Αφηρημένο

προηγούμενα αποτελέσματα της έρευνας μας έδειξαν ότι και οι δύο Ras μέλος της οικογένειας ομόλογο C (RhoC) και IQ-τομέα ΘΤΡάσης-ενεργοποίησης της πρωτεΐνης 1 (IQGAP1) ήταν πάνω-εκφράζεται σε γαστρικό ιστούς και τα κύτταρα του καρκίνου, αλλά και τους ρόλο στην tumorigenensis δεν έχει αντιμετωπιστεί με σαφήνεια. Εδώ έχουμε ανέφεραν την διεγερτική δράση της RhoC και IQGAP1 στη γαστρική καρκινικά κύτταρα και την αλληλεπίδραση μεταξύ δύο πρωτεϊνών στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων γαστρικού καρκίνου πολλαπλασιασμό. Τα πλασμίδια και ιούς κατασκευάσματα που κωδικοποιούν στόχου siRNA και DNA χρησιμοποιήθηκαν για να μεταβάλλουν την έκφραση του RhoC και IQGAP1. μέθοδο ΜΤΤ και δοκιμασία ενσωμάτωσης BrdU χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση της επίδρασης των RhoC και διαφορετικών δομών του IQGAP1 επί του πολλαπλασιασμού. Τα επίπεδα πρωτεΐνης του IQGAP1 και RhoC σε κυτταρικές σειρές ανιχνεύθηκαν με κηλίδωση Western. δοκιμασίες ανοσοφθορισμού και συνανοσοκαθίζησης εφαρμόστηκαν για τη διερεύνηση της τοπικής δέσμευσης μεταξύ RhoC και IQGAP1. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι RhoC, IQGAP1 και το C-τερματικό θραύσμα του IQGAP1 διεγείρεται σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων, και ενίσχυσε την έκφραση της κυκλίνης Ε και κυκλίνης D1. Αντίθετα, η μείωση της ενδογενούς IQGAP1 ή RhoC με siRNA εξασθενημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Η εξάντληση της έκφρασης IQGAP1 με siRNA μπλοκάρει σημαντικά την πολλαπλασιαστική δραστικότητα μόνιμα ενεργών RhoC, ενώ RhoC φίμωση με siRNA δεν είχε καμία επίδραση επί IQGAP1-επαγόμενο πολλαπλασιασμό σε γαστρικό καρκινικά κύτταρα. Συν-ανοσοκατακρήμνιση και δοκιμασίες ανοσοφθορισμού έδειξαν ότι RhoC και IQGAP1 δεσμεύονται ο ένας τον άλλον. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι RhoC διεγείρει τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω της πρόσληψης IQGAP1 ως τελεστές

Παράθεση:. Wu Υ, Tao Υ, Chen Υ, Xu W (2012) RhoC Ρυθμίζει τον πολλαπλασιασμό των Γαστρική καρκινικά κύτταρα μέσω της αλληλεπίδρασης με IQGAP1. PLoS ONE 7 (11): e48917. doi: 10.1371 /journal.pone.0048917

Επιμέλεια: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, Αυστρία

Ελήφθη: 26 του Ιουνίου 2012? Αποδεκτές: 2η Οκτωβρίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 7 του Νοέμβρη 2012

Copyright: © 2012 Wu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από την εξειδικευμένη Ταμείου Έρευνας για τον Ανώτερο Πρόγραμμα Προσωπικού του Πανεπιστημίου Jiangsu (αριθ. 11JDG114) και το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (αριθ. 31040002). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Rho ΘΤΡάσες μπορούν να επάγουν ορισμένες ενδοκυτταρική μεταγωγή σήματος και να επηρεάσει διάφορες κυτταρικές δραστηριότητες, όπως η αναδιοργάνωση του κυτταροσκελετού της ακτίνης, γονιδιακή μεταγραφή, την επιβίωση, τον πολλαπλασιασμό και [1], [2]. Παρά το γεγονός ότι τρεις ισομορφές Rho, RhoA, RhoB και RhoC, εμφανίζουν περισσότερο από το 85% ταυτότητα αμινοξέων, που παρέχουν οι διαφορές στη λειτουργία των κυττάρων [3]. Οι πρωτεΐνες RhoA και RhoC έχει αποδειχθεί ότι έχουν ένα θετικό ρόλο στον πολλαπλασιασμό και κακοήθη μετασχηματισμό [4], [5], [6], ενώ ο ρόλος του RhoB σε αυτές τις διαδικασίες φαίνεται να είναι πιο αποκλίνουσα [7], [8]. Οι περισσότερες από τις μελέτες έδειξαν ότι RhoC είχαν πολλαπλές λειτουργίες σε μετάσταση όγκου, ενορχήστρωση της δράση πολλαπλών κατάντη τελεστών, την υποβάθμιση και την ανασυγκρότηση της εξωκυττάριας μήτρας (ECM). Ωστόσο, εξακολουθεί να υπάρχει κάποια διαμάχη για τον ρόλο των RhoC στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού [9], [10], [11], [12]. Τα αποτελέσματα από τις εργαστηριακές Σωρός έδειξαν ότι RhoA και RhoC siRNA αντιπροσωπεύουν ισχυρά εργαλεία για την αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων, η εισβολή και η αγγειογένεση και τα δύο

in vitro

και

in vivo

[9]. Sun

κ.ά.

διαπίστωσε ότι εντός του όγκου έγχυση του RhoA ή RhoC siRNA σε γυμνούς ποντικούς μπορεί να αναστείλει την ανάπτυξη του όγκου [13]. Σε αντίθεση, Faried

et al

ανέφεραν ότι RhoA προωθεί την ανάπτυξη του όγκου πάνω από RhoC, ενώ RhoC προκαλεί μακρινή μετάσταση σε σύγκριση με RhoA [11], σε συμφωνία με αυτές τις παρατηρήσεις από τους Clark και οι συνεργάτες του [14]. Μια μελέτη από Ikoma και οι συνεργάτες του έδειξαν ότι RhoC δεν επηρέασε την ανάπτυξη του όγκου αλλά ενισχύει την μεταστατική φύση του καρκίνου του πνεύμονα, διεγείροντας την κυτταρική κινητικότητα [10]. Ως εκ τούτου, η περαιτέρω μελέτη είναι απαραίτητη για τον προσδιορισμό του ρόλου της στη ρύθμιση RhoC βιολογικές δραστηριότητες των κυττάρων του όγκου.

IQ-τομέα ΟΤΡάσης ενεργοποίησης πρωτεΐνες (IQGAPs) είναι σημαντικοί ρυθμιστές των κυτταρικών διαδικασιών που περιλαμβάνουν κυτταροσκελετικές αναδιατάξεις στην κυτταρική μετανάστευση , πολλαπλασιασμός και κυτοκίνηση [15], [16], [17]. IQGAP1 είναι ένα από τα μέλη των τριών σχετικών IQGAPs θηλαστικών και την αλλαγή στην ενδοκυτταρική έκφραση IQGAP1 ή λειτουργία έχει αναφερθεί να τροποποιήσει τις δραστηριότητες των κυττάρων [17], [18], [19], [20]. Ως πρωτεΐνη ικρίωμα, IQGAP1 δεσμεύει πολλαπλές πρωτεΐνες, όπως ογκογονίδια β-κατενίνης και Src, ογκοκατασταλτικό Ε-καδερίνη και η Rho ΟΤΡάσες Cdc42 και Rac1, και προκαλεί την αλλοίωση της κυτταρικής συμπεριφοράς, ιδιαίτερα για τα καρκινικά κύτταρα. προηγούμενη μελέτη μας έδειξε ότι οι υψηλότερες εκφράσεις RhoC και IQGAP1 σε γαστρικό καρκινικό ιστό σημαντικά αντίστροφα συσχετίζεται με την διαφοροποίηση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων [21]. Επιπλέον, τα επίπεδα της πρωτεΐνης ήταν επίσης σχετική με τον πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων. Ως εκ τούτου, υποθέτουμε ότι τόσο RhoC και IQGAP1 μπορεί να παίζει σημαντικό ρόλο στον μετασχηματισμό των καρκινικών κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό και υπάρχει πιθανή συσχέτιση μεταξύ τους. Στην παρούσα έρευνα, μελετήθηκε η επίδραση των RhoC και διαφορετικών δομών του IQGAP1 επί του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και του κυτταρικού κύκλου που σχετίζονται πρωτεΐνες. Ερευνήσαμε επίσης τη σχέση μεταξύ των δύο μορίων από κοινή αίτηση των siRNA παρεμβολών και την τεχνική ιογενή λοίμωξη. Ανάλυση

(Α) Western blot της έκφρασης RhoC στην BGC-823 κύτταρα μολυσμένα με Ad-RhoC-V14. (Β) Η σχετική δραστηριότητα του πολλαπλασιασμού του BGC-823 κύτταρα μολυσμένα με Ad-RhoC-V14 εξετάστηκε με τη δοκιμασία ΜΤΤ. (* P & lt? 0,05, σε σύγκριση με την ομάδα Ad-LacZ). (Γ) Η πρωτεΐνη έκφραση του RhoC σε BGC-823 κύτταρα επιμολυσμένα με RhoC siRNA. (Δ) Η κατάρριψη του RhoC ανέστειλε πολλαπλασιασμό του BGC-823 κύτταρα (δοκιμασία ΜΤΤ, * Ρ & lt? 0,05, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου siRNA). Τα δεδομένα είναι τα μέσα ± SD από τρία ανεξάρτητα πειράματα κάθε πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν.

Η

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

Η κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου BGC-823 [ ,,,0],22] και της Αφρικής νεφρού πράσινου πιθήκου κυτταρικές σειρές ινοβλαστών COS-7 που παρέχεται από το Ινστιτούτο κυτταρικής Βιολογίας (Σαγκάη, Κίνα). Η Πράσινη Φθορίζουσα Πρωτεΐνη (GFP) και πλασμίδιο αντιδραστήριο επιμόλυνσης κυττάρων Lipofectamin ™ 2000 ήταν από την Invitrogen (Carlsbad, CA)? Τα πλασμίδια που κωδικοποιούν Flag ετικέτα IQGAP1 (pFlag-IQGAP1), Flag ετικέτα IQGAP1 C-τερματικό θραύσμα (pFlag-IQGAP1-C), και Flag ετικέτα IQGAP1 Ν-τερματικό θραύσμα (pFlag-IQGAP1-Ν), και αδενοϊικοί φορείς που κωδικοποιούν β-γαλακτοσιδάση (pad-LacZ), ένα ιδιοσυστατικά ενεργή μορφή του RhoC (pad-RhoC-V14), πλήρους μήκους IQGAP1 (pad-IQGAP1), και το C-τερματικό θραύσμα του IQGAP1 (pad-IQGAP1-C) ήταν ευγενικό δώρο από τον Dr. Gerry Boss και ο Δρ Renate Pilz στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια, Σαν Ντιέγκο, ΗΠΑ. Ανθρώπινα-EGF, BrdU, ποντικού αντι-BrdU αντίσωμα, ϋΝάση Ι, ΜΤΤ, Hoechst 33342, FITC- και Cy3-συζευγμένο δευτερεύον αντισώματα ήταν από την Sigma (St. Louis, ΜΟ). Το αντι-IQGAP1 αντίσωμα (έναντι Ν-τερματικό θραύσμα, 314-422 αα), αντι-RhoA αντίσωμα, αντίσωμα αντι-IgG, αντι-CDK1 /αντισώματος CDK2, μικρής παρεμβαλλόμενα RNA (siRNA) για RhoC και αρνητικού ελέγχου ήταν από τη Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Το Rho C siRNA είναι μια πισίνα 3 ειδικού στόχου 20-25 nt siRNAs σχεδιαστεί για να γκρεμίσουμε την έκφραση γονιδίων με τις ακολουθίες ως εξής: Ακολουθία1, αίσθηση 5′-CUACUGUCUUUGAGAACUAtt-3 ‘και αντιπληροφοριακό 5′-UAGUUCUCAA- AGACAGUAGtt-3 «? Ακολουθία2, αίσθηση 5’-GCAGGAAGACUAUGAUCGAtt-3 ‘και 5′-αντινόημα UCGAUCAUAGUCUUCCUGCtt-3′? Ακολουθία3, αίσθηση 5’-CAC- ACCAGCACUUUAUACAtt-3 ‘και 5′-αντινόημα UGUAUAAAGUGCUGGUGUG- tt-3’. Το αντίσωμα αντι-IQGAP1 (έναντι Ο-τερματικό θραύσμα που αντιστοιχεί στα αμινοξέα 863 – 1657 της ανθρώπινης IQGAP1) ήταν από την Millipore (Billerica, ΜΑ). Το αντίσωμα αντι-RhoC ήταν από την Abcam (Cambridge, ΜΑ). Το αντίσωμα αντι-κυκλίνης Β ήταν από Bioworld Τεχνολογίας (St. Louis Park, ΜΝ). Το αντίσωμα αντι-D1 κυκλίνης και αντι-κυκλίνη Ε αντίσωμα ήταν από Boster (Wuhan, Κίνα). Το siRNA για IQGAP1 συντέθηκε από τη Qiagen (Valencia, CA), η αλληλουχία στόχος ήταν IQGAP1 5′-AAGTTCTACGGGAAGTAATTG-3 ‘(5058 έως 5078 bp). Η υπεροξειδάση χράνου (HRP) δευτερογενές αντίσωμα ήταν από την Rockland Immunochemicals (Gilbertsville, ΡΑ). Protein G Plus /Protein Α-αγαρόζη ήταν από την Calbiochem (San Diego, CA). Ηλεκτροχημικοφωτεινότητα (ECL) τα αντιδραστήρια ήταν από την Millipore (Billerica, ΜΑ). Όλα τα αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη ήταν αναλυτικής ποιότητας.

(Α) ανάλυση Western blot της έκφρασης IQGAP1 σε γαστρικό καρκινικό κύτταρο BGC-823 γραμμές μολύνθηκαν με Ad-LacZ, Ad-IQGAP1-C, Ad-IQGAP1- Ν ή Ad-IQGAP1. (Β) Στη δοκιμασία ΜΤΤ, IQGAP1-C και IQGAP1 επί κυττάρων έκφρασης και οι δύο έχουν μεγαλύτερη δραστηριότητα πολλαπλασιασμού από την ομάδα ελέγχου (* Ρ & lt? 0,05, σε σύγκριση με την ομάδα Ad-LacZ). (Γ) Το επίπεδο πρωτεϊνικής έκφρασης της IQGAP1 του γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή BGC-823 επιμολυσμένα με IQGAP1 siRNA. (Δ) Ο πολλαπλασιασμός του BGC-823 κύτταρα επιμολυσμένα με IQGAP1 siRNA εξετάστηκαν με τη δοκιμασία ΜΤΤ. (* Ρ & lt? 0,05, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου siRNA). (Ε) BGC-823 κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με πλασμίδια Flag-IQGAP1, Flag-IQGAP1-C, ή Flag-IQGAP1-Ν για 48 ώρες. Western κηλίδωση έδειξε την έκφραση του IQGAP1, IQGAP1-Ν, και IQGAP1-C κατασκευάσματα σε κυτταρικές γραμμές BGC-823. Ίσες ποσότητες κυτταρολύματος από κάθε ομάδα φορτώθηκαν και στυπώθηκαν με αντι-IQGAP1 αντισώματα (έναντι C-τερματικό θραύσμα ή Ν- τερματικό θραύσμα). (F) δοκιμασία BrdU χρησιμοποιήθηκε για πολλαπλασιασμό ανάλυση των κυττάρων. Εκπρόσωπος εικόνες της BGC-823 κύτταρα που εκφράζουν τις υποδεικνυόμενες κατασκευές IQGAP1 βάφτηκαν με αντισώματα έναντι BrdU (δεύτερο πάνελ κόκκινο) και Hoechst 33342 για πυρήνες (πρώτο πάνελ, μπλε). Το ποσοστό των κυττάρων με ενσωμάτωση BrdU υπολογίστηκε. Η μέση τιμή ± SD τριών ανεξάρτητων πειραμάτων παρουσιάζεται (* P & lt? 0,05).

Η

Cell Culture, Επιμόλυνση και Λοίμωξη

κύτταρα BGC-823 και COS-7 καλλιεργήθηκαν σε 1 μέσον × Τροποποιημένο κατά Dulbecco Eagle (ϋΜΕΜ) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) στους 37 ° C σε

2 ατμόσφαιρα 5% CO. Το μέσο αλλάχθηκε κάθε δεύτερη ημέρα και τα κύτταρα υπο-καλλιεργήθηκαν σε συρροή. Για την επιμόλυνση, τα κύτταρα υπο-καλλιεργήθηκαν μία ημέρα πριν από τη διαδικασία και η επιμόλυνση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων με πλασμίδια ή siRNA διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Για τη μόλυνση, 293Α κύτταρα επιμολύνθηκαν με αδενοϊικούς φορείς Pad-LacZ, Pad-RhoC-V14, Pad-IQGAP1 και Pad-IQGAP1-C, και τα ιικά σωματίδια που παράγονται από τα κύτταρα συλλέχθηκαν και ενισχύθηκαν. Οι ιοί ονομάστηκαν Ad-LacZ, Ad-RhoC-14, Ad-IQGAP1 και Ad-IQGAP1-C αντίστοιχα και χρησιμοποιήθηκαν για να μολύνουν BGC-823 κύτταρα. Την ημέρα πριν από τη μόλυνση, BGC-823 κύτταρα προσφάτως σπάρθηκαν σε 70-80% συρροή και η διαδικασία μόλυνση διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή σχετικά με τη δεύτερη ημέρα.

Τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης (Α) του IQGAP1 , IQGAP1-C και RhoC στην BGC-823 κύτταρα. BGC-823 κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με IQGAP1 siRNA ή RhoC siRNA για 24 ώρες. Τα επιμολυσμένα κύτταρα στη συνέχεια μολύνθηκαν με Ad-RhoC-V14, Ad-IQGAP1-C ή Ad-IQGAP1 για επιπλέον 48 ώρες που ακολουθείται από κηλίδωση Western. εξάντληση (Β) RhoC δεν επηρέασε σημαντικά IQGAP1 ή IQGAP1-C επαγόμενο πολλαπλασιασμό του BGC-823 κύτταρα. (Γ) Η σίγηση του IQGAP1 με siRNA ανέστειλε σημαντικά την επαγόμενη RhoC τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε BGC-823 κύτταρα. (Δοκιμασία ΜΤΤ, * P & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01). Τα δεδομένα είναι τα μέσα ± SD από τρία ανεξάρτητα πειράματα έκαστο εκτελέστηκαν εις διπλούν.

Η

Western Blotting

Τα καλλιεργημένα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές σε PBS και λύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα RIPA (50 mM Tris -ΗΟΙ, ρΗ 7.4, 1% (ν /ν) Triton Χ-100, 1 mM EDTA, 1 mM λευπεπτίνη, 1 mM φθοριούχο φαινυλμεθυλσουλφονύλιο, 10 mM NaF, 1 mM Na

3νο

4). Ίσες ποσότητες πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν με 8% ή 12% SDS-PAGE σύμφωνα με το μοριακό βάρος της πρωτεΐνης. Τα πρωτογενή αντισώματα επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C, και τα αντίστοιχα δευτερεύοντα αντισώματα επωάστηκαν για 1 h σε RT. Τρεις πλύσεις πραγματοποιήθηκαν με TBS /T μετά από κάθε επώαση αντισωμάτων. αντιδραστήρια ECL χρησιμοποιήθηκαν για να δείξει τις θετικές ζώνες στη μεμβράνη.

(Α) κύτταρα BGC-823 μολύνθηκαν με Ad-IQGAP1, Ad-IQGAP1-C ή Ad-RhoC-V14 για 48 ώρες, και στη Δυτική κηλίδα χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των εκφράσεων της κυκλίνης Ε, κυκλίνη D1 κυκλίνης Β και CDK. (Β) κύτταρα BGC-823 μορφομετατράπηκαν με IQGAP1 siRNA ή RhoC siRNA για 72 ώρες, και οι εκφράσεις της κυκλίνης Ε, κυκλίνη D1, κυκλίνη Β και CDK αναλύθηκαν με κηλίδωση Western. (Γ) Οι πρωτεΐνη εκφράσεις της κυκλίνης Ε, κυκλίνη D1, κυκλίνη Β και CDK σε BGC-823 κύτταρα τα οποία διαμολύνθηκαν παροδικά με IQGAP1 siRNA ή RhoC siRNA για 24 ώρες και στη συνέχεια μολύνθηκαν με Ad-RhoC-V14, Ad-IQGAP1-C ή Ad-IQGAP1 για επιπλέον 48 ώρες (Αποτελέσματα κηλίδωση Western).

η

ΜΤΤ Δοκιμασία

0,5-1 × 10

3cells σε 150 μλ μέσου απλώθηκαν στην φρεάτιο πλακών 96 φρεατίων. Μετά την προσκόλληση, τα κύτταρα μολύνθηκαν με αδενοϊό που αντιστοιχούν για 48 ώρες, ή επιμολυσμένα με siRNA για 72 ώρες, αντίστοιχα. Στις ομάδες συνδυασμό, τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με siRNA που στοχεύει RhoC ή IQGAP1 για 24 ώρες και στη συνέχεια μολύνθηκαν με Ad-IQGAP1-C /Ad-IQGAP1 ή Ad-RhoC-V14 για επιπλέον 48 ώρες στους 37 ° C σε 5% CO

2. Τα καλλιεργημένα κύτταρα πλύθηκαν με PBS, κατεργάστηκαν με 20 μΙ ΜΤΤ (0,5 mg /ml), και στη συνέχεια επωάστηκαν στους 37 ° C για 1 ώρα. Το μέσο απομακρύνθηκε και 100 μΐ διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Η απορρόφηση προσδιορίστηκε στα 490 nm χρησιμοποιώντας αναγνώστη μικροπλακός. Όλες οι δοκιμασίες πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

(Α) BGC-823 κύτταρα που αναπτύσσονται σε πλάκες 100 χιλιοστών παροδικά συν-μολυσμένα με Ad-IQGAP1 και Ad-RhoC-V14, ή Ad-IQGAP1-C και Ad- RhoC-V14 για 48 ώρες. Τα κύτταρα λύθηκαν και ίσες ποσότητες πρωτεΐνης προϊόντος λύσεως ανοσοκατακρημνίσθηκαν (ΙΡ) με αντι-RhoC, αντισώματα αντι-IQGAP1 ή ισότυπο IgG. Ολόκληρο κυτταρόλυμα χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος εισόδου πρωτεΐνη. (Β) κύτταρα BGC-823 επιμολύνθηκαν με πάνω από αδενοϊό για 24-48 ώρες, και ο συν-εντοπισμό των RhoC και IQGAP1 σε κύτταρα προσδιορίστηκαν με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού χρησιμοποιώντας αντι-RhoC και αντι-IQGAP1 αντισώματα. Οι πυρήνες χρωματίστηκαν με Hoechst 33342 (μπλε). (C) COS-7 κύτταρα πρόσκαιρα συν-μολυσμένα με Ad-IQGAP1-C /Ad-IQGAP1 και Ad-RhoC-V14 για 48 ώρες. Τα κύτταρα υφίστανται την ίδια διαδικασία Co-IP που περιγράφεται παραπάνω. (D) COS-7 κύτταρα επιμολύνθηκαν με πάνω από αδενοϊικούς φορείς για 24-48 ώρες, και ο συν-εντοπισμό των RhoC και IQGAP1 σε κύτταρα δείχνεται με ανοσοφθορισμό. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά από τρία ανεξάρτητα πειράματα με παρόμοια αποτελέσματα.

Η

ενσωματώσεως BrdU

Ο ρυθμός της σύνθεσης του DNA μετρήθηκε με ενσωμάτωση BrdU με ανοσοφθορισμό. Η ποσότητα σπορά κυττάρων ρυθμίστηκε για την επίτευξη πυκνότητα 70-80% συρροή την ημέρα της διαμολύνσεως. Το πλασμίδιο pFlag-IQGAP1, pFlag-IQGAP1-C ή pFlag-IQGAP1-Ν συν-επιμολύνθηκε με το πλασμίδιο GFP σε BGC-823 κύτταρα χρησιμοποιώντας Lipofectamin ™ 2000, όπως περιγράφεται παραπάνω. 24 ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα στερούνται ορού επί μία νύκτα, υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 200

μ

Μ BrdU και επωάζονται για περίπου 16 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν με PBS, σταθεροποιήθηκαν σε πρόσφατα παρασκευασμένο 4% (ν /ν) παραφορμαλδεϋδη σε RT για 10 λεπτά, και διαπερατά με 0,5% (ν /ν) Triton Χ-100, που ακολουθείται από επώαση με ϋΝάση Ι (0.5 U /μl) για 30 λεπτά στους 37 ° C. Τα κύτταρα επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα έναντι BrdU επί μία νύκτα στους 4 ° C που ακολουθείται από Cy3-συζευγμένο δευτερογενές αντίσωμα για 1 ώρα σε RT. Τέλος, οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με Hoechst 33342 για 15 λεπτά, ξεπλύθηκαν με PBS τρεις φορές και οπτικοποιήθηκαν υπό μικροσκοπία φθορισμού. Κάθε δοκιμασία διεξήχθη σε τετράδα και επαναλήφθηκε τρεις φορές.

Όταν RhoC διεγείρεται από εξωκυτταρική ή ενδοκυτταρικού σήματα, συνδέεται με την πρωτεΐνη ικρίωμα IQGAP1, επηρεάζει την έκφραση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τον κύκλο των κυττάρων όπως κυκλίνη D1 και κυκλίνη Β, επηρεάζει μεταβάσεις G1-S στον κυτταρικό κύκλο, και στη συνέχεια, προκαλεί την αλλαγή στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Η εκδήλωση μεταγωγής σήματος μέσω του οποίου IQGAP1 επηρεάζει την έκφραση της κυκλίνης θα πρέπει να διευκρινιστεί.

Η

συνανοσοκαθίζησης

Για να διερευνηθεί η αλληλεπίδραση μεταξύ RhoC και IQGAP1, COS-7 και BGC -823 κύτταρα συν-μολυσμένα με Ad-IQGAP1 ή Ad-IQGAP1-C, και Ad-RhoC-V14 για 48 ώρες και στη συνέχεια λύθηκαν με ρυθμιστικό ΚΙΡΑ, όπως περιγράφεται. Το αντίσωμα έναντι RhoC, IQGAP1 ή ισότυπου IgG χρησιμοποιήθηκε για ανοσοκαθίζηση, αντίστοιχα. Τα ανοσοϊζήματα αναλύθηκαν με κηλίδωση Western όπως παραπάνω, χρησιμοποιώντας αντι-RhoC ή αντι-IQGAP1 αντίσωμα.

μικροσκοπία ανοσοφθορισμού

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε καλυπτρίδες στερεώθηκαν με φρεσκοπαρασκευασμένα 4% (ν /ν ) παραφορμαλδεΰδη σε PBS για 15 λεπτά, διαπερατά με 0,3% Triton Χ-100 σε PBS για 10 λεπτά, και αποκλείστηκαν με 3% (β /ο) αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) σε PBS. Για ανοσοφθορισμού, τα κύτταρα πάνω σε λουρίδες κάλυψης διαδοχικά επωάζονται με πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού έναντι IQGAP1 στους 4 ° C όλη τη νύκτα, συζευγμένο με FITC IgG αίγας αντι-κουνελιού για 1 h σε RT, το μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι RhoC για 2 ώρες σε RT, και, τέλος, κατσίκα IgG αντι-ποντικού συζευγμένο με Cy3 για 1 ώρα σε RT. Τρεις πλύσεις πραγματοποιούνται μετά από κάθε επώαση αντισωμάτων. Οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με Hoechst 33342. Το αποτέλεσμα παρατηρήθηκε κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού συναρμολογούνται με μια κάμερα CCD (Leica).

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση δύο ουρών ANOVA ή Φοιτητών

t-test

με SPSS στατιστικού λογισμικού, και εκφράζονται ως μέσοι όροι ± τυπική απόκλιση (SD).

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

RhoC προήγαγαν τον πολλαπλασιασμό του BGC-823 κύτταρα

Η επίδραση της RhoC στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ήταν διερευνήθηκε επίσης. BGC-823 κύτταρα μολύνθηκαν με αδενοϊό που κωδικοποιεί ουσιαστικά δραστική RhoC και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ανιχνεύθηκε με δοκιμασία ΜΤΤ. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι RhoC προώθησε επίσης τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων BGC-823. Υπερ-έκφραση του RhoC-V14 σε BGC-823 κύτταρα που προκαλείται αύξηση 48,7% του πολλαπλασιασμού των κυττάρων (Σχ. 1Α και Β). Εν τω μεταξύ, η εξάντληση των RhoC με siRNA μείωσε τον πολλαπλασιασμό του BGC-823 κυττάρων κατά 43,1% (Εικ. 1Γ και Δ).

IQGAP1 Ενισχυμένη η διάδοση των BGC-823 κύτταρα

(1) Αποτελέσματα της δοκιμασίας ΜΤΤ.

για να εκτιμηθεί η συμβολή του IQGAP1 σε πολλαπλασιασμό, ΜΤΤ δοκιμασία χρησιμοποιήθηκε για να ανιχνευθεί η βιωσιμότητα του γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή BGC-823. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Ad-LacZ ομάδα), υψηλή έκφραση του C-τερματικό θραύσμα του IQGAP1 (Ad-IQGAP1-C ομάδα) ή πλήρους μήκους IQGAP1 (ομάδα Ad-IQGAP1) ενισχυμένη πολλαπλασιασμό των κυττάρων κατά 116% και 39%, αντίστοιχα (

*

P & lt? 0,05,

*

P & lt?. 0.05, Σχήμα 2Α και Β). Αντίθετα, το Ν-τερματικό θραύσμα του IQGAP1 δεν έχει προφανές αποτέλεσμα επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Από την άλλη πλευρά, παρεμβολή της έκφρασης IQGAP1 με siRNA μειωμένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων κατά 43%, σε σύγκριση με αρνητικό έλεγχο (

*

P & lt?. 0.05, Σχήμα 2C και D). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι IQGAP1 ήταν σε θέση να επιταχύνουν τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό? η ενεργός περιοχή βρισκόταν στο C-τερματικό θραύσμα της πρωτεΐνης.

(2) Αποτελέσματα δοκιμασία ενσωμάτωσης BrdU.

Η δοκιμασία ενσωμάτωσης BrdU έδωσε ένα μοτίβο απόκριση παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε σε ΜΤΤ δοκιμασία. Έκφραση της σημαίας-IQGAP1 και Flag-IQGAP1-C σημαντικά προώθησε τη σύνθεση του DNA στα επίπεδα σχεδόν 1-flod και 2 φορές από αυτή που παρατηρήθηκε με σημαία-D1 (* P & lt? 0,05, * P & lt?. 0.05, Σχήμα 2Ε και F) , ενώ IQGAP1-N δεν έδειξαν κάποια ανεπιθύμητη στη σύνθεση του DNA, γεγονός που υποδηλώνει ότι IQGAP1 ρυθμίζει διαφορετικά τη σύνθεση του DNA μέσω διαφορετικών τομέων.

σύνδεσης μεταξύ RhoC και IQGAP1 στη διέγερση του πολλαπλασιασμού των BGC-823 κύτταρα

(1) RhoC και IQGAP1 δεν επηρέασε την έκφραση ο ένας τον άλλον.

Τα παραπάνω αποτελέσματα υποδεικνύουν έντονα ότι τόσο RhoC και IQGAP1 συνέβαλε στην εξάπλωση της BGC-823 κύτταρα. Προκειμένου να μελετήσουμε την πιθανή συσχέτιση μεταξύ RhoC και IQGAP1 στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, έχουμε κατ ‘αρχάς ερευνήθηκε αν IQGAP1 και RhoC επηρεάζουν την έκφραση τους μεταξύ τους. BGC-823 κύτταρα επιμολύνθηκαν με siRNA να knockdown την έκφραση RhoC ή IQGAP1, και στη συνέχεια μολύνθηκαν με αδενοϊό που κωδικοποιεί IQGAP1, IQGAP1-C ή ιδιοσυστατικά ενεργό RhoC αντίστοιχα. Κηλίδωση Western εφαρμόστηκε για να ανιχνεύσει αν αλλάζοντας την έκφραση και τη δραστηριότητα των μία πρωτεΐνη θα μπορούσε να επηρεάσει την έκφραση της άλλης πρωτεΐνης ή όχι. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αύξηση εξωγενής ή knockdown του ενδογενούς IQGAP1 ή IQGAP1-C, δεν επηρέασε την έκφραση RhoC. Ομοίως, η αύξηση συστατικώς δραστική RhoC ή παρεμβολή ενδογενούς RhoC δεν επηρέασε την έκφραση των IQGAP1 ή IQGAP1-C (Σχ. 3Α).

(2) IQGAP1 ήταν ένας τελεστής της RhoC στη διέγερση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων.

δοκιμασία ΜΤΤ χρησιμοποιήθηκε για να διευκρινιστεί η σχέση μεταξύ RhoC και IQGAP1 στη διέγερση του πολλαπλασιασμού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι RhoC-siRNA δεν είχε εμφανή επίδραση επί του πολλαπλασιασμού που προκαλείται από IQGAP1 (** Ρ & lt? 0,01, Σχήμα 3Β.). Ωστόσο, η εξάντληση της έκφρασης IQGAP1 με siRNA μπλοκάρει τον πολλαπλασιασμό που προκαλείται από την έκφραση ιδιοσυστατικά ενεργό RhoC (* Ρ & lt? 0,05, ** Ρ & lt? 0,01, Σχήμα 3C.). Αυτό έδειξε ότι κατά τη διαδικασία της διέγερσης του πολλαπλασιασμού του BGC-823 κύτταρα, RhoC απαιτείται η συμμετοχή των IQGAP1. Επιπλέον, δεδομένου ότι φαινόμενο RhoC που απαιτείται IQGAP1 ενώ η επίδρασή IQGAP1 που δεν απαιτούν RhoC, RhoC θα μπορούσε να είναι η ανάντη των IQGAP1 και πήρε IQGAP1 ως δράστη.

Επίδραση των RhoC και IQGAP1 στην έκφραση του Κύκλου κυττάρων που σχετίζονται Πρωτεΐνες

για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η επίδραση διέγερση του πολλαπλασιασμού των RhoC και IQGAP1 και ερευνήσει την πιθανή μηχανισμός μέσω του οποίου οι πρωτεΐνες αυτές ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, εφαρμόσαμε κηλίδωση Western για την ανίχνευση της έκφρασης πρωτεϊνών που σχετίζονται με τον κυτταρικό κύκλο σε κύτταρα επεξεργασμένα με μεθόδους αυξάνοντας ή μειώνοντας RhoC και IQGAP1. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αύξηση του RhoC και IQGAP1 διέγειρε την έκφραση της κυκλίνης Ε και κυκλίνη D1, ενώ δεν είχε καμία επίδραση της έκφρασης της κυκλίνης Β και CDK1 /2. Από την άλλη πλευρά, η μείωση του RhoC και IQGAP1 ανέστειλε την έκφραση της κυκλίνης Ε και κυκλίνης D1. Εν τω μεταξύ, στην περίπτωση της RhoC σίγησης με siRNA, αυξάνοντας IQGAP1 ή IQGAP1-C ακόμη ενισχύουν την έκφραση της κυκλίνης Ε και κυκλίνης D1 (Εικ. 4). Διατριβές αποτελέσματα έδειξαν ότι RhoC και IQGAP1 μπορεί να ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό μέσω της αλλαγής της έκφρασης της πρωτεΐνης σχετίζονται με τον κύκλο των κυττάρων και προκαλεί περισσότερα κύτταρα να εισέλθουν στην S φάση.

RhoC και IQGAP1 Co-εντοπισμένη και Δεσμώτης μεταξύ τους σε κύτταρα

ο ανοσοφθορισμός και η μέθοδος συνανοσοκαθίζησης εφαρμόστηκαν για να εξετάσει περαιτέρω την πιθανή δέσμευση μεταξύ RhoC και IQGAP1. Τόσο BGC-823 και COS-7 κύτταρα συν-μολυσμένα με Ad-IQGAP1 και Ad-RhoC-V14 ή Ad-IQGAP1-C και Ad-RhoC-V14 για 48 ώρες, και το συνολικό κυτταρόλυμα ανοσοκαταβυθίστηκε με αντι-RhoC αντίσωμα και ανιχνεύθηκαν με αντίσωμα έναντι IQGAP1, ή ανοσοκαταβυθίστηκαν με αντι-αντίσωμα IQGAP1 και ανιχνεύθηκαν με αντίσωμα έναντι RhoC, αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα έδειξαν RhoC και IQGAP1 δεσμεύονται ο ένας τον άλλον, με C-τερματικό θραύσμα του IQGAP1 ως θέση πρόσδεσης με RhoC (Σχ. 5Α και C). Επιπλέον, δοκιμασία ανοσοφθορισμού αποκάλυψαν ότι IQGAP1 κατανεμήθηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα, όπου συν-εντοπισμένη με RhoC (Εικ. 5Β και D).

Συζήτηση

Ο ανεξέλεγκτος πολλαπλασιασμός των καρκινικών κυττάρων απαιτεί την συντονισμένη και αυστηρά ρυθμιζόμενη λειτουργία πολλών πρωτεϊνών [23], [24], [25], [26]. Είναι, επομένως, σημαντικό να μελετηθεί ο μηχανισμός για το πώς αυτές οι πρωτεΐνες αλληλεπιδρούν στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων. προηγούμενα αποτελέσματα μας έχουν τεκμηριώσει ότι η έκφραση του IQGAP1 και RhoC αυξήθηκαν σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και κυτταρικές σειρές καρκίνου [21]. Το επίπεδο των εκφράσεων τους είχε σημαντική συσχέτιση με την κακή διαφοροποίηση του γαστρικού καρκίνου. Ωστόσο, δεν είναι σαφές για το αν IQGAP1 και RhoC συνδέονται με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε tumorigenensis. Σε αυτή τη μελέτη, το επίπεδο έκφρασης του IQGAP1 και RhoC και βιολογικές δραστηριότητές τους σε γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή BGC-823 ρυθμίστηκαν μέσω μόλυνσης με αδενοϊικές κατασκευές ή επιμόλυνση με DNA πλασμιδίου ή siRNA. Ο πολλαπλασιασμός του κυττάρου στη συνέχεια διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία ενσωμάτωσης BrdU και τη μέθοδο ΜΤΤ. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ουσιαστικά δραστική RhoC προώθησε σημαντικά τη δραστικότητα πολλαπλασιασμού γαστρικού καρκίνου κυτταρική γραμμή BGC-823, και η εξάντληση των RhoC με siRNA ανέστειλε τα γνωρίσματα. Ερευνητικά δεδομένα έχουν δείξει ότι RhoC είχε σημαντικό ρόλο στη μετανάστευση των κυττάρων και τη μετάσταση [27], [28], [29], [30], [31], αλλά υπήρχαν κάποιες αντιφάσεις σχετικά με το αν RhoC ρυθμίζουν τη διαδικασία μετασχηματισμού και τον πολλαπλασιασμό σε κύτταρα όγκου [27], [29], [32]. Τα αποτελέσματά μας παρέχουν ενδείξεις ότι RhoC χρειάζεται διέγερση του πολλαπλασιασμού επίδραση στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα. Αυτό θα είναι χρήσιμο για την αποσαφήνιση του ρόλου των RhoC στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων.

Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι παρόμοια με RhoC, υπερέκφραση εξωγενούς IQGAP1 και IQGAP1-C προωθείται επίσης τον πολλαπλασιασμό των BGC-823 κύτταρα, ενώ knockdown του ενδογενούς IQGAP1 εξασθένισε την ικανότητα πολλαπλασιασμού του κυττάρου, δεικνύοντας ότι IQGAP1 συμβάλλει επίσης στην ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Λαμβάνοντας υπόψη ότι τόσο RhoC και IQGAP1 έχουν ρόλο στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και τις εκφράσεις τους ήταν υψηλή συσχέτιση, εμείς διερευνηθούν περαιτέρω τη λειτουργική σχέση μεταξύ RhoC και IQGAP1. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι σε BGC-823 κυττάρων με knock-down της έκφρασης IQGAP1, μόλυνση με αδενοϊό που κωδικοποιεί ουσιαστικά δραστική RhoC δεν θα μπορούσαν να τονώσουν πια την δραστηριότητα πολλαπλασιασμού? ενώ σε BGC-823 κυττάρων με knock-down της έκφρασης RhoC, υπερ-έκφραση ή IQGAP1 IQGAP1-C διαμέσου επιμόλυνση των κυττάρων με τον αδενοϊό που κωδικοποιεί το αντίστοιχο DNA ακόμη προκάλεσε υψηλότερη δραστικότητα πολλαπλασιασμού. Αυτό έδειξε ότι RhoC οδήγησε πολλαπλασιασμός όγκου διαμέσου IQGAP1, ειδικά μέσω του C-τελικού τμήματος της IQGAP1. Αυτή η λειτουργική σχέση μεταξύ RhoC και IQGAP1 υποστηρίχθηκε περαιτέρω από συνανοσοκαθίζησης και ανοσοφθορισμού. Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι RhoC έλαβε IQGAP1 ως τελεστής στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων, ρίχνοντας νέα υπόδειξη σχετικά με τη σχέση αυτών των πρωτεϊνών.

Για να διερευνηθεί κατά κύριο λόγο την κατάντη μηχανισμός μέσω του οποίου RhoC /IQGAP1 ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων , διερευνήσαμε την επίδραση της RhoC /IQGAP1 για την έκφραση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τον κυτταρικό κύκλο, συμπεριλαμβανομένης της κυκλίνης Ε, κυκλίνη D1, κυκλίνη Β και κυκλίνη εξαρτώμενη κινάση (ΟϋΚ). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι και οι δύο RhoC και IQGAP1 διέγειρε την έκφραση της κυκλίνης Ε και κυκλίνη D1, αλλά δεν είχε καμία επίδραση στην έκφραση της κυκλίνης Β και CDK. Ο πολλαπλασιασμός των ευκαρυωτικών κυττάρων ελέγχεται σε συγκεκριμένα σημεία στον κυτταρικό κύκλο, ιδιαίτερα κατά την πρώτη φάση χάσματος (G1) με το DNA-συνθετικά φάσης (S) και τη δεύτερη φάση χάσματος (G2) σε μίτωση (Μ) μεταβάσεις. Εκ των οποίων, οι μεταβάσεις G1-S είναι το σημαντικό σημείο ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου. Κυκλίνη D1 και κυκλίνη Ε ελέγχει την πρόοδο του κυτταρικού μέσω της προώθησης G1 στην S φάση του κυτταρικού κύκλου. Τα αποτελέσματά μας πρότεινε ότι όταν RhoC ενεργοποιήθηκε με εξωκυτταρικό ή ενδοκυτταρικό σήμα, αυτό συνδέεται με IQGAP1 και, στη συνέχεια, επηρέασε την έκφραση των πρωτεϊνών συνδέονται με τον κύκλο των κυττάρων άμεσα ή έμμεσα μέσω κάποιων ασαφής βήματα μεταγωγής σήματος, η οποία θα μπορούσε τελικά να οδηγήσει στην αλλαγή της προόδου του κυτταρικού και πολλαπλασιασμό (Εικ. 6).

Συμπερασματικά, αυτά τα δεδομένα από την τρέχουσα μελέτη, σε συνδυασμό με τα προηγουμένως δημοσιευθέντα δεδομένα [21], υποστηρίζουν την υπόθεση ότι RhoC συμμετέχει τόσο τη μετανάστευση και τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων. IQGAP1 συμμετέχουν επίσης τη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων ως καθοδικός τελεστής του RhoC. Τα δεδομένα αυτά μπορούν να λάμψουν τα φώτα για την ανάπτυξη θεραπευτικών προσεγγίσεων για καρκίνο του στομάχου.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Δρ Gerry Boss και Dr Renate Pilz στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια, Σαν Ντιέγκο, Καλιφόρνια, ΗΠΑ, για οι είδους δώρα της αδενοϊικά κατασκευάσματα.