PLoS One: Συγκλίνουσες βαθμολογικά και c-Met-σηματοδότηση μέσω Components Προβλέψτε επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του προστάτη: Ένα διαφυλετικό Συγκριτική Μελέτη

Ιανουάριος 23rd, 2016 elhealth του καρκίνου άρθρα

Αφηρημένο

Έχουμε αναφερθεί (

PLoS One

6 (12): e28670, 2011) ότι η ενεργοποίηση του c-Met σηματοδότηση σε μοντέλα οστών μεταστατικό LNCaP κυττάρων και ξενομοσχεύματος RANKL που υπερεκφράζουν αυξημένη έκφραση του RANK, RANKL, c-Met, και φωσφορυλιωμένη c-Met, και με τη μεσολάβηση κατάντη σηματοδότησης. Επιβεβαιώσαμε τη σημασία του δικτύου σηματοδοσίας RANK μεσολάβηση σε ευνουχισμό ανθεκτικά κλινικά ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη (PC) ιστούς. Στην έκθεση αυτή, χρησιμοποιήσαμε μια πολυφασματική κβαντική τεχνική επισήμανση τελεία στην ετικέτα έξι RANK και c-Met μεσολαβητές σηματοδοτικό μονοπάτι συγκλίνουν ταυτόχρονα σε φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη δείγματα ιστών (FFPE), την ποσοτικοποίηση της έντασης της κάθε έκφρασης σε υπο-κυτταρικό επίπεδο, και διερευνηθεί πιθανή χρησιμότητα τους ως προγνωστικοί παράγοντες της επιβίωσης ασθενών σε Καυκάσιος-Αμερικής, της Αφρικής και της Αμερικής και της Κίνας άνδρες. Βρήκαμε ότι RANKL και νευροπιλίνη-1 (ΕΠΜ-1) έκφρασης προβλέπει την επιβίωση του Καυκάσου-Αμερικανών με τον υπολογιστή. Ένα σκορ Gleason ≥8 σε συνδυασμό με την έκφραση της πυρηνικής p-c-Met προβλέπει επιβίωσης στις χώρες της Αφρικής και της Αμερικής ασθενείς PC. Νευροπιλίνη-1, ρ-ΝΡ-κΒ ρ65 και VEGF είναι προάγγελοι για τη συνολική επιβίωση των κινεζικών άνδρες με PC. Τα αποτελέσματα αυτά συλλογικά υποστηρίζουν διαφυλετικός διαφορές σε δίκτυα κυτταρικής σηματοδότησης που μπορεί να προβλέψει την επιβίωση των ασθενών PC

Παράθεση:. Hu P, Chung LWK, Berel D, Frierson HF, Yang H, Liu C, et al. (2013) Συγκλίνουσες βαθμολογικά και c-Met-σηματοδότηση μέσω Components Προβλέψτε επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του προστάτη: Ένα διαφυλετικό Συγκριτική Μελέτη. PLoS ONE 8 (9): e73081. doi: 10.1371 /journal.pone.0073081

Επιμέλεια: Νατάσα Κυπριανού, Πανεπιστήμιο του Κεντάκι College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 3 του Ιουλίου του 2013? Αποδεκτές: 16 του Ιούλη, 2013? Δημοσιεύθηκε: 16 Σεπτέμβρη 2013

Copyright: © 2013 Hu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από NIH2 P01CA 98912, NIH1 R01 CA122602 και Βραβείο PCF Challenge και ΤΕ Προικισμένο Cancer Research πρόεδρο να LWKC. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Μετά την εφαρμογή του αντιγόνου (PSA) έλεγχο του ειδικού προστατικού καρκίνου του προστάτη (PC) η διάγνωση έγινε πολύ πιο κοινή. Δεδομένου ότι ένας από κάθε 8-10 άνδρες διαγνώστηκαν με PC πεθαίνει από τη νόσο αυτή, είναι σημαντικό να αναπτυχθούν αποτελεσματικές προγνωστικούς παράγοντες για την επιλογή εκείνων που θα πρέπει να αντιμετωπίζονται και να αποφευχθεί η άσκοπη θεραπεία [1], [2]. Κατά τις τελευταίες δεκαετίες, πολλές προγνωστική βιοδείκτες, είτε σχετίζονται με ιστούς ή σε βιολογικά υγρά, έχουν χρησιμοποιηθεί για να διαφοροποιήσει βραδείας από επιθετικές μορφές PC. Αυτές οι δείκτες κατηγοριοποιούνται ευρέως ως καταστολείς όγκων, ογκογονίδια, παράγοντες μεταγραφής, και ρυθμιστές του κυτταρικού μεταβολισμού, και φαινοτύπων όπως τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την απόπτωση, την εισβολή, τη μετανάστευση και τη μετάσταση [2], [3]. Συνδυάσαμε τα μοντέλα καλλιέργειας κυττάρων με τη σχέση καταγωγή,

δηλαδή

, που μοιράζονται το ίδιο γενετικό υπόβαθρο, αλλά διαφέρουν ως προς την επιθετικότητα τους, με μοντέλα ζώων που εμφανίζουν μεταβλητότητα στην εγγενή εισβολής τους και μεταστατικό δυναμικό για την ανάπτυξη εκ του σύνεγγυς τις σχετικές κυτταρικής σηματοδότησης οδών μιμούνται οι φαινότυποι και συμπεριφορές των κλινικών ανθρώπινο PC. Πραγματοποιήσαμε μια συγκριτική μελέτη με τη χρήση κλινικών ιστούς PC που σχετίζονται με γνωστές επιβίωση του ασθενούς για να ελεγχθεί η υπόθεση ότι η έκφραση ορισμένων βιοδεικτών δίκτυο σηματοδότησης κυττάρων που βρίσκονται σε ζωικά μοντέλα οδήγηση PC κύτταρα να αναπτυχθούν θανατηφόρες οστών και μεταστάσεις μαλακών ιστών θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως βιοδείκτες για την πρόβλεψη της εξέλιξη και επιβίωση των ασθενών PC. Να αναζητήσουν μια καλύτερη κατανόηση των πιθανών διαφυλετικός διαφορές των κυτταρικών δικτύων σηματοδότησης, ελέγξαμε την υπόθεση ότι διαφορετικά βαθμολογικά και c-Met-μεσολάβηση κατάντη κυτταρικής σηματοδότησης συστατικά μπορεί να προβλέψει την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του προστάτη με διαφορετικά φυλετικά υπόβαθρα.

Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι θανατηφόρος PC εξέλιξη σε οστό και μεταστάσεις μαλακών ιστών καθορίζεται από την osteomimetic ιδιότητα των κυττάρων PC [4], [5]. Βρήκαμε ότι διαλυτά παράγοντες όπως β2-μικροσφαιρίνη (β2-Μ) και ενεργοποιητή υποδοχέα του συνδέτη ΝΡ-κΒ (RANKL) μπορεί να οδηγήσει PC και άλλα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα να υποβληθούν σε επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) και προσδίδουν επιθετική φαινοτύπους περιλαμβανομένων τοπική εισβολή και απομακρυσμένων μεταστάσεων [6] – [12]. Μεταξύ των κυτταρικών μονοπατιών σηματοδότησης έχουμε μελετήσει την ενεργοποίηση της σηματοδότησης RANKL-RANK ήταν ιδιαίτερου ενδιαφέροντος, διότι αυτή η οδός σηματοδότησης ενεργοποιείται τόσο σε μοντέλα ζώων και κλινικά δείγματα PC [8], [12], και η στόχευση RANKL με ένα αντι-RANKL αντίσωμα , denosumab, ήταν ιδιαίτερα αποτελεσματικό στην παρεμπόδιση των λυτικών βλαβών οστού που συνδυάζεται με άντρες που έλαβαν θεραπεία στέρησης ανδρογόνων [13]. σηματοδότηση RANKL-RANK επίσης βρέθηκε να εμπλέκεται στην επέκταση του βλαστικού κυττάρου κόγχη κατά την ανάπτυξη της ορμονικά ευαίσθητα όργανα [14], [15]. Παρατηρήσαμε σε αμφότερες τις κυτταρικές και ζωικά μοντέλα LNCaP και ARCaP ότι μια «φαύλος κύκλος» της σηματοδότησης RANKL-RANK είναι υπεύθυνο για την απονομή της ικανότητας αυτών των κυττάρων να αναπτυχθούν και μετάσταση στα οστά και μαλακούς ιστούς σε ποντίκια, μέσω της επαγωγής του EMT, τοπικών εισβολή και απομακρυσμένων μεταστάσεων [5], [8], [12]. Με γενετικά αδρανοποίηση RANK ή τον υποδοχέα c-Met, εμείς κατήργησε εντελώς την ικανότητα αυτών των καρκινικών κυττάρων να μετάσταση στα οστά και τους μαλακούς ιστούς [16]. Βρήκαμε ότι μέσω RANKL-RANK σηματοδότησης μια σειρά από παράγοντες μεταγραφής και γονιδίων-στόχων ρυθμίζονταν σε συντονισμό, με αποτέλεσμα την αλλοίωση των θεμελιωδών κυτταρικών διαδικασιών των καρκινικών κυττάρων. Συγκεκριμένα, βρήκαμε ότι η σηματοδότηση RANKL-RANK προάγει την έκφραση του ΚΑΝΚΕ, RANK, και c-Met μέσω της αυξημένης έκφρασης παραγόντων μεταγραφής c-Myc /Max [16]. Σε συνεννόηση με την ενεργοποίηση της σηματοδότησης RANKL-RANK, μπορούμε επίσης να ανιχνεύεται αυξημένη έκφραση του VEGF σε απάντηση αυξημένων παραγόντων μεταγραφής HIF-1α [6]. Ο VEGF είναι ένα κρίσιμο προ-αγγειογόνος παράγοντας που επάγει τον πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση των ενδοθηλιακών κυττάρων στο εσωτερικό αγγειακό σύστημα του όγκου [17]. Η ανώμαλη έκφραση του VEGF και των υποδοχέων του συνδέεται με κακή πρόγνωση εκδηλώνεται με αυξημένη αγγείωση του όγκου, χημειοαντίσταση, τοπική εισβολή όγκου και απομακρυσμένων μεταστάσεων [18]. Αυξημένα HIF-1α συνδέεται με τα στοιχεία υποξία-απόκρισης (HREs) και ενεργοποιεί VEGF υποκινητή [19]. Νευροπιλίνη-1 (ΕΠΜ-1), ένα VEGF συν-υποδοχέα, ταυτοποιήθηκε αρχικά ως υποδοχέας για σημαφορίνης 3, μεσολαβώντας νευρωνική καθοδήγηση και αξονική ανάπτυξη [20], που δεσμεύεται ειδικά VEGF165 αλλά όχι VEGF121 στην κυτταρική επιφάνεια των ενδοθηλιακών και όγκου κύτταρα [20], [21]. NRP-1 στερείται ένα τυπικό πεδίο κινάσης, και κυρίως λειτουργεί ως συν-υποδοχέας για το σχηματισμό συμπλοκών συνδετήρα-ειδικό. Η ανώμαλη ρύθμιση προς τα πάνω του ΕΠΜ-1 έχει παρατηρηθεί σε υψηλής ποιότητας Gleason και μεταστατικό PC και άλλων συμπαγών όγκων [22], [23]. Το εργαστήριο μας ανέφερε ότι ο VEGF ρυθμίζεται ένα αντι-αποπτωτικό Mcl-1 γονίδιο μέσω NRP1-εξαρτώμενη φωσφορυλίωση του c-Met σε κύτταρα PC και διεύρυνε τη λειτουργία της πρωτεΐνης αυτής στο δίκτυο κυτταρική σηματοδότηση [6].

φυλετικών και εθνοτικών διαφορές στο PC έχουν ευρέως αναφερθεί [24], [25]. Ενώ περιορισμένα δημοσιευμένα δεδομένα υποδεικνύουν πιθανές διαφορές στην επιλεκτική γονιδιακή έκφραση μεταξύ των επιθετικών έναντι νωχελικός υπολογιστή, τα δεδομένα που περιγράφουν διαφυλετικός συγκρίσεις της έκφρασης των γονιδίων μεταξύ των αδένων του προστάτη από τον Αφρο-Αμερικανούς και Καυκάσιους-Αμερικανοί είναι αραιή. Kwabi-Addo και συνεργάτες [26] ανέφεραν διαφορές στην ειδική μεθυλίωση προαγωγού των γονιδίων όπως GSTPi, AR, RAR beta2, SPARC, Timp3, και NKX2-5 στην οποία υψηλότερες μεθυλίωση βρέθηκε σε Αφροαμερικανοί ό, τι σε Καυκάσιος-Αμερικανούς. Χρησιμοποιώντας μια ανοσοϊστοχημική προσέγγιση χρώση στο προφίλ δείγματα PC που λαμβάνονται από Καυκάσιος-Αμερικανοί, Αφρο-Αμερικανοί, οι Κινέζοι και οι Ιάπωνες, βρήκαμε αξιοσημείωτες διαφορές μεταξύ αυτών των διαφυλετικές ομάδες σε σχέση με το προφίλ χρώση τους καταστολείς των όγκων, αγγειογενετική και νευροενδοκρινείς παράγοντες [27], [ ,,,0],28]. Στην παρούσα μελέτη, εστιάζουμε την προσοχή μας σε σύγκριση σηματοδότησης RANKL-RANK και κατάντη δράστες του μεταξύ Καυκάσου-Αμερικανών, Αφρο-Αμερικανοί και Κινέζοι λόγω της σημασίας αυτής της οδού σηματοδότησης στην ανάθεση των οστών PC και μεταστάσεις μαλακών ιστών [5], [6], [8], [12]. Αναλύσαμε τα επίπεδα της γονιδιακής έκφρασης σε ένα μόνο επίπεδο κυττάρου σε κλινικά δείγματα που λαμβάνονται από αυτές διαφυλετικός ομάδες χρησιμοποιώντας καθιερωμένη πολυπλεξίας επισήμανση κβαντική τελεία τεχνική (mQDL) για τη διαδοχική ετικέτα κάθε μία από τις έξι ενδιάμεσα σηματοδότησης, τη σύλληψη πολλαπλών εικόνων, unmix και να ποσοτικοποιηθούν τα σήματα σε υπο-κυτταρικό επίπεδο και τα δεδομένα σε μια σειρά από λογιστικής στατιστικών αναλύσεων για τον προσδιορισμό πρόβλεψη σημασία τους είτε μόνο του είτε σε συνδυασμό με τις κλινικές βαθμολογίες Gleason. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έδειξαν ότι διαφορετικές καθοδικούς τελεστές του RANKL-RANK μονοπατιού σηματοδότησης μπορεί να προβλέψει PC συνολική επιβίωση σε διαφυλετικός ομάδες με PC.

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγματα ιστού

Αυτή η έρευνα δεν περιελάμβανε καμία ανθρώπινη συμμετέχοντες. Όλα τα δείγματα ιστών που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη είχαν αρχειοθετηθεί σταθεροποιημένο με φορμαλίνη εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστοί καρκίνο (FFPE) του προστάτη. Η χρήση των δειγμάτων στον τομέα της έρευνας εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας όργανο του Ιατρικού Κέντρου Cedars-Sinai (IRB # Pro21228). Συνολικά 54 αφαιρεθεί χειρουργικά FFPE δείγματα πρωτοπαθή καρκίνο του προστάτη ελήφθησαν από ασθενείς από το Τμήμα Παθολογίας, το Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια, Charlottesville, Βιρτζίνια, και το Τμήμα Παθολογίας, Πανεπιστήμιο Jilin, Changchun, Κίνα, με τεκμηριωμένο καρκίνο προκάλεσε το θάνατο ή πληροφορίες επιβίωσης. Από τα 54 δείγματα, 20 το καθένα ήταν από Caucasian- και Αφρο-Αμερικανούς και 14 από την κινεζική ανδρών. Ο αριθμός των ασθενών, εκδηλώσεις, και η μέση (σειρές) επιβίωσης σε μήνες είναι: Καυκάσιος-Αμερικανοί-20, 16, και 74,6 (εύρος 1-190)? Αφρο-Αμερικανοί-20, 18, και 46,3 (εύρος 2-181)? Κινέζικα-14, 13, 31.9 (εύρος 1-107). Οι χειρουργικές επεμβάσεις από τον οποίο ελήφθησαν τα δείγματα ιστού ήταν: Καυκάσιος-Αμερικανοί: 15 περιπτώσεις από διουρηθρική εκτομή του προστάτη (TURP), 4 περιπτώσεις από ριζική προστατεκτομή (RP) και 1 περίπτωση από βιοψία με βελόνα (NBX)? Αφρο-Αμερικανοί: 18 περιπτώσεις από διουρηθρική προστατεκτομή και 2 περιπτώσεις από RP? Κινέζοι: 1 υπόθεση από διουρηθρική προστατεκτομή, 6 περιπτώσεις από την υπερηβική προστατεκτομή και 7 περιπτώσεις από βιοψία με βελόνα. Έγιναν προσπάθειες για να εξασφαλιστεί η συνοχή της ταξινόμησης Gleason? η ιστοπαθολογική μοτίβο των δειγμάτων από τις ΗΠΑ και την Κίνα βαθμολογήθηκαν από παθολόγους Δρ LS Zhao και ο Δρ Hua Yang από το Πανεπιστήμιο Jilin κατά τις επισκέψεις τους στο UTMDACC στο Χιούστον, Τέξας και το Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια, αντίστοιχα, και επιβεβαιώθηκε από τον Δρ Henry ΣΤ Frierson, ένα ουροποιητικό παθολόγος από το Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια

αντιδραστήρια Immunoassay

Τα πρωτογενή αντισώματα (ABS) και τις πηγές τους ήταν:. μονοκλωνικά Abs ποντικού έναντι HIF-1α (NB100-105) και RANKL (12A668) από Novus Biologicals (St. Charles, MO)? κουνέλι πολυκλωνικό Abs προς π-ΝΡκΒ ρ65 ή ρ-ρ65 (Ser 536), VEGF (Α-20), και νευροπιλίνη-1 ή NRP-1 (H286) από την Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA)? και κουνελιού πολυκλωνικό Ab σε ρ-c-Met (pYpYpY1230 /1234/1235) από την Invitrogen (Carlsbad, CA). Δευτερεύουσα Abs που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη παρασκευάστηκαν σε ένα κοκτέιλ βιοτινυλιωμένου Abs ποντικού, κουνελιού, και IgG κατσίκας από Vector Laboratories Inc. (Burlingame, CA). Φωσφορικό ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα (PBS) και στρεπταβιδίνη συζευγμένη με κβαντικές τελείες (QD) σε 565-, 585-, 605-, 625-, 655- και 705 μήκη κύματος nm ως 1 μΜ διάλυμα παρακαταθήκης ήταν από την Invitrogen.

επισήμανση πολυπλεκτικές QD (mQDL)

Έχουμε αναπτύξει ένα πρωτόκολλο mQDL χρησιμοποιώντας επικαλυμμένα με στρεπταβιδίνη ΚΤ συζευγμένο με βιοτινυλιωμένα δευτερογενή [6] Ab. Το πειραματικό πρωτόκολλο επισήμανσης που εμπλέκονται σύζευξη του πρωτογενούς Ab σε ένα βιοτινυλιωμένο δευτερεύον Ab, το οποίο με τη σειρά του αντιδρά με στρεπταβιδίνη συζευγμένη με QD σε ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος. Αυτή η διαδικασία επαναλήφθηκε επισήμανση για πολλαπλές πρωτοβάθμιας Abs έναντι διαφόρων αντιγόνων βιοδείκτη μετά τη βελτιστοποίηση. Τα QD-επισημασμένα εικόνες εξετάστηκαν και κατέλαβε κάτω από μια πολυφασματική κάμερα Nuance και η κυτταρική τμηματοποίηση και ποσοτικοποίηση διεξήχθησαν από ενημερώνουν το λογισμικό (Perkin Elmer? Waltham, ΜΑ). Η πολυφασματική κύβος QD εικόνα ήταν ακόμη δεν έχουν αναμειχθεί με συστατικό εικόνες με διακεκριμένα μήκη κύματος αιχμής QD. Μετά την απομάκρυνση του αυτοφθορισμό, οι μεμονωμένες QD-επισημασμένων πρωτεϊνών μπορούν να ανιχνευθούν

Οι αλληλουχίες ανοσοαντίδραση και οι αραιώσεις του πρωτογενούς Ab και αντιστοίχιση στρεπταβιδίνη συζευγμένη με QD του ήταν:. 1) αντι-HIF-1α Ab (1: 40) και στρεπταβιδίνη-QD565 (1:100)? 2) αντι-ρ-ΝΡκΒ ρ65 Ab (1:100) και στρεπταβιδίνη-QD585 (1:100)? 3) αντι-VEGF Ab (δύο παρα είκοσι) και στρεπταβιδίνη-QD605 (1:100)? 4) αντι-νευροπιλίνη-1 Ab (1:200) και στρεπταβιδίνη-QD625 (1:100)? 5) αντι- ρ-c-Met Ab (1:120) και στρεπταβιδίνη-QD655 (1:100)? 6) αντι-RANKL Ab (1:100) και στρεπταβιδίνη-QD705 (1:100). Όλες οι πρωτογενείς Abs επωάστηκαν στους 4

° C, όλη τη νύκτα και στρεπταβιδίνη-QD αντέδρασε στους 37 ° C, 1 ώρα. Μετά από 4 πλύσεις με PBS-Triton (0,4%), τα δείγματα χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ και τοποθετημένα. Για αρνητικό έλεγχο, πρωτογενείς Abs αντικαταστάθηκαν με isotype- και τα είδη ταιριαστό Abs ελέγχου και εφαρμόζεται στις άμεσες γειτονικά τμήματα ιστού από 5 ζεύγη δειγμάτων ιστού από τις περιπτώσεις που μελετήθηκαν. mQDL διεξήχθη παράλληλα με την τσουλήθρα ιστό επισημασμένο με τη δοκιμή πρωτογενούς Abs. Το μέσο που βασίζεται σε κύτταρα ένταση από τους αρνητικούς μάρτυρες αφαιρέθηκε από την επισήμανση Ab δοκιμή. Αναλύει

σύλληψης εικόνας και βιοδείκτης ένταση έκφραση ποσοτικοποίηση

φασματικής απεικόνισης

Πολυπλεξίας συμπεριλαμβανομένης της απόκτησης της εικόνας και αποσυνέλιξη χρησιμοποιώντας Nuance 3.0 λογισμικό και ποσοτικοποίηση του σήματος χρησιμοποιώντας ενημερώσει 1.3 του λογισμικού έγιναν όπως περιγράφεται στην προηγούμενη έκθεσή μας [6].

περιγραφή των δεδομένων και στατιστικών αναλύσεων

δεδομένα περιγραφή.

Το κύριο αποτέλεσμα ορίζεται ως συνολική επιβίωση. Μεταβλητές που μετρήθηκαν ήταν σκορ Gleason, η φυλή (Καυκάσια-Αμερικανοί, Αφρο-Αμερικανοί και Κινέζοι), και με βάση τα κύτταρα ένταση έκφρασης των βιοδεικτών στο κυτταρόπλασμα, C? πυρήνα, Ν? και κυτταρόπλασμα συν τον πυρήνα, C + N του HIF-1α, ρ-p65, VEGF, NRP-1, ρ-c-Met και RANKL. Μετρήσεις βιοδείκτη για κάθε ασθενή υπολογίστηκαν κατά μέσο όρο από 4-5 εικόνες που έχουν ληφθεί από καθεμία από τις περιοχές ιστού του όγκου στη διαφάνεια. Κατά μέσο όρο 27 εικόνων /διαφανειών ιστού λήφθηκε (μια σειρά από 4-114 εικόνες) που κατανέμονται σε: Καυκάσιος-Αμερικανοί, 5-114 εικόνες? Αφρο-Αμερικανοί, 5-57 εικόνες? Κινέζικα, 4-46 εικόνες. Το συνολικό μέγεθος του δείγματος της παρούσας μελέτης είναι 54 ασθενείς (Καυκάσιος-Αμερικανός, Ν = 20? Αφρο-Αμερικανός, Ν = 20? Κινέζικα, Ν = 14). Οι κατά μέσο όρο του αριθμού των κυττάρων που αναλύθηκαν με τις ελάχιστες στις μέγιστες και τυπική απόκλιση (SD) είναι: Καυκάσιος-Αμερικανοί, 17207 (1,363-50,488, SD = 14,702)? Αφρο-Αμερικανοί, 12541 (2,062-24,612? SD = 6.899)? Κινέζικα, 3290 (794-14,770, SD = 3.531).

Στατιστική ανάλυση.

Η μέθοδος Kaplan και Meier χρησιμοποιήθηκε για να υπολογίσει τη συνολική επιβίωση και τη δοκιμή logrank να συγκρίνουν τις ομάδες. Πολυπαραγοντική αναλογικού κινδύνου παλινδρόμησης με χρήση των εμπρός μεταβλητή επιλογής χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει ποιες βιοδείκτες είναι προγνωστικά της συνολικής επιβίωσης παρουσία συμπαράγοντες. υπόθεση των αναλογικών κινδύνων αξιολογήθηκε γραφικά και αναλυτικά, και χρησιμοποιήθηκαν martingale υπολείμματα για να εξασφαλιστεί ότι τα μοντέλα είναι κατάλληλα. Κρίσιμο επίπεδο σημαντικότητας ορίστηκε σε 5%.

Αποτελέσματα

σκορ Gleason box-οικόπεδα από αγώνα μεταξύ των 3 μελέτησε ομάδες ασθενών έδειξε συγκεντρωμένα υψηλά σκορ Gleason σε Καυκάσιους-Αμερικανούς, Αφρο-Αμερικανοί και Κινέζοι ασθενείς PC (Σχήμα 1). Το Σχήμα 2 δείχνει μια σημαντική διαφορά στη συνολική επιβίωση από τη φυλή, συμπεριλαμβανομένων όλων των περιπτώσεων (Ν = 54, ο αριθμός των εκδηλώσεων = 47) από δοκιμασία log-rank (

= 0,0249). Επιπλέον, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στη μέση και τυπικές αποκλίσεις βιοδεικτών »για συνδυασμό δείγματος και από κάθε αγώνα (Πίνακας 1), όπου Κινέζοι διαφέρουν τόσο από Καυκάσιος-Αμερικανοί και οι Αφρο-Αμερικανοί. Για τον εντοπισμό πιθανών βιοδεικτών που προβλέπουν συνολική επιβίωση των ασθενών με PC, μπορούμε στη συνέχεια αναλύθηκαν όλα τα δεδομένα ανεξάρτητα για κάθε αγώνα. Συνεχείς αναλύσεις μονομεταβλητά αναλογικό μοντέλα παλινδρόμησης κινδύνου με Gleason σκοράρει και βιοδεικτών για τους ασθενείς του Καυκάσου και της Αμερικής (Πίνακας 2) έδειξαν ότι RANKL και ΕΠΜ-1 έκφρασης στο κυτταρόπλασμα (C) συν πυρήνα (Ν) συσχετίζονταν σημαντικά με τη συνολική επιβίωση των ασθενών με PC,

-τιμή = 0.0053 και 0.0029, αντίστοιχα. Σημαντικές συσχετίσεις βρέθηκαν επίσης όταν η έκφραση σε C ή Ν αναλύθηκε ξεχωριστά. Παρόμοιες αναλύσεις έδειξαν ότι ΕΠΜ-1 σε C, N, και C + N? p-p65 σε C, C + N? και VEGF σε C συσχετίζονταν σημαντικά με τη συνολική επιβίωση των Κινέζων ασθενών με PC (Πίνακας 3). Το Σχήμα 3 δείχνει NRP-1, π-ρ65 και VEGF εικόνες έκφραση πρωτεΐνης από το mQDL ιστών που λαμβάνονται από ένα κινεζικό ασθενή που επιβίωσαν για 66 μήνες (πινάκια κορυφής) vs έναν ασθενή ο οποίος επιβίωσαν για 2 μήνες (κάτω πάνελ). Σε αντίθεση, με την εξαίρεση της βαθμολογίας Gleason (

= 0,027), κανένα από τα 6 βιοδεικτών επιτευχθεί σημαντική συσχέτιση με το χρόνο επιβίωσης των Αφρο-Αμερικανός ασθενείς αναλύθηκαν με την ίδια μέθοδο (Πίνακας 4). Correlograms (σχήματα 4, 5, 6) έδειξε ζεύγη συσχετισμοί μεταξύ βιοδεικτών ένας με τον άλλον, και βιοδείκτες με Gleason βαθμολογίες μεταξύ Καυκάσου-Αμερικανών, Αφρο-Αμερικανούς και Κινέζους ασθενείς, αντίστοιχα. Η κύρια διαγώνιο δείχνει τα συμμεταβλητή ονόματα για κάθε ζεύγη σύγκριση. Το κέντρο στο οριζόντιο και κάθετο αλληλεπίδραση του κάθε συμμεταβλητή είναι ο συντελεστής συσχέτισης Pearson και στο πάνω δεξιά είναι η σχετική τιμή ρ. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι υπήρχαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των περισσότερων από τα ζεύγη βιοδεικτών (με έντονους χαρακτήρες) ανεξάρτητα από τη φυλή, αλλά μόνο HIF-1α σχετίζεται με σκορ Gleason για τους ασθενείς του Καυκάσου και της Αμερικής,

-τιμή = 0.002. Το σχήμα 7 δείχνει επιπλέον discretized απεικονίσεις της επίδρασης της κατηγοριοποιούνται βιοδεικτών για τη συνολική επιβίωση των Καυκάσιων ασθενών, όπως αναλύθηκαν από Kaplan και Meier μέθοδο και log-rank test για να συγκρίνει την έκφραση της πρωτεΐνης βιοδείκτη στο κυτταρόπλασμα συν πυρήνα χωρισμένα σε δύο ομάδες, υψηλής και χαμηλής, χρησιμοποιώντας το μεσαίο ως σημείο αποκοπής. RANKL και ΕΠΜ-1 συσχετίστηκε σημαντικά με τη συνολική επιβίωση, με το

-τιμή = 0,025 και 0,005, αντίστοιχα. Σχήμα 8 παρουσιάζει αμιγή εικόνες mQDL των ΕΠΜ-1 και RANKL έκφραση από εκπρόσωπο ιστούς από Καυκάσιος-Αμερικανός ασθενής που επιβίωσαν για 163 μήνες (επάνω πάνελ)

vs.

Ένα ασθενή που επέζησε μόλις 2 μηνών (κάτω πάνελ) . Παρόμοιες αναλύσεις που πραγματοποιήθηκαν σε ασθενείς Αφρικής και της Αμερικής και της Κίνας δεν δείχνουν μια συσχέτιση μεταξύ RANKL και ΕΠΜ-1 βιοδείκτες και ασθενής συνολική επιβίωση (τα δεδομένα δεν περιλαμβάνονται). Για Αφρο-Αμερικανοί, αν και μόνο Gleason σκορ ήταν σημαντική στην μονοπαραγοντική μοντέλο (Πίνακας 4), η πυρηνική pc-Met έγινε ένα σημαντικό προγνωστικό παράγοντα σε συνδυασμό με το σκορ Gleason (Πίνακας 5) σε ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο αναλογική παλινδρόμηση κινδύνου (

= 0.025 και

= 0,044, αντίστοιχα). Το σχήμα 9 δείχνει τα αμιγή εικόνες mQDL της έκφρασης της πρωτεΐνης p-c-Met σε μια αφρικανική-αμερικανική ασθενών που επέζησαν για 85 μήνες (επάνω πάνελ) έναντι ενός Αφρο-Αμερικανός ασθενής που επέζησε για 12 μήνες (κάτω πάνελ). Για να απεικονίσει την επίδραση των δύο αυτών μεταβλητών στη συνολική επιβίωση, το σκορ Gleason ήταν κατηγοριοποιούνται σε δύο ομάδες: ≥8 και & lt? 8, και η πυρηνική pc-Met ήταν χωρισμένα σε δύο ομάδες, υψηλής και χαμηλής, χρησιμοποιώντας τη μέση ως σημείο αποκοπής ( Σχήμα 10,

= 0,0349). Για να διερευνήσουν περαιτέρω με συστηματικό τρόπο είτε συνδυάζοντας σκορ Gleason και ένα βιοδείκτη μπορεί να βελτιώσει την πρόβλεψη της συνολικής επιβίωσης, όλοι οι βιοδείκτες που ήταν σημαντικοί παράγοντες πρόβλεψης της συνολικής επιβίωσης σε μονοδιάστατες μοντέλα από τους Πίνακες 2, 3, 4, ταξινομήθηκαν σε δύο ομάδες, υψηλής και χαμηλής , χρησιμοποιώντας το μεσαίο ως σημείο αποκοπής. σκορ Gleason ήταν κατηγοριοποιούνται σε δύο ομάδες: ≥8 και & lt? 8 και οι δύο διχοτομικές μεταβλητές συνδυάζονται για να παράγουν τέσσερις ομάδες: Gleason ≥8 και βιοδεικτών High, Gleason ≥8 και βιοδεικτών Low, Gleason & lt? 8 και βιοδεικτών High, και Gleason & lt? 8 και βιοδεικτών Low. Τρεις ψευδομεταβλητές δημιουργήθηκαν, χρησιμοποιώντας την ομάδα Gleason & lt? 8 και βιοδεικτών Χαμηλό ως αναφορά, και πολυπαραγοντικό αναλογικού κινδύνου παλινδρόμησης με χρήση των εμπρός μεταβλητή επιλογής χρησιμοποιήθηκε για να επιλέξετε το καλύτερο μοντέλο για την πρόβλεψη της συνολικής επιβίωσης. Τα αποτελέσματα αυτών των πολυμεταβλητών μοντέλων φαίνονται στον Πίνακα 6. Αν δεν υπήρχε κατηγοριοποιούνται Gleason /ομάδα βιοδεικτών πρόβλεψης της συνολικής επιβίωσης για Καυκάσιος-Αμερικανοί και Κινέζοι, για Αφροαμερικανοί τα αποτελέσματα με τις ομάδες κατηγορίας συμφώνησε με την πολυμεταβλητή συνεχή μοντέλο προγνωστικό και λεπτομέρειες της ανάλυσης, όπως φαίνεται στον πίνακα 7. το τελικό μοντέλο παρουσιάζεται στον πίνακα 8 και εμφανίζεται στο Σχήμα 11, όπου μόνο «Gleason ≥8 /βιοδεικτών High» είναι ένας σημαντικός προγνωστικός παράγοντας της συνολικής επιβίωσης σε ασθενείς American Αφρικανική με καρκίνο του προστάτη (

= 0.0117).

Η κύρια διαγώνιο έχει το συμμεταβλητή όνομα. Κατά την οριζόντια και κάθετη τομή του κάθε συμμεταβλητή, ο συντελεστής συσχέτισης Pearson (κέντρο, σε μαύρο), και η σχετική τιμή p (επάνω δεξιά γωνία, με κόκκινο) εμφανίζονται.

Log-rank p-τιμή δοκιμής παρουσιάζεται. Χ-άξονας είναι ο χρόνος επιβίωσης σε μήνες. Υ-άξονας είναι το ποσοστό επιβίωσης.

Log-rank παρουσιάζεται p-τιμή δοκιμής. «Βιοδεικτών Υψηλή» δηλώνει αξίες βιοδείκτη πάνω από τη μέση του (συνεχής) βιοδεικτών. «Βιοδεικτών χαμηλή» δείχνει τις τιμές των βιοδεικτών μικρότερη ή ίση με τη μέση του (συνεχής) βιοδεικτών.

Log-rank test

-τιμή παρουσιάζεται. «Βιοδεικτών Υψηλή» δηλώνει αξίες βιοδείκτη πάνω από τη μέση του (συνεχής) βιοδεικτών. «Βιοδεικτών χαμηλή» δείχνει τις τιμές των βιοδεικτών μικρότερη ή ίση με τη μέση του (συνεχής) βιοδεικτών.

Απλή αναζήτηση

Συζήτηση

αύξηση στοιχεία δείχνουν ότι η βελτίωση του καρκίνου του προστάτη πρόγνωση χρήση βιοδεικτών διαφορικά εκφρασμένο σε ιστούς, τα κύτταρα και τα υγρά του σώματος μεταξύ των ασθενών είτε με βραδείας ή επιθετική νόσο θα μπορούσε να μειώσει το κόστος της υγειονομικής περίθαλψης και το άγχος και την ταλαιπωρία των ασθενών, και τη βελτίωση της συνολική αποτελεσματικότητα του σχεδίου θεραπείας. Ενώ ιστοπαθολογία και ανοσοϊστοχημεία έχουν παράσχει τις «χρυσό πρότυπο» για τη διάγνωση PC σε κυτταρικό επίπεδο, τα ποσοτικά και προγνωστική πτυχές από αυτές τις τεχνικές δεν έχουν κριτικά αξιολογηθεί. Στην ανακοίνωση αυτή, χρησιμοποιήσαμε ένα πολυπλεξίας κβαντική-dot επισήμανση προσέγγιση ποσοτική ιστοπαθολογία σε ένα μόνο κυτταρικό επίπεδο, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως από την ομάδα μας [6], για να εκτιμηθεί η έκφραση των συστατικών της οδού κυτταρική σηματοδότηση προς τα κάτω από έναν βαθμολογικά και c-Met μεσολάβηση δίκτυο σηματοδότησης σε κλινικά δείγματα PC που συλλέγονται από διαφυλετικές ομάδες, που αποτελείται από Καυκάσιος-Αμερικανών, Αφρο-Αμερικανούς και Κινέζους ασθενείς, και αξιολογείται αν αυτά σηματοδότησης συστατικά μονοπατιού μπορεί να προβλέψει την επιβίωση των ασθενών PC. Η ενεργοποίηση των βαθμολογικά και c-Met μεσολάβηση σηματοδότησης από από όγκο και προέρχονται από ξενιστή RANKL έχει δειχθεί ότι οδηγούν οστού του καρκίνου και των μεταστάσεων των μαλακών ιστών σε ανθρώπινους καρκίνους του προστάτη, του μαστού, του πνεύμονα, των νεφρών και του ήπατος. Κατά την ενεργοποίηση αυτών των οδών σηματοδότησης, παρατηρήσαμε αυξημένη έκφραση του HIF-1α, VEGF, NRP-1, RANKL, c-Met, και φωσφορυλιωμένη c-Met σε κύτταρα που ανατίθενται αντίσταση σε ευνουχισμό και την ανάπτυξη ενός μεταστατικού φαινοτύπου σε ένα ανθρώπινο PC μοντέλο ξενομοσχεύματος [6]. Βρήκαμε τις ακόλουθες διαφυλετικός διαφορές στην ενεργοποίηση των βαθμολογικά και c-Met μεσολάβηση εγκατεστημένα δίκτυα κυτταρική σηματοδότηση σε κύτταρα PC. 1) RANKL και ΕΠΜ-1 προβλέπει την επιβίωση του Καυκάσου-Αμερικανών με τον υπολογιστή (Σχήμα 7). 2) Σε Αφρο-Αμερικανοί, σε συνδυασμό σκορ Gleason ≥8 και της έκφρασης των πυρηνικών π-c-Met προβλέπει την επιβίωση (σχήματα 10 & amp? 11). 3) ΕΠΜ-1, ρ-ΝΡ-κΒ ρ65 και VEGF είναι προάγγελοι για τη συνολική επιβίωση σε κινέζικα άνδρες με PC (Πίνακας 3). 4) Παρά τις διαφορές στην πρόβλεψη της συνολικής επιβίωσης των ασθενών PC με διαφορετικά συστατικά σηματοδοτικό μονοπάτι, όλες φυλετικές ομάδες μοιράζονται τα κοινά κατάντη συστατικών σηματοδότησης μετά την ενεργοποίηση του βαθμολογικά και c-Met μεσολάβηση σηματοδότηση. Αυτό αποκαλύπτεται από την πολύ σημαντική κατά ζεύγη συσχέτιση μεταξύ αυτών των συστατικών σηματοδότησης χαράσσεται από το Correlogram (σχήματα 4, 5, 6) με ζεύγη συσχετισμούς και στις τρεις φυλετικές ομάδες. Αν και προς το παρόν δεν υπάρχει καμία επιστημονική εξήγηση για το γιατί διαφορετικά συστατικά σηματοδότησης προβλέψει την επιβίωση σε τρεις διαφορετικές φυλετικές ομάδες των PC ασθενών, εμείς εικάζουν ότι τα ρυθμιστικά στοιχεία, συμπεριλαμβανομένων των ποσοτικών πτυχών των υποδοχέων, συνδέτες, και τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των μορίων τελεστή, ελέγχοντας συνολικά RANK – και c-Met μεσολάβηση κατάντη σηματοδότησης θα μπορούσε να είναι διαφορετική μεταξύ διαφυλετικός ομάδες. Τα αποτελέσματα, ωστόσο, υποστηρίζουν συλλογικά διαφυλετικός διαφορές βαθμολογικά και c-Met-μεσολάβηση δικτύου κυτταρική σηματοδότηση που διέπει την επιβίωση των ασθενών PC.

Η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη που χρησιμοποιεί πολυφασματική κβαντική επισήμανση σημείων που βασίζεται σε κύτταρα της ορθολογικής συνδέονται με την πορεία βιοδείκτες σε συνδυασμό με λεπτομερή στατιστικές αναλύσεις για τη δοκιμή ικανότητας πρόβλεψης τους για τη συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του προστάτη. Για να μειώσετε τις πιθανές μεταβλητές που εισάγονται από την επεξεργασία του δείγματος ιστού που επέλεξε να χρησιμοποιήσει δείγματα από το ίδιο νοσοκομείο για κάθε φυλετική ομάδα. Παρά τον περιορισμένο αριθμό των δειγμάτων ασθενών που διατίθενται για τη μελέτη, η νεοσυσταθείσα πολυπλεκτικό κβαντική επισήμανση τελεία και τον ποσοτικό προσδιορισμό της τεχνολογίας απέδειξε την προγνωστική χρησιμότητα των βαθμολογικά και c-Met μεσολάβηση συγκλίνουσα μονοπατιών σηματοδότησης για την πρόβλεψη της συνολικής επιβίωσης των ασθενών με PC. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι μεταξύ των ομάδων διαφυλετικός, διαφορετικά σύνολα βιοδείκτες μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως παράγοντες πρόβλεψης για την επιβίωση. Τα ευρήματά μας υποστηρίζουν περαιτέρω τις καλά τεκμηριωμένες επιδημιολογικές διαφορές μεταξύ των ασθενών του Καυκάσου και της Αμερικής, της Αφρικής και της Αμερικής και της Κίνας με τον υπολογιστή. Εμείς θα επεκτείνει περαιτέρω το μέγεθος του δείγματος σε μια αναδρομική μελέτη επικύρωσης και να προχωρήσουν σε προοπτικές μελέτες της εξέλιξης της νόσου και την επιβίωση ασθενών, που απασχολούν κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων (CTC) από ασθενείς που υποβάλλονται σε θεραπείες για την επικύρωση ευρήματά μας και να ανακαλύψετε άλλα νέα βιοδεικτών για τη διάγνωση του καρκίνου του προστάτη και την πρόγνωση για να βοηθήσει με τη λήψη κλινικών αποφάσεων.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Gary Mawyer για επεξεργασία.

Χρόνιες ασθένειες

PLoS One: Συγκλίνουσες βαθμολογικά και c-Met-σηματοδότηση μέσω Components Προβλέψτε επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του προστάτη: Ένα διαφυλετικό Συγκριτική Μελέτη