2.5 φορές υψηλότερες από τις γεωμετρικές μέσες εκείνες στις μεγάλες μελέτες US διατομής. Σε αντίθεση, ο γεωμετρικός μέσος των ασθενών μη-προστάτη σε αυτή τη μελέτη ήταν περίπου 50% χαμηλότερες από τις γεωμετρικές μέσες τιμές των δύο αυτών μελετών πληθυσμού.

Ένα πλεονέκτημα αυτής της μελέτης είναι η χρήση μας της μεθόδου που συνιστάται από το κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων περιλαμβάνει εκχύλιση στερεάς φάσης σε συνδυασμό με ισότοπο αραίωσης-HPLC-MS /MS για τη μέτρηση της ολικής ουρικής BPA σε ένα εργαστήριο αναφοράς. Επιπλέον, έχουμε διορθωθούν για τις διακυμάνσεις που προκαλούνται από παράγοντες που επηρεάζουν ουροποιητικού αραίωση εκφράζοντας τα δεδομένα μας σε σχέση με τις συγκεντρώσεις των ούρων κρεατινίνης. Τέλος, όλοι οι ασθενείς είχαν βιοψία επιβεβαίωσε, αντί να αυτο-αναφερθεί, η PCA. Ένας πιθανός περιορισμός της μελέτης μας ήταν ότι το σύνολο των ούρων BPA στους ασθενείς μας μετρήθηκε μόνο μία φορά. Ωστόσο, σύμφωνα με την τρέχουσα βιβλιογραφία, συνολικές συγκεντρώσεις του ουροποιητικού BPA (χωρίς συν συζευγμένου) στα δείγματα σημείο (μέτρηση one-time) είναι μια αξιόπιστη μέθοδος για την αξιολόγηση της έκθεσης γραμμής βάσης από όλες τις πηγές σε όλη την ώρα, όταν το μέγεθος του δείγματος είναι αρκετά μεγάλο [38]. Αν και τοξικοκινητικές μελέτες έχουν δείξει ότι η BPA και ο κύριος μεταβολίτης της, η BPA-γλυκουρονίδιο, έχουν μάλλον μικρό χρόνο ημίσειας ζωής (περίπου 2,5 ώρα) στην κυκλοφορία του αίματος και ότι απεκκρίνεται ταχέως με τα ούρα [39], [40], ο πληθυσμός της διατομής μελέτες έχουν δείξει σημαντικά μεγαλύτερο χρόνο ημιζωής, λόγω της έκθεσης μη εδώδιμες, βιοσυσσώρευση στους ιστούς του σώματος, όπως το λίπος, και η ηπατική λειτουργία, ιδιαίτερα εκείνων που σχετίζονται με την γλυκουρονιδίωση της BPA [12], [39]. Η παρουσία υψηλών συγκεντρώσεων BPA στα ούρα μπορεί να δείχνουν ότι οι συνήθειες του τρόπου ζωής των ασθενών αυτών μπορεί να διατηρήσουν υψηλότερα επίπεδα έκθεσης. Σε αυτό το πλαίσιο, σε μια κλινική μελέτη, τα επίπεδα της BPA στα δείγματα ούρων συλλέχθηκαν την ίδια ημέρα από το αρσενικό και το θηλυκό εταίροι συσχετίζονται [41], που υποστηρίζουν την υπόθεση ότι παρόμοιες επιλογές στον τρόπο ζωής μπορούν να καθορίσουν το επίπεδο της έκθεσης BPA. Επιπλέον, μια πρόσφατη μελέτη έδειξε υψηλότερα κατά πρόσωπο μεταβλητότητας (πάνω από 1-3 χρόνια) στα επίπεδα BPA σε σχέση με τη συνολική μεταβλητότητα σε 80 γυναίκες [42]. Συλλογικά, οι μελέτες αυτές υπογραμμίζουν τη σημασία της εύρημά μας ότι μια εφάπαξ δειγματοληψία του ουροποιητικού BPA συσχετίζεται με προστάτη.

Στρωματοποιημένη αναλύσεις έδειξαν ότι η σχέση μεταξύ του ουροποιητικού επίπεδα BPA και PCA είναι ιδιαίτερα σημαντική (

p

= 0.006) μεταξύ των 30 ασθενών & lt? 65 ετών (μέση και διάμεση ηλικία = 58, ελάχιστη ηλικία = 46), αλλά ότι αυτή η ένωση δεν έφθασε σε σημαντικά μεταξύ των μισοί από τους ασθενείς & gt? 65 χρόνια (Σχήμα 1).. Αυτά τα ευρήματα είναι ενδιαφέροντα, αλλά αμηχανία. Λαμβάνονται στην ονομαστική τους αξία, που δείχνουν ότι η μεγαλύτερη έκθεση BPA συνδέεται με γρηγορότερη έναρξη της ΣΕΣ. Ωστόσο, με βάση τη θεωρία των αναπτυξιακών επαναπρογραμματισμό του κινδύνου καρκίνου [43], τα ευρήματά μας αυξήσει την πιθανότητα αναπρογραμματισμού πρόωρης ζωής του προστάτη στον άνθρωπο. Σε μελέτες σε αρουραίους, τα νεογνά τρέφονται περιβαλλοντική άποψη επίπεδα BPA είχαν αυξημένο κίνδυνο εμφάνισης νεοπλασμάτων του προστάτη [29], [44].