Αφηρημένο

Ιστορικό

Είμαστε με στόχο να αξιολογηθεί η κλινική σημασία της πυκνότητας μικροαγγείων (MVD), λεμφική πυκνότητα των αγγείων (LVD) και σχετίζονται με τον καρκίνο ινοβλάστες (CAFS) σε σχέση με την θέση του όγκου στο προχωρημένο καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC).

Μέθοδοι

Χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία, εξετάσαμε 181 ασθενείς με προχωρημένο CRC για CD31 και D2-40 να μετρήσει MVD και LVD, αντίστοιχα, α-λείου μυός ακτίνη (SMA) και δεσμίνης για τον εντοπισμό CAFS, και ΡΤΕΝ να εξετάσει γενετικές αλλαγές του CAFS. Για να αξιολογηθεί η περιφερειακή ετερογένεια αυτών των ιδιοτήτων, εξετάσαμε ιστό από τέσσερις θέσεις (το κέντρο και την περιφέρεια του πρωτογενούς καρκίνου, ένα μακρινό μετάσταση, και μια μετάσταση λεμφαδένα) σε κάθε ασθενή.

Αποτελέσματα

MVD, LVD, και CAFS παρουσίασαν σημαντική ετερογένεια σε σχέση με τη θέση του όγκου. LVD ήταν η μεγαλύτερη στο κέντρο των πρωτογενών καρκίνων και το ποσό της CAFS ήταν η χαμηλότερη σε απομακρυσμένες μεταστάσεις. Σε απομακρυσμένες μεταστάσεις, εκείνων που προέρχονται από τον πνεύμονα είχαν υψηλότερα LVD και MVD, αλλά λιγότερες CAFS από εκείνα από το ήπαρ, το περιτόναιο, ή των ωοθηκών. Οι ασθενείς με χαμηλή MVD και LVD στο κέντρο του πρωτογενούς καρκίνου του είχε χειρότερα αποτελέσματα και οι ασθενείς με λίγες CAFS σε απομακρυσμένων μεταστάσεων και του πρωτοπαθούς όγκου είχαν χαμηλότερο ποσοστό επιβίωσης. έκφραση ΡΤΕΝ σε CAFS σε απομακρυσμένες μεταστάσεις χάθηκε σε 11 από 181 ασθενείς CRC (6,1%), η οποία σχετίζεται με χειρότερη πρόγνωση.

Συμπεράσματα

Το μικροπεριβάλλον, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου που σχετίζονται με μικροαγγειακό και ινοβλάστες, είναι ετερογενής σε σχέση με τη θέση του όγκου σε ασθενείς CRC. Ως εκ τούτου, θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη η ετερογένεια των μικροπεριβάλλοντα κατά τη διαχείριση CRC ασθενείς

Παράθεση:. Kwak Y, Lee HE, Κιμ WH, Kim DW, Kang SB, Lee ΕΣ (2014) η κλινική επίπτωση σχετίζονται με τον καρκίνο μικροαγγείωση και ινοβλαστών στον τομέα των προηγμένων καρκίνο του παχέος εντέρου Οι ασθενείς με σύγχρονη ή Metachronous μεταστάσεις. PLoS ONE 9 (3): e91811. doi: 10.1371 /journal.pone.0091811

Επιμέλεια: Αντώνης W. I. Lo, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 11 Γενάρη του 2014? Αποδεκτές: 14 Φεβ 2014? Δημοσιεύθηκε: 18 Μαρτίου, 2014

Copyright: © 2014 Kwak et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τον αριθμό επιχορήγηση 03-2011-012 από το Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο Ταμείο Έρευνας. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Παρά το γεγονός ότι τα ποσοστά θνησιμότητας από καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC) των ασθενών έχει μειωθεί στις περισσότερες δυτικές χώρες και σε πολλές αναπτυσσόμενες χώρες της Ασίας, ασθενείς με προχωρημένο CRC που υπάρχει αρχικά με το στάδιο IV της νόσου ή εκείνα που αναπτύσσουν απομακρυσμένες μεταστάσεις αρκετούς μήνες μετά διάγνωση εξακολουθούν να έχουν ένα χαμηλότερο ποσοστό πενταετούς επιβίωσης [1], [2] ._ ENREF_4 Πρόσφατα, το εύρος της συστημικής χημειοθεραπείας έχει επεκταθεί και στοχευμένη θεραπεία, συμπεριλαμβανομένων του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) και του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) θεραπειών αναστολής , έχουν χρησιμοποιηθεί σε ασθενείς με προχωρημένο CRC, αυξάνοντας την επιβίωση των ασθενών [3]. Ωστόσο, ορισμένοι ασθενείς CRC μικρή ανταπόκριση σε στοχευμένη θεραπεία, παρά παρουσιάζοντας θετικά αποτελέσματα σε στοχευμένες μελέτες μετάλλαξης θεραπεία ειδικά [4]. Μια πιθανή εξήγηση γι ‘αυτή την θεραπευτική αποτυχία είναι η ετερογένεια του όγκου? αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι CRCs έχουν μια ετερογενή γονότυπο ή φαινότυπο, συμπεριλαμβανομένων των

KRAS

, p53, και

BRAF

[5] – [7]. Ως εκ τούτου, τα διαφορετικά χαρακτηριστικά του πρωτογενούς όγκου και η αντίστοιχη μεταστατικό ανάγκη όργανο να αποσαφηνιστεί για να βελτιωθεί η διαχείριση των ασθενών με μεταστατικό CRC ασθένειες. Επιπλέον, η κατανόηση των κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά της προηγμένης CRC είναι σημαντική για την ανάπτυξη και τη βελτίωση της συστηματικές θεραπείες.

Από Paget et al. περιγράφηκε για πρώτη φορά το μικροπεριβάλλον του καρκίνου με τη θεωρία «σπόρου και εδάφους» [8], υπήρξε αυξανόμενες ενδείξεις ότι σχετίζονται με τον καρκίνο στρώμα θα μπορούσε να επηρεάσει τα ίδια τα καρκινικά κύτταρα και να συμβάλει στην πρόοδο του καρκίνου [9]. Τα κύρια συστατικά του μικροπεριβάλλοντος καρκίνου είναι μικροαγγείωση (μικροαγγείων και λεμφαγγείων), φλεγμονώδη κύτταρα, και του καρκίνου που σχετίζεται με ινοβλάστες (CAFS) [10] – [12]. Η τρέχουσα μέθοδος επαλήθευσης αγγειογενετική και lymphangiogenetic δραστηριότητα σε καρκινικό ιστό είναι να εκτιμηθεί η πυκνότητα μικροαγγείων (MVD) και του λεμφικού πυκνότητα αγγείων (LVD), αντίστοιχα. MVD έχει προταθεί ως υποκατάστατος δείκτης του καρκίνου που σχετίζεται με την αγγειογένεση για τον εντοπισμό ασθενών με υψηλό κίνδυνο υποτροπής ή εκείνων με φτωχή πρόγνωση για διάφορους καρκίνους συμπεριλαμβανομένου CRC [13], [14]? Ωστόσο, η προγνωστική συσχέτιση της αγγειογένεσης σε CRC είναι ακόμα αμφιλεγόμενη [15], [16]. Παρόμοια με αγγειογένεση, LVD έχει λάβει το ενδιαφέρον ως μέσο λεμφικού μετάσταση και επιβίωση [17], [18], αλλά ο ρόλος του στην πρόοδο του όγκου είναι ακόμη ασαφής [19]. Η άλλη σημαντική συνιστώσα του στρώματος, CAFS, ενεργοποιούνται με συνέπεια και να επηρεάσει πολλές πτυχές της έναρξης του όγκου, την εισβολή και την εξέλιξη [9]. Ενώ μερικές μελέτες έχουν δείξει ότι μπορεί να αναστέλλει CAFS προόδου του όγκου [20], [21], άλλες μελέτες έχουν προτείνει ότι CAFS μπορεί να προωθήσει την εξέλιξη στον προστάτη, του μαστού, και καρκίνων του δέρματος [22] – [24]. Στο πλαίσιο της CRC, Tsujino et al. έχουν προτείνει ότι α-λείου μυός ακτίνη (SMA) εκφράζοντα CAFS θα μπορούσε να είναι ένας χρήσιμος δείκτης της κακής πρόγνωσης. Ωστόσο, αυτά τα αποτελέσματα περιορίστηκαν σε στάδιο II και III CRCs [25].

Εκτός από τα καρκινικά κύτταρα, γενετικές αλλοιώσεις σε CAFS απέδειξαν συμπεριλαμβανομένης της απώλειας της ετεροζυγωτίας, αστάθεια μικροδορυφόρου, και γενετικές μεταλλάξεις [26], [27]. Πρόσφατα, γενετική απενεργοποίηση του ΡΤΕΝ σε CAFS αναφέρθηκε σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού [28]. Trimboli et al. διαπίστωσε ότι η απώλεια PTEN σε στρωματικά ινοβλάστες οδήγησε σε εκτεταμένη εξωκυττάρια μήτρα αναδιαμόρφωση και την αγγειογένεση που χαρακτηριστικό της εξέλιξης του όγκου [28]. Ωστόσο, η απώλεια της έκφρασης της PTEN και η κλινική σημασία του δεν έχει διερευνηθεί σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν η διερεύνηση των χαρακτηριστικών των μικροπεριβάλλοντα, συμπεριλαμβανομένων microvasculatures και CAFS, σε ασθενείς με προχωρημένο CRC. Επιπλέον, εκτιμήσαμε την εντός του όγκου ετερογένεια στον πρωτογενή όγκο και την ασυμφωνία μεταξύ του πρωτογενούς όγκου και μακρινό μικροπεριβάλλοντα μετάσταση.

Υλικά και Μέθοδοι

επιλογή των ασθενών

Ένα σύνολο από 181 προηγμένων ασθενείς CRC με σύγχρονη ή metachronous μεταστάσεις, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία στο Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο (Seongnam-σι, Νότια Κορέα) μεταξύ του 2003 και του 2009, εντάχθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Σύγχρονοι μεταστάσεις ορίστηκαν ως απομακρυσμένες μεταστάσεις συμβαίνουν εντός έξι μηνών από την πρώιμη διάγνωση του CRC και metachronous μεταστάσεις ήταν εκείνα που συμβαίνουν μετά από αυτό το χρονικό σημείο [29]. Ο ιστός του καρκίνου χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη αυτή δεν ελήφθη από τους ασθενείς που είχαν χειρουργική εκτομή τόσο του πρωτογενούς όγκου και των συναφών μεταστάσεων. Κανένας από τους ασθενείς είχαν λάβει χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν από την εκτομή του πρωτογενούς όγκου. Ιατρικές διαγράμματα και τις εκθέσεις παθολογίας επανεξετάστηκαν για την καταγραφή των κλινικών και παθολογικών δεδομένων. γυάλινα πλακίδια εξετάστηκαν για να καθορίσει τον ιστολογικό τύπο σύμφωνα με την ταξινόμηση του ΠΟΥ [30]. συλλέχθηκαν πληροφορίες παρακολούθησης, συμπεριλαμβανομένης της έκβασης των ασθενών και το χρονικό διάστημα μεταξύ της ημερομηνίας της χειρουργικής εκτομής και του θανάτου. Οι περιπτώσεις που έχασε από την παρακολούθηση και οι θάνατοι από αιτίες εκτός από CRC θεωρήθηκαν λογοκρισία στοιχεία για την ανάλυση επιβίωσης. Η μέση περίοδος παρακολούθησης ήταν 37,9 μήνες (εύρος, 0,8 έως 104,6 μήνες).

Ηθικοί κανόνες

Όλα τα ανθρώπινα δείγματα ελήφθησαν από τα αρχεία του χειρουργικά περιπτώσεις που εξετάστηκαν στο Τμήμα Παθολογίας , Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο για την παθολογική διάγνωση. Η αναδρομική μελέτη πραγματοποιήθηκε με τη χρήση των αποθηκευμένων δειγμάτων μετά την παθολογική διάγνωση, και όλα τα δείγματα είχαν ανώνυμα πριν από τη μελέτη. Οι συμμετέχοντες δεν παρέχουν γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση σε αυτή τη μελέτη. Η μελέτη εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Εθνικού Πανεπιστημίου της Σεούλ Bundang Νοσοκομείο υπό τον όρο της ανωνυμίας. (Αναφορά: Β-1109 /136-302)

μεθόδους σειρά ιστών

Για να αξιολογηθεί η περιφερειακές διαφορές στρωματικά, ελήφθησαν δείγματα από κάθε ασθενή από τέσσερις τομείς: το κέντρο και την περιφέρεια του πρωτογενούς καρκίνου, απομακρυσμένων μεταστάσεων, και μεταστάσεις λεμφαδένα. Οι μακρινές μεταστατικές θέσεις για τις συστοιχίες των ιστών είχαν ως εξής: ήπατος σε 83 περιπτώσεις (45,9%), των πνευμόνων σε 38 περιπτώσεις (21,0%), ιχθυαποθέματα σε 38 περιπτώσεις (21,0%), μακρινή λεμφαδένες σε 6 περιπτώσεις (3,3%), και ωοθήκη σε 16 περιπτώσεις (8,3%). Τα δείγματα ιστών εκπρόσωπος πυρήνα (διαμέτρου 2 mm) πάρθηκαν από μεμονωμένα μπλοκ παραφίνης και ανακατατάξεις στο νέο μπλοκ συστοιχία ιστού χρησιμοποιώντας μια συσκευή τρυπάνι (Superbiochips Laboratories, Σεούλ, Νότια Κορέα) [31].

Ανοσοϊστοχημεία

διαφάνειες Array σημάνθηκαν με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας αντισώματα για CD31 (1:100, ϋΑΚΟ, Glostrup, Δανία), D2-40 (1:100, ϋΑΚΟ), SMA (1:1000, NeoMarkers, Fremont, CA, USA ), δεσμίνης (1:300, ϋΑΚΟ) και PTEN (1:80, Epitomics, Burlingame, CA, USA) μετά από μια διαδικασία ανάκτησης αντιγόνου φούρνο μικροκυμάτων, εκτός από την SMA. Μη δραστικές θέσεις αποκλείστηκαν χρησιμοποιώντας 1% ορό αλόγου σε Tris-ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα (ρΗ 6,0) για 3 λεπτά. Πρωτογενή αντισώματα εφαρμόστηκαν και η δέσμευση του αντισώματος ανιχνεύθηκε με διαμινοβενζιδίνη (DAB). Οι τομές με αιματοξυλίνη. Η αντιδραστικότητα του ΡΤΕΝ σε κάθε τμήμα του ιστού βαθμολογήθηκε ως αρνητικό, εξασθενημένο ή ισχυρή, και το ποσοστό των θετικών ΡΤΕΝ-ινοβλάστες ποσοτικοποιήθηκε. Για τη στατιστική ανάλυση, το δείγμα κρίθηκε PTEN-θετική εάν το 5% ή περισσότερο CAFS βαθμολογήθηκαν ως ισχυρά θετικά.

Υπολογισμός του LVD, MVD και CAFS χρήση ψηφιακής παθολογίας

Τα πλακίδια ταυτόχρονα αξιολογήθηκαν από δύο παθολόγους (HEL και HSL) χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φωτός για να βελτιώσει την ακρίβεια των αποτελεσμάτων (Εικ. 1). κύτταρα CRC θεωρήθηκαν ως εσωτερικά αρνητικοί μάρτυρες. Μεσοπρόθεσμη έως μεγάλου μεγέθους σκάφη θεωρήθηκαν ως εσωτερικοί θετικοί έλεγχοι για CD31 και D2-40. Εντερική μυϊκό στρώμα ή μεσαίου έως μεγάλου μεγέθους σκάφη θεωρήθηκαν ως εσωτερικοί θετικοί έλεγχοι για δεσμίνη και SMA. Δείγματα που δείχνει ακατάλληλη χρώση σε εσωτερική αρνητική ή θετικοί έλεγχοι θεωρήθηκαν μη κατατοπιστική και εξαιρέθηκαν από την ανάλυση. Διαφάνειες σαρώθηκαν χρησιμοποιώντας ένα όργανο Aperio ScanScope® CS (Aperio Technologies, Inc., Vista, CA) σε 20 × μεγέθυνση. Στη συνέχεια, αναλύθηκαν σε ImageScope ™ χρησιμοποιώντας τον αλγόριθμο v1 μικροαγγείων Ανάλυση (Aperio Technologies), και MVD και LVD υπολογίστηκαν. Επειδή δεσμίνης-θετικά μυϊκό βλεννογόνο και propria είναι θετικές για την SMA ανοσοχρώση, η περιοχή του CAFS (mm

2) υπολογίστηκε αφαιρώντας τις περιοχές βαφή δεσμίνης από εκείνη της χρώσης SMA. (SMA – δεσμίνης)

Η στατιστική ανάλυση

Ένα τεστ chi-τετράγωνο ή ακριβές τεστ του Fisher (2 όψεων) για τη μη συνεχείς μεταβλητές και Mann-Whitney ή ανάλυση για τις συνεχείς μεταβλητές Kruskal-Wallis χρησιμοποιήθηκαν για τη σύγκριση κάθε παράμετρο με σχέση με τη θέση CRC και σύμφωνα με κλινικοπαθολογική δυνατότητές του. Η συσχέτιση μεταξύ συνεχείς μεταβλητές αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το συντελεστή συσχέτισης Pearson. Για να προσδιορίσετε τις καλύτερες cut-offs των συνεχών μεταβλητών για την πρόβλεψη της επιβίωσης των ασθενών, η μέγιστη μέθοδος chi-τετράγωνο πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του προγράμματος R (https://cran.r-project.org/). Οι συνολικές καμπύλες επιβίωσης χαράχθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του προϊόντος-ορίου Kaplan-Meier και η σημαντικότητα των διαφορών ανάμεσα σε αυτές τις καμπύλες προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Μία μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μοντέλο αναλογικών κινδύνων του Cox του να καθορίζει αναλογίες κινδύνου (HR).

P

-τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις, με εξαίρεση τη μέγιστη δοκιμασία chi-τετράγωνο, έγινε με τις στατιστικές IBM SPSS 20 (Armonk, NY, USA).

Αποτελέσματα

1. Ετερογένεια του καρκίνου που σχετίζονται με στρώμα σύμφωνα με εξετάζονται θέσεις όγκου

Τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά των ασθενών με προχωρημένο CRC που περιγράφονται στον Πίνακα 1. Οι ασθενείς CRC με σύγχρονη μεταστάσεις είχαν επιθετικές δυνατότητες, όπως μεγαλύτερο μέγεθος του όγκου, πιο προηγμένες Pt και pN στάδιο, και η παρουσία του περινευρικό και φλεβική εισβολή από τους ασθενείς με metachronous μετάσταση (p & lt? 0,05).

η

Οι ετερογενείς τιμές για LVD, MVD, και την περιοχή CAF φαίνεται στο σχήμα 2. LVD ήταν το υψηλότερο στο κέντρο των πρωτογενών καρκίνων (διάμεση τιμή, διατεταρτημοριακό εύρος (IQR)? 37,00, 10,50 – 81,00) από οποιαδήποτε άλλη περιοχή (5,00, 1,00 έως 23,75 στην περιφέρεια? 2,50, 1,00 έως 15,00 σε μεταστάσεις λεμφαδένων? 3,00, 1,00 -20.00 σε απομακρυσμένες μεταστάσεις). MVD ήταν χαμηλότερη σε απομακρυσμένες μεταστάσεις (διάμεση τιμή, IQR? 641,50, 428,00 έως 1006,75) από ό, τι στην περιφέρεια του πρωτογενούς καρκίνου (731,00, 508,25 – 1049,75) και λεμφαδενικές μεταστάσεις (893,50, 520,25 έως 1275,25). Η περιοχή που καταλαμβάνεται από CAFS ήταν η χαμηλότερη στις απομακρυσμένες μεταστάσεις (διάμεση τιμή, IQR? 0,91, 0,68 – 1,18) από ό, τι οποιοδήποτε άλλο site (1,12, 0,88 – 1,41 στο κέντρο? 1,22, 0,96 έως 1,54 στην περιφέρεια, 1.40, 1.00- 1,71 σε μεταστάσεις λεμφαδένων). Επιπλέον, τα χαρακτηριστικά στρωματικά ποικίλουν σε σχέση με το μεταστατικό όργανο που εξετάστηκαν. MVD και LVD ήταν το υψηλότερο σε μεταστάσεις πνεύμονα από εκείνες στο ήπαρ, περιτόναιο ή λεμφαδένες (ρ & lt? 0,001? Εικ. 3). Ωστόσο, τα ποσά των CAFS ήταν συνεπείς μεταξύ των διαφόρων μεταστατικό όργανα (p = 0,180).

Η ΔΕΛ (Α), MVD (Β) και την περιοχή CAF (C) ήταν σημαντικά διαφορετικό ανάλογα με την εντόπιση του όγκου.

η

Τα χαρακτηριστικά του καρκίνου που σχετίζονται με στρώμα διέφερε σε σχέση με το μεταστατικό ιστοσελίδα. LVD (Α) και MVD (Β) ήταν μεγαλύτερη στα μεταστατικά καρκινικά δείγματα που συλλέγονται από τον πνεύμονα από ό, τι στα δείγματα που συλλέγονται από άλλες μεταστατικές θέσεις (ρ & lt? 0.001). Ωστόσο, το ποσό της CAFS δεν ήταν σημαντική διαφορετική μεταξύ μεταστατικές θέσεις (C).

Η

Παρά την ετερογένεια των χαρακτηριστικών στρωματικών, CRC περιπτώσεις με υψηλότερα LVD, MVD και CAFS στο κέντρο των πρωτογενών καρκίνων είχε τάση των υψηλότερων LVD, MVD και CAFS στην περιφέρεια (p & lt? 0,05? Πίνακας S1). Ωστόσο, LVD στο κέντρο και στην περιφέρεια του πρωτογενούς καρκίνου δεν συσχετίστηκαν με LVD σε συναφείς μακρινή μετάσταση (Πίνακας S1). Επιπλέον, το ποσό της μικροκυκλοφορίας συσχετίστηκε σημαντικά με το ποσό των CAFS (Πίνακας S2).

2. Κλινική σημασία του καρκίνου που σχετίζονται με στρώμα σε προχωρημένο CRCs

Η MVD, LVD, και το ποσό των CAFS παρόντες σε κάθε θέση του όγκου συγκρίθηκαν σύμφωνα με κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά τους (Πίνακας 2). Υψηλής ποιότητας CRCs συσχετίστηκαν με χαμηλότερες CAFS σε δείγματα που λαμβάνονται από την κεντρική ιστοσελίδα του καρκίνου (p = 0,041). Σε σύγκριση με σύγχρονη μεταστάσεις, οι ασθενείς με μεταστάσεις metachronous είχαν υψηλότερες LVD στο κέντρο και την περιφέρεια του πρωτογενούς καρκίνου και είχαν υψηλότερο MVD σε μεταστάσεις λεμφαδένα. Οι περισσότεροι ασθενείς με μεταστάσεις metachronous υποβλήθηκαν σε θεραπεία με επικουρική χημειοθεραπεία πριν metastasectomy. LVD και MVD στις απομακρυσμένες μεταστάσεις ήταν σημαντικά υψηλότερη στους ασθενείς που είχαν υποβληθεί σε χημειοθεραπεία πριν metastasectomy από εκείνους που δεν το έκανε (p = 0,011 και 0,048, αντίστοιχα).

Η

3. απώλεια Έκφραση ΡΤΕΝ σε CAFS

ΡΤΕΝ εκφράστηκε σε κυτταρόπλασμα και μερικές φορές ο πυρήνας τόσο καρκίνου και μη νεοπλασματικά κύτταρα όταν εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Η έκφραση της ΡΤΕΝ χάθηκε σε 8 περιπτώσεις στο κέντρο, 2 περιπτώσεις στην περιφέρεια, 4 περιπτώσεις στις μεταστάσεις λεμφαδένα, και 11 περιπτώσεις σε απομακρυσμένες μεταστάσεις (Πίνακας S3). Σε όλες τις 11 απομακρυσμένες μεταστάσεις με απώλεια του ΡΤΕΝ, η έκφραση ΡΤΕΝ ήταν άθικτο τόσο στο κέντρο και την περιφέρεια του πρωτοπαθούς καρκίνου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). απώλεια PTEN στην μακρινή μετάσταση συσχετίστηκε με σύγχρονη μετάσταση (p = 0,018).

4. Σχετίζονται με τον καρκίνο στρώμα και ασθενή πρόγνωση

Με τη χρήση των λαμβανόμενων cut-offs, κάτω LVD, MVD και CAFS στο κέντρο, LVD και CAFS στην περιφέρεια και MVD και CAFS σε απομακρυσμένες μεταστάσεις ήταν όλοι συσχετίστηκε σημαντικά με χαμηλότερο επιβίωση (ρ & lt? 0,05? Εικ. S1). Μεταξύ άλλων κλινικοπαθολογικοί χαρακτηριστικά, σύγχρονη μετάσταση, τα γηρατειά, μεγαλύτερο μέγεθος, υψηλή ιστολογική ποιότητας, προηγμένο Pt και pN στάδιο και παρουσία περινευρικό εισβολή συσχετίστηκαν με χειρότερη πρόγνωση (Πίνακας 3). Με την πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox, η αναλογία κινδύνου της σύγχρονης έναντι metachronous ήταν το υψηλότερο (4.029) με τη χαμηλότερη τιμή p (p & lt? 0.001). CAFS στο μακρινό μετάσταση, LVD και MVD στο κέντρο, LVD στην περιφέρεια, την ηλικία, και περινευρικό εισβολή, επίσης, προέβλεψε ανεξάρτητα επιβίωση των ασθενών. Επιπλέον, η απώλεια της έκφρασης ΡΤΕΝ σε CAFS σε απομακρυσμένες μεταστάσεις σχετίστηκε με χειρότερη πρόγνωση (p = 0,042? Σχ S2), αλλά όχι σε πρωτοπαθή καρκίνο ή λεμφαδένες μετάσταση στους λεμφαδένες

Η

Συζήτηση

.

καρκίνωμα κυττάρων σε διαφορετικές περιοχές του ιστού έχουν διακριτά χαρακτηριστικά [32]. Σε κεντρικές περιοχές του όγκου, κύτταρα καρκινώματος διατηρούν ένα επιθηλιακό κυτταρικό φαινότυπο, αλλά κύτταρα καρκινώματος στο μεταναστευτικό μέτωπο αποκτήσουν μια πιο κακοήθεις και μεσεγχυματικών φαινότυπο και πιστεύεται ότι έχουν αυξημένη ικανότητα μεταναστευτικών και συμβάλλουν στην μεταστατικών παθήσεων. Αυτά τα μεταστατικά κύτταρα μπορεί να αποκαταστήσει τον επιθηλιακό φαινότυπο σε μεταστατικές θέσεις [33]. Εκτός από κύτταρα καρκινώματος εαυτό τους, μικροπεριβάλλον προτείνεται να είναι άνιση μέσα σε ένα δεδομένο όγκο, επειδή ο σχηματισμός και την εξέλιξη του όγκου περιλαμβάνει τη συν-εξέλιξη των καρκινικών κυττάρων και μικροπεριβάλλοντα [34]. Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι ο καρκίνος σχετίζεται με μικροπεριβάλλον είχε επίσης διακριτά χαρακτηριστικά σε διάφορους τομείς. Από τις θέσεις που εξετάστηκαν, LVD ήταν υψηλότερη στο κέντρο του πρωτογενούς καρκίνου. MVD ήταν ελαφρώς υψηλότερο στο κέντρο από ό, τι στην περιφέρεια του πρωτογενούς καρκίνου, αλλά αυτή η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Είναι ενδιαφέρον ότι, η ποσότητα του CAFS σε απομακρυσμένων μεταστάσεων ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ό, τι στο κέντρο και την περιφέρεια του πρωτογενούς καρκίνου. Θα δείξουμε ότι το μικροπεριβάλλον στρωματικών έχει περιφερειακή ετερογένεια τόσο εντός του πρωτογενούς όγκου και μεταξύ της πρωτοβάθμιας ιστοσελίδα και τις σχετικές μεταστάσεις του. Επιπλέον, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η ετερογένεια στρωματικά μπορεί να οφείλονται στην ετερογένεια των όγκων. Ως εκ τούτου, θα ήταν χρήσιμο να εξετάσουμε τόσο στρωματικών όγκων και η ετερογένεια των κυττάρων, προκειμένου να διαχειριστούν ασθενείς CRC καλύτερα.

Είμαστε αξιολόγησε την MVD, LVD, και το ποσό των CAFS στο μεταστατικό ιστούς των διαφόρων οργάνων, συμπεριλαμβανομένων του ήπατος, των πνευμόνων , περιτοναϊκή σπορά, μακρινό λεμφαδένες, και των ωοθηκών. Των μεταστατικών όργανα που εξετάστηκαν, τόσο για Χαμηλή Τάση και MVD ήταν η υψηλότερη στον πνεύμονα. Σε προηγούμενη μελέτη μας, η

KRAS

ποσοστό ασυμφωνία ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερη σε συμφωνημένα μεταστάσεις στους πνεύμονες από ό, τι σε άλλα συμφωνημένα μεταστατικό όργανα [35]. Ο υποκείμενος μηχανισμός δεν είναι γνωστός. Θα μπορούσε να είναι ότι η πρωτογενής CRCs με υψηλή LVD και MVD έχουν την τάση να παράγουν μεταστάσεις στους πνεύμονες? Ωστόσο, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι LVD και MVD στο κέντρο και στην περιφέρεια των πρωτογενών καρκίνων ήταν χαμηλότερες στους ασθενείς με μεταστάσεις πνεύμονα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Εναλλακτικά, μπορεί να οφείλεται στις φυσιολογικά χαρακτηριστικά του μεταστατικού οργάνων, αλληλεπιδράσεις μεταξύ καρκινικών κυττάρων και μικροπεριβάλλοντος εντός του μεταστατικού όργανο, ή τα χαρακτηριστικά των καρκινικών κυττάρων κλώνους επιρρεπείς σε μετάσταση πνεύμονα. Ωστόσο, οι τεχνικές ή δειγματοληψία λάθη και μπορεί να είναι δυνατό, έτσι περαιτέρω μελέτες μεγάλης κλίμακας που απαιτούνται.

Αν και πολλές μελέτες έχουν προσπαθήσει να αποδείξει τη σύνδεση μεταξύ των χαρακτηριστικών μικροπεριβάλλον του όγκου και της επιβίωσης, οι προγνωστικές επιπτώσεις της MVD και LVD είναι ακόμα αμφιλεγόμενη. Ορισμένες μελέτες έχουν παρουσιαστεί ότι η ενεργή αγγειογένεση και λεμφαγγειογένεση αντιπροσωπεύεται από υψηλής MVD και LVD σχετίζονται με κακή πρόγνωση και επιθετική κλινικοπαθολογική παράγοντες [36], [37]. Πρόσφατη μετα-ανάλυση έδειξε ότι LVD συσχετίστηκε σημαντικά με την επιβίωση ελεύθερη νόσου, αλλά όχι τη συνολική επιβίωση [38]. Άλλες μελέτες έχουν αναφέρει καμία στατιστική σημασία της MVD και LVD στην επιβίωση [39]. Prall et al. Έχει αναφερθεί ότι η υψηλή MVD και LVD σχετίζονται με καλύτερη επιβίωση σε μία διαδοχική σειρά και ηπατικές μεταστάσεις [40]. Τα αποτελέσματα βασίστηκαν σε ασθενείς με προχωρημένη νόσο με μακρινή μετάσταση και δείξαμε ότι οι υψηλές MVD και LVD σχετίζονταν με βελτιωμένη επιβίωση. Αυτό μπορεί να συμβαίνει επειδή όλοι οι ασθενείς σε αυτή τη μελέτη είχαν επιβεβαιωθεί ότι έχουν μακρινή μετάσταση και microvasculatures θα μπορούσε να επηρεάσει ακόμα και την παράδοση του χημειοθεραπευτικού φαρμάκου εντός του όγκου. Ωστόσο, η μελέτη μας είχε κάποιους περιορισμούς όσον αφορά την ανάλυση επιβίωσης. Είμαστε εγγεγραμμένοι οι ασθενείς CRC με διαθέσιμα χειρουργικά καρκινικούς ιστούς τόσο από πρωτοπαθείς όγκους και τις αντίστοιχες μεταστατικούς όγκους. Δεν είναι όλοι οι ασθενείς με προχωρημένο CRC με μεταστατικό ασθένειες είχαν συμπεριληφθεί και πολύ προχωρημένες περιπτώσεις δεν εντάχθηκαν λόγω της αδυναμίας λειτουργίας τους. Ως εκ τούτου, μη αναγνωρισμένη προκαταλήψεις μπορεί να έχουν επηρεάσει τα αποτελέσματα επιβίωσή μας.

Μερικές μελέτες έχουν δείξει μια αντι-ογκογόνο δράση των ινοβλαστών [20], [21]. Ωστόσο, έχει γίνει σαφές ότι CAFS συμβάλλουν στην εξέλιξη του καρκίνου και προγνωστική σημασία τους σε διάφορους καρκίνους έχει επίσης αυξηθεί [41], και, επιπλέον, αρκετές μελέτες έχουν παρατηρηθεί γενετικές μεταβολές σε CAFS [26], [27]. απώλεια του ΡΤΕΝ του CAFS έχει παρατηρηθεί σε καρκίνο του μαστού και προγνωστική ένωση έχει προταθεί [27], [28]. Παρατηρήσαμε απώλεια PTEN του CAFS σε ασθενείς CRC και ήταν πιο συχνά παρατηρείται στις αντίστοιχες απομακρυσμένες μεταστάσεις. Προτείνεται ότι CAFS, όχι μόνο τα καρκινικά κύτταρα, έχουν αλλάξει την έκφραση του γονιδίου. Επιπλέον, η απώλεια του ΡΤΕΝ έκφρασης CAFS σε απομακρυσμένων μεταστάσεων συσχετίστηκε σημαντικά με την επιβίωση των ασθενών. Για τις γνώσεις μας, αυτά είναι τα πρώτα αποτελέσματα δείχνουν απώλεια PTEN σε CAFS σε ασθενείς με CRC. Παρά το γεγονός ότι απαιτείται περισσότερη έρευνα, αναμένουμε ότι θα μπορούσε να είναι ένας προγνωστικός παράγοντας σε ασθενείς CRC.

Σε μεγάλες μας ομάδα των ασθενών με προχωρημένο CRC με σύγχρονη και metachronous μακρινή μετάσταση, αποδείξαμε την περιφερειακή ετερογένεια των παραγόντων στρωματικών μικροπεριβάλλον σύμφωνα στη θέση του όγκου. Η ποσότητα του μικροαγγειακού μετρήθηκε με LVD και MVD ήταν επίσης ετερογενής σε σχέση με την μεταστατική όργανο που εξετάστηκαν. Με ανάλυση Cox παλινδρόμησης, κέντρο LVD και MVD, περιφέρεια LVD και CAFS στη μακρινή μετάσταση συσχετίστηκαν ανεξάρτητα με την πρόγνωση των ασθενών εκτός από την σύγχρονη μακρινή μετάσταση, την ηλικία, και περινευρικό εισβολή. Ετερογένεια του μικροπεριβάλλοντος, όχι μόνο των καρκινικών κυττάρων, προτείνεται να συμβάλλει στην ετερογένεια του όγκου και της πολυπλοκότητας βιολογική, έτσι θα πρέπει να θεωρηθεί στη διαχείριση ασθενών CRC. Επιπλέον, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η έκφραση ΡΤΕΝ μεταβλήθηκε σε CAFS του ΚΕΣ, γεγονός που υποδηλώνει ότι CAFS θα μπορούσε να αλλάξει την έκφραση του γονιδίου και να διαδραματίσουν ενεργό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Η προγνωστική συσχέτιση των χαρακτηριστικών στρωματικών που σχετίζεται με την τοποθεσία του όγκου. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση τιμές cut-off που λαμβάνεται με μέγιστη μεθόδους chi-τετράγωνο

doi:. 10.1371 /journal.pone.0091811.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

Εκπρόσωπος PTEN χρώσεις αντισώματος στρωματικά κύτταρα και την προγνωστική συσχέτιση της έκφρασης ΡΤΕΝ. (Α) Ακέραια έκφραση ΡΤΕΝ σε CAFS (× 400) και (Β) απώλεια της έκφρασης ΡΤΕΝ σε CAFS (× 400). (C-F) καμπύλες Kaplan-Meier επιβίωσης για το κέντρο (C) και περιφέρεια (D) του πρωτογενούς όγκου, μεταστάσεις λεμφαδένα (Ε), και απομακρυσμένες μεταστάσεις (F) σύμφωνα με την κατάσταση έκφρασης CAF ΡΤΕΝ.

DOI : 10.1371 /journal.pone.0091811.s002

(ΔΕΘ)

πίνακα S1. συντελεστές συσχέτισης

του Pearson μεταξύ κέντρο, περιφέρεια, μετάσταση στους λεμφαδένες και απομακρυσμένες μετάσταση

doi:. 10.1371 /journal.pone.0091811.s003

(DOCX)

Πίνακας S2.

συντελεστές συσχέτισης μεταξύ CAFS και LVD ή MVD

doi:. 10.1371 /journal.pone.0091811.s004

(DOCX)

Πίνακα S3. έκφραση

PTEN στην CAFS και κλινικοπαθολογική παράγοντες

doi:. 10.1371 /journal.pone.0091811.s005

(DOCX)