Αφηρημένο

Ιστορικό

ορμόνη-ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη εξακολουθεί να παρεμποδίζεται από την αναπόφευκτη εξέλιξη της αντίστασης στη θεραπεία πρώτης γραμμής με docetaxel. Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι οι φαινοτυπικές αλλαγές που σχετίζονται με τον καρκίνο μπορούν να μεταφερθούν από κύτταρο σε κύτταρο

μέσω

μικροκυστίδια /εξωσώματα. Εδώ έχουμε ως στόχο να διερευνήσει φαινοτυπικές αλλαγές που σχετίζονται με docetaxel-αντίσταση, προκειμένου να σας βοηθήσει να προσδιορίσετε την πολυπλοκότητα του προβλήματος αυτού και να αξιολογηθεί η σκοπιμότητα της εκκρίνονται εξωσωμάτων στον καρκίνο του προστάτη.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

docetaxel ανθεκτικές παραλλαγές DU145 και 22Rv1 ιδρύθηκαν και χαρακτηρίζεται από την άποψη της διασταυρούμενης αντοχής, μορφολογία, τον πολλαπλασιασμό, την κινητικότητα, την εισβολή,

anoikis

, σχηματισμό αποικιών, εξωσώματα έκκριση τους και λειτουργική συνάφεια. Προκαταρκτική ανάλυση εξωσωμάτων από σχετικές δείγματα ορού διεξήχθη επίσης. Κεκτημένα docetaxel-αντίσταση που ανατίθενται διασταυρούμενη αντοχή στην δοξορουβικίνη και προκαλείται από μεταβολές στην κινητικότητα, την εισβολή, ο πολλαπλασιασμός και η αγκύρωση-ανεξάρτητη ανάπτυξη. Εξωσώματα εκδιώχθηκαν από DU145 και 22Rv1 παραλλαγές docetaxel ανθεκτικά (DU145RD και 22Rv1RD) ανατίθενται docetaxel-αντίσταση στην DU145, 22Rv1 και κύτταρα LNCaP, η οποία μπορεί να οφείλεται εν μέρει στην exosomal MDR-1 μεταφοράς /P-gp. Τα εξωσώματα από ορούς ασθενών με καρκίνο του προστάτη »που επάγεται αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και εισβολή, σε σύγκριση με εξωσώματα από ελέγχους της ίδιας ηλικίας. Επιπλέον, εξωσώματα από ορούς ασθενών που υποβάλλονται σε θεραπευτική αγωγή docetaxel σε σύγκριση με συμφωνημένα εξωσώματα από τους ίδιους τους ασθενείς πριν από την έναρξη της θεραπείας docetaxel, όταν εφαρμόζεται και στις δύο κύτταρα DU145 και 22Rv1, έδειξε μια συσχέτιση μεταξύ κυτταρική απόκριση σε docetaxel και την ανταπόκριση των ασθενών στη θεραπεία με docetaxel.

Συμπεράσματα /Σημασία

Οι μελέτες μας δείχνουν την πολύπλοκη και πολύπλευρη φύση της docetaxel αντοχής στον καρκίνο του προστάτη. Επιπλέον, μας

in vitro

παρατηρήσεις και προκαταρκτικές κλινικές μελέτες υποδεικνύουν ότι εξωσώματα μπορούν να παίξουν ένα σημαντικό ρόλο στον καρκίνο του προστάτη, σε επικοινωνία κυττάρου-κυττάρου, και ως εκ τούτου μπορεί να προσφέρει δυνατότητες ως οχήματα που περιέχουν προγνωστική βιοδείκτες και νέων θεραπευτικών στόχων.

Παράθεση: Corcoran C, Rani S, O’Brien Κ, O’Neill Α, Prencipe Μ, Σεΐχης R, et al. (2012) Η docetaxel-αντίσταση στον καρκίνο του προστάτη: Αξιολόγηση Associated φαινοτυπικές αλλαγές και τις δυνατότητες αντίστασης μεταφοράς μέσω Εξωσώματα. PLoS ONE 7 (12): e50999. doi: 10.1371 /journal.pone.0050999

Επιμέλεια: Νατάσα Κυπριανού, Πανεπιστήμιο του Κεντάκι College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 28 του Μαρτίου, 2012? Αποδεκτές: 30 Οκτώβρη 2012? Δημοσιεύθηκε: 10 του Δεκέμβρη 2012

Copyright: © 2012 Corcoran et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από τη χρηματοδότηση Science Foundation Ιρλανδίας Στρατηγικών Ερευνών Cluster, Molecular Therapeutics για τον Καρκίνο Ιρλανδία (08 /SRC /B1410) για να JC, WW, LOD? χρηματοδότηση, να LOD, για να υποστηρίξει KOB ως υποτροφία Marie Ίδρυμα Keating στο Trinity College του Δουβλίνου? και των υποδομών και των βασικών υποστήριξη εγκατάστασης μέσω του προγράμματος ΗΕΑ της Ιρλανδίας για την Έρευνα στην Τριτοβάθμια Ιδρύματα (PRTLI) Κύκλος 5 έως LOD μεταξύ άλλων TCD αναστολείς πρωτεάσης. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ενώ docetaxel προσφέρει βελτίωση στη συνολική επιβίωση για ασθενείς με ορμονο-ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (HRPC), όπως προκύπτει από δύο μελέτες φάσης ΙΙΙ (TAX 327 και SWOG 9916) και μετέπειτα κλινική διαχείριση, δυστυχώς, η υποτροπή είναι σχεδόν αναπόφευκτη. Λόγοι για την αποτυχία της docetaxel για την αύξηση της επιβίωσης πέραν των περίπου 2,5 μήνες έχουν ακόμη διευκρινιστεί πλήρως. Η αντοχή στα φάρμακα συχνά αποδίδεται με την υπερ-έκφραση των πρωτεϊνών μεταφορέων, συμπεριλαμβανομένων Ρ-γλυκοπρωτεΐνη (MDR-1 /Ρ-gp), που συνδέεται με την εκροή πολλών αντικαρκινικών (και άλλες) παραγόντων [1] – [3]. Επιπλέον, χημειο-αντίσταση έχει επίσης αποδειχθεί ότι συμβάλλουν στην μεταβολές στην επεμβατική και κινητικό φαινότυπο των κυττάρων [4] – [7]. Άλλα φαινοτυπικά χαρακτηριστικά που μπορεί να σχετίζονται με αυτό το πρόβλημα στον καρκίνο του προστάτη δεν έχουν ακόμη οριστεί.

Προστέθηκε σε αυτό, πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι φαινοτυπικές αλλαγές που σχετίζονται με τον καρκίνο μπορεί να μεταφερθεί από κύτταρο σε κύτταρο

μέσω

μικροκυστίδια /εξωσώματα. Οι Εξωσώματα περιγραφεί ως νανο-μεγέθους δεσμευμένες σε μεμβράνη κυστίδια ενδοκυτταρικής προέλευσης [8]. Ανάλογα με το κύτταρο προέλευσής τους, έχουν αυτά τα μικρά κυστίδια έχουν ενοχοποιηθεί με πολλούς διαφορετικούς ρόλους μερικά από τα οποία περιλαμβάνουν την ένωσή τους με νοσηρές καταστάσεις, όπως ο καρκίνος. Ενδοκυτταρική επικοινωνία είναι ένα τέτοιο ρόλο, μέσω της ικανότητάς τους να προάγουν τη μεταγωγή σήματος [9] και της μεταφοράς των υποδοχέων μεμβράνης, πρωτεΐνες, mRNA, και miRNAs [10], [11] από το ένα κύτταρο στο άλλο. Η σημασία εξωσωμάτων από την άποψη των δυνατοτήτων τους για να βοηθήσει στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και η ανάπτυξη της χημειο-αντίσταση δεν έχει ακόμη καθοριστεί.

Λόγω της σύνθετης φύσης της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη, η docetaxel-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές του προστάτη αναπτύχθηκαν και χαρακτηρίστηκαν να αντιπροσωπεύει τόσο πρωτογενείς και μεταστατικούς όγκους, καθώς και ανδρογόνο ευαισθησίας και ανδρογόνο αντίσταση στον καρκίνο του προστάτη. Εν συντομία, απέκτησε αντοχή σε docetaxel, σε δύο προστάτη καρκινικές κυτταρικές γραμμές, που παρέχει διασταυρούμενη αντοχή με την ανθρακυκλίνη, δοξορουβικίνη και επάγεται μεταβολές στην κινητικότητα, μετανάστευση, εισβολή, ο πολλαπλασιασμός και ανεξάρτητο από αγκύρωση ανάπτυξη. Εφαρμογή του εξωσώματα, που απομονώνονται από docetaxel ανθεκτικά DU145RD και καρκινικά κύτταρα 22Rv1RD, να docetaxel ευαίσθητα DU145, 22Rv1 και LNCap πατρικά κύτταρα που ανατίθενται μια σημαντική αύξηση στην αντίσταση στη docetaxel σε καθένα από αυτά κύτταρα δέκτες. Αυτό μπορεί, τουλάχιστον εν μέρει, να οφείλεται στη μεταφορά MDR-1 /P-gp από εξωσώματα. Τα εξωσώματα από δείγματα ορού καρκίνου του προστάτη που προκαλείται από μια σημαντική αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και εισβολή σε σύγκριση με εξωσώματα από ίδιας ηλικίας υγιή δείγματα αναφοράς. Επιπλέον, εξωσώματα από ορούς ασθενών που υποβάλλονται σε θεραπευτική αγωγή docetaxel σε σύγκριση με συμφωνημένα εξωσώματα από τους ίδιους τους ασθενείς πριν από την έναρξη της θεραπείας docetaxel, όταν εφαρμόζεται και στις δύο κύτταρα DU145 και 22Rv1, έδειξε μια συσχέτιση μεταξύ κυτταρική απόκριση σε docetaxel και την ανταπόκριση των ασθενών σε docetaxel θεραπεία. Αυτές οι προκαταρκτικές μελέτες μεταγραφική στηρίξει περαιτέρω την κλινική σημασία των εξωσωμάτων στον καρκίνο του προστάτη.

Αποτελέσματα

προσδιορισμό της έκτασης της Αντίστασης στο Docetaxel

Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στον Πίνακα 1, DU145RD και 22Rv1RD κύτταρα βρέθηκαν να είναι περίπου 108- και 71 φορές πιο ανθεκτικό στο docetaxel σε σύγκριση με τις αντίστοιχες κυτταρικές σειρές ηλικίας-γονέα τους.

Η

Η docetaxel-ανθεκτικά κύτταρα Επίδειξη κάποια αντίσταση Σταυρού Άλλα αντικαρκινικά μέσα

Τόσο ανθεκτική κυτταρική γραμμή παραλλαγές εμφάνισαν διασταυρούμενη αντοχή (4-8 φορές) για να δοξορουβικίνη (Πίνακας 1), ενώ δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στην ευαισθησία σε 5-φθοροουρακίλη ή η καρβοπλατίνη για DU145RD ή 22Rv1RD σε σύγκριση με τις αντίστοιχες τους μητρικά κύτταρα.

η docetaxel ανθεκτικά παραλλαγές δεν διαφέρουν σε μορφολογία, αλλά έχουν διαφορετικές διάδοση των πυρηνικών όπλων, την κινητικότητα και την εισβολή φαινότυποι Versus γονικό κύτταρο Γραμμές

Παρατήρηση της μορφολογίας των κυττάρων δεν αποκάλυψε σημαντικές διαφορές στη μορφολογία των κυττάρων μετά αποκτήθηκαν docetaxel-αντίσταση (Σχήμα 1), αν και ανθεκτικά κύτταρα πολλαπλασιάζονται πιο αργά από ό, τι docetaxel ευαίσθητη τους μητρική πληθυσμούς (Πίνακας 2). δοκιμασίες επούλωσης πληγών χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθούν τα αποτελέσματα της docetaxel αντοχής σε κυτταρική κινητικότητα (Σχήμα 2). Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα DU145RD έδειξαν σημαντικά (ρ & lt? 0,05) αύξησε το κλείσιμο τραύματος σε σύγκριση με DU145. Docetaxel ανθεκτικά 22Rv1RD έδειξε οριακή, αλλά σημαντική (p & lt? 0.05), μειώθηκε το κλείσιμο της πληγής σε σύγκριση με 22Rv1. Λαμβάνοντας υπόψη την κυτταρική μετανάστευση (Σχήμα 3Α) και εισβολή (Εικόνα 3Β), DU145RD βρέθηκε να έχει αυξημένη κινητικότητα (ρ & lt? 0,01) και επεμβατικές δυνατότητες (ρ & lt? 0,05) σε σύγκριση με DU145. 22Rv1RD σύγκριση με κύτταρα 22Rv1, ωστόσο, εμφανίζεται μια μειωμένη τάση μετανάστευσης (ρ & lt? 0,01) και εισβολή (ρ & lt? 0,05).

Εικόνες ευαίσθητων γονέα και παραλλαγές docetaxel ανθεκτικές κυτταρικές σειρές DU145 και 22Rv1. (Όλυμπος CKX4, 20Χ μεγέθυνση).

Η

προσδιορισμοί για επούλωση της πληγής διεξήχθησαν για την αξιολόγηση κυτταρικής κινητικότητας. Οι μονοστιβάδες γδαρμένο με ένα ρύγχος πιπέτας και τα προκύπτοντα τραυματίες περιοχές παρακολουθήθηκαν με μικροσκοπία αντίθεσης φάσης για 24 ώρες (DU145) και 48 ώρες (22Rv1). Τα αποτελέσματα εμφανίζονται ως η = 3 ± SEM, όπου * = ρ & lt?. 0.05 (t-test του Student)

Η

δοκιμασίες Μετανάστευση διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας μέγεθος πόρων 8 μm 24 φρεατίων transwell θαλάμους? Β: Για δοκιμασίες εισβολή τα ένθετα προ-επικαλυμμένα με ECM. Τα κύτταρα αφέθηκαν να μεταναστεύσουν /εισβάλουν για 48 ώρες (DU145) και 72 ώρες (22Rv1). Τα αποτελέσματα εμφανίζονται ως n = 3 ± SEM, όπου * = p & lt? 0,05, ** = ρ & lt?. 0.01 (t-test του Student)

Η

Επίκτητης Docetaxel αντοχή Επιρροές Anchorage-ανεξάρτητο επιβίωση και την ανάπτυξη

Διερεύνηση εάν αποκτήσει ανθεκτικότητα στο φάρμακο μπορεί επίσης να αναθέσει

anoikis

αντίσταση, παρατηρήσαμε ανθεκτικότητα στο φάρμακο να σχετίζεται σημαντικά με μειωμένο κυτταρικό θάνατο κάτω από το

anoikis

προϋποθέσεις τόσο για τα ναρκωτικά ανθεκτικών παραλλαγές

δηλαδή

DU145RD (p & lt? 0,05) και 22Rv1RD (p & lt? 0,05)? σε σύγκριση με αντίστοιχα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 4Α). Στη συνέχεια να αξιολογηθεί κατά πόσο αυτά τα βιώσιμα κύτταρα είναι επίσης σε θέση να πολλαπλασιάζονται σε εναιώρημα, σχηματισμό αποικιών σε μαλακό άγαρ βρέθηκε να αυξηθεί σημαντικά σε DU145RD (

P

& lt? 0,05) και 22Rv1RD (

P

& lt ?. 0.05) σε σύγκριση με τις αντίστοιχες μητρικές τους κύτταρα (Σχήμα 4Β)

για

anoikis

δοκιμασίες, οι παραλλαγές κυτταρική γραμμή απλώθηκαν σε πολυ (υδροξυαιθυλο methactylic) φρεατίων οξύ επικαλυμμένα 24 – ή πλάκες αιθανόλη επικαλυμμένα 95%, ως έλεγχοι – και καλλιεργήθηκαν για 24 ώρες. 100 μΐ Alamar blue χρωστικής προστέθηκε στη συνέχεια σε κάθε φρεάτιο, επωάστηκε για 4 ώρες και μετρήθηκε η απορρόφηση στα 570 nm? Β: δοκιμασίες σχηματισμού αποικίας πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση Cytoselect ™ 96-Well κιτ κυττάρων μετασχηματισμού. Τα κύτταρα επωάστηκαν για 8 ημέρες σε ημιστερεά μέσα άγαρ πριν λύθηκαν και ανιχνεύονται με CyQuant GR Dye σε μια συσκευή ανάγνωσης πλάκας φθορισμού. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται ως n = 3 ± SEM, όπου * = p & lt?. 0.05 (t-test του Student)

Η είναι

Εξωσώματα Εκκρίνεται από κύτταρα του προστάτη Καρκίνος και μπορούν να επηρεάσουν την απάντηση σε Docetaxel αλλά δεν Σημαντικά Alter ο πολλαπλασιασμός, κινητικότητα και εισβολή

μικροσκοπία μετάδοσης ηλεκτρονίου εντόπισε την παρουσία εξωσωμάτων απομονώνονται από το ρυθμισμένο μέσο της κυτταρικής γραμμής όλων των παραλλαγών (Σχήμα 5Α). Επιπλέον κηλίδωση Western και για τις δύο TSG101 και PDC6I /Alix (Σχήμα 5Β), πρωτεΐνες που συνδέονται συνήθως με το σχηματισμό εξωσώματα και έτσι θεωρείται ότι είναι σημαντικό δείκτες της επιτυχούς απομόνωσης εξωσωμάτων [12], [13], ανιχνεύθηκαν σε απομονώσεις από το ρυθμισμένο μέσο της όλα κυτταρική σειρά παραλλαγών. Ποσά εξωσωμάτων εκδιώχθηκαν από τις docetaxel ανθεκτικά και ηλικίας ταιριαστό παραλλαγές δεν διέφεραν σημαντικά (Σχήμα S1 Α). Όπως απέκτησε docetaxel αντοχή στα κύτταρα DU145RD σχετίστηκε με αυξημένη μετανάστευση και εισβολής, είμαστε δίπλα διερευνηθεί εάν αυτόλογα (DU145) ή ανθεκτικά (DU145RD) εξωσώματα θα μπορούσε να μεταβάλει την κινητικότητα εκτιμάται από την επούλωση των πληγών χωρητικότητας (Σχήμα 5C) και εισβολή (Σχήμα 5D ( i)) της DU145. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ κλεισίματα πληγών των κυττάρων με την παρουσία DU145 ή DU145RD εξωσώματα βρέθηκε. Ομοίως, όταν εφαρμόζεται σε 22Rv1 κύτταρα, ούτε DU145- ούτε DU145RD που προέρχονται εξωσώματα παρέχει μια ουσιαστική επίδραση στην εισβολή (Σχήμα 5D (ii))

Α:. Ηλεκτρονική Μικροσκοπία διεξήχθη για να διερευνηθεί το μέγεθος και τη δομή εξωσωμάτων ? Β: κηλίδωση Western διεξήχθη για να αξιολογηθεί η έκφραση των κοινών δεικτών εξωσωμάτων σε 30 μg (TSG101) και 8 μg (PDC6I /Alix) εξωσώματα απομονώθηκαν από DU145 και κυτταρική γραμμή 22Rv1 παραλλαγές? C: DU145 επούλωση της πληγής δοκιμασίες υπό την παρουσία εξωσωμάτων (5 μg) από DU145 κυτταρική γραμμή παραλλαγές? D (i): δοκιμασίες εισβολή DU145 παρουσία εξωσωμάτων (15 μg) από DU145 κυτταρική γραμμή παραλλαγές? D (ii): 22Rv1 δοκιμασίες εισβολή παρουσία εξωσωμάτων (15 μg) από την κυτταρική γραμμή DU145 παραλλαγές

Η

Μια μικρή αύξηση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων DU145 παρουσία DU145 προερχόμενων εξωσώματα σημειώθηκε. . Αυτό πλησίασε σημασία (ρ = 0.053)? Ωστόσο, DU145RD εξωσώματα δεν μετέβαλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων DU145 (Σχήμα 6Α (i))? πιθανώς ως συνέπεια της βραδύτερο ρυθμό ανάπτυξης των κυττάρων από τα οποία προέρχονται αυτές οι τελευταίες εξωσώματα. Μετά τη θεραπεία με το IC

50 συγκέντρωση του docetaxel, παρουσία εξωσωμάτων DU145 (ρ & lt? 0,05) και σε μεγαλύτερο βαθμό εξωσώματα DU145RD (ρ & lt? 0,01) (Σχήμα 6Α (ii)) βρέθηκαν να επάγουν ένα σημαντικό επίπεδο αναισθησία docetaxel (αντίσταση) στα κύτταρα. Να διερευνήσει ευρύτερα αν DU145RD εξωσώματα μπορεί να προκαλέσει παρόμοια επηρεάζει όταν εφαρμόζεται σε άλλες κυτταρικές σειρές, είμαστε δίπλα διερευνώνται αυτά τα εξωσώματα τόσο 22Rv1 και LNCaP κύτταρα (Εικόνα 6Β και 6C). Ούτε DU145- ούτε DU145RD προερχόμενο εξωσώματα επηρέασε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των 22Rv1 ή κυττάρων LNCaP (Σχήμα 6Β (i) και 6C (θ)). Μετά τη θεραπεία με docetaxel, καμία ουσιαστική μεταβολή σε απόκριση των κυττάρων 22Rv1 ή LNCap να docetaxel σε παρουσία εξωσωμάτων DU145 παρατηρήθηκε σε σύγκριση με την επίδραση του φαρμάκου παρουσία του PBS αντί εξωσωμάτων (Σχήμα 6Β (ii) και 6Γ ( ii)). Ωστόσο, με την παρουσία του DU145RD εξωσωμάτων, η ικανότητα των κυττάρων 22Rv1 και LNCap να επιβιώσουν σε αυτή τη συγκέντρωση του docetaxel ήταν σημαντικά αυξημένη (ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 6Β (ii) και 6C (ii)). Για να προσδιορίσετε αν αυτό είναι πιθανό να είναι ειδικά για εξωσώματα από μια παραλλαγή κυτταρικής σειράς (DU145RD) ή γενικότερα σε εξωσώματα από τα κύτταρα docetaxel-αντίσταση, στη συνέχεια αξιολογήθηκαν εξωσώματα από 22Rv1 και 22Rv1RD παραλλαγές. Εδώ βρήκαμε την ίδια τάση να συμβεί

δηλ.

Δεν υπήρχε σημαντική αύξηση στον πολλαπλασιασμό των DU145 ή LNCaP κυττάρων με την παρουσία είτε 22Rv1 ή εξωσώματα 22Rv1RD (Σχήμα 6D (i) και Σχήμα 6Ε (θ)). Δεν υπήρχε σημαντική μεταβολή σε απόκριση προς docetaxel, είτε DU145 ή κυττάρων LNCaP, παρουσία ηλικιωμένων-γονέα 22Rv1 προερχόμενο εξωσώματα. Ωστόσο, με την παρουσία εξωσωμάτων από την ανθεκτική παραλλαγή 22Rv1RD, δύο κύτταρα DU145 (ρ & lt? 0,01) (Σχήμα 6D (ii)) και LNCaP κύτταρα (ρ & lt? 0,01) (Σχήμα 6Ε (ii)) έδειξε σημαντική αύξηση στην αντίσταση σε docetaxel

AC (i):. DU145, 22Rv1 και LNCap πολλαπλασιασμό παρουσία εξωσωμάτων (20 μg) από DU145 κυτταρική σειρά παραλλαγές? Α-C (ii) Απόκριση των κυττάρων DU145, 22Rv1 και LNCap να docetaxel σε παρουσία εξωσωμάτων (20 μg) από DU145 κυτταρική γραμμή παραλλαγές? D-E (i): DU145 και πολλαπλασιασμός LNCap παρουσία εξωσωμάτων (20 μg) από 22Rv1 κυτταρική γραμμή παραλλαγές? D-E (ii): απόκριση των κυττάρων DU145 και LNCap να docetaxel σε παρουσία εξωσωμάτων (20 μg) από παραλλαγές 22Rv1 κυτταρική γραμμή? F: κηλίδωση Western διεξήχθη για να αξιολογηθεί η έκφραση του MDR-1 /Ρ-gp σε ολικής κυτταρικής πρωτεΐνης (50 μg) και τα αντίστοιχα εξωσώματα (30 μg) DU145 και 22Rv1 παραλλαγές κυτταρική γραμμή. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται ως n = 3 ± SEM, όπου * = p & lt? 0,05, ** = ρ & lt? 0,01, *** = ρ & lt?. 0.001 (έλεγχος τ)

Η

Έχουμε στο παρελθόν ανέφερε ότι τόσο DU145RD -και 22Rv1RD σε μεγαλύτερο βαθμό- εξέφρασε MDR-1 /P-gp, ενώ MDR-1 /P-gp ήταν απαρατήρητα στα κύτταρα ελέγχου ίδιας ηλικίας, DU145 και 22Rv1 [14] (Σχήμα 6F). Για να διερευνηθεί κατά πόσο MDR-1 /P-gp είναι πιθανόν διεξάγεται

μέσω

εξωσώματα από κύτταρα DU145RD ή 22Rv1RD, ερευνήσαμε την παρουσία αυτής της αντλίας εκροής σε εξωσώματα απομονώθηκαν από ανθεκτικές αυτές τις παραλλαγές. Εδώ αναφέρουμε ότι MDR-1 /P-gp είναι, στην πραγματικότητα, υπάρχουν σε αντίστοιχες εξαγωγές exosomal (Σχήμα 6F).

Είναι

Εξωσώματα Εντοπίστηκε σε ορό από καρκίνο του προστάτη ασθενείς και μπορεί να επηρεάσει κυτταρικός πολλαπλασιασμός, η εισβολή και Ανταπόκριση Docetaxel

κηλίδωση Western και για τις δύο TSG101 και PDC6I /Alix (Σχήμα 7Α) κατέδειξε την επιτυχή απομόνωση εξωσωμάτων από ορούς ασθενών με καρκίνο του προστάτη και υγιείς μάρτυρες. Ποσότητες εξωσώματα ανιχνευθεί στους ορούς ασθενών με καρκίνο του προστάτη και ωρίμασε-μάρτυρες δεν διέφεραν σημαντικά (Σχήμα S1B). Όταν προστίθεται στα κύτταρα DU145, εξωσώματα από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη docetaxel-αφελή (n = 6) έδειξε σημαντική (

P

& lt? 0.001) αύξηση στην εισβολή σε σύγκριση με εξωσώματα από ίδιας ηλικίας υγιείς μάρτυρες (Εικόνα 7Β ). Επιπλέον, όταν εφαρμόζεται σε 22Rv1 κύτταρα, υπήρχε μια σημαντική αύξηση στον πολλαπλασιασμό παρουσία εξωσωμάτων καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση με εκείνες από υγιείς μάρτυρες (

P

& lt? 0,01) (Σχήμα 7C). Για το σκοπό της αξιολόγησης δυνητική σημασία των κυκλοφορούντων εξωσωμάτων σε σχέση με το πώς μπορούν να βοηθήσουν στην πρόβλεψη ή, πράγματι, να επηρεάσει την ανταπόκρισή των ασθενών σε θεραπεία με ντοσεταξέλη, οι επιρροές εξωσωμάτων απομονωθεί από τη θεραπεία ασθενών προ-ντοσεταξέλη (n = 8) σε σύγκριση με συμφωνημένα εξωσώματα απομονωμένος από τους ίδιους ασθενείς κατά τη διάρκεια της 10 κύκλους επεξεργασίας τους docetaxel αξιολογήθηκαν. Για τους σκοπούς αυτής της πιλοτικής μελέτης, οι ασθενείς (n = 6), ο οποίος επιτυγχάνεται μείωση των επιπέδων PSA με τη θεραπεία σε σύγκριση με τα επίπεδα τους PSA προεπεξεργασίας θεωρήθηκαν ως «αποκριτές», ενώ εκείνοι (n = 2) των οποίων τα επίπεδα PSA αυξήθηκαν κατά τη διάρκεια της αγωγής θεωρήθηκαν ως «μη-ανταποκρινόμενοι». Όπως υποδεικνύεται στο Σχήμα 7D, 22Rv1 και DU145 κύτταρα εκτέθηκαν σε κατά προσέγγιση IC

50 συγκεντρώσεις τους του docetaxel και η προκύπτουσα κυτταρική βιωσιμότητα ακολούθως εκχωρηθεί μια αυθαίρετη τιμή του 1. Οι εξωσωμάτων απομονώνονται κατά τη διάρκεια της θεραπείας από ασθενείς με αυξανόμενη PSA επίπεδα (ασθενείς Α & amp? Β? «μη-ανταποκρινόμενοι») βρέθηκαν για την προστασία τόσο των κυττάρων DU145 22Rv1 και από τις επιδράσεις του docetaxel. Αντίθετα, για τα 6 docetaxel «αποκριτές», τα εξωσώματα απομονώθηκαν κατά τη πορεία τους της θεραπείας φάνηκε να ενισχύσουν τα ανασταλτικά αποτελέσματα της docetaxel και στις δύο κύτταρα 22Rv1 και DU145.

στύπωση Western διεξήχθη για να αξιολογηθεί η έκφραση του κοινή εξωσώματα δείκτες σε 30 μg εξωσώματα απομονώθηκαν από ορούς ασθενών docetaxel-αφελή (ασθενής # 1-6) και ίδιας ηλικίας υγιείς μάρτυρες (έλεγχος # 1-6). Β: DU145 εισβολή στην παρουσία εξωσωμάτων από ασθενείς docetaxel-αφελή και ηλικίας, υγιείς μάρτυρες (25 μg), με εκπρόσωπο την εισβολή εικόνα που εμφανίζεται. C: 22Rv1 πολλαπλασιασμό παρουσία εξωσωμάτων από ασθενείς χωρίς προηγούμενη θεραπεία και ίδιας ηλικίας υγιείς μάρτυρες (25 μg). Τα αποτελέσματα εμφανίζονται ως η = 6 ± SEM, όπου ** = ρ & lt? 0,01, *** = ρ & lt? 0.001 (t-test του Student). D: Response, με docetaxel, από 22Rv1 και DU145 κύτταρα παρουσία εξωσωμάτων ορό προερχόμενο από ασθενείς με αυξημένα επίπεδα PSA (n = 2? Ασθενείς Α & amp? Β) και υπό την παρουσία εξωσωμάτων από ασθενείς με μειωμένα επίπεδα PSA ( n = 6? ασθενείς C-H)

η

Συζήτηση

Ενώ η docetaxel παραμένει ως η τρέχουσα χρυσό πρότυπο για τη θεραπεία HRPC, αυξάνει μόνο τη συνολική επιβίωση κατά μέσο όρο 2,5 μήνες και εκείνοι. ασθενείς που αρχικά ανταποκρίνονται τελικά αναπτύσσουν αντίσταση σε αυτό το φάρμακο. Σε αυτή τη μελέτη, αποδεικνύουν την πολύπλοκη φύση της docetaxel-αντίστασης με τη χρήση των

in vitro

ανθρώπινο προστάτη μοντέλα καρκινική κυτταρική σειρά. Τόσο docetaxel ανθεκτική κυτταρική γραμμή παραλλαγές αυτή η μελέτη απέδειξε διασταυρούμενη αντοχή σε δοξορουβικίνη, η οποία είναι συνεπής με προηγούμενες μελέτες των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων ανθεκτικών docetaxel [15] και κύτταρα καρκίνου του μαστού [16]. Επιπλέον, η πακλιταξέλη, από την οποία η ντοσεταξέλη συνθετικά προερχόμενο, έχει συσχετισθεί με διασταυρούμενη αντοχή σε δοξορουβικίνης σε πακλιταξέλη ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη κυτταρικές γραμμές [2]. Είναι ενδιαφέρον, DU145RD και 22Rv1RD κύτταρα, σε σύγκριση με ηλικιωμένους-γονέα τους πληθυσμούς τους, μοιράζονται επίσης έναν αριθμό άλλων φαινοτυπικών χαρακτηριστικές αλλαγές εκτός από την αντίσταση και διασταυρούμενης αντοχής. Αυτά περιλάμβαναν μείωση του συντελεστή πολλαπλασιασμού, αυξημένη

anoikis

αντοχή και αυξημένο σχηματισμό αποικιών? αλλά DU145RD και 22RV1RD διέφεραν σε σχέση με τις αλλαγές στην κινητικότητα και την εισβολή τους

Η αυξημένη μετανάστευση και την εισβολή έχουν ήδη συνδεθεί με χημειοαντίσταση [4] -. [6], οι οποίες αποτυπώνονται στα ευρήματα του μοντέλου DU145 μας. Ενώ οι παραλλαγές κυτταρικών 22Rv1 εμφανίζονται τα αντίθετα αποτελέσματα όσον αφορά την μετανάστευση και την εισβολή, είναι αξιοσημείωτο ότι για τις δοκιμασίες κινητικότητα το επίπεδο κλεισίματος τραύματος ήταν ελάχιστη ακόλουθα 48 ώρες και δοκιμασίες εισβολή /μετανάστευση σπάρθηκαν σε μια ουσιαστικά υψηλότερη πυκνότητα από τα απαιτούμενα για DU145 κύτταρα για να επιτευχθούν τα αποτελέσματα που παρατηρήθηκαν. Είναι πιθανό ότι οι διαφορές αυτές εντοπίζονται θα μπορούσε να συνδεθεί με ήδη γνωστές διαφορές μεταξύ των κυτταρικών γραμμών (όπως περιγράφεται λεπτομερώς, τα κύτταρα 22Rv1 είναι από μια πρωτογενή όγκο και ανδρογόνων ευαίσθητα, ενώ DU145 είναι από μια μετάσταση εγκεφάλου και είναι ανδρογόνο-insensitive). Αυτό υπογραμμίζει περαιτέρω την ανάγκη για αυτά τα είδη των μελετών και την ένταξη των μεγαλύτερων πάνελ μοντέλα κυτταρικής σειράς, όπου είναι εφικτό, ως βέλτιστο δυνατό να αντικατοπτρίζει άλλες ασθενή σε ασθενή διαφορές και έτσι να αυξήσει την κατανόησή μας για την πολυπλοκότητα της docetaxel αντίστασης στην καρκίνος του προστάτη. Η knockdown του βήτα κατενίνης σε κύτταρα osetocarcinoma αυξανόμενη αντίσταση σε δοξορουβικίνη έχει προηγουμένως συσχετιστεί με κατασταλεί εισβολή [7]. Επιπλέον, ανθεκτικών σε πολλαπλά φάρμακα κυτταρικές σειρές που προέρχονται από το μοντέλο Dunning R3327 προστατικού καρκινώματος αρουραίου έχουν αποδειχθεί ότι χάνουν μεταστατικού δυναμικού σε ζώα ξενιστές σε σύγκριση με το μητρικό τους κύτταρα [17].

Προηγούμενες μελέτες χρησιμοποιώντας τον ορθοκολικό καρκίνο ( ΗΤ29), ο καρκίνος του μαστού (T47D) και καρκίνου του παχέος εντέρου (Η630) κύτταρα, σύμφωνα με τη δική μας, έχουν διαπιστώσει ότι απέκτησε χημειο-αντίσταση μπορεί να μειώσει ρυθμό ανάπτυξης [18], [19]. Μειωμένη κυτταρικό πολλαπλασιασμό λόγω της παρουσίας του χρωμοσωμικής αστάθειας, η οποία συνδέεται με την αντίσταση σε πολλά φάρμακα, έχει πρόσφατα καταδειχθεί σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα [20]. Έτσι, η αυξημένη ικανότητα των παραλλαγών docetaxel ανθεκτικό να αντισταθεί θάνατο των κυττάρων κάτω από το

anoikis

συνθήκες στη μελέτη μας δεν μπορεί να αποδοθεί σε μια απλή αυξημένο ρυθμό πολλαπλασιασμού. Η συσχέτιση μεταξύ της αυξημένης κλωνογονική επιβίωση και χημειο-αντίσταση, που παρατηρείται σε τόσο DU145RD μας και τα κύτταρα 22Rv1RD, είναι σύμφωνη με αρκετές άλλες μελέτες [18], [21], [22].

Η αναδυόμενη αποδείξεις ότι τα κύτταρα μπορούν να επικοινωνούν με τις γειτονικές »ή δευτερεύοντα κύτταρα» μέσω της έκκρισης των μικρο- ή νανο-μεγέθους κυστίδια (γνωστή ως εξωσώματα) που μεταφέρουν κυψελοειδή πληροφορίες υπογράμμισε πρόσφατα τη σημασία αυτών των φορέων [23]. Εμείς, ως εκ τούτου, διερευνήθηκε η δυνατότητα αυτών των κυστιδίων να αποβληθεί και να μεταφέρει φαινοτυπικές αλλαγές, που σχετίζονται με docetaxel-αντίσταση, να δευτερευόντων κυττάρων. Δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές στην κινητικότητα, εισβολή ή τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων DU145 και 22Rv1 παρατηρήθηκαν παρουσία DU145- ή DU145RD προερχόμενο εξωσώματα. Περιορισμένες μελέτες, μέχρι σήμερα, έχουν αποδείξει ότι εξωσώματα εκφράζουν αμφιρεγουλίνη [24] και HSP90α [25] μπορεί να αυξήσει τον καρκίνο κυτταρική κινητικότητα και τη μετανάστευση. Ωστόσο, αυτό δεν φαίνεται να είναι η περίπτωση με τα εξωσώματα που προέρχεται από κύτταρα καρκίνου του προστάτη αξιολογείται εδώ.

Είναι ενδιαφέρον βρήκαμε επάγεται docetaxel-αντίσταση με κύτταρα DU145 παρουσία DU145RD εξωσωμάτων (περ. 22%), σε σύγκριση με όταν αυτά τα κύτταρα εκτέθηκαν σε δικές τους εξωσώματα. Αυτό υποδηλώνει ότι DU145RD εξωσώματα είναι, στην πραγματικότητα, η μεταφορά αντίσταση σε docetaxel. Επιπλέον, ένα παρόμοιο μοτίβο βρέθηκε όταν DU145- και DU145RD προερχόμενα εξωσώματα προστέθηκαν σε κύτταρα 22Rv1 και LNCap. Ειδικότερα, μια σημαντική αύξηση στην αντίσταση docetaxel-(περίπου 15% για 22Rv1?. 16% για LNCap), ανεξάρτητα από επιρροές πολλαπλασιασμού, είχε ως αποτέλεσμα. Αυτό, για πρώτη φορά, υποδεικνύει ότι εξωσώματα μπορεί να είναι ένα μέσο επικοινωνίας docetaxel-αντίσταση μεταξύ των κυττάρων. Για να επιβεβαιωθεί ότι η παρατηρούμενη επιπτώσεις των DU145RD που προέρχονται εξωσώματα δεν περιορίζεται σε αυτήν την παραλλαγή κυτταρική γραμμή, πραγματοποιήσαμε μια παρόμοια έρευνα με 22Rv1 και 22Rv1RD εξωσώματα. Σύμφωνα με τα ευρήματα από τις αρχικές αναλύσεις εξωσώματα DU145RD μας, παρατηρήσαμε μια παρόμοια τάση της ανατίθενται docetaxel-αντίσταση (

δηλαδή

αύξηση της περ. 11-12%) και στα δύο κύτταρα DU145 και LNCap παρουσία 22Rv1RD εξωσώματα.

MDR-1 /P-gp εκφράζεται τόσο από DU145RD και 22Rv1RD μας κύτταρα αλλά είναι μη ανιχνεύσιμη στα μητρικά κύτταρα, ενοχοποιώντας ως εμπλέκονται στη αποκτήσει docetaxel-αντίσταση (η παρατήρηση αυτή είναι κάπως στη διατήρηση με την κλινική κατάσταση όπου η πλειονότητα των καρκίνων του προστάτη είναι MDR-1 /P-gp-θετικών [26]). Είναι σημαντικό ότι, βρήκαμε ότι το πρότυπο έκφρασης των αντίστοιχων εξωσώματα αντανακλάται εκείνη των κυττάρων από το οποίο προήλθαν, υποστηρίζοντας περαιτέρω τις δυνατότητες της μεταβίβασης αντίστασης και η πρότασή μας ότι MDR1 /P-gp θα μπορούσε δυνητικά να είναι -τουλάχιστον μερικώς- που συμμετέχουν στην πρόσφατα απέκτησε την αντίσταση που παρέχεται από τα εξωσώματα. Ωστόσο, η διαφορά στα επίπεδα /P-gp-1 MDR μεταξύ εξωσώματα από παραλλαγές docetaxel ανθεκτικά σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα τους δεν συνεπάγεται κατ ‘ανάγκην αιτιώδη ρόλο για MDR1- /P-gp στο φαρμακευτικής αντίστασης που παρατηρείται.

Για να διερευνήσουν περαιτέρω τις δυνατότητες εξωσωμάτων σε κλινικό περιβάλλον, ως πιλοτική μελέτη απομονώσαμε εξωσωμάτων από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη docetaxel-αφελή και ίδιας ηλικίας υγιείς μάρτυρες. Ερευνήσαμε επηρεάζει αυτών των εξωσωμάτων για τον καρκίνο των κυττάρων εισβολής και του πολλαπλασιασμού. Το αυξημένο πολλαπλασιασμό και εισβολή κυττάρων παρουσία εξωσωμάτων από ασθενείς με καρκίνο υποδηλώνει ένα ρόλο αιτιολογικός για αυτά τα εξωσώματα. Ενώ αυτό είναι μια μικρή πιλοτική μελέτη, σε συνδυασμό με κυτταρικές μελέτες γραμμή που προέρχεται από εξωσώματα μας, υποστηρίζει περαιτέρω την υπόθεση ότι εξωσώματα μπορεί να έχει ένα ρόλο στην επικοινωνία των καρκινικών κυττάρων του προστάτη.

Στο πλαίσιο της docetaxel-αντίστασης, μπορούμε στη συνέχεια διερευνήθηκε το ενδιαφέρον εξωσωμάτων που προέρχονται από σχετικές ασθενείς. Συγκεκριμένα αυτή η πιλοτική μελέτη (n = 8 ασθενείς) περιλαμβάνονται συμφωνημένα εξωσώματα ορού που λαμβάνονται πριν και κατά τη διάρκεια της θεραπείας πορεία docetaxel. Εδώ αξιολόγησε την απόκριση των κυττάρων DU145 και 22Rv1 να τους IC

50 συγκεντρώσεις docetaxel (όπως φαίνεται στον Πίνακα 1

δηλαδή

1.7 ηΜ για τα κύτταρα DU145? 4 ηΜ για 22Rv1 κύτταρα) με την παρουσία αυτών των εξωσώματα πληθυσμούς. Η παρατηρούμενη docetaxel αντοχή ανατίθενται στις δύο κυτταρικές σειρές με εξωσώματα απομονώθηκαν από την προ-κύκλο 7 ορών (n = 2 ασθενείς) συσχετίστηκε με αύξηση των ασθενών σε επίπεδα PSA. Τα εξωσώματα από τα υπόλοιπα 6 ασθενείς φάνηκε να προσδώσει αυξημένη ευαισθησία για τα δύο κύτταρα DU145 και 22Rv1, συσχετίζοντας με τους ασθενείς (n = 6) μειωμένα επίπεδα του PSA πάνω από την πορεία τους θεραπείας.

Μια πιθανή εξήγηση για τον τρόπο με όπου τα εξωσώματα επηρεάζουν τον φαινότυπο των κυττάρων «στόχος» είναι ότι έχουν τη μεταφορά mRNA, miRNAs και /ή πρωτεϊνών από τα κύτταρα που αποκτήθηκαν αντίσταση που είναι αιτιώδης μόρια στην αλλαγή της κυτταρικό φαινότυπο των δευτερευόντων κυττάρων αποδέκτη. Αυτό είναι σύμφωνο με συσσώρευση αποδείξεις ότι εξωσώματα παίζουν σημαντικό ρόλο στην κύτταρο-προς-κύτταρο επικοινωνία. Για παράδειγμα, το 2007 Valadi et al. έδειξαν ότι τα mRNA μεταφέρεται μέσω εξωσώματα από τα σιτευτικά κύτταρα που μεταφράζεται σε πρωτεΐνη για τη μεταφορά τους στα κύτταρα-στόχους [10]. Η επιτυχής πρόσληψη εξωσωμάτων από δευτερεύοντα κύτταρα καταδείχθηκε επίσης από Skog et al. [11] όταν φθορισμό σημασμένο εξωσώματα γλοιοβλαστώματος επωάστηκαν με ενδοθηλιακά κύτταρα. Πολλές πιο πρόσφατα παραδείγματα των παρατηρήσεων αυτών έχουν αναφερθεί και σε μια πρόσφατη γνωμοδότηση Mittelbrunn και Sanchez-Madrid [27] περιγράφει περαιτέρω πώς μπορεί να συμβεί αυτή η μεταβίβαση των γενετικών πληροφοριών, με τις επιπτώσεις εξωσωμάτων στις δευτερογενείς κύτταρα δυνητικά συμβάλλουν στην καρκινογένεση και την ανάπτυξη του όγκου? χύτευση του μικροπεριβάλλον του όγκου? προαγωγή αγγειογένεσης? και ρύθμιση της ανοσολογικής απόκρισης [28], [29]. Ειδικότερα σε σχέση με τη ρύθμιση της ανταπόκρισης στη θεραπεία κατά του καρκίνου, έχουν HER2-υπερεκφράζουν εξωσώματα από κύτταρα του δότη έχουν δειχθεί ότι μειώνουν την ευαισθησία των κυττάρων-δεκτών στην τραστουζουμάμπη [30]. Έτσι, ενώ δεν μπορούμε να κάνουμε εικασίες ως προς τα συγκεκριμένα μόρια που μπορούν να πραγματοποιηθούν

μέσω

εξωσώματα από ανθεκτικά κύτταρα μας για να προκαλέσει φαινοτυπικές αλλαγές στα κύτταρα-στόχους (εκτός από το να δείχνουν ότι η μεταφορά MDR-1 /P-gp πρωτεΐνη μπορεί, εν μέρει, είναι ένας παράγοντας που συμβάλλει), είναι λογικό να υποθέσουμε ότι μπορεί να είναι ένας απλός συνδυασμός -ή ως επί- mRNAs, miRNAs ή /και πρωτεΐνες που έχουν αιτιώδη ρόλο σε docetaxel-αντίσταση. Έτσι, τώρα που λειτουργική ενδιαφέρον έχει συνδεθεί με αυτά τα εξωσώματα στο προσδίδει ένα επίπεδο docetaxel-αντίσταση, προφίλ το περιεχόμενο αυτών των εξωσωμάτων είναι αναγκαία για να κατανοήσουμε καλύτερα την ακριβή μόριο (ες) και μηχανισμό (ες) που συμμετέχουν.

Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη επιβεβαιώνει ότι docetaxel αντοχή στον καρκίνο του προστάτη είναι εξαιρετικά πολύπλοκη και μπορεί να σχετίζεται με ποικίλα κυτταρικά επηρεάζει όσον αφορά την αντοχή σε άλλα χημειοθεραπευτικά φάρμακα, κινητικότητα, εισβολή, και ανεξάρτητο από αγκύρωση ανάπτυξη. Είναι σαφές, ωστόσο, ότι δεδομένης της πολύπλευρη φύση του docetaxel αντοχής ότι όχι ένα, αλλά αρκετοί παράγοντες είναι πιθανό να μεσολαβούν επιδράσεις τους στον καρκίνο του προστάτη. Εδώ δείχνουμε, για πρώτη φορά, ότι η κυτταρική επικοινωνία

μέσω

εξωσώματα μπορεί, εν μέρει, να οδηγήσει σε ανατίθενται docetaxel αντοχή σε δευτερεύουσα κύτταρα. Μελλοντικές μελέτες σε μεγαλύτερες ομάδες των δειγμάτων ορού, από τους δύο ασθενείς docetaxel-αφελή, αλλά και από ασθενείς μετά από θεραπεία με ντοσεταξέλη, είναι δικαιολογημένη Την αξιολόγηση και τις επιπτώσεις της και οι μοριακές περιεχόμενο της exosomes- να επεκτείνει την κατανόησή μας εξωσωμάτων και τη σημασία τους για την κυτταρική επικοινωνίας και docetaxel αντοχής στον καρκίνο του προστάτη

Υλικά και Μέθοδοι

γραμμές κυττάρων και κυττάρων Πολιτισμού

Ο καρκίνος του προστάτη κυτταρικές σειρές, 22Rv1 (ATCC CRL-2505?. ανδρογόνα-ευαίσθητο ? από μια πρωτογενή ανθρώπινα όγκου), DU145 (ATCC ΗΤΒ-81? ανδρογόνο αναίσθητη? από μια μετάσταση εγκεφάλου) και LNCap (ATCC CRL-1740? ανδρογόνο ευαίσθητος? από λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες) αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection ( ATCC). 22Rv1 και DU145 κύτταρα διατηρήθηκαν σε μέσο RPMI (Sigma-Aldrich) συμπληρωμένου με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (ΡΑΑ), 1% Ε-γλουταμίνη (Sigma-Aldrich) και στους 37 ° C /5% CO

2. LNCaP κύτταρα διατηρήθηκαν σε προχωρημένο RPMI (Biosciences) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (ΡΑΑ), 1% Ε-γλουταμίνη (Sigma-Aldrich) και 1% Hepes (Sigma-Aldrich) και στους 37 ° C /5% CO

2.