Abstract

Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι το αντιγόνο βλαστικών κυττάρων προστάτη (PSCA) είναι ένας ελκυστικός στόχος για ανοσοθεραπεία με βάση την υπερέκφραση του σε ιστό όγκου του προστάτη, ιδιαίτερα σε ορισμένες μεταστατικού ιστούς. Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήσαμε δενδριτικών κυττάρων (DC) που κατευθύνεται βραδέος ιού φορέα (DCLV) που κωδικοποιεί PSCA ποντικού (DCLV-PSCA) ως ένα νέο εμβόλιο όγκου για καρκίνο του προστάτη σε μοντέλα ποντικού. Δείξαμε ότι DCLV-PSCA θα μπορούσε κατά προτίμηση να παραδώσει το γονίδιο αντιγόνου PSCA σε DC-SIGN κύτταρα που εκφράζουν 293Τ και DCs που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDCs). Απευθείας ανοσοποίηση με το DCLV-PSCA σε αρσενικά C57BL /6 ποντίκια προκάλεσε ισχυρή ΡδΟΑ-απόκρισης CD8

+ και CD4

+ Τ κυττάρων

in vivo

. Σε ένα διαγονιδιακό κυτταρική σειρά προστάτη αδενοκαρκινώματος ποντικού (TRAMP-C1) συνέργειας μοντέλο όγκου, αποδείξαμε επίσης ότι DCLV-ΡδΟΑ-εμβολιασμένα ποντίκια μπορούσαν να προστατεύονται από θανατηφόρο πρόκληση όγκου σε ένα προφυλακτικό μοντέλο, ενώ παρατηρήθηκε επιβράδυνση της ανάπτυξης όγκου σε ένα θεραπευτικό μοντέλο. Αυτό το εμβόλιο DCLV-PSCA έδειξαν επίσης αποτελεσματικότητα στην αναστολή μεταστάσεων του όγκου χρησιμοποιώντας ένα PSCA εκφράζουν μοντέλο Β16-Ρ10. Στο σύνολό τους, τα στοιχεία αυτά δείχνουν ότι DCLV είναι ένας ισχυρός φορέας εμβολίου για PSCA στην παροχή αντι-προστάτη της ασυλίας του καρκίνου

Παράθεση:. Xiao L, Joo ΚΙ, Lim Μ, Wang P (2012) δενδριτικά κύτταρα-Σκηνοθεσία εμβολιασμός με Lentivector Κωδικοποίηση PSCA για καρκίνο του προστάτη σε ποντίκια. PLoS ONE 7 (11): e48866. doi: 10.1371 /journal.pone.0048866

Επιμέλεια: Λουκία Gabriele, Istituto Superiore di Sanità, Ιταλία

Ελήφθη: 15 του Ιούνη 2012? Αποδεκτές: 2η Οκτωβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 6 Νοέμβρη 2012

Copyright: © 2012 Xiao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (R01AI68978 και P01CA132681) και ένα μεταφραστικό επιχορήγηση επιτάχυνση από το Κοινό Κέντρο Translational Medicine. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το 2011, ο FDA ενέκρινε το πρώτο θεραπευτικό εμβόλιο κατά του καρκίνου για τη θεραπεία των ασυμπτωματικών ή ελαφρώς συμπτωματική καρκίνο του προστάτη ορμονοάντοχο [1], [2], μια μεγάλη ενθάρρυνση για τους δύο ασθενείς με καρκίνο του προστάτη και οι επιστήμονες που εργάζονται για την ανοσοθεραπεία του καρκίνου . Ανοσολογικές θεραπείες μπορεί να καθοδηγήσει το ανοσοποιητικό σύστημα να αναγνωρίζει και να εξαλείψει τα καρκινικά κύτταρα, τα οποία, υπό κανονικές συνθήκες, συνήθως ξεφύγουν από ανοσολογική παρακολούθηση από προς τα κάτω ρύθμιση της παρουσίασης αντιγόνου όγκου [3] ή με την έναρξη ανοσολογικής ανοχής [4], [5]. Επί του παρόντος, αρκετές αντιγόνα έχουν ταυτοποιηθεί ως πιθανοί υποψήφιοι για εμβόλια ανοσοθεραπεία καρκίνου του προστάτη. Περιλαμβάνουν το ειδικό προστατικό αντιγόνο (PSA) [6], του προστάτη αντιγόνο βλαστικών κυττάρων (PSCA) [7] – [10], το αντιγόνο ειδικού προστατικού μεμβράνης (PSMA) [11], η όξινη προστατική φωσφατάση (ΡΑΡ) [2] , βλεννίνη 1 (MUC1) [12], ορμόνη απελευθέρωσης γοναδοτροπίνης (GnRH) [13], και ΝΥ-ΕδΟ-1 εμβόλιο [14], μεταξύ άλλων. PSCA είναι ένα γλυκοσυλοφωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 123-αμινοξέων (GPI) -συνδεδεμένες πρωτεΐνη κυτταρικής επιφάνειας που ανήκει στην οικογένεια Ly-6 [15]. PSCA είναι ένας ελκυστικός στόχος ανοσοθεραπευτικό βάση την υπερέκφραση του στην πλειοψηφία των κυττάρων καρκίνου του προστάτη, ενώ η έκφραση του σε άλλους σωματικούς ιστούς είναι ιδιαίτερα περιορισμένη [16]. Αν και ο συγκεκριμένος μηχανισμός βασίζεται η συμβολή της PSCA προς την ανάπτυξη του όγκου παραμένει απροσδιόριστη, PSCA έχει βρεθεί ότι συσχετίζεται θετικά με κακοήθεια όγκων, βαθμός παθολογία και ανδρογόνο-ανεξαρτησία [16], [17]. Προτάθηκε ότι το PSCA μπορεί να παίζει έναν ρόλο στην αντιμετώπιση φυσική ανοσοαπόκριση [18]. Επιπλέον, η έκφραση PSCA ρυθμίζεται αυξητικά σε μεταστατικούς ιστούς [16], [19]. Επί του παρόντος, αντίσωμα που κατευθύνεται προς PSCA έχει δοκιμαστεί για την αναστολή της ανάπτυξης του όγκου του καρκίνου του προστάτη και την καταστολή του σχηματισμού μετάστασης [20], ενώ άλλοι έχουν ερευνήσει χιμαιρικών υποδοχέων αντιγόνου (CAR) -με βάση θετή Τ κύτταρα θεραπεία στόχευσης PSCA για το δυναμικό του στην θεραπεία του καρκίνου του προστάτη [21 ]. Πειράματα πραγματοποιήθηκαν επίσης για τη δοκιμή PSCA ως ένα αντιγόνο εμβολίου, και έχει σαφώς δειχθεί σε ζωικά μοντέλα που PSCA στόχευση εμβόλια μπορεί να επιβραδύνει την πρόοδο του καρκίνου του προστάτη [22], [23].

Οι φορείς λεντοϊών ( LVs) είναι πολλά υποσχόμενα φορείς για ανοσοθεραπεία του καρκίνου [24], [25], και είναι υπό αξιολόγηση σε πολλές κλινικές δοκιμές για ένα ευρύ φάσμα ανθρώπινων ασθενειών [26]. Ένα επιθυμητό χαρακτηριστικό του LVs είναι η ικανότητά τους για την μεταγωγή τόσο διαχωριστική και μη διαιρούμενα κύτταρα [27], συμπεριλαμβανομένων των περιφερειακών DCs [28], [29]. Ως φορέας εμβολίου, LVs μπορεί ταυτόχρονα να παραδώσει τα αντιγόνα σε αναπτυσσόμενες χώρες [24] και να ενεργοποιήσετε ΑΧ μέσω διοδίων-όπως υποδοχείς (TLRs) [30] – [36]. Για την περαιτέρω βελτίωση LVs, πολλή προσπάθεια έχει κατευθυνθεί προς τη στόχευση LVs σε κύτταρα παρουσίασης αντιγόνου (APC)

in vivo

να επιτευχθεί καλύτερη ειδικότητα και την ασφάλεια [37] – [40]. Αναφέραμε προηγουμένως ένα DC-κατευθυνόμενη LV (DCLV), που μπορούν να στοχεύσουν ειδικά DCs εκφράζουν DC-ειδικό μόριο ενδοκυτταρικής προσκόλλησης αρπάζοντας μη ιντεγκρίνης (DC-SIGN) και να παραδώσει γονίδια αντιγόνου σε αυτά. Απευθείας

in vivo

εμβολιασμό χρησιμοποιώντας DCLV ωολευκωματίνη κοτόπουλου που κωδικοποιεί (OVA) προκάλεσε υψηλή συχνότητα ΟνΑ-ειδικών CD8

+ και CD4

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις [41] – [43].

στην έκθεση αυτή, ερευνήσαμε DCLV μεσολάβηση εμβόλια καρκίνου σε έναν σχετίζονται περισσότερο κλινικά ρύθμιση και να διερευνηθεί η ισχύς αυτής της vectored ανοσοποίησης για να ξεπεραστεί το ανοσοποιητικό ανοχή στο PSCA αντιγόνο αυτο-όγκου και να δημιουργήσουν προστατευτική ανοσία κατά του καρκίνου του προστάτη. Δείξαμε ότι DCLV κωδικοποίηση PSCA (DCLV-PSCA) θα μπορούσε να στοχεύσει DC-SIGN-κυτταρικές σειρές που εκφράζουν και ΑΧ που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDCs). Απευθείας ανοσοποίηση στη βάση της ουράς προκλητών ισχυρές αποκρίσεις Τ κυττάρου PSCA-ειδικό σε ένα μοντέλο καρκίνου του προστάτη ποντικού. Επιπλέον, ο εμβολιασμός θα μπορούσε να αναστείλει σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου κατά την πρόκληση με κύτταρα TRAMP-C1 όγκου σε ποντίκια. Όταν αυτό το εμβόλιο χρησιμοποιήθηκε σε ένα θεραπευτικό πλαίσιο, θα μπορούσε να καταστείλει την ανάπτυξη καθιερωμένων TRAMP-C1 όγκους. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι το αντι-προστατικό ανοσίας όγκου που παρέχεται από DCLV-PSCA εξαρτάται από την παρουσία και των δύο

+ και CD4

+ Τ κύτταρα CD8. Τέλος, αποδείξαμε ότι η ανοσοποίηση με DCLV-PSCA θα μπορούσε να αναστείλει αποτελεσματικά τη μετάσταση των κυττάρων Β16-PSCA στον πνευμονικό ιστό.

Αποτελέσματα

Δημιουργία DCLV-PSCA και την ικανότητά του να στοχεύσει DC-SIGN εκφράζοντα κύτταρα ίη vitro

Κατασκευάσαμε ένα λεντοϊού σκελετό που κωδικοποιεί το πλήρους μήκους PSCA ποντικού και ελέγχθηκαν την έκφραση του PSCA σε 293Τ κύτταρα. Κύτταρα 293Τ διαμολύνθηκαν παροδικά με FUW-Null ή φορέα FUW-PSCA. Δύο ημέρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα συλλέχθηκαν για την έκφραση της PSCA από ενεργοποιημένων με φθορισμό κυττάρων διαλογέα ανάλυση (FACS). 293Τ κύτταρα επιμολυσμένα με το πλασμίδιο FUW-PSCA έδειξαν θετική έκφραση του PSCA (22,5%), ενώ τα κύτταρα επιμολυσμένα με τον FUW-ουδέτερη πλασμίδιο είχε μόνο χρώση υποβάθρου (Σχήμα 1Α).

(Α) Κύτταρα 293Τ διαμολύνθηκαν παροδικά με πλασμίδια FUW-Null (mock ελέγχου, μπλε γραμμή) ή FUW-PSCA (κόκκινη γραμμή). Δύο ημέρες αργότερα, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και χρωματίστηκαν για έκφραση PSCA αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. 293Τ κύτταρα χρωματίστηκαν με το αντίσωμα ισοτύπου συμπεριλήφθηκαν ως μάρτυρας (γκρίζα περιοχή απόχρωση). (Β) Κύτταρα 293Τ διαμολύνθηκαν παροδικά με πλασμίδια FUW-PSCA, SVGmu, και άλλα πλασμίδια αναγκαία λεντοϊού συσκευασίας για την παραγωγή φορέων DCLV-PSCA. υπερκείμενο Φρέσκο ​​ιός χρησιμοποιήθηκε για τη μεταγωγή κυττάρων 293Τ (μπλε γραμμή) ή κύτταρα 293T.hDC-SIGN (κόκκινη γραμμή) με ΜΟΙ = 10. έκφραση PSCA αναλύθηκε με κυτταρομετρία ροής 3 ημέρες μετά την μεταγωγή. (C) Bone ΑΧ που προέρχονται από μυελό μετήχθησαν με μια παρωδία φορέα DC-LV-Null ή φορέα DC-LV-PSCA. Πέντε ημέρες αργότερα, CD11c και PSCA έκφραση αξιολογήθηκαν με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές και ο εκπρόσωπος δεδομένα εμφανίζονται.

Η

Στη συνέχεια χρησιμοποιούνται στο παρελθόν αναφερθεί 293T.DC-SIGN κύτταρα [41] για τη διερεύνηση της ικανότητας των DCLV να εκφράσουν PSCA. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Β, περίπου το 60% των κυττάρων 293T.DC-SIGN εμφανίζεται έκφραση PSCA μετα-DCLV-PSCA μεταγωγή, ενώ μόνο 6,79% ήταν PSCA θετικά στα κύτταρα 293Τ. Η εξειδίκευση που παρατηρείται εδώ είναι σύμφωνη με προηγούμενες αναφορές που δείχνει την ικανότητα του DCLV για τη μεταγωγή προτίμηση DC-SIGN κύτταρα που εκφράζουν [41], [44]. Ερευνήσαμε περαιτέρω εάν DCLV-PSCA θα μπορούσε να στοχεύσει και να μεσολαβήσει έκφραση PSCA στο μυελό των οστών που προέρχονται από ΑΧ (BMDCs). Τα ανώριμα BMDCs προήλθαν από την καλλιέργεια του μυελού των οστών ποντικού και επιβεβαιώθηκε με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής του CD11c δείκτη επιφανείας κυττάρων (Σχήμα 1C). Όταν εκτίθεται σε LVs, ΑΧ επιλεκτικά τροποποιήθηκε από DCLV-PSCA να εκφράσουν PSCA (3,65% στην CD11c

+ κύτταρα έναντι 0,11% στην CD11c

– κύτταρα, Εικόνα 1Γ). Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι DCLV-PSCA θα μπορούσε να στοχεύσει DC-SIGN-κύτταρα που εκφράζουν και να παραδώσει το αντιγόνο PSCA σε αναπτυσσόμενες χώρες

in vitro

.

Πρόκληση ΡδΟΑ-ειδικά CD8

+ και CD4

+ Τ κυττάρων ανοσολογικές αποκρίσεις in vivo

για να προσδιορίσετε αν αυτό το ανασυνδυασμένο φορέα DCLV-PSCA θα μπορούσε να παραδώσει αποτελεσματικά το αντιγόνο σε ΑΧ και να τοποθετήσετε αντιγόνου-ειδικές αποκρίσεις των κυττάρων Τ em

in vivo

, πραγματοποιήσαμε εμβολιασμός με DCLV-PSCA άμεσα σε αρσενικά C57BL /6 ποντίκια. Λόγω της μεταβολής της διανομής DC, η ανοσοποίηση διεξάγεται μέσω διαφορετικών οδών χορήγησης μπορεί να οδηγήσει σε διαφορετικούς αριθμούς των DCs να στοχεύουν, οδηγώντας σε διαφορετικά επίπεδα παρουσίασης αντιγόνου. Ως εκ τούτου, η σύγκριση της ανοσολογική απόκριση που προκλήθηκε μέσω διαφορετικών οδών είναι αναγκαίο να θεσπιστεί ένα βέλτιστο πρωτόκολλο ανοσοποίησης. Ως εκ τούτου, αφελείς αρσενικά C57BL 6 ποντίκια /ανοσοποιήθηκαν με μία μόνο δόση DCLV-PSCA (6 × 10

7 TU) σε ενδοδερμική περιοχή (id, στη βάση της ουράς), περιοχή πελμάτων (FP), ενδομυϊκή περιοχή ( im), υποδόρια περιοχή (sc), ή ενδοπεριτοναϊκή χώρου (ip). Μια προηγουμένως αναφερθεί CD8 πεπτίδιο

+ επίτοπο για PSCA [23] χρησιμοποιήθηκε για να χαρακτηρίσει ΡδΟΑ-ειδικά CD8

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις στον σπλήνα μέσω ΙΡΝ-γ χρώση ενδοκυτταρικής κυτοκίνης (ΕΠΙΣΕΥ). Όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 2Α και 2Β, το i.d. και Ρ.Ρ. οδοί χορήγησης είχε ως αποτέλεσμα την ισχυρότερη ΡδΟΑ-ειδικά CD8

απόκριση κυττάρων + Τ (~ 2%), δύο εβδομάδες μετά την ανοσοποίηση. Εγώ είμαι. οδοί χορήγησης είχε φτάσει μια μέτρια απόκριση (περίπου 1,2%), ενώ η υποδόρια και ε.π. ενέσεις οδήγησαν σε μια πολύ χαμηλότερη απόκριση (& lt? 0,5%). Αυτή η τάση απόκριση είναι σύμφωνη με τα αποτελέσματα από ανοσοποίηση με DCLV κωδικοποιεί HIV-1 Gag [45] ή ανθρώπινο gp100 [44]. Με βάση την i.d. την οδό χορήγησης, η οποία έδωσε την υψηλότερη CD8

+ Τ κυτταρική απόκριση, χορηγήθηκαν διαφορετικές δόσεις DCLV-PSCA (2~80 × 10

6 TU). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2C, ο CD8

+ Τ κυτταρική απόκριση ήταν δοσοεξαρτώμενη, αυξάνοντας από 0,5% έως 2%. Έτσι, η βέλτιστη αγωγή ανοσοποίηση του i.d. ένεση DCLV-PSCA με 80 × 10

6 TU χρησιμοποιήθηκε για μεταγενέστερες μελέτες. Για να αξιολογηθεί περαιτέρω η αντιγονο-ειδικών CD8

αποκρίσεις + Τ κυττάρων που προκαλείται από i.d. ανοσοποίηση, ένα πείραμα ELISPOT μέτρηση της έκκρισης ΙΡΝ-γ από τα Τ κύτταρα τόσο από σπλήνα και βουβωνικό λεμφαδένα διεξήχθη. Από 1 εκατομμύριο κύτταρα, περίπου 800 και 300 κύτταρα ανταποκρίθηκαν στην CD8

+ πεπτίδιο επιτόπου στο σπλήνα και στη βουβωνική λεμφαδένα, αντίστοιχα (Σχήμα 2D).

(Α) Male C57BL /6 ποντίκια ανοσοποιήθηκαν με 6 × 10

7 TU της DCLV-PSCA μέσω διαφορετικών οδών χορήγησης: ενδοπεριτοναϊκή χώρο (IP), υποδόρια περιοχή (SC), ενδομυϊκή περιοχή (im), πελμάτων (FP), ή ενδοδερμική (βάση του ουρά, id). Μία ομάδα ανοσοποίησης συμπεριλήφθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Δύο εβδομάδες μετά την ανοσοποίηση, σπληνοκύτταρα από ποντίκια συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν για την παρουσία της PSCA-ειδικών CD8

+ Τ κυττάρων με επαναδιέγερσης σπληνοκυττάρων με ένα πεπτίδιο PSCA (PSCA

83-91), που ακολουθείται από ενδοκυτταρική χρώση για ΙΡΝ γ και χρώση επιφάνεια για CD8. Ποσοστό ΙΡΝ-γ που εκκρίνει CD8

+ Τ κυττάρων ενδείκνυται. (Β) Στατιστική σύγκριση της ανοσοποίησης που προκαλείται από τη χορήγηση του DCLV-PSCA μεταξύ διαφορετικών οδών χορήγησης. (Γ) Αρσενικά ποντίκια C57BL /6 ανοσοποιήθηκαν με διαφορετικές δόσεις DCLV-PSCA φορείς (0, 2, 10, 40 και 80 εκατομμύρια TU) στη βάση της ουράς. Δύο εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό, ΡδΟΑ-ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα από σπλήνα αναλύθηκαν με επαναδιέγερσης με το πεπτίδιο PSCA

83-91, που ακολουθείται από ενδοκυτταρική χρώση για την ΙΡΝ-γ. (D) Παραγωγή κυττάρων ΙΡΝ-γ εκκρίνοντα PSCA-ειδικό τόσο από σπλήνα (SP) και βουβωνικό λεμφαδένα (LN) αξιολογήθηκε με επαναδιέγερση με την PSCA

83-91 πεπτίδιο, που ακολουθείται από ανάλυση ELISPOT για ΙΡΝ-γ . (Ε) Παραγωγή της PSCA-ειδικό IL-2 από σπληνοκύτταρα (με CD8

+ Τ κύτταρα εξαντλούνται) μετρήθηκε με επαναδιέγερση με 293Τ κυτταρολύματος επιμολυνθεί για να εκφράσουν PSCA, ακολουθούμενη από την ανάλυση ELISPOT για την IL-2. (**:

P

& lt? 0,01? *:

P

& lt? 0,05? One-way ANOVA που ακολουθείται από τεστ πολλαπλών σύγκριση Bonferroni για μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD..) Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές και ο εκπρόσωπος δεδομένα εμφανίζονται.

η

Λαμβάνοντας υπόψη το σημαντικό ρόλο των CD4

+ στην ανοσοθεραπεία του όγκου, μία δοκιμασία ELISPOT IL-2 χρησιμοποιήθηκε για την εξέταση της CD4

+ Τ κυτταρική απόκριση που προκλήθηκε από αυτή τη στρατηγική ανοσοποίησης. Διαπιστώσαμε περίπου 250 CD4

+ Τ κύτταρα ανά εκατομμύριο σπληνοκυττάρων ικανά να εκκρίνουν IL-2 σε απόκριση σε προϊόντα λύσης από κύτταρα 293Τ επιμολυσμένα με το πλασμίδιο FUW-PSCA (Σχήμα 2Ε). Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι DCLV-PSCA ήταν αποτελεσματικό ως φορέας εμβολίου για την τόνωση τόσο CD8

+ και CD4

+ Τ κυτταρικές αποκρίσεις σε ποντικούς.

Δημιουργία αντι-προστάτη ανοσίας όγκου τόσο προφυλακτική και θεραπευτικά μοντέλα

Υπό το φως των PSCA-ειδικό CD8

+ και CD4

+ Τ κυτταρική απόκριση που παρατηρήθηκε, ήταν απαραίτητο να αξιολογηθεί η αντικαρκινική αποτελεσματικότητα που παρέχεται από DCLV-PSCA ανοσοποίηση. Ένα μεταμοσχευμένο μοντέλο όγκου ποντικού με το διαγονιδιακό κυτταρική σειρά προστάτη αδενοκαρκινώματος ποντικού (TRAMP-C1) [46] χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση αυτή. Αρσενικά C57BL 6 ποντίκια /εμβολιάστηκαν με DCLV-PSCA, DCLV-Null, ή αφεθεί χωρίς θεραπεία. Αυτοί οι ποντικοί στη συνέχεια προκλήθηκαν 10 ημέρες αργότερα με s.c. ένεση 5 × 10

5 TRAMP-C1 κύτταρα (Σχήμα 3Α). προστασία του όγκου παρατηρήθηκε στην DCLV-ΡδΟΑ εμβολιασμένη ομάδα με 8 από τους 12 ποντικούς χωρίς όγκο για 44 ημέρα μετά την πρόκληση του όγκου (Σχήμα 3Β, κάτω αριστερά). Επιπλέον, τα άλλα 4 ποντίκια σε αυτή την ομάδα εμφάνισε μια πολύ βραδύτερο ρυθμό αύξησης από ότι στην ομάδα null φορέα. Αξίζει να σημειωθεί ότι, ο εμβολιασμός με DCLV-Null απέτυχαν να παρέχουν οποιαδήποτε μετρήσιμο όφελος καταστολή όγκου σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχήμα 3Β, επάνω δεξιά στην πάνω αριστερά). Συνολικά, οι ποντικοί από την ομάδα DCLV-PSCA εμφανίζεται σημαντικά καλύτερο ποσοστό επιβίωσης από εκείνη των ποντικιών είτε από το DCLV-ουδέτερη ή ομάδα ελέγχου. Όλες οι όγκοι από την DCLV-Null και την ομάδα ελέγχου υπερβεί το όριο μεγέθους εντός 55 ημερών (το μέγεθος του όγκου 2000 mm

3 χρησιμοποιήθηκε ως υποκατάστατο τελικό σημείο της επιβίωσης), ενώ η ομάδα DCLV-PSCA επέζησαν περισσότερο από 70 ημέρες (Σχήμα 3Β, κάτω δεξιά).

(Α, Β) Male C57BL /6 ποντίκια ανοσοποιήθηκαν με 8 × 10

7 TU της DCLV-PSCA, μακέτα φορέα DC-LV-Null, ή ελέγχου PBS στη βάση της ουράς. Δέκα ημέρες μετά την ανοσοποίηση, οι ποντικοί προκλήθηκαν υποδορίως με 5 χ 10

5 κυττάρων όγκου TRAMP-C1. καμπύλες ανάπτυξης όγκου παρακολουθήθηκε με ένα πρόστιμο καλίμπρα, και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε με βάση τις μεγαλύτερες κάθετες διαμέτρους (mm

3), σύμφωνα με τον τύπο

V = ab

2π /6

, όπου

μια

και

β

είναι οι μεγαλύτερες κάθετες διαμέτρους. Αντιπροσωπευτικά καμπύλη επιβίωσης Kaplan Meyer για προφυλακτική πρόκληση όγκου (n = 12). (C, D) Αρσενικοί C57BL /6 ποντίκια εμφυτεύτηκαν με 5 χ 10

5 TRAMP-C1 καρκινικά κύτταρα υποδορίως, και 18 ημέρες αργότερα, αυτά τα ποντίκια που φέρουν όγκο υπέστησαν αγωγή με 8 × 10

7 TU του DCLV -PSCA (n = 12) ή DCLV-Null (n = 12) στη βάση της ουράς. Ο όγκος του όγκου παρακολουθήθηκε και υπολογίστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Αντιπροσωπευτική καμπύλη επιβίωσης Kaplan Meyer για θεραπευτική πρόκληση όγκου. (***:

P

& lt? 0,001? Log-rank (Mantel-Cox) δοκιμή μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν SEM..) Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν δύο φορές και ο εκπρόσωπος δεδομένα εμφανίζονται

Η.

Θα διερευνηθεί περαιτέρω κατά πόσον DCLV-PSCA θα μπορούσε να είναι ισχυρό για την αναστολή της ανάπτυξης του όγκου σε ένα θεραπευτικό TRAMP-C1 μοντέλο, στο οποίο είχε ήδη καθοριστεί ένας όγκος (Σχήμα 3C). Ποντίκια που έφεραν όγκο θεραπευτικά εμβολιάστηκαν με DCLV-PSCA έδειξαν σημαντικά βραδύτερη ανάπτυξη του όγκου (Σχήμα 3D, ανώτερο και μεσαίο), και η μέση επιβίωση παρατάθηκε από 49,5 ημέρες έως 64 ημέρες μετά την ανοσοποίηση DCLV-PSCA (Σχήμα 3Δ, χαμηλότερα).

Η εξάρτηση του εμβολίου-προκάλεσε αντικαρκινική ανοσία σε διεισδύσει CD8

+ και /ή CD4

+ Τ κύτταρα

σε μια προσπάθεια για την περαιτέρω κατανόηση των ρόλων των CD8

+ και CD4

+ Τ κύτταρα στην αντικαρκινική ανοσία, δείγματα ιστού όγκου από DCLV-τευθείαν ή DCLV-ΡδΟΑ-ανοσοποιημένους ποντικούς συλλέχθηκαν, εγκλεισμένα σε παραφίνη και υποβλήθηκαν σε χρώση πυρήνα και επιφάνειας δείκτες. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, η ανοσοποίηση είχε σαν αποτέλεσμα διείσδυση περισσότερων κυττάρων Τ (όπως προσδιορίζονται με χρώση CD3), συμπεριλαμβανομένων τόσο των CD4

+ και CD8

+ Τ κυττάρων σε ιστούς όγκων που συλλέγονται από DCLV-ΡδΟΑ-ανοσοποιημένους ποντικούς, από εκείνη των ποντικών DCLV-null-θεραπεία. Αυτό δείχνει ότι και οι δύο κυτταροτοξικά και βοηθητικά Τ κύτταρα μπορούν να διεισδύσουν στο τοπικό ιστό του όγκου σε απόκριση προς ανοσοποίηση. Για να προσδιοριστεί η εξάρτηση του αντικαρκινική δράση σε αυτά διεισδύσει Τ κύτταρα, ένας

in vivo

Τ πείραμα εξάντληση των κυττάρων εκτελέστηκε. Τέσσερις ομάδες ποντικών εμβολιάσθηκαν με όγκους TRAMP-C1, στην οποία τρεις ομάδες στη συνέχεια ανοσοποιήθηκαν με DCLV-PSCA 14 ημερών μετά την πρόκληση όγκου, ενώ η εναπομένουσα ομάδα ανοσοποιήθηκε με DCLV-Null. Για τους DCLV-ΡδΟΑ-ανοσοποιημένες ομάδες, μία ομάδα υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ένα αντίσωμα ικανό να καταστρέφουν CD4 + Τ κύτταρα, και μια άλλη ομάδα υπέστη αγωγή με ένα αντίσωμα ικανό να καταστρέφουν CD8

+ Τ κυττάρων (Σχήμα 4Β). Όπως φαίνεται νωρίτερα, DCLV-PSCA ανοσοποίηση θα μπορούσε να επιβραδύνει σημαντικά τη συνολική ανάπτυξη του όγκου. Αντίθετα, οι όγκοι στις ομάδες με εξάντληση των CD8 είτε

+ ή CD4

+ Τ κύτταρα ανέπτυξαν ένα ταχύτερο ρυθμό της ανάπτυξης του όγκου, αν και ορισμένοι όγκων-προστατευτική επίδραση παρέμεινε. Αξίζει να σημειωθεί ότι, CD8

ομάδα + Τ κύτταρα εξαντλούνται είχαν σημαντικά μεγαλύτερους όγκους από εκείνη του CD4

+ κυττάρων Τ-εξαντλημένα ομάδα (Σχήμα 4C). Τα δεδομένα μας υποδεικνύουν περαιτέρω ότι τα Τ κύτταρα είναι υπεύθυνα για την παρατηρούμενη εμβόλιο που προκαλείται από αντικαρκινική ανοσία και ότι τα CD8

+ Τ κύτταρα παίζουν τον πιο απαραίτητη ρόλο στον έλεγχο της ανάπτυξης του όγκου.

(Α) Διείσδυση των κυττάρων Τ σε ιστούς όγκων. TRAMP-C1 όγκοι από ποντικούς που φέρουν όγκο αποκόπηκαν 3 εβδομάδες μετά την ανοσοποίηση, εγκλεισμένα σε παραφίνη, και χρωματίστηκαν για ανοσοφθορισμό-συζευγμένο CD3, CD4 και CD8 αντίσωμα (πράσινο χρώμα όπως υποδεικνύεται από λευκά βέλη) μαζί με πυρηνική χρώση (κόκκινο χρώμα) . Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν CD4

+ και CD8

+ Τ κύτταρα διεισδύσει σε ιστούς όγκου από DCLV-ΡδΟΑ-ανοσοποιημένους ποντικούς σε σύγκριση με εκείνα του DCLV-Null-ανοσοποιημένους ποντικούς. (Β) Τέσσερις ομάδες αρσενικών C57BL /6 ποντικών (η = 8 για κάθε ομάδα) μεταμοσχεύθηκαν με 5 × 10

5 TRAMP-C1 κύτταρα υποδορίως την ημέρα 0. Δεκατέσσερις ημέρες αργότερα, 3 ομάδες ανοσοποιήθηκαν με DCLV-PSCA , ενώ η άλλη ομάδα ανοσοποιήθηκε με ψευδο φορέα DCLV-Null. Δύο ομάδες ποντικών από τις DCLV-ΡδΟΑ-ανοσοποιημένες ομάδες υποβλήθηκαν σε CD4

+ ή CD8

+ εξάντληση των κυττάρων Τ με την έγχυση CD4- ή CD8-εξάντληση αντίσωμα ενδοπεριτοναϊκώς. (Γ) Ο όγκος του όγκου για κάθε ομάδα ποντικών παρακολουθήθηκε. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν SEM. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν δύο φορές και ο αντιπρόσωπος δεδομένα εμφανίζονται.

Η

Προστασία έναντι του πνεύμονα μετάσταση των κυττάρων Β16-ΡδΟΑ

Η υπερέκφραση της PSCA ταυτοποιήθηκε να συνδέεται με τη μετάσταση του όγκου του προστάτη σε πολλές μελετών, το οποίο το καθιστά ιδανικό στόχο για ανοσοθεραπεία. Για να διευκολυνθεί η μελέτη της ικανότητας των DCLV-PSCA ανοσοποίηση να αναστέλλουν το σχηματισμό μετάσταση όγκου, άγριου τύπου κύτταρα Β16-Ρ10 που εκφράζει σταθερά PSCA δομήθηκε (ορίζεται ως Β16-PSCA). Αρσενικά C57BL 6 ποντίκια /για πρώτη φορά εμβολιάστηκαν με DCLV-PSCA ή DCLV-Null ως αρνητικός μάρτυρας. Δέκα ημέρες αργότερα, συγγενικά κύτταρα όγκου Β16-PSCA εγχύθηκαν ενδοφλεβίως στα ζώα. Μετά από άλλες 14 ημέρες, τα ζώα θανατώθηκαν, και οι καταθέσεις των πνευμόνων μεταστατικό ήταν ποσοτικά μακροσκοπικά. Σε σύγκριση με DCLV-Null, DCLV-PSCA ανοσοποίηση μείωσε σημαντικά τον αριθμό του σχηματισμού επιφάνειας μετάσταση στους πνεύμονες (& gt? 75%, Σχήμα 5Α και 5C). Η ιστολογική δείγματα πνευμονικού ιστού από τις δύο παραπάνω ομάδες εξετάστηκαν επίσης μικροσκοπικά για τις καταθέσεις μετάσταση, και παρόμοια εύρημα παρατηρήθηκε (Σχήμα 5Β). Σε αντίθεση, η προστατευτική ανοσία του DCLV-PSCA περιορίστηκε μόνο στους PSCA εκφράζουν κύτταρα μελανώματος, καθώς δεν παρατηρήθηκε καμία σημαντική διαφορά όταν καρκινικά κύτταρα Β16-Ρ10 μεταμοσχεύθηκαν (Σχήμα 5C). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν ΡδΟΑ-ειδικά κατά του όγκου ανοσία που παρέχεται από DCLV-PSCA ανοσοποίηση και την ικανότητά της να καταστείλει το σχηματισμό μεταστάσεων.

(α) αρσενικά ποντίκια C57BL /6 ανοσοποιήθηκαν με DCLV-PSCA ή DCLV-Null ως παρωδία ελέγχου . Δέκα ημέρες αργότερα, οι ποντικοί προκλήθηκαν με 0,2 εκατομμύρια κύτταρα Β10-Ρ10-PSCA με ενδοφλέβια ένεση μέσω της φλέβας της ουράς. Δύο εβδομάδες αργότερα, τα ποντίκια θυσιάστηκαν, και έχουν δείξει ότι μακροσκοπική απόψεις των πνευμόνων. (Β) Η μικροσκοπική Η &? Ε χρώση (20 ×) δειγμάτων πνευμονικού ιστού από ποντικούς ανοσοποιημένους με DCLV-PSCA ή DCLV-Null. (C) Στατιστική ποσοτικοποίηση των μεταστάσεων μελανώματος πνεύμονα (αριθμός μαύρων οζίδια στους πνεύμονες) ανοσοποιημένων ποντικών? παρόμοια ανοσοποίηση, αλλά με τις αρχικές μεταστάσεις μελανώματος Β16-Ρ10 συμπεριλήφθηκε ως έλεγχος. (**:

P

& lt? 0,01 και n /s:. Όχι στατιστικά σημαντική? Μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από δοκιμή Bonferroni πολλαπλής σύγκρισης του μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν SD, η = 4). Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν δύο φορές και ο εκπρόσωπος δεδομένα εμφανίζονται.

Η

Συζήτηση

θεραπείες DC-based έχουν δείξει ελπιδοφόρα αποτελέσματα για την ανοσοθεραπεία του καρκίνου [47], [48]. DC-σκηνοθεσία LVs είναι αποτελεσματικά φορείς εμβολίου. Είναι σε θέση να μεταγάγει και να ενεργοποιήσετε ΑΧ

in vivo

και μεσολαβούν ανθεκτική έκφραση του διαγονιδίου, τα οποία μπορούν στη συνέχεια να υποβληθούν σε επεξεργασία από ΑΧ και παρουσιάζονται σε Τ κύτταρα, όπως αντιγόνα [49]. Επιπλέον, αυτά τα διανύσματα κατασκευάζονται για να είναι μη-αντιγράψιμο, με εκφράζονται ελάχιστη ιικές πρωτεΐνες, και, ως εκ τούτου, λιγότερο anti-φορέα ανοσία βρέθηκε [44]. Επιπλέον, λόγω της DC-ειδική μεταγωγή, λιγότερες ασφάλεια και off-στόχο ανησυχίες προκύπτουν κατά την εφαρμογή ΑΧ ως οχήματα εμβολίων

in vivo

[41]. Σε προηγούμενες μελέτες μας, αποδείξαμε ότι το DC-κατευθυνόμενη LVs (DCLVs) μπορούν να προκαλέσουν ισχυρές ανοσοαποκρίσεις έναντι ΟνΑ [50], HIV-gag [45], και hgp100 [44] αντιγόνα. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε τις DCLVs μεταφέρουν PSCA, ένα πραγματικό αντιγόνο αυτο-όγκου για καρκίνο του προστάτη, ως ένα εμβόλιο για συγγενικό μεταμοσχευμένο όγκου του προστάτη

in vivo

. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτό αντιπροσωπεύει την πρώτη μελέτη για να χρησιμοποιήσετε DCLVs ως τροπικότητα εμβόλιο έναντι ενός αντιγόνου αυτο-όγκου σε ζωικά μοντέλα. Δείξαμε ότι DCLV-PSCA εμβολιασμός θα μπορούσε να ξεπεραστεί η ανοχή προς PSCA αυτο-αντιγόνου και παράγουν ανθεκτικά Τ κυτταρικές αποκρίσεις αντιγόνου-ειδικών

in vivo

. Αυτή η ανοσοποίηση τοποθετεί μια άνοση απόκριση που είναι ικανή να καταστείλει τη δημιουργία όγκων TRAMP-C1 προστάτη και επιβραδύνει την ανάπτυξη του όγκου σε ένα θεραπευτικό μοντέλο.

Ο πρωτεΐνης φακέλου που χρησιμοποιείται για ψευδότυπου LVs είναι ένα κατασκευασμένο μορφή γλυκοπρωτεΐνης του ιού Sindbis (SVGmu). Η άγριου τύπου αυτού γλυκοπρωτεΐνη έχει την συγγένεια δέσμευσης τόσο θειική ηπαρίνη και DC-SIGN? DC-SIGN είναι μία επιφάνεια πρωτεΐνη που εκφράζεται κυρίως σε μακροφάγα και σε ορισμένα υποσύνολα DCs [51]. Πετύχαμε στόχευση των DCs με την απενεργοποίηση της θειικής ηπαρίνης και διατηρώντας την πρόσδεση της γλυκοπρωτεΐνης του ιού Sindbis DC-SIGN. Έχει αποδειχθεί ότι η σύνδεση του SVGmu σε DC-SIGN εξαρτάται από τη δομή υψηλής μαννόζης σε DC-SIGN. Ως εκ τούτου, το ιικό γλυκοπρωτεΐνη μπορεί να κατασκευαστεί περαιτέρω να εμφανίσει υψηλότερη μαννόζη δομή για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας μεταγωγής [52]. Επιβεβαιώσαμε καταρχάς ότι DCLV-PSCA θα μπορούσε να παραχθεί αποτελεσματικά και επιλεκτικά τη μεταγωγή DC-SIGN-κύτταρα που εκφράζουν. Η

in vitro

δοκιμασία μεταγωγή BMDC τεκμηριώνει την παρατήρηση ότι DCLV-PSCA μπορεί να κατευθύνει την παράδοση του αντιγόνου PSCA σε ΑΧ.

Έχει ήδη αποδειχθεί ότι το δέρμα που προέρχεται από ΑΧ είναι ο κύριος στόχος για LV-based εμβολιασμού [49]. Ωστόσο, η κατανομή και η προσβασιμότητα των DCs σε διάφορα μέρη του σώματος ποικίλουν, έτσι ανοσοποίηση μέσω διαφορετικών οδών μπορεί να προκαλέσει διαφορετικά επίπεδα ανοσοαποκρίσεων. Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι η F.P. διαδρομή είχε μια σχετικά υψηλότερη απόκριση σε σχέση με άλλες οδούς χορήγησης για ορισμένες παραδόσεις αντιγόνο [44], [45]. Σε αυτή τη μελέτη, συγκρίθηκαν απευθείας ανοσολογική απόκριση μέσω διαφόρων οδών εμβολιασμό (i.d., F.P., i.m., s.c. και ί.ρ.). Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ότι i.d. και σημείο τήξεως: ενέσεις δημιουργούνται πολύ υψηλότερο απαντήσεις από ό, τι το ενδομυϊκά και υποδορίως διαδρομή, ενώ ε.π. χορήγηση είχε ως αποτέλεσμα το χαμηλότερο απόκριση. Ανοσοποίηση που δημιουργούνται μέσα από την ε.δ. διαδρομή εμφανίζεται μια ελαφρώς υψηλότερη απόκριση από το F.P. διαδρομή. Να λογοδοτήσουν για αυτό το αποτέλεσμα, πιθανολογείται ότι DCLV-PSCA έχει μια καλύτερη πιθανότητα να συναντήσουμε ΑΧ όταν χορηγείται είτε μέσω της ε.δ. ή Ρ.Ρ. διαδρομή.

Μια εφάπαξ δόση DCLV-PSCA ήταν σε θέση να προστατεύσει αυτά τα ποντίκια από την πρόκληση καρκίνου του προστάτη και βελτίωσε το ποσοστό επιβίωσης τους. Αυτό το αποτέλεσμα είναι συνεπές με μία προηγούμενη μελέτη χρησιμοποιώντας μια προνομιακή /στρατηγική ώθηση για τη δημιουργία PSCA ειδική ανοσολογική απόκριση σε ένα προφυλακτικό μοντέλο [22], [23], αν και DCLV-PSCA προκάλεσε υψηλότερο μέγεθος CD8

+ Τ κυτταρική απόκριση. Σε μια TRAMP-C1 θεραπευτικό μοντέλο, δια Φορέα εμβόλιο μας σημαντικά επιβραδυνθεί η ανάπτυξη του όγκου και παρατεταμένη επιβίωση του ποντικιού, ενώ η προηγούμενη μέθοδος εμβόλιο προνομιακή /ώθηση που παράγεται μόλις ικανοποιητική προστασία του όγκου [22]. Αυτό το αποτέλεσμα μπορεί να εξηγηθεί από το χρονικό διάστημα μεταξύ του εμβολιασμού όγκου και ψηλαφητό όγκο, μια περίοδο περίπου 20~25 ημέρα. Επίσης, χρειάζεται ένα σημαντικά μεγαλύτερο χρονικό διάστημα για την εφαρμογή του prime /ώθηση ανοσοποίηση, η οποία πιθανό αποτέλεσμα λείπει η πιο κατάλληλη στιγμή για να επιβραδύνει την εξέλιξη του καρκίνου. Έτσι, ένα πιθανό πλεονέκτημα της DCLVs είναι η ικανότητά τους να ξεπεράσουν το ανοσοποιητικό ανοχή και την καθιέρωση ενός αποτελεσματικού αντικαρκινική ανοσολογική απόκριση εντός 2 εβδομάδων.

Τόσο CD8

+ και CD4

+ Τ κύτταρα διείσδυσαν σε τοπικούς ιστούς όγκων παρακάτω DCLV-PSCA ανοσοποίηση. Αν και CD8

+ και CD4

+ Τ κύτταρα και οι δύο που απαιτούνται για την προστασία των όγκων, το πείραμα εξάντληση του αντισώματος δείχνει ότι CD8

+ Τ κύτταρα παίζουν έναν πιο σημαντικό ρόλο στον έλεγχο της ανάπτυξης του όγκου. Έχει καθιερωθεί ότι τα κυτταροτοξικά CD8

+ Τ κύτταρα μπορούν να σκοτώσουν άμεσα τα καρκινικά κύτταρα [53] – [55]. Όσο για το CD4

+ Τ κύτταρα, αρκετοί πιθανοί λόγοι εξηγούν την απαίτηση τους για την προστασία των όγκων. Πρώτον, τα CD8

+ Τ κύτταρα εξαρτώνται από CD4

+ Τ κύτταρα [56], [57] για να εκμαιεύσει ισχυρή ανοσοαποκρίσεις. Προηγουμένως, παρατηρήσαμε μια εξαρτώμενη από CD4 CD8

+ Τ κυτταρική απόκριση που προκλήθηκε από DCLVs [58]. Δεύτερον, ένα μέρος τουλάχιστον του αποτελέσματος κατά του όγκου προκαλείται από την ανταπόκριση Th1, το οποίο βασίζεται σε CD4

+ Τ κύτταρα [59].

Προς το παρόν, δεν υπάρχει αξιόπιστη θεραπεία για να θεραπεύσει προχωρημένο μεταστατικό καρκίνο του προστάτη. PSCA είναι εντόνως εκφρασμένο σε μεταστατικό ιστό για τον καρκίνο του προστάτη και επομένως είναι ένας καλός στόχος για ανοσοθεραπεία καρκίνου. Έχουμε δείξει σε αυτή τη μελέτη που DCLV-PSCA μπορεί να δημιουργήσει ανοσία σε θέση να καταστείλει την μετάσταση του πνεύμονα στο μοντέλο Β16-PSCA. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν ο ίδιος αριθμός των Β16-Ρ10 ή Β16-PSCA κυττάρων εγχύθηκε ενδοφλεβίως, τα κύτταρα Β16-PSCA ήταν σε θέση να παράγουν περισσότερο σχηματισμός μετάσταση στους πνεύμονες από εκείνη των κυττάρων Β16-Ρ10 (σχήμα 5C). Επί του παρόντος, η σχέση μεταξύ μετάστασης όγκου και της έκφρασης PSCA δεν έχει διερευνηθεί διεξοδικά, αν και ορισμένες μελέτες δείχνουν ότι η PSCA μπορεί να παίζει έναν ρόλο στον περιορισμό της μετανάστευσης και μετάσταση όγκου [60]. Παρ ‘όλα αυτά, οι περισσότερες μελέτες που απαιτούνται για την περαιτέρω κατανόηση πώς η έκφραση PSCA συμβάλλει στην μετάσταση του καρκίνου του προστάτη, και Β16-PSCA μπορεί να είναι ένα κατάλληλο μοντέλο για τις μελέτες αυτές.

Στο σύνολό τους, έχουμε αναφερθεί ένα νέο σύστημα φορέα DCLV που μπορεί παραδώσει αυτο-όγκου PSCA αντιγόνου σε κύτταρα παρουσίασης αντιγόνου και mount εμβόλιο-ειδικές ανοσοαποκρίσεις. Αυτό DCLV-PSCA μπορεί να ξεπεράσει ανοσοανοχή προς PSCA, να δημιουργήσει ανοσία Τ κυττάρου που μπορεί να προστατεύσει τα ποντίκια σε μοντέλα όγκου προστάτη TRAMP-C1, και σημαντικά αναστέλλουν το σχηματισμό μετάστασης πνεύμονα Β16-PSCA. Τα αποτελέσματα αυτά παρέχουν στοιχεία που να υποστηρίζουν τη χρήση του DCLVs να παραδώσει εμβολίων κατά του καρκίνου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ποντίκια και κυτταρικές σειρές

Male C57BL /6 ποντίκια (6-8 old εβδομάδων) αγοράστηκαν από την Charles River Laboratories (Wilmington, ΜΑ, USA). Όλα τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε εγκαταστάσεις ζώων στο Πανεπιστήμιο της Νότιας Καλιφόρνιας (USC), υπό ελεγχόμενη θερμοκρασία και σκότους /12 ωρών φωτός, με ελεύθερη πρόσβαση σε νερό και τυπική εργαστηριακή τροφή. διαδικασίες ζώων πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές που καθορίζονται από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (ΝΙΗ Δημοσίευση Νο 85-23, αναθεωρήθηκε το 1996) και το πρωτόκολλο ζώων εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών ζώων Φροντίδα και Χρήση του USC (2010 έως 11450) . Το μέγεθος του όγκου του 2000 mm

3 χρησιμοποιήθηκε ως υποκατάστατο τελικό σημείο της επιβίωσης, και τα ποντίκια θα υποβάλλονται σε ευθανασία με εισπνοή CO2 από μία πηγή δεξαμενή και σε συνέχεια αυχενική εξάρθρωση. κύτταρα TRAMP-C1 ελήφθησαν από την ATCC (Manassas, VA, USA) και καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ υψηλής γλυκόζης (Cellgro, Manassas, VA, USA) με L-γλουταμίνη συμπληρωμένο με 5% FBS, 5% ορό Νυ IV (BD Biosciences, San Jose, CA, USA), βόεια ινσουλίνη παγκρέατος 5 μg /ml (Sigma, St. Louis, ΜΟ, USA) και 10 ηΜ δεϋδροϊσοανδροστερόνη (ChromaDex, Irvine, CA, USA). κύτταρα Β16-Ρ10 αγοράσθηκαν από την ATCC (Manassas, VA, USA) και καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ υψηλής γλυκόζης (Cellgro, Manassas, VA, USA) με L-γλουταμίνη, συμπληρωμένο με 10% FBS. κύτταρα Β16-Ρ10 σταθερώς εκφράζουν PSCA παρήχθησαν με μεταγωγή κυττάρων Β16-Ρ10 με φακοϊό (FUW-PSCA) ψευδοτυποποιημένοι με φυσαλιδώδους στοματίτιδας γλυκοπρωτεΐνη του ιού (VSVG), και επιλέχθηκαν κλωνικά κύτταρα.

Κατασκευή και παραγωγή φορείς λεντοϊού

Ο λεντοϊού ραχοκοκαλιά του πλασμιδίου FUW-PSCA δομήθηκε με εισαγωγή του cDNA του ποντικού PSCA προς τα κάτω του προαγωγού ουμπικουϊτίνης σε FUW. FUW είναι ένα HIV-1 που προέρχεται από το πλασμίδιο βραδέος αποτελείται από έναν εσωτερικό υποκινητή ανθρώπινης ubiquitin-C για να οδηγήσουν την έκφραση διαγονιδίου και αρκτόμυς στοιχείο απόκρισης να βελτιωθεί η σταθερότητα της μεταγραφής RNA [61]. Χρησιμοποιήσαμε μια προηγουμένως αναφερθείσα διαδικασία του παροδική επιμόλυνση των κυττάρων 293Τ για την παραγωγή του φορέα DCLV-ΡδΟΑ [41].