Αφηρημένο

Καταστολή της σηματοδότησης κυτοκίνης (SOCS) οικογένεια είναι ένα σημαντικό αρνητικό ρυθμιστής της σηματοδότησης κυτοκίνης και απορύθμιση των SOCS έχει συμμετάσχει σε πολλούς τύπους καρκίνου. Όλα τραχήλου καρκινικές κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν έδειξαν χαμηλότερη έκφραση του SOCS1, SOCS3, και SOCS5 από το κανονικό γραμμές ιστό ή κύτταρο. Το αποτέλεσμα ανοσοϊστοχημεία για τις πρωτεΐνες SOCS σε ανθρώπινο ιστό του τραχήλου της μήτρας επιβεβαίωσε επίσης ότι το φυσιολογικό ιστό εξέφρασε υψηλότερο επίπεδο των πρωτεϊνών SOCS από τις γειτονικές του όγκου. Παρόμοια με τη ρύθμιση των SOCS σε άλλους τύπους καρκίνου, μεθυλίωσης του DNA συνέβαλαν στην SOCS1 μειορρύθμιση σε CaSki, ME-180, και τα κύτταρα HeLa. Ωστόσο, η έκφραση του SOCS3 ή SOCS5 δεν ανακτήθηκε από την αναστολή της μεθυλίωσης του DNA. Απακετυλίωση ιστόνης μπορεί να είναι ένα άλλο ρυθμιστικό μηχανισμό που εμπλέκονται στην έκφραση SOCS1 και SOCS3, όμως, η έκφραση SOCS5 ήταν ούτε επηρεάζεται από τη μεθυλίωση του DNA ούτε απακετυλίωση ιστόνης. Έκτοπη έκφραση SOCS1 ή SOCS3 ανατίθενται ραδιοαντοχή σε κύτταρα HeLa, τα οποία υπονοείται SOCS σηματοδότηση ρυθμίζει την απόκριση σε ακτινοβολία για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε δείξει ότι η έκφραση SOCS καταπιεσμένη από, εν μέρει, επιγενετικώς και αλλοιωμένη έκφραση SOCS1 και SOCS3 θα μπορούσαν να συμβάλουν στην ακτινοευαίσθητα φαινότυπο στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας

Παράθεση:. Kim MH, Κιμ MS, Kim W, Kang MA, Cacalano NA, Kang SB, et al. (2015) Καταστολή της κυτοκίνης Σηματοδοσίας (SOCS) γονίδια σιγήσει DNA υπερμεθυλίωση και απακετυλίωση ιστόνης και ρυθμίζουν απόκρισης στην ακτινοθεραπεία σε κύτταρα καρκίνου του τραχήλου. PLoS ONE 10 (4): e0123133. doi: 10.1371 /journal.pone.0123133

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Rodney John Scott, Πανεπιστήμιο του Νιούκαστλ, Αυστραλία

Ελήφθη: 15, Ιουλίου 2014? Αποδεκτές: 22 Φλεβάρη 2015? Δημοσιεύθηκε: 7 του Απρίλη, 2015

Copyright: © 2015 Kim et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Τα δεδομένα μπορεί να μην είναι που διατίθενται για ηθικούς περιορισμούς. Τα στοιχεία είναι διαθέσιμα από την Επιτροπή /Δεοντολογίας KIRAMS Θεσμική Data Access για τους ερευνητές που πληρούν τα κριτήρια για την πρόσβαση σε εμπιστευτικά δεδομένα

Χρηματοδότηση:. Το ερευνητικό έργο χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Πυρηνικής Ε & amp? Δ Πρόγραμμα του Υπουργείου Επιστημών, των ΤΠΕ και μελλοντικό σχεδιασμό, τη Δημοκρατία της Κορέας (KIRAMS RTR: 504580 – 2012). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Μέλη του καταστολέα της σηματοδότησης κυτοκίνης (SOCS) οικογένεια πρωτεϊνών παίζουν σημαντικό ρόλο στην αρνητική ρύθμιση της μεταγωγής σήματος κυτοκίνης. Αυτές οι πρωτεΐνες δρουν σε ένα αρνητικό βρόχου ανάδρασης, αναστέλλοντας τις κυτοκίνη ενεργοποιηθεί Janus μετατροπείς κινάσης /σήματος και ενεργοποιητές μεταγραφής (JAK /STAT) μονοπατιού σηματοδότησης για τη ρύθμιση της κυτταρικές αποκρίσεις [1]. SOCS1 εμφανίζεται να έχει δραστηριότητα καταστολέα όγκου [2] και την αποκατάσταση της έκφρασης των γονιδίων SOCS1 προκαλεί καταστολή της ανάπτυξης και επαγωγή απόπτωσης σε κύτταρα HCC [3]. Πρόσφατα, Sobti κ.ά. έδειξαν απώλεια της έκφρασης SOCS1 μέσω μεθυλίωσης υποκινητή σε περισσότερο από το 60% των περιπτώσεων του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και πρότεινε τη σημασία των SOCS1 αρνητική ρύθμιση στην αυχενική καρκινογένεση HPV που προκαλείται [4]. SOCS3 εμπλέκεται στην ανάπτυξη και την εξέλιξη πολλών κακοηθειών, και υπάρχουν ενδείξεις ότι SOCS3 έχει διαφορετικές λειτουργίες ανάλογα με την προέλευση του όγκου. Σε ανθρώπινο πνεύμονα [5], ηπατοκυτταρικό [6], και καρκίνο κεφαλής και τραχήλου [7], SOCS3 έχει σιγήσει από υπερμεθυλίωση, η οποία δίνει μια πλεονέκτημα ανάπτυξης σε καρκινικά κύτταρα. Σε αντίθεση, SOCS3 είναι ανιχνεύσιμη στον καρκίνο του μαστού [8], και η έκφραση SOCS3 αυξάνεται κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη [9].

Είναι γενικά αποδεκτό ότι καρκίνων του τραχήλου είναι ακτινοευαίσθητα και τα αποτελέσματα της θεραπείας είναι ακόμα υπόσχεται ακόμα και μετά ο όγκος έχει διαγνωστεί πολύ αργά για θεραπεία χρησιμοποιώντας ριζική υστερεκτομή. Στην Κορέα, ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας είναι μια σημαντική ανησυχία για την υγεία των γυναικών, αντιπροσωπεύοντας το 9,8% των νέων γυναικών περιπτώσεων καρκίνου. Παρά το γεγονός ότι έχουν επίπτωση και τη θνησιμότητα ποσοστά μειώνονται, η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας σε ηλικιωμένους αυξάνεται [10]. Ωστόσο, οι περισσότερες από τις αποτυχίες της θεραπείας σε προχωρημένο τραχήλου της μήτρας cancersoriginate από την ανάπτυξη της ραδιοαντοχή, ένα πρόβλημα που δεν έχουμε ακόμη ξεπεράσει. Είναι ενδιαφέρον ότι, SOCS1 ευαισθητοποιεί κύτταρα γλοιοβλαστώματος σε ακτινοβολία, ενώ SOCS3 ενισχύει την επιβίωση των κυττάρων του όγκου και ραδιοαντοχή [11]. Zhou et al. πρότειναν ότι η στόχευση SOCS έκφρασης ή λειτουργίας σε κύτταρα γλοιοβλαστώματος μπορεί να είναι μια χρήσιμη στρατηγική για να ευαισθητοποιήσει κύτταρα όγκου σε ιοντίζουσα ακτινοβολία. Ενώ η οδός DNA απόκριση ζημιά είναι κρίσιμη για τη διαχείριση γενοτοξικό στρες, το αποτέλεσμα της απάντησης εξαρτάται από την κυτταρική έννοια υψηλά. Σαφώς, άλλες οδούς σηματοδότησης ενεργοποιούνται στο κύτταρο κατά τη στιγμή της βλάβης του DNA μπορεί να ρυθμίζουν την απόκριση και μεταβάλλει την έξοδο της μεταγωγής σήματος DNA βλάβη που προκαλείται από [12].

Στην παρούσα μελέτη, έχουμε αναλύσει SOCS1, SOCS3, και SOCS5 γονιδιακής έκφρασης σε ένα πάνελ κυτταρικών γραμμών που αντιπροσωπεύουν πρωτογενή,

de novo

ανθρώπινου τραχηλικού cancersthat είναι ακτινοευαίσθητα. Έχουμε δείξει ότι η έκφραση SOCS1, SOCS3 και SOCS5 καταστέλλεται, εν μέρει, από επιγενετικώς υπερμεθυλίωση DNA και απακετυλίωση ιστόνης. Δείχνουμε ότι αλλοιωμένη έκφραση SOCS1 και SOCS3 μπορεί να συνεισφέρει στην ακτινοευαίσθητα φαινότυπο στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Υλικά και Μέθοδοι

θεραπεία

καλλιέργεια κυττάρων, φυσιολογικό τράχηλο ιστού και αναστολέα

Το ανθρώπινο τραχήλου κυτταρικές γραμμές καρκινώματος CaSki, HeLa, ME-180, και SiHa ελήφθησαν από την Κορέας γραμμή Τράπεζας κυττάρων (KCLB, Σεούλ, Κορέα). Κανονικό ανθρώπινο ινοβλαστών κυτταρικές σειρές CCD-18Lu, CCD-18Co, και WI-38 αγοράστηκαν από την American Type Culture συλλογή (ATCC, Manassas, VA, USA). Οι κυτταρικές γραμμές CaSki και ΜΕ-180 διατηρήθηκαν σε RPMI-1640 (ΡΑΑ Laboratories, Pasching, Αυστρία) και ο HeLa, SiHa και φυσιολογικές κυτταρικές σειρές ινοβλαστών διατηρήθηκαν σε ϋΜΕΜ (ΡΑΑ Laboratories), συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός ( Lonza, Walkersville, MD, USA) και 100 μονάδες πενικιλίνης και στρεπτομυκίνης (ΡΑΑ Laboratories). Όλα τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε υγροποιημένο επωαστή με 5% CO

2 στους 37 ° C. Για την αναστολή του DNA μεθυλοτρανσφεράση, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πυκνότητα 2-5 × 10

πιάτα 5/100 mm και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 5-αζακυτιδίνη (5-AzaC) στα 10 μΜ για 72 ώρες. Media και 5-AzaC αντικαταστάθηκαν κάθε 24 ώρες. Για την αναστολή της αποακετυλάσης ιστόνης, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Τριχοστατίνη Α (TSA) στα 100 ή 200 ηΜ για 16 ώρες. Και οι δύο αναστολείς αγοράστηκαν από την Sigma Chemical Co. (St. Louis, ΜΙ, USA). Μια κανονική τράχηλο ιστός ελήφθη από έναν ασθενή που υποβλήθηκε σε υστερεκτομή για μύωμα της μήτρας. Έχουμε λάβει γραπτή συγκατάθεση από έναν ασθενή πριν από την επέμβαση. Το Διοικητικό κριτική Θεσμικών ενέκρινε τη διαδικασία συναίνεσης και το πρωτόκολλο της μελέτης (Κ-1103-003-016) στην Κορέα Ινστιτούτο Ακτινολογικής και της ιατρικής επιστήμης.

RealtimeqRT-PCR

Το συνολικό RNA από κύτταρα και ιστός απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το Hybrid-R Ολικό RNA Purification Kit (GeneAll, Σεούλ, Κορέα). Ένα σύνολο 1 μg ολικού RNA μεταγράφηκε ανάστροφα χρησιμοποιώντας το Κιτ Αντιδραστηρίου RT PrimeScript (Takara Bio Inc, Japan) με 25 pmol ολίγο-άΤ εκκινητή και 50 pmol τυχαίων εξαμερών. cDNA αραιώθηκε 1/10 με EZ Ρυθμιστικό Αραίωσης (Takara Bio Inc), και 2 μΐ χρησιμοποιήθηκε ως εκμαγείο σε μία αντίδραση 20 μι PCR. Ποσοτική PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας Πρόμιγμα Εχ Taq (Takara Bio Inc) σε θερμοκυκλοποιητή CFX-96 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν για PCR: κυκλοφιλίνη Α (CypA) (έννοια, ACG GCG AGC ΚΔ ΤΟΟ? Αντίθετης φοράς, ΤΤΤ CTG CTG TCT TTG GGA ΚΔ), SOCS1 (έννοια, ΤΤΤ TCG CCC ΤΤΑ GCG TGA Α? Αντίθετης φοράς, CAT CCA GGT GAA AGC GGC), SOCS3 (έννοια, GCT CCA ΑΑΑ GCG AGT ACC AGC? αντίθετης φοράς, AGT AGA ATC CGC TCT CCT GCA G), και SOCS5 (έννοια, ΑΑΑ AGT ΤΟΟ ATC TGT TCC ΤΑΤ GCC? αντίθετης φοράς, ACT ΑΤΤ ATC TGA CTT GTT TG). Φθορισμογόνο ανιχνευτές (6-καρβοξυ) ήταν: CypA, ΚΕΔ GTC TCC ΤΤΤ GAG CTG ΤΤΤ GCA? SOCS1, ΚΔ CGG GAC CCA CGA GCA TCC? SOCS3, TTG CGC ACG GCG TTC ACC AC? SOCS5, η έκφραση του γονιδίου Α DNMT1 ΑΓΓ ATG ΑΤΤ TTG TGA ACC ΟΤΟ AAG TAC ΟΤΟ μετρήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ SYBR premix Ex Taq II (Takara Bio Inc) με εκκινητές (έννοια, CTT CTT CAG CAC AAC CGT CA? Αντίθετης φοράς, GAA GAG CCG GTA GGT GTC AG). Η σχετική ποσοτικοποίηση της γονιδιακής έκφρασης υπολογίστηκε με τη μέθοδο της ddC (t), όπου CypA mRNA χρησιμοποιήθηκε για την κανονικοποίηση. Το πρόγραμμα PCR ήταν ως εξής: μετά από ένα αρχικό στάδιο προ-επώασης στους 95 ° C για 3 λεπτά, υπήρχαν 45 κύκλους, το καθένα αποτελούμενο από 95 ° C για 15 s και 60 ° C για 60 s. Το τελευταίο κύκλο ενίσχυσης ακολουθήθηκε από μια ανάλυση της καμπύλης τήξης για να βεβαιωθείτε για την ιδιαιτερότητα της qRT-PCR.

Η ανοσοϊστοχημεία

Όλα τα δείγματα ιστού ελήφθησαν με πλήρη ηθική έγκριση από την θεσμική αναθεώρηση KIRAMS διοικητικού συμβουλίου (IRB Νο K-1103-003-016). Η ανοσοϊστοχημική χρώση για SOCS1, SOCS3, και SOCS5 διεξήχθησαν με έναν αυτόματο βαφεύς ανοσοϊστοχημείας (Autostainer 480, Thermo Fisher Scientific, Fremont, CA, USA) σε ενσωματωμένα σε παραφίνη τομές ιστών σταθεροποιημένα με φορμαλίνη του ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα που λαμβάνεται από τον τράχηλο της μήτρας. Οι τομές αποπαραφινώθηκαν με ξυλόλιο για 15 λεπτά και σε προεπεξεργασία σε ένα φούρνο μικροκυμάτων, χρησιμοποιώντας 0.01 Μ κιτρικού ρυθμιστικού διαλύματος (ρΗ 6.0) για 30 λεπτά. Τομές επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα που κατευθύνονται εναντίον SOCS1 (1:25, ab62584, Abcam, Cambridge, UK), SOCS3 (1: 100, ab16030, Abcam) και SOCS5 (1: 100, SC-100858, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz , CA, USA) για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας UltraVision LP Detection System HRP Πολυμερών & amp? DAB Plus Χρωμογόνο (Thermo Fisher Scientific).

μεθυλίωσης-ειδική PCR (MSP)

MSP διεξήχθη για να διερευνήσει την κατάσταση μεθυλίωσης των περιοχών προαγωγού του SOCS1, SOCS3, και τα γονίδια SOCS5 . Μετά την κατεργασία όξινου θειώδους για να τροποποιήσει το DNA, πραγματοποιήθηκε PCR να διακρίνει μεθυλιωμένο από μη μεθυλιωμένο DNA όπως περιγράφεται από τον Herman et al [13]. Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από κυτταρικές σειρές χρησιμοποιώντας κιτ Exgene κυττάρων SV (GeneAll, Κορέα) και όξινο θειώδες τροποποίηση του γενωμικού DNA διεξήχθη με τη χρήση του κιτ ΕΖ μεθυλίωσης DNA (Zymo Research, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η κατεργασμένου με όξινο θειώδες DNA ενισχύθηκε με είτε ένα μεθυλίωσης-ειδικών εκκινητών ή εκκινητές ειδικούς για το μη μεθυλιωμένο αλληλουχία. Εν συντομία, ένας όγκος αντίδρασης 20 μλ που περιέχει 25 ng όξινο θειώδες τροποποιημένο DNA, 1 ρυθμιστικό × PCR, 1.5 mM MgCl

2, 0.25 mM dNTPs, 0.5 μΜ συγκεκριμένο μίγμα εκκινητή και 1 μονάδα ενζύμου Ex-Taq Hot Start (Takara BioInc) ήταν μεταχειρισμένος. Τα προϊόντα της PCR υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση σε 2% πηκτή αγαρόζης, χρωματίστηκαν με RedSafe Nucleic Acid διαλύματος βαφής (Intron, Κορέα) και οπτικοποιήθηκαν υπό φωτισμό UV. Οι Primer λίστες και PCR συνθήκες για MSP συνοψίζονται στον Πίνακα S1.

Bisulfite

αλληλούχιση

κατεργασμένου με όξινο θειώδες γονιδιωματικό DNA ενισχύθηκε με τους εκκινητές που παρατίθενται στον Πίνακα S2. Τα προϊόντα PCR κλωνοποιήθηκαν εντός του κιτ κλωνοποίησης ΤΟΡΟ ΤΑ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ή του Τ-αμβλύ PCR Kit κλωνοποίησης (Solgent, Daejeon, Κορέα). Πέντε τυχαία διάλεξε κλώνοι αλληλουχία και ευθυγραμμίζονται χρησιμοποιώντας QUMA (εργαλείο Ποσοτικοποίηση για μεθυλίωσης Analysis).

γονιδιακή σίγηση από shRNA

Οι λεντοϊού πλασμίδια έκφρασης shRNA στόχευση DNMT1 δημιουργήθηκαν με κλωνοποίηση ολιγονουκλεοτιδίων στο pLKO. 1 διάνυσμα Puro. Οι ακολουθίες των φουρκέτες που στοχεύουν DNMT1 είναι: GCCGAATACATTCTGATGGATCTCGAGATCCATCAGAATGTATTCGGC (TRCN0000021890) και GCCCAATGAGACTGACATCAACTCGAGTTGATGTCAGTCTCATTGGGC (TRCN0000021891). Ο έλεγχος κωδικοποιημένα shRNA εκφράζουν πλασμίδιο λήφθηκε από Addgene με την παρακάτω ακολουθία φουρκέτα: CCTAAGGTTAAGTCGCCCTCGCTCGAGCGAGGGCGACTTAACCTTAGG. Για την συσκευασία, pCMV-dR8.2 dvpr και pCMV-VSVG χρησιμοποιήθηκαν, οι οποίες αγοράστηκαν από Addgene (Cambridge, ΜΑ, USA). Η παραγωγή των ιικών σωματιδίων και την μεταγωγή των κυττάρων στόχων πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο pLKO.1 από Addgene. Τα υπερκείμενα από κύτταρα 293Τ επιμολυσμένα με φορείς συσκευασιών shRNA και συλλέχθηκαν 48 και 72 ώρες μετά την επιμόλυνση ακολουθούμενα από συμπύκνωση του ιού. Συμπυκνωμένο ιός χρησιμοποιήθηκε για λοιμώξεις σε παρουσία 8 μg /mL polybrene. Μία ημέρα μετά την μόλυνση, πουρομυκίνη (1 μg /mL) εφαρμόστηκε για 4 ημέρες για να επιλέξετε μεταχθέντα κύτταρα, τα οποία συλλέχθηκαν για ανάλυση σε πραγματικό χρόνο PCR.

Κλωνοποίηση SOCS υπερεκφράζουν ρετροϊικών κατασκευασμάτων

κατασκευάσματα για υπερεκφράζουν SOCS1, SOCS3, και SOCS5 έγιναν με κλωνοποίηση της SOCS1, SOCS3, και SOCS5 ORF εντός του ρετροϊικού φορέα pLNCX2 (Clontech). Τα γονίδια SOCS1 και SOCS3 προέλευσης ποντικού ευγενώς από τον Dr. Cacalano NA (UCLA, CA). Η

Bam

ΗΙ θραύσμα που περιέχει SOCS1 cDNA με ετικέτα Myc στο C-τελικό άκρο ή SOCS3 cDNA με ετικέτα FLAG στο C-τελικό άκρο υποκλωνοποιήθηκε στο

Βα ιστοσελίδα

ΙΙ της pLNCX2. Οι κλώνοι με το σωστό προσανατολισμό σαρώθηκαν με

Eco RI

πέψη και στη συνέχεια επιβεβαιώθηκε με ανάλυση της αλληλουχίας. Το γονίδιο SOCS5 προέλευσης ποντικού αγοράστηκε από Openbiosystems (MMM1013-9202191) και ενισχύθηκαν με νόημα (5′-AAACTCAGATCTACCATGGATGGATAAAGTGGGGAAAATG-3 ‘) και αντινόημα (5′-AGATATGGATCCCTCGAGCTACTACTTATCGTCATCATCTTTATAATCGATCTTTGCCTTGACTGGTTCTC-3’) εκκινητές. Ένα

Βα

II και

Sal

Ι θραύσμα που περιέχει SOCS5 με τη σημαία στο C-τελικό άκρο υποκλωνοποιήθηκε στο

Βα

II και

Xho

Ι θέση του pLNCX2 ρετροϊού.

Η παραγωγή ιού και την εγκαθίδρυση σταθερών κυττάρων

SOCS υπερεκφράζουν φορείς ρετροϊών και πλασμίδια συσκευασίας, pCMV-Gag-Pol και pCMV-VSVG, συνδιαμολύνθηκαν σε κυτταρική 293Τ. Τα υπερκείμενα από κύτταρα 293Τ συλλέχθηκαν 48 και 72 ώρες μετά την επιμόλυνση ακολουθούμενα από συμπύκνωση του ρετροϊού και χρησιμοποιούνται για να μολύνουν κύτταρα HeLa παρουσία 8 μg /mL polybrene. Μια μέρα μετά τη μόλυνση, εφαρμόσθηκε G418 (200 ng /mL) έως ότου σχηματιστεί σταθερές αποικίες. Οι αποικίες συνενώθηκαν για να ελέγξει την υπερέκφραση SOCS και χρησιμοποιείται για κλωνογονική δοκιμασία.

Western ανάλυση κηλίδος

Τα κύτταρα λύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα SDS δείγματος (125 mM Tris-HCl, ρΗ 6,8, 4% SDS , 15% γλυκερόλη, και 0,004% μπλε βρωμοφαινόλης) και στη συνέχεια έβρασε για 10 λεπτά. Η περιεκτικότητα σε πρωτείνη μετρήθηκε με την BCA Protein Assay Reagent (Intron). Ίσες ποσότητες κυτταρολύματος διαχωρίστηκαν με πηκτώματα SDS-πολυακρυλαμιδίου, μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης, ανοσοστυπώθηκαν και ανιχνεύθηκαν με χημειοφωταύγεια χρησιμοποιώντας αντιδραστήρια ανίχνευσης ECL. Αντι-myc, αντι-ακτίνης και συζευγμένο με υπεροξειδάση δευτερογενή αντισώματα χρένο αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotech (Santa Cruz, CA, USA) και αντι-FLAG αντίσωμα ήταν από τη Sigma Chemical Co.

κλωνογονική δοκιμασία

κλωνογονιδιακή επιβίωση ορίστηκε ως η ικανότητα των κυττάρων να διατηρούν κλωνογόνο ικανότητα και να σχηματίσουν αποικίες. Εν συντομία, τα κύτταρα συλλέχθηκαν από καλλιέργειες εκθετικής φάσης με θρυψινοποίηση, μετρήθηκαν και σπάρθηκε για σχηματισμό αποικιών. Την επόμενη ημέρα, η ακτινοβολία γάμμα παραδόθηκε χρησιμοποιώντας ένα διπλής πηγής

μονάδα 137Cs σε δόση των 3,2 Gy /min με GC-3000 Elan ακτινοβολίας (MDS Nordion, Ontario, Canada). Μετά από 14 ημέρες, οι αποικίες βάφτηκαν με 0.4% κρυσταλλικό ιώδες (Sigma Chemical Co.). Οι αποικίες μετρήθηκαν και ομάδες & gt? 30 κύτταρα θεωρήθηκαν ως αποικίες. Η απόδοση επιμετάλλωση (ΡΕ) αντιπροσωπεύει το ποσοστό των κυττάρων εμβολιάζονται που αναπτύσσονται σε αποικίες υπό μία συγκεκριμένη συνθήκη καλλιέργειας για μία δεδομένη κυτταρική γραμμή. Το κλάσμα επιβίωσης, που εκφράζεται ως συνάρτηση της ακτινοβολίας, υπολογίστηκε ως ακολούθως: Επιβίωση κλάσμα = αποικίες καταμετρώνται /(κύτταρα σπάρθηκαν × ΡΕ /100). Επαναλάβαμε τα πειράματα πέντε φορές για να εξασφαλίζεται η επαναληπτικότητα.

Η στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα δίνονται ως μέση τιμή ± SD.

t-test

έγινε και

σ

-τιμές μικρότερες του 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

SOCS προφίλ έκφρασης incervical καρκίνο του σε συνδυασμό Μαθητή κύτταρα

Για να αποκαλυφθεί ο πιθανός ρόλος του SOCS σε ανάπτυξη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και του πολλαπλασιασμού, η έκφραση SOCS1, SOCS3 και SOCS5 εξετάστηκε σε διάφορες ανθρώπινες τραχήλου καρκινικές κυτταρικές σειρές, CaSki, HeLa, ME-180, και SiHa. Το επίπεδο του mRNA του SOCS1 (Σχήμα 1Α), SOCS3 (Σχήμα 1Β), και SOCS5 (Σχήμα 1 C) ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε όλες τραχήλου καρκινικά κύτταρα δοκιμάστηκαν σε σχέση με το φυσιολογικό τράχηλο ιστό και καθιερωμένες φυσιολογικό κόλον (CCD-18Co) ή ινοβλαστών πνεύμονος (CCD -18Lu, κυτταρικές σειρές WI-38),

Έκφραση SOCS1 (Α), SOCS3 (Β), και SOCS5 (C) γονίδιο εξετάστηκαν με qRT-PCR σε φυσιολογικό τράχηλο (Ν Cx) ιστού, τρία κανονική κυτταρικές σειρές ινοβλαστών (CCD-18Co, CCD-18Lu, WI-38) και του τραχήλου καρκινικές κυτταρικές γραμμές (CaSki, HeLa, ME-180, SiHa). το επίπεδο έκφρασης των κανονικών δειγμάτων ελέγχου που επισημαίνονται ως open bar και του τραχήλου καρκινικών κυττάρων κλειστό μπαρ. Αστερίσκο (*), στατιστικά σημαντική (

σ

& lt? 0,05)

Η

Για να επιβεβαιωθεί ότι η χαμηλότερη έκφραση του SOCS1, SOCS3, και SOCS5 του τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα είναι ένα γενικό φαινόμενο. παρατηρούνται σε ανθρώπινους όγκους, ανοσοϊστοχημική χρώση των πρωτεϊνών SOCS διεξήχθη σε ανθρώπινο ιστό καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και στον περιβάλλοντα φυσιολογικό ιστό ως έλεγχος (Σχήμα 2). Και οι τρεις πρωτεΐνες SOCS βάφτηκαν πιο σκούρο σε κανονική (Ν) ιστών σε σύγκριση με τον όγκο περιοχής (Τ). Όλα αυτά τα αποτελέσματα οδήγησαν στο συμπέρασμα ότι SOCS1, SOCS3, και SOCS5 ishigher έκφραση σε φυσιολογικό ιστό σε σχέση με τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, και υποστηρίζουν την πιθανότητα ότι μειορύθμιση του SOCS θα μπορούσε να συμβάλει στην ογκογένεση ή τη συντήρηση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.

Έκφραση επίπεδο του SOCS1 (Α), SOCS3 (Β), και SOCS5 (C) σε όγκο (Τ) και γειτονικούς υγιείς (Ν) των επιθηλιακών κυττάρων του αφαιρεθεί χειρουργικά δείγμα ασθενούς συγκρίθηκαν.

Η

DNA μεθυλίωση ανάλυση του SOCS

γονιδίου υποκινητή

για να καθοριστεί εάν το DNA μεθυλίωση συμβάλλει στην αρνητική ρύθμιση των πρωτεϊνών SOCS στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, ένα μεθυλίωση-ειδική PCR (MSP) δοκιμασία διεξήχθη. έκφραση SOCS1 συσχετίστηκε με διαφορική μεθυλίωση του DNA μόνο σε CaSki, HeLa, και ΜΕ-180 κύτταρα (σχήμα 3Α). Ο προαγωγός SOCS1 σε SiHa κυττάρων δεν μεθυλιώθηκε σε αυτήν την περιοχή, αν και SOCS1 μεταγραφή προς τα κάτω σε κύτταρα SiHa σε παρόμοιες levelas άλλα τράχηλο κυτταρικές σειρές. Αντιθέτως, δεν μεθυλίωσης του DNA ανιχνεύθηκε στην περιοχή προαγωγού SOCS3 και SOCS5, τουλάχιστον στην CPG εμπλουτισμένο περιοχή που εξετάστηκαν σε αυτό το πείραμα, όλα τα τραχήλου καρκινικές κυτταρικές σειρές (Σχήμα 3Α).

(Α) Μεθυλ -ειδικές ανάλυση PCR. Κατεργασμένου με όξινο θειώδες γονιδιωματικό DNA ενισχύθηκε με μη μεθυλιωμένο (U) ή μεθυλιωμένα ειδικούς εκκινητές (Μ) DNA. (Β-D) Bisulfite αλληλούχιση του SOCS1 (Β), SOCS3 (C), και SOCS5 (D). Μη μεθυλιωμένα ιστοσελίδα CpG στην περιοχή του υποκινητή ενισχυμένο έγινε έδειξε ως ένα ανοιχτό κύκλο και μεθυλιωμένα CpG ως ένα κλειστό κύκλο.

Η

Για να επιβεβαιωθεί το αποτέλεσμα MSP, τις περιοχές υποκινητή της SOCS1, SOCS3, και τα γονίδια SOCS5 περιλαμβάνει νησίδες CpG κλωνοποιήθηκαν και πέντε ανεξάρτητοι κλώνοι αναλύθηκαν κατά την αλληλουχία (Σχήμα 3Β-3ϋ). Τα μη μεθυλιωμένα CpG θέσεις που υποδεικνύεται από ένα ανοιχτό κύκλο και είναι μεθυλιωμένα CpG θέσεις υποδεικνύεται από ένα γεμάτο κύκλο. Μεθυλίωσης του DNA ανιχνεύθηκε στο γονίδιο υποκινητή SOCS1 σε CaSki, HeLa και κύτταρα ΜΕ-180 αλλά όχι σε SiHa (Σχήμα 3Β), που ταιριάζουν το αποτέλεσμα MSP (σχήμα 3Α). Σε CaSki και HeLa, το μεθυλιωμένο περιοχή του SOCS1 σχεδόν ισούται με το μη μεθυλιωμένη περιοχή, ενώ στο ΜΕ-180 κύτταρα τα περισσότερα από περιοχή προαγωγού μεθυλιώθηκε. sites μεθυλιωμένα CpG δεν ανιχνεύθηκαν στους υποστηρικτές SOCS3 και SOCS5 σε φυσιολογικά κύτταρα του τραχήλου της μήτρας καρκίνου cellsor (Σχήμα 3C και 3D), που συμπίπτει με το πείραμα MSP (σχήμα 3Α).

Η αναστολή της DNA υπερμεθυλίωσης αποκαθιστά την έκφραση SOCS1

για να καθοριστεί εάν DNA μεθυλίωση του υποκινητή SOCS1 συμβάλλει στην αρνητική ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης SOCS1

in vivo

, η θεραπεία με 5-AzaC χρησιμοποιήθηκε για να αναστείλει DNMT1 (Σχήμα 4). Στο CaSki (Σχήμα 4Α) και HeLa (Εικόνα 4Β), SOCS1expression ήταν εμφανώς αυξήθηκε μετά από αγωγή 5-AzaC. έκφραση SOCS1 σε ΜΕ-180 ήταν ελαφρώς αυξημένη από θεραπεία με τον αναστολέα DNMT1 (Σχήμα 4C), πιθανώς λόγω υψηλότερου: τη μεθυλίωση του γονιδίου υποκινητή SOCS1 σε ME-180 κύτταρα (σχήμα 3Α και 3Β) από ό, τι στις άλλες κυτταρικές σειρές. έκφραση SOCS3 και SOCS5 δεν επηρεάστηκε από τη θεραπεία 5-AzaC, υποστηρίζοντας ότι η μεθυλίωση του DNA δεν εμπλέκεται στην αρνητική ρύθμιση της SOCS3 και SOCS5 το προηγούμενο αποτέλεσμα (Σχήμα 3). Το αποτέλεσμα αυτό επιβεβαιώθηκε από shRNA μεσολάβηση νοκ-downof DNMT1 (Σχήμα 4D-4F). Παρεμβολή RNA (RNAi) είναι η οδός με την οποία σύντομης παρεμβολής RNA (siRNA) ή μικρή RNA φουρκέτας (shRNA) χρησιμοποιούνται για την απενεργοποίηση της έκφρασης των γονιδίων στόχων [14]. έκφραση SOCS1 αυξήθηκε κατά αναστολή της DNMT1 ενώ η έκφραση SOCS3 και SOCS5 αυξηθεί λίγο. Αυτά τα ευρήματα, μαζί με MSP και διθειώδες αποτελέσματα αλληλούχισης, υποδηλώνουν μια πιθανότητα ότι ρυθμιστικούς μηχανισμούς πλην hypermethylationare σημαντική για τον έλεγχο της έκφρασης SOCS.

CaSki (A, D), HeLa (Β, Ε), και ΜΕ-180 (C, F) κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 10 μΜ 5-αζακυτοσίνη (5-Αζα) για 72 h (AC) ή μολύνθηκαν με φακοϊό ελέγχου (shSCR) ή φακοϊού που εκφράζουν shRNA DNMT1 στόχευσης (shDNMT1) (DF). Νοκ-κάτω της DNMT1 και γονιδιακής έκφρασης SOCS εξετάστηκε με qRT-PCR. Αστερίσκο (*), στατιστικά σημαντική (

σ

& lt? 0,05)

Η

Η ακετυλίωση των ιστονών ρυθμίζει SOCS1 και SOCS3 γονιδιακής έκφρασης

απακετυλίωση ιστόνης είναι ένα πολύ γνωστό. επιγενετικές μηχανισμό ρύθμισης που ελέγχονται για τη σύνδεση με την αρνητική ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης SOCS. Θεραπεία της τριχοστατίνη Α (TSA), ενός εκλεκτικού αναστολέα της II αποακετυλάσης ιστόνης θηλαστικών (HDAC) οικογένειες ενζύμων κατηγορίας Ι και, αυξημένη γονιδιακή έκφραση SOCS1 σε CaSki, HeLa, και SiHa αλλά όχι ΜΕ-180 κύτταρα (Σχήμα 5Α). γονιδιακή έκφραση SOCS3 ανακτήθηκε επίσης σε κύτταρα CaSki και SiHa μετά την κατεργασία TSA (σχήμα 5Β). Ωστόσο, η έκφραση αυτών των γονιδίων δεν επηρεάστηκε από την TSA σε WI-38, ένα κανονικό πνεύμονα ελέγχου κυτταρική σειρά ινοβλαστών. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι SOCS1 και SOCS3 είναι προς τα κάτω ρυθμισμένη με HDAC σε διάφορα καρκινικά κύτταρα του τραχήλου της μήτρας. Αυτή είναι η πρώτη αναφορά ότι η έκφραση SOCS επηρεάζεται όχι μόνο από υπερμεθυλίωση αλλά και απακετυλίωση ιστόνης σε στερεά καρκινικά κύτταρα. Αντιθέτως, η έκφραση του γονιδίου SOCS5 δεν άλλαξε καθόλου με αναστολή HDAC σε WI-38 ή σε οποιοδήποτε από τα τραχήλου της μήτρας καρκινικών κυττάρων που εξετάστηκαν (Σχήμα 5C). Απαιτείται περαιτέρω μελέτη για να χαρακτηριστούν οι μηχανισμοί καταστολής έκφρασης γονιδίου SOCS στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Τα φυσιολογικά κύτταρα ινοβλαστών πνεύμονος (WI-38) και του τραχήλου καρκινικά κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0, 100, ή 200 ηΜ TSA για 16 ώρες και SOCS1 (Α), SOCS3 (Β), και γονιδιακή έκφραση SOCS5 (C) μετρήθηκε με qRT-PCR. Αστερίσκο (*), στατιστικά σημαντική (

σ

& lt? 0,05).

Η

Η υπερέκφραση του SOCS1 ή SOCS3 αποκτήσει ραδιοαντοχή σε κύτταρα HeLa

Για να εξετάσει τις βιολογικές επιδράσεις αυξημένης έκφρασης γονιδίου SOCS στην τραχηλική καρκινικά κύτταρα, κύτταρα HeLa αρκετές καθορίστηκαν με μόλυνση με ρετροϊούς που υπερεκφράζουν το γονίδιο SOCS. Η έκφραση του εξωγενούς γονιδίου SOCS σε νεομυκίνη ανθεκτικά κύτταρα HeLa επιβεβαιώθηκε με κηλίδωση Western (Σχήμα 6Α). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ή βιωσιμότητα μεταξύ ψευδο ή SOCS υπερεκφράζουν κύτταρα HeLa (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Όπως έχουν εμπλακεί SOCS1 και SOCS3 σε απόκριση σε ακτινοβολία σε γλοιοβλάστωμα [11], κλωνογόνων δοκιμασίες διεξήχθησαν για να αξιολογηθεί η πιθανή συμβολή της γονιδιακής έκφρασης SOCS να radioresponsivity. Όπως φαίνεται στο σχήμα 6, η υπερέκφραση του SOCS1 ή SOCS3 κάνει τα κύτταρα HeLa περισσότερο ανθεκτικά στην ακτινοβολία από τα κύτταρα ελέγχου (Εικόνα 6Β). Ωστόσο, η ραδιοευαισθησία των κυττάρων HeLa που υπερεκφράζουν SOCS5 δεν άλλαξε.

SOCS1, SOCS3, ή SOCS5 υπερεκφράζουν κύτταρα HeLa καθιερώθηκαν χρησιμοποιώντας pLNCX2 ρετροϊικό φορέα και υπερέκφραση επιβεβαιώθηκε με ανάλυση western blot (Α). Ένα κλωνογόνο δοκιμασία εκτελέστηκε μετά την έκθεση στην ενδεικνυόμενη δόση ακτινοβολίας σε κύτταρα SOCS υπερεκφράζουν (Β). Οι τιμές είναι μέσοι ± τυπική απόκλιση γιά τριπλά αντίγραφα φρεατίων για κάθε σημείο δόσης. Αστερίσκο (*), στατιστικά σημαντική (

σ

& lt? 0,05)

Η

Συζήτηση

SOCS είναι μια μεγάλη υπερ-οικογένεια των πρωτεϊνών που γενικά θεωρείται ως ανταγωνιστές της κυτοκίνης επαγόμενη Janus-ενεργοποιημένη σηματοδότηση κινάσης-STAT. Ωστόσο, SOCS εμπλέκεται στη ρύθμιση των πρόσθετων οδών σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένου φωσφατιδυλινοσιτόλη 3-κινάση και ERK ΜΑΡΚ [15]. Μελέτες σχετικά με SOCS και καρκίνο του τραχήλου είναι λίγες σε αριθμό. SOCS1may παίζουν ένα ρόλο στη ρύθμιση των επιπέδων της πρωτεΐνης Ε7 του ιού του ανθρώπινου θηλώματος, και που επηρεάζουν τη μετατροπή του δυναμικού τους [16]. Παρατήρησαν θεραπεία ΙΡΝ-γ σε HeLa και κυτταρικές σειρές CaSki είχε ως αποτέλεσμα τη μείωση του Ε7 πρωτεΐνης. Kamio et al. έδειξε υπερέκφραση SOCS1 μειωμένου συντελεστή πολλαπλασιασμού στις δύο κυτταρικές σειρές HeLa και CaSki. Επιβεβαίωσαν επίσης SOCS1 κατέστειλε τη σύνθεση του DNA με την παρατήρηση μειωμένη ενσωμάτωση BrdU [16]. Ωστόσο, στην πλευρά της ανοσολογικής απόκρισης, SOCS1 σίγηση ενισχυμένη τα επίπεδα έκφρασης των προφλεγμονωδών κυτοκινών όπως ιντερλευκίνες, TNF-α, ΙΡΝ-γ οδηγεί σε βελτιωμένη παρουσίαση αντιγόνου των δενδριτικών κυττάρων [17]. Ως εκ τούτου, σας προτείνουμε το καθαρό αποτέλεσμα της καταστολής SOCS1 πηγαίνει δυσμενής για τους οικοδεσπότες. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν επίσης την πιθανότητα ότι SOCS πρωτεΐνες λειτουργούν ως καταστολείς των όγκων. SOCS1, SOCS3, και η έκφραση ήταν χαμηλότερη SOCS5 σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας από τα περιβάλλοντα φυσιολογικό ιστό (Εικόνα 2), και τα επίπεδα του mRNA των γονιδίων SOCS ήταν χαμηλότερες σε καρκίνο του τραχήλου κυτταρικές γραμμές από ό, τι στην κανονική τράχηλο ιστό ή κυτταρικές σειρές ινοβλαστών (Σχήμα 1). Έχει προηγουμένως αναφερθεί ότι σημαντική καταστολή της μεταγραφής των γονιδίων SOCS προέκυψε από το DNA υπερμεθυλίωση στην περιοχή προαγωγού [6,7,9]. Ένας μακρύς κατάλογος υπερμεθυλιωμένων γονιδίων είναι ένα κοινό γνώρισμα όλων των τύπων καρκίνου στον άνθρωπο. Αν και πολλά ογκοκατασταλτικά γονίδια σιγήσει DNA μεθυλίωση κατά την διάρκεια της καρκινογένεσης, προς τα κάτω ρύθμιση SOCS3 και SOCS5 δεν εξαρτιόταν από το DNA υπερμεθυλίωση (Σχήματα 3 και 4). Ένας άλλος επιγενετικές γονίδιο μηχανισμός, ιστόνης υποακετυλίωση, φίμωση μεσολαβεί SOCS1 μειορύθμιση σε CaSki, HeLa, και τα κύτταρα SiHa και SOCS3downregulation σε CaSki και SiHa κύτταρα (Σχήμα 5). γονιδιακή έκφραση SOCS5 δεν άλλαξε καθόλου από την αναστολή της μεθυλίωσης του DNA ή ακετυλίωση ιστονών. Όπως γονιδιακή σίγηση συχνά περιλαμβάνει έναν συνδυασμό μεθυλίωσης του DNA και χρωματίνης ακετυλίωση ιστονών, εξετάσαμε επίσης την επίδραση του συνδυασμού 5-Αζα και TSA στην έκφραση SOCS1 σε ME-180 κυττάρων. Ωστόσο, καμία σημαντική αύξηση στην έκφραση SOCS1 παρατηρήθηκε (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Επιγενετική ρύθμιση των γονιδίων SOCS σε καρκίνο του τραχήλου κύτταρα συνοψίζεται στον Πίνακα S3. Αξίζει να θυμηθούμε ότι αναλύσαμε επιγενετικής γονιδιακής ρύθμισης SOCS μόνο σε τέσσερις ιδρύθηκε τραχήλου καρκινικές κυτταρικές σειρές και απαιτείται περαιτέρω επιβεβαίωση αν ο μηχανισμός αυτός κανονισμός ισχύει για την πρωτογενή καρκίνος του τραχήλου.

Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η αλλοιωμένη έκφραση της SOCS1or SOCS3 επηρέασε την απόκριση ακτινοβολία του τραχήλου της μήτρας καρκινικών κυττάρων. Η υπερέκφραση του SOCS1 και SOCS3 βελτιωμένη κυτταρική επιβίωση μετά από ιονίζουσα ακτινοβολία (Σχήμα 6). SOCS1 είναι ένας σημαντικός ενεργοποιητής της ρ53 και της απόκρισης βλάβη του DNA [18]. Επειδή SOCS1 απαιτεί το πλαίσιο SOCS να σχηματίσει ένα σύμπλοκο με ΑΤΜ, v-Abl- ή φωσφορυλίωση κινάση Pim θα μπορούσε δυνητικά να επηρεάσει αυτήν την ενεργοποίηση αλληλεπίδραση και μπλοκ ρ53. Ως εκ τούτου, φαίνεται ότι παρεκκλίνουσα φωσφορυλίωση από ογκογόνους κινάσες θα μπορούσε να παρεμποδίζει τις δραστηριότητες καταστολέα όγκου των SOCS1 με τουλάχιστον δύο διαφορετικούς μηχανισμούς: (1) φωσφορυλιωμένου SOCS1 δεν θα ήταν σε θέση να αναστέλλουν την οδό JAK /STAT και να αλληλεπιδρούν με ΑΤΜ και την προώθηση p53 ενεργοποίηση [18]. (2) SOCS3improves κυττάρων survivalin γλοιοβλάστωμα [11], αλλά ενήργησε σαν χημειοευαισθητοποιητή στον αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς [19]. Κερατινοκυττάρων-ειδική υπερέκφραση του SOCS3 οδήγησε σε ατροφήσει επιθήλια πληγή περιθώριο και επαυξημένης την φλεγμονώδη απόκριση των κερατινοκυττάρων τραυμάτων από την αύξηση της χημειοκίνης (ΜΙΡ-2) και των φλεγμονωδών ενζύμων (COX-2 και iNOS) έκφραση [20]. COX-2 συμβάλλει στη μετάσταση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας με την προώθηση αυτοκρινή ή παρακρινή έκφραση VEGF τόσο σε πρωτογενή και μεταστατικές θέσεις [21]. Κατά συνέπεια, είναι λογικό να υποθέσουμε ότι SOCS3 γενικά δρα ως παράγοντας επιβίωσης των κυττάρων, με εξαίρεση αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς. Ωστόσο, SOCS1 ενήργησε σαν ραδιοευαισθητοποιητής σε κύτταρα γλοιοβλαστώματος [11]. Είναι διέκοψε τη μετατροπή της κανονικής του τραχήλου της μήτρας επιθηλίων σε νεοπλασματικά κύτταρα μέσω ενός Ε7 πρωτεΐνη, όπως ένα ογκοκατασταλτικό. Από την άλλη πλευρά, SOCS1 ανέστειλε την απόπτωση των μοσχευμάτων νησίδας λόγω κασπάσης 3 και οδούς παράγοντας που επάγει την απόπτωση σε πάγκρεας αρουραίων [22], που δείχνει ότι, σε συμφωνία με τα δεδομένα μας, προάγει την επιβίωση των κυττάρων.

Άγρια -τύπου του τραχήλου της μήτρας κυτταρικές σειρές καρκίνου έδειξαν καταπιεσμένη έκφραση SOCS1, SOCS3 και SOCS5. Τόσο μεθυλίωσης του DNA και απακετυλίωση ιστόνης μπορεί να συνεισφέρει στην αρνητική ρύθμιση του SOCS 1, 3, 5, γονίδια σε τραχήλου καρκινικά κύτταρα. Ανάκτηση της γονιδιακής έκφρασης SOCS1 και SOCS3 μείωσε το ακτινοευαισθησία των κυττάρων HeLa. Φαίνεται απίθανο ότι η λειτουργία των SOCS1 και SOCS3 σε συμπαγείς όγκους δρουν ομοιόμορφα προς μία κατεύθυνση

in vivo

.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1. Primer κατάλογο και την κατάσταση της PCR για τον ΘΧΣ

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123133.s001

(DOCX)

S2 πίνακα. Primer λίστα που χρησιμοποιείται για θειώδους αλληλουχίας

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123133.s002

(DOCX)

S3 πίνακα. Περίληψη της επιγενετικής ρύθμισης των γονιδίων SOCS του τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123133.s003

(DOCX)