Αφηρημένο

Ιστορικό

Πρόσφατες εκθέσεις σχετικά με

Propionibacterium acnes

(

P. acnes

) προτείνουν ότι αυτό το βακτήριο είναι διαδεδομένη στον προστάτη, συνδέεται με οξεία και χρόνια φλεγμονή του προστάτη, και θα μπορούσε να έχει ένα ρόλο στην καρκινογένεση προστάτη.

Μέθοδοι

για να αξιολογηθεί η παθογόνος ρόλος αυτής της ιθαγενών βακτηρίδιο, εμείς διαλογή για το βακτήριο σε ριζική προστατεκτομή δείγματα χρησιμοποιώντας ένζυμο ανοσοϊστοχημεία με ένα νέο

P. acnes

-ειδικές μονοκλωνικό αντίσωμα (PAL αντίσωμα), μαζί με ένα αντίσωμα αντι-πυρηνικό παράγοντα-κάππα Β (NF-κΒ). Εξετάσαμε φορμόλη-σταθερές και τομές ιστού ενσωματωμένες σε παραφίνη από ριζική προστατεκτομή δείγματα από 28 ασθενείς με καρκίνο του προστάτη και 18 ασθενείς της ομάδας ελέγχου ίδιας ηλικίας με καρκίνο της ουροδόχου κύστης, αλλά χωρίς καρκίνο του προστάτη.

Αποτελέσματα

ανοσοϊστοχημεία με το αντίσωμα PAL αποκάλυψε μικρά στρογγυλά όργανα εντός ορισμένων μη-καρκινικές αδενικό επιθήλιο και στρωματικά μακροφάγα στα περισσότερα δείγματα προστάτη. δείγματα καρκίνου του προστάτη είχαν υψηλότερες συχνότητες είτε κυτταροπλασματικών

P. acnes

ή πυρηνική έκφραση του NF-κΒ από αδενικό επιθήλιο και μεγαλύτερο αριθμό μακροφάγων στρωματικών με

P. acnes

από τα δείγματα ελέγχου. Αυτές οι παράμετροι ήταν επίσης υψηλότερη στην περιφερική ζώνη σε σχέση με την μεταβατική ζώνη του προστάτη, ιδιαίτερα σε δείγματα καρκίνου του προστάτη. έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ ήταν πιο συχνή σε αδένες με

P. acnes

ό, τι σε αδένες, χωρίς να

P. acnes

. Ο αριθμός των μακροφάγων στρωματικών με το βακτήριο συσχετίζονται με το βαθμό της χρόνιας φλεγμονής τόσο στο PZ και TZ περιοχές και με το βαθμό της οξείας φλεγμονής στην περιοχή TZ.

Συμπεράσματα

Η ανοσοϊστοχημική ανάλυση με ένα νέο μονοκλωνικό αντίσωμα για την ανίχνευση

P. acnes

στον προστάτη πρότεινε ότι ενδοεπιθηλιακή

P. acnes

μόλυνση σε μη καρκινική αδένων του προστάτη και τη φλεγμονή που προκαλείται από το βακτήριο μπορεί να συνεισφέρει στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη

Παράθεση:. Bae Υ, Ito Τ, Iida Τ, Uchida Κ, Sekine Μ, Nakajima Y, et al. (2014) Η ενδοκυτταρική

acnes Propionibacterium

μόλυνση στο αδενικό επιθήλιο και στρωματικά μακροφάγα του προστάτη, με ή χωρίς καρκίνο. PLoS ONE 9 (2): e90324. doi: 10.1371 /journal.pone.0090324

Συντάκτης: Robert Hurst, Οκλαχόμα Πανεπιστήμιο Επιστημών Υγείας Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 13η Δεκεμβρίου του 2013? Αποδεκτές: 29 Γενάρη του 2014? Δημοσιεύθηκε: 28 Φεβρουαρίου, 2014

Copyright: © 2014 Bae et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από την Ιαπωνία Εταιρείας για την Προώθηση της Επιστήμης Grant-in-ενισχύσεις για την Επιστημονική Έρευνα 24659402 (YE). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η δεύτερη πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες σε όλο τον κόσμο, με περίπου 900.000 περιπτώσεις και 258.000 θανάτους το 2008 [1]. Ενώ αρκετοί παράγοντες κινδύνου για καρκίνο του προστάτη έχουν εντοπιστεί, όπως η εθνοτική καταγωγή, η ηλικία, το οικογενειακό ιστορικό, και τη διατροφή [2], η ακριβής αιτιολογία του καρκίνου του προστάτη παραμένει άγνωστη. Πολλές πρόσφατες μελέτες παρέχουν ενδείξεις ότι η χρόνια φλεγμονή είναι ένα σημαντικός παράγοντας που συμβάλλει για την καρκινογένεση του προστάτη προκαλώντας βλάβες στο DNA, την προώθηση κυτταρικό κύκλο εργασιών, και δημιουργώντας ένα μικροπεριβάλλον του ιστού που ενισχύει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την αγγειογένεση [3], [4].

στην φλεγμονώδη απόκριση, οι μεταγραφικοί παράγοντες όπως πυρηνικού παράγοντα κΒ-(NF-κΒ) ενεργοποιείται με την δέσμευση των υποδοχέων μοτίβο αναγνώρισης (ΤοΙΙ υποδοχείς, νουκλεοτίδιο πεδίο σύνδεσης ολιγομερισμού [NOD] προσομοιαζόντων υποδοχέων, και άλλοι ), προφλεγμονωδών υποδοχείς κυτοκίνης (παράγοντα νέκρωσης Ογκου-α ή ιντερλευκίνη [IL] -1), και υποδοχείς αντιγόνων [5] – [8]. Αν και NF-κΒ δεν ταιριάζει στον κλασικό ορισμό ενός ογκογονιδίου, είναι ένα ισχυρό ενεργοποιητή του κακοήθους κατάστασης και ρυθμίζει την έκφραση των γονιδίων στόχων σημαντική για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την επιβίωση, την αγγειογένεση, και την επισκευή των ιστών [8] – [12].

η έκθεση σε περιβαλλοντικούς παράγοντες, όπως λοιμώδεις παράγοντες, διαιτητικά καρκινογόνα, και ορμονικές ανισορροπίες, πιστεύεται ότι οδηγεί σε ζημία του προστάτη και την ανάπτυξη της χρόνιας φλεγμονής [3]. Πρόσφατες εκθέσεις έδειξαν ότι

Propionibacterium acnes

(

P. Acnes

) συχνά ανιχνεύεται σε προστατικό ιστό από ασθενείς με προστατίτιδα και του καρκίνου του προστάτη, και ότι το βακτήριο σχετίζεται με οξεία και χρόνια φλεγμονή του προστάτη και θα μπορούσε να έχει ένα ρόλο στην καρκινογένεση του προστάτη [13] – [21]

P.. acnes

είναι ένα Gram-θετικό, μη-σπορίων που σχηματίζουν, αναερόβια βάκιλος που βρέθηκαν κυρίως στην σμηγματογόνων αδένων περιοχές πλούσιες του δέρματος σε ενήλικες [22]. Η αυτόχθονες βακτήριο απομονώθηκε επίσης από τον επιπεφυκότα, του στόματος, και το έντερο [23]. Ιστορικά,

P. acnes

πιστεύεται ότι είναι χαμηλής τοξικότητας, αλλά πρόσφατα βρέθηκε να είναι ο αιτιολογικός παράγοντας σε διάφορες παθολογικές καταστάσεις.

P. acnes

είναι κυρίως εμπλέκεται στην κοινή ακμή [24], αλλά το βακτηρίδιο θα μπορούσε επίσης να συνδέεται με έναν αριθμό φλεγμονωδών καταστάσεων, όπως ενδοκαρδίτιδα, κοινές και το κεντρικό νευρικό μολύνσεις, και σαρκοείδωση [25] – [28].

Σας έχουν αναφερθεί στο παρελθόν ότι πολλοί (71%) ορότυπος Ι των κλινικών απομονώσεων του

P. acnes

εισβάλλουν τα επιθηλιακά κύτταρα [29], και ενδοεπιθηλιακή

P. acnes

μόλυνση ενεργοποιεί NF-κΒ τόσο σε NOD1- και NOD2-εξαρτώμενο τρόπο [30]. Παρά τη συσσώρευση αποδείξεις

P. acnes

μόλυνση στον προστάτη με καλλιέργεια ή πολυμεράσης μεθόδων αλυσιδωτής αντίδρασης βακτηριακές, υπάρχουν μόνο λίγες αναφορές στο οποίο το βακτηρίδιο βρισκόταν σε ιστούς προστάτη με ίη situ μεθόδους ανοσοφθορισμού με ένα πολυκλωνικό αντίσωμα σε

P. acnes

[31] ή πολύχρωμα φθορισμού σε μεθόδους in situ υβριδισμού που στοχεύουν

P. acnes

23S rRNA [14].

Για να διερευνήσουν περαιτέρω τη συσχέτιση αιτιολογικός μεταξύ

P. acnes

και φλεγμονή ή καρκινογένεση, όχι μόνο το βακτήριο, αλλά και ιστολογικά χαρακτηριστικά του προστατικού ιστού πρέπει να αναλυθούν σε πανομοιότυπες ιστολογικές τομές. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να εντοπίσει

P. acnes

στον προστατικό ιστό υπό μικροσκόπιο φωτός από το ένζυμο ανοσοϊστοχημεία. Για το σκοπό αυτό, αναπτύξαμε ένα νέο αντι

P. acnes

μονοκλωνικό αντίσωμα που αντιδρά με τα βακτήρια σε μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη και έχει εμπεδωθεί με παραφίνη ιστό προστάτη τμήματα. Για να αξιολογηθεί η παθογόνο ρόλο αυτού του βακτηρίου ιθαγενών στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη, εξετάσαμε ριζική προστατεκτομή δείγματα που λαμβάνονται από ασθενείς με ή χωρίς καρκίνο του προστάτη με ανοσοϊστοχημεία με το νέο αντίσωμα προς

P. acnes

και ένα αντίσωμα NF-κΒ, το οποίο χρησιμοποιήθηκε για να προσδιορίσει μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ

P. acnes

μόλυνση και έκφραση της πυρηνικής ΝΡ-κΒ σε αδένες του προστάτη. Επίσης, αναλύσαμε εάν

P. acnes

λοίμωξη κατάσταση σχετίστηκε με τον κίνδυνο καρκίνου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Τόκιο Ιατρική και Οδοντιατρική του Πανεπιστημίου (Αριθμός Εγγραφής 1373). Επειδή η μελέτη συμμετείχαν ανοσοχρώση κλινικά λαμβάνονται και αρχειοθετούνται φορμόλη σταθερό και έχει εμπεδωθεί με παραφίνη δείγμα ιστού, η επιτροπή δεοντολογίας ενέκρινε παραίτηση των ειδικών εν επιγνώσει συναίνεση, σύμφωνα με τις ηθικές κατευθυντήριες γραμμές για τις κλινικές μελέτες (όπως τροποποιήθηκε 31ης Ιουλίου του 2008) από το Υπουργείο Υγείας, Εργασίας και Πρόνοιας της Ιαπωνίας. Το πειραματικό πρωτόκολλο ζώων που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη εγκρίθηκε από το Κέντρο Πειραματικής Ζώων του Τόκιο Ιατρική και Οδοντιατρική του Πανεπιστημίου (ΑΡ.Μ.Α.Ε. 0120203A) και έγινε σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της πάνω από το κέντρο.

Δείγματα

Εξετάσαμε φορμόλη-σταθερές και ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές ιστών της ριζικής προστατεκτομής δείγματα από 28 ασθενείς (ηλικία: 50-78 ετών) με καρκίνο του προστάτη που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση μεταξύ 2008 και 2011 στο Τόκιο Ιατρική και Οδοντιατρική Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, και από 18 ασθενείς της ομάδας ελέγχου (ηλικία: 50-80 ετών) με καρκίνο της ουροδόχου κύστης, αλλά χωρίς καρκίνο του προστάτη, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στο διάστημα μεταξύ 1994 και 2011 στο ίδιο νοσοκομείο. Οι ασθενείς που έλαβαν προεγχειρητική θεραπεία εξαιρέθηκαν από τη μελέτη. Οι κλινικοπαθολογικοί προφίλ των περιπτώσεων παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. μπλοκ ιστού εγκλεισμένα σε παραφίνη επιλέχθηκαν από όγκοι που παρασκευάζονται για τη συνήθη παθολογική εξέταση. Μία οριζόντια κομμένο τμήμα του προστάτη περιλαμβανομένου του verumontanum ταυτοποιήθηκε σε κάθε περίπτωση, και τα δείγματα εισήχθησαν στη μελέτη, όταν η εξάπλωση του καρκίνου περιορίστηκε προς τα δεξιά ή αριστερά λοβό στο τμήμα. Ένα από τα δεξιά και αριστερά λοβών σε ένα τμήμα ελεύθερο από καρκίνο αναλύθηκε για την εξέταση της κατανομής των

P. acnes

και η ενδοεπιθηλιακή ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ σε μη καρκινικό ιστό, και το άλλο λοβό αναλύθηκε για την ανίχνευση

P. acnes

σε καρκινικό ιστό.

Η

Παραγωγή μονοκλωνικού αντισώματος

Ένα νέο μονοκλωνικό αντίσωμα αναπτύχθηκε για να εντοπίσετε το

P. acnes

σε μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη και έχει εμπεδωθεί με παραφίνη ιστό προστάτη τμήματα. Το αντίσωμα παρήχθη σύμφωνα με το πρωτόκολλο που περιγράφεται σε ένα εγχειρίδιο εργαστηρίου [32] με τροποποιήσεις. ποντίκια BALB /c (CLEA Japan, Tokyo, Japan) ανοσοποιήθηκαν με υπερήχους ολόκληρη βακτηριακή λύμα του ορότυπου Ι

P. acnes

απομονωθεί από το ανθρώπινο προστάτη σε μια προηγούμενη μελέτη [29]. Υβριδώματος κυτταρικές σειρές που παράγουν αντι-

P. acnes

αντισώματα ελέγχθηκαν με ανοσορροφητική δοκιμασία συνδεδεμένη με ένζυμο με τα βακτηριακά αντιγόνα που χρησιμοποιήθηκαν ως ανοσογόνα. Υβριδώματος κυτταρικές γραμμές με θετικά αποτελέσματα σε διαλογή με ανοσοχρώση με σταθεροποιημένο με φορμαλίνη και έχει εμπεδωθεί με παραφίνη τομές ιστών του

P. acnes

-εγχυθέντα ήπατος αρουραίου.

P. acnes ενίεται

ήπατος αρουραίου ελήφθη με ενδοφλέβια ένεση 30 mg του θανατωμένου με θερμότητα

P. acnes

σε θηλυκούς αρουραίους Sprague-Dawley (CLEA Japan) 1 ώρα πριν από τη θανάτωση του αρουραίου. Παρόμοια παρασκευάστηκαν τομές ιστού ήπατος αρουραίων με ένεση από κάθε στέλεχος άλλων βακτηρίων ελέγχου εξετάστηκαν επίσης να επιβεβαιώσουν την ιδιαιτερότητα να

P. acnes

. Υβριδώματος κυτταρικές σειρές που παράγουν το αντίσωμα που παράγεται μια ισχυρή αντίδραση ειδικά για

P. acnes

σε τομές ήπατος αρουραίου επιλέχθηκαν και περαιτέρω διαλογή με ανοσοχρώση με σταθεροποιημένο με φορμαλίνη και τμήματα ιστών του προστάτη εγκλεισμένων σε παραφίνη του δείγματος απομακρύνεται με προστατεκτομή στην οποία ένας μεγάλος αριθμός των

P. acnes

καλλιεργήθηκαν στην προηγούμενη μελέτη [29]. Το υβρίδωμα που παράγει το αντίσωμα που παράγεται το πιο συγκεκριμένο προϊόν αντίδρασης στερούμενη διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με ανθρώπινους ιστούς του προστάτη, συμπεριλαμβανομένων των πιγμέντων λιποφουσκίνης, επελέγη και κλωνοποιήθηκε με δύο γύρους περιοριστικής αραίωσης. Ένας απλός κλώνος υβριδώματος στη συνέχεια εμφυτεύονται στο ενδοπεριτοναϊκή διάστημα των σοβαρών ποντικών συνδυασμένου ανοσοανεπάρκειας (CLEA Japan). Σε 1 ή 2 εβδομάδες μετά την εμφύτευση, ασκίτη συλλέχθηκε και χρησιμοποιήθηκε ως μη αραιωμένη αντίσωμα χωρίς περαιτέρω καθαρισμό. Το αντίσωμα ονομάστηκε PAL.

Η ειδικότητα του αντισώματος PAL εξετάστηκε με στύπωμα Western, σύμφωνα με την προηγουμένως περιγραφείσα μέθοδο [26] με τον ορότυπο I

P. acnes

τύπου στέλεχος (ATCC 6919 και ATCC 11827), ορότυπος II

P. acnes

τύπου στέλεχος (ATCC 11828), 19 κλινικές απομονώσεις του

P. acnes

(10 στελέχη του ορότυπου Ι και 9 στελέχη του ορότυπου II) από προστάτες [29], άλλες δερματικές propionibacteria (

P. κοκκώδης

ATCC 25564,

P. avidum

, ATCC 25577, και

P. lymphophilum

ATCC 27520), και άλλα βακτήρια ελέγχου (

Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli

,

Bacteroides flagilis

, και

Enterrococcus faecalis

).

Ανοσοϊστοχημεία

τμήματα ιστολογική (3 μm πάχους) κόπηκαν από δείγματα μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη και έχει εμπεδωθεί με παραφίνη ιστό και τοποθετήθηκαν σε πλακίδια επικαλυμμένα με σιλάνιο (Muto Pure Chemicals , Tokyo, Japan). Μετά τα τμήματα από-παραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν, ήταν μικροκύματα (φούρνος μικροκυμάτων Processor H2850? Ενέργεια δέσμης Sciences, East Granby, CT) για 40 λεπτά στους 97 ° C σε 10 mmol /l ρυθμιστικού κιτρικού (ρΗ 6,0). Οι τομές στη συνέχεια σε επεξεργασία με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% σε μεθανόλη για 10 λεπτά. Οι τομές επωάστηκαν πρώτα με φυσιολογικό ορό αλόγου (Vectastain Elite ABC καθολική Kit? Vector Laboratories, Burlingame, CA) και στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύκτα σε θερμοκρασία δωματίου είτε με κατάλληλα αραιωμένου αντισώματος PAL (1:60000) ή αντι-ΝΡ-κΒ αντίσωμα (1 :2000, EPITOMICS, Burlingame, CA), ή ένα μείγμα αυτών των δύο αντισωμάτων για κοκτέιλ ανοσοχρώση, σε ένα υγροποιημένο θάλαμο. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν για 30 λεπτά με βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα, που ακολουθείται από 30 λεπτών επώαση με στρεπταβιδίνη-υπεροξειδάση σύμπλοκο (Kit Vectastain Elite ABC καθολική), τόσο σε θερμοκρασία δωματίου. Πριν και μετά από κάθε στάδιο, οι τομές πλύθηκαν σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό που περιέχει 0.5% Tween-20. Το σήμα αναπτύχθηκε ως ένα καφέ προϊόν αντίδρασης χρησιμοποιώντας υπεροξειδάσης υπόστρωμα διαμινοβενζιδίνη (DAB HistofineSimplestain Solution? Nichirei Bioscience Inc., Tokyo, Japan). Όλα τα δείγματα με αιματοξυλίνη Mayer του. Δίπλα τομές εξετάστηκαν επίσης με αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρώση για τα συμβατικά εξέταση ιστοπαθολογικές.

Για ταυτόχρονη ταυτοποίηση κυτταροπλασματικών

P. acnes

και έκφραση πυρηνικών NF-κΒ στο ίδιο τμήμα του ιστού του προστάτη, κοκτέιλ ανοσοχρώση με ένα μίγμα αντισώματος PAL και αντι-ΝΡ-κΒ αντίσωμα ως το πρωτογενές αντίσωμα πραγματοποιήθηκε σε όλα τα δείγματα. Για να εξασφαλιστεί η αξιοπιστία της μεθόδου αυτής, δύο διαδοχικές τομές των όμοιων δειγμάτων εξετάστηκαν με κοκτέιλ ανοσοχρώση και immunoenzyme διπλό χρώση, αντίστοιχα. Για το διπλό-χρώση immunoenzyme, οι τομές αντιδρά πρώτα με αντίσωμα PAL χρησιμοποιώντας αβιδίνη-βιοτίνης μέθοδος με την Vectastain ABC-ΑΡ Kit (AK-5000, VECTOR) και το διάνυσμα μπλε Αλκαλική φωσφατάση Υποστρώματος Kit III (SK-5300, VECTOR ), και στη συνέχεια επωάστηκαν για 5 λεπτά σε διάλυμα μετουσίωσης (αποδιάταξη κιτ διάλυμα, BRR001DH, Biocare Medical) και επωάστηκε περαιτέρω για 5 λεπτά σε Dako REAL υπεροξειδάση Ανασταλτικό διάλυμα (S2023, Dako, Glostrup, Δανία). Μετά από αυτές τις διαδικασίες, οι τομές υποβλήθηκαν τη δευτερεύουσα αντίδραση με αντίσωμα αντι-ΝΡ-κΒ, που ακολουθείται με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας μια μέθοδο πολυμερές με EnVision + System-HRP Labelled Polymer (K4001, Dako) και HistofineSimplestain DAB Solution.

Το ίδιο δείγματα που χρησιμοποιήθηκαν για immunoenzyme διπλής χρώσης αναλύθηκαν επίσης με ανοσοφθορισμό διπλό χρώση με τον φαινότυπο των κυττάρων με ενδοκυτταρικά

P. acnes

χρησιμοποιώντας αντισώματα στα επιθηλιακά κύτταρα και φαγοκύτταρα? αντι-κυτοκερατίνης μονοκλωνικό αντίσωμα (ΑΕ1 /ΑΕ3, Dako) για τα επιθηλιακά κύτταρα, αντι-ανθρώπινο CD68 μονοκλωνικό αντίσωμα (κλώνος KP1? Dako) για μακροφάγα, ή αντι-ανθρώπινο fascin μονοκλωνικό αντίσωμα (κλώνος 55Κ-2? Dako) για δενδριτικά κύτταρα, σύμφωνα με τις μεθόδους που περιγράφηκαν προηγουμένως [33].

για να επιβεβαιωθεί ότι το αντίσωμα PAL δεν παρουσιάζει διασταυρούμενη αντίδραση με χρωστικές ουσίες λιποφουσκίνης που βρίσκονται συχνά σε προστάτη αδένες, χρώση ανοσοφθορισμού με ή χωρίς το αντίσωμα PAL συγκρίθηκε χρησιμοποιώντας σειριακή τομές ιστών του προστάτη, και χρώση immunoenzyme με το αντίσωμα PAL ακολούθησε χρώση Fontana-Masson ή φθορισμού-μικροσκοπική παρατήρηση για πανομοιότυπα τμήματα ιστού του προστάτη.

Αξιολόγηση των ανοσοϊστοχημικών και ιστολογικά ευρήματα

για την αξιολόγηση

P. acnes

μόλυνση και έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ σε πανομοιότυπες ιστολογικές τομές, οπτικού μικροσκοπίου εικόνες των τμημάτων ανοσοχρώση με ένα μίγμα από αντίσωμα PAL και αντίσωμα αντι-ΝΡ-κΒ (κοκτέιλ ανοσοχρώση) ενσωματώθηκαν σε εικονικό διαφάνειες με Mirax MIDI BF /FL ψηφιοποίησης για 12 Διαφάνειες (Carl Zeiss MicroImaging, Jena, Germany) και εξετάζονται με τη βοήθεια Pannoramic Viewer 1.15 Service Pack 2 (3DHISTECH, Βουδαπέστη, Ουγγαρία). Μορφομετρική ανάλυση όλων των αδένων του προστάτη που περιλαμβάνονται στα τμήματα που διεξήχθη υπό υψηλό άποψη εξουσία των εικονικό διαφάνειες. Κάθε προστάτη αδένα θεωρήθηκε

P. acnes

-θετικό όταν παρατηρήθηκαν κυτταροπλασματικό θετικά σήματα από αντίσωμα PAL σε τουλάχιστον ένα επιθηλιακό κύτταρο του αδένα. Όσο για την έκφραση της πυρηνικής ΝΡ-κΒ, ο αδένας θεωρήθηκε θετική όταν παρατηρήθηκαν τα σήματα πυρήνα θετικά σε τουλάχιστον ένα επιθηλιακό κύτταρο. Η κυτταροπλασματική έκφραση ΝΡ-κΒ δεν θεωρήθηκε θετική επειδή ενεργοποιείται ΝΡ-κΒ μετατίθεται από το κυτταρόπλασμα στον πυρήνα [34], [35]. Σύμφωνα με την παρουσία ή την απουσία κυτταροπλασματικής

P. acnes έκφραση πυρηνικών NF-κΒ για κάθε αδένα, όλα αδένες προστάτη (συνολικός αριθμός των αδένων ανά τμήμα που κυμαίνονται από 933 να 5519 με ένα μέσο αριθμό 2358) που βρίσκονται στις περιοχές της περιφερειακής ζώνης (ΡΖ) ή μεταβατική ζώνη (

και TZ) ταξινομήθηκαν σε τέσσερις ομάδες (

P acnes

/NF-κΒ:.. + /+, +/- – /+ και – /-), και τους αδένες κατηγοριοποιούνται σε κάθε ομάδα χαρακτηρίστηκαν από μια διαφορετικό χρώμα για τα εικονικά διαφάνειες. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα που προκύπτουν από την ταξινόμηση τέσσερις-ομάδα, η συχνότητα ανίχνευσης των αδένων είτε με κυτταροπλασματικό

P. acnes

ή έκφραση πυρηνικών NF-κΒ υπολογίστηκε για κάθε περίπτωση στο ΡΖ και περιοχές ΤΖ, αντίστοιχα. Όλα τα στρωματικά κύτταρα του προστάτη με κυτταροπλασματική σήματα από το αντίσωμα PAL μετρήθηκαν στην ΡΖ και περιοχές ΤΖ, αντίστοιχα, στα τμήματα εικονική διαφάνεια που ανοσοχρώση με μόνο PAL αντίσωμα. Για την αξιολόγηση του βαθμού της οξείας και χρόνιας φλεγμονής, γειτονικά τμήματα εξετάστηκαν με αιματοξυλίνη και χρώση ηωσίνης και κατατάσσεται σε τέσσερις κατηγορίες (0, 1+, 2+, και 3+) σύμφωνα με τα κριτήρια που χρησιμοποιούνται από τους Cohen et al. [13].

Στατιστικές αναλύσεις

Η συχνότητα (%) του

P.acnes

-θετικό αδένων ή πυρηνικών ΝΡ-κΒ-θετικά αδένες υπολογίστηκε ως ο αριθμός των θετική αδένες διαιρείται με τον αριθμό των συνολικών αδένων για κάθε ασθενή? και ο αριθμός των

P. acnes

-θετικό μακροφάγων μετρήθηκε για κάθε ασθενή. Αυτές οι παράμετροι συνοψίζονται ως διάμεσος [25

ου και 75

ου εκατοστημόρια] για κάθε PZ και την περιοχή TZ και συγκρίνονται μεταξύ δειγμάτων ελέγχου και του καρκίνου του προστάτη χρησιμοποιώντας ένα Mann-Whitney U. Οι παράμετροι σε κάθε δείγμα ελέγχου και του καρκίνου του προστάτη συγκρίθηκαν επίσης μεταξύ του PZ και περιοχές TZ χρησιμοποιώντας το τεστ υπέγραψε-rank Wilcoxon. Η συσχέτιση μεταξύ αυτών των παραμέτρων και βαθμό οξείας ή χρόνιας φλεγμονής αναλύθηκε χρησιμοποιώντας συντελεστής συσχέτισης τάξης Spearman του του. Βαθμός της οξείας ή χρόνιας φλεγμονής συγκρίθηκε επίσης μεταξύ των δειγμάτων ελέγχου και του καρκίνου του προστάτη χρησιμοποιώντας ένα Mann-Whitney U. Η συχνότητα της έκφρασης πυρηνικών NF-κΒ σε αδένες με

P. acnes

και τους αδένες, χωρίς να

P. acnes

υπολογίστηκε για κάθε ασθενή, συνοψίζονται ως διάμεσος [25

ου και 75

ου εκατοστημόρια], και σε σύγκριση με τη χρήση του τεστ υπέγραψε-rank Wilcoxon στην PZ και TZ τομείς του ελέγχου και του προστάτη δείγματα καρκίνου. ο συντελεστής Spearman χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει τη συσχέτιση μεταξύ της συχνότητας των

P.acnes

-θετικό αδένων και του αριθμού των

P. acnes

-θετικό μακροφάγα του στρώματος. Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν για τις περιοχές PZ και TZ, αντίστοιχα.

σ

-τιμές προσαρμόστηκαν για πολλαπλές συγκρίσεις με τη μέθοδο Holm, όπου ενδείκνυται. Ένα

σ

-τιμή μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. λογισμικού StatView (έκδοση 5.0? SAS Institute, Cary, NC). Χρησιμοποιήθηκε για όλους τους στατιστικούς υπολογισμούς

Αποτελέσματα

Εξειδίκευση του μονοκλωνικού αντισώματος

Το αντίσωμα PAL αντέδρασε με όλα τα στελέχη του ορότυπου Ι

P. acnes

και δεν αντιδρά με κανένα από τα στελέχη ορότυπου II

P. acnes

, άλλες δερματικές propionibacteria, ή άλλα βακτήρια ελέγχου. Το αντίσωμα αναγνώρισε ένα

P. acnes

-ειδικού επιτόπιου του lipoteichoic οξέος κοινά αποδεκτούς από όλα τα στελέχη του ορότυπου Ι

P. acnes

.

Εντοπισμός

P. acnes

σε

προστάτη

Στα μη-καρκινικές προστάτη αδένες, το αντίσωμα PAL αντέδρασε με μικρά στρογγυλά όργανα στα επιθηλιακά κύτταρα (Εικόνα 1). Τα μικρά στρογγυλά σώματα παρατηρήθηκαν σε υπερπλαστικό, κανονικό, και ατροφική επιθηλιακά κύτταρα, αλλά πιο συχνά σε υπερπλαστικά επιθηλιακά κύτταρα (Σχήμα 2Α-Β) σε σχέση με την κανονική ή ατροφικό κύτταρα (Σχήμα 2C-D). Στο προστατικού στρώματος, PAL-θετική μικρά στρογγυλά όργανα ανιχνεύθηκαν επίσης σε μακροφάγα, όπως κύτταρα, τα οποία διανεμήθηκαν αραιά σε ομάδες στο στρώμα. Αυτά τα κύτταρα εμφανίστηκε στην σχετικά υψηλή πυκνότητα κοντά στα ατροφική αδένες, που συνοδεύεται από μονοπύρηνα φλεγμονώδη κύτταρα (Σχήμα 2Ε-F). Σε ορισμένα εστίες σοβαρών periglandular φλεγμονή, μακροφάγων που μοιάζει με PAL-θετικών κυττάρων διεισδύσει τους αδένες και μερικές φορές ανιχνεύθηκαν στα αυλού χώρους.

Το αντίσωμα αντέδρασε με μικρά στρογγυλά όργανα (βέλη) σε κάποιο μη-καρκινικές αδενικό επιθηλιακά κυττάρων.

η

Θετικά σήματα από το αντίσωμα ήταν πιο συχνές σε αδένες με επιθηλιακή υπερπλασία (Α, Β) από ό, τι στην κανονική ή ατροφικό αδένες (C, D). Στην προστατικού στρώματος, θετικά σήματα βρέθηκαν στα μακροφάγα κύτταρα παρόμοια συνοδεύεται από μονοπύρηνα φλεγμονώδη κύτταρα (Ε, F). Λίγα θετικά σήματα σπάνια βρέθηκαν σε ορισμένα καρκινικά κύτταρα (G, H). Μεγαλύτερη μεγέθυνση της περιοχής που υποδεικνύεται από το βέλος παρουσιάζεται στο ένθετο του κάθε σχήματος.

Η

ανοσοφθορισμού διπλό χρώση επιβεβαίωσε ότι όλοι αδενικής σήματα που ανιχνεύονται από το αντίσωμα PAL ήταν στο κυτταρόπλασμα των επιθηλιακών κυττάρων χρωματίστηκαν με αντι-κυτοκερατίνης αντίσωμα (ΑΕ1 /ΑΕ3) και όλα τα σήματα στρωματικών ανιχνεύεται από το αντίσωμα PAL ήταν σε μακροφάγα βάφονται με αντι-CD68 αντίσωμα, αλλά όχι με αντι-fascin αντίσωμα (Σχήμα 3Α-Γ). χρωστικές lipofuscin παρατηρήθηκαν σε ορισμένες προστάτη αδένες με ενδοκυτταρική

P. acnes

. Αυτές οι χρωστικές λιποφουσκίνης βάφτηκαν σκούρο καφέ με Fontana-Masson και παρήγαγε ισχυρές αυτόματη φθορισμού, και το αντίσωμα PAL έκανε δεν αντιδρούν εγκάρσια με αυτές τις χρωστικές λιποφουσκίνης (Σχήμα 3D-J).

ανοσοφθορισμού διπλό χρώση του

P. acnes

-θετικό κυττάρων σε ιστούς προστάτη (A-C). Πράσινο σήμα (FITC): PAL αντισώματος? κόκκινο σημάτων (TRITC): αντι-κυτοκερατίνης αντίσωμα (Α), αντίσωμα αντι-CD68 (Β), και αντι-fascin αντίσωμα (C). Τα αποτελέσματα της διπλής χρώσης συγχωνεύθηκαν σε όλες τις φωτογραφίες. Στους αδένες του προστάτη, όλα τα

P. acnes

-θετικό σημάτων επικαλύπτεται (κίτρινο) με αδενικά επιθηλιακά κύτταρα κυτοκερατίνη-θετικών (Α). Στο στρώμα του προστάτη, όλα τα

P. acnes

-θετικό σημάτων επικαλύπτεται (κίτρινο) με CD68-θετικών μακροφάγων (B) και δεν επικαλύπτονται καθόλου (πράσινο) με fascin-θετικά δενδριτικά κύτταρα (C). Η ανοσοχρώση με το αντίσωμα PAL ακολουθούμενη από χρώση Fontana-Masson (D). Τα περισσότερα από τα κόκκινα θετικά σήματα από αντίσωμα PAL (βέλη) στους αδένες του προστάτη δεν συμπίπτουν με τις χρωστικές λιποφουσκίνης (βέλη), οι οποίες είναι σκούρο καφέ με χρώση Fontana-Masson. Immunoenzyme χρώση του ιστού του προστάτη, με ή χωρίς αντίσωμα PAL χρησιμοποιώντας τομές ιστών σειριακή προστάτη (E, F). Πολλές ενδοκυτταρικές σκούρο καφέ σήματα (βέλη) παρατηρήθηκαν στο τμήμα με το αντίσωμα PAL (Ε), αλλά κανένα τέτοιο σήματα παρατηρήθηκαν στο τμήμα χωρίς το αντίσωμα (F). Πανομοιότυπες μέρος του προστάτη αδένα με ή χωρίς ανοσοδραστικό σήματα με τη μέθοδο του ενζύμου που παρατηρείται τόσο από το φως και μικροσκοπία φθορισμού (G-J). Στο μέρος ενός προστατικού αδένα με πολλά θετικά σήματα αντίσωμα (βέλη) (G), λίγο λιποφουσκίνης auto-φθορισμού (κεφαλή βέλους) παρατηρήθηκε στην πανομοιότυπη περιοχή (H). Αντίθετα, στο πλαίσιο μιας προστάτη αδένα χωρίς θετικές ενδείξεις αντίσωμα (Ι), ένα μεγαλύτερο επίπεδο lipofuscin auto-φθορισμού (αιχμές βελών) παρατηρήθηκε στην πανομοιότυπη περιοχή (J).

Η

επιβεβαίωσε επίσης ότι τα αποτελέσματα ανίχνευσης της κυτταροπλασματικά

P. acnes

και έκφραση πυρηνικών ΝΡ-κΒ σε προστάτη αδενικά επιθηλιακά κύτταρα ήταν σχεδόν η ίδια μεταξύ του immunoenzyme διπλής χρώσης και κοκτέιλ ανοσοχρώσης που χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των εικονικών διαφάνειες (Σχήμα 4). Ταυτόχρονη αξιολόγηση των

P. acnes

και την κατάσταση της NF-κΒ σε πανομοιότυπα τμήματα από κοκτέιλ ανοσοχρώση αποκάλυψε μια πανοραμική κατανομή των αδένων κατηγοριοποιούνται σε τέσσερις ομάδες ανάλογα με την εικονική διαφάνειες (Σχήμα 5).

Στο διπλό χρώση (αριστερή στήλη), τα θετικά σήματα ανιχνεύονται από τον PAL αντίσωμα (βέλη) και τα θετικά σήματα πυρηνικής από αντι-ΝΡ-κΒ αντίσωμα (βέλη) έγιναν ορατά με μπλε και καφέ χρώματα, αντίστοιχα. Στην χρώση κοκτέιλ (δεξιά στήλη), και τα δύο από τα θετικά σήματα κατέστησαν ορατά με το καφετί χρώμα. Εκπρόσωπος αδένες που κατηγοριοποιούνται σε κάθε μία από τις τέσσερις ομάδες ανάλογα με την κατάσταση της ενδοεπιθηλιακής

P. acnes

μόλυνση και έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ παρουσιάζονται σε κάθε σειρά. Τα αποτελέσματα από αυτές τις παραμέτρους ήταν η σχεδόν ίδιες μεταξύ immunoenzyme διπλό χρώσης και κοκτέιλ ανοσοχρώση. . NNF-κΒ: πυρηνική NF-κΒ

Η

Αριστερά, δείγμα του καρκίνου του προστάτη (Α)? δεξιά, δείγμα ελέγχου (Β). Κόκκινους κύκλους, αδένες και με τα δύο

P. acnes έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ

και? κίτρινο κύκλους, αδένες με

P. acnes

αλλά όχι έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ? μπλε κύκλους, αδένες με την έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ αλλά όχι

P. acnes

? και άσπρο κύκλους, αδένες ούτε με

P. acnes

ούτε έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ. Μαύρες γραμμές δείχνουν τη διαχωριστική γραμμή ανάμεσα στην περιφερειακή ζώνη (PZ) και μεταβατική ζώνη (ΤΖ). Συνολικός αριθμός των αδένων που εξετάστηκαν από τον αναλυτή εικονική διαφάνεια ήταν 1.894 στο δείγμα (Α) από έναν ασθενή με καρκίνο του προστάτη και 1.465 του δείγματος (Β) από έναν ασθενή με καρκίνο της ουροδόχου κύστης, αλλά χωρίς καρκίνο του προστάτη. Σημειώστε ότι παρατηρήθηκαν περισσότερο κόκκινο και κίτρινο κύκλους στην περιοχή PZ του δείγματος καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση τόσο με το ΡΖ και ΤΖ περιοχές του δείγματος ελέγχου, καθώς και στην περιοχή ΤΖ του δείγματος καρκίνου του προστάτη.

Η

κυττάρων καρκίνου του προστάτη, στις περισσότερες περιπτώσεις ήταν αρνητικά για το αντίσωμα PAL, με τρεις εξαιρετικές περιπτώσεις (Σχήμα 2G-η). Η κατοχική περιοχή των καρκινικών αδένων με

P. acnes

λοίμωξη σε ολόκληρη την περιοχή της βλάβης του καρκίνου στο τμήμα ήταν 5% σε μία περίπτωση και λιγότερο από 1% στις άλλες δύο περιπτώσεις. PAL-θετικά μακροφάγα στρωματικά ανιχνεύθηκαν σε 13 (46%) του 28 καρκινικών ιστών.

συχνότητα ανίχνευσης

P. acnes

στον προστάτη

Ενδοεπιθηλιακή

P. acnes

των μη καρκινικών προστατικών αδένων ανιχνεύθηκε σε όλα τα δείγματα, και παρατηρήθηκαν μακροφάγα στρωματικών με το βακτήριο σε 27 από 28 δείγματα καρκίνου και 14 από 18 δείγματα ελέγχου.

Η διάμεση [25

ου και 75

ου εκατοστημόρια] συχνότητας (%) των αδένων του προστάτη με ενδοεπιθηλιακή

P. acnes

ήταν 14,4 [8,8, 28,0] στην περιοχή PZ και 4,9 [2,4, 9,1] στην περιοχή ΤΖ των δειγμάτων καρκίνου (Σχήμα 6Α). Σε δείγματα ελέγχου, η συχνότητα ήταν 4.3 [1.3, 8.1] στην περιοχή PZ και 1.6 [1.1, 3.2] στην περιοχή TZ. Η συχνότητα ήταν σημαντικά υψηλότερη σε δείγματα καρκίνου του ό, τι σε δείγματα ελέγχου και στις δύο ΡΖ και περιοχές ΤΖ. Σε αμφότερα τα δείγματα καρκίνου και ελέγχου, η συχνότητα ήταν σημαντικά υψηλότερη στην περιοχή PZ ό, τι στην περιοχή ΤΖ.

Συχνότητα (%) του

P. acnes

-θετικό αδένες (Α) ή πυρηνικά ΝΡ-κΒ-θετικά αδένες (Β), και ο συνολικός αριθμός των

P. acnes

-θετικό στρωματικά μακροφάγα (C) στις περιφερειακές και μεταβατικές ζώνες του καρκίνου του προστάτη (PCA) και των δειγμάτων ελέγχου.

P-τιμές

προσαρμόστηκαν για πολλαπλές συγκρίσεις (4 συγκρίσεις σε κάθε πλευρά) με τη μέθοδο Holm του. NS:. Δεν είναι σημαντική

Η

Ο διάμεσος αριθμός των μακροφάγων στρωματικών με

P. acnes

ήταν 30 [10, 82] στην περιοχή PZ και 12 [3,35] στην περιοχή TZ των δειγμάτων καρκίνου, ενώ ο μέσος αριθμός ήταν 2 [0, 32] και 5 [0, 7] σε έλεγχο δείγματα, αντιστοίχως (Σχήμα 6C). Ο αριθμός των στρωματικών μακροφάγων ήταν σημαντικά υψηλότερη στα δείγματα του καρκίνου από ότι στα δείγματα ελέγχου τόσο στην ΡΖ και περιοχές ΤΖ. Σε δείγματα του καρκίνου, ο αριθμός ήταν σημαντικά υψηλότερη στην περιοχή PZ ό, τι στην περιοχή ΤΖ. Οι αριθμοί του

P. acnes

-θετικό μακροφάγα στρωματικά συσχετίζονται με τις συχνότητες του

P. acnes

-θετικό αδένες στην περιοχή PZ των δειγμάτων καρκίνου (ο συντελεστής Spearman είναι = 0.47,

σ

= 0,015).

συχνότητας ανίχνευσης πυρηνικών NF-κΒ

έκφρασης

Πυρηνική ΝΡ-κΒ έκφραση αδενικών επιθηλιακών κυττάρων ανιχνεύθηκε σε όλα τα δείγματα. Στα δείγματα καρκίνου, η διάμεση συχνότητα (%) του ΝΡ-κΒ-θετικών αδένες ήταν 17,1 [10,3, 31,4] στην περιοχή PZ και 7,1 [2,8, 14,8] στην περιοχή ΤΖ (Σχήμα 6Β). Σε δείγματα ελέγχου, η συχνότητα ήταν 7,3 [4,4, 11,1] στην περιοχή PZ και 4.4 [2.1, 11.3] στην περιοχή TZ. Στην περιοχή ΡΖ, η συχνότητα ήταν σημαντικά υψηλότερη σε δείγματα καρκίνου του ό, τι σε δείγματα ελέγχου. Σε δείγματα καρκίνου, η συχνότητα ήταν σημαντικά υψηλότερη στην περιοχή PZ από ό, τι στη ζώνη του TZ.

Συσχέτιση

P. acnes

μόλυνση και την πυρηνική NF-κΒ έκφραση

Σε δείγματα του καρκίνου, η μέση συχνότητα (%) των πυρηνικών έκφρασης NF-κΒ των αδένων με

P. acnes

ήταν 27,6 [18,3, 47,5] στην περιοχή PZ και 14.0 [5.8, 25.6] στην περιοχή TZ, ενώ διάμεση συχνότητα των αδένων με την έκφραση της πυρηνικής NF-κΒ, αλλά χωρίς να

P. acnes

ήταν 15,9 [9,0, 27,2] στην περιοχή PZ και 6,7 [2,7, 13,7] στην περιοχή ΤΖ (Σχήμα 7Α). Σε δείγματα ελέγχου, η συχνότητα σε

P. acnes

-θετικό αδένες ήταν 17.8 [8.9, 24.8] στην περιοχή PZ και 13.0 [1.3, 36.1] στην περιοχή TZ, ενώ η συχνότητα στο

P. acnes

-αρνητική αδένες ήταν 7,2 [4,1, 10,9] στην περιοχή ΡΖ και 4,1 [2,0, 10,7] στην περιοχή ΤΖ (Σχήμα 7Β). Οι συχνότητες της έκφρασης πυρηνικών NF-κΒ ήταν σημαντικά υψηλότερα σε

P. acnes

-θετικό αδένες από ό, τι στο

P. acnes

-αρνητική αδένες στο ΡΖ και TZ περιοχών και των δύο δειγμάτων καρκίνου και ελέγχου.

Συχνότητα (%) της έκφρασης πυρηνικών NF-κΒ στους αδένες, με ή χωρίς κυτοπλασμική

P. acnes

στις περιφερειακές ή μεταβατικών ζωνών του καρκίνου του προστάτη (Α) και τον έλεγχο του προστάτη (Β) δείγματα.

P-τιμές

προσαρμόστηκαν για πολλαπλές συγκρίσεις (2 συγκρίσεις σε κάθε πλευρά) με τη μέθοδο Holm του.

Η

Συσχέτιση μεταξύ της φλεγμονής και

P. acnes

καθεστώς μόλυνσης ή ΝΡ-κΒ

ενεργοποίηση

Βαθμού της οξείας ή χρόνιας φλεγμονής στο PZ ή ΤΖ περιοχές των καρκινικών και ελέγχου δείγματα παρουσιάζεται στο Σχήμα 8. Σε αμφότερα ΡΖ και περιοχές ΤΖ, ο βαθμός της φλεγμονής δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των καρκινικών και ελέγχου δείγματα. Ο βαθμός της οξείας ή χρόνιας φλεγμονής δεν συσχετίζεται είτε με την συχνότητα των αδένων με κυτταροπλασματικά

P. acnes

ή τη συχνότητα των αδένων με έκφραση πυρηνικών NF-κΒ.