Αφηρημένο

Η αναποτελεσματικότητα της δημιουργίας πολυδύναμα σωματικά κύτταρα (iPS) προκάλεσε δύο υποστηρίζοντας μοντέλα, δηλαδή το στοχαστικό μοντέλο και το μοντέλο Elite. Παρά το γεγονός ότι η πρώτη είναι πιο ευνοϊκό για να εξηγήσει τις εγγενείς αδυναμίες, μπορεί να σφάλλουν, να προεκτείνουν το ίδιο μοντέλο εργασίας σε επαναπρογραμματισμό των καρκινικών κυττάρων. Πράγματι, τα κύτταρα του όγκου είναι γνωστό ότι είναι εγγενώς ετερογενής σε σχέση με διακριτικά χαρακτηριστικά παρέχοντας έτσι μια κατάλληλη πλατφόρμα για να ελεγχθεί αν η διαδικασία επαναπρογραμματισμού των καρκινικών κυττάρων πολώνεται. Εδώ, αναφέρουμε τις παρατηρήσεις μας ότι όλα τα τυχαία διάλεξε που προκαλείται από τον καρκίνο πολυδύναμα κύτταρα (IPCS) που δημιουργήθηκε προηγουμένως δεν έχουν μεταλλάξεις είναι γνωστό στο γονικό πληθυσμό. Αυτό το απρόβλεπτο παρατήρηση είναι πιο φειδωλά εξηγείται από το Elite μοντέλο, σύμφωνα με την οποία επιλέχθηκαν υποθετικό νωρίς απογόνων του όγκου κατά τη διάρκεια της επαγωγής για να πλειοδυναμία

Παράθεση:. Lai J, Κονγκ CM, Mahalingam D, Xie Χ, Wang Χ (2013) Elite μοντέλο για την δημιουργία κυττάρων πολυδύναμα Καρκίνο (IPCS). PLoS ONE 8 (2): e56702. doi: 10.1371 /journal.pone.0056702

Επιμέλεια: Rajasingh Johnson, Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 Σεπ 2012? Αποδεκτές: 14η Ιανουαρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 13 Φεβρουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Lai et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Υπουργείο εκπαίδευση Ακαδημαϊκό Ταμείο Έρευνας Tier 1 επιχορηγήσεις, R-183-000-259-112 και R-183-000-295-112. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Induced καρκινικά κύτταρα Πολυδύναμα (IPCS)

η επαγωγή των καρκινικών κυττάρων να πλειοδυναμία (IPCS) έχει επιτευχθεί με επιτυχία σε διάφορα καρκινικά κύτταρα και έδειξε ελπιδοφόρα αποτελέσματα των ελαφρυντικών ογκογενετικότητας τους [1] – [5 ]. Ωστόσο, δεδομένου ότι κάθε εγκατεστημένος αποικία των καρκινικών κυττάρων πολυδύναμα υποτίθεται ότι είναι κλωνική από ένα μόνο γονικού καρκινικού κυττάρου, και ότι η γονική πληθυσμός καρκινικών κυττάρων είναι πιθανό ετερογενής, θα είναι από οδυνηρή ενδιαφέρον να κατανοήσουμε εάν η διαδικασία πυρηνικής επαναπρογραμματισμού πολώνεται. Αν και Γιαμανάκα (2009) πρότεινε ότι η παραγωγή επαγόμενων πολυδύναμων βλαστοκυττάρων (iPS) δεν είναι μια μεροληπτική διαδικασία (στοχαστικό μοντέλο) [6], είναι πράγματι fallible να προεκτείνουν αυτό το μοντέλο στην παραγωγή των ΑΣΠ, δεδομένης της ετερογένειας των καρκινικών κυττάρων .

ενδονεοπλασματική ετερογένεια

Ατομικά όγκοι έχουν συνήθως έχουν παρατηρηθεί να είναι μορφολογικά και καρυοτυπικά ετερογενής [7] – [12], περιστασιακά αποκρύπτοντας ιστοπαθολόγους σε ακριβή καθορισμό του βαθμού του όγκου για την κλινική διάγνωση. Επιπλέον, ένα κλασικό πείραμα υποκλώνωση διεξάγεται από Fidler, Ι.Ι. και Κρίπκι, Μ.Ι. υπό την προϋπόθεση πειστικές αποδείξεις ότι υπάρχει ανομοιογένεια εντός ενός όγκου σε σχέση με την μεταστατική ικανότητα [13]. Επιπλέον, η επιθετική εξέλιξη της αλληλουχίας επόμενης γενιάς (NGS) έχει ήδη μπαίνει στη δυνατότητα της ενιαίας αλληλουχίας πυρήνα, η οποία πρότεινε ένα Διακοπτόμενης μοντέλο για την εξέλιξη του όγκου [14].

Για να ελέγξετε αν το μοντέλο Στοχαστικές κατέχει στην επαναπρογραμματισμό των κυττάρων, ένα διακριτό ετερογενή πληθυσμό θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν για να παρατηρήσει αν κάποια υποπληθυσμό είναι υπερεκπροσωπούνται σε επαναπρογραμματιστούν αποικίες. Πράγματι, η προϋπόθεση αυτή πληρούται από τα καρκινικά κύτταρα, η οποία παρουσιάζει μια ενδιαφέρουσα πειραματική διάταξη. Hochedlinger

et al.

(2004) παρατήρησαν ότι οι ποντικοί επαναπρογραμματιστούν κύτταρα μελανώματος μοιράζονται ένα ομοιογενές διαμόρφωση καρυότυπο, σε αντίθεση με τη γονική κυτταρικό πληθυσμό του ότι είναι ετερογενής [15]. Πράγματι, αν το μοντέλο Στοχαστικές κατέχει, ο καρυότυπος του επαναπρογραμματιστούν πληθυσμού μελάνωμα θα πρέπει να είναι ετερογενείς μεταξύ των κλώνων. Ωστόσο, μια κρίσιμη παράμετρος για να τεκμηριώσει πλήρως την απόρριψη του στοχαστικού μοντέλου πρέπει να προσδιοριστεί: το ποσοστό των γονικών κυττάρων που έχουν την ίδια διαμόρφωση καρυότυπο όπως τα επαναπρογραμματιστούν κύτταρα. Εάν αυτή η αναλογία είναι μεγάλη στην προηγούμενη, στατιστικώς, υπάρχει μικρή βάση για την απόρριψη της στοχαστικό μοντέλο σε αυτή την περίπτωση. Ωστόσο, αν το ποσοστό είναι αρκετά μικρό, είναι πράγματι αντιληπτή να απορρίψει το στοχαστικό μοντέλο

Εδώ, αναφέρουμε παρόμοιες παρατηρήσεις σχετικά με τον επαναπρογραμματισμό των δύο μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων (NSCLC) -. Η358 και Η460 . Ο πρώην αναφέρθηκε για να είναι

TP53

ομόζυγη διαγραφή [16], η τελευταία μεταφέρει ομόζυγη διαγράφεται

CDKN2A

[17] και των μεταλλαγμένων

CDKN2B

(αδημοσίευτα δεδομένα). Αρκετά αναπάντεχα, παρατηρήσαμε ότι οι IPC που παράγεται από αυτά τα καρκινικά κύτταρα, δηλαδή, iPCH358 και iPCH460, λιμάνι πλέον καμία από τις γνωστές διαγραφών ή μεταλλάξεων. Επιπλέον,

TP53

παρατηρείται σε iPCH358 και

CDKN2A, CDKN2B

σε iPCH460 παρατηρήθηκαν να είναι άγριου τύπου. Επιπλέον, η προαναφερθείσα κρίσιμη παράμετρος προσδιορίζεται και προτείνει την απόρριψη του μοντέλου Stochastic? πειραματικά αποτελέσματα μας δείχνουν ότι επαναπρογραμματισμός των καρκινικών κυττάρων ακολουθεί το Elite μοντέλο το οποίο έχει επιλέξει μια διακριτή υποπληθυσμό κυττάρων από έναν ετερογενή πληθυσμό γονικού καρκινικού κυττάρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταρικές γραμμές και καλλιέργεια

οι κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη είναι ανθρώπινες IMR90 εμβρυϊκό πνεύμονα ινοβλάστες (ATCC αρ. CCL-186), HeLa (ATCC αρ. CCL-2), αδενοκαρκίνωμα NCI-Η358 (ATCC αρ. CRL-5807), μεγάλο κύτταρο καρκίνωμα NCI-Η460 (ATCC ηο. ΗΤΒ-177), καθώς και της ανθρώπινης Η1 εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων (WiCell αρ. WA01). ΝΟΙ-Η460 που λαμβάνεται από το εργαστήριο του Δρ Koeffler ήταν επίσης αγοράστηκε από την ATCC. Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε υγροποιημένο επωαστή διατηρείται στο 5% CO

2 και 37 ° C καλλιεργήθηκε σε ATCC συνιστώμενα μέσα συμπληρωμένα με 10% FBS. Η παραγωγή IPCs περιγράφηκε προηγουμένως [18]. Εν συντομία, IPCS ιδρύθηκαν μέσω πρωτοκόλλου Γιαμανάκα με ελαφρά τροποποίηση [19]. Lentivirus και ρετροϊού παράχθηκαν με επιμόλυνση κυττάρων 293Τ και κύτταρα Plat-Ε, αντίστοιχα. Πριν από την μολύνοντας Η358 και Η460 κυττάρων, ιών διηθούνται μέσω ενός φίλτρου οξικής κυτταρίνης 0,45 μm μεγέθους πόρων επιφανειοδραστικού χωρίς (Sartorius). IPCS και hESC καλλιεργήθηκαν επί ακτινοβολημένων ποντίκι εμβρυϊκών ινοβλαστών (iMEFs) λούζονται σε DMEM /F12 (Invitrogen) συμπληρωμένο με 20% αντικατάσταση Knockout ορού (Invitrogen), 1 mM Ε-γλουταμίνη (Invitrogen), 100 μΜ μη βασικά αμινοξέα, 100 μΜ β μερκαπτοαιθανόλη (Sigma-Aldrich) και 4 ng /μL βασικός αυξητικός παράγοντας ινοβλαστών (bFGF) (Invitrogen). Πριν από τη διεξαγωγή πειραμάτων επί IPCS και hESC, τα κύτταρα σπάρθηκαν επί Matrigel (BD Bioscience) και διατηρήθηκαν σε mTeS®1 (StemCell Technologies).

RNA /DNA απομόνωση και αντίστροφη μεταγραφή PCR (RT-PCR)

το ολικό RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας RNeasy Mini Kit (Qiagen) και αντίστροφη μεταγραφή χρησιμοποιώντας ανάστροφη μεταγραφάση Enzyme (Promega), καθώς και ολίγο dT εκκινητές (Promega), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό DNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας DNeasy Blood Προτείνουμε ότι η αναλογία του υποπληθυσμού «μετάλλαξη χωρίς» είναι πολύ μικρή για να παράσχει επαρκή μήτρα για PCR ενισχύσεις για να δώσουν τα προϊόντα επαρκεί για ανίχνευση βρωμιούχο αιθίδιο. Πράγματι, δείξαμε αυτό στην αραίωση του IMR90 γονιδιακού DNA τουλάχιστον 5000 φορές θα καλύψει τον εντοπισμό των

CDKN2B

αμπλικόνιο. Με βάση την ανάλυση αυτή, υπολογίσαμε ότι υπάρχει το πολύ ένα «μετάλλαξη-free» των κυττάρων για κάθε 5000 Η358 ή Η460 κύτταρα. Ως εκ τούτου, για να επιτευχθούν οι IPC που προέρχονται από αυτό το άπιαστο «μετάλλαξη-free ‘υποπληθυσμός είναι εξαιρετικά απίθανο, αν η διαδικασία επαναπρογραμματισμού είναι στοχαστική. Ως εκ τούτου, προτείνουμε ότι επαναπρογραμματισμό των καρκινικών κυττάρων ακολουθεί το Elite μοντέλο.

απογόνων όγκων σε πρώιμο στάδιο μπορεί να καθορίζει αρμοδιότητα προς επαναπρογραμματισμό

Δεδομένου ότι η διαδικασία επαναπρογραμματισμού διακρίσεις έναν ετερογενή πληθυσμό καρκινικών κυττάρων, προσπαθήσαμε να οριοθετηθούν η υποκείμενα χαρακτηριστικά των καρκινικών κυττάρων που καθορίζει ικανότητας προς επαναπρογραμματισμό. Προηγούμενες μελέτες έχουν επισημάνει ότι οι παράγοντες επαναπρογραμματισμού ενεργοποιούν αρκετές γήρανση και τους μηχανισμούς του όγκου-κατασταλτικό (δηλαδή

TP53

και

CDKN2A

) που δρουν ως εμπόδια προς επαναπρογραμματισμό [25] – [27]. Παραδόξως, παρά σωματική γονιδιακή διαγραφές από αυτά τα εμπόδια στην πλειονότητα των κυττάρων Η358 και Η460, κανένα από τα τυχαία επιλεγμένα αποικίες ήταν μηδενική για αυτά τα γονίδια. Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι ογκογόνο δυναμικό (που προσδιορίζεται από ποντίκια SCID τον εμβολιασμό) μιμείται ασθενώς ο εμπλουτισμός με τη διαδικασία επαναπρογραμματισμού. Από την άλλη πλευρά, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι τα παράγωγα αυτών των ΑΣΠ είναι υποθετικό νωρίς απογόνων του πληθυσμού όγκου.

Ratchet Muller δηλώνει ότι οι μεταλλάξεις σε οργανισμούς που αναπαράγονται αγενώς είναι μη αναστρέψιμη και συσσωρεύεται την πάροδο των γενεών [28]. Ομοίως, τα καρκινικά κύτταρα «αναπαράγουν» μέσω της μίτωσης και της γενετικής βλάβες είναι μη αναστρέψιμες και συσσωρεύονται πάνω από πολλαπλούς κύκλους των κυττάρων. Με άλλα λόγια, αυτό σημαίνει ότι τα παράγωγα του iPCH358 και iPCH460 είναι κύτταρα από τα προηγούμενα στάδια της ογκογένεσης. Επιπλέον, δεδομένου ότι τα μεταλλαγμένα γονίδια εν λόγω (

TP53

,

CDKN2A

και

CDKN2B

) είναι σημαντική για την ακεραιότητα του γονιδιώματος, είναι πιθανό ότι αυτά τα «μετάλλαξη κύτταρα -δωρεάν »έχουν χαμηλότερο βαθμό από προσβολές γενετικό επίπεδο. Παραδόξως, όμως, αυτά τα κύτταρα είναι ανευπλοειδικών και να εμφανίσει την ευρύτερη διάδοση της μετράει χρωμόσωμα από τη γονική τους κύτταρα (Εικόνα S2), εύλογα επιβεβαιώνουν τη θεωρία ότι ανευπλοειδισμών προωθεί γενωμική αστάθεια [29]. Συμφωνώ με αυτή τη θεωρία, Navin και οι συνεργάτες παρομοίως παρατηρηθεί ότι το αντίγραφο αριθμός ενίσχυση των

KRAS

, ένα σημαντικό ογκογονίδιο, είναι μοναδική για ανευπλοειδικών πληθυσμού όγκου [14]. Ως εκ τούτου, προτείνουμε μια κατευθυντήρια υπόθεση ότι επαναπρογραμματισμό επιλέγει τα καρκινικά κύτταρα από τις προηγούμενες απογόνων της ογκογένεσης, όπου προσβολές γενετικό επίπεδο είναι χαμηλό, αλλά κατάφωρα ανευπλοειδικών (Σχήμα 5). Πράγματι, η γενετική ακεραιότητα διατηρείται από

TP53

και

CDKN2A

, μεταξύ άλλων, μπορεί να είναι απαραίτητη προκειμένου να διατηρηθεί η αυστηρά ρυθμιζόμενη κύκλωμα πλειοδυναμία για να εξασφαλιστεί η επιτυχία επαναπρογραμματισμό [30] – [32]. Εκτός από εξηγώντας γιατί ΑΣΠ παράγεται από Η358 και Η460 δεν ήταν

TP53

άκυρη και

CDKN2A

null, αντίστοιχα, αυτό μπορεί να απαντήσει σε μια ενδιαφέρουσα ερώτηση που έθεσε ο Zhang και οι συνεργάτες του ως προς το πώς ένα επαναπρογραμματιστούν σάρκωμα με πολλαπλές βλάβες γενετικό επίπεδο θα μπορούσε ακόμα να επιτευχθεί πλειοδυναμία [5]. Μελλοντικά πειράματα όπως Flow-FISH (κυτταρομετρία ροής φθορισμού

in situ υβριδισμού

) για να λύσουμε το υποπληθυσμό «μετάλλαξη-free», ακολουθούμενο από ενιαίο αλληλουχίας πυρήνα θα παρέχει στοιχεία που να επιβεβαιώνουν ή να διαψεύσει αυτή την υπόθεση. . Επιπλέον, περαιτέρω μελέτες σχετικά με το γονιδίωμα του εκφυτεύματος όγκου H358-2 θα είναι ενδιαφέρον για την αντιμετώπιση αυτής της υπόθεσης

Από τα στοιχεία μας, παρατηρήσαμε ότι τα παράγωγα του ΑΣΠ μας: 1) δεν είχε κλειδί γενετική μετάλλαξη (s) ? 2) ανευπλοειδικών? 3) ανήλικος υποπληθυσμό. Δεδομένων αυτών των παρατηρούμενων χαρακτηριστικών, είναι ασφαλές να υποθέσουμε ότι τα παράγωγα αυτά ήταν από τους πρώτους απογόνους του πληθυσμού όγκου (που εκπροσωπούνται στο πράσινο). Έτσι, ανευπλοειδία είναι πιθανότατα το πρώτο που αποκτήθηκαν πριν από την κρίσιμη μεταλλάξεις να οδηγήσετε περαιτέρω συμφέρουσα μεταλλάξεις (οριοθετημένες με γκρι χρώμα), σύμφωνα με την παρατήρηση από Navin et al (2011). Σε συνδυασμό με την προϋπόθεση ότι το ρυθμιστικό κύκλωμα πλειοδυναμία ρυθμίζεται αυστηρά και πολύπλοκη, λιγότερο προσβολές γενετικό επίπεδο στα κύτταρα (κύκλοι λείπει το κόκκινο «Χ») θα διασφαλίσει την ακεραιότητα του κυκλώματος και από εκεί την επιτυχή εγκατάσταση του ΔΕΚ (που εκπροσωπούνται στο μωβ) που μπορεί να να διαφοροποιηθούν σε πολλαπλές καταγωγές (εκπροσωπούνται σε μπλε χρώμα).

Η

Τελικές παρατηρήσεις

σε αυτή τη μελέτη, έχουμε χρησιμοποιηθούν κυτταρικές σειρές καρκίνου που είναι εγγενώς ετερογενή, δίνοντάς μας τη δυνατότητα να παρατηρήσουμε τα οποία μεταβλητή ( α) τις προκαταλήψεις για την επιτυχή δημιουργία του ΑΣΠ. Πράγματι, οι παρατηρήσεις μας που επιλέχθηκαν οι υποπληθυσμοί «μετάλλαξη-δωρεάν» ενάντια στην πλειοψηφία δείχνουν ότι επαναπρογραμματισμό των καρκινικών κυττάρων ακολουθεί το μοντέλο Elite. Το συμπέρασμα αυτό δεν παραποιούν την προηγούμενη πρόταση ότι η γενιά των iPS ακολουθεί το στοχαστικό μοντέλο, λόγω ότι τα φυσιολογικά σωματικά κύτταρα και τα καρκινικά κύτταρα είναι διαφορετικά. Επιπλέον, τα δεδομένα μας οδηγεί σε μια κατευθυντήρια υπόθεση ότι επιλέχθηκαν υποθετικό νωρίς απόγονοι του πληθυσμού του όγκου κατά τη διάρκεια της διαδικασίας επαναπρογραμματισμού. Μελλοντικές διαλεύκανση των συνδεδεμένων χαρακτηριστικών στο υποπληθυσμό «μετάλλαξη-free ‘προτείνεται από τα δεδομένα μας θα είναι μεγάλης χρησιμότητας σε περαιτέρω κατανόηση της επαναπρογραμματισμό διαδικασία καρκινικά κύτταρα για να διαλευκάνουν την υποκείμενη ετερογενή make-up των όγκων, η οποία θα είναι το κλειδί στην αντικαρκινική θεραπευτικές στρατηγικές.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Έκφραση CDKN2B πρωτεΐνης σε Η460 και iPCH460.

CDKN2B

μεταλλάσσεται σε Η460 που καθιστά όλες τις δοκιμασίες PCR για να αποτύχει, αλλά δεν διαταράσσει την έκφραση της πρωτεΐνης του

doi:. 10.1371 /journal.pone.0056702.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

Παρουσία

CDKN2B

σε Η460 κύτταρα από το εργαστήριο μας και το εργαστήριο του Δρ Koeffler του (Klab). (Α) πρωτεΐνη CDKN2B μπορεί να ανιχνευθεί σε Η460 κύτταρα από εργαστήριο και Klab μας. (Β) ένα εναλλακτικό ζεύγη εκκινητών που σχεδιάσαμε (Πίνακας S1) ήταν σε θέση να ενισχύσουν

CDKN2B

τόσο γονιδιακού DNA και cDNA του Η460. Εμείς αλληλουχία την κωδική περιοχή του γονιδίου αυτού και διαπίστωσε ότι είναι άγριου τύπου (GenBank με: JX391994)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0056702.s002

(ΔΕΘ)

Εικόνα S3.

μεταφάσης εξάπλωση δείχνει ότι η μετα-ΑΣΠ (piPCs) είναι ανευπλοειδικών. (Α) Εκπρόσωπος spreads μετάφαση της Η358, Η460, piPCH358 και piPCH460. (Β) Συνοπτικός πίνακας μετράει χρωμοσωμάτων από τουλάχιστον οκτώ ανεξάρτητες spreads ανά δείγμα. Μπλε – DAPI βάφονται τα χρωμοσώματα? πράσινο – trf2? . Κόκκινο – CENPA

doi: 10.1371 /journal.pone.0056702.s003

(ΔΕΘ)

Εικόνα S4.

2-φορές διαδοχική αραίωση του IMR90 γονιδιώματος για την ενίσχυση της

TP53

και

CDKN2A

. (Α) IMR90 γονιδιωματικό DNA ήταν 2-φορές σειριακή αραίωση με Η358 γενωμικό DNA ως εκμαγείο για να ενισχύσει

ΤΡ53

. Παρατηρήσαμε ότι σε 4-πλάσια αραίωση, ζώνη PCR που αντιστοιχεί στο

TP53

είναι οριακά ορατό. Αυτό μας δίνει μια εκτίμηση ότι για κάθε τέσσερις Η358 κύτταρα, μία είναι η «μετάλλαξη-free». (Β) Ομοίως, IMR90 γονιδιωματικό DNA ήταν 2 φορές σειριακά αραιωμένου αλλά αντ ‘αυτού με Η460 γονιδιωματικό DNA. αποτελεσματικότητας της ενίσχυσης του

CDKN2A

ήταν επίσης σε κίνδυνο από μη-ειδικά προϊόντα? σε 32-πλάσια αραίωση, η ζώνη PCR ήταν οριακά αισθητή δίνοντας έτσι μια εκτίμηση ότι για κάθε 32 Η460 κύτταρα, το ένα είναι «μετάλλαξη-free ‘. Ανεξάρτητα, parsing οποιαδήποτε από αυτές τις παραμέτρους στο μοντέλο πιθανοτήτων στο Σχήμα 3 θα οδηγήσει σε μια πιθανότητα πολύ μικρότερο από 0,05

doi:. 10.1371 /journal.pone.0056702.s004

(TIF)

Παρουσίαση S1 .

Αρχικό εικόνες που χρησιμοποιούνται στο Σχήμα 1 και Σχήμα 2.

doi: 10.1371 /journal.pone.0056702.s005

(PDF)

Πίνακα S1.

Primer Ακολουθίες

doi:. 10.1371 /journal.pone.0056702.s006

(XLSX)

Πίνακας S2.

Explant όγκου δεδομένων

doi:. 10.1371 /journal.pone.0056702.s007

(XLSX)

Ευχαριστίες

Χίου Mee Κονγκ είναι αποδέκτης των ερευνητικών υποτροφιών από Yong Loo Lin School of Medicine, NUHS, NUS, Σιγκαπούρη. Ευχαριστούμε τον Δρ Πάτρικ Ταν για τις διορατικές σχόλια, καθώς και ο Δρ Phillip Koeffler για την ευγενική προσφορά του των κυττάρων Η460.