Αφηρημένο

Το οξειδωτικό στρες, αποτελεί σημαντικό παράγοντα στην διαμόρφωση της γλυκολυτικής οδού και την επαγωγή του στρες ενεργοποιούνται γονίδια, αυξάνεται περαιτέρω λόγω της μειωμένης σύστημα αντιοξειδωτικής άμυνας, η οποία προωθεί την εξέλιξη του καρκίνου μέσω της επαγωγής αγγειογένεσης. Η κουρκουμίνη, ένα φυσικό chemopreventive φυτοχημικό, έχει αναφερθεί ότι αναστέλλει την καρκινογένεση σε διάφορα πειραματικά μοντέλα ζώων. Ωστόσο, ο υποκείμενος μηχανισμός που εμπλέκονται στην αντικαρκινική δράση της κουρκουμίνης οφείλεται στην μακροπρόθεσμη επίδραση του είναι ακόμα να αναφερθεί λόγω της ταχείας μεταβολισμού του, αν και οι μεταβολίτες συσσωρευτεί στους ιστούς και να παραμένουν για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα. Ως εκ τούτου, η μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης χρειάζεται ενδελεχή έρευνα. Η παρούσα μελέτη είχε ως σκοπό να αναλύσει την αντικαρκινική δράση της κουρκουμίνης στο ήπαρ, ακόμη και μετά τη διακοπή της θεραπείας σε λεμφώματος ποντικών που φέρουν Ντάλτον. Το οξειδωτικό στρες που παρατηρούνται κατά την εξέλιξη του λεμφώματος μειωμένη αντιοξειδωτική δραστηριότητα του ενζύμου, και επαγόμενη αγγειογένεση καθώς και την ενεργοποίηση των πρώιμων ενεργοποιημένων στρες γονίδια και γλυκολυτικής οδού. θεραπεία κουρκουμίνη είχε ως αποτέλεσμα την ενεργοποίηση του αντιοξειδωτικού ενζύμου σούπερ οξείδιο δισμουτάσης και προς τα κάτω ρύθμιση του επιπέδου των ROS καθώς δραστηριότητα των ROS που παράγουν το ένζυμο NADPH: οξειδάση, η έκφραση των ενεργοποιημένων γονιδίων στρες HIF-1α, cMyc και της δραστηριότητας της LDH προς το φυσιολογικό επίπεδο. Περαιτέρω, αυτό να οδηγήσει σε σημαντική αναστολή της αγγειογένεσης, παρατηρήθηκε μέσω MMPs δραστηριότητα, ΡΚΟα και το επίπεδο VEGF, καθώς και με δοκιμασία βύσμα matrigel. Έτσι, τα ευρήματα αυτής της μελέτης καταλήγουν στο συμπέρασμα ότι η μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης παρουσιάζει αντικαρκινική δυναμικό μέσω της επαγωγής του αντιοξειδωτικού αμυντικού συστήματος και η αναστολή της αγγειογένεσης μέσω ρύθμισης προς τα κάτω των ενεργοποιημένων στρες γονιδίων και γλυκολυτικής οδού στο ήπαρ των ποντικών λεμφώματος που φέρουν.

Παράθεση : Das L, Vinayak Μ (2014) μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης στον κανονισμό της γλυκολυτικής οδού και αγγειογένεση μέσω της διαμόρφωσης του στρες Ενεργός γονίδια στην πρόληψη του καρκίνου. PLoS ONE 9 (6): e99583. doi: 10.1371 /journal.pone.0099583

Επιμέλεια: Gautam Sethi, Yong Loo Lin Ιατρική Σχολή, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σιγκαπούρης, Σιγκαπούρη

Ελήφθη: 25 Μάρτη 2014? Αποδεκτές: 15 Μάη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 16 Ιουνίου, 2014

Copyright: © 2014 Das, Vinayak. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα στοιχεία που περιλαμβάνονται στο έγγραφο

Χρηματοδότηση:. Το έργο χρηματοδοτήθηκε από το Τμήμα Επιστήμης και Τεχνολογίας (Grant Νο-SR /S0 /AS-97/2007), η κυβέρνηση της Ινδίας να MV . Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Αυξημένα αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) όπως ρίζες υπεροξειδίου και H

2O

2 λειτουργούν ως μόρια σηματοδότησης σε διάφορες πτυχές των απαντήσεων αυξητικό παράγοντα μεσολάβηση συμπεριλαμβανομένης της αγγειογένεσης κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου. Η κύρια πηγή παραγωγής ROS ρυθμίζεται από ΝΑϋΡΗ οξειδάσης. Ο αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) είναι ένας μείζων διεγέρτης αγγειογένεσης, η οποία διεγείρει τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση, και το σχηματισμό του σωλήνα των ενδοθηλιακών κυττάρων (ECs) μέσω του type2 υποδοχέα VEGF. VEGF επαγόμενη αγγειογένεση μεσολαβεί πρωτεϊνική κινάση C (PKC), όπως PKC εμπλέκεται στην οδό σηματοδότησης της ανάπτυξης όγκων VEGF με μεσολάβηση και την αγγειογένεση [1]. ΡΚΟα προωθεί αγγειογενετική δραστηριότητα των ενδοθηλιακών κυττάρων μέσω επαγωγής του VEGF και VEGF ενισχύει τη δική του έκφραση μέσω ΡΚΟα εξαρτώμενη θετικό μηχανισμό ανάδρασης [2]. Περαιτέρω, ο VEGF ρυθμίζεται σε μεταγραφικό επίπεδο από υποξία παράγοντα 1-α (HIF-1α) σε απόκριση προς υποξία [3], [4]. HIF-1 ρυθμίζει όχι μόνο την παράδοση οξυγόνου (αγγειογένεση), αλλά η κατανάλωση οξυγόνου (γλυκολυτικά μεταβολισμός) επίσης σε υποξικές μικροπεριβάλλον του όγκου [5]. Η έκφραση ενός αριθμού γονιδίων που αρχίζει με ογκογονίδιο μεσολάβηση που ακολουθείται από τα γονίδια HIF-1 μεσολαβούμενων επάγονται που προωθούν μεταβολικές μεταβολές κατά την καρκινογένεση. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα την εξαιρετικά γλυκολυτικό φαινότυπο «Warburg» και την καταστολή της μιτοχονδριακής βιογένεσης [6]. Η προς τα πάνω ρύθμιση της γαλακτικής αφυδρογονάσης Α (LDH-Α) είναι μια σημαντική μοριακή μεσολαβητής Warburg αποτέλεσμα, το οποίο εμφανίζεται ακόμη και σε αερόβια κατάσταση ως συνέπεια της υποξικής μικροπεριβάλλον του όγκου και τροποποιήσεις ορισμένων ογκογονιδίων ή γονιδίων καταστολής του όγκου [7]. Επιπλέον, η υπερέκφραση της LDH-Α ρυθμίζεται από HIF-1 συνεργασία με την απορυθμισμένη c-Myc. Έχει παρατηρηθεί ότι ογκογόνο ενεργοποίηση μέσω απορυθμισμένη έκφραση του c-myc συμβάλλει στην ογκογένεση σε διάφορους ιστούς σε διαγονιδιακά ποντίκια και πολλούς τύπους ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων των λεμφωμάτων [8]. Έτσι, η απορρύθμιση στην έκφραση των ογκογονιδίων, ογκοκατασταλτικών γονιδίων και γονιδίων σταθερότητα εμπλέκονται στην καρκινογένεση, αυτό το αποτέλεσμα σε ένα μειωμένο επίπεδο αντιοξειδωτικής άμυνας στο μικροπεριβάλλον του όγκου και καρκινικών κυττάρων [9]. Περαιτέρω, μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας (ΜΜΡ) είναι ψευδάργυρος εξαρτώνται από πρωτεολυτικά ένζυμα, διασπούν εξωκυτταρικό πλέγμα, καθώς και υποστρώματα μη-μήτρα (παράγοντες ανάπτυξης, υποδοχείς κυτταρικής επιφάνειας, κλπ) και να ρυθμίζουν μονοπάτια που ελέγχουν την ανάπτυξη των κυττάρων, φλεγμονή, αγγειογένεση ή σηματοδότησης. Δρα ως ρυθμιστής της μικροπεριβάλλον του όγκου και μπορεί να λειτουργήσει ακόμη και με μη πρωτεολυτικό τρόπο. Η απελευθέρωση των MMPs εμπλέκεται σε πολλές ασθένειες, όπως μετάσταση όγκου, ρευματοειδή αρθρίτιδα, και της περιοδοντικής νόσου [10], [11]. Εκτός αυτού, MMPs επανενεργοποιήσει αγγειογενετική δραστηριότητα του VEGF με εκλεκτική αποικοδόμηση του παράγοντα αυξητικού (CTGF), ως μία από τις ισομορφές του VEGF δεσμεύει CTGF και αγγειογόνο δραστικότητα του VEGF αναστέλλεται στο VEGF-CTGF σύμπλοκο [12]. Έτσι, η αναστολή της αγγειογόνου δραστηριότητες μέσω διαφοροποίησης των γλυκολυτικής οδού, η ενεργοποίηση του ενδογενούς συστήματος αντιοξειδωτικής άμυνας και αναστολή του σχηματισμού ROS μπορεί να είναι ένα βήμα για την πρόληψη της καρκινογένεσης. Κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του λεμφώματος Ντάλτον (α ποντικού μεταμοσχεύσιμων μη Hodgkin λέμφωμα Τ-κυττάρων του), τα διάφορα μέρη που επηρεάζονται συμπεριλαμβανομένων του ήπατος και μυελού των οστών πέρα ​​από το λεμφικό σύστημα. Συκώτι είναι η κύρια μεταβολική και αποτοξίνωση των οργάνων του σώματος επηρεάζεται σε μεγάλο βαθμό κατά τη διάρκεια της εξέλιξης λεμφώματος. Επιπλέον, η μετάσταση και κακοήθειας έχει επιβεβαιωθεί νωρίτερα στο ήπαρ του λεμφώματος ρουλεμάν Ντάλτον (DL) ποντίκια, τα οποία είναι χαρακτηριστικά των μη-Hodgkin λέμφωμα [13], [14].

ευρύ φάσμα των φυσικών φυτοχημικών μπορεί παρέχουν βέλτιστα οφέλη για την υγεία για τους ανθρώπους. Η χρήση του όλο το εκχύλισμα ή ένα μόνο απομονωμένο συστατικό ή ενός μεταβολίτη του ένα απομονωμένο συστατικό για την επίτευξη επιθυμητών οφέλη για την υγεία έχει αποτελέσει θέμα της τα τελευταία χρόνια. Η κουρκουμίνη, ένα φυσικό chemopreventive φυτοχημικό που προέρχεται από κουρκουμά (

Curcuma longa

), έχει αναφερθεί ότι αναστέλλει χημικά επαγόμενη καρκινογένεση σε πολλαπλές θέσεις οργάνων σε διάφορα πειραματικά μοντέλα ζώων. Η κουρκουμίνη καταστέλλει την ενεργοποίηση αρκετών παραγόντων μεταγραφής που εμπλέκονται στην ογκογόνο δραστηριότητες, μετασχηματισμός μπλοκ, τον πολλαπλασιασμό, και εισβολή καθώς και επάγει την απόπτωση σε κύτταρα όγκου. Έτσι, η κουρκουμίνη παρουσιάζει τεράστια υπόσχεση για τη θεραπεία του καρκίνου [15]. Ωστόσο, είναι ακόμη να αναφερθεί αν η αντικαρκινική δράση της κουρκουμίνης οφείλεται στην αθροιστική επίδραση των μεταβολιτών της ή οφείλονται στην ίδια κουρκουμίνη, όπως ο μεταβολισμός των κουρκουμίνη είναι πολύ γρήγορη, αλλά μεταβολίτες παραμένουν για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα σε διαφορετικούς ιστούς [16]. Περαιτέρω, συσσωρεύοντας ενδείξεις υποδηλώνουν ότι η κατανάλωση του συνόλου ή μερικώς καθαρισμένα εκχυλίσματα τροφίμων είναι περισσότερο επωφελής άνω μονής απομονώνονται συστατικά λόγω της ύπαρξης του συνεργιστικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των φυτοχημικών σε ολόκληρα τα τρόφιμα [17], [18]. Ως εκ τούτου, παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει το μηχανισμό που εμπλέκεται στην αντικαρκινική δράση της κουρκουμίνης, ακόμη και μετά τη διακοπή της χορήγησης. Η μελέτη επικεντρώνεται στην γλυκολυτική οδό και την αγγειογένεση, συνεργατικά ρυθμίζονται από το c-Myc και HIF-1 κάτω από μικροπεριβάλλον οξειδωτική όγκου σε μεταστατικό στο ήπαρ των ποντικών λεμφώματος που φέρουν.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

Όλα τα χημικά ήταν αναλυτικής και της μοριακής βιολογίας βαθμού καθώς και ενδοτοξίνη ελεύθερη και χρησιμοποιήθηκε χωρίς περαιτέρω καθαρισμό. Η κουρκουμίνη, αντιδραστήρια για την απομόνωση RNA και πολυμεράση Taq, μη φθορίζον 2 ‘, 7’-διοξική διχλωροφθορεσκεϊνης (H2DCFDA) και συζευγμένο με HRP αντι-ακτίνη β αγοράστηκαν από την Sigma Aldrich. Αντίστροφη Μεταγραφάση, ριβονουκλεάση Inhibitor, τυχαία εναύσματα και 100 bp Plus DNA σκάλα από Fermentase Life Science και ειδικό γονίδιο εκκινητές για RT-PCR συντέθηκαν από Metabion. Αντι-ποντικού ΡΚΟα και VEGF-A αντισώματα αγοράστηκαν από Santacruz βιοτεχνολογίας και Biolegend αντίστοιχα. HRP συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι-κουνελιού και δευτερογενές αντίσωμα αντι-αρουραίου κουνελιού από Bangalore Genei. Matrigel μήτρα βασικής μεμβράνης από την BD Biosciences, ζελατίνη από Amresco και ECL (Super Kit σήμα) αγοράστηκε από την Pierce Biotechnology.

Ζώα και επαγωγή Τ-κυτταρικό λέμφωμα (Λέμφωμα Ντάλτον)

Ποντίκια (AKR στέλεχος) εκτράφηκαν και διατηρήθηκαν υπό τυπικές εργαστηριακές συνθήκες με την κατάλληλη ανθρώπινη φροντίδα, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της επιτροπής δεοντολογίας θεσμικό ζώων, στους 25 ± 2 ° C κάτω από 12 ώρες φως /12 ώρες σκοτάδι πρόγραμμα παρέχεται με το πρότυπο ποντίκια ζωοτροφές και στο πόσιμο νερό

κατά βούληση

. Όλα τα πειράματα σε ζώα έγιναν με την έγκριση της επιτροπής δεοντολογίας Θεσμικών ζώων, Banaras Hindu University. Υγιή αρσενικά ποντίκια ενήλικα (ηλικίας 16-20 εβδομάδων και 30 ± 2 g) χρησιμοποιήθηκαν στην πειραματική εργασία. λέμφωμα Ντάλτον (μεταμοσχεύσιμων μη-Hodgkin λέμφωμα Τ-κυττάρων του) κύτταρα ασκίτη μεταφυτεύθηκαν σε ενήλικα αρσενικά ποντίκια μέσω ενδοπεριτοναϊκής (ίρ) σειριακή μεταμόσχευση περίπου 1 × 10

6 βιώσιμα κύτταρα ασκίτη όγκου σε 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών (PBS) ανά ποντικό όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19]. κύτταρα ασκίτη λεμφώματος Ντάλτον ήταν προικισμένος από τον καθηγητή Ajit Sodhi, Σχολή Βιοτεχνολογίας, Banaras Hindu University, Βαρανάσι, Ινδία. λέμφωμα Dalton είναι ένα μεταμοσχεύσιμο ποντικού Τ-κυτταρικό λέμφωμα προέρχεται από το θύμο αδένα ενός DBA /2 ποντικού στο Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Bethesda, MD, το 1947. [20].

Ανάπτυξη DL επιβεβαιώθηκε με ανώμαλη κοιλιακή διόγκωση και την αύξηση του σωματικού βάρους, οι οποίες ήταν ορατές σαφώς στις 10-11 ημέρες μετά τη μεταμόσχευση και DL ποντικοί επιβίωσαν για 20 ± 2 ημέρες. Πρώτα 7-9 ημέρες, αρχής γενομένης από την επόμενη ημέρα της μεταμόσχευσης DL, ανάπτυξη λεμφώματος Dalton δεν έδειξε καμία σημαντική μεταβολή στο σωματικό βάρος και ασκίτη συσσώρευση υγρού. Ετσι πρώτα 7-9 ημέρες μπορεί να συγκριθεί με τη φάση καθυστέρησης /προπαρασκευαστική φάση του σιγμοειδούς καμπύλης για την αύξηση του πληθυσμού ασκίτη κυττάρων. Ως εκ τούτου, επελέγη ανάλογα πρόγραμμα θεραπείας κουρκουμίνης να DL ποντίκια για 9 ημέρες ξεκινώντας από την επόμενη ημέρα μετά DL μεταμόσχευση και ποντίκια θυσιάστηκαν την ημέρα 18 της μεταμόσχευσης των υστέρων DL (πριν ποντίκια DL πεθαίνει φυσικά) για να πάρετε την μακροπρόθεσμη επίδραση της κουρκουμίνης, όπως κουρκουμίνη πρέπει να μεταβολιστεί πλήρως με τους μεταβολίτες της, πριν από τις 9 ημέρες από τελευταία ημέρα της θεραπείας. Ως εκ τούτου, το αποτέλεσμα θα είναι να μην οφείλονται στην άμεση επίδραση της κουρκουμίνης, αλλά μπορεί να οφείλεται στους μεταβολίτες της κουρκουμίνης.

Πρόγραμμα θεραπείας κουρκουμίνη σε ποντίκια DL και συλλογή ιστών

Μια ομάδα της κανονικής ποντίκια χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος, χωρίς καμία επεξεργασία (Ν). DL ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες με 6 ποντίκια σε κάθε ομάδα (n = 6). Τρεις ομάδες υποβλήθηκαν σε αγωγή με διαφορετικές δόσεις της κουρκουμίνης: 1,5 mg [λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με 50 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους (DLT50)], 3 mg [λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με 100 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους (DLT100) ], και 4,5 mg [λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους (DLT150)], διαλύθηκε σε 50 μΙ DMSO σε κάθε ποντικό ανά ημέρα μέσω ip για 9 ημέρες διαδοχικά, ξεκινώντας από την επόμενη ημέρα μετά τη μεταμόσχευση DL. Μία ομάδα ποντικών DL έλαβαν 50 μλ DMSO ως όχημα (DL + DMSO) με τρόπο παρόμοιο με άλλους και ομάδα ποντικών DL χρησιμοποιήθηκαν χωρίς οποιαδήποτε επεξεργασία (DL). Όλα τα ποντίκια από κάθε ομάδα θανατώθηκαν την ημέρα 18 της μεταμόσχευσης των υστέρων DL με αυχενική εξάρθρωση. Ήπαρ αποκόπηκε αμέσως μετά τη θυσία του ζώου και πλύθηκε με παγωμένο φυσιολογικό ορό. Ήπαρ όλων των ζώων (η = 6) της μιας ομάδας συνενώθηκε και αναμείχθηκε με τεμαχισμό ασηπτικώς σε 4 ° C για το μέσο όρο αποτέλεσμα. Συνολικές ιστός χρησιμοποιείται αμέσως ή διατηρημένα στους -80 ° C για περαιτέρω μελέτη.

In vivo

αγγειογένεση δοκιμασία

ελήφθησαν Ένα άλλο σύνολο έξι ομάδες με τρία ποντίκια ανά ομάδες να μελετήσει

in vivo

αγγειογένεση. Όλες οι θεραπείες ήταν ίδια όπως παραπάνω εκτός του ότι, κατά τον χρόνο της μεταμόσχευσης DL, κάθε ποντικοί από όλες τις ομάδες εγχύθηκαν υποδορίως με 500 μΙ μήτρας βασικής μεμβράνης BD Matrigel (Matrigel βύσμα). Αμέσως μετά θυσιάζει, matrigel βύσματα αφαιρέθηκαν. Βύσματα αμέσως φωτογραφήθηκαν και ζυγίζονται. Για να ποσοτικοποιηθεί η αγγείωση του βύσματος, η ποσότητα της αιμοσφαιρίνης (Hb) συσσωρεύεται στο πώμα μετρήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ HEMOCOR-D (Crest Biosystems, τουλίπα Group, Ινδία) ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή και η απορρόφηση των δειγμάτων μετρήθηκαν σε 540 nm.

RT-PCR

Ολικό RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TRI (Sigma-Aldrich) σύμφωνα με το εγχειρίδιο χρήσης της. Κατεργασία ϋΝάσης διεξήχθη σε ολικό RNA χρησιμοποιώντας κιτ ™ DNA-Free TURBO Ι για να απομακρυνθεί οποιοδήποτε γενωμικό DNA μόλυνση. RNA προσδιορίστηκε ποσοτικά στα 260 nm και η ακεραιότητα ελέγχθηκε με ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης φορμαλδεΰδης 1%. Το cDNA συντέθηκε από απομονωμένο ολικό RNA χρησιμοποιώντας ένα πρότυπο μίγμα που περιέχει το καθένα dNTPs, τυχαίους εξαμερείς, Μ-ΜυΙ_ν αντίστροφης μεταγραφάσης, αναστολέα RNase και ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης σύμφωνα με το πρότυπο πρωτόκολλο του Fermentas Life Science, και cDNA χρησιμοποιήθηκε αμέσως ή αποθηκεύονται στους -80 ° C ΝΤΟ. Έκφραση των ισοενζύμων της SOD και NOx, HIF-1α, cMyc, LDH-Α, ΡΚΟα, VEGF-A και ΜΜΡ 9 & amp? 2 γονίδια μελετήθηκαν με ημι-ποσοτική RT-PCR χρησιμοποιώντας συντεθεί cDNA. Taq πολυμεράση και τα κατάλληλα ζεύγη εκκινητών (Πίνακας 1) χρησιμοποιήθηκαν για αντιδράσεις PCR με τη χρήση θερμικού κύκλου (Applied Biosystem). PCR άρχισε με 3 λεπτά στους 95 ° C για μετουσίωση που ακολουθείται από τρία στάδια του κύκλου της θερμοκρασίας (Πίνακας 1). Ένα τελικό στάδιο επέκτασης στους 72 ° C για 7 λεπτά περιελήφθη μετά τον τελικό κύκλο για να ολοκληρωθεί ο πολυμερισμός. Αριθμός κύκλων βελτιστοποιήθηκε κατά την εκθετική φάση της ενίσχυσης. Το μέγεθος των ενισχυμένων προϊόντων ελέγχθηκε με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης χρησιμοποιώντας 100 bp σκάλα. Η ένταση της ζώνης ενισχυμένων προϊόντων στην πηκτή αγαρόζης οπτικοποιήθηκε, φωτογραφήθηκαν και αναλύθηκαν με τη χρήση Gel Doc System (Άλφα Innotech

ΕΚ). Περαιτέρω, η ένταση μπάντα ομαλοποιήθηκε με αντίστοιχη λωρίδα της β-ακτίνης ως εσωτερικός έλεγχος.

Η

ΑΡΧΙΚΗ μη-μετουσίωσης και ειδική χρώση δραστηριότητα

δοκιμασίες gel Δραστηριότητα χρησιμοποιήθηκαν για τη μέτρηση της ενζυμικής δραστηριότητας και ισοενζύμων μοτίβο του αντιοξειδωτικού ενζύμου SOD, καθώς και NOX και LDH. Καθώς μεταβολές της ενζυματικής δραστηριότητας που σχετίζεται με μεταβολικές αλλαγές, ανάλυση PAGE μη μετουσιώσεως και προσδιορισμού γέλη δραστικότητα προτιμώνται έναντι ανοσοανίχνευση, επειδή η μέθοδος χρησιμοποιεί ειδικότητα υποστρώματος με βάση την ανίχνευση μόνο ενεργό μέρος της πρωτεΐνης. Ετσι, θεωρείται ιδιαίτερα σημαντική για τη συσχέτιση μια αλλαγή στο επίπεδο ενός συγκεκριμένου ισοενζύμου με εκείνη των μεταβολικών αλλαγών στο κυτταρικό επίπεδο.

Η υπεροξειδική δισμουτάση (SOD)

Η δοκιμασία γέλη δραστηριότητα της SOD εκτελέστηκε με PAGE μη μετουσιώσεως, που ακολουθείται από χρώση δραστηριότητα όπως στη μέθοδο του Beauchamp and Fridovich [21]. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα διαχωρίστηκαν με 10% PAGE μη μετουσιώσεως στους 4 ° C. Μετά την ηλεκτροφόρηση η πηκτή εμποτίζεται σε διάλυμα 1,23 mM ΝΒΤ επί 20 λεπτά υπό σκότος. Η γέλη συντομία πλυθεί με απεσταγμένο νερό και επωάστηκαν για 15-20 λεπτά υπό σκοτάδι σε 100 mM φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (ρΗ 7.0) που περιέχει 28 mM TEMED και 0,28 mM ριβοφλαβίνη. Στη συνέχεια, η πηκτή εξετέθη σε φως φθορισμού μέχρι την εμφάνιση των διαυγών ζωνών αρωματικών ζωνών δραστηριότητας με μπλε φόντο. Η ένταση των ζωνών αναλύθηκε με πυκνομετρική σάρωση χρησιμοποιώντας ένα Άλφα σύστημα αναλυτή εικόνας (Άλφα Innotech, San Leandro, CA, USA)

χρώση Δραστηριότητα της NADPH:. Οξειδάση

Το επίπεδο της ενζυμικής δραστηριότητας του ΝΟΧ ισοένζυμα προσδιορίστηκαν σε PAGE μη μετουσιώσεως, που ακολουθείται από χρώση με δραστηριότητα μέθοδο αναγωγής ΝΒΤ που περιγράφεται από τους Sagi και Fluhr [22]. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα διαχωρίστηκαν με 10% PAGE μη μετουσιώσεως στους 4 ° C. Μετά την ηλεκτροφόρηση η πηκτή χρωματίστηκε σε 50 mM Tris-Cl (ρΗ 7,4) 0,2 mM NBT, 0,1 mM MgCl2, και 1 mM CaCl2, στο σκοτάδι για 20 λεπτά. Στη συνέχεια, 0.2 mM NADPH προστέθηκε στο διάλυμα χρώσης και παρατηρήθηκε η εμφάνιση του μπλε φορμαζάνης μπάντες. Η αντίδραση σταμάτησε με εμβάπτιση των πηκτωμάτων σε απεσταγμένο νερό. Η ένταση των ζωνών αναλύθηκε με πυκνομετρική σάρωση χρησιμοποιώντας ένα Άλφα σύστημα αναλυτή εικόνας (Άλφα Innotech, San Leandro, CA, USA).

χρώση Δραστηριότητα γαλακτικής αφυδρογονάσης (LDH)

Στην ενζυματική τζελ δοκιμασία δραστικότητας της γαλακτικής αφυδρογονάσης διεξήχθη με PAGE μη μετουσιώσεως ακολουθούμενη από την ειδική χρώση δραστικότητα όπως περιγράφεται από Dietz και Lubrano [23]. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα διαχωρίστηκαν με 8% PAGE μη μετουσιώσεως στους 4 ° C. Μετά την ηλεκτροφόρηση η πηκτή υποβλήθηκε σε LDH ειδική χρώση δραστηριότητα στο διάλυμα χρώσης που περιείχε 125 mM Tris-Cl (ρΗ 7,4), 0,5 mM χλωριούχο μαγνήσιο, 0.1 mM λιθίου-γαλακτικό, 1 mg /ml NAD, 10 mM NaCl, 0,25 mg /ml ΝΒΤ και 0,025 mg /ml PMS με ήπια ανακίνηση για 5-10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, μετά την ανάπτυξη των ζωνών LDH πλύθηκε η γέλη. Η ένταση των ζωνών αναλύθηκε με πυκνομετρική σάρωση χρησιμοποιώντας ένα Άλφα Σύστημα Αναλυτή εικόνας (Άλφα Innotech, San Leandro, CA, USA).

δοκιμασία υπεροξείδιο του υδρογόνου

επίπεδο υπεροξειδίου του υδρογόνου στο ηπατικό ιστό ήταν μετρήθηκε φασματοφωτομετρικά με τη λήψη της απορρόφησης στα 570 nm όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Η συγκέντρωση του H

2O

2 σε κάθε δείγμα προσδιορίσθηκε με τη χρήση της πρότυπης καμπύλης, δημιουργείται από τη λήψη γνωστών ποσοτήτων H

2O

2, και εκφράζεται σε μmole /mg πρωτεΐνης.

ROS Δοκιμασία

επίπεδο Σύνολο ROS προσδιορίστηκε με την οξειδωτική μετατροπή των μη φθορίζον 2 ‘, 7′-διχλωρο διοξεικό (H2DCFDA) σε εξαιρετικά φθορίζον 2′, 7’-διχλωροφθορεσκεϊνης (DCF) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25 ]. Ήπαρ εκχυλίσματα ποσό 100 μΐ επωάστηκαν στους 37 ° C για 60 λεπτά με 100 μΐ 2 mM H2DCFDA (Invitrogen) σε PBS. Ο φθορισμός καταγράφηκε στα 485 nm (διέγερση) και 527 nm (εκπομπή) με HITACHI F-3000 φασματοφωτόμετρο φθορισμού. Το επίπεδο του ROS σε κάθε δείγμα προσδιορίστηκε με την παρατήρηση φθορισμού (απορρόφηση) /mg πρωτεΐνης.

ζυμογραφία ζελατίνης

Δραστηριότητα

των MMPs σε δείγμα ιστού αναλύθηκε για τη μελέτη δραστηριότητα εξευτελιστικές ζελατίνης χρησιμοποιώντας ζυμογραφία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26]. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης από κάθε δείγμα αναμειγνύεται με ίσο όγκο 2Χ μη αναγωγικό ρυθμιστικό διάλυμα (0,125 Μ Tris-Cl ρΗ 6,8, 20% γλυκερίνη, 4% SDS, 0,003% μπλε βρωμιοφαινόλης) διαχωρίστηκε σε 4 ° C κατά 8% την επίλυση και 5% στοιβασίας SDS-PAGE που περιείχε 0,1% ζελατίνη. Μετά την ηλεκτροφόρηση, πηκτή πλύθηκε δύο φορές σε 2.5% Triton Χ-100 για 20 λεπτά κάθε προκειμένου να απομακρυνθούν SDS και αναδιάταξη ένζυμα. Η πηκτή στη συνέχεια επωάστηκε για 20 ώρα στους 37 ° C στο ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει 21 mM Tris-Cl (ρΗ 7.6), 10 mM CaCl2, και 0,04% NaN3. Στη συνέχεια, γέλη πλύθηκε σε απεσταγμένο νερό, χρωματίστηκαν με CBB και αποχρωματίζονται σε μεθανόλη και οξικό οξύ. Η δράση πρωτεάσης παρατηρήθηκε ως σαφής ζώνη πέψη ζελατίνης. Η ένταση των ζωνών αναλύθηκε με πυκνομετρική σάρωση χρησιμοποιώντας ένα Άλφα σύστημα αναλυτή εικόνας (Άλφα Innotech, San Leandro, CA, USA).

Η στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με το λογισμικό SPSS χρησιμοποιώντας ένα κατευθύνσεων ANOVA ακολουθούμενη από δοκιμή Tucky του. Οι τιμές εκφράστηκαν ως μέση ± S.E.M. που λαμβάνονται από τρία διαφορετικά σύνολα πειραμάτων, ρ & lt? 0,05 λήφθηκε ως στατιστικά σημαντική (95% διάστημα εμπιστοσύνης). # P & lt? 0,05 και ## & lt? 0,01 σε σύγκριση με το Ν, * ρ & lt? 0,05 και ** p & lt?. 0.01 σε σύγκριση DL + DMSO ομάδα αντίστοιχα

Αποτελέσματα

Έκφραση και ενζυμική δραστηριότητα της SOD

Η έκφραση SOD στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντίκια βρέθηκε να ρυθμίζεται κάτω σημαντικά σε σύγκριση με το φυσιολογικό. Οι εκφράσεις αμφοτέρων των Mn-SOD και Cu /Zn-SOD σε ποντίκια DL ήταν 75% και 78% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα, και 82% και 69% της κανονικής αντίστοιχα σε DL + DMSO. Σημαντική up ρύθμιση της έκφρασης τόσο των ισοενζύμων της SOD βρέθηκε απέναντι κανονικό επίπεδο με τη θεραπεία κουρκουμίνη? Μη-SOD ρυθμίζεται αυξητικά μέχρι 1,21 φορές και 1,22 φορές ποντικών DL + DMSO με 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως, και Cu /Zn-SOD μέχρι 1,15 φορές, 1,42 φορές και 1,1 φορές της DL + DMSO με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους αντίστοιχα [εικ. 1 (Α)]. Ομοίως δραστηριότητα της SOD ακολουθεί επίσης την παρόμοια τάση μεταβλητότητας στην έκφραση. Η δραστικότητα του Mn-SOD σε DL και DL + DMSO ποντίκια βρέθηκε να είναι 65% και 63% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα. θεραπεία κουρκουμίνη ανύψωσε την δραστηριότητα εξαρτάται από τη δόση τρόπο που ήταν περίπου μέχρι 1.3 φορές, 1,39 φορές και 1,58 φορές της DL + DMSO σε 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντίστοιχα. Ομοίως, η δραστικότητα του Cu /Zn-SOD μειώθηκε σε DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι 61% και 61,5% των φυσιολογικών ποντικών, αντίστοιχα. θεραπεία κουρκουμίνη ήταν ικανή να αυξήσει τη δραστηριότητα της Ου /Ζη-δΟϋ σε παρόμοια δόση εξαρτώμενο τρόπο, περίπου μέχρι 1,24 φορές, 1,35 φορές, 1,5 φορές ποντικών DL + DMSO με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως [Σχ. 1 (C)].

Επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση mRNA και ενζυματική δραστηριότητα ισοενζύμων SOD στο ήπαρ ποντικών που φέρουν λεμφώματος (Α) RT-PCR του Mn-SOD, Cu /Zn-SOD και β-ακτίνης γονίδιο, (Β) πυκνομετρική σάρωση του Mn-SOD και γονιδίων Cu /Zn-SOD μετά από κανονικοποίηση με β-ακτίνη, (Γ) Ειδική χρώση δείχνει δραστικότητα του ισοενζύμων SOD, (D) πυκνομετρική σάρωση της ζώνης δραστηριότητας του ισοενζύμων SOD. Τα συκώτια των έξι ζώων κάθε ομάδας συνενώθηκε χωριστά και χρησιμοποιήθηκε για την εκχύλιση του συνολικού RNA και πρωτεΐνες σε μη κατάσταση μετουσίωσης. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # P & lt? 0,05 σε σύγκριση με το Ν ομάδα και * ρ & lt? 0,05 σε σύγκριση με την ομάδα DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη, το Μ είναι 100 δείκτη bp και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

έκφραση και ενζυμική δράση της ΝΟΧ

Η έκφραση των Nox1 και NOX2 παρατηρήθηκε να απορυθμίζεται σημαντικά σε DL και DL + DMSO ποντίκια σε σύγκριση με τα φυσιολογικά ποντίκια, το οποίο διαμορφώνεται προς κανονικό επίπεδο με τη θεραπεία κουρκουμίνη [εικ. 2 (Α)]. Η έκφραση του Nox1 βρέθηκε να είναι περίπου 1,75 φορές και 1,44 φορές φυσιολογικών ποντικών στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντίκια αντίστοιχα. θεραπεία κουρκουμίνη μείωσε την έκφραση η οποία ήταν περίπου 83%, 86% και 72% των ποντικών DL + DMSO με τη δόση των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως. Ομοίως σύγκριση με το κανονικό, η έκφραση της NOX2 βρέθηκε να είναι περίπου 2,7 φορές και 2,38 φορές στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντικών αντίστοιχα, η οποία ρυθμίζεται προς τα κάτω μετά την επεξεργασία κουρκουμίνη όπως παρατηρήθηκε να είναι περίπου 60%, 86% και 87% του DL + DMSO ποντικών με την δόση των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως. Παρομοίως δραστικότητα του ΝΟΧ παρατηρήθηκε να είναι αυξημένα ως έκφραση του mRNA της. NOX ρυθμίζει το σχηματισμό των ROS? επομένως η δράση του ΝΟΧ μπορεί να μετρηθεί ως δείκτης του επιπέδου ROS. Σε σύγκριση με τα φυσιολογικά ποντίκια, η δραστικότητα της ήταν περίπου Nox1 1,6 φορές και 1,45 φορές, όπου, όπως δραστικότητα της NOX2 ήταν 1,37-φορές και 1,3-φορές στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντίκια αντίστοιχα. Διαφορετικές δόσεις της θεραπείας κουρκουμίνη διαμορφώνονται σημαντικά τη δραστηριότητα προς το φυσιολογικό επίπεδο. Δραστηριότητα του Nox1 βρέθηκε να είναι περίπου 86%, 70% και 80% των ποντικών DL + DMSO, ενώ η δραστηριότητα του NOX2 βρέθηκε να είναι περίπου 78%, 84% και 84% του DL + DMSO ποντικών με την δόση των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους αντίστοιχα [εικ. 2 (C)].

Επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση mRNA και ενζυματική δραστικότητα του ΝΟΧ ισοενζύμων στο ήπαρ του λεμφώματος ποντικών που φέρουν (Α) RT-PCR του NOX2, Nox1 και τα γονίδια β-ακτίνης, (Β) Η πυκνομετρική σάρωση NOX2 και Nox1 γονιδίων μετά την ομαλοποίηση με β-ακτίνη, (Γ) Ειδική χρώση δείχνει δραστικότητα του ΝΟΧ ισοενζύμων, (D) πυκνομετρική σάρωση της ζώνης δραστηριότητας του ΝΟΧ ισοενζύμων. Τα συκώτια των έξι ζώων κάθε ομάδας ενώθηκαν χωριστά και χρησιμοποιήθηκαν για την εκχύλιση του συνολικού RNA και πρωτεΐνες σε μη κατάσταση μετουσίωσης. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # P & lt? 0,05 και ## & lt? 0,01 σε σύγκριση με το Ν ομάδα, * ρ & lt? 0,05 και ** p & lt? 0,01 σε σύγκριση με την ομάδα DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη, το Μ είναι 100 δείκτη bp και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

επίπεδο H

2O

2 και το σύνολο των ROS σε ηπατικό ιστό

το επίπεδο του Η2Ο2, είναι ένας δείκτης του οξειδωτικού στρες αντικατοπτρίζει την οξειδωτική κατάσταση του ιστού. Το επίπεδο του υπεροξειδίου του υδρογόνου στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντικών σημαντικά αυξημένα, μέχρι περίπου 1,47 φορές και 1,39 φορές φυσιολογικών ποντικών αντίστοιχα. θεραπεία κουρκουμίνη μείωσε σημαντικά το επίπεδο μέχρι 82% του DL + DMSO ποντίκια με ποντίκια 100 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους, και 96% και 90% των ποντικών DL + DMSO με kg βάρους σώματος ποντικούς 50 και 150 mg κουρκουμίνη /αντίστοιχα [Σχ. 3 (Α)]. ROS συντίθεται με ΝΟΧ, καθώς και από άλλες πηγές δρα ως ένα σημαντικό μόριο σηματοδότησης στην οξειδωτική μικροπεριβάλλον του όγκου για να προκληθεί ογκογόνο μετασχηματισμό. Σύνολο επίπεδο ROS σε όρους φθορισμού (απορρόφηση) /mg πρωτεΐνης ήταν σημαντικά αυξημένα σε DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 2,59 φορές και 2,64 φορές φυσιολογικών ποντικών. Θεραπεία της κουρκουμίνης κατέστειλε επίπεδο ROS σημαντικά, η οποία παρατηρήθηκε ότι είναι περίπου 62%, 51% και 67% των ποντικών DL + DMSO με τη δόση των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως [Σχ. 3 (Β)].

Η επίδραση της κουρκουμίνης στο οξειδωτικό στρες από την άποψη του συνολικού επιπέδου H2O2 και το συνολικό επίπεδο ROS στο ήπαρ των ποντικών λεμφώματος φέρουν (Α) ιστόγραμμα δείχνει το συνολικό επίπεδο Η2Ο2 σε διαφορετικές ομάδες, (Β) Ιστόγραμμα Εκθέσεις συνολικό επίπεδο ROS σε διαφορετικές ομάδες. Τα συκώτια των έξι ζώων κάθε ομάδας ενώθηκαν χωριστά και ομογενοποίημα παρασκευάστηκε για τον προσδιορισμό του Η2Ο2 και ROS επίπεδο. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # Ρ & lt? 0,05 σε σύγκριση με Ν ομάδα, * ρ & lt? 0,05 σε σύγκριση με την ομάδα DL + DMSO αντιστοίχως. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

Η έκφραση του HIF-1α και cMyc

Η έκφραση του mRNA του HIF-1α και cMyc μελετήθηκε ως ένα πρώιμο γονίδιο στρες απόκριση και ογκογονιδίου αντίστοιχα σε υποξικά μικροπεριβάλλον του όγκου. Η έκφραση τόσο του HIF-1α και cMyc ήταν επάνω ρυθμίζεται DL και DL + DMSO ποντίκια σε σύγκριση με τα φυσιολογικά ποντίκια, τα οποία μειώθηκε σημαντικά με κατεργασία κουρκουμίνη [Σχ. 4 (Α)]. Η έκφραση του HIF-1α στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντίκια βρέθηκε να είναι περίπου 1,85 φορές και 1,51 φορές φυσιολογικών ποντικών αντίστοιχα. Το επίπεδο έκφρασης μετά τη θεραπεία κουρκουμίνη ήταν περίπου 93%, 91% και 78% των ποντικών DL + DMSO με τη δόση των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως. Παρομοίως, η έκφραση της cMyc βρέθηκε να είναι περίπου 2,03 φορές και 1,45 φορές φυσιολογικών ποντικών στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντίκια, αντίστοιχα, και μετά τη θεραπεία κουρκουμίνη η έκφραση μειώθηκε σε περίπου 95%, 83% και 78% του DL + DMSO ποντικών με την δόση των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως.

Επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση του mRNA του ενεργοποιημένου στρες γονίδιο HIF-1α και cMyc στο ήπαρ του λεμφώματος ποντικών που φέρουν (Α) RT -PCR του HIF-1α, cMyc και τα γονίδια β-ακτίνης, (Β) πυκνομετρική σάρωση του HIF-1α και γονιδίων cMyc μετά την ομαλοποίηση με β-ακτίνη. Τα συκώτια των έξι ζώων κάθε ομάδας ενώθηκαν χωριστά και χρησιμοποιήθηκαν για την εκχύλιση του ολικού RNA. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # P & lt? 0,05 και ## & lt? 0,01 σε σύγκριση με το Ν ομάδα, * ρ & lt? 0,05 σε σύγκριση με την ομάδα DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη, το Μ είναι 100 δείκτη bp και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

έκφραση και ενζυμική δράση της LDH-A

Η έκφραση του mRNA της LDH-Α στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντίκια ρυθμίζεται αυξητικά μέχρι περίπου 1.4 φορές και 1.4- πλάσια φυσιολογικών ποντικών αντίστοιχα. Όλες οι δόσεις της κουρκουμίνης σημαντικά προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης. Η έκφραση μετά τη θεραπεία κουρκουμίνη βρέθηκε να είναι περίπου 90%, 79% και 80% των ποντικών DL + DMSO με τη δόση των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως [Σχ. 5 (Α)]. Το πυροσταφυλικό δεν μπορεί να μεταβολιστεί σε αερόβιες συνθήκες, αλλά μετατρέπεται σε γαλακτικό από την LDH-Α σε υποξικά μικροπεριβάλλον του όγκου. Ως εκ τούτου, γλυκολυτικών μεταβολισμός μπορεί να παρακολουθείται από την άποψη της δραστικότητας της LDH-A. Η δραστικότητα της LDH-Α βρέθηκε να είναι αυξημένα μέχρι περίπου 1,76 φορές και 1,64 φορές φυσιολογικών ποντικών στο ήπαρ του DL και DL + DMSO ποντίκια αντίστοιχα. Θεραπεία της κουρκουμίνης μείωσε σημαντικά τη δραστικότητα της LDH-Α, το οποίο ήταν περίπου 75%, 67% και 85% των ποντικών DL + DMSO με τις δόσεις των 50, 100 και 150 mg /kg σωματικού βάρους, αντιστοίχως [Σχ. 5 (C)].

Επίδραση της κουρκουμίνης στην έκφραση mRNA και ενζυματική δραστικότητα της LDH-Α στο ήπαρ του λεμφώματος ποντικών που φέρουν (Α) RT-PCR του LDH-Α και γονιδίων β-ακτίνης, (Β) πυκνομετρική σάρωση των LDH-Α μετά από κανονικοποίηση με β-ακτίνη, (Γ) Ειδική χρώση δείχνει δραστικότητα της LDH-Α, (D) πυκνομετρική σάρωση της ζώνης δραστηριότητας της LDH-A. Τα συκώτια των έξι ζώων κάθε ομάδας ενώθηκαν χωριστά και χρησιμοποιήθηκαν για την εκχύλιση του συνολικού RNA και των ολικών πρωτεϊνών στο μη κατάσταση μετουσίωσης. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± S.E.M. # P & lt? 0,05 και ## & lt? 0,01 σε σύγκριση με το Ν ομάδα, * ρ & lt? 0,05 και ** p & lt? 0,01 σε σύγκριση με την ομάδα DL + DMSO, αντίστοιχα. Cur είναι η κουρκουμίνη, το Μ είναι 100 δείκτη bp και BW είναι το σωματικό βάρος. Ν, DL, DL + DMSO, DLT50, DLT100 και DLT150 παριστά φυσιολογικό, λέμφωμα έδρανο Dalton, λέμφωμα Ντάλτον φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DMSO και Dalton λέμφωμα φέρουν ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 50, 100 και 150 mg κουρκουμίνη /kg σωματικού βάρους διαλυμένη σε DMSO, αντίστοιχα.

Η

Η έκφραση και το επίπεδο της πρωτεΐνης του ΡΚΟα

Η έκφραση του mRNA της ΡΚΟα βρέθηκε να είναι μέχρι ρυθμίζεται DL και DL + DMSO ποντίκια μέχρι περίπου 1,75 φορές και 1,65 φορές της κανονικής ποντίκια. Όλες οι τρεις δόσεις της κουρκουμίνης μείωσε σημαντικά την έκφραση του ΡΚΟα.